專利名稱：穩(wěn)定性優(yōu)異的還原型輔酶q的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物體吸收性、氧化穩(wěn)定性優(yōu)異的還原型輔酶Q10的結(jié)晶以及含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物。還原型輔酶Q10相比于氧化型輔酶Q10，顯示高的口服吸收性，是優(yōu)異的作為食品、營(yíng)養(yǎng)功能食品、特定保健用食品、營(yíng)養(yǎng)輔助劑、營(yíng)養(yǎng)劑、動(dòng)物藥、飲料、飼料、化妝品、醫(yī)藥品、治療藥、預(yù)防藥等的有用的化合物。
背景技術(shù)：
已知輔酶Q是分布于從細(xì)菌到哺乳動(dòng)物的廣泛的生物體中的必須成分，并作為生物體細(xì)胞中的線粒體的電子傳遞系統(tǒng)構(gòu)成成分。輔酶Q除了在線粒體中通過(guò)反復(fù)進(jìn)行氧化和還原來(lái)承擔(dān)作為電子傳遞系統(tǒng)中的傳遞成分的功能以外，已知還原型輔酶Q還具有抗氧化作用。在人體中，輔酶Q的側(cè)鏈具有10個(gè)重復(fù)結(jié)構(gòu)的輔酶Q10是主要成分，在生物體中，通常40～90％左右是作為還原型存在的。作為輔酶Q的生理作用，可以舉出由于線粒體活化作用而引起的能量生產(chǎn)的活化、心功能的活化、細(xì)胞膜的穩(wěn)定化效果、由于抗氧化作用引起的細(xì)胞的保護(hù)效果等。
輔酶Q10的氧化型輔酶Q10在歐美作為健康食品使用，在日本作為充血性心力衰竭藥使用，近年，在日本也開(kāi)始作為營(yíng)養(yǎng)功能食品使用了。
另一方面，還原型輔酶Q由于其自身具有強(qiáng)的抗氧化作用，通過(guò)向血中送入充分量的還原型輔酶Q，可以有效地增加血中的抗氧化作用活性?？梢哉J(rèn)為增加血中的抗氧化活性對(duì)于缺血再回流時(shí)的血管障礙、預(yù)防動(dòng)脈硬化的再次狹窄、防止腦梗塞后的再次血管障礙、動(dòng)脈硬化的預(yù)防、糖尿病的并發(fā)癥的預(yù)防等、由于活性氧種類而導(dǎo)致惡化的大量的疾病具有廣泛的有用性。
已知還原型輔酶Q10可以通過(guò)例如，合成、發(fā)酵、從天然物提取等原本已知的方法得到輔酶Q后，通過(guò)濃縮由色譜法的流出液中的還原型輔酶Q10級(jí)分的方法而獲得(參照專利文獻(xiàn)1)。此時(shí)，可以使用硼氫化鈉、連二亞硫酸鈉(低亞硫酸鈉)等通常的還原劑將上述還原型輔酶Q10中含有的氧化型輔酶Q10還原后，進(jìn)行色譜法的濃縮，另外，在該專利文獻(xiàn)中還記載了，還原型輔酶Q10還可以通過(guò)使上述還原劑作用于已經(jīng)存在的高純度輔酶Q10的方法而獲得。
另外，本發(fā)明者們進(jìn)行悉心研究的結(jié)果，確立了用于得到高品質(zhì)的還原型輔酶Q10的制造方法，并申請(qǐng)了專利(參照專利文獻(xiàn)2～8)。
可是，還原型輔酶Q10容易被分子氧氧化成氧化型輔酶Q10。上述氧化直接導(dǎo)致了難除去性的氧化型輔酶Q10的產(chǎn)生以及向制品中混入等質(zhì)量方面的問(wèn)題。為了得到高純度的還原型輔酶Q10結(jié)晶，進(jìn)而使得到的還原型輔酶Q10的結(jié)晶穩(wěn)定地保持，適當(dāng)?shù)胤雷o(hù)上述氧化是重要的。
專利文獻(xiàn)1特開(kāi)平10-109933號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2WO03/06408專利文獻(xiàn)3WO03/06409專利文獻(xiàn)4WO03/06410專利文獻(xiàn)5WO03/06411專利文獻(xiàn)6WO03/06412專利文獻(xiàn)7WO03/08363專利文獻(xiàn)8WO03/32967發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的課題因此，期望穩(wěn)定性改善的還原型輔酶Q10的結(jié)晶和含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物，以及改善還原型輔酶Q10的穩(wěn)定性的方法。
解決課題的措施本發(fā)明者們鑒于上述問(wèn)題，進(jìn)行了悉心研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)從油脂中將還原型輔酶Q10進(jìn)行結(jié)晶化，可以得到穩(wěn)定性優(yōu)異的還原型輔酶Q10結(jié)晶，另外，該結(jié)晶在Cu-Kα射線的X射線衍射中具有與從通常的溶劑中結(jié)晶化的還原型輔酶Q10結(jié)晶不同的特征，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明的還原型輔酶Q10結(jié)晶的特征在于，在Cu-Kα射線的X射線衍射中，在衍射角(2θ)3.1°具有中間強(qiáng)度的峰，在20.2°、23.0°具有強(qiáng)的峰，在18.7°、19.0°具有特別強(qiáng)的峰。
另外，本發(fā)明的組合物是上述還原型輔酶Q10的結(jié)晶和油脂共存而形成的含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物。
另外，本發(fā)明的口服給藥劑是含有上述還原型輔酶Q10的結(jié)晶或上述組合物而形成的口服給藥劑。
另外，本發(fā)明還涉及還原型輔酶Q10的結(jié)晶的制造方法，其特征在于，將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或?qū)⒓訜崛廴诘倪€原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻，并使還原型輔酶Q10進(jìn)行結(jié)晶化。
按照本發(fā)明，可以得到穩(wěn)定性得到改善了的還原型輔酶Q10的結(jié)晶。
以下，詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。另外，在本說(shuō)明書中，只記載為輔酶Q10時(shí)，是不論氧化型、還原型，表示兩者混合存在時(shí)的混合物全體。
本發(fā)明的還原型輔酶Q10的結(jié)晶，可以通過(guò)將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或?qū)⒓訜崛廴诘倪€原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻，然后使之結(jié)晶化而制造。
作為本發(fā)明的結(jié)晶的還原型輔酶Q10可以通過(guò)例如，合成、發(fā)酵、從天然物提取等原本已知的方法獲得。還原型輔酶Q10可以是單獨(dú)的，或者也可以是與氧化型輔酶Q10的混合物。可以優(yōu)選通過(guò)使用通常的還原劑，例如連二亞硫酸鈉(低亞硫酸鈉)、硼氫化鈉、抗壞血酸等，將已經(jīng)存在的高純度輔酶Q10等氧化型輔酶Q10、或氧化型輔酶Q10和還原型輔酶Q10的混合物進(jìn)行還原而得到。
還原型輔酶Q10在輔酶Q10的總量(即，還原型輔酶Q10和氧化型輔酶Q10的總量)中所占的比例沒(méi)有特別限制，通常為20重量％或20重量％以上，優(yōu)選40重量％或40重量％以上，更加優(yōu)選60重量％或60重量％以上，進(jìn)一步優(yōu)選80重量％或80重量％以上，特別優(yōu)選90重量％或90重量％以上，最為優(yōu)選96重量％或96重量％以上。上限為100重量％，雖然沒(méi)有特別限定，但通常為99.9重量％或99.9重量％以下。
作為使用的油脂，可以是從動(dòng)植物中得到的天然油脂，也可以是合成油脂或加工油脂。更加優(yōu)選的是食用或醫(yī)藥用所允許的油脂。例如，作為植物油脂，可以舉出，例如，椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、亞麻仁油、山茶油、粗米胚芽油、菜籽油、米油、花生油、玉米油、小麥胚芽油、大豆油、紫蘇子油、棉籽油、葵花子油、吉貝油、月見(jiàn)草油、牛油樹(shù)脂、婆羅雙樹(shù)脂(サル脂)、可可脂、芝麻油、紅花油、橄欖油等，作為動(dòng)物油脂，可以舉出，例如，豬油、乳脂、魚油、牛油等，另外，還可以舉出通過(guò)將這些分別進(jìn)行加氫、酯交換等加工的油脂(例如，硬化油等)。當(dāng)然，還可以使用中鏈脂肪酸三甘油酯(MCT)、脂肪酸的部分甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、磷脂等。另外，還可以使用這些的混合物。
作為中鏈脂肪酸三甘油酯(MCT)，可以舉出，例如，脂肪酸的碳原子數(shù)分別為6～12，優(yōu)選8～12的三甘油酯等。
作為脂肪酸的部分甘油酯，可以舉出，例如，脂肪酸的碳原子數(shù)分別為6～18，優(yōu)選6～12的單甘油酯或二甘油酯等。
作為丙二醇脂肪酸酯，可以舉出，例如，脂肪酸的碳原子數(shù)分別為6～18，優(yōu)選6～12的單甘油酯或二甘油酯等。
作為磷脂，可以舉出，例如，卵黃卵磷脂、精制大豆卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、鞘磷脂、聯(lián)十六烷基磷酸、硬脂酰胺、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰肌醇胺、心磷脂、磷酸乙醇胺神經(jīng)酰胺、磷酸甘油神經(jīng)酰胺以及它們的混合物等。
上述油脂中，從操作容易度、臭氣等方面看，優(yōu)選植物油脂、合成油脂或加工油脂、磷脂。這些優(yōu)選考慮油脂的價(jià)格、還原型輔酶Q10的穩(wěn)定性和輔酶Q10的溶解性等來(lái)進(jìn)行選定。例如，優(yōu)選椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、菜籽油、米油、大豆油、棉籽油、橄欖油、MCT、磷脂等，特別優(yōu)選米油、大豆油、菜籽油、MCT、磷脂等。
含有結(jié)晶前的還原型輔酶Q10的油脂可以通過(guò)將已經(jīng)存在的還原型輔酶Q10結(jié)晶在還原型輔酶Q10的熔點(diǎn)(49℃)或熔點(diǎn)以上加熱·熔融后，加入到加熱的油脂中，或者將已經(jīng)存在的還原型輔酶Q10結(jié)晶加入到油脂中后，進(jìn)行加熱·溶解，例如，在50～90℃下加熱而得到。另外，也可以使用抗壞血酸等還原劑使含有氧化型輔酶Q10的油脂溶液進(jìn)行還原，作為含有還原型輔酶Q10的油脂。
上述加熱·熔融或加熱·溶解的溫度沒(méi)有特別限制，通常為約50℃或50℃以上，優(yōu)選約55℃或55℃以上，更加優(yōu)選約60℃或60℃以上。上限通常為約90℃或90℃以下，優(yōu)選約85℃或85℃以下，更加優(yōu)選約80℃或80℃以下。通常在約50～90℃、優(yōu)選在約55～85℃、更加優(yōu)選在約55～80℃、特別優(yōu)選在約60～80℃實(shí)施。
還原型輔酶Q10的結(jié)晶化通過(guò)將含有上述還原型輔酶Q10的油脂冷卻來(lái)進(jìn)行。
在還原型輔酶Q10的結(jié)晶化之際，除了上述油脂以外，還可以適當(dāng)添加其他的原料。作為這樣的物質(zhì)，沒(méi)有特別的限制，可以舉出，例如，賦形劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、抗氧劑、著色劑、防凝聚劑、吸收促進(jìn)劑、有效成分的助溶劑、穩(wěn)定化劑、粘度調(diào)節(jié)劑等。當(dāng)然，不妨礙使輔酶Q10以外的其他的活性成分共存，上述原料也可以在使還原型輔酶Q10的結(jié)晶析出后添加。
作為上述賦形劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，白糖、乳糖、葡萄糖、玉米淀粉、甘露糖醇、結(jié)晶纖維素、磷酸鈣、硫酸鈣等。
作為上述崩解劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，淀粉、瓊脂、檸檬酸鈣、碳酸鈣、碳酸氫鈉、糊精、結(jié)晶纖維素、羧甲基纖維素、西黃蓍膠等。
作為上述潤(rùn)滑劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，滑石、硬脂酸鎂、聚乙二醇、二氧化硅等。
作為上述粘合劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，乙基纖維素、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、西黃蓍膠、蟲膠、明膠、阿拉伯樹(shù)膠、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、山梨糖醇等。
作為上述抗氧劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，抗壞血酸、生育酚、維生素A、β-胡蘿卜素、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、檸檬酸等。
作為上著色劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，允許在醫(yī)藥品、食品中添加的物質(zhì)等。
作為上述防凝聚劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，硬脂酸、滑石、輕質(zhì)二氧化硅、含水二氧化硅等。
作為上述吸收促進(jìn)劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，高級(jí)醇類；高級(jí)脂肪酸類；蔗糖脂肪酸酯、山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧化乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯等表面活性劑等。
作為上述有效成分的助溶劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，富馬酸、琥珀酸、蘋果酸等有機(jī)酸等。
作為上述穩(wěn)定化劑，沒(méi)有特別限制，可以舉出，例如，苯甲酸、苯甲酸酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、蜂蠟等。
作為上述粘度調(diào)節(jié)劑，沒(méi)有特別限制，例如，可以舉出蜂蠟等。
作為上述輔酶Q10以外的活性成分，可以舉出，例如，氨基酸、維生素、礦物、多酚、有機(jī)酸、糖類、肽、蛋白質(zhì)等。
還原型輔酶Q10的結(jié)晶化溫度(結(jié)晶化時(shí)的冷卻溫度)沒(méi)有特別限制，但從結(jié)晶析出率等觀點(diǎn)看，通常為30℃或30℃以下，優(yōu)選25℃或25℃以下，更加優(yōu)選20℃或20℃以下，進(jìn)一步優(yōu)選15℃或15℃以下，特別優(yōu)選10℃或10℃以下。下限為體系的固化溫度。通常優(yōu)選在0～25℃實(shí)施。
結(jié)晶化時(shí)的還原型輔酶Q10的濃度，相對(duì)于使用的油脂的重量，還原型輔酶Q10的重量比例，優(yōu)選約75重量％或75重量％以下，更加優(yōu)選約50重量％或50重量％以下，進(jìn)一步優(yōu)選約30重量％或30重量％以下，特別優(yōu)選約20重量％或20重量％以下。下限通常為約0.1重量％，優(yōu)選約1重量％，更加優(yōu)選約3重量％。通常在約0.1～75重量％，優(yōu)選在約1～50重量％，更加優(yōu)選在約3～30重量％實(shí)施。
這樣得到的還原型輔酶Q10結(jié)晶可以分離使用，也可以與油脂混合地作為含有還原型輔酶Q10的組合物使用。在結(jié)晶化后分離還原型輔酶Q10結(jié)晶時(shí)，結(jié)晶化時(shí)的還原型輔酶Q10的濃度，相對(duì)于使用的油脂的重量，還原型輔酶Q10的重量比例，通常為約30重量％或30重量％以下，優(yōu)選約20重量％或20重量％以下，更加優(yōu)選約15重量％或15重量％以下，進(jìn)一步優(yōu)選約12重量％或12重量％以下，特別優(yōu)選約10重量％或10重量％以下。通過(guò)維持上述濃度，即使是工業(yè)規(guī)模，也能夠合適地進(jìn)行結(jié)晶化和結(jié)晶的分離。此時(shí)，濃度的下限，從生產(chǎn)性的觀點(diǎn)看，通常為約1重量％，優(yōu)選約2重量％。通常優(yōu)選在約1～30重量％實(shí)施。
在結(jié)晶化時(shí)，為了抑制過(guò)飽和，順利地進(jìn)行成核化·結(jié)晶成長(zhǎng)，也可以優(yōu)選進(jìn)行添加晶種。
另外，在結(jié)晶化之際，還可以在強(qiáng)制流動(dòng)下實(shí)施。為了抑制過(guò)飽和，順利地進(jìn)行成核化·結(jié)晶成長(zhǎng)，以及從高品質(zhì)化的觀點(diǎn)看，作為每單位容積的攪拌所需要的動(dòng)力通常為約0.01kW/m3或0.01kW/m3以上，優(yōu)選約0.1kW/m3或0.1kW/m3以上，更加優(yōu)選約0.3kW/m3或0.3kW/m3以上的流動(dòng)。上述強(qiáng)制流動(dòng)通常可以通過(guò)攪拌翼的旋轉(zhuǎn)來(lái)賦予，但要得到上述流動(dòng)也未必一定要使用攪拌翼，例如，也可以利用通過(guò)液體循環(huán)的方法等。
在結(jié)晶化時(shí)，優(yōu)選控制每單位時(shí)間的結(jié)晶的析出量，從而控制過(guò)飽和的形成。優(yōu)選的單位時(shí)間的結(jié)晶析出量為，例如每單位時(shí)間結(jié)晶析出全部結(jié)晶析出量的約50重量％的量的速度或該速度以下(即，最大為50重量％的量/小時(shí))，優(yōu)選每單位時(shí)間結(jié)晶析出全部結(jié)晶析出量的約25重量％的量的速度或該速度以下(即，最大為25重量％的量/小時(shí))。
另外，作為冷卻速度，通常為約40℃/小時(shí)或40℃/小時(shí)以下，優(yōu)選約20℃/小時(shí)或20℃/小時(shí)以下。
如上所述結(jié)晶化后，視需要，還可以分離、取得還原型輔酶Q10結(jié)晶。此時(shí)，例如，可以在結(jié)晶化后通過(guò)離心分離、加壓過(guò)濾、減壓過(guò)濾等進(jìn)行固液分離，再視需要進(jìn)行濾餅的洗凈，作為濕體而獲得。另外，還可以將濕體放入到用不活性氣體對(duì)內(nèi)部進(jìn)行了置換的減壓干燥器(真空干燥器)中，在減壓下干燥，從而作為干體而獲得。
可知如上述得到的本發(fā)明的還原型輔酶Q10的結(jié)晶，在使用Cu-Kα射線的X射線衍射法中，與從通常的溶劑中結(jié)晶化的還原型輔酶Q10結(jié)晶顯示不同的特征，并且穩(wěn)定性優(yōu)異，另外，具有優(yōu)異的生物體吸收性。
本發(fā)明的還原型輔酶Q10結(jié)晶與從通常的溶劑中結(jié)晶化的還原型輔酶Q10結(jié)晶的區(qū)別是，在通過(guò)Cu-Kα射線的X射線衍射法中，在衍射角(2θ)3.1°具有中間強(qiáng)度的峰，在20.2°、23.0°具有強(qiáng)峰，在18.7°、19.0°具有特別強(qiáng)的峰。
作為還原型輔酶Q10結(jié)晶，優(yōu)選在通過(guò)上述Cu-Kα射線的X射線衍射法中，具有下述(a)～(c)中的至少一個(gè)特征的結(jié)晶(a)將19.0°的峰強(qiáng)度作為100，3.1°的峰強(qiáng)度為25或25以下、優(yōu)選20或20以下，(b)將19.0°的峰強(qiáng)度作為100，18.7°的峰強(qiáng)度為80或80以上、優(yōu)選85或85以上，(c)20.2°的峰和23.0°的峰的強(qiáng)度比，20.2°的峰強(qiáng)度/23.0°的峰強(qiáng)度，為0.7或0.7以上、優(yōu)選0.75或0.75以上。
更加優(yōu)選同時(shí)具有上述(a)～(c)中的任意2個(gè)特征的結(jié)晶，進(jìn)一步優(yōu)選同時(shí)具有上述(a)～(c)的3個(gè)特征的結(jié)晶。
另外，在衍射角度的表示方面，由于可能有根據(jù)使用儀器等所引起的誤差，因此，±0.2°左右的誤差是本發(fā)明的范疇。
另外，由于結(jié)晶中殘存的非晶質(zhì)等的影響，當(dāng)X射線衍射圖的基線紊亂時(shí)，優(yōu)選對(duì)基線進(jìn)行補(bǔ)正，從而排除非晶質(zhì)等的影響。
還原型輔酶Q10結(jié)晶化后，可以直接作為還原型輔酶Q10結(jié)晶和油脂共存的組合物使用，也可以將還原型輔酶Q10結(jié)晶分離使用。分離的還原型輔酶Q10結(jié)晶可以添加到上述所希望的油脂等中，作為含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物。當(dāng)然，在該組和物中，除了還原型輔酶Q10結(jié)晶和油脂以外，還可以含有前面敘述的賦形劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、抗氧劑、著色劑、防凝聚劑、吸收促進(jìn)劑、有效成分的助溶劑、穩(wěn)定化劑、粘度調(diào)節(jié)劑、輔酶Q10以外的活性物質(zhì)。
在含有本發(fā)明的還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物中，相對(duì)于使用的油脂的重量，還原型輔酶Q10的重量比例，優(yōu)選約75重量％或75重量％以下，更加優(yōu)選約50重量％或50重量％以下，進(jìn)一步優(yōu)選約30重量％或30重量％以下，特別優(yōu)選約20重量％或20重量％以下。濃度的下限通常為約0.1重量％，優(yōu)選約1重量％，更加優(yōu)選約3重量％。通常在約0.1～75重量％，優(yōu)選在約1～50重量％，更加優(yōu)選在約3～30重量％實(shí)施。
根據(jù)本發(fā)明，可以得到穩(wěn)定性優(yōu)異的還原型輔酶Q10的結(jié)晶或含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物。這樣得到的結(jié)晶或含有該結(jié)晶的組合物，生物體吸收性也優(yōu)異。
上述得到的還原型輔酶Q10的結(jié)晶或含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物雖然可以直接使用，但可以優(yōu)選將其進(jìn)一步加工成膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊、微膠囊)、片劑、糖漿、飲料等口服給藥劑的形態(tài)使用，也可以進(jìn)一步加工成用于乳膏劑、栓劑、糊狀牙膏等形態(tài)使用。優(yōu)選口服給藥劑，特別優(yōu)選膠囊劑，尤其優(yōu)選軟膠囊。
當(dāng)然，將溶解在油脂中的還原型輔酶Q10(加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或?qū)⒓訜崛廴诘倪€原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物)以還原型輔酶Q10溶解的狀態(tài)進(jìn)行膠囊化后，通過(guò)冷卻使還原型輔酶Q10的結(jié)晶析出，含有這樣的還原型輔酶Q10的結(jié)晶的膠囊劑也是本發(fā)明的范疇。
作為用于制造膠囊劑的基體材料，沒(méi)有特別限制，除了可以使用代表性的來(lái)自牛骨、牛皮、豬皮、魚皮等的明膠以外，還可以使用其它的基體材料(例如，可以作為食品添加劑使用的角叉菜膠、海藻酸等來(lái)自海藻的產(chǎn)品、刺槐豆膠、瓜爾膠等來(lái)自植物種子的產(chǎn)品等增粘穩(wěn)定劑；含有纖維素類的制造用劑等)。
另外，本發(fā)明的還原型輔酶Q10的結(jié)晶或含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物或上述膠囊劑可以在烹制例如，面包、通心粉、菜粥、米飯、洋點(diǎn)心、點(diǎn)心等時(shí)適當(dāng)添加使用。當(dāng)然，也可以作為其它的食品形態(tài)使用。
本發(fā)明的還原型輔酶Q10的結(jié)晶或含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物的制造和保管通過(guò)在脫氧氛圍氣體下實(shí)施，這樣可以提高抗氧化效果。脫氧氛圍氣可以通過(guò)不活性氣體的置換、減壓、沸騰或者這些的組合來(lái)實(shí)現(xiàn)。優(yōu)選至少進(jìn)行不活性氣體的置換，即，使用不活性氣體。作為上述不活性氣體，可以舉出，例如，氮?dú)?、氦氣、氬氣、氫氣、二氧化碳?xì)怏w等，優(yōu)選氮?dú)狻?br> 在上述還原型輔酶Q10的結(jié)晶、含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物或口服給藥劑中，規(guī)定期間的保存后，希望還原型輔酶Q10/(還原型輔酶Q10+氧化型輔酶Q10)的重量比例，維持還原型輔酶Q10在90重量％或90重量％以上，更加優(yōu)選維持在95重量％或95重量％以上。上述保存期間為1天或1天以上，優(yōu)選1周或1周以上，更加優(yōu)選1個(gè)月或1個(gè)月以上，進(jìn)一步優(yōu)選半年或半年以上，特別優(yōu)選1年或1年以上，最為優(yōu)選2年或2年以上。
發(fā)明效果按照本發(fā)明，可以簡(jiǎn)便地制造穩(wěn)定性優(yōu)異的還原型輔酶Q10的結(jié)晶、含有該結(jié)晶的組合物。另外，該還原型輔酶Q10的結(jié)晶以及含有該還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物，生物體吸收性優(yōu)異，適合于作為食用或醫(yī)藥用等的組合物或口服給藥劑使用等，可在很寬的范圍內(nèi)使用，具有很多優(yōu)點(diǎn)。


示出了將還原型輔酶Q10溶解在菜子油中后，冷卻結(jié)晶化的還原型輔酶Q10結(jié)晶的通過(guò)Cu-Kα射線的X射線衍射法測(cè)定的X射線衍射圖。
示出了將還原型輔酶Q10溶解在含水6％的乙醇中后，冷卻結(jié)晶化的還原型輔酶Q10結(jié)晶的通過(guò)Cu-Kα射線的X射線衍射法測(cè)定的X射線衍射圖。
實(shí)施發(fā)明的最佳方案以下，舉出實(shí)施例來(lái)詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限定。另外，實(shí)施例中的還原型輔酶Q10的純度、還原型輔酶Q10和氧化型輔酶Q10的重量比通過(guò)下述HPLC分析求得，但得到的還原型輔酶Q10的純度并不是規(guī)定的本發(fā)明中的純度的界限值，此外，同樣地，還原型輔酶Q10和氧化型輔酶Q10的重量比也不是規(guī)定的其上限制。
(HPLC分析條件)柱SYMMETRY C18(Waters制造)、250mm(長(zhǎng)度)、4.6mm(內(nèi)徑)移動(dòng)相乙醇/甲醇＝4/3(v/v)檢測(cè)波長(zhǎng)210nm流速1ml/min還原型輔酶Q10的保留時(shí)間9.1min氧化型輔酶Q10的保留時(shí)間13.3min另外，實(shí)施例中的通過(guò)Cu-Kα射線的X射線衍射法，按照如下進(jìn)行。
裝置旋轉(zhuǎn)對(duì)陰極型X射線衍射裝置ガイガ一フレツクスRAD-rA[理學(xué)電氣(株)]使用X射線Cu·Kα射線X射線強(qiáng)度40kV、100mA角度范圍2θ＝2～60°掃描速度2°/分取樣間隔0.02秒發(fā)散狹縫1°接受狹縫0.60°散射狹縫1°(參考例1)在1000g乙醇中加入100g氧化型輔酶Q10、60g的L-抗壞血酸，在78℃下攪拌，進(jìn)行還原反應(yīng)。30小時(shí)后，冷卻到50℃，邊保持相同的溫度邊添加400g乙醇、100g水。一邊攪拌該乙醇溶液(攪拌所要的動(dòng)力為0.3kW/m3)，一邊以10℃/小時(shí)的速度冷卻到2℃，得到白色的漿液。將得到的漿液減壓過(guò)濾，并將濕結(jié)晶以冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序洗凈，再將濕結(jié)晶進(jìn)行減壓干燥(20～35℃，1～30mmHg)，由此，得到白色的干燥結(jié)晶95g(表觀收率(有姿收率)95摩爾％)。另外，除了減壓干燥以外的所有的操作都是在氮?dú)夥諊鷼怏w下進(jìn)行的。得到的結(jié)晶的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5。
(實(shí)施例1)將參考例1中得到的10g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)在25℃添加到190g的菜子油中，一邊在60℃攪拌(攪拌所要的動(dòng)力為0.3kW/m3)一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。一邊攪拌(攪拌所要的動(dòng)力為0.3kW/m3)，一邊以10℃/小時(shí)的冷卻速度使結(jié)晶析出。另外，以上的所有操作都是在氮?dú)夥諊逻M(jìn)行的。將得到的漿液減壓過(guò)濾，用己烷充分洗凈后，將濕結(jié)晶進(jìn)行減壓干燥(20～35℃，1～30mmHg)，由此，得到通過(guò)Cu-Kα射線的X射線衍射法測(cè)定的X射線衍射圖如圖1所示的還原型輔酶Q10結(jié)晶8.7g。該結(jié)晶在上述X射線衍射圖中，在衍射角(2θ)3.1°具有中間強(qiáng)度的峰，在20.2°、23.0°具有強(qiáng)峰，在18.7°、19.0°具有特別強(qiáng)的峰。得到的結(jié)晶的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.3/0.7。
(實(shí)施例2)將參考例1中得到的10g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)在25℃添加到190g的中鏈脂肪酸三甘油酯(MCT，碳原子數(shù)8∶碳原子數(shù)10＝6∶4)中，一邊在60℃攪拌(攪拌所要的動(dòng)力為0.3kW/m3)一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。一邊攪拌(攪拌所要的動(dòng)力為0.3kW/m3)，一邊以10℃/小時(shí)的冷卻速度冷卻到5℃，使結(jié)晶析出。另外，以上的所有操作都是在氮?dú)夥諊逻M(jìn)行的。將得到的漿液減壓過(guò)濾，用己烷充分洗凈后，將濕結(jié)晶進(jìn)行減壓干燥(20～35℃，1～30mmHg)，由此，得到6.5g還原型輔酶Q10結(jié)晶。得到的結(jié)晶的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.3/0.7。
(比較例1)將參考例1中得到的10g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)在25℃添加到150g的含水6％的乙醇中，一邊在60℃攪拌，一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。一邊攪拌(攪拌所要的動(dòng)力為0.3kW/m3)，一邊以10℃/小時(shí)的冷卻速度冷卻到5℃，使結(jié)晶析出。另外，以上的所有操作都是在氮?dú)夥諊逻M(jìn)行的。將得到的漿液減壓過(guò)濾，并以乙醇、水、乙醇的順序洗凈后，將濕結(jié)晶進(jìn)行減壓干燥(20～35℃，1～30mmHg)，由此，得到通過(guò)Cu-Kα射線的X射線衍射法測(cè)定的X射線衍射圖如圖2所示的還原型輔酶Q10結(jié)晶9.6g。得到的結(jié)晶的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.3/0.7。
(實(shí)施例3)將實(shí)施例1、實(shí)施例2以及比較例1中得到的還原型輔酶Q10結(jié)晶在30℃、空氣中、遮光條件下保存4天。測(cè)定4天后的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比，其結(jié)果示于表1中。


R還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比由此結(jié)果可知，從油脂中結(jié)晶化還原型輔酶Q10而得到的本發(fā)明的還原型輔酶Q10結(jié)晶與從通常的溶劑中結(jié)晶化的還原型輔酶Q10結(jié)晶相比，穩(wěn)定性優(yōu)異。
(參考例2)使用實(shí)施例1中取得的還原型輔酶Q10和比較例1中取得的還原型輔酶Q10，測(cè)定對(duì)大鼠口服給藥時(shí)的輔酶Q10血中濃度。
各樣品是將這些還原型輔酶Q10按還原型輔酶Q10∶菜子油＝1∶2的重量比加入到0.2％Tween80水溶液中，使懸浮，并使用胃探(胃ゾンデ)對(duì)1組6只的SD大鼠(雄性)進(jìn)行強(qiáng)制口服給藥，以使達(dá)到30mg(還原型輔酶Q10)/kg(大鼠體重)。此后，隨時(shí)采取血液，用HPLC測(cè)定血漿中的輔酶Q10濃度。血漿中輔酶Q10濃度的測(cè)定結(jié)果示于表2。


Cmax(mg/ml)…最高血漿中濃度
Tmax(hr)…達(dá)到最高血漿中濃度的時(shí)間AUC(0-24)(mg/ml·hr)…血漿中濃度-時(shí)間曲線下的面積如表2所示，在測(cè)定并比較將實(shí)施例1中取得的還原型輔酶Q10結(jié)晶和比較例1中取得的還原型輔酶Q10結(jié)晶給藥到動(dòng)物時(shí)的輔酶Q10的血漿中濃度時(shí)，本發(fā)明的還原型輔酶Q10的生物體利用能力明顯高于在溶劑中結(jié)晶析出的還原型輔酶Q10。因此，可以明確，如果使用本發(fā)明的還原型輔酶Q10，顯示極高的生物體吸收性。
(實(shí)施例4)將160g菜子油、10g硬化油、5g卵磷脂、5g蜂蠟在70℃下混合。在相同溫度下，添加參考例1中得到的20g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)，一邊攪拌(攪拌所要的動(dòng)力為0.3kW/m3)一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。另外，以上的所有操作都是在氮?dú)夥諊逻M(jìn)行的。將含有該還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物返回到20℃后，按照規(guī)定的方法，將含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物作成每1個(gè)膠囊中為300mg(相當(dāng)于30mg還原型輔酶Q10)的明膠軟膠囊制劑。
(實(shí)施例5)將160g菜子油、10g硬化油、5g卵磷脂、5g蜂蠟在70℃下混合。在相同溫度下，添加參考例1中得到的20g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)，一邊攪拌(攪拌所要的動(dòng)力為0.3kW/m3)一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。溶解后，一邊維持上述攪拌一邊以10℃/小時(shí)的冷卻速度冷卻到5℃，使結(jié)晶析出。另外，以上的所有操作都是在氮?dú)夥諊逻M(jìn)行的。將含有該還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物返回到20℃后，按照規(guī)定的方法，將含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物作成每1個(gè)膠囊中為300mg(相當(dāng)于30mg還原型輔酶Q10)的明膠軟膠囊制劑。如果將該軟膠囊制劑在5℃下靜置24小時(shí)，在軟膠囊內(nèi)析出還原型輔酶Q10的結(jié)晶。
工業(yè)實(shí)用性按照本發(fā)明，可以簡(jiǎn)便地制造穩(wěn)定性優(yōu)異的還原型輔酶Q10的結(jié)晶、含有該結(jié)晶的組合物。另外，該還原型輔酶Q10的結(jié)晶以及含有該還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物，生物體吸收性優(yōu)異，適合于作為食用或醫(yī)藥用等的組合物或口服給藥劑使用等，可在很寬的范圍內(nèi)使用，具有很多優(yōu)點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.一種還原型輔酶Q10的結(jié)晶，其特征在于，在Cu-Kα射線的X射線衍射法中，在衍射角(2θ)3.1°具有中間強(qiáng)度的峰，在20.2°、23.0°具有強(qiáng)峰，在18.7°、19.0°具有特別強(qiáng)的峰。
2.按照權(quán)利要求1記載的還原型輔酶Q10的結(jié)晶，其在Cu-Kα射線的X射線衍射法中，具有下述(a)～(c)中的至少一個(gè)特征(a)將19.0°的峰強(qiáng)度作為100，3.1°的峰強(qiáng)度為25或25以下；(b)將19.0°的峰強(qiáng)度作為100，18.7°的峰強(qiáng)度為80或80以上；(c)20.2°的峰和23.0°的峰的強(qiáng)度比，20.2°的峰強(qiáng)度/23.0°的峰強(qiáng)度，為0.7或0.7以上。
3.按照權(quán)利要求1或2記載的還原型輔酶Q10的結(jié)晶，該結(jié)晶是通過(guò)將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或?qū)⒓訜崛廴诘倪€原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻后，分離還原型輔酶Q10而得到的。
4.按照權(quán)利要求3記載的還原型輔酶Q10的結(jié)晶，其中，在結(jié)晶化時(shí)，還原型輔酶Q10與油脂重量的重量比例為1～30重量％。
5.按照權(quán)利要求3或4記載的還原型輔酶Q10的結(jié)晶，其中，油脂為選自椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、亞麻仁油、山茶油、粗米胚芽油、菜籽油、米油、花生油、玉米油、小麥胚芽油、大豆油、紫蘇子油、棉籽油、葵花子油、吉貝油、月見(jiàn)草油、牛油樹(shù)脂、婆羅雙樹(shù)脂、可可脂、芝麻油、紅花油、橄欖油、豬油、乳脂、魚油、牛油、通過(guò)將這些分別進(jìn)行加氫、和/或酯交換等加工的油脂、中鏈脂肪酸三甘油酯、脂肪酸的部分甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、磷脂中的至少1種。
6.一種組合物，該組合物是使權(quán)利要求1～5的任一項(xiàng)記載的還原型輔酶Q10的結(jié)晶與油脂共存而形成的含有還原型輔酶Q10結(jié)晶的組合物。
7.按照權(quán)利要求6記載的組合物，該組合物是將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或?qū)⒓訜崛廴诘倪€原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻而得到的。
8.按照權(quán)利要求6記載的組合物，該組合物是通過(guò)將權(quán)利要求1記載的還原型輔酶Q10的結(jié)晶添加到油脂中而得到的。
9.按照權(quán)利要求6～8中的任一項(xiàng)記載的組合物，其中，還原型輔酶Q10與油脂重量的重量比例為0.1～75重量％。
10.按照權(quán)利要求6～9中的任一項(xiàng)記載的組合物，其中，油脂為選自椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、亞麻仁油、山茶油、粗米胚芽油、菜籽油、米油、花生油、玉米油、小麥胚芽油、大豆油、紫蘇子油、棉籽油、葵花子油、吉貝油、月見(jiàn)草油、牛油樹(shù)脂、婆羅雙樹(shù)脂、可可脂、芝麻油、紅花油、橄欖油、豬油、乳脂、魚油、牛油、通過(guò)將這些分別進(jìn)行加氫、和/或酯交換等加工的油脂、中鏈脂肪酸三甘油酯、脂肪酸的部分甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、磷脂中的至少1種。
11.一種口服給藥劑，其是含有權(quán)利要求1～5的任一項(xiàng)記載的還原型輔酶Q10的結(jié)晶或權(quán)利要求6～9中的任一項(xiàng)記載的組合物而形成的。
12.按照權(quán)利要求11記載的口服給藥劑，其是膠囊劑。
13.按照權(quán)利要求12記載的口服給藥劑，其是將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或?qū)⒓訜崛廴诘倪€原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物，以還原型輔酶Q10溶解的狀態(tài)膠囊化后，冷卻，并使還原型輔酶Q10結(jié)晶化而得到的膠囊劑。
14.一種還原型輔酶Q10結(jié)晶的制造方法，其特征在于，將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或?qū)⒓訜崛廴诘倪€原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻，使還原型輔酶Q10結(jié)晶化。
15.按照權(quán)利要求14記載的制造方法，其中，在結(jié)晶化時(shí)，還原型輔酶Q10與油脂重量的重量比例為0.1～75重量％。
16.按照權(quán)利要求14或15記載的制造方法，其中，油脂為選自椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、亞麻仁油、山茶油、粗米胚芽油、菜籽油、米油、花生油、玉米油、小麥胚芽油、大豆油、紫蘇子油、棉籽油、葵花子油、吉貝油、月見(jiàn)草油、牛油樹(shù)脂、婆羅雙樹(shù)脂、可可脂、芝麻油、紅花油、橄欖油、豬油、乳脂、魚油、牛油、通過(guò)將這些分別進(jìn)行加氫、和/或酯交換等加工的油脂、中鏈脂肪酸三甘油酯、脂肪酸的部分甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、磷脂中的至少1種。
17.按照權(quán)利要求14～16中的任一項(xiàng)記載的制造方法，該制造方法是在脫氧氛圍氣體下制造還原型輔酶Q10的結(jié)晶的方法。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供穩(wěn)定性優(yōu)異的還原型輔酶Q
文檔編號(hào)A61P9/10GK1849287SQ20048002615
公開(kāi)日2006年10月18日 申請(qǐng)日期2004年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月10日
發(fā)明者植田尚宏, 北村志郎, 川辺泰三, 岸田秀之, 上田恭義 申請(qǐng)人:株式會(huì)社鐘化