專利名稱：包含胃泌素化合物的組合物及其在糖尿病中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明廣泛地涉及包含胃泌素化合物的組合物和方法，及其用途。
背景技術(shù)：
胃泌素和其它生長(zhǎng)因子與胎兒胰腺的發(fā)育有關(guān)(Brand andFuller，J.Biol.Chem.2635341-5347)。胃泌素短暫地表達(dá)在胎兒的胰島中且該表達(dá)限于原始分化胰島前體形成分化胰島的時(shí)期。在還不知道胰島中胰腺胃泌素表達(dá)的重要性時(shí)，已經(jīng)注意到伴隨著胰島母細(xì)胞增生癥胰腺胃泌素升高。尤其是，已經(jīng)證明在嬰兒胰島母細(xì)胞增生癥中胰腺胃泌素異常持久(Hollande等人，Gastroenterology，71251-262，1976)且胃泌素過多癥由胃泌素表達(dá)胰島細(xì)胞瘤所引起。萎縮性胃炎與分化胎兒胰島中看到的相似也與胰島母細(xì)胞增生癥有關(guān)(Sacchi等人，Virchows Archiv B，48261-276，1985)。然而，在兩種觀察結(jié)果中沒有一種偶然的聯(lián)系建立在胰島母細(xì)胞增生癥和胃泌素刺激之間。
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發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種組合物，尤其是一種藥物組合物，包含一種或多種可以在糖尿病和其并發(fā)癥治療中提供有益效果的胃泌素化合物。
一個(gè)方面本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包含一種或多種治療后提供有益效果，尤其是持久有益效果的胃泌素化合物。本發(fā)明的一種組合物提供的有益效果可以包括胃泌素化合物的吸收、分布、代謝和/或消除的增加。一種組合物可以具備增加的生物利用率(吸收更快并且更高)或提供增強(qiáng)的治療的效果，尤其是持久的有益效果。
本發(fā)明也提供了一種用于向病人給藥以提供有益效果的藥物組合物，尤其是持久的有益效果，包含一種胃泌素化合物和任選的可藥用的載體、輔料或賦形劑。
本發(fā)明也提供了一種用于治療疾病或病癥的藥物組合物，包含存在于可藥用的載體、輔料或賦形劑中提供持久有益效果的治療有效量的胃泌素化合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種包含胃泌素化合物的藥物組合物，該藥物組合物適于給予個(gè)體以提供持久的有益效果以治療病癥或疾病。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該組合物是一種給予個(gè)體后產(chǎn)生大約正常血糖水平的劑型，這種大約正常的血糖水平在治療停止之后持續(xù)一段時(shí)間。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種包含胃泌素化合物或其可藥用鹽的液體藥物劑型，且涉及可以重組以制備穩(wěn)定且適合于腸胃外投藥的混懸液的凍干藥物制劑。
在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種包含適于供給持久的有益效果的胃泌素化合物的含水組合物。本發(fā)明也提供了一種包含提供持久有益效果的胃泌素化合物或其可藥用鹽和至少一種增溶劑的含水制劑藥物。
本發(fā)明涉及包含在治療病癥或疾病尤其是糖尿病中提供有益效果，尤其是持久有益效果的胃泌素化合物的組合物。
在另一方面，本發(fā)明涉及一種組合物，包含有效劑量的胃泌素化合物用于誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞增殖為增加量的成熟胰島素分泌細(xì)胞，尤其是在給予胃泌素化合物后一段持續(xù)時(shí)期內(nèi)。胰島前體細(xì)胞的增殖可以在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)。該組合物可以是劑量有效地用于誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟胰島素分泌細(xì)胞。該組合物可以存在于可藥用的載體、輔料或賦形劑。
本發(fā)明又提供了一種制備穩(wěn)定要?jiǎng)?wù)組合物的方法，該組合物包含一種或多種治療后適于提供有益效果的胃泌素化合物，尤其是持久的有益效果。一種包含混合一種或多種胃泌素化合物和一種可藥用的載體、輔料、或賦形劑的方法，尤其是有效物理穩(wěn)定胃泌素化合物的一種可藥用的載體、輔料、或賦形劑。組合物制備以后，可以將他們置于適當(dāng)?shù)娜萜髦胁①N上標(biāo)簽標(biāo)明治療的病癥。為了本發(fā)明組合物的給藥，這樣的標(biāo)記包括給藥量、頻率、和方法。
本發(fā)明也預(yù)期包含至少一種胃泌素化合物的組合物在制備用于預(yù)防和/或治療病癥和/或疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明另外提供了本發(fā)明藥物組合物在預(yù)防和/或治療病癥和/或疾病藥物制備中的應(yīng)用。治療后該藥物提供有益的效果，尤其是持久的有益效果。
本發(fā)明提供了一種用于治療和/或預(yù)防個(gè)體病癥和/或疾病的方法，包括給予該個(gè)體治療有效量的一種或一種以上胃泌素化合物以提供有益效果。在一方面本發(fā)明提供了一種治療方案，治療后該治療方案產(chǎn)生持久的有益效果。
本發(fā)明在預(yù)防和/或治療糖尿病中有獨(dú)特的應(yīng)用。因而，本發(fā)明涉及一種治療方法，包括給予治療有效量的一種或一種以上胃泌素化合物，該化合物給予帶有糖尿病癥狀的個(gè)體產(chǎn)生有益效果，尤其是持久的有益效果。在一個(gè)實(shí)施方案中，持久的有益效果通過一個(gè)或多個(gè)下述得到證實(shí)(a)C-肽生成增多；(b)胰腺胰島素生成增多；和/或(c)大約正常的血糖水平。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防和/或治療I型或II型糖尿病的方法，包括給予治療有效量的本發(fā)明的一種組合物。
在另外的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于在遭受I型或II型糖尿病個(gè)體中改善病癥和/或疾病進(jìn)展或獲得病癥和/或疾病較輕階段的方法，包括給予治療有效量的本發(fā)明的一種組合物。
本發(fā)明涉及一種延遲葡萄糖耐量降低的進(jìn)展或非胰島素需求II型糖尿病向胰島素需求II型糖尿病轉(zhuǎn)變的方法，包括給予治療有效量的本發(fā)明的一種組合物。
本發(fā)明也涉及一種增加個(gè)體合成胰島素能力的方法，包括給予治療有效量的本發(fā)明的一種組合物。
在本發(fā)明方法的實(shí)施方案中，個(gè)體不使用胰島素治療。
本發(fā)明提供了一種藥盒，包含本發(fā)明的一種或多種胃泌素化合物或藥物組合物。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于預(yù)防和/或治療糖尿病的藥盒，含有包含一種或多種胃泌素化合物的組合物、容器和使用說明書。該藥盒的組合物可以進(jìn)一步包含可藥用的載體、輔料或賦形劑。
從下述附圖和詳細(xì)說明中，本發(fā)明的各個(gè)方面、特征和優(yōu)越性對(duì)那些在本領(lǐng)域擅長(zhǎng)的人來說是顯而易見的。


參考這些附圖可以更好地理解本發(fā)明圖1是顯示用E1(1μg/Kg/天I.P.14)或G1(3g/Kg/天I.P.14天)治療最近糖尿病發(fā)病NOD小鼠治療結(jié)果的條線圖。顯示了第0天和糖尿病發(fā)病35天后(FBG＞6.6mM)的空腹血糖水平(mM)。
圖2和圖1描述的一樣是顯示用E1或者G1治療最近糖尿病發(fā)病NOD鼠的治療結(jié)果條線圖。胰腺胰島素含量(μg/pancreas)是顯示單獨(dú)在糖尿病發(fā)病和第35天的媒介物。14天后停止治療。
圖3是顯示監(jiān)視最近發(fā)病糖尿病NOD鼠8周結(jié)果的線條圖，包括使用胃泌素的最初18天療程。顯示了在第0周和其后各周的空腹血糖水平(mM)。
圖4是顯示用G1治療方案降低慢性糖尿病胰島素依賴NOD鼠空腹血糖水平和預(yù)防胰島素療法停止14天后死亡的圖表。
實(shí)施方案的詳細(xì)說明詞匯本文終點(diǎn)敘述的數(shù)值范圍包括了包含在該范圍內(nèi)所有的數(shù)值和分?jǐn)?shù)(例如1到5包括1、1.5、2、2.75、3、3.90、4和5)。也可以理解為所有的數(shù)值和其分?jǐn)?shù)可以通過術(shù)語″″約”意為加上或減去所參考數(shù)值的0.1-50％、5-50％、或10-40％，尤其是10-20％，更優(yōu)選10％或15％。進(jìn)一步，可以這樣理解，除非本文另外明確指示，″″″而，例如提及一種組合物含有″合物的混合物。
本文描述的化合物可以包含一種或多種不對(duì)稱中心和可以產(chǎn)生對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體及其他立體異構(gòu)化的形式，其可以按照立體化學(xué)定義為R或S型。因此，本發(fā)明包括所有這樣可能的非對(duì)映異構(gòu)體和對(duì)映異構(gòu)體以及他們的外消旋體和旋光純形式。光學(xué)活性(R)-和(S)-異構(gòu)體可以使用手性的合成單體或手性試劑或使用傳統(tǒng)方法分解制備。除非另外指定，當(dāng)本文描述的化合物包含幾何不對(duì)稱性中心時(shí)，該化合物同時(shí)包括E和A兩種幾何異構(gòu)體。所有的互變異構(gòu)形式都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本文描述的術(shù)語″″″″指包括溫血?jiǎng)游镌趦?nèi)的一種動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物，其患有或被懷疑將要或正偏向于一種疾病或病癥。哺乳動(dòng)物包括非限制性的哺乳綱的任何成員。通常，該術(shù)語是指人。該術(shù)語也包括繁殖用于食物或當(dāng)做寵物的家畜，包括馬、奶牛、羊、家禽、魚、豬、貓、和動(dòng)物園動(dòng)物、山羊、猿(例如大猩猩或黑猩猩)、和嚙齒動(dòng)物例如老鼠和小鼠。本文使用在主體/個(gè)體/個(gè)體上的方法預(yù)期預(yù)防和治療用途。本文描述的用于治療方案典型的主體包括易感、遭受或已經(jīng)遭受病癥或疾病的人。本發(fā)明實(shí)施方案中一種主體是糖尿病個(gè)體。
術(shù)語″不影響活性成分的效力或活性且對(duì)主體沒有毒性。載體、輔料、或賦形劑包括稀釋劑、粘合劑、膠粘劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、填充劑、濕潤(rùn)劑或乳化劑、pH緩沖劑和為了制備一種獨(dú)特組合物所必須的諸如吸收劑的其他材料。載體等的實(shí)例包括但不限于鹽水、緩沖鹽水、葡萄糖、水、甘油、乙醇和其混合物。用于活性物質(zhì)的這些媒介和試劑的用途在本領(lǐng)域是公知的。
″合使用的化合物中?？伤幱名}的實(shí)例包括鈉、鈣、銨、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙胺、2-乙胺基、乙醇、組氨酸、procarine和羧基鉀鹽和氨基鹽酸鹽。氨基其他可藥用的鹽是氫溴酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、草酸鹽、磷酸氫鹽、二氫的磷酸鹽、醋酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽(甲磺酸鹽)和對(duì)甲苯磺酸鹽(甲苯磺酸鹽)。
術(shù)語″/或治療”是指在病癥或者疾病發(fā)病前后給予主體一種本發(fā)明的組合物。治療方案可能實(shí)行一種急性或者慢性途徑?！宓乃幚韺W(xué)和/或治療學(xué)效果，和改善的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和生物活性。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，有益效果包括但不限于下列胰島炎癥的減輕或消失、疾病進(jìn)展的減緩或預(yù)防、存活率增加、或疾病或病癥的治療或恢復(fù)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，有益效果可以通過一個(gè)或多個(gè)下述得以證明(a)空腹血糖水平降低，尤其是當(dāng)血糖水平大于7-10mM時(shí)；(b)血紅蛋白糖基化降低；(c)血清胰島素濃度升高；(d)胰腺胰島素產(chǎn)物或含量增多；和/或(e)疾病進(jìn)展的預(yù)防。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，該有益效果包括(a)、(b)和(c)或(a)、(c)和(d)。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該有益效果是一個(gè)″果”，該有益效果在治療終止后持續(xù)一個(gè)延長(zhǎng)時(shí)段。治療之后有益效果可以持續(xù)至少約2至4周、2至5周、3至5周、2至6周、2至8周、2至10周、2至12周、2至14周、2至16周、2至20周、2至24周、2周至12月或2周至18月的延長(zhǎng)期。有益效果持續(xù)的時(shí)段可能與治療的持續(xù)時(shí)間和測(cè)定時(shí)間有關(guān)。個(gè)體可能周期性或連續(xù)性地連續(xù)治療約或至少約2至4周、2至6周、2至8周、2至10周、2至12周、2至14周、2至16周、2周至6個(gè)月、2周to 12個(gè)月、2周至18個(gè)月。一段持久的有益效果可以顯示為治療后一個(gè)延長(zhǎng)時(shí)段內(nèi)一個(gè)或多個(gè)C-肽產(chǎn)物的增加、胰腺胰島素產(chǎn)物或含量的增加、和大約正?；虻偷难撬健?br> 與不使用該化合物的效果比較，按照對(duì)胃泌素化合物效果的統(tǒng)計(jì)分析該有益效果是一個(gè)統(tǒng)計(jì)上顯著的效果。″″常不同的”效果或水平可以表現(xiàn)為高或低于標(biāo)準(zhǔn)水平。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，和沒有胃泌素化合物的效果相比，該區(qū)別可能高出或低出1.5、2、3、4、5或6倍。
″(例如胃泌素化合物)或能夠產(chǎn)生一種或多種期望的有益效果，尤其是一種或多種持久的有益效果的本發(fā)明組合物的用量或劑量。物質(zhì)的治療有效量可以根據(jù)諸如個(gè)體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重和該物質(zhì)在個(gè)體中引起期望的反應(yīng)的能力等因素變化?？梢哉{(diào)節(jié)劑量以提供最佳的治療學(xué)的效應(yīng)(例如持續(xù)的有益效果)。例如可以每天給予幾個(gè)分劑量或根據(jù)治療情況的急迫性相應(yīng)地減少劑量。
″或″具有相同氨基酸順序的多肽。這樣的自然序列多肽可以從自然中分離或可以通過重組或合成方式制得。該術(shù)語明確地包括由一個(gè)多肽自然地發(fā)生截?cái)嗷蚍置?，包括自然地發(fā)生變體形成得多肽變體(例如可選擇地剪接形成或剪接變體)，和自然產(chǎn)生的等位變體。
術(shù)語″70-80％、尤其是至少大約85％、更優(yōu)選至少約90％、最優(yōu)選至少大約95％氨基酸序列同一性的多肽，尤其是與任何SEQ ID Nos.1到5中的序列識(shí)別具有至少70-80％、85％、95％、98％、或99％氨基酸序列同一性。這樣的變體包括，例如多肽全長(zhǎng)的N-或C-末端增加或刪掉一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基或包括從其他種類得到的變體SEQ ID NOs1到5的成熟序列，但不包括自然序列多肽。
兩個(gè)氨基酸序列或兩個(gè)核酸序列的同一性百分率定義為該候選序列中氨基酸殘基或核苷酸相當(dāng)于多肽或核酸序列中氨基酸殘基的百分比。排列序列和引入缺口染色體后，必要時(shí)為了得到最大百分比的序列同一性，且不考慮任何保守置換作為該序列同一性的一部分。用于測(cè)定氨基酸或核酸序列同一性百分率的基準(zhǔn)線可以在多種傳統(tǒng)的方法中獲得例如使用公開的可獲得的計(jì)算機(jī)軟件包括GCG程序包(Devereux J.等人，Nucleic Acids Research 12(1)387，1984)；BLASTP，BLASTN，and FASTA(Atschul，S.F.等人J.Molec.Biol.215403-410，1990)。BLAST程序可從NCBI及其他來源公開地獲得(BLAST Manual，Altschul，S.等人NCBI NLM NIH Bethesda，Md.20894；Altschul，S.等人J.Mol.Biol.215403-410，1990)。熟練的技術(shù)人員可以決定用于測(cè)量基準(zhǔn)線的適當(dāng)?shù)膮?shù)，包括要獲得該被相比的序列全長(zhǎng)最大基準(zhǔn)線的任何算法。用于測(cè)定同一性和相似性的方法都編纂在公眾可獲得的計(jì)算機(jī)程序中。
″基酸殘基所取代、母體多肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已經(jīng)轉(zhuǎn)化、母體多肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已經(jīng)被除去、和/或一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被加成到該母體肽上的多肽。這樣的加成、取代、消去、和/或轉(zhuǎn)換可以在N-末端或C-末端或在該母體多肽內(nèi)，或它們的組合。
可以通過標(biāo)準(zhǔn)方法將突變引入一個(gè)多肽中，例如定位誘變和PCR介導(dǎo)的誘變。保守置換可以發(fā)生在一個(gè)或多個(gè)預(yù)測(cè)的非必需氨基酸殘基上?！逑嗨苽?cè)鏈的氨基酸殘基所替換。帶有相似側(cè)鏈的氨基酸在本領(lǐng)域是公知的包括帶有堿性側(cè)鏈的氨基酸(例如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電的極性側(cè)鏈(例如甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸和半胱氨酸)、非極性的側(cè)鏈(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、Iso、脯氨酸、色氨酸)、β-側(cè)鏈(例如蘇氨酸、纈氨酸、Iso)，和芳香側(cè)鏈(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。突變還可以隨機(jī)地引入自然序列的一部分或全部當(dāng)中，例如通過飽和誘變。伴隨著誘變變體多肽可以通過重組表達(dá)。
″基已經(jīng)經(jīng)過化學(xué)修飾?；瘜W(xué)修飾包括添加化學(xué)部分、產(chǎn)生新的鍵和消除化學(xué)部分。一個(gè)多肽可以被化學(xué)修飾，例如烷化、?；?、糖基化、pegylation、酯的形成、脫酰胺、或氨化物的形成。
″(優(yōu)選生物學(xué)活性的)的與異源多肽可操縱地連接的精選多肽(例如除了該精選的多肽之外的一個(gè)多肽)。在融合蛋白之內(nèi)，術(shù)語″該精選多肽和該異源的多肽是彼此結(jié)構(gòu)內(nèi)融合的。該異源多肽可以融合到一個(gè)精選多肽的N-末端或C-末端?？梢酝ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA的方法產(chǎn)生嵌合和融合蛋白質(zhì)。
″物，其完全地或部分地、直接地或間接地、增強(qiáng)、誘導(dǎo)、模仿、或在其他方面提高胃泌素或胃泌素/CCK受體的活性。尤其是，可以使用一個(gè)胃泌素化合物完全地或部分地關(guān)聯(lián)和/或激活胃泌素/CCK受體。胃泌素/CCK受體包括與胃泌素相關(guān)的受體。
在本發(fā)明的一些應(yīng)用中，胃泌素化合物可以是與胃泌素/CGK受體相關(guān)的、連接在一起的，有影響的或有刺激作用的配位體。胃泌素化合物可以精選的，是一種具有合適的IC50的肽或非肽小分子，例如大約0.7nM的IC50，通過本領(lǐng)域所公知的方法測(cè)得(參看Singh等人(1995)J.)Biol.Chem.2708429-8438，和Kopin等人(1995)J.Biol.Chem.2705019-5023描述了體外細(xì)胞生長(zhǎng)測(cè)定，受體結(jié)合測(cè)定描述于Singh等人(1995)J.Biol.Chem.2708429-8438，和Kopin等人(1995)J.Biol.Chem.2705019-5023)。
″片、類似物(例如突變蛋白質(zhì))、衍生物、亞型、變體、嵌合多肽、具有序列同一性的多肽、肽模擬物、和其可藥用的鹽、和活性的代謝產(chǎn)物和前體藥物。特別地該術(shù)語包括胃泌素的多種形式，前胃泌素原、前胃液素、例如胃泌素-34(大胃泌素)、胃泌素17(小胃泌素)、胃泌素8(微型胃泌素)、五肽促胃酸激素、四肽胃泌素和片斷、類似物、和其衍生物。
胃泌素的序列包括大胃泌素-34(Bonato等人，1986，Life Science39959)和小胃泌素-17(Bentley等人(1966)Nature 209583)都顯示在SEQ ID NOs.1到5當(dāng)中。大胃泌素-34本質(zhì)上是小胃泌素-17在N-末端的一個(gè)氨基酸序列的擴(kuò)展。大胃泌素在體內(nèi)裂解釋放胃泌素-17。Glp在N-末端是焦谷氨酸，其是一種谷氨酸的自然環(huán)化形式。在多種實(shí)施方案中，當(dāng)半胱氨酸或賴氨酸加成到具有焦谷氨酸的胃泌素的末端時(shí)，該焦谷氨酸被替換為谷氨酸，或該焦谷氨酸被消去。進(jìn)一步，正如本文SEQ ID NOs1到4所示，胃泌素-34和胃泌素-17可以在15位具有甲硫氨酸或亮氨酸。胃泌素化合物可以是硫酸化的或非硫酸化的。[參看J.H.Walsh，″Gastrin″in Gut PeptidesBiochemistry and Physiology，ed.J.H.Walsh and G.J.Dockray，Raven Press Ltd.，New York，1994關(guān)于胃泌素的綜述]胃泌素化合物也包括活性類似物、片斷及其他變體，例如與內(nèi)源哺乳動(dòng)物胃泌素或自然序列胃泌素共享氨基酸序列同一性，例如共享60％、70％、80％、90％、95％、98％、或99％序列同一性。
可用于本發(fā)明的胃泌素化合物的實(shí)例包括揭示在美國(guó)專利6,288,301中的化合物。在本發(fā)明的一些應(yīng)用中，胃泌素化合物可以選自胃泌素受體的肽或非肽激動(dòng)劑或部分激動(dòng)劑例如A71378(Lin等人，Am.J.Physiol.258(4Pt1)G648，1990)。在本發(fā)明的其他應(yīng)用中，胃泌素化合物可以是胃泌素/CCK受體配位體，包括但不限于本文描述的胃泌素化合物、或諸如CCK 58、CCK 33、CCK 22、CCK 12和CCK 8的縮膽囊肽(CCK)；等等。
胃泌素化合物也包括能增加內(nèi)源性胃泌素分泌的物質(zhì)、縮膽囊肽或來自于組織儲(chǔ)藏的相似的活性肽。實(shí)例是胃釋放肽、抑制胃酸分泌和增加血漿胃泌素水平的奧美拉唑、增加CCK刺激的大豆胰蛋白酶抑制劑、和刺激胃泌素分泌而不與胃泌素受體結(jié)合的胃泌素釋放肽。
可以用常規(guī)方法制備胃泌素化合物。例如諸如胃泌素17的小的胃泌素形式可以通過肽合成而經(jīng)濟(jì)地的制備，且合成肽是市場(chǎng)上買得到的。尤其是，可以使用在蛋白質(zhì)化學(xué)所公知的方法通過化學(xué)合成來合成胃泌素化合物，例如固相合成(Merrifield，1964，J.m.Chem.Assoc.852149-2154)或在同質(zhì)溶液中合成(Houbenweyl，1987，Methods of Organic Chemistry，ed.E.Wansch，Vol.15I andII，Thieme，Stuttgart)。可以使用人工操作程序或自動(dòng)化完成該合成?？梢赃M(jìn)行自動(dòng)合成，例如使用AppliedBiosystems431A肽合成器(Perkin Elmer)。
胃泌素化合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的重組體方法制備。因此，本發(fā)明預(yù)期編碼胃泌素化合物和任選的調(diào)控元件的核苷酸序列，和一種包含用于胃泌素化合物制備的核苷酸序列的宿主細(xì)胞。
胃泌素化合物也可以從商業(yè)的來源獲得。例如從Bachem AGBubendorf(瑞士)和Research Plus Inc(新澤西，美國(guó)可以獲得在15位具有甲硫氨酸或亮氨酸合成人胃泌素17。
包含胃泌素化合物核苷酸序列的″真核宿主細(xì)胞。例如該多肽可以表達(dá)在細(xì)菌細(xì)胞例如E.大腸菌、芽胞桿菌、或Streptonzyces、昆蟲細(xì)胞(采用桿狀病毒)、酵母細(xì)胞、或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中。其他適合的宿主細(xì)胞可以在Goeddel，GeneExpression TechnologyMethods inEnzymology 185，AcademicPress，San Diego，CA(1991)中發(fā)現(xiàn)。也可以選擇一種宿主細(xì)胞，其調(diào)整一個(gè)插入核苷酸序列的表達(dá)，以一種需要的方式修飾(例如糖基化或磷酸化作用)和加工(例如裂解)該多肽。宿主系統(tǒng)或細(xì)胞系可以選自具有特殊的和特有的結(jié)構(gòu)用于蛋白質(zhì)的翻譯后加工和修飾。為了蛋白質(zhì)長(zhǎng)期高產(chǎn)率穩(wěn)定的表達(dá)，可以設(shè)計(jì)穩(wěn)定地表達(dá)該基因產(chǎn)物的細(xì)胞系和宿主系統(tǒng)。
″因表達(dá)中具有調(diào)節(jié)作用的因子，例如啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，用于產(chǎn)生重組結(jié)構(gòu)編碼胃泌素化合物的大量合適的媒介和啟動(dòng)子是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的且是市場(chǎng)上買得到的。下面舉例說明載體。細(xì)菌性的pBs、phagescript、PsiX174、pBluescript SK、pBs KS、pNH8a、pNH16a、pNH18a、pNH46a(stratagene)；pTrc99A、pKK223-3、pKK233-3、pDR540、pRIT5(pharmacia)。真核生物的pWLneo、pSV2cat、pOG44、PXTL pSG(stratagene)pSVK3、pBPV、pMSG、pSVL(pharmacia)。正如本文所定義的″”是指在載體或細(xì)胞之內(nèi)的一個(gè)游離多核苷酸和一種調(diào)節(jié)因子以通過已經(jīng)轉(zhuǎn)染成具有該連接的多核苷酸/調(diào)節(jié)因子序列的宿主細(xì)胞的方式表達(dá)該多肽。調(diào)控元可以是基本的或誘發(fā)轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)部位，例如通過增加胞內(nèi)的葡萄糖濃度誘導(dǎo)胰島素因子轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)的部位。
″/或疾病”、″″癥。本文所用的術(shù)語″明顯的癥狀，包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型、和包括人類I型和II型糖尿病、糖尿病初始階段、和以胰島素降低或血糖水平輕度地升高為特征的前驅(qū)糖尿病的癥狀?！逄撬奖憩F(xiàn)的個(gè)體，和/或顯示出易于患糖尿病或與家族史遺傳傾向性相關(guān)的癥狀，或就II型糖尿病來說的肥胖，和包括以前曾患有糖尿病或相關(guān)癥狀的個(gè)體和再患病的風(fēng)險(xiǎn)。
″分泌的能力，以產(chǎn)生或增加細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收量，降低血清葡萄糖或血糖水平。本領(lǐng)域所公知的方法可用于測(cè)定促胰島素的活性。例如可以用體外和體內(nèi)方法測(cè)量胃泌素受體鍵合活性，受體活化作用(參看授予Gelfand等人的EP 619,322專利和美國(guó)專利5,120,712中描述的方法)、和胰島素或C-肽水平。如果胰島細(xì)胞在該化合物或組合物存在的情況下分泌胰島素超過基本水平或缺乏胃泌素化合物或組合物的水平，本文描述的化合物或組合物具有促胰島素活性。
″胞、胰島前體細(xì)胞、或β-細(xì)胞，其可能具有或不具有擁有以無限方式復(fù)制的能力的干細(xì)胞的特性。
組合物和方法本發(fā)明涉及利用一個(gè)或多個(gè)胃泌素化合物提供有益效果，尤其是增強(qiáng)的有益效果，更優(yōu)選持久的有益效果的組合物和方法。
在一個(gè)實(shí)施方案中，其中的疾病或癥狀是糖尿病，組合物的持久有益效果或本發(fā)明的治療方案可以顯示為一個(gè)或多個(gè)選自下列a)帶有糖尿病癥狀的個(gè)體給予胃泌素化合物后，胰腺胰島素水平相對(duì)于沒有胃泌素化合物的水平升高。優(yōu)選地，該化合物在一個(gè)個(gè)體胰腺胰島素水平上誘發(fā)至少大約0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、5％、10％、15％、20％、30％、33％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或99％的升高。
b)帶有糖尿病癥狀的個(gè)體給藥后胰島炎癥癥狀的降低或消失。
c)相對(duì)于在沒有使用胃泌素化合物的帶有糖尿病癥狀的個(gè)體中測(cè)量的血糖水平降低。優(yōu)選地，該化合物誘發(fā)至少大約2％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％的血糖水平降低。最優(yōu)選地，該化合物產(chǎn)生大約或接近于一個(gè)正常個(gè)體的普通水平的血糖水平。
d)葡萄糖耐量提高，尤其是，在葡萄糖耐量上提高至少大約5-95％、10-90％、10-80％、10-70％、10-60％。
e)相對(duì)于在沒有使用胃泌素化合物的帶有糖尿病癥狀的個(gè)體中測(cè)量的C-肽水平升高。優(yōu)選地，該化合物引起至少大約0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、5％、10％、15％、20％、30％、33％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或99％的C-肽水平升高。
f)血糖水平大約正常維持一段持續(xù)很久的時(shí)段、尤其是至少1周、3周、4周、5周、6周、8周、10周、12周、14周、16周、20周、24周、30周、40周、52周，或78周、更優(yōu)選2到4周、2到5周、3到5周、2到6周、2到8周、2到10周、2到12周、2到16周、2到20周、2到24周、2周到了12月，或2周到18月。
g)降低、預(yù)防、或減緩糖尿病個(gè)體中的疾病進(jìn)展的速度。
h)降低或預(yù)防糖尿病癥狀的嚴(yán)重的高血糖和酮酸中毒的進(jìn)展。
i)帶有糖尿病癥狀個(gè)體的存活率升高。
j)降低通至少10-90％、10-80％、10-70％、1060％、10-50％、10-40％、10-30％、或10-20％的胰島素注射/攝入需求量。
一個(gè)或多個(gè)這樣的有益效果可以在糖尿病個(gè)體或疾病模型，例如一個(gè)帶有糖尿病癥狀的不肥胖的(NOD)小鼠中顯示出來。
在根據(jù)一個(gè)或多個(gè)下列特性可以選擇胃泌素化合物用于本發(fā)明中特殊的應(yīng)用與胃泌素受體的結(jié)合能力；引發(fā)轉(zhuǎn)導(dǎo)遺傳途徑信號(hào)產(chǎn)生增殖和/或分化β-細(xì)胞或促胰島素的活性的能力；降低葡萄糖水平的能力；促胰島素的活性；β-細(xì)胞繁殖/分化的刺激；和/或在人們使用的常規(guī)方法中，至少5分鐘到24小時(shí)的體內(nèi)半衰期，優(yōu)選2到10小時(shí)或2到8小時(shí)。
可以選擇本發(fā)明的藥物組合物和方法，其具有持久的有益效果，優(yōu)選統(tǒng)計(jì)上顯著的持久的有益效果。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種具有統(tǒng)計(jì)上顯著的持久有益效果的藥物組合物包括選自下列的一種胃泌素化合物胃泌素17和其類似物和衍生物、優(yōu)選的具有17位氨基酸殘基在氨基酸15位連著一個(gè)亮氨酸殘基的合成人胃泌素I。在一種具體的實(shí)施方案中，提供了包含胃泌素-17(亮氨酸)的具有統(tǒng)計(jì)上顯著的有益效果的藥物組合物。
本發(fā)明預(yù)期了本發(fā)明的組合物用于預(yù)防、和/或改善疾病嚴(yán)重性、病征、和/或病癥和/或疾病再發(fā)生周期性的用途。本發(fā)明也預(yù)期了使用本發(fā)明組合物或治療方案預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物的癥狀和/或疾病。尤其是，本發(fā)明提供使用胃泌素化合物用于糖尿病持續(xù)的治療方案的改善方法和組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中本發(fā)明提供了一種包含胃泌素化合物的組合物，該組合物獲得了更大的效能、效力和效用。該更大效能可以通過改善治療中的嚴(yán)重的糖尿病個(gè)體的葡萄糖耐量顯示出來，該治療方案在停止治療后以及最新發(fā)病的糖尿病個(gè)體中產(chǎn)生血糖水平的持續(xù)改善。本文描述組合物產(chǎn)生的葡萄糖耐量改善可以通過使用低的胃泌素劑量觀察到，例如低于1-50μg/kg體重的劑量，尤其是1-30μg/kg體重。
本發(fā)明胃泌素治療方案的更大的效能和效力改善了治療方案的治療比率，減少了不利的副作用和毒性。即使治療方案是在β細(xì)胞破壞完成很久以后才開始，本發(fā)明的方法也提高長(zhǎng)期的糖尿病改善的效用。
雖然不希望通過特殊的機(jī)理而結(jié)合，使用胃泌素醫(yī)冶之后在葡萄糖耐量方面的改善可以引起β細(xì)胞再生和伴隨的β細(xì)胞團(tuán)塊增加。根據(jù)形態(tài)測(cè)量，組織學(xué)分析可以顯示使用胃泌素治療方案激發(fā)了β細(xì)胞再生伴隨β細(xì)胞團(tuán)塊的增加。這些可以通過生物化學(xué)上胰腺胰島素含量的增加得以證實(shí)。增加的β細(xì)胞團(tuán)塊還可以引起胰島素分泌到血流中量的增加，其可以通過血漿中循環(huán)C-肽的增加顯示出來。
長(zhǎng)久有效的胰島細(xì)胞再生可以根據(jù)本發(fā)明給予本發(fā)明的胃泌素化合物或組合物后而獲得。胃泌素化合物組合物給予個(gè)體體內(nèi)以達(dá)到胰島細(xì)胞的增殖和/或分化或給予體外細(xì)胞用于移植?？梢允褂冒ㄖ亟M方法在內(nèi)的本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法將胃泌素化合物引入細(xì)胞。例如一個(gè)嵌合胰島素啟動(dòng)子-胃泌素融合基因可以在體內(nèi)或體外引入到胰腺細(xì)胞以表達(dá)一個(gè)或多個(gè)胃泌素化合物。
本發(fā)明涉及一種用于干細(xì)胞或祖細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞發(fā)展和分化的方法，包括用本發(fā)明的一種治療有效量的胃泌素化合物或組合物接觸干細(xì)胞或祖細(xì)胞或用以繁殖和分化干細(xì)胞或祖細(xì)胞的足夠量的胃泌素化合物或組合物。干細(xì)胞可以獲自于胰島、臍帶、胚胎、或干細(xì)胞管。與不使用胃泌素化合物組合物相比，繁殖和分化的用量和持續(xù)時(shí)間非常不同。在一個(gè)實(shí)施方案中，干細(xì)胞或祖細(xì)胞在培養(yǎng)基中與胃泌素化合物或組合物接觸。在另一實(shí)施方案中，干細(xì)胞或祖細(xì)胞在個(gè)體體內(nèi)與胃泌素化合物或組合物接觸。胃泌素化合物或組合物可以在干細(xì)胞移植到個(gè)體之前、期間和之后給藥，以在長(zhǎng)時(shí)間的一段時(shí)期內(nèi)繁殖和分化個(gè)體體內(nèi)的干細(xì)胞。該方法可以另外包括給予一種免疫抑制劑。
在一方面，本發(fā)明提供了一種用于治療糖尿病的方法，通過提供一種包含給藥以后在長(zhǎng)時(shí)間的一段時(shí)期內(nèi)足夠有效地分化胰島前體細(xì)胞到成熟胰島素分泌細(xì)胞量的胃泌素化合物。該組合物的胃泌素化合物可以在生理可接受的載體中系統(tǒng)給藥，尤其是注射、優(yōu)選靜脈內(nèi)注射。可選擇地，胃泌素化合物可以在原位表達(dá)，在提供細(xì)胞內(nèi)化合物表達(dá)的表達(dá)結(jié)構(gòu)載體中具有一個(gè)或多個(gè)編碼胃泌素化合物的核酸體外或體內(nèi)轉(zhuǎn)化胰島前體細(xì)胞。編碼胃泌素化合物的核酸可以包含在包含前胃泌素原肽前體編碼序列的表達(dá)結(jié)構(gòu)中，接著表達(dá)加工成胃泌素。該表達(dá)結(jié)構(gòu)可以包括調(diào)控元件。
本發(fā)明也涉及誘導(dǎo)個(gè)體胰島再生，包含使胰島前體細(xì)胞與足以增加和延長(zhǎng)個(gè)體胰島前體細(xì)胞的增殖從而誘導(dǎo)胰島再生的量的本發(fā)明的胃泌素化合物或組合物。一方面，本發(fā)明提供了一種用于激發(fā)個(gè)體持續(xù)的β-細(xì)胞增殖的方法，包括給予治療有效量的本發(fā)明的一種胃泌素化合物或組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于持續(xù)一段時(shí)間內(nèi)增加個(gè)體β-細(xì)胞數(shù)量和/或大小的方法，包括給予治療有效量的本發(fā)明的一種胃泌素化合物或組合物。
多能胰腺前體細(xì)胞的再生性分化，例如可以使用胃泌素化合物獲得一個(gè)延長(zhǎng)時(shí)期的胰腺導(dǎo)管細(xì)胞分化為成熟胰島素-分泌細(xì)胞，本文所述的組合物和方法用于糖尿病的治療，尤其是剛起病的糖尿病，且通過治療學(xué)給予胃泌素化合物或組合物，該化合物或組合物是系統(tǒng)給藥，或在胰腺內(nèi)原位表達(dá)。
本發(fā)明提供了用于在需要治療的個(gè)體中治療糖尿病的方法，通過給予一種包含有足夠使個(gè)體的胰島前體細(xì)胞持久分化成成熟胰島-分泌細(xì)胞和/或刺激現(xiàn)有胰島細(xì)胞合成胰島素的量的胃泌素化合物的組合物。該組合物可以系統(tǒng)給藥或原位表達(dá)，通過宿主細(xì)胞包含一種核酸構(gòu)造在一種表達(dá)載體，其中該核酸構(gòu)造在胰島前體細(xì)胞中包含一種用于胃泌素化合物的編碼序列，轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控元件功能。
在一方面，本發(fā)明提供一種用于在需要治療的個(gè)體中治療糖尿病的方法，該方法包括給予該個(gè)體一種組合物，該組合物提供足以產(chǎn)生胰島前體細(xì)胞持久分化為成熟胰島素-分泌細(xì)胞的量的胃泌素化合物。在另一方面，本發(fā)明提供了一種用于治療胰島素依賴糖尿病，尤其是I型或糖尿病初期的方法，包括優(yōu)選系統(tǒng)地給予糖尿病哺乳動(dòng)物一種分化再生量的胃泌素化合物以刺激胰島再生引起給藥后持續(xù)一段時(shí)期內(nèi)胰腺內(nèi)功能性葡萄糖響應(yīng)的島素分泌細(xì)胞數(shù)量地增加。
本發(fā)明預(yù)期了一種在一個(gè)持久的時(shí)期內(nèi)擴(kuò)展移植到糖尿病個(gè)體體內(nèi)的胰島功能性β細(xì)胞量的方法，該方法包括給予個(gè)體一種本發(fā)明的治療有效量的胃泌素化合物或組合物。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了一種用于預(yù)防和/或治療糖尿病的方法，該方法包括給予需要治療的哺乳動(dòng)物一種組合物，該組合物包含給藥后足以在哺乳動(dòng)物體內(nèi)一段持久的時(shí)期內(nèi)增加胰島素分泌細(xì)胞的胃泌素化合物，以此預(yù)防和/或治療糖尿病。該組合物是系統(tǒng)給藥。該哺乳動(dòng)物是糖尿病哺乳動(dòng)物，例如該哺乳動(dòng)物已經(jīng)得了其壽命的1％時(shí)間的糖尿病，該胃泌素化合物以足以在持久的一段時(shí)期內(nèi)誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞分化為葡萄糖響應(yīng)的胰島素分泌細(xì)胞的量提供。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供了一種用于預(yù)防和/或治療糖尿病的方法，該方法包括給予需要治療的哺乳動(dòng)物一種組合物，該組合物包含給藥后足以在一段持久的時(shí)期內(nèi)增加胰島組織內(nèi)胰島前體細(xì)胞分化的量和過程的量的胃泌素化合物，以此預(yù)防和/或治療糖尿病。
在另一方面，本發(fā)明提供了一種預(yù)防和/或治療糖尿病的方法，該方法包括給予需要治療的哺乳動(dòng)物一種組合物，該組合物包含給藥后足以在一段持久的時(shí)期內(nèi)增加哺乳動(dòng)物體內(nèi)胰島素分泌β細(xì)胞數(shù)量的量的胃泌素化合物，確定胰島再生的數(shù)量，以此預(yù)防和/或治療糖尿病。胰島再生的數(shù)量可以通過下列一個(gè)或多個(gè)參數(shù)測(cè)定血糖水平，血清葡萄糖，血液糖基化血色素，胰島細(xì)胞數(shù)量，血清胰島素和胰島素含量。給予該組合物降低了相對(duì)于給予組合物前化驗(yàn)的血糖水平。相對(duì)于給予組合物前化驗(yàn)的哺乳動(dòng)物體內(nèi)的糖基化血色素濃度在一個(gè)持久的時(shí)間期間降低了。相對(duì)于給予組合物前化驗(yàn)的哺乳動(dòng)物體內(nèi)的血清胰島素濃度在一個(gè)持久的時(shí)間期間升高了。相對(duì)于給予組合物前化驗(yàn)的哺乳動(dòng)物體內(nèi)的胰腺胰島素濃度在一個(gè)持久的時(shí)間期間升高了。
進(jìn)一方面，本發(fā)明提供了一種在哺乳動(dòng)物體內(nèi)用于誘導(dǎo)胰島再生的方法，該方法包括給予哺乳動(dòng)物一種組合物，該組合物含有給藥后在持久的一段時(shí)間期間內(nèi)足以增加胰島組織內(nèi)胰島前體細(xì)胞分化的量和時(shí)間的量的胃泌素化合物，以此誘導(dǎo)胰島再生。這些細(xì)胞可以為多細(xì)胞的。這些細(xì)胞以系統(tǒng)的方式遞送到哺乳動(dòng)物。
進(jìn)一方面，本發(fā)明提供了一種持久時(shí)期內(nèi)用于動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)胰島再生治療的方法，包括使細(xì)胞與可操作地連接到調(diào)控元件上的編碼胃泌素化合物的核酸序列接觸，例如胰島素啟動(dòng)子受體試劑，例如，金屬硫因啟動(dòng)子，例如，細(xì)胞為生殖細(xì)胞，或細(xì)胞為體外培養(yǎng)的同源細(xì)胞。
本發(fā)明預(yù)期了以細(xì)胞為基礎(chǔ)的治療方法，使用本發(fā)明的胃泌素化合物或本發(fā)明的組合物。因此，本發(fā)明預(yù)期了包括使用本發(fā)明的胃泌素化合物或組合物治療細(xì)胞，或治療哺乳動(dòng)物外植體胰島組織和誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物的細(xì)胞或胰島組織以提供有益效果的方法，尤其是持久的有益效果。參看PCT/CA03/33595關(guān)于普通培養(yǎng)和以細(xì)胞為基礎(chǔ)的治療方法的描述。
一種用于治療主體此處描述的疾病或癥狀的方法，包括一些體外細(xì)胞與本發(fā)明的胃泌素化合物或組合物接觸，任選地培養(yǎng)這些細(xì)胞，將這些細(xì)胞給予需要治療的個(gè)體以提供有益的效果，尤其是持久的有益效果。
在以細(xì)胞為基礎(chǔ)的治療方法的實(shí)施方案中，細(xì)胞為胰島導(dǎo)管細(xì)胞，用于該方法的化合物或組合物的量是在一個(gè)持久的時(shí)期內(nèi)有效增加個(gè)體體內(nèi)胰島素分泌細(xì)胞量的。該細(xì)胞是同源的(例如來自于相同的個(gè)體)，或來自于相同種類的其他個(gè)體，或來自于不同種類。
本發(fā)明也預(yù)期一種治療個(gè)體糖尿病的方法，包括移植到個(gè)體體內(nèi)一種胰島制品和給予治療有效量的本發(fā)明的胃泌素化合物或組合物以提供有益效果，尤其是持久的有益效果。
本發(fā)明也涉及一種支持胰島細(xì)胞或前體細(xì)胞培養(yǎng)的方法，包括有足以持續(xù)這些細(xì)胞培養(yǎng)的量的本發(fā)明的胃泌素化合物或組合物存在下培養(yǎng)該細(xì)胞。相對(duì)于沒有該化合物或組合物存在的細(xì)胞培養(yǎng)，這些細(xì)胞可以在非常長(zhǎng)的時(shí)間期間持續(xù)培養(yǎng)。在本發(fā)明的胃泌素化合物或組合物存在下的培養(yǎng)細(xì)胞在用于移植的細(xì)胞的制備和維持中非常有用。
也提供了通過植入糖尿病個(gè)體體內(nèi)胰島細(xì)胞用于在需要治療的個(gè)體中治療糖尿病的方法和組合物，該胰島細(xì)胞暴露培養(yǎng)到足夠量的胃泌素化合物以在持久的時(shí)期內(nèi)增加胰島內(nèi)胰島β細(xì)胞的數(shù)量。任選地，胰島β細(xì)胞地?cái)?shù)量可以在一段時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)增長(zhǎng)，足以擴(kuò)展移植前P-細(xì)胞地?cái)?shù)量。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供了一種用于治療糖尿病的方法，該方法包括在體外使細(xì)胞與包含足以增加胰島前體細(xì)胞增殖和胰島素分泌細(xì)胞數(shù)量的胃泌素化合物的組合物接觸，給予接觸后的細(xì)胞到需要此的哺乳動(dòng)物以產(chǎn)生有益效果，尤其是持久的有益效果。細(xì)胞可以是同源的。該組合物以足以影響干細(xì)胞分化的量提供，例如影響胰島內(nèi)胰島前體細(xì)胞分化為成熟胰島素分泌胰島細(xì)胞。該組合物以足以增加胰島干細(xì)胞增殖的量提供，例如胰島前體細(xì)胞在長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)。干細(xì)胞可以獲自于胰島組織或非-胰島組織，例如肝臟或骨髓。
本發(fā)明提供了一種治療疾病或病癥的方法，包括將胃泌素化合物或任何前述權(quán)利要求的組合物連同大量細(xì)胞對(duì)需要治療的個(gè)體給藥，從而提供有益效果、優(yōu)選持久的有益效果。一方面，本發(fā)明提供了一種在糖尿病個(gè)體細(xì)胞內(nèi)用于擴(kuò)展和分化干細(xì)胞為胰島素分泌細(xì)胞的方法，該方法包括將細(xì)胞植入個(gè)體且給予一種組合物，該組合物含有有效劑量的胃泌素化合物以產(chǎn)生有益效果，尤其是持久的有益效果。例如植入的細(xì)胞獲自于人類，例如獲自于人的胰島，人的肝臟，人的骨髓，人的臍帶，或人的晶胚。可以通過諸如直接注射入器官，例如注射到胰島，腎臟，或者肝臟的途徑將該細(xì)胞植入個(gè)體?？蛇x擇地，植入細(xì)胞可以通過靜脈注射，例如注射到門靜脈或肝靜脈。在特定的實(shí)施方案中，植入細(xì)胞前先使用含有胃泌素化合物的組合物體外治療。
本發(fā)明也包括本發(fā)明的組合物與一種或多種另外的治療劑聯(lián)合使用的用途，包括但不限于免疫抑制劑(例如雷怕霉素、環(huán)孢霉素A、ISAtx247和FK506)減肥藥、抗糖尿病藥、食欲調(diào)節(jié)藥、抗高血壓藥、治療和/或預(yù)防由病癥或疾病引起或與病癥或疾病相關(guān)的并發(fā)癥的藥劑，尤其是糖尿病和肥胖癥、抗-惡心藥、抗頭痛藥、和治療或預(yù)防副作用的普通藥劑。
本發(fā)明也預(yù)期包含至少一種胃泌素化合物的組合物在制備用于在治療病癥或疾病中提供有益效果，尤其是持久的有益效果的藥物中的應(yīng)用。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療有效量的至少一種胃泌素化合物在制備用于在治療病癥或疾病中提供有益效果的藥物中中的應(yīng)用，尤其是持久的有益效果。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了胃泌素化合物在制備用于增加(優(yōu)選持續(xù)增加)治療后個(gè)體體內(nèi)β細(xì)胞數(shù)量和/或大小的藥物中的應(yīng)用。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了胃泌素化合物在制備用于刺激(優(yōu)選延長(zhǎng)的刺激)治療后β細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了胃泌素化合物在制備用于延長(zhǎng)或持久治療I型或II型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了本發(fā)明的胃泌素化合物或藥物組合物在制備用于在治療疾病或病癥中提供有益效果，優(yōu)選持久有益效果的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明組合物和方法的治療有效性和毒性可以通過細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)過程測(cè)定，例如通過計(jì)算統(tǒng)計(jì)學(xué)參數(shù)例如ED50(半數(shù)治療有效的劑量)或LD50(半數(shù)致死的劑量)。治療指數(shù)是有效和毒性作用的劑量比率，其可以通過ED50/D50來表達(dá)。藥物組合物顯示大的治療指數(shù)是優(yōu)選的。
本發(fā)明的方法可進(jìn)一步測(cè)定一個(gè)或多個(gè)下述標(biāo)記物血糖、血清葡萄糖、血液糖基化血紅蛋白、胰腺β細(xì)胞群、血清胰島素、胰腺胰島素水平、形態(tài)確定的β細(xì)胞群、胰島素分泌性細(xì)胞的數(shù)量和胰島素分泌性細(xì)胞的葡萄糖反應(yīng)性。
給藥本發(fā)明的胃泌素化合物和組合物可以通過任何引起活性劑與個(gè)體或病人體內(nèi)作用部位接觸以產(chǎn)生有益效果，尤其是持久有益效果的方式給藥。該活性成分可以在不同時(shí)間點(diǎn)以任何順序同時(shí)或順序給藥，以產(chǎn)生期望的有益效果，優(yōu)選持久的有益效果。本發(fā)明的胃泌素化合物和組合物可以制成持續(xù)釋放的形式，用于局部和系統(tǒng)給藥。選擇可以使得本發(fā)明組合物和治療方法的效果最優(yōu)化以提供有益效果、尤其是持久的有益效果的給藥形式和給藥途徑，這在熟練醫(yī)師或獸醫(yī)的能力范圍之內(nèi)。
胃腸外給藥的方法包括但并不限于透皮、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)和口腔途徑給藥。化合物可以任何便利的途徑給藥，例如輸注或單次快速注射，透過上皮或粘膜皮膚層(例如口腔粘膜、直腸和腸粘膜等)吸收，可與其它生物活性成分一起給藥。優(yōu)選的給藥途徑是系統(tǒng)給藥，例如皮下注射。對(duì)于胃腸外給藥，本文描述的化合物和組合物可與具有適當(dāng)pH值的生理鹽水、PBS或其它合適的緩沖液一起給藥。緩釋制劑也可以用于一種或兩種治療劑。
組合物可以口服劑型給藥，例如片劑、膠囊(各自包括緩釋或控釋劑型)、丸劑、散劑、顆粒劑、酏劑、酊劑、混懸劑、糖漿劑和乳劑。它們也可以靜脈內(nèi)(單次快速注射或輸注)、腹膜內(nèi)、皮下或肌內(nèi)的形式給藥，所利用的劑型都是藥學(xué)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所熟知的。本發(fā)明組合物可經(jīng)由局部使用適當(dāng)?shù)谋莾?nèi)賦形劑，或經(jīng)由透皮途徑來通過鼻內(nèi)途徑給藥，例如使用常規(guī)的透皮貼劑。使用透皮遞藥系統(tǒng)給藥的劑量規(guī)則是在整個(gè)給藥方案過程中持續(xù)給藥優(yōu)于間歇給藥。
本發(fā)明的給藥方案根據(jù)已知因素而會(huì)有所改變，例如藥劑的藥效學(xué)特征以及給藥的方法和途徑，個(gè)體的種族、年齡、性別、健康狀況、醫(yī)療條件和體重、癥狀的性質(zhì)和程度、同時(shí)治療的疾病的類別、治療的頻率、給藥途徑、個(gè)體的肝腎功能，以及期望的效果。
本發(fā)明的治療劑量(該劑量對(duì)于治療特定的病況或病癥以提供效果，尤其是持久的有益效果是有效的)將取決于病況或病癥的性質(zhì)，可以用標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)來確定。制劑中采用的精確劑量也取決于給藥途徑以及病況或病癥的嚴(yán)重程度，應(yīng)該根據(jù)開業(yè)醫(yī)生的判斷和各個(gè)個(gè)體的情況來確定。用本領(lǐng)域的一種普通技術(shù)來進(jìn)行胰島素或C-肽的血漿水平以及葡萄糖或葡萄糖激發(fā)(glucose challenges)的空腹水平的常規(guī)測(cè)定。
給藥的合適劑量范圍是優(yōu)選提供有益效果的，尤其是持久的有益效果。劑量范圍通常是大約0.01μg到大約500μg胃泌素化合物每千克體重每天，例如大約0.01μg到大約1μg/kg、大約0.1μg/kg到大約10μg/kg、或大約1μg/kg到大約50μg/kg。
本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了含0.1-30、0.1-40、0.1-50和0.1-60μg/kg/天胃泌素化合物的藥物組合物。
本發(fā)明的特別實(shí)例提供了持久的有益效果，胃泌素化合物給藥的劑量范圍是1-30μg/kg體重，尤其是3-30μg/kg體重，更尤其是5-20μg/kg體重。
本發(fā)明的組合物或治療可包括單位劑量的至少一種胃泌素化合物，以提供有益效果，尤其是持久的有益效果?！鍐挝粍┝俊敝傅氖菃我坏囊簿褪菃未蝿┝?，它能夠?qū)€(gè)體施用，且可以很容易的處理和包裝，它是物理和化學(xué)穩(wěn)定的單位劑量，包含像這樣的活性劑或者活性劑與一種或多種固體或液體藥學(xué)輔料、載體或賦形劑的混合物。
一方面，提供了包含治療有效的未最佳劑量的胃泌素化合物的藥物組合物，它對(duì)于持續(xù)一段時(shí)間內(nèi)降低或減少葡萄糖水平，或者治療以后增加β細(xì)胞增殖或分化是有效的。
另一方面，提供了改進(jìn)的藥物組合物，它包含治療有效的未最佳量的胃泌素化合物，且呈長(zhǎng)期或快速治療疾病或病況尤其是糖尿病的形式。
一方面，本發(fā)明提供了包含30-3000、100-3000、100-6000、1000-6000、2000-6000和3000-6000μg胃泌素化合物每單次劑量的藥物組合物。
可對(duì)個(gè)體周期地或連續(xù)地施用本發(fā)明的組合物或制劑大約或至少大約2周到4周、2周到6周、2周到8周、2周到10周、2周到12周、2周到14周、2周到16周、2周到6個(gè)月、2周到12個(gè)月或2周到18個(gè)月?？墒┯帽景l(fā)明組合物一次或多次每日，尤其是1或2次每日。
本發(fā)明組合物或其部分通常包含基于預(yù)期的給藥形式而作出選擇的適當(dāng)?shù)目伤幱玫妮d體、輔料和賦形劑，這和與常規(guī)的藥學(xué)實(shí)踐相一致。
適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)載體、輔料和賦形劑描述在Remington′sPharmaceutical Sciences(Mack出版公司)的標(biāo)準(zhǔn)正文中。對(duì)于膠囊或片劑形式的口服給藥的例子來說，活性組分可與口服的、無毒的可藥用的惰性載體結(jié)合，例如乳糖、淀粉、蔗糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、葡萄糖、硫酸鈣、磷酸二鈣、甘露醇和山梨醇等。對(duì)于液體形式的口服給藥來說，藥物組分可與任何口服的、無毒的可藥用的惰性載體結(jié)合，例如乙醇、甘油和水等。適當(dāng)?shù)恼澈蟿?例如明膠、淀粉、玉米增甜劑、天然糖包括葡萄糖、天然和合成的樹膠、以及蠟)、潤(rùn)滑劑(例如油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉和氯化鈉)、崩解劑(例如淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土和黃原膠)、調(diào)味劑和著色劑也可與組合物或其組分結(jié)合。本文所述的組合物還可以包含潤(rùn)濕劑或乳化劑，或者pH緩沖劑。
組合物可以是液體溶液、混懸劑、乳劑、片劑、丸劑、膠囊、緩釋制劑或散劑?？梢杂贸Ｒ?guī)粘合劑和載體例如甘油三酯將組合物制成栓劑?？诜苿┛梢园?biāo)準(zhǔn)載體，例如藥物級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。各種遞藥系統(tǒng)是已知的，可用于對(duì)本發(fā)明的組合物進(jìn)行給藥，例如包囊于脂質(zhì)體、微粒和微囊等中。
本發(fā)明的一方面，組合物具有大約7到10的pH值。
本發(fā)明組合物的胃腸外給藥制劑可包括水溶液、糖漿、水性或油性混懸劑、以及含食用油如棉子油、椰子油或花生油的乳劑?？梢杂糜谒曰鞈覄┑姆稚┗蛑鷳覄┌ê铣傻幕蛱烊坏臉淠z如西黃蓍膠、藻酸鹽、阿拉伯膠、葡聚糖、羧甲基纖維素鈉、明膠、甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮。
胃腸外給藥的組合物可包括無菌的水性或非水性溶劑，例如水、等滲鹽水、等滲葡萄糖溶液、緩沖液、或便于用于治療活性劑胃腸外給藥的其它溶劑。預(yù)期用于胃腸外給藥的組合物也可包含常規(guī)添加劑，例如穩(wěn)定劑、緩沖劑、或防腐劑例如抗氧劑如羥苯甲酯或類似的添加劑。
在一個(gè)實(shí)例中，根據(jù)常規(guī)方法將此處的組合物制成適于皮下或靜脈內(nèi)對(duì)人類進(jìn)行給藥以提供有益效果，尤其是持久的有益效果的藥物組合物。典型地，皮下或靜脈內(nèi)給藥的組合物是無菌等滲的水性緩沖液溶液。必要的話，組合物也可包含增溶劑和局麻劑，以減輕注射部位的疼痛。一般地，所提供的成分被分別或混和包裝成單位劑量形式，例如，作為干燥的凍干粉末或不含水的濃縮物包裝在熔封容器例如安瓿或囊(sachette)中，還指示例如活性劑的量。當(dāng)組合物要進(jìn)行輸注給藥時(shí)，可提供無菌注射用水或注射用生理鹽水的安瓿，以使成分可在給藥前被混和。
本發(fā)明的組合物可以被制成中性形式或鹽的形式?？伤幱玫柠}包括與游離氨基形成的那些鹽，例如衍生自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的那些鹽，以及與游離羧基形成的那些鹽，例如衍生自鈉、鉀、銨、鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等的那些鹽。
一個(gè)實(shí)例是，提供固體形式的藥物組合物(例如片劑、膠囊、散劑或粉末狀形式)，它包含結(jié)晶的或無定形的胃泌素化合物。
另一個(gè)實(shí)例是，提供固體形式的藥物組合物(例如片劑、膠囊、散劑或粉末狀形式)，它包含結(jié)晶的或無定形的胃泌素化合物。
另一個(gè)實(shí)例是，本發(fā)明涉及包含胃泌素化合物的可藥用的鹽的液體藥物制劑，還涉及凍干藥物制劑，它可以被重構(gòu)以提供穩(wěn)定的且適于胃腸外給藥的混懸劑。
特別的實(shí)例是，本發(fā)明涉及包含胃泌素化合物的可藥用的鹽的水性組合物，以及產(chǎn)生增溶作用的溶劑系統(tǒng)。
本發(fā)明也提供包含胃泌素化合物的可藥用的鹽和至少一種增溶劑的水性制劑的藥物。
本發(fā)明的組合物可通過下列方法滅菌，例如通過細(xì)菌截留過濾器過濾、向組合物中添加滅菌劑、照射組合物或加熱組合物?；蛘?，所提供的本發(fā)明的化合物或組合物可以是無菌的固體制劑，例如凍干粉末，在即將使用前它很容易溶于無菌溶劑中。
除了本文所描述的制劑以外，組合物也可以被制成貯庫制劑。這種長(zhǎng)效制劑可通過植入(例如皮下或肌內(nèi))或肌內(nèi)注射給藥。因此，例如，該部分可與適當(dāng)?shù)木酆喜牧匣蚴杷牧?例如制成可接受的油的乳劑)，或者離子交換樹脂一起進(jìn)行制劑，或者制成略溶的衍生物，例如制成略溶的鹽。
本發(fā)明的組合物及其組分可包含作為靶向藥物載體的可溶性聚合物。
制備好藥物制劑以后，可以將它們置于適當(dāng)?shù)娜萜髦?，并且?biāo)記所治療的病癥。對(duì)于本發(fā)明組合物的給藥來說，這種標(biāo)記將包括量、頻率和給藥方法。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例是，提供包含一個(gè)或多個(gè)裝有一種或多種提供有益效果，尤其是持久的有益效果的本發(fā)明藥物組合物成分的容器的藥物包裝或藥盒。該容器附帶的可以是各種書寫材料，例如使用說明書，或按政府機(jī)構(gòu)規(guī)定形式用于規(guī)范藥物制劑或生物制品的生產(chǎn)、使用或銷售的注意事項(xiàng)，該注意事項(xiàng)反映了政府機(jī)構(gòu)對(duì)于人用產(chǎn)品的生產(chǎn)、使用或銷售的許可。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)例是提供藥盒。一方面，藥盒包含胃泌素化合物或藥物組合物。藥盒是一種包裝，它內(nèi)裝含有本發(fā)明組合物的容器，還內(nèi)裝將組合物對(duì)個(gè)體進(jìn)行給藥的說明書。
經(jīng)由具體實(shí)施例將更詳細(xì)地描述本發(fā)明。所提供的下列實(shí)施例是用于詳細(xì)說明的目的，并不試圖以任何方式限制本發(fā)明。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將很容易地識(shí)別多種非關(guān)鍵性的參數(shù)，這些參數(shù)可以進(jìn)行改變或修改以產(chǎn)生基本相同的結(jié)果。
實(shí)施例實(shí)施例1胃泌素或EGF對(duì)新近糖尿病發(fā)作的NOD小鼠的空腹血糖和胰腺胰島素含量的影響該實(shí)驗(yàn)的目的是測(cè)定單獨(dú)的胃泌素(G1)或EGF(E1)是否可以改善新近糖尿病發(fā)病的NOD小鼠的糖尿病狀況。
從Taconic(Germanton，NY)購買患有慢性胰島素依賴性糖尿病的非肥胖糖尿病(NOD)雌性小鼠。將小鼠進(jìn)行圈養(yǎng)，并在無病原的環(huán)境下喂養(yǎng)，按照加拿大委員會(huì)有關(guān)動(dòng)物管理指南的要求進(jìn)行照顧。監(jiān)測(cè)NOD小鼠的糖尿病進(jìn)展(空腹血糖，F(xiàn)BG＞6.6mmol/l)。糖尿病發(fā)作后，小鼠按照下列方法進(jìn)行處理(i)賦形劑(V)-鹽水磷酸鹽緩沖液(n＝4)，(ii)E1(E)1μg/kg/天，i.p.給藥，每天一次(n＝5)，給藥14天，(iii)G1(G)3μg/kg/天，i.p.給藥，每天一次(n＝5)，給藥14天。小鼠不接受胰島素替代療法。監(jiān)測(cè)空腹血糖水平和胰腺胰島素水平。E1是51個(gè)氨基酸的EGF類似物；G1是胃泌素類似物，它與天然胃泌素具有相同的長(zhǎng)度，但在第15位有一個(gè)氨基酸的改變。
賦形劑處理的對(duì)照動(dòng)物35天以后空腹血糖(FBG)水平加倍。E1或G1處理的動(dòng)物FBG水平與糖尿病發(fā)作(第0天)時(shí)記錄的值相近，盡管該動(dòng)物模型的疾病惡化了(例如胰島細(xì)胞的進(jìn)行性破壞)。參見圖1。EGF或胃泌素刺激的胰島細(xì)胞的新生補(bǔ)償了這些細(xì)胞的破壞。另外還測(cè)定了所有動(dòng)物的胰腺胰島素水平。由于β-細(xì)胞的破壞，賦形劑處理的對(duì)照組的胰腺胰島素水平在第35天降低了，而E1或G1處理的動(dòng)物則顯示了相對(duì)于預(yù)處理值顯著提高的胰腺胰島素水平。參見圖2。該研究的結(jié)果證明，NOD小鼠新近糖尿病發(fā)作后，短期(14天)用E1或G1處理可以預(yù)防糖尿病狀況的惡化，并且在治療停止后至少3周還能持續(xù)提高胰腺胰島素含量。
實(shí)施例2胃泌素對(duì)新近糖尿病發(fā)作的NOD小鼠的空腹血糖的持續(xù)影響該實(shí)驗(yàn)的目的是確定胃泌素的治療是否可以對(duì)新近糖尿病發(fā)病的NOD小鼠的糖尿病狀況產(chǎn)生長(zhǎng)期的改善。從Taconic(Germanton，NY)購買NOD小鼠。將小鼠進(jìn)行圈養(yǎng)，并在無病原的環(huán)境下喂養(yǎng)，按照加拿大委員會(huì)有關(guān)動(dòng)物管理指南的要求進(jìn)行照顧。
用3μg/kg/天的胃泌素處理最初的18天后，從治療一開始就監(jiān)測(cè)非肥胖糖尿病(NOD)小鼠的空腹血糖(FBG)水平至少8周。也監(jiān)測(cè)賦形劑處理的對(duì)照組小鼠。
賦形劑處理的對(duì)照動(dòng)物的空腹血糖(FBG)水平隨時(shí)間而增加。在停止治療后，胃泌素處理的動(dòng)物的FBG水平相對(duì)于對(duì)照動(dòng)物降低了至少5周。參見圖3。該研究的結(jié)果證明治療停止后，胃泌素的處理降低了NOD小鼠的空腹血糖水平至少5周。
實(shí)施例3胃泌素對(duì)患有慢性胰島素依賴性糖尿病的NOD小鼠的空腹血糖的劑量依賴性影響目的確定胃泌素(G1)是否可以預(yù)防嚴(yán)重高血糖癥的發(fā)展和患有慢性胰島素依賴性糖尿病的NOD小鼠的死亡。
方法患有慢性胰島素依賴性糖尿病且持續(xù)進(jìn)行胰島素治療的NOD小鼠被分成不同的治療組，進(jìn)行以下處理(i)賦形劑(n＝4)，(ii)G1 1μg/kg/天，i.p.給藥，每天兩次(n＝4)，給藥28天，(iii)G1 5μg/kg/天，i.p.給藥，每天兩次(n＝4)，給藥28天，(iv)G1 10μg/kg/天，i.p.給藥，每天兩次(n＝4)，給藥28天。開始用G1治療后14天停止胰島素治療。G1是17個(gè)氨基酸的胃泌素類似物，它和天然胃泌素分子具有相同長(zhǎng)度，但在第15位有一個(gè)氨基酸的變化。
結(jié)果和結(jié)論從第0天到第14天，在持續(xù)進(jìn)行胰島素治療的動(dòng)物中，所有治療組的空腹血糖(FBG)水平都與第0天記錄的水平相近，除了用10μg/kg/天的G1治療的組以外，這一組的FBG顯示出降低。在第28天，胰島素治療停止后14天，賦形劑組的所有動(dòng)物死于糖尿病酮癥酸中毒(DKA)，因?yàn)檫@些小鼠完全依賴于胰島素注射。然而，用G1治療的所有小鼠在停止胰島素治療2周后都還存活。1μg/kg/天的G1治療的小鼠的空腹血糖水平保持提高，但用增加劑量的G1(分別是5和10μg/kg/天)治療取得了相應(yīng)降低的空腹血糖水平。參見圖4。這些數(shù)據(jù)表明，在不用胰島素治療的情況下，胃泌素的治療能夠顯著提高對(duì)慢性胰島素依賴性糖尿病NOD小鼠的葡萄糖的控制。
本文描述的具體實(shí)例沒有限制本發(fā)明的范圍，因?yàn)檫@些實(shí)例僅僅旨在闡明本發(fā)明的一個(gè)方面，任何功能等價(jià)的實(shí)例都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。的確，除了此處顯示和描述的那些改變以外，從上面的說明書和附圖看來，本發(fā)明的各種改變對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說都將是顯而易見的。這樣的改變都意圖落在附加的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。
本文涉及的所有出版物、專利和專利出版物都被同樣程度的全文引入作為參考，就如同每一篇單獨(dú)的出版物、專利或?qū)＠霭嫖锉惶貏e和單獨(dú)地指出要全文引入作為參考一樣。此處引用的任何參考文獻(xiàn)都沒有被承認(rèn)是作為本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)而提供的。
序列表序列表<110>WARATAH PHARMACEUTICALS，INC.
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<308>P01350<309>2004-06-15<313>(1)..(101)
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權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，所述組合物包含治療有效量的提供持久有益效果的胃泌素化合物和可藥用載體、輔料或賦形劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，所述組合物是在糖尿病個(gè)體中提供給藥后持續(xù)一段延長(zhǎng)時(shí)間的正常血糖水平的形式。
3.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中所述組合物包含治療有效量的胃泌素化合物，并且是用于有此需要的個(gè)體的長(zhǎng)期或快速治療的形式。
4.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，所述組合物包含約0.1到20或0.1到30μg/kg/天的胃泌素化合物，尤其是3-30μg/kg/天。
5.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中所述有益效果是下述的一種或多種胰島炎癥的減輕或消失、減慢的疾病進(jìn)展、生存率增加、或糖尿病癥狀或相關(guān)并發(fā)癥的減少。
6.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述的組合物，其中的有益效果是持久的有益效果，其在治療終止后持續(xù)一個(gè)延長(zhǎng)的時(shí)間段。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中所述有益效果在治療后持續(xù)大約或至少約2周到4周、2周到5周、3周到5周、2周到6周、2周到8周、2周到10周、2周到12周、2周到16周、2周到20周、2周到24周、2周到12個(gè)月或2周到18個(gè)月。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中所述持久有益效果可以表現(xiàn)為治療后延長(zhǎng)時(shí)間的C-肽生成增加、胰腺胰島素生成增加和大約正常或低的血糖水平。
9.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中對(duì)于胃泌素化合物的效果與缺乏胃泌素化合物存在的效果相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，持久的有益效果是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。
10.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中所述持久的有益效果將胰腺胰島素水平增加至少約0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、5％、10％、15％、20％、30％、33％、35％、40％、45％或50％。
11.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中所述持久有益效果將血糖水平降低至少約2％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
12.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其中所述持久的有益效果是治療后至少約2周到4周、2周到5周、3周到5周、2周到6周、2周到8周、2周到10周、2周到12周、2周到16周、2周到20周、2周到24周、2周到12個(gè)月或2周到18個(gè)月的時(shí)期內(nèi)血糖水平降低。
13.一種用于治療個(gè)體糖尿病的方法，包括給予該個(gè)體治療有效量的至少一種胃泌素化合物以提供持久的有益效果。
14.一種治療方法，包括給予個(gè)體治療有效量的至少一種胃泌素化合物，其中對(duì)于具有糖尿病癥狀個(gè)體的給藥產(chǎn)生了至少一種糖尿病癥狀的持久有益效果。
15.一種制備穩(wěn)定的藥物組合物的方法，該組合物包含胃泌素化合物，以及有效地物理穩(wěn)定胃泌素化合物并適于提供治療糖尿病的有益效果、優(yōu)選持久有益效果的可藥用載體、輔料或賦形劑。
16.一種治療糖尿病的方法，包括將治療有效量的胃泌素化合物或任何前述權(quán)利要求的組合物對(duì)需要治療的個(gè)體給藥，從而提供有益效果、優(yōu)選持久的有益效果。
17.一種治療糖尿病的方法，包括將胃泌素化合物或任何前述權(quán)利要求的組合物連同大量細(xì)胞對(duì)需要治療的個(gè)體給藥，從而提供有益效果、優(yōu)選持久的有益效果。
18.一種治療糖尿病個(gè)體的方法，包括在體外將大量細(xì)胞與胃泌素化合物或任何前述權(quán)利要求的組合物接觸，任選地培養(yǎng)細(xì)胞，并將該細(xì)胞對(duì)需要治療的個(gè)體給藥。
19.一種誘導(dǎo)個(gè)體胰島再生的方法，包括將胰島前體細(xì)胞與足以提供個(gè)體胰島前體細(xì)胞的延長(zhǎng)增強(qiáng)增殖效果從而誘導(dǎo)胰島再生的量的胃泌素化合物或任何前述權(quán)利要求的組合物接觸。
20.一種長(zhǎng)時(shí)間將干細(xì)胞擴(kuò)展和分化成胰島素分泌細(xì)胞的方法，包括將干細(xì)胞與有效量的胃泌素化合物或任何前述權(quán)利要求的組合物接觸。
21.一種治療糖尿病的方法，該方法包括給需要治療的哺乳動(dòng)物施用包含胃泌素化合物的組合物，以足以長(zhǎng)時(shí)間增加哺乳動(dòng)物的分泌胰腺胰島素的β細(xì)胞的數(shù)量施用，從而治療糖尿病。
22.一種治療糖尿病的方法，該方法包括給需要治療的哺乳動(dòng)物施用包含胃泌素化合物的組合物，以在施用胃泌素化合物后足以提供胰腺組織的胰島前體細(xì)胞增殖的延長(zhǎng)增強(qiáng)的量施用，從而治療糖尿病。
23.一種治療糖尿病的方法，該方法包括給需要治療的哺乳動(dòng)物施用包含胃泌素化合物的組合物，以足以提供哺乳動(dòng)物的分泌胰腺胰島素的細(xì)胞數(shù)量延長(zhǎng)增加的量，并測(cè)定胰島再生的量，從而治療糖尿病。
24.權(quán)利要求23的方法，其中胰島再生的量是通過選自血糖、血清葡萄糖、血糖基化血紅蛋白、胰腺β細(xì)胞群、血清胰島素、胰腺胰島素含量和形態(tài)確定的β細(xì)胞群的參數(shù)來測(cè)定的。
25.權(quán)利要求23的方法，其中與施用組合物之前所測(cè)定的血糖相比，施用組合物后在延長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)降低了血糖。
26.權(quán)利要求25的方法，其中與施用組合物之前所測(cè)定的血糖相比，施用組合物將血糖降低了50％。
27.權(quán)利要求23的方法，其中與沒有施用組合物的對(duì)照哺乳動(dòng)物的糖基化血紅蛋白相比，糖基化血紅蛋白濃度在延長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)降低。
28.權(quán)利要求23的方法，其中與施用組合物之前所測(cè)定的哺乳動(dòng)物血清胰島素濃度相比，血清C-肽胰島素濃度在延長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)提高。
29.權(quán)利要求23的方法，其中與施用組合物之前所測(cè)定的哺乳動(dòng)物胰腺胰島素濃度相比，胰腺胰島素濃度在延長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)提高。
30.權(quán)利要求23的方法，其中細(xì)胞是胰管細(xì)胞。
31.權(quán)利要求23的方法，其中胃泌素化合物以足以引起胰腺胰島前體細(xì)胞延長(zhǎng)分化成葡萄糖反應(yīng)性胰島素分泌性胰島細(xì)胞的量提供。
32.權(quán)利要求23的方法，其中胃泌素化合物以足以引起胰腺胰島前體細(xì)胞延長(zhǎng)分化成葡萄糖反應(yīng)性胰島素分泌性胰島細(xì)胞的量提供。
33.權(quán)利要求23的方法，其中組合物以足以影響胰腺組織中的胰腺胰島前體細(xì)胞延長(zhǎng)分化成成熟胰島素分泌性胰島細(xì)胞的量提供。
34.權(quán)利要求23的方法，其中組合物以足以提供胰腺胰島前體細(xì)胞增殖的延長(zhǎng)增強(qiáng)的量提供。
35.一種誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物胰腺胰島再生的方法，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用包含胃泌素化合物的組合物，以足以提供胰腺組織的胰島前體細(xì)胞增殖的延長(zhǎng)增強(qiáng)的量施用，從而誘導(dǎo)胰腺胰島再生。
36.一種用于在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)胰島再生的方法，該方法包括施用包含胃泌素化合物的組合物，以足以在哺乳動(dòng)物中產(chǎn)生持久的分泌胰島胰島素的β細(xì)胞數(shù)量上增加的量施用。
37.一種用于在動(dòng)物細(xì)胞中誘導(dǎo)胰島再生性治療的方法，包括使該細(xì)胞與可操縱地連接到調(diào)控元件上的編碼胃泌素化合物的核酸序列接觸，從而引起該胃泌素化合物的持久有益效果。
38.一種包含能有效誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞持久增殖變?yōu)樵黾恿康某墒煲葝u素分泌性細(xì)胞的劑量的胃泌素化合物的組合物。
39.其劑量足以誘導(dǎo)胰島前體細(xì)胞分化成成熟胰島素分泌性細(xì)胞的權(quán)利要求38的組合物。
40.包含至少一種胃泌素化合物的組合物在制備用于持久治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
41.前述任一權(quán)利要求所述組合物的藥盒。
全文摘要
本發(fā)明一般涉及包含胃泌素化合物的新的組合物和方法。該組合物和方法在治療糖尿病中提供了有益效果，尤其是持久的有益效果。
文檔編號(hào)A61KGK1829528SQ200480022042
公開日2006年9月6日 申請(qǐng)日期2004年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月27日
發(fā)明者A·克魯茲 申請(qǐng)人:瓦拉塔藥品公司