專利名稱：水芹科植物的提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有大量生理活性成分的來(lái)自水芹科植物的提取物、其制備方法、以及含有該提取物的藥物、食品、飲料或飼料。
背景技術(shù)：
當(dāng)歸是水芹科的大型多年生草本植物，已知具有各種各樣的健康促進(jìn)效果。例如，作為當(dāng)歸所具有的生理活性，已知有抗菌作用、抗腫瘤作用、抑制胃酸分泌作用、抗癌效果、增強(qiáng)神經(jīng)生長(zhǎng)因子產(chǎn)生的效果、增強(qiáng)肝細(xì)胞增殖因子產(chǎn)生的作用(例如，參照國(guó)際公開(kāi)第01/76614號(hào)小冊(cè)子)?？墒?，至今為止，對(duì)于抗糖尿病作用和抗肥胖作用等胰島素作用，仍是未知的。
胰島素是哺乳動(dòng)物正常的糖類、蛋白質(zhì)以及脂肪代謝所必需的激素。I型糖尿病患者由于不能產(chǎn)生足夠的作為支持生命的激素的胰島素，為了生存，必須從外部給藥胰島素。II型糖尿病病人，為了控制因胰島素產(chǎn)生量不足、胰島素耐受性等原因引起的不合適的血糖量到恰當(dāng)?shù)牧?，必須施用胰島素或胰島素分泌促進(jìn)劑?？墒?，在II型糖尿病患者中，對(duì)于以高胰島素血癥或胰島素受體異常、胰島素受體的下游信號(hào)的異常等引起的胰島素耐受性為主要原因的糖尿病患者，有時(shí)即使施用胰島素或胰島素分泌促進(jìn)劑也不能顯示出治療效果。
近年，為了解決胰島素的副作用和上述問(wèn)題，進(jìn)行了與胰島素具有同樣生理功能的物質(zhì)(以下有時(shí)也稱為胰島素樣物質(zhì))的開(kāi)發(fā)，并明確了合成的苯醌衍生物是胰島素樣物質(zhì)(例如，國(guó)際公開(kāi)第99/51225號(hào)小冊(cè)子)，另外，來(lái)自紫草根(紫草根)的紫草寧也是胰島素樣物質(zhì)(例如，Kamei R.等7人，Biochem.Biophys.Res.Commun.，2002年，Vol.292，P642-651)。這些胰島素樣物質(zhì)不僅對(duì)I型糖尿病患者，即使是對(duì)于II型糖尿病患者、甚至是胰島素耐受性為主要原因的II型糖尿病患者，也顯示與胰島素同樣的生理活性，可以期待改善癥狀。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種來(lái)自天然物，可以安全且簡(jiǎn)便地?cái)z取的含有大量生理活性成分的來(lái)自水芹科植物的提取物、其制備方法、以及含有該提取物的藥物、食品、飲料或飼料。
以下，概要說(shuō)明本發(fā)明本發(fā)明的第1項(xiàng)發(fā)明涉及一種提取物，該提取物是用含水醇提取水芹科植物或其處理物而得到的。
本發(fā)明的第2項(xiàng)發(fā)明涉及一種來(lái)自水芹科植物或其處理物的提取物的制備方法，包括用含水醇提取水芹科植物或其處理物的工序。
在本發(fā)明的第1以及第2項(xiàng)發(fā)明中，作為水芹科植物，可以優(yōu)選地列舉出當(dāng)歸。另外，作為含水醇，可以列舉出濃度大于或等于40(v/v)％且小于100(v/v)％的乙醇水溶液。
本發(fā)明的第3項(xiàng)發(fā)明涉及一種伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病和/或糖尿病的并發(fā)癥的治療藥或預(yù)防藥，其特征在于，含有本發(fā)明的第1項(xiàng)發(fā)明的提取物作為有效成分。
本發(fā)明的第4項(xiàng)發(fā)明涉及一種胰島素樣作用劑，其特征在于，含有本發(fā)明的第1項(xiàng)發(fā)明的提取物作為有效成分。
本發(fā)明的第5項(xiàng)發(fā)明涉及一種食品、飲料或飼料，其特征在于，含有本發(fā)明的第1項(xiàng)發(fā)明的提取物。在本發(fā)明的第5項(xiàng)發(fā)明中，食品、飲料或飼料可以列舉用于治療或預(yù)防伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病、和/或糖尿病的并發(fā)癥的食品、飲料或飼料。
本發(fā)明的第6項(xiàng)發(fā)明涉及一種促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖的促進(jìn)劑，其特征在于，含有本發(fā)明的第1項(xiàng)發(fā)明的提取物作為有效成分。
本發(fā)明的第7項(xiàng)發(fā)明涉及一種誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞的藥物，其特征在于，含有本發(fā)明的第1項(xiàng)發(fā)明的提取物作為有效成分。
本發(fā)明的第8項(xiàng)發(fā)明涉及一種醛糖還原酶抑制劑，其特征在于，含有本發(fā)明的第1項(xiàng)發(fā)明的提取物作為有效成分。
具體實(shí)施例方式
在本發(fā)明中，所謂水芹科植物，是屬于被子植物類水芹科的植物，可以列舉例如當(dāng)歸、水芹、鴨兒芹、獨(dú)活(シシウド)、胡蘿卜、旱芹(セロリ)、荷蘭芹(パセリ)等。在本發(fā)明中，特別優(yōu)選使用當(dāng)歸。另外，本發(fā)明使用的水芹科植物，沒(méi)有特別限定，可以使用果實(shí)、種子、種皮、花、葉、莖、根、根莖和/或以植物整體。
作為本發(fā)明的提取物的原料，除了上述水芹科植物以外，還使用其處理物。在此，作為處理物，沒(méi)有特別限定，可以使用例如水芹科植物的粉碎物、切細(xì)物、干燥物、榨汁液等。另外，將水芹科植物用已知的方法作成茶葉狀，對(duì)其實(shí)施本發(fā)明的提取方法而得到的提取物，也可以作為本發(fā)明的提取物使用。另外，作為成為原料的水芹科植物，還可以使用多種水芹科植物或它們的處理物的混合物。此外，在本發(fā)明中，可以將來(lái)源植物不同的提取物、來(lái)源植物的部位不同的提取物、來(lái)源部位相同但使用組成不同的含水醇提取而得到的提取物、或通過(guò)它們的組合而得到的提取物分別單獨(dú)或混合2種或2種以上作為本發(fā)明的提取物使用。另外，如果含有了本發(fā)明的提取物，即使還含有用與本發(fā)明的提取物制備方法不同的提取法得到的提取物的物質(zhì)也可以作為本發(fā)明的提取物使用。
水芹科植物的粉碎物可以通過(guò)例如使植物干燥并使用粉碎機(jī)粉碎、或通過(guò)冷凍粉碎而獲得。切細(xì)物可以通過(guò)將水芹科植物適當(dāng)切碎而獲得，干燥物可以通過(guò)例如冷凍干燥而獲得。榨汁液可以通過(guò)使用已知的植物榨汁方法，例如使用螺旋式、齒輪式、刀具式等榨汁機(jī)或飲料機(jī)來(lái)榨汁水芹科植物而得到。
在本發(fā)明中，所謂含水醇，沒(méi)有特別限定，是指例如乙醇、甲醇、異丙醇、乙二醇、丁二醇、丙二醇、丙三醇等醇類和水的混合物(醇水溶液)，特別優(yōu)選的可以舉出含水乙醇。作為本發(fā)明使用的含水乙醇，由于可以在得到的提取物中含有更多的生理活性物質(zhì)，故沒(méi)有特別的限定，可以使用例如醇含量以其濃度計(jì)，優(yōu)選40(v/v)％或40(v/v)％以上但低于100(v/v)％，更加優(yōu)選45～80(v/v)％，特別優(yōu)選50～70(v/v)％的含水醇。通常，作為含水醇，使用濃度大于或等于40(v/v)％且小于100(v/v)％乙醇水溶液是合適的。另外，這些含水醇，根據(jù)需要可以單獨(dú)、或作為適當(dāng)混合了各種醇的含水醇使用。
在本發(fā)明中，所謂提取物是指使用提取溶劑經(jīng)過(guò)進(jìn)行提取操作的工序而得到的物質(zhì)。提取可以采用已知的提取方法如下進(jìn)行。例如，提取可以將作為原料的水芹科植物的特定部位直接、或?qū)⒃撝参锓鬯榛蚯兴楹螅萌軇╅g歇式或連續(xù)式地進(jìn)行。提取溶劑的量雖然可以適當(dāng)決定，但通常對(duì)于原料植物，可以優(yōu)選用使用時(shí)的原料植物的形態(tài)原樣(例如如果原料植物為生植物，則為生的植物)重量的0.1～100倍量的提取溶劑。提取溫度也可以根據(jù)目的適當(dāng)決定，但優(yōu)選0～80℃，更加優(yōu)選0～60℃，進(jìn)一步優(yōu)選0～50℃，特別優(yōu)選0～40℃的范圍。提取時(shí)間也可以考慮提取效率來(lái)決定，但通常以優(yōu)選幾秒～幾天，更加優(yōu)選5分鐘～24小時(shí)的范圍來(lái)設(shè)定原料、提取溶劑、提取溫度。提取操作可以邊攪拌邊進(jìn)行，也可以靜置進(jìn)行，另外，視需要還可以反復(fù)進(jìn)行多次。通過(guò)以上操作，可以得到水芹科植物的提取物(以下有時(shí)稱為本發(fā)明的提取物)。視需要，提取物還可以實(shí)施過(guò)濾、離心分離、濃縮、超濾、分子篩等的處理，也可以進(jìn)行濃縮。
這樣得到的本發(fā)明的提取物，例如，當(dāng)原料使用了作為水芹科植物之一的當(dāng)歸時(shí)，是高濃度地含有具有生理活性的查耳酮類化合物的4-羥基德里辛(4-hydroxyderricin)或黃色當(dāng)歸醇(xanthoangelol)，另外，還高濃度地含有由本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的2種查耳酮類化合物(以下，稱為T(mén)B1、TB2)的新型提取物。此外，至今為止，還沒(méi)有從水芹科植物中得到以高濃度地含有TB1或TB2為指標(biāo)的提取物的報(bào)道，是由本發(fā)明人首次實(shí)施的。TB1和TB2的化學(xué)結(jié)構(gòu)分別示于下式(化1)和(化2)中。
(化1) (化2)
在本發(fā)明的提取物中含有的以上4種查耳酮類化合物(4-羥基德里辛、黃色當(dāng)歸醇、TB1、TB2)，如后述的參考例1和2所記載，是天然的胰島素樣活性成分。另外，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，TB1和TB2還具有醛糖還原酶抑制作用，對(duì)于糖尿病的并發(fā)癥，可以期待其效果(國(guó)際公開(kāi)第2004/031165號(hào)小冊(cè)子)。
另外，在從當(dāng)歸得到的本發(fā)明的提取物中，含有查耳酮類化合物黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮(isobavachalcone)、補(bǔ)骨脂色滿查耳酮(bavachromanol)，或黃烷酮類化合物munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮(isobavachin)、prostratol F，這些化合物如后述的實(shí)施例11、參考例1和2所示，也具有醛糖還原酶抑制作用或胰島素樣作用。
即，由本發(fā)明得到的提取物，作為對(duì)健康人具有預(yù)防糖尿病的效果、對(duì)被稱為“糖尿病預(yù)備軍”的初期糖尿病患者具有改善效果、以及對(duì)在糖尿病患者中發(fā)現(xiàn)了并發(fā)癥癥狀的人們的糖尿病及其并發(fā)癥具有改善效果的綜合性糖尿病改善或預(yù)防用藥物、功能性食品原料是極其有用的。另外，本發(fā)明的提取物所具有的胰島素樣作用是以促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖的作用、誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞的分化的作用作為指標(biāo)，在后述的實(shí)施例5～7中示出。另外，本發(fā)明提取物的醛糖還原酶抑制作用在后述的實(shí)施例8、9中示出。
另外，上述的TB1、TB2除了醛糖還原酶抑制作用以外，由于還具有神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用、NO產(chǎn)生抑制作用、白細(xì)胞介素產(chǎn)生抑制作用、成骨促進(jìn)作用等(參照例如國(guó)際公開(kāi)第2004/031165號(hào)小冊(cè)子)，因此，本發(fā)明的提取物，作為利用了這些生理活性的來(lái)自天然的藥物、保健食品原料也是有用的。
此外，在本發(fā)明中，所謂胰島素樣作用，只要是顯示胰島素所具有的生理活性中的至少1種活性即可，沒(méi)有特別的限制，可以舉出例如促進(jìn)細(xì)胞中的糖、氨基酸的吸收，糖原、蛋白質(zhì)的合成以及分解抑制等代謝調(diào)節(jié)作用中的至少1種。另外，對(duì)于有無(wú)胰島素樣作用，可以通過(guò)后述的實(shí)施例5或6所述的方法簡(jiǎn)便地測(cè)定。由于本發(fā)明的有效成分具有胰島素樣作用，在治療上或預(yù)防上，對(duì)于使用胰島素有效的所有疾病都可以發(fā)揮治療效果或預(yù)防效果。
另外，通過(guò)使用已知的方法分級(jí)本發(fā)明的水芹科植物提取物而得到的級(jí)分、或通過(guò)反復(fù)多次分級(jí)操作而得到的級(jí)分也包含在本發(fā)明的提取物中。作為上述分級(jí)方法，可以舉出提取、分別沉淀、柱色譜法、薄層色譜法等。
在本發(fā)明中，本發(fā)明的提取物的形狀沒(méi)有特別的限定，可以是粉狀、固體狀、液體狀的任何一種。為粉狀時(shí)，沒(méi)有特別的限定，可以將以含水醇作為溶劑從原料中提取的本發(fā)明的提取物濃縮，再添加賦形劑等，通過(guò)干燥、粉碎來(lái)得到粉狀的本發(fā)明的提取物。另外，還可以將用已知的方法造粒該提取物而得到的粒狀固體物質(zhì)作為本發(fā)明的提取物使用。作為造粒方法，可以舉出旋轉(zhuǎn)造粒、攪拌造粒、流化床造粒、氣流造粒、擠出造粒、壓縮成型造粒、粉碎造粒、噴射造?；驀婌F造粒等。另外，作為液體狀的提取物，除了含水乙醇提取物本身、其濃縮物或稀釋物以外，還可以舉出將上述的粉狀提取物溶解在液體，例如水或醇等中而成為液體狀的物質(zhì)。
另外，本發(fā)明提供高濃度或高純度地含有本發(fā)明的提取物的食品、飲料或飼料，這些與以前的食品、飲料或飼料相比，意味著在本發(fā)明的食品、飲料或飼料中高濃度和/或高純度地含有上述查耳酮類化合物或黃烷酮類化合物。
此外，在本發(fā)明中，有時(shí)將本發(fā)明的提取物稱為本發(fā)明的有效成分，將含有本發(fā)明的有效成分的治療或預(yù)防伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病、和/或糖尿病的并發(fā)癥的藥物稱為本發(fā)明的治療藥或預(yù)防藥。另外，有時(shí)將該治療藥、預(yù)防藥以及胰島素樣作用劑稱為本發(fā)明的藥物。
在本發(fā)明的有效成分中，如后述沒(méi)有發(fā)現(xiàn)特別的毒性。此外，也不用擔(dān)心發(fā)生副作用。由此，可以安全并且恰當(dāng)?shù)剡M(jìn)行疾病的治療或預(yù)防。因此，含有該有效成分的本發(fā)明的治療藥、預(yù)防藥、食品、飲料或飼料對(duì)于伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病、和/或糖尿病的并發(fā)癥的治療或預(yù)防是有效的。
在本發(fā)明中，作為伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病，可以列舉以選自血中胰島素水平的變化、胰島素或胰島素受體活性水平的變化、胰島素受體的下游信號(hào)異常以及它們的組合的原因?yàn)樘卣鞯募膊?，例如，糖尿病、肥胖、高血壓、?dòng)脈硬化、可卡因戒斷癥狀、充血性心力衰竭、健忘癥、心臟血管痙攣、大腦血管痙攣、嗜鉻細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)成神經(jīng)細(xì)胞瘤(神経節(jié)神経芽腫)、亨庭頓氏病、高血脂癥。作為糖尿病，可以舉出I型糖尿病、II型糖尿病的任意一種。另外，作為II型糖尿病，還包含即使給藥胰島素或胰島素分泌促進(jìn)劑也不見(jiàn)治療效果的胰島素耐受性為主要原因的疾病。
伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病，在其發(fā)病階段，大多是由于胰島素產(chǎn)生量不足、或胰島素耐受性而導(dǎo)致胰島素作用不充分。本發(fā)明的有效成分由于顯示胰島素樣作用，可以抑制伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病發(fā)病，因此，還可以期待該疾病的預(yù)防效果，進(jìn)而還可以期待糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防效果。
在胰島素耐受性的狀態(tài)中，來(lái)自胰島素產(chǎn)生導(dǎo)致的胰島素受體的信號(hào)被阻斷，不能發(fā)揮胰島素所具有的各種功能，從而產(chǎn)生各種代謝異常。本發(fā)明使用的有效成分即使是對(duì)于胰島素耐受性的癥狀，也可以發(fā)揮胰島素樣的效果。即，通過(guò)使用本發(fā)明的預(yù)防藥或治療藥，對(duì)于以胰島素耐受性為原因的疾病，例如即使給藥胰島素或胰島素分泌促進(jìn)劑也不見(jiàn)治療效果的II型糖尿病，也可以發(fā)揮治療或預(yù)防效果。另外，本發(fā)明的有效成分還可以發(fā)揮降低血中胰島素量的效果。即，在治療或預(yù)防時(shí)，可以將本發(fā)明的藥物作為需要降低胰島素量的疾病的治療或預(yù)防藥使用。作為該疾病，沒(méi)有特別的限定，可以列舉出高胰島素血癥和阿耳茨海默病等。另外，由于還報(bào)道了通過(guò)胰島素受體的刺激和延長(zhǎng)壽命效果之間存在密切的關(guān)系(Science，Vol.299，P572～574(2003年)；Nature，Vol.424，P277～284(2003年))，因此，還可以將本發(fā)明的藥物作為抗衰老藥使用。
已知胰島素可促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)，另外還已知在成熟脂肪細(xì)胞中吸收葡萄糖、在細(xì)胞內(nèi)蓄積甘油三酯(J.Biol.Chem.，Vol.253，No.20，P7570～7578(1978年))。即，利用這些發(fā)現(xiàn)，給藥受檢物質(zhì)代替胰島素，通過(guò)測(cè)定向脂肪細(xì)胞的分化和細(xì)胞中的甘油三酯量，可以測(cè)定受檢物質(zhì)的胰島素樣作用。
另外，已知胰島素有促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖的作用，并已知在成熟的脂肪細(xì)胞中，通過(guò)胰島素的作用可以促進(jìn)細(xì)胞葡萄糖(J.Biol.Chem.，Vol.253，No.20，P7579～7583(1978年))。即，利用這些發(fā)現(xiàn)，給藥受檢物質(zhì)代替胰島素，通過(guò)測(cè)定成熟脂肪細(xì)胞中的葡萄糖吸入量，可以測(cè)定受檢物質(zhì)的胰島素樣作用。
在本發(fā)明中，作為糖尿病的并發(fā)癥，可以列舉出例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性末梢神經(jīng)病、白內(nèi)障、聽(tīng)力減退、感覺(jué)異常、肌肉萎縮等糖尿病性精神癥、腎機(jī)能不全等糖尿病性腎病、動(dòng)脈硬化或腦梗塞等糖尿病性血管疾病、白血球的吞噬作用降低導(dǎo)致的傳染病、糖尿病性昏睡等。
作為本發(fā)明的治療藥或預(yù)防藥，可以舉出將本發(fā)明的上述有效成分與已知的藥用載體組合并制成制劑的藥物。另外，作為本發(fā)明的治療藥或預(yù)防藥，還可以將上述有效成分和可以與該有效成分使用于相同用途的其他成分，例如，已知的胰島素制劑、胰島素分泌促進(jìn)劑、胰島素耐受性改善劑、食后高血糖改善劑、胰島素樣作用劑、醛糖還原酶抑制劑等配合。
本發(fā)明的治療藥或預(yù)防藥的制備，通常可以通過(guò)將上述有效成分與可藥用的液體或固體載體配合來(lái)進(jìn)行，根據(jù)需要，還可以加入溶劑、分散劑、乳化劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑等，制成片劑、顆粒劑、散劑、粉劑、膠囊劑等固體制劑、常規(guī)液體劑、懸浮劑、乳劑等液體制劑。另外，還可以制成能在使用前通過(guò)添加適當(dāng)?shù)妮d體制成液體的干燥品或其他的外用藥。
藥用載體可以根據(jù)治療藥或預(yù)防藥的給藥方式以及劑型來(lái)選擇。制成含有固體組合物的口服制劑時(shí)，可以作成片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、細(xì)粒劑、顆粒劑等。例如，可以利用淀粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧甲基纖維素、玉米淀粉、無(wú)機(jī)鹽等。另外，在制備口服制劑時(shí)，還可以配合粘合劑、崩解劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑、助流動(dòng)劑、矯味劑、著色劑、香料等。例如，制成片劑或丸劑時(shí)，根據(jù)需要，還可以用蔗糖、明膠、羥丙基纖維素等糖衣或胃溶性或腸溶性物質(zhì)的膜包衣。制成由液體組合物構(gòu)成的口服制劑時(shí)，可以制成藥理學(xué)容許的乳濁劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑等，例如，可以利用精制水、乙醇等作為載體。此外，根據(jù)需要，還可以添加潤(rùn)濕劑、懸浮劑等助劑、甜味劑、風(fēng)味劑、防腐劑等。
另一方面，制成非口服制劑時(shí)，可以按照通常的方法，通過(guò)使本發(fā)明的上述有效成分溶解或懸浮在作為稀釋劑的注射用蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、谷物油、丙二醇、聚乙二醇等中，根據(jù)需要再加入殺菌劑、穩(wěn)定劑、等滲化劑、無(wú)痛化劑等來(lái)進(jìn)行制備。另外，還可以制備固體組合物，并在使用前溶解在無(wú)菌水或無(wú)菌的注射用溶劑中使用。
作為外用劑，包含經(jīng)皮給藥用或經(jīng)粘膜(口腔內(nèi)、鼻腔內(nèi))給藥用的固體、半固體狀或液體狀的制劑。此外，還包含栓劑。例如，可以作成乳劑、洗劑等乳濁劑、外用酊劑、經(jīng)粘膜給藥用液體制劑等液體制劑、油性軟膏、親水性軟膏等軟膏劑、膜劑、貼劑、泥敷劑等經(jīng)皮給藥用或經(jīng)粘膜給藥用的貼等。
以上的各種制劑，可以分別利用已知的藥用載體等，通過(guò)適當(dāng)、通常的方法來(lái)制備。另外，在上述制劑中的有效成分的含量，考慮其給藥形態(tài)、給藥方法等，優(yōu)選只要是可以在后述的給藥量范圍內(nèi)給藥該有效成分的量，則沒(méi)有特別的限制。作為本發(fā)明的治療藥或預(yù)防藥中的有效成分的含量，通常為0.1～100重量％左右。
本發(fā)明的治療藥或預(yù)防藥，可以根據(jù)制劑的形態(tài)以適當(dāng)?shù)慕o藥途徑給藥。給藥方法沒(méi)有特別限定，可以通過(guò)內(nèi)用、外用以及注射進(jìn)行。注射藥可以通過(guò)例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、皮內(nèi)等給藥，外用藥，例如可以將栓劑通過(guò)合適的給藥方法來(lái)給藥。
作為本發(fā)明的治療藥或預(yù)防藥的給藥量，可以根據(jù)其制劑形態(tài)、給藥方法、使用目的以及作為該治療藥或預(yù)防藥的給藥對(duì)象的患者的年齡、體重、癥狀適當(dāng)決定，并不是一定的。一般地，制劑中含有的上述有效成分的給藥量，以干燥重量計(jì)，成人每天優(yōu)選0.001mg～10g/kg體重，更加優(yōu)選0.1mg～1g/kg體重。當(dāng)然，由于給藥量可根據(jù)各種條件變動(dòng)，因此，既有用比上述給藥量少的量就足夠的情況，也有必須超過(guò)該范圍的情況。給藥可以在期望的給藥量范圍內(nèi)，每天一次，或分為多次進(jìn)行。給藥期間也是任意的。另外，本發(fā)明的治療藥或預(yù)防藥除了直接口服給藥外，還可以添加到任意的飲食物中，在日常中攝取。
另外，本發(fā)明可以提供含有上述有效成分的胰島素樣作用劑。作為該胰島素樣作用劑，可以是上述有效成分本身，還可以使含有上述有效成分的組合物。該胰島素樣作用劑還可以將上述有效成分和可以與該有效成分用于相同用途的其他成分，例如，已知的胰島素制劑、胰島素分泌促進(jìn)劑、胰島素耐受性改善劑、食后高血糖改善劑、胰島素樣作用劑等配合，按照上述治療藥或預(yù)防藥的制備方法制備成通常使用的藥物形態(tài)。在該胰島素樣作用劑中的上述有效成分的含量，考慮該胰島素樣作用劑的給藥方法、使用目的等，只要是能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明所需效果的量，則沒(méi)有特別的限定。作為典型的胰島素樣作用劑中的有效成分的含量為0.1～100重量％左右。另外，該胰島素樣作用劑的用量，只要是能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明所需效果的量，也沒(méi)有特別的限定。特別是，在對(duì)生物體給藥而使用時(shí)，可以優(yōu)選使用能夠在上述治療藥或預(yù)防藥中有效成分的給藥量的范圍內(nèi)給藥有效成分的量。胰島素樣作用劑對(duì)伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病是有用的。另外，該胰島素樣作用劑對(duì)伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病的藥物篩選也是有用的。此外，該胰島素樣作用劑對(duì)胰島素對(duì)于細(xì)胞的作用機(jī)理、或關(guān)于該細(xì)胞的物理變化的功能研究也是有用的。另外，該胰島素樣作用劑可以代替血清或胰島素制劑使用，或者與它們一起添加到細(xì)胞·組織·器官培養(yǎng)用培養(yǎng)基中使用。該培養(yǎng)基作為降低或不含有血清或胰島素制劑的細(xì)胞·組織·器官培養(yǎng)用培養(yǎng)基使用，是非常有用的。
另外，通過(guò)將本發(fā)明的胰島素樣作用劑給藥于人，可以期待血中胰島素量的降低。即，在治療或預(yù)防時(shí)，可以將本發(fā)明的胰島素樣作用劑作為需要降低胰島素量的疾病的治療或預(yù)防藥使用。作為該疾病，沒(méi)有特別的限定，可以列舉出高胰島素血癥和阿耳茨海默病等。另外，由于還報(bào)道了通過(guò)胰島素受體的刺激和延長(zhǎng)壽命效果之間存在密切的關(guān)系(Science，Vol.299，P572～574(2003年)；Nature，Vol.424，P277～284(2003年))，因此，還可以將本發(fā)明的藥物作為抗衰老藥使用。
在本發(fā)明的有效成分中，如后所述沒(méi)有發(fā)現(xiàn)特別的毒性。此外，也不用擔(dān)心發(fā)生副作用。由此，可以安全并且恰當(dāng)?shù)卦跈C(jī)體內(nèi)產(chǎn)生胰島素作用和/或醛糖還原酶抑制作用。因此，含有該有效成分的本發(fā)明的藥物、食品、飲料或飼料對(duì)于伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病、和/或糖尿病的并發(fā)癥的治療或預(yù)防是有效的。
另外，本發(fā)明還提供含有本發(fā)明的提取物的食品、飲料或飼料。本發(fā)明的食品、飲料或飼料，由于其胰島素樣作用、醛糖還原酶抑制作用，對(duì)于伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病、糖尿病并發(fā)癥的癥狀改善或預(yù)防是極其有用的。另外，本發(fā)明的食品或飲料是具有降低血糖值的作用的用于降低血糖值的食品或飲料，對(duì)于擔(dān)心血糖值者或擔(dān)心身體脂肪者，作為功能性食品或飲料是有用的。
本發(fā)明的食品、飲料或飼料中，也可以配合已知的具有抗糖尿病作用的其他物質(zhì)，例如，已知的胰島素樣作用物質(zhì)、具有胰島素分泌促進(jìn)作用的物質(zhì)、具有胰島素耐受性改善作用的物質(zhì)、具有食后過(guò)血糖改善作用的物質(zhì)、醛糖還原酶抑制物質(zhì)等。例如，還可以與難消化性糊精等配合。
另外，在本發(fā)明的食品、飲料或飼料中，所謂“含有”是指含有、添加和/或稀釋的意思。在此，所謂“含有”是在本發(fā)明的食品、飲料或飼料中含有本發(fā)明的提取物的狀態(tài)，所謂“添加”是在本發(fā)明的食品、飲料或飼料中添加本發(fā)明的提取物的狀態(tài)，所謂“稀釋”是在本發(fā)明的提取物中添加食品、飲料或飼料的原料的狀態(tài)。
對(duì)本發(fā)明的食品、飲料或飼料的制備方法，沒(méi)有特別的限定。例如，配合、調(diào)和、加工可以按照一般食品、飲料或飼料的方法，可以按照它們的制備方法來(lái)制備，只要得到的食品、飲料或飼料含有本發(fā)明的提取物即可。
作為本發(fā)明的食品或飲料，沒(méi)有特別的限定，可以舉出例如含有本發(fā)明的提取物的谷物加工品(小麥粉加工品、淀粉類加工品、預(yù)混和加工品(プレミツクス加工品)、面類、通心粉類、面包類、豆餡類、蕎麥類、麩子、粉條(ビ一フン)、粉絲、包裝糕點(diǎn)等)、油脂加工品(增塑性油脂、油炸油、色拉油、蛋黃醬類、調(diào)味料類等)、大豆加工品(豆腐類、醬、納豆等)、肉類加工類(火腿、臘肉、壓制的火腿、香腸等)、水產(chǎn)制品(冷凍的磨碎的魚(yú)肉、魚(yú)糕、圓筒狀魚(yú)糕、魚(yú)肉山芋丸子、炸胡蘿卜魚(yú)肉餅、汆魚(yú)丸子、劣質(zhì)魚(yú)糕、魚(yú)肉火腿、香腸、松魚(yú)節(jié)、魚(yú)卵加工品、水產(chǎn)罐頭、甜烹海味等)、乳制品(原味乳、奶油、酸奶、黃油、乳酪、煉乳、奶粉、冰淇淋等)、蔬菜·果實(shí)加工品(糊狀食品、果醬、醬菜類、果實(shí)飲料、蔬菜飲料、混合飲料等)、點(diǎn)心類(巧克力、餅干類、果子面包類、點(diǎn)心、糕餅、米果類)、酒精飲料(日本酒、中國(guó)酒、葡萄酒、威士忌、燒酒、伏特加、白蘭地、杜松子酒、糖酒、啤酒、清涼酒精飲料、果實(shí)酒、利久酒等)、嗜好飲料(青汁、綠茶、紅茶、烏龍茶、咖啡、清涼飲料、乳酸飲料等)、調(diào)味品(醬油、調(diào)味汁、醋、甜料酒等)、罐頭·瓶罐頭·袋裝食品(牛肉飯、小鍋什錦份兒飯、紅小豆糯米飯、咖哩飯、其他的各種烹調(diào)好的食品)、半干燥或濃縮食品(肝泥、其他的涂抹果醬、黃油等的食品、蕎麥面·面條的汁、濃縮湯類)、干燥食品(速食面、速食咖哩飯、速溶咖啡、粉末果汁、粉末湯、速食醬湯、烹調(diào)好的食品、烹調(diào)好的飲料、烹調(diào)好的湯等)、冷凍食品(雞素?zé)?、蒸雞蛋羹、烤鱔魚(yú)片、漢堡牛肉餅、燒麥、餃子、各種冰棍、果汁雞尾酒等)、固體食品、液體食品(湯等)、香辣調(diào)味料類等農(nóng)產(chǎn)·林產(chǎn)加工品、畜產(chǎn)加工品、水產(chǎn)加工品等。
本發(fā)明的食品，可以含有、添加一種或多種本發(fā)明的提取物，和/或用一種或多種本發(fā)明的提取物稀釋，不特別限定形狀，也包含片狀、顆粒狀、膠囊狀等形狀的可以經(jīng)口攝取的形狀的物質(zhì)。
作為片狀食品的制備方法，可以通過(guò)已知的方法制備，沒(méi)有特別的限定，例如，用60(v/v)％乙醇水溶液提取當(dāng)歸干燥粉末，然后在濃縮的提取物中添加賦形劑，例如，糊精、難消化性糊精、玉米淀粉、木薯淀粉、環(huán)糊精等，并通過(guò)冷凍干燥、粉碎得到當(dāng)歸提取物的干燥粉末后，再適當(dāng)混合乳糖、結(jié)晶纖維素、蔗糖脂肪酸酯、還原麥芽糖、磷酸鈣、卵殼鈣、微粒二氧化硅、CMC-Ca、海藻糖、維生素C等各種維生素類、檸檬酸、葡萄糖、砂糖、糖醇、斯特維亞菊等甜味料、香料、粉末果汁、來(lái)自海藻的粉末(例如，含有巖藻依聚糖的粉末、瓊脂低聚糖粉末等)、蘑菇粉、干蔬菜粉末(例如，當(dāng)歸等水芹科植物粉末)等，根據(jù)需要實(shí)施造粒工序，采用旋轉(zhuǎn)式打片機(jī)打片來(lái)制備。
另外，作為顆粒狀食品的制備方法，可以采用已知的方法制備，沒(méi)有特別的限定，例如，可以在上述片狀食品的制備工序中，在用旋轉(zhuǎn)式打片機(jī)打片前得到的各種混合的粉末中，添加乙醇并進(jìn)行混煉，再通過(guò)擠出造粒機(jī)進(jìn)行造粒，使其干燥并用振動(dòng)篩進(jìn)行整粒來(lái)制備顆粒狀食品。
另外，作為膠囊狀食品的制備方法，可以采用已知的方法制備，沒(méi)有特別的限定，例如，可以在上述片狀食品的制備工序中，將用旋轉(zhuǎn)式打片機(jī)打片前得到的各種混合的粉末，填充到1號(hào)膠囊中來(lái)制備。另外，還可以在填充前的粉末中添加甘油脂肪酸酯、蜂蠟等進(jìn)行乳化，將明膠和甘油作為包覆材料來(lái)制備軟膠囊。
另外，本發(fā)明的提取物降低了水芹科植物獨(dú)有的苦味和澀味，作為食品原料也是優(yōu)異的。即，本發(fā)明的食品或飲料也是優(yōu)異的嗜好食品或飲料。
另外，作為本發(fā)明的飲料，可以采用已知的方法制備，沒(méi)有特別的限定，例如，可以通過(guò)用60(v/v)％乙醇水溶液提取當(dāng)歸的干燥粉末，在濃縮的提取物中添加例如糊精、難消化性糊精、玉米淀粉、木薯淀粉、環(huán)糊精等，冷凍干燥并通過(guò)粉碎得到當(dāng)歸提取物的干燥粉末后，在其中添加適當(dāng)?shù)南懔?、甜味劑、果汁、粉末果汁、蔬菜提取物、蔬菜泥、?lái)自海藻的粉末或海藻提取物(例如，含有巖藻依聚糖的粉末、瓊脂低聚糖粉末等)、蘑菇粉、水芹科植物的干燥粉末等，并溶解在水或醇中來(lái)制備本發(fā)明的飲料。另外，還可以將當(dāng)歸提取物的干燥粉末溶解在水中后，按照已知的清涼飲料的制備方法來(lái)制備本發(fā)明的飲料。另外，還可以使用當(dāng)歸提取物的濃縮物來(lái)代替當(dāng)歸提取物的干燥粉末。此外，也可以使用當(dāng)歸的含水醇提取物制備作為本發(fā)明的飲料的酒精飲料。
本發(fā)明的食品或飲料中上述有效成分的含量沒(méi)有特別限定，可以從其官能和活性表達(dá)的觀點(diǎn)進(jìn)行適當(dāng)選擇，例如，上述有效成分以干燥重量計(jì)，在食品中，優(yōu)選0.00001重量％或0.00001重量％以上，更加優(yōu)選0.0001～90重量％，特別優(yōu)選0.0006～80重量％，例如，在飲料中，優(yōu)選0.00001重量％或0.00001重量％以上，更加優(yōu)選0.0001～90重量％，特別優(yōu)選0.0006～80重量％。另外，本發(fā)明的食品或飲料中所含的有效成分可以以例如，成人每天優(yōu)選0.01mg～10g/kg體重，更加優(yōu)選0.1mg～1g/kg體重的量攝取。
另外，本發(fā)明還提供一種含有、添加和/或稀釋本發(fā)明的提取物而得到的生物用飼料，另外，作為另一個(gè)方式，還提供一種以給與生物本發(fā)明的提取物為特征的生物的飼養(yǎng)方法。此外，作為本發(fā)明的另一個(gè)方式，還提供一種以含有本發(fā)明的提取物為特征的生物飼養(yǎng)劑。
在這些發(fā)明中，所謂生物，是養(yǎng)殖動(dòng)物、寵物動(dòng)物等，作為養(yǎng)殖動(dòng)物，可以列舉出家畜、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、家禽、魚(yú)類、甲殼類或貝類。作為飼料，可以列舉出身體狀態(tài)的維持和/或改善用飼料。作為生物飼養(yǎng)劑，可以列舉出浸漬用劑、飼料添加劑、飲料添加劑。
按照這些發(fā)明，在適用這些的如上述列舉出的生物中，基于本發(fā)明使用的本發(fā)明的提取物的胰島素樣作用、醛糖還原酶抑制作用，可以期待表現(xiàn)出與本發(fā)明的上述治療藥或預(yù)防藥同樣的效果。即，本發(fā)明的飼料等，可以發(fā)揮在該生物中的伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病和糖尿病的并發(fā)癥的治療或預(yù)防效果。
本發(fā)明使用的本發(fā)明的提取物，通常相對(duì)于對(duì)象生物體重1kg，每天優(yōu)選給藥0.01～2000mg。給藥可以通過(guò)例如將該有效成分添加混合到提供給對(duì)象生物的人工配合飼料的原料中，或與人工配合飼料的粉末原料混合后，再添加混合到其他的原料中來(lái)進(jìn)行。另外，本發(fā)明的提取物在飼料中的含量沒(méi)有特別的限定，可以根據(jù)目的適當(dāng)設(shè)定，例如，以上述有效成分的干燥重量計(jì)，0.001～15重量％的比例是合適的。在生物飼養(yǎng)劑中的本發(fā)明的有效成分的含量也可以是同等程度。
對(duì)本發(fā)明的飼料的制備方法沒(méi)有特別限定，另外，其配合也可以基于一般飼料的方法，還可以在制備的飼料中含有本發(fā)明的提取物。生物飼養(yǎng)劑也可以同樣地制備。
作為本發(fā)明可以適用的生物，沒(méi)有特別限定，作為養(yǎng)殖動(dòng)物，可以舉出馬、牛、豬、羊、山羊、駱駝、美洲駝等家畜、小鼠、大鼠、豚鼠、兔子等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、雞、鴨、火雞、鴕鳥(niǎo)等家禽，作為寵物動(dòng)物，可以舉出狗、貓等，可以廣泛適用。
在本發(fā)明中，通過(guò)例如攝取含有本發(fā)明提取物的飼料、或?qū)?duì)象生物浸漬在含有本發(fā)明提取物的液體中(例如，使上述浸漬用試劑溶解在水中的物質(zhì))中，可以良好地維持或改善家畜、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、家禽、寵物動(dòng)物等的身體狀態(tài)。另外，這樣的方式是本發(fā)明中的生物飼養(yǎng)方法的一種方式。
另外，本發(fā)明還可以提供一種含有上述有效成分的促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖的促進(jìn)劑。作為該葡萄糖吸收促進(jìn)劑，可以是上述有效成分本身，另外，也可以是含有上述有效成分的組合物。該葡萄糖吸收促進(jìn)劑還可以將上述有效成分和可以與該有效成分用于相同用途的其他成分，例如，已知的胰島素制劑、胰島素分泌促進(jìn)劑、胰島素耐受性改善劑、食后高血糖改善劑、胰島素樣作用劑等配合，按照上述治療藥或預(yù)防藥的制備方法制成通常使用的藥物形態(tài)。在該葡萄糖吸收促進(jìn)劑中，上述有效成分的含量，考慮該葡萄糖吸收促進(jìn)劑的給藥方法、使用目的等，只要是能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明所需效果的量，則沒(méi)有特別的限定。作為典型的葡萄糖吸收促進(jìn)劑中有效成分的含量，以干燥重量計(jì)，為0.1～100重量％左右。另外，該葡萄糖吸收促進(jìn)劑的用量，只要是能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明所需效果的量，也沒(méi)有特別的限定。特別是，在對(duì)生物體給藥時(shí)，優(yōu)選使用能以上述治療藥或預(yù)防藥中有效成分的給藥量范圍給藥有效成分的量。該葡萄糖吸收促進(jìn)劑，在治療或預(yù)防上，對(duì)需要促進(jìn)細(xì)胞的葡萄糖吸收作用的疾病的治療或預(yù)防是有用的。作為該疾病，除了例如需要上述的胰島素樣作用的疾病外，還可以列舉出心臟疾病、特別是心肌梗塞、缺血后的心臟損傷等。另外，由于該葡萄糖吸收促進(jìn)劑促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖，因此，在肌肉細(xì)胞中由于該作用發(fā)揮功能，可以誘發(fā)肌肉增強(qiáng)作用、恢復(fù)疲勞作用。另外，該葡萄糖吸收促進(jìn)劑還可以用于制備這些疾病的治療或預(yù)防用食品、飲料或飼料。對(duì)于這些食品、飲料或飼料，可以根據(jù)本發(fā)明的上述食品、飲料或飼料來(lái)使用。另外，該葡萄糖吸收促進(jìn)劑，在上述的治療或預(yù)防上，對(duì)需要促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖的作用的疾病的藥物篩選也是有用的。另外，該葡萄糖吸收促進(jìn)劑對(duì)細(xì)胞的葡萄糖吸收作用機(jī)理的研究或該細(xì)胞的物理變化等功能研究也是有用的。
另外，本發(fā)明還提供一種含有上述有效成分的誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑。作為可以被該分化誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞的前體細(xì)胞，只要是可以分化成脂肪細(xì)胞的細(xì)胞，則沒(méi)有特別的限定，例如，除了前體脂肪細(xì)胞以外，還可以舉出成纖維細(xì)胞和間葉干細(xì)胞等。作為該分化誘導(dǎo)劑，可以是上述有效成分本身，另外，也可以是含有上述有效成分的組合物。該分化誘導(dǎo)劑，例如，還可以將上述有效成分和可以與該有效成分用于相同用途的其他成分，例如，已知的胰島素制劑、胰島素分泌促進(jìn)劑、胰島素耐受性改善劑、食后高血糖改善劑、胰島素樣作用劑等配合，按照上述治療藥或預(yù)防藥的制備方法制成通常使用的藥物形態(tài)。在該分化誘導(dǎo)劑中，上述有效成分的含量，考慮該分化誘導(dǎo)劑的給藥方法、使用目的等，只要是能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明所需效果的量，則沒(méi)有特別的限定。作為典型誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化的該分化誘導(dǎo)劑中的有效成分含量，以干燥重量計(jì)，為0.1～100重量％左右。另外，該分化誘導(dǎo)劑的用量只要是能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明所需效果的量，也沒(méi)有特別的限定。特別是，在對(duì)生物體給藥時(shí)，優(yōu)選使用能以上述治療藥或預(yù)防藥中有效成分的給藥量范圍給藥有效成分的量。該分化誘導(dǎo)劑，在治療或預(yù)防上，對(duì)需要誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化的分化誘導(dǎo)作用的疾病的治療或預(yù)防是有用的。作為該疾病，除了例如上述的需要胰島素樣作用的疾病以外，還可以列舉出痛風(fēng)、脂肪肝、膽石病、月經(jīng)異常、不孕癥等。另外，該分化誘導(dǎo)劑也可以用于制備這些疾病的治療或預(yù)防用食品、飲料或飼料。對(duì)于這些食品、飲料或飼料，可以按照本發(fā)明的上述食品、飲料或飼料使用。另外，該分化誘導(dǎo)劑，在上述的治療或預(yù)防上，對(duì)需要誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)劑的疾病的藥物篩選也是有用的。此外，該分化誘導(dǎo)劑，對(duì)誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用的機(jī)理研究及其物理變化等功能研究也是有用的。
另外，本發(fā)明還提供一種含有上述有效成分的醛糖還原酶抑制劑。作為該抑制劑，可以是上述有效成分本身，也可以是含有上述有效成分的組合物。該抑制劑，例如還可以將上述有效成分和可以與該有效成分用于相同用途的其他成分，例如，依帕司他等配合，按照上述治療藥或預(yù)防藥的制備方法制備成通常使用的藥物形態(tài)。在該抑制劑中的上述有效成分的含量，考慮該抑制劑的給藥方法、使用目的等，只要是能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明所需效果的量，則沒(méi)有特別的限定。作為典型的醛糖還原酶抑制劑中的有效成分的含量，以干燥重量計(jì)，為0.1～100重量％左右。另外，該抑制劑的用量，只要是能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明所需效果的量，也沒(méi)有特別的限定。特別是在對(duì)生物體給藥時(shí)，優(yōu)選使用能以上述治療藥或預(yù)防藥中有效成分的給藥量范圍給藥有效成分的量。該抑制劑，在治療或預(yù)防上，對(duì)需要醛糖還原酶抑制作用的疾病的治療或預(yù)防是有用的。作為該疾病，可以列舉出上述的糖尿病并發(fā)癥等。另外，該抑制劑也可以用于制備用于治療或預(yù)防這些疾病的食品、飲料或飼料。對(duì)于這些食品、飲料或飼料，可以按照上述本發(fā)明的食品、飲料或飼料使用。另外，該抑制劑對(duì)于篩選上述糖尿病并發(fā)癥的藥物也是有用的。此外，該抑制劑對(duì)于多元醇代謝和糖尿病并發(fā)癥的機(jī)理研究及其物理變化等功能研究也是有用的。
另外，本發(fā)明的提取物還可以作為化妝品原料使用。該提取物可以與可以作為化妝品使用的任意的物質(zhì)混合使用。一般地，可以與水、醇類、油脂類、脂肪酸類、甘油、無(wú)機(jī)鹽類、防腐劑、表面活性劑、維生素類、氨基酸類、糖類等混合，作為洗液、乳液、乳膏等使用。作為化妝品中的本發(fā)明提取物的含量，以干燥重量計(jì)，0.1～80重量％左右是合適的。
另外，作為本發(fā)明的其他實(shí)施方式，還提供一種醛糖還原酶抑制劑，其特征在于含有選自黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮、補(bǔ)骨脂色滿查耳酮、munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮、prostratol F中的至少1種或1種以上作為有效成分。作為這些有效成分的制備方法，可以通過(guò)已知的方法得到。另外，作為該醛糖還原酶抑制劑的制備方法，可以按照上述本發(fā)明的治療藥或預(yù)防藥的制備來(lái)制備。
本發(fā)明中使用的上述有效成分，即使是對(duì)生物體進(jìn)行發(fā)揮該作用所需有效量的給藥，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)毒性。例如，口服給藥時(shí)，即使是將當(dāng)歸的60(v/v)％乙醇水溶液提取物的干燥物分別以1g/kg體重對(duì)小鼠單次給藥，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)死亡例。另外，上述有效成分，在對(duì)大鼠的口服給藥時(shí)，即使口服單次給藥1g/kg體重，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)死亡例。
實(shí)施例以下舉出實(shí)施例更具體地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些記載的任何限制。另外，在實(shí)施例中如果沒(méi)有特別的說(shuō)明，所有的％都是指體積(v/v)％。
實(shí)施例1在當(dāng)歸莖葉部分的冷凍干燥物的粉碎物2g中，加入40mL的提取溶劑(40、50、60、70、80％乙醇水溶液以及100％乙醇)，在25℃下進(jìn)行30分鐘的提取。離心后的上清液用HPLC測(cè)定查耳酮類的含量。柱使用TSK gel ODS-80Ts QA(4.6mm×25cm東ソ一公司制)。溶劑A(蒸餾水和乙腈以體積比4比1混合的混合溶劑，并含有0.1％三氟乙酸)和溶劑B(蒸餾水和乙腈以體積比1比9混合的混合溶劑，并含有0.1％三氟乙酸)的洗脫比從0到45分鐘直線地使溶劑B的比從0變到100％，隨后10分鐘保持溶劑B的比為100％。洗脫速度為1mL/分，檢測(cè)在215nm、柱溫30℃下進(jìn)行。
其結(jié)果示于表1。由表1可知，從當(dāng)歸莖葉部分提取TB1和TB2時(shí)，與100％乙醇相比，含水乙醇的提取效率更好。另外，還可以知道，對(duì)于從當(dāng)歸莖葉部分提取黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛，60％、70％、80％乙醇水溶液比100％乙醇的效率更好。
表1從當(dāng)歸莖葉部分提取查耳酮類時(shí)的含水乙醇的效果

將通過(guò)100％乙醇提取的提取量表示為100％實(shí)施例2對(duì)將當(dāng)歸根部的冷凍干燥物的粉碎物進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的提取，并測(cè)定提取液中查耳酮類的量。結(jié)果如表2所示。由表2可知，從當(dāng)歸根部提取TB1和TB2時(shí)，含水乙醇的提取效率比100％的乙醇好。另外，還可以明確，從當(dāng)歸根部提取黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛?xí)r，60％、70％、80％乙醇水溶液比100％乙醇的效率更好。
表2從當(dāng)歸根部提取查耳酮類時(shí)的含水乙醇的效果

將通過(guò)100％乙醇提取的提取量表示為100％實(shí)施例3在當(dāng)歸莖葉部分的冷凍干燥物的粉碎物2g中，加入40mL的提取溶劑(40、50、60、70、80％乙醇水溶液以及100％乙醇)，在室溫下進(jìn)行30分鐘的提取。將離心后的上清液30mL濃縮干固，并溶解到0.75mL的二甲亞砜中。
實(shí)施例4在當(dāng)歸根部的冷凍干燥物的粉碎物2g中，加入40mL的提取溶劑(40、50、60、70、80％乙醇水溶液以及100％乙醇)，在室溫下進(jìn)行30分鐘的提取。將離心后的上清液30mL濃縮干固，并溶解到0.75mL的二甲亞砜中。
實(shí)施例5當(dāng)歸莖葉部分提取物誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化的活性(1)向脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)是部分改良Rubin C.S.等的方法(J.Biol.Chem.，Vol.253，No.20，p7570～7578(1978年))來(lái)進(jìn)行的。在包含200μM抗壞血酸的含10％胎牛血清(ギブコ公司制)的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(シグマ公司制，D6046)(以下，稱為A-D-MEM培養(yǎng)基)中，以4×103個(gè)/mL懸浮前體脂肪細(xì)胞株3T3-L1(ATCC CCL-92.1)，并在12孔微量滴定板的孔中，每孔各加入2mL，在5％二氧化碳存在下，在37℃培養(yǎng)7天。其中在第2、4天用同樣的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)基更換。在第7天，更換為含有0.25μM地塞米松的A-D-MEM培養(yǎng)基后，分別將實(shí)施例3制備的當(dāng)歸莖葉部分的40％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液以終濃度為0.1％、0.033％；50％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液以終濃度為0.1％、0.033％、0.011％；另外，60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物的二甲亞砜溶液以終濃度為0.2％、0.067％、0.022％的量添加到各孔中。此外，作為陽(yáng)性對(duì)照，設(shè)定添加4μL的5mg/mL胰島素(タカラバイオ公司制)水溶液的區(qū)域，作為陰性對(duì)照，設(shè)定添加二甲亞砜的區(qū)域。45小時(shí)后，更換為A-D-MEM培養(yǎng)基，分別將當(dāng)歸莖葉部分的40％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液以終濃度為0.1％、0.033％；50％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液以終濃度為0.1％、0.033％、0.011％；另外，60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物的二甲亞砜溶液以終濃度為0.2％、0.067％、0.022％的量添加到各孔中，此外，作為陽(yáng)性對(duì)照，添加2μL的5mg/mL胰島素水溶液，作為陰性對(duì)照，添加二甲亞砜，再培養(yǎng)7天，在第2、4天更換培養(yǎng)基。此時(shí)，將當(dāng)歸莖葉部分的40％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液以終濃度為0.1％、0.033％；50％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液以終濃度為0.1％、0.033％、0.011％；另外，60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物的二甲亞砜溶液以終濃度為0.2％、0.067％、0.022％的量添加到各孔中。作為陽(yáng)性對(duì)照，添加2μL的5mg/mL胰島素水溶液，作為陰性對(duì)照，添加二甲亞砜。
(2)甘油三酯生物合成量的測(cè)定作為誘導(dǎo)向成熟脂肪細(xì)胞分化的指標(biāo)，測(cè)定了細(xì)胞中的甘油三酯的量作為胰島素樣作用評(píng)價(jià)。培養(yǎng)結(jié)束后，除去培養(yǎng)基，用磷酸緩沖鹽溶液將細(xì)胞洗滌2次，添加1mL的己烷∶異丙醇＝3∶2的溶劑，在室溫下放置30分鐘后，回收上清液。再次重復(fù)此操作，將得到的2mL上清液濃縮干固。將沉淀溶解在100μL的異丙醇中之后，使用甘油三酯E-檢測(cè)器(和光純藥公司制，代號(hào)432-40201)測(cè)定在10μL溶液中含有的甘油三酯的量。另外，測(cè)定全部以2連進(jìn)行。
結(jié)果是，與二甲亞砜添加區(qū)域相比，在當(dāng)歸莖葉部分的40％、50％、60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物添加區(qū)域中，與添加了胰島素的區(qū)域同樣，確認(rèn)了甘油三酯生物合成的誘導(dǎo)。即，在當(dāng)歸莖葉部分的40％、50％、60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物中，確認(rèn)了誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化的活性。
實(shí)施例6由當(dāng)歸根部提取物產(chǎn)生的葡萄糖吸收促進(jìn)作用(1)成熟脂肪細(xì)胞的制備向成熟脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)是部分改良Rubin C.S.等的方法來(lái)進(jìn)行的。在包含200μM抗壞血酸的含10％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基中，以4×103個(gè)/mL懸浮3T3-L1細(xì)胞，并在12孔微量滴定板的孔中，每孔各加入2mL，在5％二氧化碳存在下，在37℃培養(yǎng)7天。在第7天，更換為2mL包含0.25μM地塞米松以及10μg/mL胰島素、0.5mM的3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(ナカライテスク公司制，19624-44)的含10％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基。45小時(shí)后，更換為2mL含有200μM抗壞血酸和5μg/mL胰島素的含10％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基，再于2天后、4天后更換相同的培養(yǎng)基并培養(yǎng)7天，制備成熟脂肪細(xì)胞。
(2)對(duì)成熟脂肪細(xì)胞的葡萄糖吸收促進(jìn)作用的測(cè)定作為葡萄糖吸收促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)，測(cè)定了在成熟脂肪細(xì)胞中的試樣(實(shí)施例4中制備的當(dāng)歸根部提取物)刺激時(shí)的吸收到細(xì)胞內(nèi)的2-脫氧葡萄糖量作為胰島素樣作用的評(píng)價(jià)。
培養(yǎng)結(jié)束后，除去培養(yǎng)基，用含有0.1(w/v)％牛血清白蛋白(シグマ公司制，A8022)的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基將細(xì)胞洗滌2次后，分別在各孔中添加1mL的含有終濃度為0.1％、0.067％、0.022％的實(shí)施例4制備的當(dāng)歸根部40％、50％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液、終濃度為0.2％、0.067％、0.022％的當(dāng)歸根部60％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液、終濃度為0.067％、0.022％的當(dāng)歸根部70％、80％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液或當(dāng)歸根部100％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液的相同培養(yǎng)基，在5％二氧化碳存在下，在37℃培養(yǎng)一晚。另外，設(shè)定不添加試樣的區(qū)域作為陰性對(duì)照。培養(yǎng)一晚后，用HEPES緩沖鹽溶液(140mM NaCl、5mM KCl、2.5mM MgSO4、1mM CaCl2、20mMHEPES-Na(pH 7.4))將細(xì)胞洗滌2次，在各孔中添加0.9mL含有終濃度為0.1％、0.067％、0.022％的當(dāng)歸根部40％、50％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液、終濃度為0.2％、0.067％、0.022％的當(dāng)歸根部60％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液、終濃度為0.067％、0.022％的當(dāng)歸根部70％、80％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液或當(dāng)歸根部100％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液的相同緩沖液，在37℃培養(yǎng)75分鐘。此時(shí)，設(shè)定在經(jīng)過(guò)45分鐘的時(shí)刻，在沒(méi)有添加試樣的孔中以終濃度為1μg/mL的量添加了胰島素的區(qū)域作為陽(yáng)性對(duì)照。然后，添加100μL含有0.5μCi/mL的2-脫氧-[1，2-3H(N)]葡萄糖(パ一キンエルマ一ライフサイエンス公司制，NET549A)、1mM的2-脫氧葡萄糖(ナカライテスク公司制，10722-11)的HEPES鹽緩沖液，進(jìn)一步在37℃培養(yǎng)10分鐘。培養(yǎng)結(jié)束后，除去上清液，用冷卻到4℃的磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞3次后，通過(guò)添加0.5mL含有1％ノニデツトP-40的磷酸鹽緩沖液來(lái)溶解細(xì)胞，溶出吸收到細(xì)胞中的2-脫氧[1，2-3H(N)]葡萄糖。使用25μL上清液，將ウルチマゴ一ルド(パ一キンエルマ一ライフサイエンス公司制，6013329)作為シンチレ一シヨンカウンタ一，通過(guò)液體放射線檢測(cè)器LS6500(ベツクマン公司制)測(cè)定放射活性。
其結(jié)果，添加了當(dāng)歸根部40％、50％、60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物的區(qū)域與陰性對(duì)照相比，與添加了胰島素的區(qū)域同樣地，發(fā)現(xiàn)了2-脫氧[1，2-3H(N)]葡萄糖吸收的促進(jìn)。即，在當(dāng)歸根部40％、50％、60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物中，確認(rèn)了葡萄糖吸收促進(jìn)活性。
實(shí)施例7當(dāng)歸根部提取物誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞的分化基于實(shí)施例5的方法測(cè)定按照實(shí)施例4制備的當(dāng)歸根部40％、50％、60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物誘導(dǎo)向成熟脂肪細(xì)胞分化的作用(胰島素樣作用)。
即，設(shè)定在各孔中分別添加了終濃度為0.1％、0.033％的當(dāng)歸根部40％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液、終濃度為0.033％、0.011％的當(dāng)歸根部50％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液、終濃度為0.022％的當(dāng)歸根部70％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液、終濃度為0.067％、0.022％的當(dāng)歸根部60％、80％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液或100％乙醇水溶液提取物的二甲亞砜溶液的區(qū)域作為試樣。另外，設(shè)定添加4μL的5mg/mL胰島素(タカラバイオ公司制)水溶液的區(qū)域作為陽(yáng)性對(duì)照，設(shè)定添加二甲亞砜的區(qū)域作為陰性對(duì)照。此后，與實(shí)施例5所述的方法同樣地，進(jìn)行培養(yǎng)基以及試樣的更換，在試樣添加7天后，測(cè)定細(xì)胞中甘油三酯的量。
其結(jié)果，在添加了當(dāng)歸根部40％、50％、60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物的區(qū)域中，確認(rèn)了甘油三酯生物合成的誘導(dǎo)。即，在當(dāng)歸根部40％、50％、60％、70％、80％乙醇水溶液提取物或100％乙醇提取物中，確認(rèn)了誘導(dǎo)向成熟脂肪細(xì)胞分化的作用。
制備例1當(dāng)歸葉莖部分、根部水提取物的制備在當(dāng)歸葉莖部、根部的冷凍干燥物的粉碎物2g中，加入40mL的水，在室溫下進(jìn)行30分鐘的提取。將離心后的上清液30mL濃縮干固，溶解到0.75mL水中，制成當(dāng)歸葉莖部分、根部水提取物。
實(shí)施例8當(dāng)歸根部提取物的醛糖還原酶抑制作用按照以下方法測(cè)定當(dāng)歸根部提取物的醛糖還原酶抑制作用。將20μL的100mM甲基乙二醛溶液加入到10μL作為試樣的實(shí)施例4制備的當(dāng)歸根部各種乙醇提取物以及制備例1制備的當(dāng)歸根部水提取物(溶解在50％二甲亞砜水溶液中的物質(zhì))、100μL的0.2M磷酸緩沖液(pH6.2)、20μL的1mM NADPH(磷酸緩沖液)、10μL來(lái)自人肌肉細(xì)胞的醛糖還原酶溶液(0.1U/M1，和光純藥工業(yè)公司制，磷酸緩沖液)中，測(cè)定從經(jīng)過(guò)30秒后的180秒內(nèi)NADPH在340nm的吸光度的變化。使用50％二甲亞砜水溶液代替試樣作為陰性對(duì)照。另外，使用蒸餾水代替甲基乙二醛溶液作為各試樣的空白測(cè)定吸光度。測(cè)定值用2次實(shí)驗(yàn)值的平均值表示。按照以下的式子計(jì)算出醛糖還原酶抑制率(％)。抑制率(％)＝[1-(ΔAs-ΔAsb)/(ΔAc-ΔAcb)]×100式中，ΔAs以及ΔAc分別表示試樣溶液、陰性對(duì)照溶液每分鐘的吸光度變化，ΔAsb以及ΔAcb分別表示試樣溶液、陰性對(duì)照溶液的空白溶液每分鐘的吸光度變化。
試樣的添加量是使最終濃度如表3所示。由表3可知，當(dāng)歸根部的含水乙醇提取物比水提取物或乙醇提取物顯示高的醛糖還原酶抑制作用。
表3

實(shí)施例9當(dāng)歸莖葉部分提取物的醛糖還原酶抑制作用按照與實(shí)施例8同樣的方法測(cè)定實(shí)施例3制備的當(dāng)歸莖葉部分提取物的醛糖還原酶抑制活性。結(jié)果示于表4。由表4可知，當(dāng)歸莖葉部分的60％乙醇水溶液提取物比水提取物或乙醇提取物顯示高的醛糖還原酶抑制作用。
表4

實(shí)施例10黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮、補(bǔ)骨脂色滿查耳酮、munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮、prostratol F的制備對(duì)實(shí)施例3制備的當(dāng)歸莖葉部分的40、50、60、70以及80％乙醇提取物和實(shí)施例4制備的當(dāng)歸根部的40、50、60、70以及80％乙醇提取物，用實(shí)施例1所示的條件進(jìn)行通過(guò)HPLC的分析，結(jié)果確認(rèn)在這些提取物中含有黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮、補(bǔ)骨脂色滿查耳酮、munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮、prostratol F。使用各種色譜法分離這些化合物。
實(shí)施例11在當(dāng)歸根部提取物中含有的物質(zhì)的醛糖還原酶抑制活性用與實(shí)施例8同樣的方法測(cè)定實(shí)施例10制備的黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮、補(bǔ)骨脂色滿查耳酮、munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮、prostratol F的醛糖還原酶抑制活性。
結(jié)果示于表5。由表5可知，黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮、補(bǔ)骨脂色滿查耳酮、munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮、prostratolF存在濃度依賴性的醛糖還原酶抑制活性。
在實(shí)施例1和2中，可以確認(rèn)在含水乙醇提取物中含有TB1、TB2，本發(fā)明者們?cè)趪?guó)際公開(kāi)2004/031165號(hào)小冊(cè)子中明確了TB1以及TB2具有醛糖還原酶抑制活性。即，可以明確，在實(shí)施例1和2中所示的含水乙醇提取物中，除了TB1、TB2以外，還含有很多具有醛糖還原酶抑制作用的物質(zhì)。
表5

N.T.表示未試驗(yàn)參考例1黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛、TB1、TB2、黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮、munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮、prostratolF誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化的活性基于實(shí)施例5的方法測(cè)定黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛、TB1、TB2、黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮、munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮、prostratol F誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化的作用(胰島素樣作用)。
即，設(shè)定在各孔中分別添加了黃色當(dāng)歸醇(終濃度1、3、10μM)、4-羥基德里辛(終濃度3、10μM)、TB1(終濃度3、10μM)、TB2(終濃度3、10μM)、異補(bǔ)骨脂查耳酮(終濃度3、10μM)、黃色當(dāng)歸醇H(終濃度1.3、4、13μM)、munduleaflavanone A(終濃度3、10μM)、異補(bǔ)骨脂黃酮(終濃度3、10、30μM)、prostratol F(終濃度3、10μM)的二甲亞砜溶液的區(qū)域作為試樣。另外，設(shè)定添加4μL的5mg/mL胰島素(タカラバイオ公司制)水溶液的區(qū)域作為陽(yáng)性對(duì)照，設(shè)定添加二甲亞砜的區(qū)域作為陰性對(duì)照。此后，與實(shí)施例5所述的方法同樣地進(jìn)行培養(yǎng)基以及試樣的更換，在試樣添加7天后，測(cè)定細(xì)胞中的甘油三酯的量。
其結(jié)果，在添加了黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛、TB1、TB2、黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮、munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮、prostratol F的區(qū)域中，分別確認(rèn)了甘油三酯的生物合成的誘導(dǎo)。即，在黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛、TB1、TB2、黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮、munduleaflavanone A、異補(bǔ)骨脂黃酮、prostratol F中，確認(rèn)了誘導(dǎo)向成熟脂肪細(xì)胞分化的作用。
參考例2黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛、黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮的葡萄糖吸收促進(jìn)作用基于實(shí)施例6的方法，測(cè)定了在成熟脂肪細(xì)胞中的試樣刺激時(shí)的細(xì)胞內(nèi)吸收的2-脫氧葡萄糖量作為黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛、黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮的葡萄糖吸收促進(jìn)作用的評(píng)價(jià)，并作為胰島素樣作用的評(píng)價(jià)。
即，在各孔中分別使用黃色當(dāng)歸醇(終濃度3、10μM)、4-羥基德里辛(終濃度3、10、30μM)、黃色當(dāng)歸醇H(終濃度30μM)、異補(bǔ)骨脂查耳酮(終濃度3、10、30μM)的二甲亞砜溶液作為試樣。另外，設(shè)定不添加試樣的區(qū)域作為陰性對(duì)照，設(shè)定以終濃度為1μg/mL的量添加了胰島素的區(qū)域作為陽(yáng)性對(duì)照。此后，同樣地測(cè)定在細(xì)胞中吸收的2-脫氧-[1，2-3H(N)]葡萄糖。
其結(jié)果，添加了黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛、黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮的區(qū)域與陰性對(duì)照相比，與添加了胰島素的區(qū)域同樣地，發(fā)現(xiàn)了2-脫氧[1，2-3H(N)]葡萄糖吸收的促進(jìn)。即，在黃色當(dāng)歸醇、4-羥基德里辛、黃色當(dāng)歸醇H、異補(bǔ)骨脂查耳酮中，確認(rèn)了葡萄糖吸收促進(jìn)活性。
實(shí)施例12將當(dāng)歸干燥粉末40kg加入到400L的55％乙醇中，在25℃下進(jìn)行1小時(shí)的提取。然后，將當(dāng)歸粉末過(guò)濾分離，并通過(guò)濃縮罐減壓濃縮該提取液，得到150L當(dāng)歸提取濃縮液。在該濃縮液中添加10kg糊精作為賦形劑，進(jìn)行冷凍干燥、粉碎，得到當(dāng)歸提取粉末22kg。
實(shí)施例13將2.5kg實(shí)施例12中得到的當(dāng)歸提取粉末、10.0kg結(jié)晶纖維素、0.6kg蔗糖脂肪酸酯依次投入到混合機(jī)中，攪拌15分鐘。將該混合物通過(guò)旋轉(zhuǎn)式打片機(jī)打片，得到片劑13.1kg。另外，除了使用實(shí)施例12所述的當(dāng)歸干燥粉末作為對(duì)照以外，用同樣的方法制備當(dāng)歸干燥粉末的片劑。由20名成員對(duì)這些進(jìn)行官能檢查，結(jié)果評(píng)價(jià)為含有當(dāng)歸提取物的片劑苦味和澀味降低，并且嗜好性優(yōu)異。
實(shí)施例14將5.0kg實(shí)施例12中得到的當(dāng)歸提取粉末、5.0kg結(jié)晶纖維素、5.0kg乳糖、0.7kg蔗糖脂肪酸酯依次投入到混合機(jī)中，攪拌15分鐘。將該混合物通過(guò)旋轉(zhuǎn)式打片機(jī)打片，得到片劑15.7kg。另外，除了使用實(shí)施例12所述的當(dāng)歸干燥粉末作為對(duì)照以外，用同樣的方法制備當(dāng)歸干燥粉末的片劑。由20名成員對(duì)這些進(jìn)行官能檢查，結(jié)果評(píng)價(jià)為含有當(dāng)歸提取物的片劑苦味和澀味降低，并且嗜好性優(yōu)異。
實(shí)施例15將2.5kg實(shí)施例12中得到的當(dāng)歸提取粉末、10.0kg結(jié)晶纖維素、0.6kg蔗糖脂肪酸酯依次投入到混合機(jī)中，攪拌15分鐘。再添加60％乙醇水溶液并進(jìn)行混煉，將得到的混合物通過(guò)擠出造粒機(jī)進(jìn)行造粒。再用擱板式溫風(fēng)干燥機(jī)將其在60℃下干燥6小時(shí)，用振動(dòng)篩進(jìn)行整粒，得到20～100目的顆粒物13.1kg。另外，除了使用實(shí)施例12中所述的當(dāng)歸干燥粉末作為對(duì)照以外，用同樣的方法制備當(dāng)歸干燥粉末的顆粒物。由20名成員對(duì)這些進(jìn)行官能檢查，結(jié)果評(píng)價(jià)為含有當(dāng)歸提取物的顆粒品苦味和澀味降低，并且嗜好性優(yōu)異。
實(shí)施例16將2.0kg實(shí)施例12中得到的當(dāng)歸提取粉末、3.0kg乳糖、3.0kg海藻糖、3.5kg結(jié)晶纖維素、0.8kg蔗糖脂肪酸酯、0.5kg維生素C、0.2kg檸檬酸依次投入到混合機(jī)中，攪拌15分鐘。再添加60％乙醇水溶液并進(jìn)行混煉，通過(guò)擠出造粒機(jī)進(jìn)行造粒。再用擱板式溫風(fēng)干燥機(jī)將其在60℃下干燥6小時(shí)，用振動(dòng)篩進(jìn)行整粒，得到20～100目的顆粒物15kg。另外，除了使用實(shí)施例12所述的當(dāng)歸干燥粉末作為對(duì)照以外，用同樣的方法制備當(dāng)歸干燥粉末的顆粒物。由20名成員對(duì)這些進(jìn)行官能檢查，結(jié)果評(píng)價(jià)為含有當(dāng)歸提取物的顆粒品苦味和澀味降低，并且嗜好性優(yōu)異。
實(shí)施例17將2.9kg實(shí)施例12中得到的當(dāng)歸提取粉末、10.78kg乳糖、0.9kg蔗糖脂肪酸酯、0.1kg維生素C、0.07kg滑石、0.25kg香料依次投入到混合機(jī)中，攪拌15分鐘，得到15kg混合粉末。然后，將該混合粉末以每個(gè)300mg填充到1號(hào)膠囊中，得到配合了當(dāng)歸提取粉末的膠囊。
實(shí)施例18在混合機(jī)中加入10.0kg大豆油作為基質(zhì)油，并向其中添加2.0kg實(shí)施例12中得到的當(dāng)歸提取粉末、1.0kg維生素E、1.0kg甘油脂肪酸酯、0.8kg蜂蠟，并進(jìn)行乳化。將得到的乳化物填充到將明膠和甘油作為包覆材料的軟膠囊中。
實(shí)施例19制備含有當(dāng)歸提取物的清涼飲料水。組分如表6所示。


依次混合表6的材料至均勻后，用加熱板在95℃下加熱殺菌15秒鐘，填充到容量50mL的玻璃瓶中。然后，進(jìn)一步用巴氏滅菌器在75℃下進(jìn)行15分鐘的殺菌。
另外，除了使用實(shí)施例12所述的當(dāng)歸干燥粉末作為對(duì)照以外，用同樣的方法制備含有當(dāng)歸干燥粉末的清涼飲料水。由20名成員對(duì)這些進(jìn)行官能檢查，結(jié)果評(píng)價(jià)為含有當(dāng)歸提取物的清涼飲料水苦味和澀味降低，并且嗜好性優(yōu)異。
實(shí)施例20制備含有當(dāng)歸提取物的清涼飲料水。組分如表7所示。

依次混合表7的材料至均勻后，用加熱板在95℃下加熱殺菌15秒鐘，填充到容量50mL的玻璃瓶中。然后，進(jìn)一步用巴氏滅菌器在75℃下進(jìn)行15分鐘的殺菌。
另外，除了使用實(shí)施例12所述的當(dāng)歸干燥粉末作為對(duì)照以外，用同樣的方法制備含有當(dāng)歸干燥粉末的清涼飲料水。由20名成員對(duì)這些進(jìn)行官能檢查，結(jié)果評(píng)價(jià)為含有當(dāng)歸提取物的清涼飲料水苦味和澀味降低，并且嗜好性優(yōu)異。
實(shí)施例21制備含有當(dāng)歸提取物的清涼飲料水。組分如表8所示。

依次混合表8的材料至均勻后，用加熱板在98℃下加熱殺菌15秒鐘，填充190g到容量200mL的罐中后，進(jìn)一步用巴氏滅菌器在85℃下進(jìn)行5分鐘的殺菌。
另外，除了使用實(shí)施例12所述的當(dāng)歸干燥粉末作為對(duì)照以外，用同樣的方法制備含有當(dāng)歸干燥粉末的清涼飲料水。由20名成員對(duì)這些進(jìn)行官能檢查，結(jié)果評(píng)價(jià)為含有當(dāng)歸提取物的清涼飲料水苦味和澀味降低，并且嗜好性優(yōu)異。
實(shí)施例22制備使用了實(shí)施例12中得到的當(dāng)歸提取濃縮液的清涼飲料水。組分如表9所示。


依次混合表9的材料至均勻后，用加熱板在95℃下加熱殺菌15秒鐘，填充到容量50mL的玻璃瓶中。然后，進(jìn)一步用巴氏滅菌器在75℃下進(jìn)行15分鐘的殺菌。
另外，除了使用實(shí)施例12所述的當(dāng)歸干燥粉末作為對(duì)照以外，用同樣的方法制備含有當(dāng)歸干燥粉末的清涼飲料水。由20名成員對(duì)這些進(jìn)行官能檢查，結(jié)果評(píng)價(jià)為含有當(dāng)歸提取物的清涼飲料水苦味和澀味降低，并且嗜好性優(yōu)異。
實(shí)施例23將由上述實(shí)施例19～22制備的清涼飲料水以同樣的方法填充到帶有塞口的容量200mL的小袋或容量100mL的殺菌袋中來(lái)代替玻璃瓶或罐，殺菌，作成袋裝飲料。
工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供一種來(lái)自水芹科植物的含水醇提取物及其制備方法。在該提取物中，存在大量來(lái)自天然物的生理活性物質(zhì)(例如，上述顯示胰島素樣作用、醛糖還原酶抑制作用的物質(zhì)等)，該提取物作為對(duì)糖尿病或肥胖等伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病和/或糖尿病的并發(fā)癥有效的藥物、食品、飲料或飼料的原料是有用的。另外，該食品或飲料通過(guò)作為日常的飲食品來(lái)攝取，可以預(yù)防、改善伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病和/或糖尿病的并發(fā)癥的癥狀。因此，含有本發(fā)明的提取物的功能性飲食品，由于具有該胰島素樣作用和/或醛糖還原酶抑制作用，是對(duì)于維持機(jī)體穩(wěn)定性的有用的功能性飲食品。另外，本發(fā)明還提供一種含有本發(fā)明的提取物的胰島素樣作用劑，該胰島素樣作用劑對(duì)于胰島素的功能研究、胰島素關(guān)連的疾病用藥物的篩選是有用的。此外，本發(fā)明還提供一種含有本發(fā)明提取物的促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖的促進(jìn)劑，該葡萄糖吸收促進(jìn)劑，在治療或預(yù)防上，對(duì)需要促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖的作用的疾病的治療或預(yù)防、該疾病的治療或預(yù)防用食品、飲料或飼料的制備、對(duì)于需要促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖的作用的疾病的藥物篩選也是有用的。另外，本發(fā)明還提供一種含有本發(fā)明提取物的誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化的誘導(dǎo)劑，該分化誘導(dǎo)劑，在治療或預(yù)防上，對(duì)需要誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用的疾病的治療或預(yù)防、該疾病的治療或預(yù)防用食品、飲料或飼料的制備、對(duì)于需要該分化誘導(dǎo)作用的疾病的藥物篩選也是有用的。另外，本發(fā)明還提供一種含有本發(fā)明提取物的醛糖還原酶抑制劑，該抑制劑，在治療或預(yù)防上，對(duì)需要醛糖還原酶抑制作用的疾病的治療或預(yù)防、該疾病的治療或預(yù)防用食品、飲料或飼料的制備、對(duì)于需要該抑制作用的疾病的藥物篩選也是有用的。
權(quán)利要求
1.一種提取物，該提取物是用含水醇提取水芹科植物或其處理物而得到的。
2.權(quán)利要求1所述的提取物，其中，水芹科植物為當(dāng)歸。
3.權(quán)利要求1或2所述的提取物，其中，含水醇為濃度大于或等于40(v/v)％且小于100(v/v)％的乙醇水溶液。
4.一種來(lái)自水芹科植物或其處理物的提取物的制備方法，包括用含水醇提取水芹科植物或其處理物的工序。
5.權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，水芹科植物為當(dāng)歸。
6.權(quán)利要求4或5所述的制備方法，其中，含水醇為濃度大于或等于40(v/v)％且小于100(v/v)％的乙醇水溶液。
7.一種伴隨胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病和/或糖尿病的并發(fā)癥的治療藥或預(yù)防藥，其特征在于，含有權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的提取物作為有效成分。
8.一種胰島素樣作用劑，其特征在于，含有權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的提取物作為有效成分。
9.一種食品、飲料或飼料，其特征在于，含有權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的提取物。
10.權(quán)利要求9所述的食品、飲料或飼料，所述食品、飲料或飼料用于治療或預(yù)防伴隨胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病和/或糖尿病的并發(fā)癥。
11.一種促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖的促進(jìn)劑，其特征在于，含有權(quán)利要求1～3中任意一項(xiàng)所述的提取物作為有效成分。
12.一種誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)劑，其特征在于，含有權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的提取物作為有效成分。
13.一種醛糖還原酶抑制劑，其特征在于，含有權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的提取物作為有效成分。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用含水醇提取水芹科植物或其處理物而得到的提取物；以及該提取物的制備方法；以含有上述提取物作為有效成分為特征的伴隨著胰島素量或胰島素應(yīng)答異常的疾病和/或糖尿病的并發(fā)癥的治療藥或預(yù)防藥；以含有上述提取物作為有效成分為特征的胰島素樣作用劑；以含有上述提取物作為有效成分為特征的食品、飲料或飼料；以含有上述提取物作為有效成分為特征的細(xì)胞吸收葡萄糖促進(jìn)劑；以含有上述提取物作為有效成分為特征的誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞的分化的誘導(dǎo)劑；以含有上述提取物作為有效成分為特征的醛糖還原酶抑制劑。
文檔編號(hào)A61P3/08GK1809369SQ200480017300
公開(kāi)日2006年7月26日 申請(qǐng)日期2004年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月20日
發(fā)明者大野木宏, 杉山勝美, 村木信子, 榎龍嗣, 佐川裕章, 加藤郁之進(jìn) 申請(qǐng)人:寶生物工程株式會(huì)社