專利名稱：一種苦碟子凍干粉針劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術領域，具體涉及一種苦碟子凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術：
苦碟子，又名抱莖苦荬菜，為菊科植物抱莖苦荬菜的當年生干燥全草。性味苦、辛、平，具清熱解毒，消腫止痛之功效，其主要成分為黃酮苷類成分和腺嘌呤核苷?，F(xiàn)代研究證明該藥對循環(huán)系統(tǒng)具有增加冠脈血流量、改善心肌循環(huán)等作用，對血液系統(tǒng)能顯著抑制血小板聚集功能，明顯增加纖維蛋白溶解酶的活性。已上市的制劑有苦碟子注射液(WS-10354(ZD-0354)-2002)，苦碟子注射液有活血止痛、清熱祛瘀功效，用于瘀血閉阻的胸痹，證見胸痹、心痛、口苦、舌暗紅或存瘀斑等。適用于冠心病、心絞痛見上述癥狀者。亦可用于腦梗塞者。苦碟子注射液制備工藝中采用水煎煮，石硫醇法除雜質，該方法提取物水溶性雜質多，工藝比較復雜，制備過程中有效成分損失大，因而使藥物有效成分含量低，同時該方法制備的注射液無機鹽含量高，注射時易產(chǎn)生疼痛。注射液對穩(wěn)定性要求高，在攜帶、儲藏、運輸時容易破碎，也帶來許多麻煩。
專利(申請?zhí)?2109532)“一種治療心腦血管和眼底病的的中藥及其制備方法”和專利(申請?zhí)?3133969)“一種苦碟子藥物制劑及其制備方法”分別公開了一種苦碟子粉針劑和制備方法，前者為凍干粉針劑，后者為用噴霧干燥法制成粉針，但這兩個發(fā)明工藝制法都基本沿用了苦碟子注射液(WS-10354(ZD-0354)-2002)的制備方法，無新穎性。
在資料檢索中未發(fā)現(xiàn)其它有關苦碟子凍干粉針劑的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是公開一種活性成分含量高、療效好的苦碟子凍干粉針制劑。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述凍干粉針制劑的制備方法。
本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)。
一、制備方法(1)原料藥的處方為苦碟子。
(2)取苦碟子藥材，粉碎過20-50目篩，加6-8倍量70％乙醇，20KHz頻率超聲提取二次，第一次30min，第二次20min，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，得苦碟子浸膏。
(3)將苦碟子浸膏加入適量蒸餾水使藥液含1g生藥/ml，攪勻，冷藏放置過夜，高速離心，取上清液超濾，超濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，用水洗至流出液無色，再用3-5倍柱體積量60％-80％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，得到苦碟子提取物。
(4)制劑處方為苦碟子提取物5-7重量份，藥用輔料40-50重量份。
(5)取上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入藥用輔料，加注射用水至規(guī)定量，調節(jié)pH值至6.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
在苦碟子凍干粉針劑的制備中，采用超聲法提取藥物有效成分，該工藝與傳統(tǒng)的水煎煮、乙醇回流工藝相比，提取溫度低，提取時間短，由于超聲波能破壞植物藥材的細胞，使溶媒滲透到藥材細胞中，從而加速藥材中有效成分溶解于溶媒中，提高有效成分的提出率?？嗟犹崛∥锢洳睾蟾咚匐x心，上清液用截留分子量10000-30000的超濾膜超濾，可有效除去藥液所含糅質、蛋白質、樹脂、淀粉等大分子雜質，超濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，用水洗脫除去部分雜質后，用乙醇洗脫解吸附，合并洗脫液，得到總黃酮苷類成分。該方法可使純化后的苦碟子提取物中主要有效成分總黃酮的含量大于40％，腺苷含量大于0.07％，提高了藥物有效成分的含量。制成凍干粉后藥物以固體狀態(tài)存在，提高了制劑的穩(wěn)定性。藥理實驗證明本發(fā)明的凍干粉具有更好的藥理作用以上制備工藝中苦碟子藥材粗粉超聲提取的粒度優(yōu)選為30-40目篩，聚酰胺樹脂柱洗脫時，洗脫聚酰胺樹脂柱的乙醇濃度優(yōu)選為70-75％。
二、含量測定分析1、苦碟子制劑中總黃酮的含量測定1.1儀器與試藥日本島津UV-3000A紫外分光光度計?？嗟幼⑸湟?通化華夏藥業(yè)有限責任公司，規(guī)格10ml/支)；本發(fā)明苦碟子干粉針劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室提供)；蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所)；乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉試劑均為分析純，水為三蒸水(自制)。
1.2實驗方法參照苦碟子注射液(WS-10354(ZD-0354)-2002)總黃酮的測定方法進行測定，結果見表1。
表1 制劑中總黃酮(以無水蘆丁計)含量測定含量(mg/支)批號 苦碟子注射液 本發(fā)明苦碟子凍干粉針劑17.2 24.326.9 23.837.5 22.12、苦碟子制劑中腺苷的含量測定參照苦碟子注射液(WS-10354(ZD-0354)-2002)質量標準中腺苷的含量測定方法進行測定，結果見表2。
表2 制劑中腺苷的含量測定含量(mg/支)批號 苦碟子注射液本發(fā)明苦碟子凍干粉針劑1 0.031 0.0452 0.032 0.0433 0.029 0.042
以上含量測定結果說明，本發(fā)明的苦碟子凍干粉針劑中的總黃酮和腺苷含量明顯高于苦碟子注射液(WS-10354(ZD-0354)-2002)的總黃酮和腺苷含量。說明本發(fā)明的制備方法更加合理，更加科學，更具有實用性。
3、提取物中總黃酮和腺苷的含量測定測定儀器、方法同上。提取物1(按苦碟子注射液(WS-10354(ZD-0354)-2002)的提取方法制得)；提取物2(按本發(fā)明苦碟子凍干粉提取物工藝方法制備)；結果見表3和表4。
表3 提取物中總黃酮(以無水蘆丁計)含量測定含量(％)批次提取物1 提取物21 10.2 42.12 11.0 42.53 10.5 41.7表4 提取物中腺苷含量測定含量(％)批次提取物1 提取物21 0.044 0.0752 0.046 0.0723 0.041 0.070以上含量測定結果說明，本發(fā)明的制備方法得到的提取物中有效成分總黃酮和腺苷含量明顯高于苦碟子注射液提取物(按照(WS-10354(ZD-0354)-2002)中的制法所得)中的總黃酮和腺苷含量。說明本發(fā)明的制備方法更加合理科學，更具有實用性。
四、藥理實施例試藥；生理鹽水(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室提供)苦碟子注射液(通化華夏藥業(yè)有限責任公司)
本發(fā)明苦碟子凍干粉針劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室提供)。
1、對冠脈血流量的影響動物健康雜種犬，18只，雌雄兼用，體重12-15kg。
實驗方法將18只犬隨機分為3組，每組6只，生理鹽水組劑量為2ml/kg，給藥組給藥劑量為1.5g/kg，犬用3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉，右側臥位固定于手術臺上，分離股靜脈，插入靜脈插管，經(jīng)靜脈緩慢輸入生理鹽水，以備給藥，分離氣管，插入氣管插管連接呼吸機行正壓人工呼吸，頻率22次/min，在左側第4-5肋間打開胸腔，暴露心臟，分離左冠狀動脈前降支上部，放置電磁流量計探頭(內徑2mm-3mm)，測定每搏冠脈流量，實驗結束取出心臟稱重。手術完畢后，動物穩(wěn)定20min，測定每搏冠脈流量，給藥后30min，再測定每搏冠脈流量，按下列公式計算冠脈血流量和變化率冠脈血流量(ml/min·100g)＝每搏冠脈流量(ml)×心率/心臟重量(g)×100變化率＝(給藥后-給藥前)/給藥前×100％實驗結果見表4。
表4 對犬冠脈流量的影響冠脈血流量(ml/min·100g)分組給藥前 給藥后 變化率(％)生理鹽水51.4±9.851.5±11.3 0.3±4.8苦碟子射液 47.5±10.9*50.9±15.4*7.8±6.5*本發(fā)明苦碟子凍干粉 50.1±9.2*#55.2±9.9*#9.5±7.0*#與生理鹽水組比*p＜0.01與注射液比#P＜0.05實驗結果表明本發(fā)明苦碟子凍干粉針劑和苦碟子注射液均能顯著增加冠脈血流量，但本發(fā)明苦碟子凍干粉針劑的作用明顯比苦碟子注射液強，說明本發(fā)明苦碟子凍干粉針劑的藥理作用強于苦碟子注射液。
2、對血液流變學的影響動物Wistar大鼠，40只，雌雄各半，體重250±5g。
實驗方法取Wistar大鼠，隨機分為4組，每組10只，生理鹽水組和對照組每天腹腔注射生理鹽水10ml/kg，連續(xù)7天，模型組第7天皮下注射0.1％腎上腺素0.8mg/kg，2小時后將大鼠浸入冰水中5分鐘，2小時再注射腎上腺素一次后停食給藥組連續(xù)給藥7天，給藥組給藥劑量為5g/kg，于第7天按上述方法造模斷頭取血用3-9型電腦多功能血粘度儀測定血液流變學，結果見表5。
表5 對大鼠“血瘀證”血液流變學的影響冠脈流量(ml/min.100g)分組全血比粘度(高切)血漿粘度相對粘度紅細胞聚集指數(shù)生理鹽水 3.22±1.2 1.25±0.9 2.85±1.0 18.52±1.9模型組6.12±1.5*2.95±1.3*5.0±1.3*27.2±2.2*苦碟子注射液 4.05±1.4#1.75±1.0#3.78±1.2#21.3±2.0#本發(fā)明苦碟子凍干粉3.75±1.0#△1.42±1.1#△3.09±1.4#△19.0±1.8#△與生理鹽水組比*P＜0.01，與模型組組比#P＜0.01，與苦碟子注射液比△P＜0.05藥理實驗結果表明苦碟子注射液和本發(fā)明苦碟子凍干粉對“血瘀證”大鼠血液流變學都有明顯改善作用，證明苦碟子具有確切的活血化瘀，改善微循環(huán)的功效，其中本發(fā)明苦碟子凍干粉具有比苦碟子注射液更好的藥理作用。
六、制備實施例，實施例1(1)原料藥的處方為苦碟子1000g。
(2)取苦碟子藥材，粉碎過40目篩，加7倍量70％乙醇，20KHz頻率超聲提取二次，第一次30min，第二次20min，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，得苦碟子浸膏。
(3)將苦碟子浸膏加入適量蒸餾水使藥液含1g生藥/ml，攪勻，冷藏放置過夜，高速離心，取上清液超濾，超濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，用水洗至流出液無色，再用4倍柱體積量70％乙醇洗脫，合并70％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，得到苦碟子提取物6.0g。
(4)制劑處方為苦碟子提取物6.0g，甘露醇44g。、(5)取上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇，加注射用水至規(guī)定量，調節(jié)pH值至6.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例2(1)原料藥的處方為苦碟子1000g。
(2)取苦碟子藥材，粉碎過30目篩，加8倍量70％乙醇，20KHz頻率超聲提取二次，第一次30min，第二次20min，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，得苦碟子浸膏。
(3)將苦碟子浸膏加入適量蒸餾水使藥液含1g生藥/ml，攪勻，冷藏放置過夜，高速離心，取上清液超濾，超濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，用水洗至流出液無色，再用5倍柱體積量75％乙醇洗脫，合并75％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，得到苦碟子提取物6.5g。
(4)制劑處方苦碟子提取物6.5g，葡萄糖25g，甘露醇20g。
(5)取上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入葡萄糖、甘露醇，加注射用水至規(guī)定量，調節(jié)pH值至6.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例3(1)原料藥的處方為苦碟子800g。
(2)取苦碟子藥材，粉碎過50目篩，加6倍量70％乙醇，20KHz頻率超聲提取二次，第一次30min，第二次20min，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，得苦碟子浸膏。
(3)將苦碟子浸膏加入適量蒸餾水使藥液含1g生藥/ml，攪勻，冷藏放置過夜，高速離心，取上清液超濾，超濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，用水洗至流出液無色，再用3倍柱體積量60％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，得到苦碟子提取物5.0g。
(4)制劑處方苦碟子提取物5.0g，葡聚糖45g。
(5)取上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入葡聚糖，加注射用水至規(guī)定量，調節(jié)pH值至6.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例4(1)原料藥的處方為苦碟子1200g。
(2)取苦碟子藥材，粉碎過20目篩，加8倍量70％乙醇，20KHz頻率超聲提取二次，第一次30min，第二次20min，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，得苦碟子浸膏。
(3)將苦碟子浸膏加入適量蒸餾水使藥液含1g生藥/ml，攪勻，冷藏放置過夜，高速離心，取上清液超濾，超濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，用水洗至流出液無色，再用5倍柱體積量60％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，得到苦碟子提取物7.0g。
(4)制劑處方苦碟子提取物7.0g，右旋果糖40g，乳糖10g。
(5)取上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入藥用輔料，加注射用水至規(guī)定量，調節(jié)pH值至6.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例5(1)原料藥的處方為苦碟子900g。
(2)取苦碟子藥材，粉碎過30目篩，加6倍量70％乙醇，20KHz頻率超聲提取二次，第一次30min，第二次20min，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，得苦碟子浸膏。
(3)將苦碟子浸膏加入適量蒸餾水使藥液含1g生藥/ml，攪勻，冷藏放置過夜，高速離心，取上清液超濾，超濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，用水洗至流出液無色，再用4倍柱體積量75％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，得到苦碟子提取物5.5g。
(4)制劑處方苦碟子提取物5.5g，甘露醇35g，右旋果糖10g。
(5)取上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入藥用輔料，加注射用水至規(guī)定量，調節(jié)pH值至6.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
實施例6(1)原料藥的處方為苦碟子1100g。
(2)取苦碟子藥材，粉碎過40目篩，加8倍量70％乙醇，20KHz頻率超聲提取二次，第一次30min，第二次20min，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，得苦碟子浸膏。
(3)將苦碟子浸膏加入適量蒸餾水使藥液含1g生藥/ml，攪勻，冷藏放置過夜，高速離心，取上清液超濾，超濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，用水洗至流出液無色，再用3倍柱體積量80％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，得到苦碟子提取物6.4g。
(4)制劑處方為苦碟子提取物6.4g，甘露醇28g，乳糖15g。
(5)取上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入藥用輔料，加注射用水至規(guī)定量，調節(jié)pH值至6.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
權利要求
1.一種苦碟子凍干粉針劑，其特征在于它是由苦碟子提取物5-7重量份和藥用輔料40-50重量份制成，其中苦碟子提取物中總黃酮的含量大于或等于40％。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種苦碟子凍干粉針劑，其中藥用輔料為甘露醇、葡聚糖、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一種或兩種的混合物。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種苦碟子凍干粉針劑，其制備方法包括以下步驟(1)原料藥的處方為苦碟子。(2)取苦碟子藥材，粉碎過20-50目篩，加6-8倍量70％乙醇，20KHz頻率超聲提取二次，第一次30min，第二次20min，提取液過濾，合并，減壓回收乙醇，得苦碟子浸膏。(3)將苦碟子浸膏加入適量蒸餾水使藥液含1g生藥/ml，攪勻，冷藏放置過夜，高速離心，取上清液超濾，超濾液上聚酰胺樹脂柱吸附，用水洗至流出液無色，再用3-5倍柱體積量60％-80％乙醇洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，得到苦碟子提取物。(4)取上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入藥用輔料，加注射用水至規(guī)定量，調節(jié)pH值至6.0-7.0，微孔濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，即得。
4.根據(jù)權利要求3所述的苦碟子凍干粉針劑，其中苦碟子藥材粉碎成30-40目粗粉。
5.根據(jù)權利要求3所述的苦碟子凍干粉針劑，其中苦碟子藥材用20KHz頻率超聲提取二次，第一次30min，第二次20min。
6.根據(jù)權利要求3所述的苦碟子凍干粉針劑，其中洗脫聚酰胺樹脂柱的乙醇濃度為70％-75％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種苦碟子凍干粉針劑及其制備方法。它是由苦碟子提取物和藥用輔料制備而成?？嗟铀幉牟捎贸暦ㄌ崛?，提取液高速離心、超濾后，采用聚酰胺樹脂柱進行分離純化得到苦碟子提取物，其中的主要有效成分總黃酮的含量大于40％。含量測定和藥理實驗結果說明，本發(fā)明制劑含有的有效成分含量更高，藥理作用更強。
文檔編號A61P9/00GK1634395SQ20041008399
公開日2005年7月6日 申請日期2004年10月15日 優(yōu)先權日2004年10月15日
發(fā)明者張平 申請人:張平