專利名稱：油菜蜂花粉有效部位藥物及制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬植物有效部位藥物，主要涉及油菜(Brassica campestris L)蜂花粉(Pollen of Brassin Campestris L)制備的藥物及制備方法。制備的藥物可在治療前列腺腫瘤中應用。
背景技術：
前列腺腫瘤是男性最常見的癌癥之一，美國1997年癌癥統(tǒng)計顯示，在男性腫瘤中，前列腺腫瘤居發(fā)病率之首，占41％，居癌癥死亡的第二位，占14％，50歲以上男性尸解前列腺腫瘤發(fā)生率高達30％。到目前為止，我國前列腺腫瘤發(fā)病率雖遠低于歐美發(fā)達國家，但其發(fā)病率顯著上升。隨著我國人口的老年化和前列腺腫瘤普查的開展，將會出現(xiàn)越來越多的前列腺腫瘤患者，前列腺腫瘤已成為越來越影響公眾健康的問題前列腺腫瘤的傳統(tǒng)療法包括手術、激光治療、放化療和冷凍治療等，以上療法均有較好療效，但仍會有大約1/3的病人會復發(fā)且副作用較大。目前臨床上多采用傳統(tǒng)療法加藥物治療的聯(lián)合治療，但臨床上可供選擇的治療前列腺腫瘤的藥物較少。
在我國的中草藥寶庫中，有很多治療前列腺腫瘤的藥材和藥方，其中有不少藥物經(jīng)臨床驗證具有較好的療效。采用現(xiàn)代化的生物和化學方法，從這些中藥材中提取并篩選出活性成分或活性部位，有望獲得安全高效的抗前列腺腫瘤的新藥，這將產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟效益。油菜是十字花科蕓苔屬植物，以菜籽榨油為種植目的一年生或越年生草本植物，油菜蜂花粉是其另一主要的經(jīng)濟產(chǎn)物。油菜蜂花粉的成分很復雜，含有蛋白質、氨基酸、糖類、維生素、激素、礦物質、脂肪酸、酶、微量元素等多種營養(yǎng)物質，除作為營養(yǎng)補劑外，還具抑制前列腺增生、調節(jié)免疫、改善糖代謝等藥理活性，現(xiàn)經(jīng)研究試驗發(fā)現(xiàn)，花粉提取物具有抗腫瘤作用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供含油菜蜂花粉有效部位的藥物，其制劑組成是油菜蜂花粉有效部位和藥用輔料。
本發(fā)明的另一個目的是提供油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，通過以下步驟實現(xiàn)1、以油菜蜂花粉為原料，40～60℃干燥，再機械粉碎或超微破壁粉碎，用有機溶劑在25～40℃浸泡提取數(shù)次，有機溶劑選自乙醇、丙酮、氯仿、甲醇、石油醚中任一種；2、將上述提取液濃縮，加30～50％乙醇溶解，用有機溶劑萃取，有機溶劑選自石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇中任一種；3、上述萃取物用硅膠拌樣，過硅膠柱或使用中壓分離制備儀經(jīng)過高效反相硅膠柱，用混合溶劑梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集具有明顯抑制作用的餾分、合并，即為具治療前列腺腫瘤作用的油菜蜂花粉有效部位，有效部位在油菜蜂花粉生藥中的質量分數(shù)得率為0.2～2.0％；硅膠選自50～100目、100～200目、200～300目中任一種。
其中過硅膠柱梯度洗脫用混合溶劑選自比例為10∶0～0∶10的石油醚∶乙酸乙酯或10∶0～0∶10的石油醚∶丙酮或10∶0∶0～1∶1∶8的石油醚∶氯仿∶丙酮中任一種。收集比例為10∶0.5～10∶3的石油醚∶乙酸乙酯或10∶0.4～10∶1.5的石油醚∶丙酮或10∶10∶0.1～10∶9∶1的石油醚∶氯仿∶丙酮的洗脫餾分并合并。
高效反相硅膠柱梯度洗脫用混合溶劑選自甲醇∶水或異丙醇∶甲醇∶水或氯仿∶甲醇∶水中的任一種。收集98∶2的甲醇∶水或20∶75∶5的異丙醇∶甲醇∶水或10∶86∶4的氯仿∶甲醇∶水的洗脫餾分并合并。
TLC薄層層析條件選擇硅膠G板的薄層層析板；展開劑選自8∶2的石油醚∶丙酮或4∶6的石油醚∶氯仿或5∶3∶2的石油醚∶氯仿∶丙酮或6∶4的氯仿∶乙酸乙酯；碘蒸氣或醋酐∶硫酸或10％硫酸乙醇或三氯化銻的顯色劑。
本發(fā)明的又一個目的是油菜蜂花粉有效部位在制備治療前列腺腫瘤藥物中的應用。
本發(fā)明提供的油菜蜂花粉有效部位加入藥用輔料，制成的制劑劑型可選自軟膠囊、膠囊、口服液、注射液、微乳劑。
本發(fā)明以油菜蜂花粉為原料，油菜(Brassica campestris L)是以菜籽榨油為目的一年生成越年生草本植物，在世界范圍內廣泛種植，我國是油菜種植大國，種植面積、年產(chǎn)量及消費量均居世界第一，以油菜花科作為原料，資源豐富易得，年產(chǎn)量700萬噸以上。本發(fā)明以乙醇等有機溶劑為提取溶媒，污染小，成本低，操作方便。提取物經(jīng)有機溶劑萃取分離、硅膠柱純化精制，通過體外細胞模型篩選，去除花粉中沒有抗腫瘤活性的成分，保留了具抗前列腺腫瘤的活性成分。
本發(fā)明的有益效果集中有(1)擴大了油菜蜂花粉有效部位藥物在治療前列腺腫瘤的用途。(2)在油菜蜂花粉中提供一個具治療前列腺腫瘤作用的活性部位。(3)本發(fā)明方法設計先進、合理、穩(wěn)定，操作方便，生物利用度高，同時工藝生產(chǎn)成本低，具較強的實用性和社會性。
具體實施例方式
本發(fā)明結合實施例作進一步說明。
實施例1取油菜蜂花粉1000g，干燥，機械粉碎，用95％乙醇35℃浸泡提取五次。每次24小時，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加40-58％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅膠拌樣，經(jīng)過50～100目硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脫的餾分，合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位5g。
有效部位加入一定量的稀釋劑，制成軟膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例2取油菜花粉1500g，干燥，機械粉碎，用95％乙醇40℃浸泡提取三次。每次24小時，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅膠拌樣，經(jīng)過100～200目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的餾分，經(jīng)體外PC-3抑制試驗，具明顯抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位11g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作的藥物制劑。
實施例3
取油菜蜂花粉1500g，干燥，機械粉碎，用95％乙醇25℃浸泡提取三次。每次24小時，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200-300目硅膠拌樣，經(jīng)過200-300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分，經(jīng)PC-3體外抑制試驗，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位15g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有藥物制劑。
實施例4取油菜蜂花粉2000g，干燥，機械粉碎，用丙酮25℃浸泡提取三次。每次24小時，加丙酮量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇700ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，各餾分經(jīng)體外PC-3細胞試驗，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分具有明顯的抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位14g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例5取油菜花粉2000g，干燥，機械粉碎，用28℃丙酮浸泡提取三次。每次24小時，加丙酮量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇600ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的、并具明顯抑制PC-3作用的餾分，合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位39g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有效藥物。
實施例6
取油菜蜂花粉1000g，干燥，機械粉碎，用無水乙醇35℃浸泡提取五次。每次24小時，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅膠拌樣，經(jīng)過50～100目硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脫的餾分，合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位6g。
有效部位加入一定量的稀釋劑，制成軟膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例7取油菜花粉1500g，干燥，機械粉碎，用無水乙醇40℃浸泡提取三次。每次24小時，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅膠拌樣，經(jīng)過100～200目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的餾分，經(jīng)體外PC-3抑制試驗，具明顯抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位10g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作的藥物制劑。
實施例8取油菜蜂花粉1500g，干燥，機械粉碎，用無水乙醇25℃浸泡提取三次。每次24小時，加乙醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0-1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分，經(jīng)PC-3體外抑制試驗，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位19g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有藥物制劑。
實施例9
取油菜蜂花粉2000g，干燥，機械粉碎，用無水乙醇20℃浸泡提取三次。每次24小時，加丙酮量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇700ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，各餾分經(jīng)體外PC-3細胞試驗，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分具有明顯的抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位10g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成微乳，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例10取油菜花粉2000g，干燥，機械粉碎，用26℃無水乙醇浸泡提取三次。每次24小時，加丙酮量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的、并具明顯抑制PC-3作用的餾分，合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位41g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成微乳，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有效藥物。
實施例11取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，機械粉碎，用甲醇5℃浸泡提取五次。每次24小時，加甲醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅膠拌樣，經(jīng)過50～100目硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脫的餾分，合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位3g。
有效部位加入一定量的稀釋劑，制成軟膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例12
取油菜花粉1500g，50℃干燥，機械粉碎，用甲醇40℃浸泡提取三次。每次24小時，加甲醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅膠拌樣，經(jīng)過100～200目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的餾分，經(jīng)體外PC-3抑制試驗，具明顯抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位24g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作的藥物制劑。
實施例13取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，機械粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小時，加甲醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分，經(jīng)PC-3體外抑制試驗，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位36g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有藥物制劑。
實施例14取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，機械粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小時，加甲醇量為每次3500ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇700ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，各餾分經(jīng)體外PC-3細胞試驗，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分具有明顯的抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位31g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例15取油菜花粉2000g，40℃干燥，機械粉碎，用甲醇35℃浸泡提取三次。每次26小時，加甲醇量為每次3500ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的、并具明顯抑制PC-3作用的餾分，合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位36g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有效藥物。
實施例16取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇5℃浸泡提取五次。每次24小時，加甲醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅膠拌樣，經(jīng)過50～100目硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脫的餾分，合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位17g。
有效部位加入一定量的稀釋劑，制成軟膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例17取油菜花粉1500g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇40℃浸泡提取三次。每次24小時，加甲醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅膠拌樣，經(jīng)過100～200目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的餾分，經(jīng)體外PC-3抑制試驗，具明顯抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位32g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作的藥物制劑。
實施例18取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小時，加甲醇量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50-60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分，經(jīng)PC-3體外抑制試驗，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位46g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有藥物制劑。
實施例19取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇25℃浸泡提取三次。每次24小時，加甲醇量為每次3500ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇700ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，各餾分經(jīng)體外PC-3細胞試驗，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分具有明顯的抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位51g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例20取油菜花粉2000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用甲醇35℃浸泡提取三次。每次26小時，加甲醇量為每次3500ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的、并具明顯抑制PC-3作用的餾分，合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位76g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有效藥物。
實施例21取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚5℃浸泡提取五次。每次24小時，加石油醚量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～55％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅膠拌樣，經(jīng)過50～100目硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脫的餾分，合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位11g。
有效部位加入一定量的稀釋劑，制成軟膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例22取油菜花粉1500g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚10℃浸泡提取三次。每次24小時，加石油醚量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅膠拌樣，經(jīng)過100～200目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的餾分，經(jīng)體外PC-3抑制試驗，具明顯抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位32g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作的藥物制劑。
實施例23取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚15℃浸泡提取三次。每次24小時，加石油醚量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加石油醚萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚∶氯仿∶丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分，經(jīng)PC-3體外抑制試驗，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位46g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有藥物制劑。
實施例24取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚20℃浸泡提取三次。每次24小時，加石油醚量為每次3500ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇700ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，各餾分經(jīng)體外PC-3細胞試驗，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分具有明顯的抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位39g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例25取油菜花粉2000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚35℃浸泡提取三次。每次26小時，加石油醚量為每次3500ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加50～60％乙醇600ml，混勻后加氯仿萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的、并具明顯抑制PC-3作用的餾分，合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位67g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服微乳，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有效藥物。
實施例26取油菜蜂花粉1000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚5℃浸泡提取五次。每次24小時，加石油醚量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加15％乙醇600ml，混勻后加乙酸乙酯萃取四次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用50～100目硅膠拌樣，經(jīng)過50～100目硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，主要收集其中石油醚-乙酸乙酯10∶0.5～10∶3洗脫的餾分，合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位35g。
有效部位加入一定量的稀釋劑，制成軟膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例27取油菜花粉1500g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚10℃浸泡提取三次。每次24小時，加石油醚量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加20％乙醇600ml，混勻后加乙酸乙酯萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用100～200目硅膠拌樣，經(jīng)過100～200目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的餾分，經(jīng)體外PC-3抑制試驗，具明顯抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位39g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成膠囊，規(guī)格，每粒含有效部位50至250mg，即得具有治療前列腺腫瘤作的藥物制劑。
實施例28取油菜蜂花粉1500g，55℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚15℃浸泡提取三次。每次24小時，加石油醚量為每次3000ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加16％乙醇600ml，混勻后加乙酸乙酯萃取三次，每次2500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，收集其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分，經(jīng)PC-3體外抑制試驗，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具治療前列腺腫瘤作用的有效部位42g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有藥物制劑。
實施例29取油菜蜂花粉2000g，50℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚20℃浸泡提取三次。每次24小時，加石油醚量為每次3500ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加18％乙醇700ml，混勻后加乙酸乙酯萃取三次，每次2000ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-氯仿-丙酮10∶0∶0～1∶1∶8梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，各餾分經(jīng)體外PC-3細胞試驗，其中石油醚-氯仿-丙酮10∶10∶0.1～10∶9∶1洗脫收集的餾分具有明顯的抑制作用，有明顯抑制作用的餾分合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位41g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服液，即得具有治療前列腺腫瘤作用的藥物制劑。
實施例30取油菜花粉2000g，40℃干燥，超微破壁粉碎，用石油醚35℃浸泡提取三次。每次26小時，加石油醚量為每次3500ml，合并提取液，提取液濃縮至約300ml，加15％乙醇600ml，混勻后加乙酸乙酯萃取三次，每次1500ml，合并，萃取液回收至干，萃取物用200～300目硅膠拌樣，經(jīng)過200～300目硅膠柱，石油醚-丙酮10∶0～0∶10梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集餾分，收集其中石油醚-丙酮10∶0.4～10∶1.5洗脫的、并具明顯抑制PC-3作用的餾分，合并、濃縮至干，得具有治療前列腺腫瘤作用的有效部位47g。
有效部位加入一定稀釋劑，制成口服微乳，即得具有治療前列腺腫瘤作用的有效藥物。
實施例31本發(fā)明油菜花粉抗前列腺癌有效部位藥的藥理學試驗1、油菜花粉抗前列腺癌有效部位用二甲亞砜(DMSO)溶解，設不同梯度濃度，以阿霉素作陽性對照，DMSO作陰性對照，分別加入前列腺癌細胞株PC-3中培養(yǎng)96小時，用MTT法測細胞活性，測得花粉有效部位對人前列腺癌細胞株PC-3體外抑制作用半數(shù)死亡濃度(IC50)為16.21ug/ml，最強達到3.7ug/ml。
2、花粉有效部位對人前列腺癌細胞PC-3裸鼠移植瘤生產(chǎn)影響的藥效學研究表明，腹腔給藥12日后，測量腫瘤體積表明，三個樣品組裸鼠移植瘤生長較陰性對照組和環(huán)磷酰胺(CTX)組緩慢，且具備量效關系。
有效部位對裸鼠移植瘤生產(chǎn)的抑制作用試驗(第12天)

注1.TV為腫瘤體積(mm3)2.RTV為第12天與0天腫瘤體積之比3.T/C為給藥組與陰性對照藥RTV之比實施例32經(jīng)特征顯色反應及薄層層析檢查，本發(fā)明油菜蜂花粉抗前腺腫瘤活性有效部位含植物脂肪酸、大量甾醇類等物質，高效液相色譜法測定本發(fā)明中抗前列腺腫瘤有效部位中活性成分甾醇類物質的含量儀器Waters高效液相儀色 譜 柱C18柱4.6mm×250mm流 動 相乙腈-水(97∶3)檢測波長210nm流速1ml/min結果測得甾醇類的含量為20-90％。
無需進一步詳細闡述，相信采用前面所公開的內容，本領域技術人員可最大限度地應用本發(fā)明。因此，前面的實施方案應理解為僅是舉例說明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
權利要求
1.油菜蜂花粉有效部位的藥物組合物，其特征是制備它的有效組分原料含有油菜蜂花粉有效部位和藥用輔料。
2.油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，通過以下步驟實現(xiàn)(1)以油菜蜂花粉為原料，40～60℃干燥，再機械粉碎或超微破壁粉碎，用有機溶劑在25～40℃浸泡提??；(2)將步驟(1)的提取液濃縮，加30～50％乙醇溶解，用有機溶劑萃取，有機溶劑選自石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇中任一種；(3)將步驟(2)的萃取物用硅膠拌樣，過硅膠柱或高效反相硅膠柱，用混合溶劑梯度洗脫，洗脫下的餾分用TLC薄層層析檢測，根據(jù)TLC檢測結果收集具有明顯抑制作用的餾分并合并，即為油菜蜂花粉有效部位，有效部位在油菜蜂花粉生藥中的質量分數(shù)得率為0.2～2.0％。
3.根據(jù)權利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是步驟(1)中有機溶劑選自乙醇、丙酮、氯仿、甲醇、石油醚中任一種。
4.根據(jù)權利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是步驟(2)中硅膠選自50～100目、100～200目、200～300目中任一種。
5.根據(jù)權利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是步驟(3)中過硅膠柱梯度洗脫用混合溶劑選自比例為10∶0～0∶10的石油醚∶乙酸乙酯或10∶0～0∶10的石油醚∶丙酮或10∶0∶0～1∶1∶8的石油醚∶氯仿∶丙酮中任一種。
6.根據(jù)權利要求5所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是收集比例為10∶0.5～10∶3的石油醚∶乙酸乙酯的洗脫餾分并合并。
7.根據(jù)權利要求5所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是收集比例為10∶0.4～10∶1.5的石油醚∶丙酮的洗脫餾分并合并。
8.根據(jù)權利要求5所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是收集比例為10∶10∶0.1～10∶9∶1的石油醚∶氯仿∶丙酮的洗脫餾分并合并。
19.根據(jù)權利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是步驟(3)中高效反相硅膠柱梯度洗脫用混合溶劑選自甲醇∶水或異丙醇∶甲醇∶水或氯仿∶甲醇∶水中的任一種。
10.根據(jù)權利要求9所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是收集洗脫用混合溶劑比例為98∶2的甲醇∶水的洗脫餾分并合并。
11.根據(jù)權利要求9所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是收集洗脫用混合溶劑比例為20∶75∶5的異丙醇∶甲醇∶水的洗脫餾分并合并。
12.根據(jù)權利要求19所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是收集洗脫用混合溶劑比例為10∶86∶4的氯仿∶甲醇∶水的洗脫餾分并合并。
13.根據(jù)權利要求2所述的油菜蜂花粉有效部位藥物的制備方法，其特征是步驟(3)中TLC薄層層析條件選用硅膠G板的薄層層析板，展開劑選自8∶2的石油醚∶丙酮或4∶6的石油醚∶氯仿或5∶3∶2的石油醚∶氯仿∶丙酮或6∶4的氯仿∶乙酸乙酯中任一種，顯色劑選自碘蒸氣或醋酐∶硫酸或10％硫酸乙醇或三氯化銻中的任一種。
14.根據(jù)權利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位在制備治療前列腺腫瘤藥物中的應用。
15.根據(jù)權利要求1所述的油菜蜂花粉有效部位的藥物，制劑劑型可選自軟膠囊、膠囊、口服液、注射液、微乳劑中的任一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由油菜蜂花粉中得到的有效部位制成的藥物及制備方法和用途。該藥物具有治療前列腺腫瘤作用，以油菜蜂花粉為原料，經(jīng)有機溶劑提取、萃取制備花粉提取物，然后花粉提取物進一步通過硅膠柱層析純化精制，得到具有抗前列腺腫瘤作用的有效部位，該有效部位制成的藥物制劑，用于治療前列腺腫瘤。本發(fā)明的抗前列腺腫瘤有效部位富含治療前列腺腫瘤及相應癥狀的活性成分，工藝先進、穩(wěn)定、生產(chǎn)成本低，具有極強的生產(chǎn)性和實用性。
文檔編號A61K9/10GK1660225SQ20041007351
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月22日 優(yōu)先權日2004年12月22日
發(fā)明者張馮敏, 吳健, 阮碧芳, 邱紅英, 姚建標 申請人:浙江康恩貝制藥股份有限公司, 浙江康恩貝藥品研究開發(fā)有限公司