專利名稱：黃芪多糖在制備降血脂的藥物和保健品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及黃芪多糖的應(yīng)用。更確切地說，本發(fā)明涉及黃芪多糖在制備降血脂藥物和保健品中的應(yīng)用，還涉及黃芪多糖在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物和保健品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
醫(yī)學(xué)研究表明，脂類代謝與心血管疾病密切相關(guān)，高脂血癥是引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的主要原因之一，特別是血清總膽固醇水平增高是致動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)指標(biāo)。血脂是血清中各類脂質(zhì)的總稱，血脂主要包括膽固醇、甘油三酯和磷脂等，此外還有少量游離脂肪酸和極少量的其它脂質(zhì)，包括脂溶性維生素和類固醇激素等。膽固醇的三分之二以膽固醇酯的形式存在，其余三分之一為游離膽固醇。
膽固醇既是細(xì)胞膜及血漿脂蛋白的重要成分，在維持膜的流動(dòng)性和正常中起重要作用，又是合成膽汁酸、類固醇激素(腎上腺素皮質(zhì)激素、雄激素及雌激素)及維生素D2等重要生物活性的原料。膽固醇代謝障礙可引起血漿膽固醇升高，這是形成動(dòng)脈粥樣硬化的一種危險(xiǎn)因素，可引起腦血管、冠狀動(dòng)脈和周圍血管病變。所以，膽固醇代謝紊亂與這些疾病的關(guān)系是當(dāng)前醫(yī)學(xué)界較矚目的主要問題之一。且我們的受試藥黃芪多糖顯著降低膽固醇，可防治動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管、冠狀動(dòng)脈和周圍血管病變。用酶比色法(CHOD-PAP)測(cè)定總膽固醇(Total Cholesterol，TC)。原理是反應(yīng)溫度為37℃，先用膽固醇脂水解酶(CEH)將血清中的膽固醇脂(CE)水解為游離膽固醇(FC)和脂肪酸；再用膽固醇氧化酶(COD)將血清中的所有FC氧化成Ch-4-烯-3-酮，并產(chǎn)生H2O2；后者與4-氨基安替比林(4-AAP)及4-氯酚在過氧化物酶(POD)作用下反應(yīng)(Trinder反應(yīng))生成紅色的醌亞胺，在500nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定。
脂肪由1分子甘油和3分子脂肪酸組成，故又稱三酯酰甘油(Triacylglycerol，TG)或甘油三酯。后一名在化學(xué)上不夠明確，故國(guó)際命名委員會(huì)建議不再使用這一名稱，但習(xí)慣稱之。TG的升高使高密度脂蛋白種類減少或成分改變，產(chǎn)生富含TG的高密度脂蛋白，而后者的降低與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)，且我們的受試藥黃芪多糖顯著降低甘油三酯。用酶比色法(GPO-PAP)測(cè)定甘油三酯(Triglycerides，TG)。反應(yīng)溫度為37℃，先用脂蛋白脂酶(LPL)將血清中的甘油三酯水解為甘油和脂肪酸，在甘油激酶(GK)的作用下，甘油和ATP反應(yīng)生成甘油-3-磷酸和ADP，在甘油磷酸氧化酶(GPO)的作用下，甘油-3-磷酸被氧氣氧化成磷酸二羥丙酮和H2O2，在過氧化物酶(POD)作用下，H2O2與4-氨基安替比林(4-AAP)及4-氯酚反應(yīng)(Trinder反應(yīng))生成紅色的醌亞胺，在500nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定。
高密度脂蛋白(HDL)能夠活化卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)，是將肝外組織膽固醇運(yùn)送到肝臟的主要運(yùn)載工具，故其與血漿脂蛋白的清除、血漿膽固醇和膽固醇酯有關(guān)?？梢哉fHDL是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白，冠心病的保護(hù)因子。其對(duì)冠心病的保護(hù)作用與HDL在脂蛋白代謝中的特殊作用是分不開的。它可能通過以下機(jī)制而起保護(hù)作用①含APOE的HDL亞類能識(shí)別LDL的B1E受體；而且與LDL競(jìng)爭(zhēng)受體，減少LDL的攝入和降解；②HDL能夠?qū)⑼庵芙M織的膽固醇轉(zhuǎn)移至肝臟進(jìn)行代謝，在這種膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)中，HDL是膽固醇的載體，LCAT在此過程中起重要作用。HDL的這種作用可防止膽固醇在細(xì)胞沉積；③提供APOC，促進(jìn)CM、VLDL的代謝，使血漿膽固醇下降。④HDL-C與前列腺素(PGI2)合成正相關(guān)，PGI2水平升高，可以加強(qiáng)抑制血小板聚集，血管擴(kuò)張不易發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化。且我們的受試藥黃芪多糖顯著升高高密度脂蛋白，充分活化卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶，是將肝外組織膽固醇運(yùn)送到肝臟的主要運(yùn)載工具，可清除血漿脂蛋白、血漿膽固醇和膽固醇酯。用磷鎢酸-鎂沉淀法測(cè)定高密度脂蛋白膽固醇(High Density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C)，血清中的低密度脂蛋白(LDL)及極低密度脂蛋白(VLDL)經(jīng)磷鎢酸-鎂沉淀后，上清液為高密度脂蛋白(HDL)，其膽固醇含量用酶法測(cè)定。
目前，隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人們的飲食結(jié)構(gòu)已發(fā)生很大變化，動(dòng)物脂肪等高熱量食物攝取率增高，再加上生活節(jié)奏加快所致的社會(huì)心理因素的變化，而使高脂血癥人群增多，與此相應(yīng)，心腦血管疾病的發(fā)病率升高。雖然各類降脂藥物已應(yīng)運(yùn)而生，如他汀類降脂藥(主要降膽固醇，輕度降甘油三酯)包括洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀和氟伐他?。荒懰嵛絼?只降低膽固醇，輕微升高甘油三酯)包括考來希胺和考來替哌；貝丁酸類降脂藥(主要降低甘油三酯)包括非諾貝特、苯扎貝特和吉菲羅齊；煙酸類降脂藥(對(duì)降低甘油三酯及膽固醇均有效)包括煙酸和阿西莫司。這些藥物雖然具有降脂作用，但也有不少副作用，醫(yī)學(xué)界正在努力開發(fā)副作用小的降脂藥物。據(jù)報(bào)道，從天然植物中提取的多糖，如海帶多糖、南瓜多糖、滸苔多糖、石莼多糖和枸杞多糖具有降血脂作用，但尚未見黃芪多糖具有降血脂作用的相關(guān)報(bào)道。本發(fā)明人從事黃芪資源的綜合開發(fā)利用研究，長(zhǎng)期研究和大量試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪多糖具有降血脂功效，有顯著降低膽固醇和甘油三酯、升高高密度脂蛋白的作用，在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的之一是提供黃芪多糖在制備降血脂的藥物和保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明目的之二是提供黃芪多糖在制備降低膽固醇、降低甘油三酯和升高高密度脂蛋白的藥物和保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明目的之三是提供黃芪多糖在制備降低膽固醇的藥物和保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明目的之四是提供黃芪多糖在制備降低甘油三酯的藥物和保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明目的之五是提供黃芪多糖在制備升高高密度脂蛋白的藥物和保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明目的之六是提供黃芪多糖在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物和保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明目的之七是提供黃芪多糖在制備預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物和保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明目的之八是提供黃芪多糖在制備預(yù)防和治療冠狀動(dòng)脈病變的藥物和保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明目的之九是提供黃芪多糖在制備預(yù)防和治療周圍血管病變的藥物和保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明目的之十是提供黃芪多糖在制備預(yù)防和治療高脂血癥的藥物和保健品中的應(yīng)用。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。春、秋二季采挖，除去須根與根頭，曬干。本品呈圓柱形，有的有分枝，上端較粗，長(zhǎng)30～90cm，直徑1～3.5cm。表面淡棕黃色或淡棕褐色，有不整齊的縱皺紋或縱溝。質(zhì)硬而韌，不易折斷，斷面纖維性強(qiáng)，并顯粉色，皮部黃白色，木部淡黃色有放射狀紋理及裂隙。氣微，味微甜，嚼之微有豆腥味。黃芪有補(bǔ)氣固表、利尿托毒等功能。將天然生長(zhǎng)的黃芪根洗凈，切成薄片，晾干，粉碎，用蒸餾水水煮提取、醇沉、分離，即得黃芪多糖。下面對(duì)本發(fā)明所述的黃芪多糖的提取方法，其純度、分子量、成分、結(jié)構(gòu)鑒定方法作簡(jiǎn)要說明。
1.黃芪多糖的制備方法將內(nèi)蒙古自治區(qū)天然生長(zhǎng)的黃芪根洗凈，切成薄片，晾干，粉碎成末。將750g黃芪粉末倒入到5000mL三頸瓶中，加入3000ml蒸餾水，置入5000mL可調(diào)控溫電熱套，用JHS-1電子恒溫?cái)嚢铏C(jī)電動(dòng)攪拌，70℃下回流2-3小時(shí)。冷卻到室溫，過濾。將濾餅用蒸餾水按照上述方法再提取2次。合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮提取液，直至濃粘液，將其逐漸滴入到大量的無水乙醇(比例1∶5-10)中沉淀，過夜。棄去上清液，將沉淀離心，再將沉淀溶解于蒸餾水中，濃縮該溶液，至極濃，將其滴入大量乙醇(比例1∶5-10)中沉淀，過夜。將得到的黃芪多糖沉淀，溶于蒸餾水，蒸出殘余乙醇，用液氮或冷凍箱將其冷凍后，用冷凍干燥機(jī)凍結(jié)干燥，得到黃芪多糖60g，產(chǎn)率8.0％。用同樣的方法提取1400g黃芪粉末，共得到黃芪粗糖170g，產(chǎn)率12.14％。黃芪多糖產(chǎn)率在8-12％?？偺橇?5-95％。
2.黃芪多糖的純度及分子量關(guān)于黃芪多糖純度說明我們這里所講的黃芪多糖，是乙醇溶劑中可沉淀的大分子天然多糖，其分子量一般不小于2000。在乙醇溶劑中不沉淀的有機(jī)化合物，屬小分子雜質(zhì)。我們提取的黃芪多糖的純度是乙醇中不溶大分子(多糖)。產(chǎn)品中黃芪多糖的含量的測(cè)定方法，是用無水乙醇浸泡黃芪多糖產(chǎn)品30分鐘，然后濾出多糖，蒸干乙醇濾液、干燥、稱重?？傻玫揭掖伎扇芪锏闹亓?。黃芪多糖純度計(jì)算式如下
黃芪多糖純度平均96％以上，純度范圍在95％-99％。
關(guān)于分子量說明黃芪多糖是一種天然多糖，屬于高分子物質(zhì)。高分子物質(zhì)是由結(jié)構(gòu)一致或相近，分子量不同的大量高分子化合物組成的。因此，高分子物質(zhì)不同于小分子，高分子沒有準(zhǔn)確的分子量，只有平均分子量(Mn)。平均分子量可用凝膠色譜儀(GPC)測(cè)定。我們提取的黃芪多糖的數(shù)均分子量范圍是2-10萬。分子量最小的黃芪多糖也是在乙醇中沉淀下來的多糖。小分子糖和小分子有機(jī)化合物，在乙醇中不會(huì)沉淀。
經(jīng)元素分析，黃芪多糖含有C40-42(平均41.14)；H6.3-7.3(平均6.77)；N2.0-3.0(平均2.38)。
3.黃芪多糖的結(jié)構(gòu)鑒定黃芪多糖作為分子量范圍較寬的天然高分子多糖，其分子結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，目前在國(guó)內(nèi)外還不十分清楚。但是對(duì)黃芪多糖的水溶性部分，人們作了很多研究，我們也作了較系統(tǒng)的研究工作。
黃芪多糖的主要組成及其結(jié)構(gòu)是1，4-D-α-葡聚糖。該成分占總黃芪多糖的90％以上。黃芪多糖的結(jié)構(gòu)，用簡(jiǎn)單的物化方法難于確定。如紅外光譜、紫外光譜、氣相色譜、薄層分析等手段都不能確定黃芪多糖的結(jié)構(gòu)，也難以用于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的確定。目前最好方法是用碳13核磁共振圖譜(13C-NMR)?？?3C-NMR圖譜上，黃芪多糖的碳1特征峰在98-100ppm之間。黃芪多糖的6個(gè)C的強(qiáng)峰與1，6-D-α-葡聚糖13C-NMR圖譜基本吻合。黃芪多糖和葡聚糖的6個(gè)C的強(qiáng)峰的化學(xué)位(PPm)如下C198.93 C270.67 C372.67 C475.89 C571.03 C659.73。


圖1為黃芪多糖的13C-NMR圖譜。
具體實(shí)施例方式
下面通過試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明黃芪多糖在制備降血脂藥物和保健品中的應(yīng)用，以及黃芪多糖在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物和保健品中的應(yīng)用的有益效果。
試驗(yàn)例一.黃芪多糖安全性(毒性)試驗(yàn)據(jù)中藥新藥研究指導(dǎo)原則，對(duì)黃芪多糖進(jìn)行了小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)觀察，動(dòng)物預(yù)試結(jié)果表明，由于黃芪多糖沒有明顯的毒性，無法測(cè)出LD50，因此對(duì)受試藥物進(jìn)行最大給藥量的測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察小白鼠灌胃黃芪多糖后所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況。
試驗(yàn)材料(1)被試藥黃芪多糖，由本實(shí)驗(yàn)室(內(nèi)蒙古大學(xué)高分子化學(xué)及蒙藥研究所)提供。試驗(yàn)時(shí)稱取適量黃芪多糖凍干粉用蒸餾水配成可灌胃的最大濃度的水溶液0.108g/ml，備用。(2)動(dòng)物昆明品種小白鼠，32只，雌雄各半，體重21±1.2g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，實(shí)驗(yàn)室溫度20～23℃，相對(duì)濕度70％。
預(yù)試急性毒性試驗(yàn)取小鼠12只，雌雄各半，禁食12h，不禁水，觀察黃芪多糖一次性最大濃度0.1075g/ml，最大容積量0.8ml/20g體重給小鼠灌胃后所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)、體重變化及死亡情況，每天觀察一次，連續(xù)觀察7天，結(jié)果列入表1、表2，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明體重增長(zhǎng)正常。各器官、系統(tǒng)生理反應(yīng)正常，無毒性表現(xiàn)。觀察期間無1例死亡，存活率為100％，按規(guī)則應(yīng)繼續(xù)增大給藥量至找出100％估計(jì)致死量，但受到最高灌胃容積量的限制，無法繼續(xù)增加給藥量，也無法準(zhǔn)確計(jì)算出半數(shù)致死量LD50。說明黃芪多糖為安全、無毒，適用于臨床。
最大給藥量測(cè)定中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部新藥審批辦法對(duì)新藥毒理研究的技術(shù)要求補(bǔ)充說明指出“中藥制劑急毒性試驗(yàn)，如因藥物濃或給藥體積過大，無法測(cè)定LD50時(shí)可給予動(dòng)物能夠接受的最大濃度下的最大體積進(jìn)行急性毒性測(cè)定，并可在24小時(shí)內(nèi)口服多次(二至四次)，以觀察短期內(nèi)(七日內(nèi))所產(chǎn)生的不良反應(yīng)。
取小鼠20只，隨機(jī)分為對(duì)照組、給藥組，每組10只，雌雄各半。動(dòng)物禁食12小時(shí)，以藥物對(duì)小鼠可灌胃最大濃度0.108g/ml，最大容積量0.8ml/20g體重的藥量24h內(nèi)灌胃3次，總給藥量13g/kg體重，相當(dāng)于推薦用藥量的216倍(推薦用藥量60mg/kg·日)。對(duì)照組灌胃等容量蒸餾水。給小鼠灌胃后，對(duì)可能產(chǎn)生的毒性反應(yīng)、體重變化及死亡情況，每天觀察一次，連續(xù)觀察7天。結(jié)果列入表3、表4，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明觀察期間，體重增長(zhǎng)正常、各器官系統(tǒng)的生理反應(yīng)正常、無毒性表現(xiàn)，無一例死亡。黃芪多糖小鼠灌胃最大給藥量為0.108g/20g，1日3次，總給藥量按體重13g/kg相當(dāng)于推薦用量60mg(黃芪多糖)/kg體重的216倍。表明小鼠實(shí)驗(yàn)中，黃芪多糖沒有毒性，臨床應(yīng)用安全可靠(＞200倍)。以上兩個(gè)試驗(yàn)充分證實(shí)黃芪多糖為安全、無毒。所以，可放心利用黃芪多糖開發(fā)食品、保健品、藥品等。
表1 黃芪多糖對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)體重變化表 單位g時(shí)間 體重(均值±標(biāo)準(zhǔn)差) 死亡情況給藥前20.35±1.11無給藥后1天 21.43±1.07無給藥后2天22.36±0.97無給藥后3天23.27±0.99無給藥后4天23.33±0.79無給藥后5天24.89±0.62無給藥后6天26.46±0.94無給藥后7天27.46±1.00無表2給藥后小鼠毒性反應(yīng)情況器官系統(tǒng) 檢查方法 毒性表現(xiàn)中樞和運(yùn)動(dòng) 行為 給藥后一天內(nèi)少動(dòng)，之后活動(dòng)一直正常神經(jīng)系統(tǒng) 對(duì)刺激的反應(yīng) 正常異常運(yùn)動(dòng) 無神經(jīng)反射 正常植物神經(jīng)系統(tǒng) 瞳孔 給藥后正常分泌物 未見異常分泌物呼吸系統(tǒng) 鼻未見分泌物呼吸及其頻率正常胃腸系統(tǒng) 大便 正常皮膚和皮毛 顏色、完整性 正常其他 未見其他各種異常現(xiàn)象表3 黃芪多糖對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)---最大給藥量試驗(yàn)的體重變化表 單位g時(shí)間對(duì)照組 給藥組 P值 死亡情況給藥前 21.34±0.92 21.63±1.380.58無給藥后1天 22.36±0.96 22.07±1.72無給藥后2天 23.27±0.84 23.45±1.93無給藥后3天 23.98±0.67 23.15±2.70無給藥后4天 24.69±0.64 25.00±2.24無給藥后5天 25.40±0.76 25.85±2.34無給藥后6天 26.11±0.99 27.11±2.36無給藥后7天 26.82±1.27 27.34±1.750.44無表4 給藥后小鼠毒性反應(yīng)情況器官系統(tǒng)檢查方法 毒性表現(xiàn)中樞和運(yùn)動(dòng)行為 給藥后一天內(nèi)活動(dòng)增多后減少，之后活動(dòng)一直正常神經(jīng)系統(tǒng) 對(duì)刺激的反應(yīng) 正常異常運(yùn)動(dòng)無神經(jīng)反射正常植物神經(jīng)系統(tǒng) 瞳孔 給藥后正常分泌物 未見異常分泌物呼吸系統(tǒng) 鼻未見分泌物呼吸及其頻率正常胃腸系統(tǒng) 大便 正常腹脹皮膚和皮毛顏色、完整性 正常其他未見其他各種異常試驗(yàn)例二.黃芪多糖的降血脂藥效試驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物二級(jí)雄性Wistar大白鼠，體重170±10g(內(nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物研究中心提供)。
實(shí)驗(yàn)試劑黃芪多糖由本研究所自己提取；總膽固醇試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)；生產(chǎn)批號(hào)180091，證號(hào)京T20010069甘油三酯試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)；生產(chǎn)批號(hào)220411，證號(hào)京T20010069膽固醇由北京化學(xué)試劑公司生產(chǎn)；生產(chǎn)批號(hào)020816膽酸鈉由北京海淀區(qū)微生物培養(yǎng)機(jī)制品廠生產(chǎn)；生產(chǎn)批號(hào)020726辛伐他汀由江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；生產(chǎn)批號(hào)20020601蛋黃粉由大連境港生化制品廠生產(chǎn)批號(hào)801103實(shí)驗(yàn)儀器PRONTO EVOLUTION全自動(dòng)生化儀(意大利產(chǎn))；TDL-5-A離心機(jī)(上海產(chǎn))；高脂飼料的配方配方1(預(yù)防性受試給藥模型)膽固醇3％，豬油10％，膽酸鈉0.5％，基礎(chǔ)飼料86.5％(配方面粉20％，米粉10％，玉米20％，麩皮25％，豆料20％，骨粉2％，魚粉2％，食鹽0.9％，維生素0.1％)。
配方2(治療性受試給藥模型)膽固醇1％，豬油10％，膽酸鈉0.2％，蛋黃粉10％；基礎(chǔ)飼料78.8％(配方面粉20％，米粉10％，玉米20％，麩皮25％，豆料20％，骨粉2％，魚粉2％，食鹽0.9％，維生素0.1％)。
2.黃芪多糖預(yù)防高血脂癥的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)高脂模型與給藥取大白鼠30只，體重170±10g，雄性，用普通標(biāo)準(zhǔn)飼料飼喂3天后，按體重隨機(jī)分成3組，每組10只，1組為高脂飼料對(duì)照組；2組為陽(yáng)性對(duì)照組；3組為黃芪多糖組；給藥第1天開始喂養(yǎng)高脂飼料每只20g/天，灌胃時(shí)間每天上午10:30。分組情況及各組給藥量見表5。
測(cè)定與觀察方法各組灌胃給藥14天，在第15天時(shí)禁食不禁水12小時(shí)，尾靜脈取血，采用酶比色法在全自動(dòng)生化儀上測(cè)定血清總膽固醇值和甘油三酯值。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，差異顯著性以T檢驗(yàn)判定。
結(jié)果每隔5天按鼠體重計(jì)算給藥量。體重變化見表6，各組從1、5、10、15天體重增長(zhǎng)正常，平均體重各組間無異常變化，且證明黃芪多糖無毒、安全性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果列入表7、8、9、10。表7、8表明，兩組比較空白對(duì)照都有一定的降總膽固醇作用，但沒有顯著差異。辛伐他汀組與對(duì)照組比較P值大于黃芪多糖與對(duì)照組比較P值，表明黃芪多糖的降總膽固醇作用比陽(yáng)性對(duì)照藥(辛伐他汀)還要好，但沒有顯著差異。表9、10表明，兩組與空白對(duì)照比較都有一定的降甘油三酯的作用，有顯著差異。辛伐他汀組與對(duì)照組比較P值小于黃芪多糖與對(duì)照組比較P值，表明黃芪多糖的降甘油三酯作用不如陽(yáng)性對(duì)照藥(辛伐他汀)好，但沒有顯著差異。
表5 分組情況及各組給藥量組別1 2 3藥品對(duì)照 陽(yáng)性對(duì)照受試藥(H2O)(辛伐他汀) (黃芪多糖)給藥量(mg/kg) 6010 60(mg/Kg)表6 平均體重變化記錄(g)組別對(duì)照組辛伐他汀組 黃芪多糖組第1天 163.7 163.2 164.0第5天 206.0 199.0 205.3第10天237.1 221.5 223.2第15天249.7 236.9 243.5表7 給藥后第15天的大白鼠血清總膽固醇含量測(cè)定結(jié)果(單位mmol/L)對(duì)照組辛伐他汀組黃芪多糖組1號(hào) 3.71 2.41 3.662號(hào) 10.06 4.01 3.303號(hào) 3.3 7.67 2.464號(hào) 5.07 3.12 3.355號(hào) 2.88 2.29 3.346號(hào) 3.41 2.99 3.297號(hào) 3.88 2.68 2.498號(hào) 5.29 3.17 4.659號(hào) 3.89 3.92 2.0010號(hào) 3.32 3.40 3.20平均值4.57 3.69 3.12標(biāo)準(zhǔn)差2.21 1.59 0.76表8 對(duì)大白鼠血清膽固醇的影響(均值±標(biāo)準(zhǔn)差)分析(mmol/L)組別 動(dòng)物例數(shù)(只) 給藥劑量總膽固醇 P值對(duì)照組 10 4.57±2.21辛伐他汀組 10 10mg/Kg·體重 3.69±1.59*0.282黃芪多糖組 10 60mg/Kg·體重 3.12±0.75**0.080*辛伐他汀組與對(duì)照組比較P＞0.05，**黃芪多糖與對(duì)照組比較P＞0.05。
表9 給藥后第15天大白鼠血清甘油三酯含量測(cè)定結(jié)果(單位mmol/L)對(duì)照組 辛伐他汀組 黃芪多糖組
1號(hào)1.06 0.53 1.032號(hào)1.23 0.94 0.993號(hào)1.08 0.93 0.824號(hào)1.25 1.06 1.025號(hào)0.66 0.80 0.826號(hào)0.98 1.16 0.927號(hào)1.36 0.86 0.738號(hào)1.23 0.60 0.939號(hào)1.41 1.04 0.9710號(hào) 1.28 0.74 1.12平均值 1.15 0.87 0.93標(biāo)準(zhǔn)差 0.22 0.20 0.10表10對(duì)大白鼠血清甘油三酯的影響(均值±標(biāo)準(zhǔn)差)分析(mmol/L)組別動(dòng)物例數(shù)(只) 給藥劑量甘油三酯 P值對(duì)照組 10 1.15±0.22辛伐他汀組 10 10mg/Kg·體重 0.87±0.20 *0.0068黃芪多糖組 10 60mg/Kg·體重 0.93±0.10 **0.0078*辛伐他汀組與對(duì)照組比較P＜0.05，**黃芪多糖與對(duì)照組比較P＜0.05。
試驗(yàn)例三.黃芪多糖治療高血脂癥的動(dòng)物試驗(yàn)治療性高脂模型正常血值的測(cè)定取大鼠60只，體重170±20g，雄性，按體重隨機(jī)分成5組，每組12只，在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下大鼠飼喂基礎(chǔ)飼料觀察7天，取尾血，測(cè)定血清總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。測(cè)定結(jié)果見表11、12、13。各組數(shù)據(jù)表明各項(xiàng)指標(biāo)都在正常范圍之內(nèi)。
高脂模型的形成自正式實(shí)驗(yàn)開始各組動(dòng)物換用高脂飼料飼喂8天，取尾血，測(cè)定TC、TG、HDL-C水平，測(cè)定結(jié)果見表14、15、16，各組數(shù)據(jù)表明各項(xiàng)指標(biāo)平均值都高于正常值。CHO正常值與高脂模型值的比較見表17，各組高脂模型值與正常值比較的P值都小于0.05，所以判定高脂血癥模型制備成功。
分組及給藥量計(jì)算再根據(jù)CHO水平，進(jìn)行隨機(jī)分5組(見表18)，每組11只(把5個(gè)血脂模型差的鼠棄掉)。1組為黃芪多糖低劑量(40mg/kg)組；2組為黃芪多糖中劑量(60mg/kg)組，3組為黃芪多糖高劑量(80mg/kg)組4組為高脂飼料對(duì)照組；5組為陽(yáng)性對(duì)照組。灌胃時(shí)間每天上午8:40。分組情況及各組給藥量見表19。
測(cè)定與觀察方法各組灌胃給藥14天，在第15天時(shí)禁食不禁水16小時(shí)，尾靜脈取血，采用酶比色法在全自動(dòng)生化儀上測(cè)定血清總膽固醇值、甘油三酯值及高密度脂蛋白。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，差異顯著性以T檢驗(yàn)判定。每隔5天按鼠體重計(jì)算給藥量。
結(jié)果CHO結(jié)果表明(見表20)低劑量黃芪多糖組、中劑量黃芪多糖組與對(duì)照組比較P＜0.01，有極顯著差異；辛伐他汀組與對(duì)照組比較P＜0.05，有顯著差異。以上數(shù)據(jù)表明，三組都有明顯的降總膽固醇作用，有顯著差異。辛伐他汀組與對(duì)照組比較P值大于黃芪多糖低、中組與對(duì)照組比較P值，說明黃芪多糖的降總膽固醇作用比陽(yáng)性對(duì)照藥(辛伐他汀)還要好。
TG結(jié)果表明(見表21)雖然P值都大于0.05，無顯著性差異。但給藥各組與對(duì)照組比較都不同程度降低了TG水平。黃芪多糖的各給藥組的P值都小于陽(yáng)性對(duì)照的P值，表明降低TG水平與陽(yáng)性對(duì)照藥(辛伐他汀)相當(dāng)。
HDL-C結(jié)果表明(見表22)黃芪多糖低劑量、高劑量組與空白對(duì)照組比較P值都小于0.05，有顯著性差異；黃芪多糖中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組比較雖然都不同程度升高但無顯著性。HDL-C的升高，促進(jìn)脂類代謝，所以黃芪多糖的降脂功能比陽(yáng)性對(duì)照要強(qiáng)的多。
表11 正常大鼠的總膽固醇測(cè)定結(jié)果 單位(mmol/L)1組 2組 3組 4組 5組1 1.902.251.771.87 1.872 1.922.101.771.62 1.803 1.721.761.981.83 2.134 1.842.221.871.64 1.705 1.652.141.651.78 1.526 1.852.181.701.56 1.507 1.892.191.651.87 1.94
8 1.771.80 1.86 2.08 1.619 1.631.74 2.08 1.74 1.61101.751.43 1.82 2.13 1.82112.121.83 1.63 1.61 2.37121.491.95 1.26 1.89 1.98均值 1.791.97 1.75 1.80 1.82標(biāo)準(zhǔn)差0.160.26 0.21 0.18 0.26表12正常大鼠的甘油三酯測(cè)定結(jié)果 單位(mmol/L)1組 2組 3組 4組 5組1 1.531.32 1.28 1.04 0.902 2.101.35 1.10 0.87 1.163 0.881.02 1.00 1.83 1.444 1.041.01 1.28 1.64 0.855 1.421.05 1.05 1.07 0.766 1.211.44 0.79 0.88 0.987 0.861.03 0.90 1.09 1.138 1.141.02 0.78 1.04 1.159 0.581.03 1.10 0.96 1.23101.040.87 1.23 1.07 1.27111.031.49 1.01 0.89 1.70120.851.69 1.01 1.58 1.40平均值1.141.19 1.04 1.03 1.16標(biāo)準(zhǔn)差0.400.25 0.17 0.19 0.27表13正常大鼠的高密度脂蛋白測(cè)定結(jié)果 單位(mmol/L)1組 2組 3組 4組 5組1 1.381.45 1.34 1.33 1.422 1.231.35 1.30 1.19 1.303 1.141.16 0.84 1.43 1.264 1.231.36 1.26 1.10 1.255 1.031.52 1.21 1.23 0.976 1.321.38 1.14 1.07 1.147 1.231.40 1.16 1.19 1.34
8 1.181.27 1.631.471.179 1.331.25 1.281.331.13101.300.98 1.251.451.20111.521.25 1.191.151.53121.021.42 0.971.281.24平均值1.241.32 1.211.271.25標(biāo)準(zhǔn)差0.140.15 0.190.140.15表14高脂模型大鼠的總膽固醇測(cè)定結(jié)果 單位(mmol/L)1組 2組 3組 4組 5組1 3.59 2.87 1.822.802.192 4.94 2.31 1.631.721.803 4.36 1.71 2.091.973.124 3.05 2.15 2.952.291.755 4.13 2.88 2.111.902.286 4.02 2.48 3.062.012.467 3.20 2.43 2.063.412.008 4.06 1.95 2.063.762.199 2.68 1.98 2.131.742.66103.31 1.85 2.622.743.09112.55 2.10 2.162.272.67123.04 2.15 1.842.292.38平均值3.58 2.24 2.212.412.38標(biāo)準(zhǔn)差0.73 0.37 0.440.650.47表15高脂模型大鼠的甘油三酯測(cè)定結(jié)果 單位(mmol/L)1組 2組 3組 4組 5組1 1.20 1.06 1.021.110.882 1.69 1.03 0.771.040.753 1.02 0.74 1.050.761.224 1.10 0.76 1.521.090.035 0.88 1.18 1.151.180.956 1.13 0.85 1.211.341.227 1.15 0.69 1.081.291.16
8 1.29 0.881.00 1.34 0.659 0.97 0.950.87 1.30 1.16101.05 0.781.24 1.04 1.27111.06 0.961.17 0.73 1.11120.96 0.871.20 0.90 0.88平均值1.13 0.901.11 1.09 0.95標(biāo)準(zhǔn)差0.21 0.150.19 0.21 0.37表16高脂模型大鼠的高密度脂蛋白測(cè)定結(jié)果 單位(mmol/L)1組 2組 3組4組5組1 0.48 0.850.92 1.07 1.102 0.43 1.010.88 1.08 0.953 0.54 1.151.12 1.05 0.544 0.92 0.920.76 0.84 0.085 0.41 0.950.38 1.02 0.786 0.51 1.500.61 0.78 0.817 0.63 1.111.00 0.81 0.898 0.41 1.080.99 0.68 1.039 0.62 1.180.89 0.72 0.9010 0.48 0.891.05 1.00 1.0111 0.71 1.260.99 1.23 0.9112 0.66 0.980.85 1.27 0.91平均值 0.57 1.070.87 0.96 0.83標(biāo)準(zhǔn)差 0.15 0.180.21 0.19 0.28表17總膽固醇正常值與高脂模型值的比較單位(mmol/L)1組 2組 3組4組 5組正常 模型 正常模型正常 模型正常 模型 正常 模型平均值 1.79 3.58 1.972.241.75 2.211.80 2.41 1.82 2.38標(biāo)準(zhǔn)差 0.16 0.73 0.260.370.21 0.440.18 0.65 0.26 0.47P值3×10-80.0488 0.0037 0.0055 0.0016表18根據(jù)總膽固醇值隨機(jī)分組情況 單位(mmol/L)
1組2組 3組 4組 5組1 1-13.591-2 4.941-3 4.361-5 4.131-8 4.062 1-64.021-12 3.041-4 3.051-7 3.201-10 3.313 5-33.125-12 2.673-4 2.953-6 3.065-11 3.094 5-10 3.092-2 2.313-10 2.622-1 2.872-5 2.885 1-92.682-7 2.431-11 2.552-6 2.485-6 2.286 4-42.294-8 3.764-7 3.415-7 2.464-9 2.747 3-82.062-8 1.985-1 2.194-1 2.805-9 2.198 3-72.063-9 2.133-3 2.092-12 2.153-5 2.119 3-11 2.162-10 1.854-3 1.912-9 1.952-11 2.1010 4-51.903-1 1.825-5 1.753-12 1.845-8 2.0011 4-12 2.294-11 1.764-2 1.724-10 2.274-6 2.01平均值 2.70 2.61 2.60 2.66 2.615標(biāo)準(zhǔn)差 0.73 0.98 0.81 0.66 0.666注1-1表示原第一組的一號(hào)鼠。
表19分組情況及各組給藥量組別 1 23 4 5藥品 低劑量中劑量 高劑量 空白對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照(粗黃芪) (粗黃芪) (粗多糖)(水)(辛伐他汀)給藥量 4060 80 60 10(mg/Kg)表20總膽固醇測(cè)定結(jié)果單位(mmol/L)低劑量組中劑量組高劑量組空白對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組11.982.252.752.46 2.5522.512.002.882.75 2.3232.422.302.183.41 2.7042.072.351.872.53 2.8852.502.283.722.78 2.1162.082.212.182.64 2.7072.301.972.262.41 2.3482.231.912.403.32 2.0792.592.182.022.93 1.9710 1.911.771.792.31 2.2511 2.261.763.422.40 1.79
均值 2.26 2.09 2.55 2.72 2.33標(biāo)準(zhǔn)差0.24 0.21 0.59 0.37 0.34P值 0.0032 8.3×10-50.4362 0.0189表21甘油三酯測(cè)定結(jié)果 單位(mmol/L)低劑量組 中劑量組 高劑量組空白對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組11.50 1.12 3.101.29 1.2423.28 1.38 1.593.14 1.3631.32 2.86 1.201.09 3.7141.25 0.80 3.451.60 1.3853.14 1.94 0.973.26 1.7360.99 1.12 1.321.13 3.8271.22 1.38 3.001.62 1.0182.76 1.28 0.964.01 1.4590.79 2.72 1.351.01 3.0110 1.27 0.85 2.541.50 1.3711 2.51 1.12 1.213.42 1.52均值 1.82 1.51 1.882.10 1.96標(biāo)準(zhǔn)差 0.91 0.70 0.941.12 1.03P值 0.5321 0.1531 0.62890.7734表22高密度脂蛋白測(cè)定結(jié)果 單位(mmol/L)低劑量組 中劑量組 高劑量組 空白對(duì)照組 陽(yáng)性對(duì)照組10.62 0.53 0.65 0.49 0.4120.65 0.57 0.69 0.65 0.3830.55 0.75 0.54 0.61 0.6840.48 0.61 0.55 0.60 0.6050.71 0.58 0.71 0.54 0.4960.87 0.44 0.59 0.52 0.5670.68 0.66 0.80 0.56 0.4880.67 0.68 0.58 0.50 0.5590.76 0.46 0.61 0.66 0.5110 0.65 0.63 0.79 0.54 0.5711 0.52 0.71 0.84 0.44 0.35
均值 0.65 0.60 0.67 0.56 0.60標(biāo)準(zhǔn)差0.11 0.10 0.11 0.07 0.26P值 0.0250.215 0.008 0.608脂類代謝與心血管疾病密切相關(guān)，高脂血癥則是引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的主要原因之一，特別是血清總膽固醇水平增高是致動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)指標(biāo)。血脂濃度的高低除機(jī)體代謝，特別是內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)控外，外源性物質(zhì)的影響也是很重要的一個(gè)方面。試驗(yàn)結(jié)果表明，用不同的兩個(gè)模型及不同劑量黃芪多糖與現(xiàn)在市場(chǎng)上的降血脂良藥辛伐他汀比較，發(fā)現(xiàn)預(yù)防性模型，兩組比較空白對(duì)照都有一定的降總膽固醇作用。辛伐他汀組與對(duì)照組比較P值大于黃芪多糖與對(duì)照組比較P值，表明黃芪多糖的降總膽固醇作用比陽(yáng)性對(duì)照藥(辛伐他汀)還要好。兩組與空白對(duì)照比較都有一定的降甘油三酯的作用，有顯著差異。辛伐他汀組與對(duì)照組比較P值小于黃芪多糖與對(duì)照組比較P值，表明黃芪多糖的降甘油三酯作用不如陽(yáng)性對(duì)照藥(辛伐他汀)好。治療性模型結(jié)果表明，黃芪多糖的降血清總膽固醇水平、降甘油三酯水平、升高高密度脂蛋白水平都比辛伐他汀強(qiáng)。毒性實(shí)驗(yàn)又證實(shí)黃芪多糖安全、無毒，表明黃芪多糖在制備降血脂藥物和保健品中的應(yīng)用以及在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物和保健品中的應(yīng)用中具有獨(dú)特效果。
權(quán)利要求
1.黃芪多糖在制備降血脂的藥物和保健品中的應(yīng)用。
2.黃芪多糖在制備降低膽固醇、降低甘油三酯和升高高密度脂蛋白的藥物和保健品中的應(yīng)用。
3.黃芪多糖在制備降低膽固醇的藥物和保健品中的應(yīng)用。
4.黃芪多糖在制備降低甘油三酯的藥物和保健品中的應(yīng)用。
5.黃芪多糖在制備升高高密度脂蛋白的藥物和保健品中的應(yīng)用。
6.黃芪多糖在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物和保健品中的應(yīng)用。
7.黃芪多糖在制備預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物和保健品中的應(yīng)用。
8.黃芪多糖在制備預(yù)防和治療冠狀動(dòng)脈病變的藥物和保健品中的應(yīng)用。
9.黃芪多糖在制備預(yù)防和治療周圍血管病變的藥物和保健品中的應(yīng)用。
10.黃芪多糖在制備預(yù)防和治療高脂血癥的藥物和保健品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及黃芪多糖在制備降血脂藥物和保健品中的應(yīng)用。研究表明，黃芪多糖具有降血脂，即降低膽固醇和甘油三酯、升高高密度脂蛋白的作用；能夠預(yù)防和治療心腦血管疾病，如動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈病變、周圍血管病變以及高脂血癥等。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1575800SQ200410062299
公開日2005年2月9日 申請(qǐng)日期2004年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月5日
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