專利名稱：一種復方丹參凍干粉針劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術領域，具體涉及一種復方丹參凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術：
冠心病、心絞痛在臨床上是常見病、多發(fā)病，近年來，隨著人們生活水平的提高，冠心病發(fā)病年齡有所提前，加上人口結(jié)構的老齡化，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，開發(fā)治療心腦血管疾病的藥物漸成研究的熱點。越來越多的臨床報道顯示，中藥在治療冠心病、心絞痛方面具有良好的應用前景，特別是中藥的副作用少，日益受到人們的喜愛。復方丹參制劑主要由丹參、三七和冰片組成，臨床上主要用于心血管疾病方面的治療，具有較好的效果，如復方丹參滴丸在市場上銷量一直很好。近年來，以丹參為主的制劑在臨床上應用日益廣泛，研究也不斷深入。丹參能擴張冠狀動脈，增加冠脈血流量，減慢心率；對抗血小板活化因子引起的血小板集聚和血栓形成；促進損傷心肌恢復，增加心肌收縮力，保護心肌細胞。三七的藥理作用非常廣泛，對機體多個系統(tǒng)都有影響，其主要作用為止血、活血化瘀、消腫止痛，近年來研究又發(fā)現(xiàn)，三七具有抗心絞痛、治療腦血管后遺癥、抗肝炎等作用，特別是三七中所含的總皂苷類成分，在心血管方面具有較好的生理活性。冰片則有開竅醒神，清熱止痛的功效。雖然，由三七和丹參單味藥制成的注射液已在臨床上大量應用，并且由三藥組成的復方丹參制劑在臨床上也有多種劑型，但由三藥組成的制劑都只限于口服制劑，專利CN02158104.5公開了一種治療心血管疾病的復方丹參固體制劑及其制備方法，市場未見有由以上三味藥組方的注射液特別是凍干粉針劑的報道，雖然文獻中有有關復方丹參注射液的報道，如中國專利CN98103032、CN02133724、CN02144600，但其報道的復方丹參由皆由丹參和降香兩味藥組成，而非由丹參、三七、冰片三味藥組成，兩者組方不同。中藥復方的配伍應用，可充分發(fā)揮中藥多組分、多靶點多作用途徑的特點，使之在臨床上具有更好的療效。注射用凍干粉針劑具有起效迅速，又穩(wěn)定便于運輸貯存等優(yōu)點，因此，進一步開發(fā)復方丹參制劑特別是其凍干粉針劑型，將會具有廣闊的市場前景。
由三七和丹參單味藥有效部位制成的注射制劑有較多報道。專利CN99106223公開了由三七有效成分三七總皂甙制成的注射劑。丹參治療心血管的主要有效成分為水溶性酚酸類成分，專利CN01142288和專利CN02117923分別公開了丹參總丹酚酸的制備方法，均采用大孔吸樹脂法對總丹酚酸進行富集和純化。
對于復方丹參制劑的專利，對其固體劑型報道的較多，專利CN01136155.7和專利CN02158104.5分別公開了該復方制劑的固體劑型及其制備方法，專利CN01133333.2則公開了該復方制劑的緩釋和控釋劑型和制備方法。專利CN02157383、CN02157377、CN02157379、CN02157380、CN02157382則公開了基本上包括復方丹參的整個固體劑型，但目前仍沒有關于復方丹參制劑凍干粉針劑的報道。
冰片為脂溶性成分，在注射液中溶解度較小，這也是復方丹參制劑目前尚無凍干粉針劑的原因之一。
超濾技術是指常溫下以一定壓力和流量，利用不對稱微孔結(jié)構和半透膜分離介質(zhì)、以錯流方式進行過濾，使溶劑及小分子物質(zhì)通過，高分子物質(zhì)和微粒子如蛋白質(zhì)、水溶性高聚物、細菌等被濾膜阻留，從而達到分離、純化、濃縮的發(fā)展最快的新型膜分離技術，能夠分離分子量為1000～1000000道爾頓的物質(zhì)。使用不同的超濾膜如醋酸纖維、磺化聚砜、聚砜、聚砜酰胺、聚丙烯睛，能夠?qū)?.5、1、3、7萬不同分子量物質(zhì)進行選擇性截留。與傳統(tǒng)分離方法相比，具有分離過程無相變、分離效率高、無需添加化學試劑無污染、無需加熱、能耗低、條件溫和不破壞成分、操作方便、流程短的特點，能夠部分取代傳統(tǒng)的過濾、吸附和萃取等分離技術，已開始廣泛應用于生物工程及中藥制劑工藝中?？梢杂贸瑸V法制備注射用水、輸液及中藥注射液，以5～7萬分子量超濾膜制備口服液和固體制劑等等。另外，根據(jù)超濾膜的特點，還可以利用它來去除注射液中的鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)和大分子的糖類等雜質(zhì)，改善注射液的澄明度等。利用超濾技術制備注射液，還能夠用來有效去除細菌和熱原，因為熱原的平均分子量為10萬左右，采用截留分子量為3000的超濾膜超濾，即可有效除去熱原。所以，本發(fā)明在制劑工藝中采用超濾技術后，注射液的質(zhì)量得到了明顯的改善與提高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是對復方丹參片(見《藥典》2000年版一部，國家藥典委員會編)的劑型改進，目的在于提供一種起效迅速、劑型先進、制劑穩(wěn)定的注射用復方丹參凍干粉針劑及其制備方法。本發(fā)明采用水煎煮法、醇提取法、樹脂吸附法以及超濾法對復方丹參片制劑中的丹參、三七進行提取和純化，得到其水溶性提取物，利用羥丙基β-環(huán)糊精(HP-β-CD)對處方中的冰片進行包合，解決了其在注射液水溶液中溶解難的問題，提高了制劑的質(zhì)量和臨床療效。
本發(fā)明分別采用離子交換樹脂法和大孔吸附樹脂法對丹參和三七中的水溶性成分進行了富集純化，并采用超濾法超濾，保證了注射液的澄明度和熱原合格，同時除去了丹參藥材中的鞣質(zhì)，使注射劑的質(zhì)量和療效得到顯著提高。
另外，丹參中的水溶性有效成分多為醛類和酸類成分，在水溶液中易氧化變質(zhì)(提高復方丹參注射液穩(wěn)定性的方法[J].中國藥師，1998(3)143)，本發(fā)明將其制成凍干粉針劑，很好的解決了上述問題，使制劑的穩(wěn)定性得到明顯提高。
本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)1、提取與制備(1)取丹參藥材飲片，加水煎煮三次，合并煎煮液，濾過，續(xù)濾液用陰離子交換樹脂吸附，先用水洗去雜質(zhì)再用稀堿液洗脫，堿洗脫液用酸調(diào)pH值至4-5，減壓濃縮至相對密度為1.20-1.30(50℃)的浸膏，加乙醇使含醇量達60-80％，靜置，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.25-1.35(50℃)的浸膏；浸膏邊攪拌邊加乙醇使含醇量達70-85％，靜置24小時，濾過，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得丹參提取物。
(2)三七粉碎成最粗粉，分別用50-80％的乙醇回流提取三次，合并提取液，濾過，回收乙醇至盡后，加水稀釋(提取液∶藥材＝1∶1)，高速離心，上清液過已處理好的大孔吸附樹脂柱，先用1倍樹脂柱體積的水洗去雜質(zhì)，再用50-80％的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得三七提取物。
(3)冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD飽和液中，邊加邊攪拌，冰片乙醇液加完后，持續(xù)攪拌數(shù)小時，混合液冷藏，濾過，沉淀低溫干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(4)取上述丹參、三七提取物加注射用水溶解，濾過，濾液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD液混合，加入凍干賦型劑，調(diào)PH值為5.0-6.5，用0.2％的活性炭80℃保溫15分鐘，濾過，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至8.0，濾過，灌裝，凍冷干燥，即得。
本發(fā)明所用大孔吸附樹脂可以是非極性或弱極性的大孔樹脂，包括D101和AB-8型大孔樹脂。
本發(fā)明所用凍干賦形劑可以是甘露醇和乳糖中一種或二種的混合物。
試驗例一注射用復方凍干粉針劑的初步穩(wěn)定性試驗1、試驗儀器與材料DL 302型調(diào)溫調(diào)濕箱(上海吳凇五金廠)；HP 1100液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司)。甲醇為色譜純，醋酸為分析純，水為超純水；原兒茶醛對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。
注射用復方丹參凍干粉針劑與復方丹參注射液(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供)2方法采用加速試驗法測定注射用復方丹參凍干粉針劑與復方丹參注射液的穩(wěn)定性，將二者置于DL 302型調(diào)溫調(diào)濕箱中，39±1℃、相對濕度在75％的條件下分別于0、1、2、3月測定二者中原兒醛的含量。
3含量測定3.1色譜條件及系統(tǒng)適用性 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；甲醇-0.5％醋酸(20∶80)為流動相；檢測波長280nm。
3.2檢測波長的選擇 取原兒茶醛對照品溶液適量，在200～400nm波長范圍記錄光譜曲線，原兒茶醛在280.0nm波長處有最大吸收，因此選擇280nm作為檢測波長。
3.3樣品制備 取本發(fā)明的注射用復方丹參凍干粉針劑加水溶解，與復方丹參注射液直接進樣以外標法進行測定。
4 結(jié)果表1初步穩(wěn)定性試驗結(jié)果表原兒茶醛含量 時間(月)(Mg/ml) 0月 1月2月3月注射用復方丹參凍0.653 0.644 0.650 0.646干粉針劑復方丹參注射液 0.650 0.623 0.610 0.593試驗結(jié)果表明，普通復方丹參注射液在加速試驗條件下，含量下降了近期10％，而本發(fā)明的注射用復方丹參凍干粉針劑原兒茶醛含量基本保持不變，具有較好的穩(wěn)定性。
試驗例二注射用復方丹參凍干粉針劑對大鼠急性心肌缺血的影響1、實驗儀器與材料動物Wistar大白鼠；垂體后葉素注射液，北京生化制藥廠生產(chǎn)。
2、方法與結(jié)果2.1復方丹參注射制劑對垂體后葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響取體重250～300g Wistar大鼠40只，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只，連續(xù)ip給藥7d，劑量見表1。各組動物于末次給藥30min后，腹腔注射25％烏拉坦0.4ml/100g麻醉，仰臥固定，標準電壓1mv＝15mm，走紙速度50mm/s，記錄II導聯(lián)心電圖。舌下靜脈注射垂體后葉素0.75u/kg于5s內(nèi)注射完。每30s記錄一次心電圖。大鼠靜脈注射垂體后葉素1min內(nèi)，大多數(shù)表現(xiàn)為心率減慢，T波高聳，ST段抬高等變化。分別觀察用藥前后30s、1min及50min上T波增殖的變化。
表2本發(fā)明的復方丹參注射制劑與丹參注射液對垂體后葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響。
T波增值(mV)組別 動物數(shù)劑量30s 1min5min生理鹽水組 100.6ml 0.35±0.12 0.25±0.16 0.18±0.022丹參注射液組 100.6ml/kg0.26±0.06* 0.15±0.041*0.098±0.015*本發(fā)明的復方100.6ml/kg0.19±0.05**0.10±0.034** 0.052±0.011**丹參注射液組維拉帕米 105mg/kg 0.16±0.020** 0.08±0.032** 0.030±0.018**與生理鹽水組比較*P＜0.05，**P＜0.01從以上結(jié)果可看出，本發(fā)明的復方丹參注射制劑能顯著降低30s、1min及5min時的T波增殖，比普通丹參注射液效果更明顯。
具體實施例實施例一處方 丹參1657.4g 三七324.2g 冰片18.4g取丹參飲片，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小時，第二、三次分別加6倍量水煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，續(xù)濾液用陰離子交換樹脂吸附，水洗除雜后用稀堿液洗脫，堿洗脫液用酸調(diào)PH值為4-5，減壓濃縮至相對密度為1.20-1.30(50℃)的浸膏，浸膏在攪拌的情況下加乙醇使含醇量達60-80％，靜置，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.25-1.35(50℃)的浸膏；浸膏邊攪拌邊加乙醇使含醇量達70-85％，靜置24小時，濾過，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得丹參提取物。
三七粉碎成最粗粉，分別加6倍、5倍、5倍量的50-80％的乙醇回流提取三次，第一次2小時，第二、三次為1.5小時，合并提取液，濾過，回收乙醇至盡后，加水稀釋(提取液∶藥材＝1∶1)，高速離心，上清液過處理好的D101大孔樹脂吸附，1倍樹脂量的水洗樹脂去雜質(zhì)，再用80％的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得三七提取物。
冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取20倍冰片量的HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD飽和液中，邊加邊攪拌，攪拌速度每分鐘4000轉(zhuǎn)，冰片乙醇液加完后，持續(xù)攪拌5小時，混合液冷藏，濾過，沉淀低溫干燥，備用。
取丹參、三七提取物加注射用水700ml溶解，煮沸15分鐘，冷藏，濾過，續(xù)濾液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD包合物混合，加入凍干賦型劑，調(diào)整體積至1000ml，調(diào)PH值為8.0，除菌濾過，分裝，凍干，即得。
實施例二處方 丹參1657.4g 三七324.2g 冰片18.4g取丹參飲片，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小時，第二、三次分別加6倍量水煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，續(xù)濾液用陰離子交換樹脂吸附，水洗除雜后用稀堿液洗脫，堿洗脫液用酸調(diào)PH值為4-5，減壓濃縮至相對密度為1.20-1.30(50℃)的浸膏，浸膏在攪拌的情況下加乙醇使含醇量達60-80％，靜置，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.25-1.35(50℃)的浸膏；浸膏邊攪拌邊加乙醇使含醇量達70-85％，靜置24小時，濾過，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得丹參提取物。
三七粉碎成最粗粉，分別加6倍、5倍、5倍量的50-80％的乙醇回流提取三次，第一次2小時，第二、三次為1.5小時，合并提取液，濾過，回收乙醇至盡后，加水稀釋(提取液∶藥材＝1∶1)，高速離心，上清液過處理好的AB-8型大孔樹脂吸附，先用1倍樹脂量的水洗去雜質(zhì)，再用70％的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.20-1.30(50℃)的浸膏，真空干燥得三七提取物。
冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取20倍冰片量的HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD飽和液中，邊加邊攪拌，攪拌速度每分鐘4000轉(zhuǎn)，冰片乙醇液加完后，持續(xù)攪拌5小時，混合液冷藏，濾過，沉淀低溫干燥，備用。
取丹參、三七提取物加注射用水700ml溶解，煮沸15分鐘，冷藏，濾過，續(xù)濾液用截留分子量為3000的中空纖維柱超濾，超濾液與冰片HP-β-CD包合物混合，加入凍干賦型劑，調(diào)整體積至1000ml，調(diào)PH值為8.0，除菌濾過，分裝，凍干，即得。
權利要求
1.一種注射用復方丹參凍干粉針劑，其原料為丹參、三七和冰片，其特征在于它是由丹參、三七的水溶性提取物和冰片羥丙基β-環(huán)糊精包合物及水溶性藥用輔料組成，即通過以下制備方法制成(1)取丹參藥材飲片，加水煎煮三次，合并煎煮液，濾過，續(xù)濾液用陰離子交換樹脂吸附，先用水洗去雜質(zhì)后再用稀堿液洗脫，堿洗脫液用酸調(diào)pH值為4-5，減壓濃縮至50℃時相對密度為1.20-1.30的浸膏，加乙醇使含醇量達60-80％，靜置，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.35的浸膏；浸膏邊攪拌邊加乙醇使含醇量達70-85％，靜置24小時，濾過，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至50℃時相對密度為1.20-1.30的浸膏，真空干燥得丹參提取物；(2)三七粉碎成最粗粉，用50-80％的乙醇回流提取三次，合并提取液，濾過，回收乙醇至盡后，加水稀釋，高速離心，上清液過已處理好的大孔吸附樹脂柱，先用1倍樹脂柱體積的水洗去雜質(zhì)，再用50-80％的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮至50℃時相對密度為1.20-1.30的浸膏，真空干燥得三七提取物；(3)冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD飽和液中，邊加邊攪拌，冰片乙醇液加完后，持續(xù)攪拌數(shù)小時，混合液冷藏，濾過，沉淀低溫干燥，得冰片HP-β-CD包合物；(4)取上述丹參、三七提取物加注射用水溶解，濾過，濾液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD包合物混合，加入凍干賦形劑，調(diào)pH值為5.0-6.5，用0.2％的活性炭80℃保溫15分鐘，濾過，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至8.0，濾過，灌裝，凍冷干燥，即得。
2.權利要求1所述的復方丹參凍干粉針劑的制備方法，其特征在于它包括以下制備步驟取丹參飲片，加水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小時，第二、三次分別加6倍量水煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，續(xù)濾液用陰離子交換樹脂吸附，水洗除雜后用稀堿液洗脫，堿洗脫液用酸調(diào)PH值為4-5，減壓濃縮至50℃時相對密度為1.20-1.30的浸膏，浸膏在攪拌的情況下加乙醇使含醇量達60-80％，靜置，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至50℃時相對密度為1.25-1.35的浸膏；浸膏邊攪拌邊加乙醇使含醇量達70-85％，靜置24小時，濾過，上清液回收乙醇，并減壓濃縮至50℃時相對密度為1.20-1.30的浸膏，真空干燥得丹參提取物；將三七粉碎成最粗粉，分別加6倍、5倍、5倍量的50-80％的乙醇回流提取三次，第一次2小時，第二、三次為1.5小時，合并提取液，提取液∶藥材＝1∶1，濾過，回收乙醇至盡后，加水稀釋，高速離心，上清液過處理好的D101大孔樹脂吸附，1倍樹脂量的水洗樹脂去雜質(zhì)，再用80％的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮至50℃時相對密度為1.20-1.30的浸膏，真空干燥得三七提取物；將冰片用無水乙醇溶解成近飽和液備用；另取20倍冰片量的HP-β-CD加注射用水制成飽和溶液，將冰片乙醇液慢慢滴加到HP-β-CD飽和液中，邊加邊攪拌，攪拌速度每分鐘4000轉(zhuǎn)，冰片乙醇液加完后，持續(xù)攪拌5小時，混合液冷藏，濾過，沉淀低溫干燥，備用；取丹參、三七提取物加注射用水700ml溶解，煮沸15分鐘，冷藏，濾過，續(xù)濾液用截留分子量為3000的超濾膜超濾，超濾液與冰片HP-β-CD包合物混合，加入凍干賦形劑，調(diào)整體積至1000ml，調(diào)PH值為8.0，除菌濾過，分裝，凍干。
3.根據(jù)權利要求1所述的復方丹參凍干粉針劑，其特征在于其中的吸附樹脂可以是非極性或弱極性的大孔樹脂。
4.根據(jù)權利要求3所述的復方丹參凍干粉針劑，其特征在于其中的吸附樹脂為D101和AB-8型大孔樹脂。
5.根據(jù)權利要求1所述的復方丹參凍干粉針劑，其特征在于其中的凍干賦形劑是甘露醇和乳糖中的一種或二種的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復方丹參凍干粉針劑及其制備方法，其特征在于它主要由丹參、三七水溶性有效部位和冰片羥丙基β－環(huán)糊精包合物組成。本發(fā)明對丹參、三七中的有效成分采用提取后過樹脂柱富集以及超濾法純化，對冰片采用羥丙基β－環(huán)糊精(HP－β－CD)包合，解決其在注射液中的溶解度小的問題，使復方丹參注射劑在澄明度、有效成分的含量、制劑的穩(wěn)定性等質(zhì)量和臨床療效方面得到顯著提高。本發(fā)明的注射用復方丹參凍干粉針劑，具有有效成分含量高，穩(wěn)定性好，療效顯著的特點。
文檔編號A61P9/10GK1583131SQ20041004612
公開日2005年2月23日 申請日期2004年6月1日 優(yōu)先權日2004年6月1日
發(fā)明者張正生 申請人:北京神農(nóng)壇醫(yī)藥科技有限公司