專利名稱：重組人干擾素α2b滴鼻劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有藥用抗病毒、調(diào)節(jié)免疫功能的作用的干擾素，尤其涉及重組人干擾素α2b滴鼻劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
干擾素有抑制病毒復(fù)制，抗細(xì)胞增殖和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答等多種生物學(xué)效應(yīng)。廣泛應(yīng)用于治療和預(yù)防病毒感染性、免疫功能失調(diào)性等疾病。干擾素包括α、β、γ三大類型，最近又發(fā)現(xiàn)了ω和Γ兩類干擾素。α干擾素可分為許多亞型，分別命名為α1、α2、α3……，其中α2又包括α2a和α2b兩種亞型。干擾素α2b的序列結(jié)構(gòu)特征及其重組制備方法，見(jiàn)《歐洲藥典》(2000年版)。
從其生產(chǎn)制備方法上來(lái)分，干擾素可分為天然干擾素和重組干擾素。天然干擾素是通過(guò)培養(yǎng)人的白細(xì)胞并利用適當(dāng)?shù)拇碳ぴ?如雞瘟病毒、仙臺(tái)病毒)對(duì)其進(jìn)行刺激誘導(dǎo)，使其產(chǎn)生干擾素，再利用生化方法進(jìn)行純化而得到。重組干擾素則是通過(guò)基因重組的方法，將干擾素基因整合到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)系統(tǒng)中(如大腸桿菌)，在通過(guò)發(fā)酵或細(xì)胞培養(yǎng)的方法使干擾素得到大量表達(dá)，然后通過(guò)分離純化而得到。重組人干擾素α2b就是利用此方法，將人的干擾素α2b基因整合到大腸桿菌中，通過(guò)發(fā)酵，純化而得到高純度、高產(chǎn)量的重組人干擾素α2b。重組人干擾素與天然干擾素相比，具有純度高、產(chǎn)量大、成本低等優(yōu)點(diǎn)。
現(xiàn)有的α干擾素研究大都采用天然干擾素，如中國(guó)專利申請(qǐng)98105384.x公開(kāi)了一種復(fù)方干擾素口含片及其制備方法，但采用的是天然α干擾素與白細(xì)胞介素2的混合物。中國(guó)專利申請(qǐng)95111433.6公開(kāi)了一種人白細(xì)胞干擾素口含片及其制備方法，但采用的人白細(xì)胞干擾素，系由健康人白細(xì)胞通過(guò)仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)、提純，并經(jīng)特殊滅活病毒處理制成。中國(guó)專利申請(qǐng)98105383.1公開(kāi)了一種β干擾素口含片及其制備方法，但采用的是β干擾素。中國(guó)專利申請(qǐng)95101216.9也隱含公開(kāi)了一種口服給藥的重組人α干擾素組合物，但組分復(fù)雜、成本高。中國(guó)專利申請(qǐng)0213242.2也公開(kāi)了一種重組人干擾素α滴鼻劑及其生產(chǎn)工藝，但組分復(fù)雜、成本高、療效有待驗(yàn)證。這些天然α干擾素口含片具有抗病毒、調(diào)節(jié)免疫功能的作用，如抗流感病毒、抗SARS冠狀病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、使用的劑量為小劑量，在10000IU以下，以100IU～500IU較多。上述文獻(xiàn)公開(kāi)的技術(shù)方案都存在著組分復(fù)雜、原料成本高等不足之處。
重組人干擾素α2b目前有注射劑、滴眼劑、栓劑、凝膠劑、軟膏劑等。常用的注射劑具有增加病人痛苦、副作用大、價(jià)格昂貴的不足。重組人干擾素滴鼻劑劑型的研究報(bào)道甚少。因此，研究和開(kāi)發(fā)滴鼻劑劑型，充分發(fā)揮該劑型生物利用度高(干擾素通過(guò)鼻粘膜得到良好的吸收)、用藥方便(因不存在下咽，特別適合兒童用藥)、病人耐受性好、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，成為人們期盼。本發(fā)明人按照SFDA的要求，經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，終于完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種生物利用度高、組分簡(jiǎn)單、安全有效劑量、療效好、副作用小、使用方便的重組人干擾素α2b滴鼻劑。
本發(fā)明的目的還在于提供重組人干擾素α2b滴鼻劑制備方法，使得重組人干擾素α2b在制備過(guò)程中失活少。
為了達(dá)到以上目的，本發(fā)明提供了一種重組人干擾素α2b滴鼻劑，其中包含作為有效成份的重組人干擾素α2b，以及藥學(xué)上認(rèn)可的保護(hù)液，保護(hù)液選自人血白蛋白、羥苯乙酯等。
上述滴鼻劑的重組人干擾素α2b含量為10萬(wàn)IU～300萬(wàn)IU/ml，保護(hù)液人血白蛋白重量百分比0.5％～2％、羥苯乙酯重量百分比0.01％～0.05％。
本發(fā)明的制備工藝是，先用生理鹽水配制成0.01％～0.05％羥苯乙酯和0.5％～2％人血白蛋白為保護(hù)液，再將重組人干擾素α2b溶于保護(hù)液中使其濃度為10萬(wàn)IU～300萬(wàn)IU/ml，然后經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾除菌，最后分裝。
本發(fā)明也可以使用其它適宜的添加劑如防腐劑和矯味劑。
本發(fā)明的重組人干擾素α2b滴鼻劑經(jīng)一系列實(shí)驗(yàn)研究表明安全有效，具有抗病毒，調(diào)節(jié)免疫功能等功效?？捎糜谥委熀皖A(yù)防嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(SARS)、流感、乙肝、丙肝、病毒性心肌炎、多發(fā)性硬化癥及其它疾病。
本發(fā)明由于保護(hù)液組分選擇簡(jiǎn)單、合理，且滴鼻劑無(wú)污染、雜質(zhì)極少、無(wú)潛在因子，因此本發(fā)明具有生物利用度高、組分簡(jiǎn)單、安全有效劑量、療效好、副作用小、使用方便。人干擾素α2b在制備過(guò)程中失活少。
下面通過(guò)實(shí)施例的方式進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 重組人干擾素α2b滴鼻劑(10萬(wàn)IU/ml)制備組分重組人干擾素α2b10萬(wàn)IU人血白蛋白 0.5％羥苯乙酯0.01％制備方法先用生理鹽水配制成0.01％羥苯乙酯和0.5％人血白蛋白為保護(hù)液，再將重組人干擾素α2b溶于保護(hù)液中使其濃度為10萬(wàn)IU/ml，然后經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾除菌，最后分裝。
實(shí)施例2 重組人干擾素α2b滴鼻劑(100萬(wàn)IU/ml)制備組分重組人干擾素α2b100萬(wàn)IU人血白蛋白 1％羥苯乙酯0.03％制備方法先用生理鹽水配制成0.03％羥苯乙酯和1％人血白蛋白為保護(hù)液，再將重組人干擾素α2b溶于保護(hù)液中使其濃度為100萬(wàn)IU/ml，然后經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾除菌，最后分裝。
實(shí)施例3 重組人干擾素α2b滴鼻劑(300萬(wàn)IU/ml)制備組分重組人干擾素α2b300萬(wàn)IU人血白蛋白 2％
羥苯乙酯0.05％制備方法先用生理鹽水配制成0.05％羥苯乙酯和2％人血白蛋白為保護(hù)液，再將重組人干擾素α2b溶于保護(hù)液中使其濃度為300萬(wàn)IU/ml，然后經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾除菌，最后分裝。
試驗(yàn)實(shí)施例1 重組人干擾素α2b滴鼻劑急性毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察重組人干擾素α2b滴鼻劑一次性于鼻腔粘膜給藥后，由于粘膜吸收所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。
實(shí)驗(yàn)材料1、藥品重組人干擾素α2b滴鼻劑，50萬(wàn)IU/ml，由深圳海王英特龍生物公司提供。
2動(dòng)物Wistar大鼠20只雌雄各半，體重250-300g，由吉林省藥品檢驗(yàn)所動(dòng)物室提供，合格證編號(hào)10-1009。
實(shí)驗(yàn)方法1、劑量選擇重組人干擾素α2b滴鼻劑臨床每日擬用劑量為50萬(wàn)IU/人，在預(yù)試的基礎(chǔ)上，選高于臨床劑量100倍量。
2、分組、給藥及觀察上述大鼠均分為生理鹽水組和重組人干擾素α2b滴鼻劑組。將滴鼻劑滴在鼻腔中，5000萬(wàn)IU/只，1次給藥，即刻觀察動(dòng)物狀態(tài)、毛發(fā)、食欲、四肢活動(dòng)、精神狀態(tài)、死亡情況及體重變化，連續(xù)14日。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、給藥7日之內(nèi)，生理鹽水組及重組人干擾素α2b滴鼻劑組動(dòng)物毛發(fā)、食欲、四肢活動(dòng)、精神狀態(tài)均無(wú)異常，無(wú)一死亡，體重亦無(wú)明顯差別，見(jiàn)下表。
表 重組人干擾素α2b滴鼻劑及生理鹽水組急毒試驗(yàn)體重變化(x±s，n＝5)

2、重組人干擾素α2b滴鼻劑臨床擬用量為每日50萬(wàn)IU/人，若人體重按60kg計(jì)算，即8333IU/kg；而急毒試驗(yàn)證明，給藥量5000萬(wàn)IU/只，未出現(xiàn)毒性反應(yīng)，若大鼠體重按0.27kg計(jì)算，即18518萬(wàn)IU/kg相當(dāng)于臨床劑量的22000倍，所以臨床用藥非常安全。
試驗(yàn)實(shí)施例2 大鼠機(jī)體免疫力IgG(g/L)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康臋z測(cè)重組人干擾素α2b滴鼻劑對(duì)大鼠免疫力作用，為臨床用藥效性提供依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)材料1、藥品重組人干擾素α2b滴鼻劑，50萬(wàn)IU/ml，由深圳市海王英特龍生物技術(shù)股份有限公司提供。
2、動(dòng)物Wistar大鼠40只，雌雄各半，體重200-300g，由吉林省藥品檢驗(yàn)所動(dòng)物室提供。
實(shí)驗(yàn)方法1、動(dòng)物分組、給藥劑量將大鼠隨機(jī)分為A、B二組，A組為滴鼻生理鹽水對(duì)照組，20只；B組為滴鼻重組人干擾素α2b滴鼻劑試驗(yàn)組，20只，連續(xù)滴鼻7周時(shí)間，3天1次，每次50萬(wàn)IU/kg。
2、檢測(cè)大鼠IgG(g/L)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

A、B組比較P＜0.01結(jié)論經(jīng)過(guò)對(duì)重組人干擾素α2b滴鼻劑用于大鼠免疫學(xué)指標(biāo)測(cè)定和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，有顯著性差異，表示提高了機(jī)體免疫力。
試驗(yàn)實(shí)施例3 小鼠機(jī)體免疫力IgM(g/L)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康臋z測(cè)重組人干擾素α2b滴鼻劑對(duì)小鼠免疫力作用，為臨床用藥效性提供依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)材料1、藥品重組人干擾素α2b滴鼻劑，50萬(wàn)IU/ml，由深圳市海王英特龍生物技術(shù)股份有限公司提供。
2、動(dòng)物小鼠40只，雌雄各半，體重25-40g，由吉林省藥品檢驗(yàn)所動(dòng)物室提供。
實(shí)驗(yàn)方法1、動(dòng)物分組、給藥劑量將大鼠隨機(jī)分為A、B二組，A組為滴鼻生理鹽水對(duì)照組，20只；B組為滴鼻重組人干擾素α2b滴鼻劑試驗(yàn)組，20只，連續(xù)滴鼻3周時(shí)間，2天1次，每次50萬(wàn)IU/kg。
2、檢測(cè)小鼠IgM(g/L)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

A、B組比較P＜0.01結(jié)論經(jīng)過(guò)對(duì)重組人干擾素α2b滴鼻劑用于小鼠免疫學(xué)指標(biāo)測(cè)定和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，有顯著性差異，表示提高了機(jī)體免疫力。
權(quán)利要求
1.一種重組人干擾素α2b滴鼻劑，其中包含作為有效成份的重組人干擾素α2b，以及藥學(xué)上認(rèn)可的保護(hù)液，保護(hù)液選自人血白蛋白、羥苯乙酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的滴鼻劑，作為有效成份的重組人干擾素α2b含量是10萬(wàn)IU/ml-300萬(wàn)IU/ml，所述的保護(hù)液中，人血白蛋白重量百分比0.5％～2％、羥苯乙酯重量百分比0.01％～0.05％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的滴鼻劑的制法，先用生理鹽水配制成0.01％～0.05％羥苯乙酯和0.5％～2％人血白蛋白為保護(hù)液，再將重組人干擾素α2b溶于保護(hù)液中使其濃度為10萬(wàn)IU～300萬(wàn)IU/ml，然后經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾除菌，最后分裝。
全文摘要
本發(fā)明涉及重組人干擾素α2b滴鼻劑及其制備方法，其中藥用重組人干擾素α2b含量在10萬(wàn)－300萬(wàn)IU/ml，保護(hù)液中人血白蛋白重量百分比0.5％～2％、羥苯乙酯重量百分比0.01％～0.05％。上述組分先用生理鹽水配制成羥苯乙酯和人血白蛋白保護(hù)液，再將重組人干擾素α2b溶于保護(hù)液中使其濃度為10萬(wàn)IU/ml－300萬(wàn)IU/ml，然后經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾除菌，最后分裝。該滴鼻劑具有更有效的治療和預(yù)防嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥(SARS)、流感、乙肝、丙肝、病毒性心肌炎、多發(fā)性硬化癥等疾病的作用。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1539500SQ20041003673
公開(kāi)日2004年10月27日 申請(qǐng)日期2004年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月28日
發(fā)明者王妍, 柴向東, 劉麗軍, 李云富, 何凌冰, 王 妍 申請(qǐng)人:深圳市海王英特龍生物技術(shù)股份有限公司, 深圳市海王英特龍生物技術(shù)股份有限公