專利名稱：口服降纖酶腸溶膠囊的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，尤其是一種口服降纖酶腸溶膠囊。
背景技術(shù)：
心血管疾病是當代人類死亡的主要原因。腦血管病中，70％以上是腦血管梗死，加上心肌梗塞，腦、心血管供血不足，眼底血管、內(nèi)聽動脈及四肢血管阻塞，這類血栓疾病在中國每年的患病率超過1000萬人以上，需要進行疏通血管、溶化血栓治療。目前這類藥物需要量很大。
經(jīng)檢索得知，中國專利941 199983提出從蛇毒類凝血酶中提取的降纖酶注射液，是目前使用比較廣泛單一成分的制劑，雖然有效好療效，但必須靜脈點滴，也不能肌注，給使用帶來很大限制。尤其腦、心血管供血不足的防治和腦、心血管梗死恢復期的治療，病人對靜脈滴注都難以接受。另外注射液也不方便存放、運輸。
靜脈注射用降纖酶是從尖吻蝮蛇毒和白眉蝮蛇毒中的類凝血酶純化出的單一成分的制劑，每次只需使用5-15個酶單位，就能達到降纖、抗凝、溶解血栓的目的；過量則會出血；而用單一成分的降纖酶口服，由于消化酶的破壞，用量不夠則達不到抗凝、化栓作用，必須用靜脈注射量的20倍以上才能有作用，這樣每日用藥量需人民幣1000元左右，是難于推廣用于臨床的。
靜脈注射用降纖酶的提取方法只是收集了從7.8～9分時的降纖酶單一峰，其降纖酶單成分制劑酶收率只在1.2～1.8酶單位/mg，最高只能達到3單位/mg。只有獲得更多的酶活力單位，才能制成經(jīng)濟適用的降纖酶口服腸溶型劑，用于治療腦、心血管阻塞等疾病。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明提供一種口服降纖酶腸溶膠囊，它收取從7～15分時分離的降纖酶及同功酶，獲得更多的酶活力單位，能適應(yīng)口服制劑應(yīng)用的要求。
本發(fā)明提取尖吻蝮(含白眉蝮、江浙蝮)蛇毒類凝血中的降纖酶及多種同工酶，獲得了較高的酶活力單位，從而大大降低降纖酶的成本，每日只需5元左右人民幣的口服腸溶制劑，即可達到降纖、抗凝、溶栓的目的。
降纖酶是一種具有活性的小分子蛋白物質(zhì)，它比口服的免疫球蛋白分子量小，比口服的轉(zhuǎn)移因子分子量要大。所述兩種制劑經(jīng)實驗證實均能透過腸道部分吸收進入血液，發(fā)揮療效，并經(jīng)國家管理部門批準作為藥品進入市場。
降纖酶在中性偏堿性的條件下較為穩(wěn)定，為了減少胃酸和消化酶對它的分解，故采用了腸溶劑型。發(fā)明人經(jīng)動物實驗和部分臨床觀察，每日用口服降纖酶100～200酶單位后，可產(chǎn)生降纖、抗凝、溶栓作用，并顯著改善微循環(huán)作用。
本發(fā)明提供的口服降纖酶腸溶膠囊制劑，以新鮮立即凍干尖吻蝮蛇毒粉為原料，經(jīng)溶解、澄清、用分子篩、離子交換層析進行組份分離，把有效組分合并，脫鹽、濃縮、凍干，經(jīng)酶活性測定合格，即制成口服降纖酶腸溶膠囊原料藥，每粒腸溶膠囊含有降纖酶60-70酶單位的原料藥和賦形劑低分子右旋糖酐200mg。原料藥與賦形劑低分子右旋糖酐按1∶200的比例混均。
本發(fā)明用同樣的蛇毒降纖酶為原料，收集從7-15分時分離的降纖酶及同功酶，提高酶回收率，首次制成了口服腸溶制劑，用于治療腦、心血管閉塞性疾病，便于應(yīng)用及推廣，為國內(nèi)外首創(chuàng)。常規(guī)的降纖酶單成分制劑酶收率只在1.2-1.8酶單位/mg，最高只能達到3單位/mg。而本發(fā)明的工藝酶回收率可達到55～63單位/mg，較中國專利941199983的工藝產(chǎn)量提高20～30倍，由于大幅度的降低了成本，使口服蛇毒降纖酶型劑成為可行。


圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
圖2為現(xiàn)有注射用降纖酶的分析圖譜。
圖3為本發(fā)明提取的口服降纖酶分析圖譜。
具體實施例方式本發(fā)明以下結(jié)合實施例作進一步描述。
實施例1將檢驗合格的五步蛇毒粗毒凍干品10克，溶于100ml生理鹽水中，4℃冰箱過夜，使其充分溶解，按工藝程序逐步進行，最終獲得624000酶單位，平均62.4酶單位/mg，經(jīng)質(zhì)量檢測完全合格。
實施例2將五步蛇粗毒凍干品30克，溶于500ml生理鹽水中，4℃冰箱過夜，使其充分溶解，按上述工藝程序逐步進行，最終獲得1866600酶單位，平均62.22酶單位/mg，經(jīng)質(zhì)量檢測完全合格。
實施例3將五步蛇粗毒凍干品30克，溶于500ml生理鹽水中，4℃冰箱過夜，使其充分溶解，按上述工藝程序逐步進行，最終獲得1869000酶單位，平均62.30酶單位/mg，經(jīng)質(zhì)量檢測完全合格。
經(jīng)實驗驗證，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，有很好的重復性，根據(jù)質(zhì)檢項目均完全合格，HPLC高效液相分析圖譜也基本一致，有很好的重現(xiàn)性和可行性，見圖2。
實施例4取原料藥1克溶于生理鹽水100ml中，噴淋在低分子右旋糖酐200克上，攪拌均勻使原料藥液將賦形劑低分子右旋糖酐濕潤呈糊狀，置于低溫干燥后，用天平稱量干燥固體粉末分裝于1000粒4號腸溶膠囊內(nèi)，每粒中含200mg，經(jīng)檢測每粒含62降纖酶酶單位。
實施例5取原料藥2克含溶于生理鹽水200ml中，噴淋在低分子右旋糖酐400克上，使原料液與賦形劑低分子右旋糖酐呈糊狀，置于低溫干燥后，分別裝入腸溶膠囊2000粒中，每粒200mg，經(jīng)檢測每粒含降纖酶61酶單位。
實施例6取原料藥3克溶于生理鹽水300ml中，噴淋在低分子右旋糖酐600克上，使原料藥與賦形劑低分子右旋糖酐呈糊狀，經(jīng)低溫干燥后，分別裝入腸溶膠囊3000粒中，每粒200mg，測酶活力，每粒中含降纖酶60.5酶單位。
實施例7取原料藥1.5克含溶于生理鹽水100ml中，噴淋在低分子右旋糖酐300克上，使呈糊狀，冷凍干燥后，分別裝入腸溶膠囊1500粒中，每粒200mg，經(jīng)檢測每粒內(nèi)含降纖酶61.5酶單位。
實施例8取原料藥10克溶于生理鹽水600ml中，噴淋在低分子右旋糖酐1000克上，使呈糊狀，冷凍干燥后，分別裝入4號腸溶膠囊1000粒中，每粒含200mg，經(jīng)檢測每粒含降纖酶60酶單位。
本發(fā)明經(jīng)多次實驗驗證，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，有很好的重復性，根據(jù)質(zhì)檢項目均完全合格，從圖2所示的HPLC分析圖譜也基本一致，有很好的重現(xiàn)性和可行性。
本發(fā)明的口服降纖酶腸溶膠囊與常規(guī)注射用降纖酶的區(qū)別。
1、靜脈注射用降纖酶(Defibraes)主峰為7.8-9min之間，僅單一峰?？诜道w酶在7-15min之間，其中主要由三個峰組成，主峰的出峰時間相同。
2、分子量測定，注射用降纖酶分子量在35000±500道爾頓，本發(fā)明多同工酶分子量在28000～70000道爾頓之間。
本發(fā)明提供的口服降纖酶腸溶膠囊的穩(wěn)定性、口服治療血栓性疾病有效性安全性及可行性資料1)穩(wěn)定性2002年3月制成的降纖酶腸溶膠囊。在昆明室溫12-30℃條件下儲藏至2003年3月，原每粒含62酶活力單位，實測為61.2酶單位，至2004年2月實測為60酶單位，在室溫儲藏二年，酶活力基本穩(wěn)定。
2)安全性①急性毒性試驗 用小白鼠60只，分成6組，每組10只，結(jié)果a.用人體用量的33.3倍，灌胃7天，無1只死亡。
b.用人體用量的66倍、132倍、416倍、832倍、1664倍灌胃7天，仍無一死亡，處死動物并剝離皮膚，未見出血。
②長期毒性試驗，用人體用量的40倍劑量，分別給160只大白鼠喂食三個月后，白細胞、肝功、腎功能均無異常變化。從以上試驗看，超人體量1000多倍無出血副作用，40倍量無肝、腎功能損害。
3)有效性①用人體20倍對家兔灌胃七天后，血液學的改變。N＝20指標TT PT APTT 血漿粘度 FIB(g/L)用藥前 11.5 7.425.2 2.06 2.91用藥后3天 15.2 7.726.0 1.72 2.42用藥后7天 18.2 8.431.00 1.61 1.76P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05＜0.05＜0.05②用人體用量40倍，對家兔灌胃7天后。N＝10指標TT PT APTT 血漿粘度用藥前 15.76.724.1 1.6用藥后3天 20.07.428.9 1.42用藥后7天 24.08.336.4 1.3P值與用藥前比 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05＜0.05
從上述看，出血時間，凝血酶原時間均顯著延長，說明抗凝血效應(yīng)，血粘度下降，血液稀釋流動加速，活血效果好，纖維蛋白原下降，有降纖溶解血栓、防止血栓形成功能。
③10例血栓病志愿者用本發(fā)明的口服降纖酶腸溶膠囊，每粒含60酶單位，每日三次，連用三個月，用藥前，纖維蛋白原為3.26g/L，一個月后為2.08g/L，全血粘度(低切)血漿粘度均下降，用藥后TT、PT、APTT均延長，血象肝腎功能ALT AST BUN.CR均無變化，且深靜脈原血栓形成處血栓再通暢。上述資料說明，血栓病人應(yīng)用后，有抗纖、抗凝、溶栓作用；肝腎功能血象均無變化。
以上資料證明，本發(fā)明的口服蛇毒降纖酶制劑治療血栓性疾病是可行的，安全的，有效的，有可能成為一個治療腦、心、四肢、眼底、內(nèi)耳血栓疾病的新藥。
權(quán)利要求
1.口服降纖酶腸溶膠囊，以新鮮立即凍干尖吻蝮蛇毒粉為原料，經(jīng)溶解、澄清、用分子篩、離子交換層析進行組份分離，把有效組分合并，脫鹽、濃縮、凍干，經(jīng)酶活性測定合格，即制成口服精制降纖酶原料藥，其特征在于每粒腸溶膠囊含有降纖酶60-70酶單位的原料藥和賦形劑低分子右旋糖酐200mg。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腸溶膠囊，其特征在于原料藥與賦形劑低分子右旋糖酐按1∶200的比例混均。
全文摘要
一種口服降纖酶腸溶膠囊，每粒腸溶膠囊含有降纖酶60－70酶單位的原料藥和賦形劑低分子右旋糖酐200mg，原料藥與賦形劑低分子右旋糖酐按1∶200的比例混均，本發(fā)明用蛇毒降纖酶為原料，收取從7～15分時分離的降纖酶及同功酶，獲得更多的酶活力單位，能適應(yīng)口服制劑應(yīng)用的要求，首次制成了口服腸溶制劑，用于治療腦、心血管閉塞性疾病，大大降低降纖酶的成本，每日只需5元左右人民幣即可達到降纖、抗凝、溶栓的目的。便于應(yīng)用及推廣。
文檔編號A61P9/00GK1562358SQ20041002227
公開日2005年1月12日 申請日期2004年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月7日
發(fā)明者李鳳英, 楊靖華, 沈居仁 申請人:楊靖華