專利名稱：注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有蟾蜍提取物的藥物制劑，特別涉及含有蟾蜍提取物的注射用藥物制劑。
背景技術(shù)：
蟾蜍為兩棲綱無尾目動物，有250多種，分布很廣，其中數(shù)量較多的為中華大蟾蜍和黑眶蟾蜍。其皮膚、皮膚腺及耳后腺的提取物，味甘、辛、性溫。有排毒、消腫、強心、止痛功能。主治惡瘡，癰疽、咽喉腫痛等癥。
蟾蜍提取物主要成分強心甙為蟾酥毒，其水解后得10余種蟾毒配基。如華蟾毒靈、華蟾毒素、華蟾毒配基、羥基華蟾毒配基、蟾毒靈。吲哚類衍生物蟾酥堿、蟾素甲堿、5-羥色胺、腎上腺素等。詳見(現(xiàn)代中藥藥理學，王本祥主編，天津科學技術(shù)出版社。1997年，P1411)。
蟾蜍脂性提取物對多種癌癥有一定的臨床效果，尤對淋巴細胞性白血病(蔣開先主編，蟾酥的臨床與研究，中醫(yī)文獻，海洋出版社，北京，1994，P58)。
蟾蜍的水性提取物對體外培養(yǎng)的人神經(jīng)膠原瘤，肝癌，白血病和子宮癌等細胞有抑制作用(張瑜瑤，許長照蟾酥水溶性總成分的實驗研究，南京中醫(yī)藥學院學報，1998，7(2)33)(楊素娟，蟾蜍及蟾酥的臨床應(yīng)用及研究進展，中醫(yī)藥雜志，1992，9(5)2)。
用蟾蜍提取物脂蟾毒配基制成的注射液在日本已有產(chǎn)品，主要用于呼吸興奮劑，可以增加心臟博出量，加大換氣量，有強心升壓的功效。國內(nèi)有中華大蟾蜍皮水溶性提取物的水針，華蟾素注射液、蟾酥注射液，主要功能為解毒消炎，作為急性、慢性化膿性感染，抗腫瘤，抗癌輔助用藥，有改善全身狀態(tài)，恢復(fù)細胞免疫功能，提高白血球水平等作用。蟾蜍的油、水提取物的主要作用是強心，但也是主要的毒性作用部分。因其有效濃度較低，限制了它的使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑及其制備方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的使用具有局限性的缺陷。
本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思是這樣的脂質(zhì)體可以包裹脂溶性和水溶性兩種類型藥物，它是具有多種功能的定向性的藥物載體。脂質(zhì)體本身對人體毒性小，并且脂質(zhì)體對人體無免疫抑制作用，在體內(nèi)使藥物具有定向分布的靶向性特征。藥物被包封于脂質(zhì)體，能夠降低藥物毒性。因為藥物被脂質(zhì)體包封后，主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬細胞所攝取，在肝、脾和骨髓等網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞較豐富的器官中集中，而藥物在心臟和腎臟中的累積量比游離藥物低得多。因此，如將那些對心臟、腎臟有毒性的藥物，尤其是對正常細胞有毒性的抗腫瘤藥物，包封成脂質(zhì)體可以明顯降低藥物的毒性。
為此，發(fā)明人經(jīng)過大量試驗，開發(fā)研究了一種以脂質(zhì)體為載體的注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑，以滿足醫(yī)療領(lǐng)域的需要。
本發(fā)明的注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑包括治療有效量的蟾蜍提取物和卵磷脂以及膽固醇，其中卵磷脂與膽固醇之間的用量為卵磷脂3～20份，膽固醇0～10份，重量份；優(yōu)選的組分和重量份數(shù)包括膽固醇 1份卵磷脂 3～20份蟾蜍提取物 0.1～10份膽固醇的作用是使脂質(zhì)體的膜強度增加，以增加脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，卵磷脂的作用是提供雙分子層，包容藥物，兩者作為脂質(zhì)體制劑的載體；
所說的蟾蜍提取物包括蟾蜍脂溶性提取物或/和水溶性提取物。
所述及的脂溶性提取物指的是采用非水溶性有機溶劑從蟾蜍中提取的有效成分，提取方法在眾多文獻中已有詳細報道，本發(fā)明不再贅述。
所述及的水溶性提取物以水為溶劑，從蟾蜍中提取的有效成分，主要為吲哚類生物堿及其衍生物，在前述的文獻中已有詳細的介紹，提取方法在眾多文獻中已有詳細報道，本發(fā)明不再贅述。也可采用市售產(chǎn)品。
蟾毒靈＜bfifalin簡稱BF)，是蟾蜍的脂溶性提取物抗舯瘤作用主要成分之一，能延緩大鼠植入腫瘤的生長速率和延長大鼠的生存期。蟾毒靈能選擇性的誘導(dǎo)人白血病病細胞分化和調(diào)亡，體外細胞培養(yǎng)證明，蟾毒靈在10-7～10-5M時誘導(dǎo)白血病細胞調(diào)亡，在10-9～10-8M時則誘導(dǎo)白血病細胞分化，并可恢復(fù)臨床上耐維甲酸白血病細胞對維甲酸的敏感性。與其它抗腫瘤藥合用，可提高腫瘤細胞對抗腫瘤藥物的敏感性。盡管蟾毒靈的上述作用機制尚不十分清楚，但可能與蟾毒靈可以改變細胞中促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活性有關(guān)，進而影響某些癌基因的表達水平。
蟾毒靈為疏水性藥物，小鼠腹腔注射LD50為2.2mg/kg，目前尚未單獨作為藥物應(yīng)用。
所說的吲哚類生物堿及其衍生物對動物移植腫瘤的抑制率為30～63％(沙靜珠，毛洪奎，華蟾素注射液，藥學通報，1987，22(7)438)，臨床上已用于肝癌等消化系腫瘤，有較好的療效(宣典發(fā)，周敏，華蟾素治療原發(fā)性肝癌69例近期療效初步觀察，中西醫(yī)結(jié)合療法，1985，5(2)126)，張振己等發(fā)現(xiàn)華蟾素對三種消化道腫瘤有直接的殺傷作用，效果與順鉑相當。作用部位在細胞內(nèi)的DNA，(張振己等，華蟾素對三種消化道腫瘤細胞殺傷機制研究，中藥藥理與臨床，1995，15(5)實驗研究。
按照本發(fā)明，如以蟾蜍水溶性提取物為活性成分時，最好在上述組合物中再加入右旋糖酐或甘露醇10～30份，以作為凍干品的支架，形成良好的制劑。
以蟾蜍脂溶性提取物為活性成分時上述注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑的制備方法包括如下步驟取卵磷脂，膽固醇和蟾蜍脂溶性提取物如蟾毒靈溶解于有機溶劑，再于10～50℃的溫度下減壓除去有機溶劑，加入注射用水于超聲水浴中處理5～60分鐘，高壓均化，過濾，采用常規(guī)的方法冷凍干燥即可。
所述及的有機溶劑包括氯仿或乙醇，優(yōu)選氯仿。
以蟾蜍水溶性提取物為活性成分時上述注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑的制備方法包括如下步驟卵磷脂、膽固醇用乙醇溶解后，逐滴滴入通N2的急速攪拌的溶解有蟾蜍脂水性提取物和右旋糖酐或甘露醇的水溶液，然后采用常規(guī)的方法冷凍干燥即可。
如同時以蟾蜍脂溶性提取物和蟾蜍水溶性提取物為活性成分時，述注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑的制備方法包括如下步驟(1)將膽固醇，卵磷脂和蟾蜍脂溶性提取物溶于有機溶劑如氯仿中，在10～50℃水浴上加熱，除去氯仿得含藥磷脂膜；(2)將卵磷脂、膽固醇用乙醇溶解后，逐滴滴入通N2的急速攪拌的溶解有蟾蜍脂水性提取物和右旋糖酐或甘露醇的水溶液；(3)將步驟(1)和步驟(2)的產(chǎn)物加入水中，攪拌下通N2使溶解，高壓均化，過0.45u，0.2u的濾膜后，采用常規(guī)的方法凍干即可。
本發(fā)明的制劑可用于治療肝癌，肺癌，消化道腫瘤或白血病等疾病，一般劑量＞3μg/kg體重，可根據(jù)病情和病人情況決定，通過靜脈注射。
試驗數(shù)據(jù)證明，本發(fā)明的制劑毒性明顯低于現(xiàn)有的產(chǎn)品，治療效果良好，并具有靶向治療效果，產(chǎn)品粒徑分布均勻。


圖1為以蟾毒靈為活性成分的脂質(zhì)體粒徑分布。
具體實施例方式
實施例1處方卵磷脂5克，膽固醇1克；蟾毒靈1克。
制備工藝取卵磷脂，膽固醇和蟾蜍脂溶性提取物如蟾毒靈溶解于18ml氯仿，再于40℃的溫度下減壓除去氯仿，加入注射用水100ml，于超聲水浴中處理15分鐘，高壓均化，過濾，采用常規(guī)的方法冷凍干燥。
其粒徑分布如圖1，圖1為用激光衍射法測得的粒徑分布圖，從圖可見，平均粒徑為80nm，未見大于200nm的粒子。
實施例2處方卵磷脂8克，膽固醇1克，蟾蜍水溶性提取物0.5克，右旋糖酐10克。
制備工藝卵磷脂、膽固醇用15ml乙醇溶解后，逐滴滴入通N2的急速攪拌的溶解有蟾蜍脂水性提取物和右旋糖酐水溶液200ml，用5u，0.45u，0.2u的濾膜過濾，然后采用常規(guī)的方法冷凍干燥即可。用激光衍射法測得的粒徑分布為平均粒徑為80nm，未見大于500nm的粒子。
實施例3處方(A)部分卵磷脂9克，膽固醇2克，蟾毒靈1克，脂蟾毒配基0.5克，華蟾毒精0.14克。
(B)部分卵磷脂5克，膽固醇1克，蟾蜍水溶性提取物0.5克，右旋糖酐10克或甘露醇20克。
制備工藝(1)將(A)部分的全部材料溶于氯仿中，在40℃水浴上減壓，除去氯仿得含藥磷脂膜；(2)將卵磷脂、膽固醇用乙醇溶解后，逐滴滴入通N2的急速攪拌的溶解有蟾蜍脂水性提取物和右旋糖酐水溶液或甘露醇水溶液；(3)將步驟(1)和步驟(2)的產(chǎn)物加入水中，攪拌下通N2使溶解，高壓均化，過0.45u，0.2u的濾膜后，采用常規(guī)的方法凍干即可。
用激光衍射法測得的平均粒徑為70～80nm，99.5％的粒子小于200nm。
實施例4實施例1的蟾毒靈脂質(zhì)體的急性毒性游離蟾毒靈的LD501.64(1.5～1.8)；實施例1的LD503.68(3.4～3.9)蟾毒靈脂質(zhì)體的毒性明顯下降，可能由于其在網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)皮系統(tǒng)分布多，心臟處少，淋巴系統(tǒng)濃度高，主要濃度降低有關(guān)。因此提示可能會減少其心臟毒性，而提高抗腫瘤作用。
實施例5對實施例1的蟾毒靈脂質(zhì)體的體內(nèi)抗小鼠Lewis肺癌的效果進行試驗，結(jié)果見下表

實施例6實施例2的制劑的急性毒性
蟾蜍水提物的LD501.3mg/kg；實施例2的LD504.6mg/kg。
由此可見，實施例2的脂質(zhì)體毒性明顯下降，有利于抗腫瘤治療。
實施例7實施例3的制劑的穩(wěn)定性試驗。
將實施例3的復(fù)合制劑置于40℃，75％RH的條件下，不同時間后的變化情況如下表。

穩(wěn)定性試驗表明，實施例3的制劑在3各月內(nèi)是穩(wěn)定的。
權(quán)利要求
1.注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑，其特征在于包括治療有效量的蟾蜍提取物和卵磷脂以及膽固醇，其中卵磷脂與膽固醇之間的用量為卵磷脂3～20份，膽固醇0～10份，重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其特征在于組分和重量份數(shù)包括膽固醇 1份卵磷脂 3～20份蟾蜍提取物 0.1～10份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制劑，其特征在于，所說的蟾蜍提取物包括蟾蜍脂溶性提取物或/和水溶性提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制劑，其特征在于，還包括右旋糖酐或甘露醇10～30份，所說的蟾蜍提取物為蟾蜍水溶性提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其特征在于，還包括右旋糖酐或甘露醇10～30份，重量份。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟取卵磷脂，膽固醇和蟾蜍提取物溶解于有機溶劑，減壓除去有機溶劑，加入注射用水于超聲水浴中處理分鐘，高壓均化，過濾，采用常規(guī)的方法冷凍干燥即可；所述及的有機溶劑包括氯仿或乙醇中的一種，所述的蟾蜍提取物為脂溶性提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟以蟾蜍脂水性提取物為活性成分時上述注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑的制備方法包括如下步驟卵磷脂、膽固醇用乙醇溶解后，滴入通N2的攪拌的溶解有蟾蜍提取物和右旋糖酐或甘露醇的水溶液，然后采用常規(guī)的方法冷凍干燥即可；所說的蟾蜍提取物為水溶性蟾蜍提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)將膽固醇，卵磷脂和蟾蜍脂溶性提取物溶于有機溶劑，10～50℃加熱，除去有機溶劑，得含藥磷脂膜；(2)將卵磷脂、膽固醇用乙醇溶解后，滴入通N2的攪拌的溶解有蟾蜍脂水性提取物和右旋糖酐或甘露醇的水溶液；(3)將步驟(1)和步驟(2)的產(chǎn)物加入水中，攪拌下通N2使溶解，高壓均化，過濾膜后，采用常規(guī)的方法凍干即可。
全文摘要
本發(fā)明公開了注射用蟾蜍提取物脂質(zhì)體制劑及其制備方法。包括治療有效量的蟾蜍提取物和卵磷脂以及膽固醇。試驗數(shù)據(jù)證明，本發(fā)明的制劑毒性明顯低于現(xiàn)有的產(chǎn)品，治療效果良好，并具有靶向治療效果，產(chǎn)品粒徑分布均勻。可用于治療多種腫瘤疾病。
文檔編號A61P35/00GK1647799SQ20041001606
公開日2005年8月3日 申請日期2004年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月29日
發(fā)明者賀芬, 侯惠民 申請人:上海現(xiàn)代藥物制劑工程研究中心有限公司