專利名稱：一種羥基喜樹堿片劑的制備方法及口服應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于抗腫瘤藥羥基喜樹堿片劑的制備方法，具體涉及人體可吸收的羥基喜樹堿片劑的制備方法及口服應(yīng)用。
背景技術(shù)：
羥基喜樹堿是我國特有植物喜樹(Camptotheca acuminate Decsne)的果實(shí)中提取的天然植物堿，是迄今為止唯一的一類作用于拓?fù)洚悩?gòu)酶I(TOPO I)的抗癌藥，它能夠抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I(TOPO I)，造成DNA單鏈斷裂，抑制DNA的復(fù)制，作用于細(xì)胞的S期，同時(shí)可以抑制腫瘤細(xì)胞周圍的新生血管的形成，誘導(dǎo)癌細(xì)胞調(diào)亡，最終導(dǎo)致癌細(xì)胞的死亡。
羥基喜樹堿具有抗癌譜廣，療效確切的特點(diǎn)。目前國內(nèi)臨床上使用的有注射液和凍干粉針劑，廣泛用于肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、頭頸部腫瘤、肺癌、白血病的治療。但是注射劑使用時(shí)必須在醫(yī)生或護(hù)士的操作下才能完成。因此羥基喜樹堿片劑的上市必然給腫瘤患者提供便利。
由于羥基喜樹堿不溶于水和酯溶性差等特點(diǎn)，未開環(huán)的羥基喜樹堿(C-HCPT)的直接壓片，人體口服后藥物難以進(jìn)入血液，因此，羥基喜樹堿(C-HCPT)按常規(guī)方法制備的片劑在人體口服后血藥濃度極低，即進(jìn)行生物利用度試驗(yàn)時(shí)其生物利用度偏低。難以達(dá)到臨床用藥的療效。
現(xiàn)發(fā)明的“開環(huán)方法”先使羥基喜樹堿內(nèi)酯環(huán)打開，羥基喜樹堿則以羧酸鹽形式(O-HCPT)溶解于水，再制成的片劑經(jīng)人體口服后血藥濃度明顯提高，生物利用度明顯提高，藥物進(jìn)入血液后，受血液PH值影響，羥基喜樹堿的羧酸鹽形式(O-HCPT)又環(huán)合成內(nèi)酯形式，從而達(dá)到抑制腫瘤的目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服羥基喜樹堿(C-HCPT直接壓片，人體口服幾乎不吸收的問題，提供一種能提高生物利用度的羥基喜樹堿片劑的制備方法。這種方法制得的羥基喜樹堿片供人體口服。
1、羥基喜樹堿片劑其特征在于由以下原輔料組成(均為重量百分比)羥基喜樹堿 2-10％淀粉10-40％微晶纖維素 10-40％氨基乙酸4-20％羧甲淀粉鈉 2-8％硬酯酸鎂0.2-0.5％
2、制備羥基喜樹堿片劑的原料—羥基喜樹堿必須先行處理其特征是先將羥基喜樹堿(酯型結(jié)構(gòu)C-HCPT)的內(nèi)酯環(huán)打開，使其成為羧酸鹽形式(O-HCPT)，具體方法是將羥基喜樹堿采用醫(yī)學(xué)上可接受的堿液(氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液)，使其溶解，然后加入PH值調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)PH值9.0-9.5，裝盤置冷凍干燥機(jī)中，在-55℃真空度為0.01mbar的條件下，冷凍干燥36小時(shí)，收集干燥物，得開環(huán)的羥基喜樹堿羧酸鹽(0-HCPT)。
3、所述堿液為氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液。其堿液濃度氫氧化鈉為0.1-1％(W/L)，碳酸鈉為0.5-2.0％(W/L)。
4、所述pH調(diào)節(jié)劑為氨基乙酸。
5、羥基喜樹堿片劑的制備方法，步驟如下(1)分別將處方中的輔料過80目篩，另制備4％的淀粉漿備用。
(2)分別將處方中的輔料(除硬酯酸鎂)混合均勻備用。
(3)將制備方法2的羥基喜樹堿羧酸鈉與上述(2)中的輔料按等遞增法充分混合均勻。
(4)用粘合劑4％的淀粉漿制成軟材，用40目篩制粒，顆粒于70℃干燥，并用40目篩整粒。
(5)顆粒加入處方量的硬酯酸鎂，混合均勻，壓片。
(6)用薄膜包衣劑包衣。
本羥基喜樹堿片劑組方合理，穩(wěn)定性好，經(jīng)包衣可防止產(chǎn)品氧化，延長藥品的有效期，也便于貯藏、運(yùn)輸和患者使用，所得的片劑含量、溶出度均符合國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，臨床上運(yùn)用于原發(fā)性肝癌、胃腸癌、膀胱癌、頭頸部腫瘤、肺癌、白血病等惡性腫瘤的治療。
按上述方法制備的羥基喜樹堿片劑經(jīng)人體口服生物利用度試驗(yàn)證實(shí)，其生物利用度達(dá)31.95％(26.4～35.8)，時(shí)滯短(0.14h)，體內(nèi)消除半衰期6.17h，口服后2～3h達(dá)最高濃度，6h仍能維持較高濃度。而按常規(guī)方法制備的羥基喜樹堿片劑(沒有打開內(nèi)酯環(huán))的口服生物利用度試驗(yàn)證實(shí)其物利用度只有7％。本發(fā)明的羥基喜樹堿片劑的制備方法，其人體口服生物利用度是常規(guī)方法制備的羥基喜樹堿片的4.8倍。
四

羥基喜樹堿片制備工藝流程圖五、具體實(shí)施方案實(shí)施例1羥基喜樹堿 2％2％碳酸鈉 適量淀粉 35％微晶纖維素 35％
氨基乙酸 22％羧甲基淀粉鈉 5.7％硬酯酸鎂 0.3％羥基喜樹堿片劑的制備方法，步驟如下(1)分別將處方中的淀粉350克、微晶纖維素350克、羧甲基淀粉鈉57克分別過80目篩，另制備4％的淀粉漿備用。
(2)分別將處方中的輔料(除硬酯酸鎂)混合均勻備用。
(3)將羥基喜樹堿加2％的碳酸鈉溶液適量使其溶解，加入氨基乙酸調(diào)節(jié)PH值9-9.5，裝盤置冷凍干燥機(jī)中，在-55℃真空度為0.01mbar的條件下，冷凍干燥36小時(shí)，收集干燥物，得開環(huán)的羥基喜樹堿羧酸鹽(0-HCPT)。將干燥物與(2)中的輔料按等遞增法充分混合均勻。
(4)將粘合劑用4％的淀粉漿制成軟材，用40目篩制粒，顆粒于70℃干燥并用40目篩整粒。
(5)顆粒加入處方量的硬酯酸鎂，混合均勻，壓片。約10000片。
(6)用薄膜包衣劑包衣。
實(shí)施例2羥基喜樹堿5％0.8％氫氧化鈉 適量淀粉 34.5％微晶纖維素34.5％氨基乙酸 20％羧甲基淀粉鈉 5.7％硬酯酸鎂 0.3％羥基喜樹堿片劑的制備方法，步驟如下(1)分別將處方中的輔料淀粉414克、微晶纖維素414克、羧甲基淀粉鈉68.4克分別過80目篩，另制備4％的淀粉漿備用。
(2)分別將上述輔料(除硬酯酸鎂)混合均勻備用。
(3)將羥基喜樹堿60克加0.8％的氫氧化鈉溶液適量使其溶解，加入氨基乙酸調(diào)節(jié)PH值9-9.5，裝盤置冷凍干燥機(jī)中，在-55℃真空度為0.01mbar的條件下，冷凍干燥36小時(shí)，收集干燥物，得開環(huán)的羥基喜樹堿羧酸鹽(O-HCPT)。將干燥物與(2)中的輔料按等遞增法充分混合均勻。
(4)將粘合劑用4％的淀粉漿制成軟材，用40目篩制粒，顆粒于70℃干燥并用40目篩整粒。
(5)顆粒加入3.6克的硬酯酸鎂，混合均勻，壓片。約12000片。
(6)用薄膜包衣劑包衣。
羥基喜樹堿(HCPT)片劑人體生物利用度試驗(yàn)廣州中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤防治中心試驗(yàn)室 李蘇目的初步測定HCPT的生物利用度方法1、病例入選標(biāo)準(zhǔn)1)經(jīng)病理和細(xì)胞學(xué)證實(shí)初治的晚期惡性腫瘤；2)年齡18～40歲；3)性別男性4)體力狀況0-1級(ECOG，詳見附件1)；5)體重在標(biāo)準(zhǔn)體重±10％范圍內(nèi)，同一批受試者懸殊不能過大；標(biāo)準(zhǔn)體重＝[身高(cm)-80]×0.7或標(biāo)準(zhǔn)體重＝[身高(cm)-170]×0.6+62；6)粒細(xì)胞(ANC)＞2.0×109/L或WBC＞4.0×109/L，血小板(pt)＞100×109/L；血紅蛋白＞9g/dl；7)未有腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)ALT＜正常上限2倍，或有肝轉(zhuǎn)移但ALT＜正常上限5倍；8)血Cr＜正常上限1.5倍；9)以往治療停止＞30天；10)預(yù)計(jì)生存期＞3個(gè)月；11)病人同意參加本研究；2、儀器與試劑儀器Agilent 1100高效液相色譜系統(tǒng)，包括四元泵，熒光檢測器，自動樣器；試劑甲醇、乙腈Fisher公司的色譜純，水為雙蒸水，其它試劑均為分析純試劑藥物來源羥基喜樹堿片劑、針劑、對照品由湖北李時(shí)珍藥業(yè)有限公司免費(fèi)提供。
3、劑量及用法生物利用度試驗(yàn)第一天靜脈給藥，羥基喜樹堿(HCPT)注射液，劑量12mg/m2，加入NaCL 250ml中靜脈滴注，1小時(shí)內(nèi)滴完。
第8天后口服給藥試驗(yàn)前禁食過夜10小時(shí)，于次日早晨空腹服用羥基喜樹堿片劑，用150～200ml溫開水送服，服藥2小時(shí)后方可再飲水，4小時(shí)后進(jìn)餐。(受試者服藥后應(yīng)避免劇烈運(yùn)動，亦不得長時(shí)間臥床，用藥及觀察期間不得使用放療、化療及其它生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。
3、測定羥基喜樹堿方法1)色譜條件色譜柱Varian SP-C18短柱(4mm×150mm)；流動相0.075mol/L醋酸胺緩沖液(PH6.4)-乙腈(78∶22)，含5mmol/L的磷酸三乙胺；檢測波長；發(fā)射波長550nm，激發(fā)波長362nm；流速1.000ml/min；柱溫室溫標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定精密稱取羥基喜樹堿內(nèi)酯對照品1.0mg，用乙腈-枸櫞酸(1∶1)溶解，用空白血漿稀釋，使最終濃度為2、5、10、25、50、75、100、250、500、750、1000、1500、2000ng/ml，取200ul加200ul的冷甲醇-乙腈(1∶1)震搖混勻，以10000rpm/min高速離心5min，取上清液20ul直接進(jìn)樣。
2)樣本的收集靜脈給藥于給藥前、給藥中30’、給藥后即刻、5’、30’、1h、2h、4h、8h、10h、16h抽血2ml置肝素試管中。
口服給藥于口服前、口服后30’、1h、1.5h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、12h、16h抽血2ml置肝素試管中。
3)樣本的測定同上結(jié)果1、標(biāo)準(zhǔn)曲線取濃度為2ng/ml～100ng/ml的7個(gè)點(diǎn)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到Y(jié)＝0.016+5.2×10-3X(r＝0.987)，取濃度為250ng/ml～2000ug/ml的7個(gè)點(diǎn)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到Y(jié)＝-3.30+9.27×10-3X(r＝0.993)2、穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取適量羥基喜樹堿內(nèi)酯對照品濃溶液，加入空白血漿中，使之成為含羥基喜樹堿10ng/ml的血樣品(提取制備方法同上)，測定羥基喜樹堿內(nèi)酯在48小時(shí)內(nèi)的含量。結(jié)果如下

可以看出，羥基喜樹堿內(nèi)酯對照液在48h內(nèi)可以保持穩(wěn)定，但在血漿中，只能在6h內(nèi)保持穩(wěn)定，日間穩(wěn)定性很差，所以本試驗(yàn)最好每天做隨形標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3、收率試驗(yàn)取低、中、高三個(gè)濃度的對照液與血樣品(5ng/ml、100ng/ml、2000ng/ml)作回收率試驗(yàn)

本方法適合HCPT藥代動力學(xué)的測定。
3、羥基喜樹堿片劑的生物利用度預(yù)試驗(yàn)病例數(shù)5例，年齡35-56y，男4例，女1例；鼻咽癌2例，肺癌2例，食管癌1例羥基喜素堿片劑口服后的血液濃度

羥基喜樹堿針劑(對照試驗(yàn))在病人血漿中的代謝情況，劑量與測定方法同上(12mg/m2，共15mg)，測得血藥濃度如下表

由此可初步判斷羥基喜樹堿片劑的生物利用度為AUC片劑/AUC針劑×100％＝(61.05/874.8)×100％＝7.0％
羥基喜樹堿(羧酸鈉型)片劑絕對生物利用度的臨床試驗(yàn)廣州中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤防治中心試驗(yàn)室 李蘇羥基喜樹堿(10-Hydroxycamptothecin，HCPT)是從我國特有的珙垌科植物喜樹中提取的一種抗腫瘤藥物。它特異的抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I而受到廣泛的研究，臨床前實(shí)驗(yàn)表明，本品對多種腫瘤包括胃腸道腫瘤(包括胰腺癌)、卵巢癌、原發(fā)性肝癌、膀胱癌、非小細(xì)胞肺癌等有效。大量文獻(xiàn)報(bào)道，喜樹堿類藥物不僅注射給藥有明確的療效，其口服用藥也有顯著的療效，如topotecan、CPT-11等。按國家新藥臨床研究批件(2001XL0588)，由中山大學(xué)腫瘤防治中心對武漢李時(shí)珍藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的羥基喜樹堿片劑進(jìn)行臨床試驗(yàn)。為便于確定口服片劑的適用劑量，進(jìn)行片劑生物利用度試驗(yàn)?，F(xiàn)已經(jīng)完成片劑的生物利用度的試驗(yàn)，總結(jié)如下一、試驗(yàn)?zāi)康拇_定羥基喜樹堿片劑的絕對生物利用度，藥代動力學(xué)行為及羥基喜樹堿片劑臨床適用劑量。
二、試驗(yàn)材料儀器Agilent 1100高效液相色譜系統(tǒng)，Agilent 1100四元泵，Agilent 1100熒光檢測器，presica 125A電子分析天平，PHSJ-3F用度(F)。

五、結(jié)果1、病例資料共入選病例數(shù)為8例，均為男性，年齡27～52y，體重均在標(biāo)準(zhǔn)體重的范圍之內(nèi)，鼻咽癌3例，肺癌2例，頭頸部腫瘤1例，肝癌2例(術(shù)后)。見表3表3 八例患者的病例資料

2、羥基喜樹堿針劑的體內(nèi)血藥濃度和藥代動力學(xué)參數(shù)將患者靜脈給HCPT后血藥濃度一時(shí)間曲線，如表4和圖1、2，代入3P8軟件進(jìn)行房室模型擬合，表明曲線呈明顯的雙相處置特征，經(jīng)過進(jìn)一步證明羥基喜樹堿在人體內(nèi)的藥動學(xué)符合二房室模型，并符合一級動力學(xué)消除。其主要藥動學(xué)參數(shù)見表5所示。
表48例患者注射HCPT后的血藥濃度

表58位患者體內(nèi)靜注HCPT的主要藥代動力學(xué)參數(shù)’

3、羥基喜樹堿片劑的體內(nèi)血藥濃度和藥代動力學(xué)參數(shù)患者按12mg/m2劑量口服HCPT后的血藥濃度一時(shí)間曲線如表6和圖3。其主要藥動學(xué)參數(shù)見表7所示?？诜﨟CPT的吸收為一級動力學(xué)吸收，口服吸收為消除的限速過程。
表6口服HCPT的血藥濃度

表7口服HCPT的主要藥代動力學(xué)參數(shù)

4、羥基喜樹堿片劑的生物利用度試驗(yàn)8例腫瘤患者空腹口服羥基喜樹堿片劑12mg/m2，其絕對生物利用度為26.4～35.8％，平均絕對生物利用度為31.95％±3.4％，CV為9.98％小于15％?？诜?-3小時(shí)達(dá)最高濃度，Cmax為169.7±56.8ug/L，至6小時(shí)仍維持較高濃度，C6為69.58ug/L，12小時(shí)的濃度大于10ug/L。各個(gè)病人的生物利用度(F)結(jié)果如表6表6 羥基喜樹堿片劑在病人體內(nèi)絕對生物利用度

六、討論羥基喜樹堿是喜樹堿(CPT)的同系物，與后者相比其抗癌活性及抗瘤譜增加，但毒性減少，大量的臨床試驗(yàn)表明對某些腫瘤有明確的療效。喜樹堿類藥物可特異的抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I，與其它類抗腫瘤藥物不存在交叉耐受性，而且與一些藥物如順鉑具有協(xié)同作用；對喜樹堿類同系物的研究和開發(fā)不斷出現(xiàn)，如CPT-11和Topotecan。
試驗(yàn)中，HCPT片劑口服吸收符合一級吸收動力學(xué)過程，時(shí)滯短(0.14h)，迅速達(dá)到有效治療濃度，平均Cmax為169.7ug/L，Tmax為2.37h，6h后仍維持較高濃度，12h濃度大于10ug/L，絕對生物利用度26.4～35.8％，與Topotecan片劑生物利用度(32～44％)相近?？诜r(shí)t1/2α為1.73h，t1/2β6.19h；靜注時(shí)t1/2α、t1/2β分別為0.39h和4.27h，對比兩給藥途徑，可見口服給要t1/2略呈后移現(xiàn)象，這可能與腸、肝循環(huán)重吸收存在，消化吸收及與胃排空速率的個(gè)體差異等因素有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究。
羥基喜樹堿I期臨床試驗(yàn)研究表明其注射劑推薦劑量為12mg/m2，連用5天，21天為1個(gè)療程，主要的劑量限制性毒性為骨髓抑制和腹瀉。該項(xiàng)研究發(fā)表后，有些醫(yī)院反映，推薦劑量偏高。估計(jì)與羥基喜樹堿水針劑穩(wěn)定性較差，儲存后易降解有關(guān)。其后我們曾對穩(wěn)定性較好的凍干粉針進(jìn)行適用性研究，結(jié)果以6mg/m2/日連續(xù)滴注五天為宜。我們研究的武漢李時(shí)珍藥業(yè)生產(chǎn)的羥基喜樹堿片劑生物利用度為26.4～35.8％，與ToPotecan片劑的生物利用度(32-44％)類似，達(dá)峰時(shí)間2～3h，可維持較高濃度至6h，口服12mg/m2后，12h生物利用度仍＞10ug/L。因此，推薦羥基喜樹堿片劑臨床實(shí)驗(yàn)劑量為6-10mg/m2/12h，口服連續(xù)5天為一個(gè)療程，相當(dāng)于每12小時(shí)口服2-3片為宜。
七、結(jié)論1)HCPT口服在體內(nèi)呈二室模型，吸收、消除為一級動力學(xué)過程，吸收為消除的限速過程。
2)HCPT片劑的平均絕對生物利用度為31.95％。
權(quán)利要求
1.一種人體可吸收的羥基喜樹堿片劑的制備方法其特征在于由以下原輔料組成(均為重量百分比)。羥基喜樹堿 2-10％淀粉10-40％微晶纖維素 10-40％氨基乙酸4-20％羧甲淀粉鈉 2-8％硬酯酸鎂0.2-0.5％
2.如權(quán)利要求1所述，制備羥基喜樹堿片劑的原料—羥基喜樹堿必須先行處理其特征是先將羥基喜樹堿(酯型結(jié)構(gòu)簡稱C-HCPT)的內(nèi)酯環(huán)打開，使其成為羧酸鹽形式(簡稱O-HCPT)，具體方法是取羥基喜樹堿采用醫(yī)學(xué)上可接受的堿液(氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液)將羥基喜樹堿溶解，然后加入PH值調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)PH值9.0-9.5，裝盤置冷凍干燥機(jī)中，在-55℃真空度為0.015mBar的條件下，冷凍干燥36小時(shí)，收集干燥物，得開環(huán)的羥基喜樹堿羧酸鹽(O-HCPT)。
3.如權(quán)利要求2的方法，其特征是所述堿液為氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液。其堿液濃度氫氧化鈉為0.1-1％(W/L)，碳酸鈉為0.5-2.0％(W/L)。
4.如權(quán)利要求1所述，羥基喜樹堿片劑的制備方法，步驟如下(1)分別將處方中的輔料過80目篩，另制備4％的淀粉漿備用。(2)分別將處方中的輔料(除硬酯酸鎂)混合均勻備用。(3)將權(quán)利要求書2中所得的羥基喜樹堿羧酸鈉與上述(2)中的輔料按等量遞增法充分混合均勻。(4)將粘合劑用4％的淀粉漿制成軟材，用40目篩制粒，顆粒于70℃干燥，并用40目篩整粒。(5)顆粒加入處方量的硬酯酸鎂，混合均勻，壓片。(6)用薄膜包衣劑包衣。
5.本片劑采用薄膜包衣，可防止產(chǎn)品氧化和吸潮。
6.本發(fā)明的方法得到的羥基喜樹堿鹽(O-HCPT)可供口服，用于治療肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、頭頸部腫瘤、肺癌、白血病的治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種羥基喜樹堿片劑的制備方法。本發(fā)明的目的在于克服羥基喜樹堿片直接壓片人體口服幾乎不吸收的難題，本發(fā)明采用醫(yī)學(xué)上可接受的堿溶液使羥基喜樹堿結(jié)構(gòu)中的內(nèi)酯環(huán)開環(huán)后再按常規(guī)制備片劑的方法，其方法制備的羥基喜樹堿片劑與沒有開環(huán)的羥基喜樹堿按常規(guī)方法制備的片劑相比，經(jīng)人體口服后測試血藥濃度計(jì)算，其生物利用度可提高約4.8倍。與國外口服抗腫瘤藥的生物利用度相當(dāng)。本發(fā)明為腫瘤患者使用羥基喜樹堿治療癌癥提供了方便。
文檔編號A61K31/475GK1695620SQ200410013138
公開日2005年11月16日 申請日期2004年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月12日
發(fā)明者陳秀珍, 肖文輝, 王群 申請人:黃石李時(shí)珍藥業(yè)集團(tuán)武漢李時(shí)珍藥業(yè)有限公司