專利名稱：喜樹堿、10－羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從天然物質(zhì)中提取有效成分領(lǐng)域，尤其涉及一種以2～40天喜樹幼苗或喜樹果實(shí)為原料，生產(chǎn)喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法。
背景技術(shù)：
喜樹堿(Camptothecin，CPT)，為淡黃色片狀結(jié)晶，分子式C20H16N2O4，分子量348.3。 喜樹堿分子結(jié)構(gòu)式10-羥基喜樹堿(10-Hydroxycamptothecin，HCPT)，為黃色棱柱狀結(jié)晶，分子式C20H16N2O5，分子量364.3。 10-羥基喜樹堿分子結(jié)構(gòu)式喜樹堿，是1966年由美國學(xué)者從我國特有樹種喜樹(Camptothecaacuminata)中提取得到的具有廣譜抗腫瘤活性的生物堿，并由此而命名。10-羥基喜樹堿是喜樹堿的天然衍生物，是我國廣泛臨床用的抗腫瘤藥物。此外，喜樹堿和10-羥基喜樹堿是目前已獲美國食品及藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)臨床應(yīng)用的喜樹堿類抗腫瘤藥物CPT-11(Irinotecan，用于治療直腸/結(jié)腸癌)、TPT(Topotecan，用于治療卵巢癌)的半合成前體化合物。
目前，喜樹堿一般從喜樹中提取得到，10-羥基喜樹堿主要經(jīng)由喜樹堿生物合成制備。
國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利局于1996年5月8日公開了一種喜樹堿的提取方法，該發(fā)明專利是以喜樹的果實(shí)或根皮為原料提取喜樹堿。它采用磨粉→水煮→煮液濃縮→膏狀物→乙醇分離樹膠雜質(zhì)→析出粗品→氯仿混合液多次重結(jié)晶得到產(chǎn)品的工藝路線。
1999年12月22日，國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利局公開了一種喜樹堿的生產(chǎn)方法，該發(fā)明專利以喜樹葉為主要原料，果實(shí)為輔助原料生產(chǎn)喜樹堿。它采用原料粉碎→乙醇滲漉→超臨界二氧化碳萃取剩余物質(zhì)→濃縮滲漉液和萃取液→大孔吸附樹脂柱層析→重結(jié)晶后得到產(chǎn)品的工藝路線。
2000年4月26日又公開了另外一種喜樹堿的生產(chǎn)方法，該發(fā)明專利涉及一種以喜樹葉及果實(shí)為原料，生產(chǎn)喜樹堿的工藝方法。它采用原料粉碎→乙醇及水滲漉→濃縮滲漉液→大孔吸附樹脂柱層析→重結(jié)晶后得到產(chǎn)品的工藝路線。
上述三種方法在以喜樹果實(shí)為原料生產(chǎn)喜樹堿時(shí)，均未考慮到原料中尚含有10-羥基喜樹堿(含量約為喜樹堿的10％)，提取純化后所得產(chǎn)品可創(chuàng)造相當(dāng)于喜樹堿產(chǎn)品的產(chǎn)值(10-羥基喜樹堿價(jià)格為喜樹堿的10倍以上)，因而造成了10-羥基喜樹堿資源的浪費(fèi)。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種以2～40天的喜樹幼苗或喜樹果實(shí)為原料，產(chǎn)品得率高、生產(chǎn)成本低的喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明以2～40天的喜樹幼苗或喜樹果實(shí)為原料經(jīng)粉碎→乙醇滲漉萃取→萃取液濃縮至濃水溶液→大孔吸附樹脂柱層析→不同溶劑解吸液濃縮分別得喜樹堿、10-羥基喜樹堿粗品→分別重結(jié)晶后得喜樹堿、10-羥基喜樹堿的工藝路線。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1、2～40天的喜樹幼苗中10-羥基喜樹堿含量可與喜樹堿含量相當(dāng)。以2～40天的喜樹幼苗為原料生產(chǎn)喜樹堿、10-羥基喜樹堿，產(chǎn)品得率高，生產(chǎn)成本低，經(jīng)濟(jì)效益十分可觀。
2、以喜樹果實(shí)為原料生產(chǎn)喜樹堿、10-羥基喜樹堿，可避免資源浪費(fèi)。
3、本發(fā)明以2～40天喜樹幼苗為原料，喜樹堿產(chǎn)品收率為0.4‰，10-羥基喜樹堿產(chǎn)品收率為0.2‰；以喜樹果實(shí)為原料，喜樹堿產(chǎn)品收率為0.3‰，10-羥基喜樹堿產(chǎn)品收率為0.02‰。
4、本發(fā)明的喜樹堿產(chǎn)品純度可超過97.5％，10-羥基喜樹堿產(chǎn)品純度可達(dá)90％。
5、本發(fā)明在生產(chǎn)過程中不使用毒性高的氯仿和甲醇，環(huán)境污染小，對(duì)生產(chǎn)人員的毒害小。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明以2～40天的喜樹幼苗或喜樹果實(shí)為原料，經(jīng)粉碎→乙醇滲漉萃取→萃取液濃縮至濃水溶液→大孔吸附樹脂柱層析→不同溶劑解吸液濃縮分別得喜樹堿、10-羥基喜樹堿粗品→分別重結(jié)晶后得喜樹堿、10-羥基喜樹堿產(chǎn)品的工藝路線。
所述的提取所用乙醇濃度為40～80％乙醇水溶液，重量為原料的6～10倍。
所述的乙醇滲漉液濃縮至原體積的1/3～1/4。
所述的大孔吸附樹脂采用惰性大孔吸附樹脂。
所述的大孔吸附樹脂柱層析所用喜樹堿解吸劑，可為乙酸乙酯或丙酮。
所述的大孔吸附樹脂柱層析所用10-羥基喜樹堿解吸劑，可為乙酸乙酯或丙酮與乙醇的混合溶液。
所述的乙酸乙酯或丙酮與乙醇的混合溶劑的體積比為1∶4～4∶1。
所述的喜樹堿、10-羥基喜樹堿重結(jié)晶所用溶劑為解吸10-羥基喜樹堿所用解吸劑。
實(shí)施例1將發(fā)芽2～40天的喜樹幼苗去除果皮后60～80℃烘干24小時(shí)，粉碎至20目。取10千克喜樹幼苗粉經(jīng)7倍體積60％乙醇滲漉萃取后，將所得萃取液濃縮至原體積的1/4。濃縮液直接通過惰性大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附，吸附后用蒸餾水洗滌至基本無色，以20倍柱體積乙酸乙酯解吸后，再以20倍柱體積乙酸乙酯/乙醇(體積比1∶1)。分別收集合并乙酸乙酯解吸液及乙酸乙酯/乙醇解吸液，濃縮后分別析出喜樹堿、10-羥基喜樹堿粗品，最后分別經(jīng)乙酸乙酯/乙醇(體積比1∶1)重結(jié)晶得到喜樹堿產(chǎn)品4克(得率為0.4‰)、10-羥基喜樹堿產(chǎn)品2克(得率為0.2‰)。
實(shí)施例2將喜樹果實(shí)80℃烘干24小時(shí)后，粉碎至20目。取10千克喜樹果粉經(jīng)8倍體積50％乙醇滲漉萃取后，將所得萃取液濃縮至原體積的1/3。濃縮液直接通過惰性大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附，吸附后用蒸餾水洗滌至基本無色，以20倍柱體積丙酮解吸后，再以10倍柱體積丙酮/乙醇(體積比1∶1)。分別收集合并丙酮解吸液和丙酮/乙醇解吸液，濃縮后分別析出喜樹堿、10-羥基喜樹堿粗品，最后分別經(jīng)丙酮/乙醇(體積比1∶1)重結(jié)晶得到喜樹堿產(chǎn)品3克(得率為0.4‰)、10-羥基喜樹堿產(chǎn)品0.2克(得率為0.02‰)。
權(quán)利要求
1.喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法，其特征在于以2～40天的喜樹幼苗或喜樹果實(shí)為原料，經(jīng)粉碎→乙醇滲漉萃取→萃取液濃縮至濃水溶液→大孔吸附樹脂柱層析→不同溶劑的解吸液濃縮分別得喜樹堿、10-羥基喜樹堿粗品→分別重結(jié)晶后得喜樹堿、10-羥基喜樹堿產(chǎn)品的工藝路線。
2.按照權(quán)利要求1所述的喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法，其特征在于乙醇滲漉采用40～80％乙醇水溶液，重量為原料的6～10倍。
3.按照權(quán)利要求1所述的喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法，其特征在于萃取液濃縮至原體積的1/3～1/4。
4.按照權(quán)利要求1所述的喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法，其特征在于大孔吸附樹脂采用惰性大孔吸附樹脂。
5.按照權(quán)利要求1或4所述的喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法，其特征在于大孔吸附樹脂柱層析所用喜樹堿解吸劑，可為乙酸乙酯或丙酮。
6.按照權(quán)利要求1或4所述的喜樹堿及10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法，其特征在于大孔吸附樹脂柱層析所用10-羥基喜樹堿解吸劑，可為乙酸乙酯或丙酮與乙醇的混合溶液。
7.按照權(quán)利要求1或4或6所述的喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法，其特征在于乙酸乙酯或丙酮與乙醇的混合溶液的體積比為1∶4～4∶1。
8.按照權(quán)利要求1所述的喜樹堿、10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法，其特征在于喜樹堿、10-羥基喜樹堿重結(jié)晶所用溶劑為解吸10-羥基喜樹堿所用解吸劑。
全文摘要
一種喜樹堿、10－羥基喜樹堿的生產(chǎn)工藝方法，它是以2～40天的喜樹幼苗或喜樹果實(shí)為原料，經(jīng)粉碎→乙醇滲漉萃取→萃取液濃縮至濃水溶液→大孔吸附樹脂柱層析→不同溶劑解吸液濃縮分別得喜樹堿和10－羥基喜樹堿粗品→分別重結(jié)晶后得喜樹堿和10－羥基喜樹堿產(chǎn)品的工藝路線。本發(fā)明生產(chǎn)喜樹堿及10－羥基喜樹堿，生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)過程中的環(huán)境污染程度低，對(duì)生產(chǎn)人員的毒害小，產(chǎn)品收率高，純度高。
文檔編號(hào)C07D491/22GK1428343SQ0113894
公開日2003年7月9日 申請(qǐng)日期2001年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月25日
發(fā)明者閻秀峰, 王洋, 張玉紅, 于濤 申請(qǐng)人:東北林業(yè)大學(xué), 閻秀峰, 王洋