專(zhuān)利名稱(chēng)：含有多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分，特別是含有作為多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆了碳酸鈣、碳酸鋅或者磷酸鈣的被膜的視黃酸納米顆粒作為有效成分的組合物。詳細(xì)地說(shuō)，涉及含有包覆了碳酸鈣、碳酸鋅或者磷酸鈣的被膜的視黃酸納米顆粒作為有效成分的口服給藥制劑、非口服給藥制劑、外用制劑、化妝品。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，作為脂溶性維生素A酸的視黃酸在含有ES細(xì)胞(embryostem cell胚胎干細(xì)胞)的各種未分化細(xì)胞中的分化誘導(dǎo)作用一直受到關(guān)注，另外，視黃酸作為對(duì)急性前髓細(xì)胞性白血病的治療藥的臨床應(yīng)用也在進(jìn)行。
然而，視黃酸是分子內(nèi)具有羧基的化合物，因此具有刺激性，在皮下給藥的場(chǎng)合，可以看到發(fā)炎或者注射部位的腫塊，另外，因是脂溶性的，作為注射劑難于制劑化。因此，對(duì)于視黃酸，研究了各種緩釋制劑或者應(yīng)用作為定向給藥療法的藥物遞送系統(tǒng)(DDS)的制劑化[例如C.S.Cho，K.Y.Cho，I.K.Park，S.H.Kim，T.Sugawara，M.Uchiyama & T.Araike“Receptor-mediated delivery of all trans-retinoic acid to hepatocyte using poly(L-lactic acid)nanoparticlescoated with galactose-carrying polystylene”，J.Control Release，2001Nov.977(1-2)，7-15]。
另外，還提出了使用生物降解性聚合物的注射制劑[例如G.G.Giordano，M.FD.Refojo & M.H.Arroyo“Sustained delivery ofretinoic acid from microsphers of biodegradable polymer in PVR”，Invest.Ophthalmol.Vis.，1993 Aug.34(9)274-2745]。
進(jìn)一步提出了因視黃酸的上皮細(xì)胞增殖作用，所以可以應(yīng)用在化妝品中，除去皮膚的皺紋，作為皮膚的活化劑·抗老化劑等(日本專(zhuān)利公開(kāi)No.平09-503499)，但由于其作為羧酸的性質(zhì)，因此存在刺激性強(qiáng)，引起炎癥等問(wèn)題，不能在現(xiàn)實(shí)的化妝品中使用。
鑒于這種現(xiàn)狀，本發(fā)明人等首先提供了既可以皮下和靜脈注射，也可以用作緩釋制劑的含有視黃酸的納米顆粒，另外也提供了在涂布到皮膚上的場(chǎng)合，能夠有效發(fā)揮視黃酸具有的效果的含有視黃酸的納米顆粒[例如特願(yuàn)2003-172493；藥劑學(xué)，Vol.62 Mar.2002，Supplement，日本藥劑學(xué)會(huì)第17次年會(huì)演講摘要集；Drug Delivery System(DDS)，Vol.18，No.3 May.221(2003)；29th Annual Meeting of the ControlledRelease Society in Collaboration with the Korean Society forBiomaterials；Final Program July 20-25(2002)]。
首先提出的含有視黃酸的納米顆粒，通過(guò)將視黃酸溶解在少量的極性溶劑中，用含堿的水使之分散，然后添加非離子表面活性劑，得到混合微膠粒，往其中添加2價(jià)的金屬鹽，進(jìn)一步添加具有2價(jià)陰離子的鹽從而進(jìn)行制備。
這種含有視黃酸的納米顆粒是在顆粒表面形成金屬化合物的被膜而形成的，例如在使用氯化鈣作為2價(jià)金屬鹽，使用碳酸鈉作為具有2價(jià)陰離子的鹽的場(chǎng)合，在納米顆粒表面就會(huì)形成碳酸鈣的被膜。
該本發(fā)明人等首先提供的含有視黃酸的納米顆粒是利用視黃酸的兩親性而制備的。即，使視黃酸分散在水溶液中，一旦形成為球狀微膠粒，就成為微膠粒表面被負(fù)電荷覆蓋的狀態(tài)。然后，添加非離子表面活性劑，進(jìn)一步添加氯化鈣，使鈣離子(Ca2+)吸附到微膠粒表面的負(fù)電荷上，防止視黃酸的微膠粒之間聚集、沉淀，由此形成微膠粒表面被鈣離子覆蓋的具有球狀或者橢圓形等的微膠粒。進(jìn)一步添加碳酸鈉，使碳酸根離子(CO32-)吸附(鍵合)到微膠粒表面的鈣離子上，完全中和微膠粒表面電荷。結(jié)果，在視黃酸的微膠粒表面上形成碳酸鈣被膜，制備得到碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒。
可是，一般用沉淀法或者均勻沉淀法形成的碳酸鈣結(jié)晶通常是稱(chēng)為方解石的對(duì)水幾乎沒(méi)有溶解性的結(jié)晶。但是，用上述方法在微膠粒表面形成的碳酸鈣形成于具有球狀或者橢圓形等帶曲率的微膠粒表面上，從而難于獲得硬的結(jié)晶結(jié)構(gòu)。因此，所形成的碳酸鈣層具有有所謂玻璃結(jié)構(gòu)的非晶形結(jié)構(gòu)或者作為亞穩(wěn)態(tài)相的球霰石結(jié)構(gòu)。碳酸鈣被膜為非晶形的場(chǎng)合，由于不是硬的結(jié)晶結(jié)構(gòu)，因此在水中的溶解性高，生物降解性提高，容易分解。而形成球霰石的場(chǎng)合，一般地，與作為碳酸鈣之外的結(jié)晶結(jié)構(gòu)的方解石或者文石相比，在水中的溶解度高，因此容易生物降解。
結(jié)果，在生物體內(nèi)施用上述得到的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒等場(chǎng)合，微膠粒表面的碳酸鈣被膜層容易分解，含有的視黃酸被釋放出，結(jié)果可以緩釋地發(fā)揮藥效。
在用金屬化合物包覆視黃酸的微膠粒表面的場(chǎng)合，不只是上述碳酸鈣，而且具有生物適應(yīng)性的例如碳酸鋅、磷酸鈣等多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽也發(fā)揮同樣的效果。
但是，以如上所述形成的碳酸鈣為首的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒具有約5～1000nm的粒徑(直徑)，不能充分有效地制備具有所希望的粒徑的納米顆粒。特別在視黃酸皮下或者靜脈內(nèi)給藥的場(chǎng)合，或者皮膚給藥(涂布給藥等)，經(jīng)皮吸收的場(chǎng)合，希望其粒徑是約5～300nm的極其微小的納米顆粒。
因此，本發(fā)明的課題在于對(duì)于以碳酸鈣為首的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒，制成粒徑為約5～300nm的極其微小的納米顆粒，提供含有這種納米顆粒作為有效成分的、作為皮下或者靜脈內(nèi)給藥的制劑，或者作為外用劑、化妝品能夠適用于皮膚(涂布給藥等)的組合物。
為了解決該課題，本發(fā)明人等悉心地進(jìn)行了研究，結(jié)果新發(fā)現(xiàn)在視黃酸的微膠粒表面上形成多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜的階段，通過(guò)適當(dāng)調(diào)節(jié)往該微膠粒中添加的金屬鹵化物和堿金屬碳酸化物或者磷酸化物的摩爾比，可以制備平均粒徑約5～300nm的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒，從而完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
因此本發(fā)明的基本方式為(1)一種組合物，其特征在于含有用多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆視黃酸的微膠粒表面形成的平均粒徑5～300nm的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分；(2)上述(1)所述的組合物，作為有效成分的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒中的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜是碳酸鈣、碳酸鋅或者磷酸鈣；(3)上述(1)或(2)所述的組合物，作為有效成分的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒如下得到將視黃酸的低級(jí)醇溶液與堿性水溶液一起分散，進(jìn)一步添加非離子表面活性劑，制備得到混合微膠粒，往其中以摩爾比1∶0～1.0的范圍添加2價(jià)金屬鹵化物或者醋酸化物以及堿金屬碳酸化物或者磷酸化物，從而在微膠粒表面形成多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜，將其平均粒徑調(diào)節(jié)到5～300nm的范圍內(nèi)；(4)上述(1)、(2)或(3)所述的組合物，有效成分是平均粒徑為5～300nm的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒；(5)上述(1)、(2)或(3)所述的組合物，有效成分是平均粒徑為5～300nm的碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒；(6)上述(1)、(2)或(3)所述的組合物，有效成分是平均粒徑為5～300nm的磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒；(7)上述(1)～(6)所述的組合物，組合物是口服給藥制劑、非口服給藥制劑、外用制劑、化妝品；(8)上述(7)所述的組合物，組合物是緩釋性的。
因此，本發(fā)明的具體方式是(9)一種緩釋制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分；(10)一種外用制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分；(11)混合平均粒徑為5～300nm的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒形成的化妝品；(12)一種緩釋制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分；(13)一種外用制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分；(14)混合平均粒徑為5～300nm的碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒形成的化妝品；(15)一種緩釋制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分；(16)一種外用制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分；(17)混合平均粒徑為5～300nm的磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒形成的化妝品。
本發(fā)明提供的組合物中的有效成分多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒，是平均粒徑在5～300nm的范圍內(nèi)的極其微小的顆粒。
視黃酸在皮下給藥的場(chǎng)合，因其高刺激性和脂溶性，在給藥部位可以看到炎癥或者腫塊化。另外，由于在水中不溶，作為注射劑不合適。本發(fā)明提供的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒在溶解于水時(shí)，保持透明溶液的形態(tài)，因此可以作為皮下和靜脈內(nèi)注射制劑給藥。另外，視黃酸被生物適應(yīng)性的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜包覆，因此刺激性低，具有在給藥部位沒(méi)有看到炎癥的產(chǎn)生、腫塊化等的特性。
而且，在皮膚上涂布施用本發(fā)明的納米顆粒作為外用劑的場(chǎng)合，由于良好地經(jīng)皮吸收，沒(méi)有刺激性，因此不會(huì)引起炎癥，視黃酸從納米顆粒緩釋出，可以發(fā)揮除去皮膚的皺紋、活性化等效果。
特別是在皮膚上涂布視黃酸的場(chǎng)合，造成上皮細(xì)胞增殖，對(duì)新的皮膚再生是極其有效的，是對(duì)美白、除皺有效的化合物，但到目前為止，因皮膚刺激性，作為化妝品不能應(yīng)用。但是，將其制成包覆了多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的納米顆粒，刺激性降低，還由于平均粒徑微小，達(dá)到5～300nm，因此皮膚滲透性提高，視黃酸在血中動(dòng)態(tài)上升，在短時(shí)間內(nèi)視黃酸存在于血中，還具有長(zhǎng)時(shí)間緩慢釋放，能夠維持血中濃度的優(yōu)點(diǎn)。
結(jié)果，上皮細(xì)胞的增殖因子HB-EGF(HB-Epidermal GrowthFactor)的產(chǎn)生量上升，再者，由于誘導(dǎo)產(chǎn)生在表皮內(nèi)通常短時(shí)間內(nèi)不會(huì)產(chǎn)生的透明質(zhì)酸，因此皮膚再生加速，具有可以顯著看到表皮肥厚的特性，因此，不僅可以應(yīng)用在化妝品中，而且作為在再生醫(yī)療中的應(yīng)用是極其有用的。


圖1是表示試驗(yàn)例4中的黑素瘤細(xì)胞因視黃酸刺激引起的3H-胸腺嘧啶核甙吸收量的圖。
圖2是表示試驗(yàn)例5的(1)中的、對(duì)大鼠皮下給藥視黃酸-CaCO3納米顆粒和視黃酸微膠粒時(shí)，血中釋放的視黃酸濃度變化的圖。
圖3是試驗(yàn)例5的(1)中的給大鼠施用作為比較例的沒(méi)有納米顆?；囊朁S酸微膠粒，給藥10天后的皮下給藥部位的照片。
圖4是試驗(yàn)例5的(1)中的給大鼠皮下施用本發(fā)明的視黃酸-CaCO3納米顆粒，給藥10天后的皮下給藥部位的照片。
圖5是表示試驗(yàn)例5的(2)中的將視黃酸-CaCO3納米顆粒、視黃酸-ZnCO3納米顆粒和視黃酸與凡士林基質(zhì)混合，在小鼠的皮膚上涂布給藥時(shí)，血中釋放出的視黃酸濃度變化的圖。
圖6是表示試驗(yàn)例6中的HB-EGF mRNA產(chǎn)生量比較的圖。
圖7是表示試驗(yàn)例7中的施用各制劑時(shí)的表皮厚度結(jié)果的圖。
圖8是試驗(yàn)例7中的作為對(duì)照的沒(méi)有處理組的皮膚組織的染色(HE染色)照片。
圖9是試驗(yàn)例7中的單獨(dú)含有視黃酸的制劑給藥組的皮膚組織的染色(HE染色)照片。
圖10是試驗(yàn)例7中的含有視黃酸-CaCO3納米顆粒的制劑給藥組的皮膚組織的染色(HE染色)照片。
圖11是試驗(yàn)例7中的含有視黃酸-ZnCO3納米顆粒的制劑給藥組的皮膚組織的染色(HE染色)照片。
圖12是試驗(yàn)例7中的含有視黃酸-Ca納米顆粒的制劑給藥組的皮膚組織的染色(HE染色)照片。
圖13是試驗(yàn)例7中的含有視黃酸-Zn納米顆粒的制劑給藥組的皮膚組織的染色(HE染色)照片。
圖14是試驗(yàn)例7中的單獨(dú)含有視黃酸的制劑給藥組的皮膚組織的染色(膠態(tài)鐵染色)照片。
圖15是試驗(yàn)例7中的含有視黃酸-CaCO3納米顆粒的制劑給藥組的皮膚組織的染色(膠態(tài)鐵染色)照片。
圖16是試驗(yàn)例8中的給藥開(kāi)始前，無(wú)毛小鼠頸部的照片。
圖17是試驗(yàn)例8中的涂布4天單獨(dú)含有視黃酸的制劑和含有本發(fā)明視黃酸-CaCO3納米顆粒的制劑的無(wú)毛小鼠頸部的照片。
圖18是表示試驗(yàn)例9中的單獨(dú)含有視黃酸的制劑的極大吸收的變化的圖。
圖19是表示試驗(yàn)例9中的視黃酸-CaCO3納米顆粒水介質(zhì)制劑的極大吸收的變化的圖。
圖20是表示試驗(yàn)例9中的視黃酸-CaCO3納米顆粒凡士林基質(zhì)制劑的極大吸收的變化的圖。
另外，在圖中，RA表示視黃酸，RA-CaCO3表示視黃酸-CaCO3納米顆粒，RA-ZnCO3表示視黃酸-ZnCO3納米顆粒，RA-Ca表示視黃酸-Ca納米顆粒，RA-Zn表示視黃酸-Zn納米顆粒。
具體實(shí)施例方式
在本發(fā)明中使用的視黃酸在生理學(xué)上具有保持視覺(jué)、聽(tīng)覺(jué)、生殖等功能、促進(jìn)成長(zhǎng)、保持皮膚和粘膜等正常、抑制癌癥等作用，是作為急性前髓細(xì)胞性白血病(APLacute promyelocytic leukemia)的治療藥在臨床中使用的全反式視黃酸(all-trans retinoic acid)。
該包覆了多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的視黃酸納米顆粒的制備詳細(xì)地如下進(jìn)行。
視黃酸是脂溶性化合物，還因其在分子內(nèi)具有羧酸，因此通過(guò)添加堿性水溶液例如氫氧化鈉水溶液和少量的低級(jí)醇，可以在水溶液中形成球狀的微膠粒。該微膠粒的表面呈被負(fù)電荷覆蓋的狀態(tài)，因此容易吸附(鍵合)2價(jià)金屬離子，例如鈣離子(Ca2+)，發(fā)生與鈉離子的交換反應(yīng)。此時(shí)，2價(jià)金屬離子的吸附力(鍵合力)比鈉離子高，因此吸附了2價(jià)金屬離子的微膠粒其表面的電荷難于解離，在水中不溶解，微膠粒沉淀。一產(chǎn)生沉淀，則顆粒之間產(chǎn)生聚集，就會(huì)形成非常大的顆粒。
因此，為了防止在該階段的顆粒間的聚集，與視黃酸一起添加非離子表面活性劑，例如聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單油酸酯(Tween80)。即，Tween80和視黃酸一起形成混合微膠粒，使聚氧乙烯鏈突出在微膠粒表面上，因此即使多價(jià)金屬離子吸附(鍵合)于微膠粒表面，由于微膠粒表面上突出的作為親水基團(tuán)的聚氧乙烯鏈的存在，也不會(huì)產(chǎn)生微膠粒的沉淀。
接著，添加2價(jià)金屬鹵化物或者醋酸化物例如氯化鈣。此時(shí)的2價(jià)金屬鹵化物的添加量只要是使2價(jià)金屬離子充分吸附在視黃酸的微膠粒表面上的量即可。2價(jià)金屬離子的吸附力(鍵合力)比鈉離子強(qiáng)，由此產(chǎn)生與鈉離子的交換。結(jié)果，2價(jià)金屬離子優(yōu)先吸附(鍵合)，形成微膠粒表面被2價(jià)金屬離子覆蓋的球狀或者橢圓形等的微膠粒。其中，如果進(jìn)一步添加堿金屬碳酸化物或者堿金屬磷酸化物，由于微膠粒表面電荷沒(méi)有完全被中和，因此碳酸根離子(CO32-)或者磷酸根離子(PO42-)進(jìn)一步吸附(鍵合)到位于表面的2價(jià)金屬離子上。結(jié)果，在視黃酸的微膠粒表面就會(huì)形成多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜，制備得到多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒。
作為這種多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的納米顆粒中的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽，可以舉出具有生物適應(yīng)性的碳酸鈣、碳酸鋅或者磷酸鈣。
因此，作為2價(jià)金屬鹵化物或者醋酸化物，是鈣鹵化物、鋅鹵化物、醋酸鈣或者醋酸鋅，作為鈣鹵化物和鋅鹵化物，具體地可以舉出氯化鈣、溴化鈣、氟化鈣、碘化鈣、氯化鋅、溴化鋅、氟化鋅和碘化鋅。
另外，作為堿金屬碳酸化或者堿金屬磷酸化物，可以舉出碳酸鈉、碳酸鉀、磷酸鈉和磷酸鉀。
另一方面，作為在制備納米顆粒中使用的低級(jí)醇，可以舉出甲醇或者乙醇。
另外，作為非離子表面活性劑，可以舉出例如聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單油酸酯(Tween 80)、聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單硬脂酸酯(Tween60)、聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇單棕櫚酸酯(Tween 40)、聚氧乙烯(20)脫水山梨糖醇三油酸酯(Tween 85)、聚氧乙烯(8)辛基苯基醚、聚氧乙烯(20)膽甾醇酯和聚氧乙烯硬化蓖麻油。
用以上方法制備的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒是微小的納米顆粒，其粒度分布寬，具有約10～3000nm粒徑(直徑)。
可是，在皮下給藥或者靜脈內(nèi)給藥多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒的場(chǎng)合，或者進(jìn)一步在皮膚給藥，從而視黃酸經(jīng)皮吸收的場(chǎng)合，優(yōu)選其粒徑約5～300nm的極其微小的納米顆粒。因此，對(duì)于所需的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒，有必要調(diào)節(jié)到其粒徑約5～300nm的極其微小的納米顆粒。
判明這種粒徑的調(diào)節(jié)可以如下進(jìn)行改變?yōu)榱嗽谝朁S酸的微膠粒表面形成包覆而添加的2價(jià)金屬鹵化物或者醋酸化物與堿金屬碳酸化物或者磷酸化物的摩爾比，且給予超聲波處理等機(jī)械振動(dòng)。
即，在視黃酸的微膠粒表面形成多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜可以如下進(jìn)行使在堿性(具體地為鈉)水溶液中形成的微膠粒表面的負(fù)電荷與2價(jià)金屬鹵化物或者醋酸化物的2價(jià)金屬離子例如鈣離子(Ca2+)進(jìn)行交換反應(yīng)，以及其與堿金屬碳酸化物或者磷酸化物的碳酸根離子(CO32-)或者磷酸根離子(PO42-)進(jìn)行中和。
具體的說(shuō)，添加的2價(jià)金屬鹵化物或者醋酸化物與堿金屬碳酸化物或者磷酸化物兩者的比率以摩爾比計(jì)，在1∶0～1.0的范圍內(nèi)添加，從而在微膠粒表面形成多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜，根據(jù)需要，施加超聲波處理等機(jī)械振蕩，就可以使其平均粒徑在5～300nm的范圍內(nèi)。
相對(duì)于1摩爾2價(jià)金屬鹵化物或者醋酸化物添加超過(guò)1.0摩爾的堿金屬碳酸化物或者磷酸化物的場(chǎng)合，在微膠粒表面雖然形成多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜，但是，粒徑變大，顆粒間產(chǎn)生了聚集，即使施加超聲波處理，也不能得到具有所希望的平均粒徑的納米顆粒，是不優(yōu)選的。
然而，添加的2價(jià)金屬鹵化物或者醋酸化物與堿金屬碳酸化物或者磷酸化物的兩者的比率在摩爾比1∶0～1.0的范圍內(nèi)添加的場(chǎng)合，在微膠粒表面形成多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜，而且可以使平均粒徑在5～300nm的范圍內(nèi)。
另外，判明還有所得納米顆粒以聚集體存在的場(chǎng)合，此時(shí)，通過(guò)給予這種聚集體超聲波處理等機(jī)械振動(dòng)，從而可以制成具有極其均勻的平均粒徑的納米顆粒。因此，本發(fā)明的納米顆粒也包括這樣的聚集體。
如上制備的本發(fā)明提供的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒在溶解于水的場(chǎng)合，保持透明溶液的形式，由于視黃酸被多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜包覆，因此刺激性低，可以作為皮下和靜脈內(nèi)注射制劑給藥。另外，沒(méi)有看到給藥部位產(chǎn)生炎癥、腫塊化等。
而且，作為外用劑在皮膚上涂布給藥的場(chǎng)合，良好地經(jīng)皮吸收，沒(méi)有刺激性，所有沒(méi)有引起炎癥，視黃酸從納米顆粒緩慢釋放，可以發(fā)揮除去皮膚的皺紋、活性化等效果。
本發(fā)明提供的組合物是含有上述多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分、利用其特性的口服給藥用制劑、非口服給藥用制劑、外用制劑、化妝品形式的組合物，另外還是緩慢釋放視黃酸的緩釋組合物。
作為口服給藥用制劑，可以舉出片劑、膠囊劑、顆粒劑、細(xì)粒劑、糖漿劑等。另外，作為非口服給藥用制劑，可以舉出注射劑(皮下注射、靜脈內(nèi)注射等)、點(diǎn)滴靜注等液體制劑、滴眼劑、噴霧劑、噴霧劑等經(jīng)鼻、口腔用制劑等。進(jìn)一步作為外用劑，可以舉出軟膏劑、霜?jiǎng)?、巴布劑等?br> 這些制劑均可以根據(jù)日本藥典的“制劑總則”所記載的方法制備，作為制劑化中所用的載體、賦形劑、潤(rùn)滑劑、流動(dòng)化劑、崩解劑、粘合劑、等滲劑、穩(wěn)定劑等，可以適當(dāng)選擇使用制劑學(xué)中廣泛使用的各種添加劑。
本發(fā)明提供的組合物中的有效成分多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒的給藥量不能一概而論。一般來(lái)說(shuō)，因所要給藥的患者的性別、年齡、體重、其癥狀而異，可以給予能發(fā)揮視黃酸具有的藥理活性，顯現(xiàn)其效果的用量。
本發(fā)明的組合物可以用作包括例如心肌梗塞、心絞痛、腦梗塞在內(nèi)的缺血性疾病的治療藥。
另一方面，作為本發(fā)明提供的化妝品，可以舉出乳霜、乳液、化妝水、面部洗潔劑、濕敷劑等基礎(chǔ)化妝品；口紅、粉底等彩妝化妝品等?；瘖y品中的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒的混合量不能一概而論，既可以和適當(dāng)?shù)南懔弦黄鹗褂?，也可以適當(dāng)同時(shí)配合用于化妝品的適當(dāng)?shù)囊再x形劑、香料、色素為首的油脂類(lèi)、表面活性劑、保濕劑、pH調(diào)節(jié)劑、增稠劑、防腐劑、抗氧化劑、紫外線吸收劑、顏料、洗滌劑、干燥劑、乳化劑等各種化妝品成分。
另外，本發(fā)明提供的組合物也可以涂布在如支架和插管等醫(yī)療用器械上使用。
下面通過(guò)各種試驗(yàn)例，詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。
另外，本發(fā)明提供的組合物中的有效成分多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒中，有時(shí)也將碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒描述為“視黃酸-CaCO3納米顆?！?，將碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒描述為“視黃酸-ZnCO3納米顆粒”，將磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒描述為“視黃酸-CaPO4納米顆?！薄?br> 試驗(yàn)例1視黃酸-CaCO3納米顆粒的制備將視黃酸13.6mg溶解于900μl的乙醇(或者甲醇)中，往該溶液中加入100μL 0.5N NaOH水溶液。此時(shí)的pH為7～7.5。把該溶液作為母液收集100μL，將其加入到含有Tween 80的蒸餾水100μL中，充分?jǐn)嚢琛?br> 約30分鐘后，加入5M含有氯化鈣的水溶液并攪拌，30分鐘后，再加入1M含有碳酸鈉的水溶液，進(jìn)一步攪拌。繼續(xù)攪拌一晝夜后，將所得溶液冷凍干燥一夜，制備得到所需的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒。
在該場(chǎng)合，通過(guò)改變氯化鈣和碳酸鈉的摩爾比并添加到視黃酸的微膠粒中而得到的視黃酸-CaCO3納米顆粒在剛制造后的粒徑(直徑)和施行5分鐘超聲波處理后的粒徑(直徑)如下述表1所示。
表1氯化鈣和碳酸鈉的比率對(duì)納米顆粒粒徑的影響

從表1所述的結(jié)果可知，通過(guò)調(diào)節(jié)氯化鈣和碳酸鈉的摩爾比，并添加到視黃酸微膠粒中，可以調(diào)節(jié)視黃酸-CaCO3納米顆粒的粒徑。
特別是通過(guò)以摩爾比1∶0～0.2的范圍添加氯化鈣和碳酸鈉，在視黃酸微膠粒的表面上形成碳酸鈣被膜，可以將其粒徑調(diào)節(jié)到10～50nm的范圍內(nèi)。
另外，在氯化鈣和碳酸鈉的摩爾比在1∶0.3～1.0的場(chǎng)合，剛制造后的平均粒徑約350～1500nm，這表示微小的納米顆粒聚集，具有作為聚集塊的大的平均粒徑的值。
該聚集塊通過(guò)施行超聲波處理，聚集塊分散成各個(gè)顆粒，分散成平均粒徑約100nm的極其均勻的納米顆粒。
因此，判明了以摩爾比1∶0～1.0添加氯化鈣和碳酸鈉，并給予超聲波處理等機(jī)械振動(dòng)，可以調(diào)節(jié)成為平均粒徑為5～300nm的視黃酸-CaCO3納米顆粒。
另外，對(duì)于試驗(yàn)中使用的視黃酸-CaCO3納米顆粒，將冷凍干燥后的納米顆粒用注射用蒸餾水再分散至規(guī)定的濃度后使用。
試驗(yàn)例2視黃酸-ZnCO3納米顆粒的制備將視黃酸13.6mg溶解于900μL的乙醇中，往該溶液中加入100μL0.5N NaOH水溶液。此時(shí)的pH為7～7.5。把該溶液作為母液收集100μL，將其加入到含有Tween80的蒸餾水100μL中，充分?jǐn)嚢琛?br> 約30分鐘后，加入5M含有醋酸鋅的水溶液并攪拌，30分鐘后，再加入1M含有碳酸鈉的水溶液，進(jìn)一步攪拌。持續(xù)攪拌1晝夜后，將所得溶液冷凍干燥一夜，制得所需的碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒(視黃酸-ZnCO3納米顆粒)。
制得的視黃酸-ZnCO3納米顆粒的粒徑具有和上述試驗(yàn)例1一樣的粒度分布。
另外，對(duì)于用于試驗(yàn)的視黃酸-ZnCO3納米顆粒，用注射用蒸餾水將冷凍干燥后的納米顆粒再分散成規(guī)定的濃度后使用。
試驗(yàn)例3視黃酸-CaPO4納米顆粒的制備將視黃酸13.6mg溶解于900μL的乙醇中，往該溶液中加入100μL0.5N NaOH水溶液。此時(shí)的pH為7～7.5。把該溶液作為母液收集100μL，將其加入到含有Tween 80的蒸餾水100μL中，充分?jǐn)嚢琛?br> 約30分鐘后，加入5M含有氯化鈣的水溶液并攪拌，30分鐘后，再加入1M含有磷酸鈉的水溶液，進(jìn)一步攪拌。持續(xù)攪拌1晝夜后，將所得溶液冷凍干燥一夜，制得所需的磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒(視黃酸-CaPO4納米顆粒)。
制得的視黃酸-CaPO4納米顆粒的粒徑也顯示出與上述試驗(yàn)例1一樣的粒度分布。
為了確認(rèn)如上制備的本發(fā)明提供的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒的藥理作用和確認(rèn)其粒徑帶來(lái)的藥理效果，進(jìn)行以下的生物學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)例4體外實(shí)驗(yàn)-視黃酸-CaCO3納米顆粒向B16黑素瘤細(xì)胞添加的實(shí)驗(yàn)視黃酸對(duì)B16黑素瘤細(xì)胞具有增殖抑制效果是公知的。通過(guò)本試驗(yàn)例研究本發(fā)明提供的視黃酸-CaCO3納米顆粒，對(duì)該B16黑素瘤細(xì)胞是否具有增殖抑制效果，還有該效果與沒(méi)有納米顆?；囊朁S酸單獨(dú)進(jìn)行比較，效果怎樣，為了進(jìn)行這些研究，進(jìn)行以下的試驗(yàn)。
(方法)培養(yǎng)B16黑素瘤細(xì)胞(2×104)24小時(shí)。之后，將視黃酸和上述視黃酸-CaCO3納米顆粒添加到培養(yǎng)基中。之后進(jìn)一步培養(yǎng)48小時(shí)，測(cè)定3H-胸腺嘧啶核甙(3H thymidine)的吸收量，比較B16黑素瘤細(xì)胞的DNA合成能力。
(結(jié)果)其結(jié)果示于圖1中。從圖中所示的結(jié)果可知，本發(fā)明的視黃酸-CaCO3納米顆粒隨著其添加量的增加，與單獨(dú)添加沒(méi)有納米顆?；囊朁S酸相比，顯示出高的增殖抑制效果。
因此，判明了將視黃酸納米顆?；谋景l(fā)明的視黃酸-CaCO3納米顆粒對(duì)B16黑素瘤細(xì)胞可以極其有效地發(fā)揮增殖抑制效果。
試驗(yàn)例5體內(nèi)實(shí)驗(yàn)-對(duì)大鼠皮下給藥時(shí)血中動(dòng)態(tài)的試驗(yàn)(1)皮下給藥的場(chǎng)合(方法)使用Wistar系大鼠(7周齡/雄性)，對(duì)大鼠的皮下施用氚(3H)標(biāo)記的視黃酸和從氚(3H)標(biāo)記的視黃酸微膠粒得到的視黃酸-CaCO3納米顆粒。之后，每一時(shí)間間隔采集血液，用閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定血中的視黃酸的量。
另外，在試驗(yàn)中使用對(duì)視黃酸微膠粒，以摩爾比1∶1.0的比率添加氯化鈣和碳酸鈉而得到的視黃酸-CaCO3納米顆粒(平均粒徑150nm)。
另外，作為比較例的視黃酸以沒(méi)有納米顆?；囊朁S酸微膠粒給藥。
(結(jié)果)在圖2中，顯示出視黃酸-CaCO3納米顆粒(平均粒徑150nm)皮下給藥時(shí)的結(jié)果與作為比較例的沒(méi)有納米顆粒化的視黃酸微膠粒的情形相比較的結(jié)果。
從圖中的結(jié)果可知，作為比較例的沒(méi)有納米顆粒化的視黃酸微膠粒的場(chǎng)合，給藥后約1小時(shí)，視黃酸就釋放到血中，與此相對(duì)，視黃酸-CaCO3納米顆粒的場(chǎng)合，初期血中濃度受到抑制，而且是持續(xù)的，視黃酸從納米顆粒中釋放出持續(xù)約7天。
從以上結(jié)果可以確認(rèn)，可以顯著看到視黃酸-CaCO3納米顆粒的視黃酸緩釋效果，作為緩釋制劑是極其有效的。
另外，圖3和圖4中顯示出給藥10天后的皮下給藥部位的照片。圖3是施用作為比較例的沒(méi)有納米顆?；囊朁S酸微膠粒時(shí)的照片，圖4是施用視黃酸-CaCO3納米顆粒時(shí)的照片。施用視黃酸微膠粒時(shí)，因視黃酸的刺激性在給藥部位引起炎癥，但在施用視黃酸-CaCO3納米顆粒時(shí)，視黃酸的刺激性得到緩解，結(jié)果完全沒(méi)有引起炎癥。
從以上結(jié)果可以判明，本發(fā)明有效成分的視黃酸-CaCO3納米顆粒的皮膚刺激性低，可以作為外用制劑皮膚給藥，或者可以作為化妝品安全地應(yīng)用到皮膚上。
(2)皮膚給藥(涂布)的場(chǎng)合使用小鼠(ddy系，5周齡/雄性)，用電推子剪去小鼠背部的毛，將上述得到的氚(3H)標(biāo)記的視黃酸和從氚(3H)標(biāo)記的視黃酸微膠粒得到的視黃酸-CaCO3納米顆粒以及視黃酸-ZnCO3納米顆粒與凡士林基質(zhì)混合，涂布在皮膚上。之后每一時(shí)間間隔采集血液，用閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定血中的視黃酸的量。
供給試驗(yàn)的試樣如下。
(a)視黃酸-CaCO3納米顆粒(平均粒徑約20nm)。
(b)視黃酸-ZnCO3納米顆粒(平均粒徑約20nm)。
另外，對(duì)于作為比較例的視黃酸，將沒(méi)有納米顆?；囊朁S酸本身與凡士林基質(zhì)混合使用。
(結(jié)果)其結(jié)果示于圖5中。將視黃酸-CaCO3納米顆粒[RA-CaCO3](粒徑約20nm)和視黃酸-ZnCO3納米顆粒[RA-ZnCO3](粒徑約20nm)與凡士林基質(zhì)混合皮膚涂布給藥時(shí)，與沒(méi)有納米顆?；囊朁S酸相比較，視黃酸的血中濃度顯著高。
因此，可以判明，本發(fā)明有效成分的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒通過(guò)調(diào)節(jié)其平均粒徑，特別是使之成為微小的納米顆粒，可以更有效地發(fā)揮視黃酸的藥理效果。
試驗(yàn)例6體內(nèi)實(shí)驗(yàn)HB-EGF mRNA產(chǎn)生試驗(yàn)(小鼠)(方法)以1天30mg/耳廓的量，在小鼠(ddy系，5周齡/雄性)的耳廓上涂布含有視黃酸的凡士林基質(zhì)制劑(作為視黃酸，為0.1％)，連續(xù)涂布4天。在第5天切除耳朵，提取RNA，用實(shí)時(shí)PCR(real-time PCR)法，測(cè)定HB-EGF mRNA。
另外，同時(shí)也合成和測(cè)定作為管家基因的GAPDH(磷酸甘油醛脫氫酶甘油醛-3-磷酸脫氫酶，glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)，作為相對(duì)值進(jìn)行定量。
作為使用的視黃酸，如下所示。
(a)視黃酸-CaCO3納米顆粒(平均粒徑約20nm)。
(b)視黃酸-ZnCO3納米顆粒(平均粒徑約20nm)。
(c)單獨(dú)的視黃酸。
(結(jié)果)其結(jié)果示于圖6中。如圖中所示的結(jié)果可知，調(diào)節(jié)本發(fā)明的粒徑得到的視黃酸-CaCO3納米顆粒(平均粒徑約20nm)和視黃酸-ZnCO3納米顆粒(平均粒徑約20nm)與單獨(dú)的視黃酸相比較，顯著產(chǎn)生HB-EGF mRNA。
HB-EGF mRNA是上皮細(xì)胞的增殖因子，其產(chǎn)生量增加顯示出本發(fā)明的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆?？梢燥@著發(fā)揮皮膚再生能力的事實(shí)。
試驗(yàn)例7體內(nèi)實(shí)驗(yàn)-皮膚給藥時(shí)的表皮細(xì)胞的增殖效果(小鼠)(方法)使用小鼠(ddy系，5周齡/雄性)，用電推子剪去小鼠背部的毛，以每天10mg/cm2的量涂布含有視黃酸的凡士林基質(zhì)制劑(作為視黃酸，為0.1％的制劑)，連續(xù)涂布4天。在第4天測(cè)定涂布部位的表皮厚度。
作為使用的視黃酸，如下所示。
(a)視黃酸-CaCO3納米顆粒(平均粒徑約20nm)。
(b)視黃酸-ZnCO3納米顆粒(平均粒徑約20nm)。
(c)往視黃酸微膠粒中只添加氯化鈣得到的用鈣包覆微膠粒表面的視黃酸-Ca納米顆粒(平均粒徑約20nm)。
(d)往視黃酸微膠粒中只添加氯化鋅得到的用鋅包覆微膠粒表面的視黃酸-Zn納米顆粒(平均粒徑約20nm)。
(e)單獨(dú)的視黃酸。
另外，作為對(duì)照，給出未處理組和只涂布作為基質(zhì)的凡士林的組。
(結(jié)果)其結(jié)果示于圖7中。如圖中結(jié)果所示，可知本發(fā)明有效成分視黃酸-CaCO3納米顆粒和視黃酸-ZnCO3納米顆粒與含有視黃酸的制劑相比較，使表皮細(xì)胞顯著增殖，表皮厚度顯著增加。
另外，往視黃酸微膠粒中只添加氯化鈣得到的用鈣包覆微膠粒表面的視黃酸-Ca納米顆粒[RA-Ca]和往視黃酸微膠粒中只添加氯化鋅得到的用鋅包覆微膠粒表面的視黃酸-Zn納米顆粒[RA-Zn]也與單獨(dú)的視黃酸相比較，表皮的厚度增加。該事實(shí)表明，對(duì)于使視黃酸形成為微膠粒，通過(guò)金屬鹵化物或者醋酸化物使之穩(wěn)定化的產(chǎn)物，與含有視黃酸的制劑相比較，可以發(fā)現(xiàn)表皮細(xì)胞顯著增殖效果，其構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
皮膚組織的HE染色結(jié)果的照片示于圖8～圖13中。
圖8是作為對(duì)照的未處理組的結(jié)果，圖9是單獨(dú)含有視黃酸的制劑給藥組的結(jié)果，圖10是含有視黃酸-CaCO3納米顆粒的制劑給藥組的結(jié)果，圖11是含有視黃酸-ZnCO3納米顆粒的制劑給藥組的結(jié)果，圖12是含有視黃酸-Ca納米顆粒的制劑給藥組的結(jié)果，圖13是含有視黃酸-Zn納米顆粒的制劑給藥組的結(jié)果。照片中染成紫色的部分相當(dāng)于表皮。
涂布含有本發(fā)明的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒的制劑的場(chǎng)合，與涂布對(duì)照和單獨(dú)含有視黃酸的制劑相比較，可知表皮的再生顯著。
另外，皮膚的膠態(tài)鐵染色的照片示于圖14和圖15中。
圖14是單獨(dú)含有視黃酸的制劑給藥組的結(jié)果，圖15是含有視黃酸-CaCO3納米顆粒的制劑給藥組的結(jié)果。在照片中，深藍(lán)部分相當(dāng)于透明質(zhì)酸，與涂布含有視黃酸的制劑相比較，在涂布本發(fā)明的含有視黃酸-CaCO3納米顆粒的制劑時(shí)，可知透明質(zhì)酸在表皮內(nèi)的基底細(xì)胞棘細(xì)胞間產(chǎn)生。該事實(shí)表明通過(guò)經(jīng)皮給予本發(fā)明的視黃酸-CaCO3納米顆粒，可以在短時(shí)間內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生在表皮內(nèi)通常短時(shí)間不會(huì)產(chǎn)生的透明質(zhì)酸。
試驗(yàn)例8體內(nèi)實(shí)驗(yàn)-皮膚給藥的除皺效果(無(wú)毛小鼠)(方法)在可以看到無(wú)毛小鼠(18周齡/雄性)的許多皺紋的頸部，以1日30mg/頸部的量涂布含有本發(fā)明的視黃酸-CaCO3納米顆粒(平均粒徑20nm)的凡士林基質(zhì)制劑(作為視黃酸，為0.1％的制劑)，連續(xù)涂布4天。在第4天觀察其皺紋的消失程度。
作為對(duì)照，給出涂布單獨(dú)含有視黃酸的制劑的情況。
(結(jié)果)其結(jié)果示于圖16和圖17中。圖16的照片是給藥開(kāi)始前頸部的照片，圖17的照片的上部是涂布單獨(dú)含有視黃酸的制劑時(shí)的結(jié)果，下部是涂布含有本發(fā)明的視黃酸-CaCO3納米顆粒的制劑時(shí)的結(jié)果。從這些結(jié)果的對(duì)比可以看出，通過(guò)涂布本發(fā)明的制劑，頸部看到的深的皺紋消失，皮膚變得光滑。
試驗(yàn)例9制劑的貯藏穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)于含有本發(fā)明有效成分視黃酸-CaCO3納米顆粒(平均粒徑20nm)的制劑的貯藏穩(wěn)定性，將以水為介質(zhì)的制劑(作為視黃酸，為0.1％的制劑)和凡士林基質(zhì)制劑(作為視黃酸，為0.1％的制劑)在37℃保存，試驗(yàn)視黃酸的分解程度。
另外，作為對(duì)照，給出視黃酸的凡士林基質(zhì)制劑(作為視黃酸，為0.1％的制劑)。
保存開(kāi)始后，通過(guò)在第10天、第24天和第46天用分光光度計(jì)檢測(cè)的極大吸收(340nm)的吸收強(qiáng)度的變化研究各制劑中的視黃酸的穩(wěn)定性。
(結(jié)果)其結(jié)果示于圖18～圖20中。
圖18表示單獨(dú)含有視黃酸的制劑的極大吸收的變化，圖19表示本發(fā)明有效成分視黃酸-CaCO3納米顆粒水介質(zhì)制劑的極大吸收的變化，圖20表示本發(fā)明有效成分視黃酸-CaCO3納米顆粒凡士林基質(zhì)制劑的極大吸收的變化。
從三者的比較可以看出，本發(fā)明的制劑的視黃酸穩(wěn)定性極其優(yōu)異。
下面列舉使用本發(fā)明提供的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒的制劑例。另外，本發(fā)明當(dāng)然不受這些制劑例的限定。
再者，對(duì)于下述制劑例中使用的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒，用蒸餾水將冷凍干燥后的納米顆粒再分散至成規(guī)定量的濃度后使用。
制劑例1外用軟膏劑/水凝膠劑取適量視黃酸-CaCO3納米顆粒(平均粒徑約20nm)、白色凡士林、羧甲基纖維素和對(duì)羥基苯甲酸甲酯，將它們混合至均勻，得到含有視黃酸0.3％的軟膏劑和水凝膠劑。
制劑例2外用貼劑(水性巴布劑)(配方)視黃酸-CaCO3納米顆粒 0.1重量％(或者視黃酸-ZnCO3納米顆粒)聚丙烯酸 2.0重量％聚丙烯酸鈉5.0重量％羧甲基纖維素鈉2.0重量％明膠 2.0重量％聚乙烯醇 0.5重量％甘油 25.0重量％高嶺土1.0重量％氫氧化鈉 0.6重量％酒石酸0.3重量％EDTA-2-鈉 0.1重量％純凈水余量通過(guò)混合上述成分，按照常規(guī)方法得到外用貼劑(水性巴布劑)制劑例3化妝用乳霜將羧基乙烯基聚合物1份溶解在純凈水89份中，往其中加入將氫氧化鉀0.4份溶解于純凈水9.6份中得到的溶液，得到羧基乙烯基聚合物的堿中和水性凝膠100份。
接著，使用上述得到的水性凝膠，根據(jù)下面的配方，按照常規(guī)方法得到化妝用乳霜。
視黃酸-CaCO3納米顆粒0.1份上述得到的水性凝膠 30份液體石蠟 10份甘油 22.7份對(duì)羥基苯甲酸甲酯 0.3份硬脂酸 10份香料 適量純凈水 余量制劑例4化妝用乳液(配方)鯨蠟醇 1.5份凡士林 5.0份液體石蠟 10.0份聚氧乙烯(10)脫水山梨糖醇單硬脂酸酯 10.0份聚乙二醇(1500) 3.0份三乙醇胺 1.0份醋酸生育酚 0.2份視黃酸-CaCO3納米顆粒0.05份(或者視黃酸-ZnCO3納米顆粒)亞硫酸氫鈉 0.01份羧基乙烯基聚合物(商品名；Hibiswako) 0.05份對(duì)羥基苯甲酸甲酯 適量香料 適量純凈水 余量(制法)將羧基乙烯基聚合物溶解在少量的純凈水中(A液)。往余量的純凈水中加入聚乙二醇和視黃酸-CaCO3納米顆粒(或者視黃酸-ZnCO3納米顆粒)以及三乙醇胺使之溶解，加熱并保持在70℃(水相)。另外加熱溶解剩余的成分，保持在70℃(油相)。往水相中加入油相，進(jìn)行預(yù)乳化，然后加入A液，在此時(shí)的溫度下用勻漿機(jī)(homomixer)使之均勻乳化，乳化后，在充分?jǐn)嚢柘率怪鋮s，得到化妝用乳液。
工業(yè)實(shí)用性如上所述，本發(fā)明提供含有用多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽被膜包覆視黃酸的微膠粒表面形成的納米顆粒作為有效成分的組合物。本發(fā)明的有效成分多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒溶解于水時(shí)，保持透明溶液的形態(tài)，因此可以作為皮下和靜脈內(nèi)注射制劑給藥。另外，視黃酸被多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的皮膜包覆，因此刺激性低，具有在給藥部位沒(méi)有看到發(fā)生炎癥、腫決化等的特性。
因此，本發(fā)明提供的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆?？梢杂行У匕l(fā)揮視黃酸的藥理效果，作為在口服給藥制劑、非口服給藥制劑、外用劑或者化妝品中的應(yīng)用是極其有效的，其在工業(yè)上的貢獻(xiàn)非常大。
權(quán)利要求
1.一種組合物，其特征在于含有用多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆視黃酸的微膠粒表面形成的平均粒徑5～300nm的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分。
2.權(quán)利要求1所述的組合物，作為有效成分的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒中的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜是碳酸鈣、碳酸鋅或者磷酸鈣。
3.權(quán)利要求1或2所述的組合物，作為有效成分的多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒如下得到將視黃酸的低級(jí)醇溶液與堿性水溶液一起分散，進(jìn)一步添加非離子表面活性劑，制備得到混合微膠粒，往其中以摩爾比1∶0～1.0的范圍添加2價(jià)金屬鹵化物或者醋酸化物以及堿金屬碳酸化物或者磷酸化物，從而在微膠粒表面形成多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜，將其平均粒徑調(diào)節(jié)到5～300nm的范圍內(nèi)。
4.權(quán)利要求1、2或3所述的組合物，有效成分是平均粒徑為5～300nm的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒。
5.權(quán)利要求1、2或3所述的組合物，有效成分是平均粒徑為5～300nm的碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒。
6.權(quán)利要求1、2或3所述的組合物，有效成分是平均粒徑為5～300nm的磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒。
7.權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的組合物，組合物是口服給藥制劑、非口服給藥制劑、外用制劑、化妝品。
8.權(quán)利要求7所述的組合物，組合物是緩釋性的。
9.一種緩釋制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分。
10.一種外用制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分。
11.混合平均粒徑為5～300nm的碳酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒形成的化妝品。
12.一種緩釋制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分。
13.一種外用制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分。
14.混合平均粒徑為5～300nm的碳酸鋅包覆的視黃酸納米顆粒形成的化妝品。
15.一種緩釋制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分。
16.一種外用制劑，其特征在于，含有平均粒徑為5～300nm的磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒作為有效成分。
17.混合平均粒徑為5～300nm的磷酸鈣包覆的視黃酸納米顆粒形成的化妝品。
全文摘要
本發(fā)明提供含有視黃酸納米顆粒作為有效成分的組合物，所述視黃酸納米顆?？梢云は陆o藥和靜脈內(nèi)給藥，也可以作為緩釋制劑使用，而且皮膚透過(guò)性高，也可以用在涂布在皮膚上等的藥品和作為準(zhǔn)藥品的外用劑和化妝品中，刺激性降低。本發(fā)明的有效成分多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽包覆的視黃酸納米顆粒溶解于水時(shí)保持透明溶液的形態(tài)，因此可以作為皮下和靜脈內(nèi)注射制劑給藥。另外，視黃酸被多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽的被膜包覆，因此刺激性低，具有在給藥部位沒(méi)有看到發(fā)生炎癥、腫塊化等的特性。作為該多價(jià)金屬無(wú)機(jī)鹽，為碳酸鈣、碳酸鋅或者磷酸鈣。
文檔編號(hào)A61K9/51GK1859906SQ200380110558
公開(kāi)日2006年11月8日 申請(qǐng)日期2003年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月15日
發(fā)明者山口葉子, 五十嵐理慧, 水島裕, 武永美津子, N·中村 申請(qǐng)人:株式會(huì)社納米卵