專利名稱：用于預(yù)防和/或治療抗癌劑誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病的乙?；璴－肉堿的制作方法
本文所述的發(fā)明涉及L-肉堿和烷酰基L-肉堿在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用，特別是與抗癌劑聯(lián)合。
背景技術(shù)：
眾所周知，抗癌劑在人類治療中的應(yīng)用會造成許多的毒副作用，它們可能威脅患者的生命。事實(shí)上，這些并發(fā)癥會造成藥物劑量的減小，有時(shí)會中斷治療本身。
劑量的減小或治療的中斷在許多情況下會造成患者總體狀況的惡化，因?yàn)樗兄趶?fù)發(fā)的發(fā)生，其造成的后果有時(shí)對于患者是致命的。
在醫(yī)療場所和腫瘤患者家庭中的另一個非常重要的和強(qiáng)烈地感受到的方面是“提高接受治療的患者的生活質(zhì)量”的概念。
同樣眾所周知的是，接受常規(guī)的癌癥綜合化學(xué)療法的患者會發(fā)生相當(dāng)?shù)捏w重減輕。
越來越多的抗癌劑用于人類治療，且越來越重要，其主要限制仍然是毒副作用的發(fā)生，這意味著該問題仍然是非常值得關(guān)注的問題。
因而，理想的是發(fā)現(xiàn)新的藥物或不同藥物的新的合適的組合，它們能大大減輕用于人類治療的抗癌劑造成的毒副作用。
已經(jīng)知道L-肉堿與抗癌劑相組合的已有用途。
在實(shí)驗(yàn)動物模型中已經(jīng)證實(shí)，與一組用阿霉素和L-肉堿組合處理的大鼠相比，單用阿霉素處理的大鼠表現(xiàn)出更大的體重減輕(Senekowitsch R，Lohninger A，Kriegel H.，Staniek H.，Krieglsteiner HP.，Kaiser E.Protective effects of carnitineon adriamycit toxicity to heart.InKaiser E.，Lohninger A.，(eds.).Carnitineits role in lung and heart disorders126-137.Karger，Basel-New York，1987)。
美國專利號4,713,370公開了組合使用肉堿和細(xì)胞生長抑制劑例如道諾霉素、N-乙?；?道諾霉素和道諾霉素肟來減輕這些化合物的心臟毒性。美國專利號4,267,163公開了組合使用肉堿和細(xì)胞生長抑制劑例如阿霉素、阿霉素-14-辛酸酯，4′-表-阿霉素阿霉素β-異頭體和4′-表-阿霉素γ-異頭體來減輕這些化合物的心臟毒性。美國專利號4,751,242公開了乙?；鵏-肉堿用于治療性治療外周神經(jīng)病的應(yīng)用。在該后一專利中，將外周神經(jīng)病定義為一組腦干和脊髓的運(yùn)動神經(jīng)元和/或第一級感覺神經(jīng)元和/或外周自主神經(jīng)元的持久障礙，包括外周軸突和它們的伴隨支持結(jié)構(gòu)的參與。關(guān)于它們的病因?qū)W，外周神經(jīng)病構(gòu)成了不同種類的一組疾病，因?yàn)樗鼈兊牟∫蚩赡芾^發(fā)于病毒感染(帶狀皰疹)、局部缺血(動脈硬化)、代謝失衡(糖尿病、腎和肝機(jī)能不全)、藥物誘導(dǎo)的毒性(阿霉素、異煙肼、呋喃妥因)、機(jī)械應(yīng)力(壓縮、包埋、骨折或脫位)、輻射、遺傳因素和免疫系統(tǒng)的病理情況。但是，無論該疾病形式的實(shí)際病因是什么，總可以檢測因細(xì)胞脂類、膽固醇和神經(jīng)節(jié)苷脂的變化引起的膜流動性的改變。脂類在限定三級和四級蛋白結(jié)構(gòu)和維持腺苷三磷酸酶結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性中起非常重要的作用。實(shí)際上，它們的缺失會造成酶失活。在該文獻(xiàn)中，假定乙?；鵏-肉堿可能是對自由基(超氧化物、過氧化氫)產(chǎn)生“清除劑”作用，所述自由基在不規(guī)則的或不充分的灌注條件下或在細(xì)胞色素氧化酶的活性降低引起的炎癥過程中形成，所述細(xì)胞色素氧化酶控制四價(jià)的和二價(jià)的厭氧途徑之間的代謝轉(zhuǎn)換。乙?；鵏-肉堿通過提高還原型谷胱甘肽(最重要的抗氧化代謝物之一)的水平和可能地提高細(xì)胞色素氧化酶的水平，可清除自由基并總體上恢復(fù)四價(jià)的氧化-還原呼吸機(jī)制，且特別是對于神經(jīng)元。而且，乙酰基L-肉堿會通過增加最佳的神經(jīng)傳遞必不可少的ATP-酶和AChE來影響神經(jīng)元。
其它的研究已經(jīng)評價(jià)了肉堿對蒽環(huán)類抗生素誘導(dǎo)的心臟毒性的保護(hù)作用(NeriB.，Comparini T.，Milani A.，Torcia M.，Clin.TrialJ.20，98-103，1983；De Leonardis V.，DeScalziM.，Neri B.，等Int.J.Clin.Pharm.Res.70，307-311，1987)。
上面引用的專利和著錄文獻(xiàn)證實(shí)了，已經(jīng)進(jìn)行了許多努力來嘗試減輕抗癌劑的毒副作用，但是沒有以令人滿意的方式解決該嚴(yán)重問題。
卡鉑是順鉑的結(jié)構(gòu)類似物，其伴隨的腎毒性雖然無法忽略，但是比順鉑的輕。外周神經(jīng)毒性是抗腫瘤藥順鉑的劑量限制性的副作用(Cavaletti等Journal of the Peripheral Nervous System，Vol.6，Number 3；September 2001，136-2001 Meeting of the PeripheralNerve Society)。
長春新堿是一種熟知的抗癌劑，其具有毒性作用，特別是在免疫系統(tǒng)水平上。
紫杉醇是一種具有抗癌性質(zhì)的天然提取物，首次分離自短葉紅豆杉(Taxus brevifolia)的樹皮，并且對人類對象具有經(jīng)證實(shí)的神經(jīng)毒性和骨髓毒性。它用于治療對鉑療法耐藥的腫瘤，但是會在外周神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生更大的累積毒性。還已經(jīng)查明，紫杉醇能誘導(dǎo)治療的對象的中性白細(xì)胞減少(Rowinsky等；Semin.Oncol.(1993)，Aug.20(4suppl 3)，1-15；Onetto等J.Natl.Cancer Inst.Monogr.(1993)；(15)131-9)。
不同種類的化療藥物會誘導(dǎo)外周神經(jīng)毒性，其中我們提及紫杉烷類(taxoids)、鉑化合物、長春花屬生物堿、epothilone類、法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、沙利度胺、5-氟尿嘧啶、cryptophycin類似物、蛋白酶體抑制劑。
嚴(yán)重的外周神經(jīng)病會導(dǎo)致治療修正，而輕微的或中度的病例仍然代表了重要的耐受性問題，其限制了患者的生活質(zhì)量。
長春花屬生物堿能結(jié)合微管蛋白并阻止可溶性二聚體聚合成微管，而紫杉烷能促進(jìn)微管的形成并阻止它們的解聚，這導(dǎo)致豐富的剛性微管。
微管是維持細(xì)胞形狀、多種細(xì)胞行為和軸漿運(yùn)輸?shù)幕境煞?。在神?jīng)元和軸突中微管功能缺陷可能是這兩類化療藥物的神經(jīng)毒性的起因。
紫杉烷主要誘導(dǎo)對稱分布的感覺末梢神經(jīng)病，它與單一劑量和累積劑量的藥物均相關(guān)，并且可能取決于治療方案。紫杉醇的神經(jīng)毒性是由于獨(dú)特的作用機(jī)理；它結(jié)合微管蛋白并促進(jìn)微管的裝配(Schiff P.B.等，Nature 1979；Parnass J.和Horowitz S.B.，J.Cell.Biol.1981)。在存在紫杉醇的情況下形成的微管即使在通常會使它們解聚的條件中也是穩(wěn)定的，該條件包括存在鈣和冷。紫杉醇還會改變微管裝配的動力學(xué)，消除在啟動裝配之前通常會觀察到的3至4分鐘的滯后時(shí)間(Horowitz S.B.等，Ann.N.Y.Acad.Sci.1986)。該機(jī)理與長春花屬生物堿的形成對比，后者抑制微管裝配。
這種相反的機(jī)理使得難以發(fā)現(xiàn)能同時(shí)作用于兩種不同地誘導(dǎo)的神經(jīng)病的藥物。
隨著造血生長因子挽救骨髓毒性的應(yīng)用，神經(jīng)毒性變成劑量限制因素(Schiller等，J.Clin.Oncol.1994)。癥狀可能始于早至用較高的單一劑量(＞250mg/m2)治療后24至72小時(shí)，但是神經(jīng)毒性典型地是累積的，癥狀在每次高劑量或低劑量的治療后都會進(jìn)展。
癥狀通常是可以耐受的(NCI級別1或2)。神經(jīng)學(xué)檢查特征地揭示了遠(yuǎn)端的、對稱的、手套-和-長襪方式的升高的閾值和振動知覺。通常，大纖維感覺體(振動，本體感受)比小纖維感覺體(疼痛，溫度)的喪失更頻繁受到影響。深部腱反射也頻繁地受到影響，遠(yuǎn)端(踝)反射總是缺失的或減低的。
神經(jīng)傳導(dǎo)研究表明了感覺神經(jīng)動作電位振幅以對稱的、遠(yuǎn)端的、長度依賴性的方式減小。事實(shí)上，腓腸感覺神經(jīng)動作幅度在有癥狀的患者中總是減小的或缺失的。
中斷紫杉醇后的數(shù)月內(nèi)，輕微的感覺癥狀通常會改善或完全消退。
順鉑會誘導(dǎo)外周感覺軸突神經(jīng)病，影響較大直徑的感覺纖維和在較低程度上影響較小直徑的感覺纖維。感覺異常和受損的本體感受是最常見的癥狀(Thompson S.W.等，Cancer 1984)。順鉑蓄積于并損傷背根神經(jīng)節(jié)，軸突變化繼發(fā)于神經(jīng)元的損傷(Warner E.，Int.J.Gynecol.Cancer 1995)。
順鉑-誘導(dǎo)的神經(jīng)病的發(fā)生很大程度上取決于累積劑量，在順鉑的總劑量為330至400mg/m2時(shí)看到癥狀的出現(xiàn)。順鉑能緊密地且不可逆地結(jié)合到神經(jīng)組織，這解釋了有時(shí)發(fā)生在停止順鉑治療后神經(jīng)狀況的惡化。
長春花屬生物堿會誘導(dǎo)外周感覺-運(yùn)動多神經(jīng)病和自主神經(jīng)病，其在數(shù)月后好像是部分地可逆的(Potsma T.J.等，J.Neurooncol.1993)。
Epothilone家族具有類似于紫杉烷家族的毒理學(xué)作用(Lee FY等Proc Am Assoc Cancer Res，2002，792)。
用于癌癥治療的幾種其它化合物表現(xiàn)出輕微的至嚴(yán)重的神經(jīng)病。除了別的以外，特別地提及法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，例如R11577(Adjei，A.A.，等，J.Clin.Oncol.，2003，May，1；21(9)1760-6)；沙利度胺(Rajkumar，S.V.，等，Leukemia，2003，Apr；17(4)775-9)5-氟尿嘧啶(van Laarhoven，H.W.，等，Anticancer Res.，2003，Jan-Feb；231(1B)647-8)；多西他賽(Thongprasert，S.，等，J.Med.Assoc.Thai，2002，Dec；85(12)1296-300)；cryptophycin類似物，例如LY355703(Sessa，C.，等，Eur.J.Caneer.，2002，Dec；38(18)2388-96)和蛋白酶體抑制劑，例如PS431(Aghajanian，C.，等，Clin.Cancer Res.，2002，Aug；8(8)2505-11)。
藥理學(xué)治療的一個普遍問題是藥物的治療指數(shù)，也就是說治療有效劑量與毒性劑量的比，或者，至少是導(dǎo)致副作用發(fā)生的劑量。
醫(yī)藥界仍然感覺到需要能使患者愿意接受治療的治療方案，這在抗癌化療的情況下特別難以支持，而同時(shí)保留可接受的生活質(zhì)量。這些考慮也適用于動物的治療，例如所謂的寵物。
自然趨勢是減少劑量，因而使用適合于治療上有益地施用的藥物形式而不強(qiáng)迫患者過頻地服藥，這與每種抗癌劑典型的最低有效劑量形成對比。
國際申請WO 00/06134公開了L-肉堿和其烷酰基衍生物在制備抗癌劑藥物中的應(yīng)用。更具體地，該申請公開了組合使用烷?；鵏-肉堿和抗癌劑來提高治療指數(shù)和減少抗癌化療典型的副作用。更具體地，該申請公開了L-肉堿對總體毒性的作用，表達(dá)為對于抗癌劑的存活時(shí)間或體重減輕。更詳細(xì)地，該引用的申請?zhí)峁┝吮；鵏-肉堿對例如紫杉醇的抗癌活性的協(xié)同效應(yīng)。關(guān)于幾種抗癌劑的特異性毒性，該引用的申請?zhí)峁┝藢Σ﹣砻顾氐姆尾慷拘?、紫杉醇誘導(dǎo)的中性白細(xì)胞減少和紫杉醇誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病的保護(hù)作用的實(shí)施例。
該關(guān)于肉堿家族的一般公開不會引導(dǎo)本領(lǐng)域的技術(shù)人員預(yù)見到乙?；鵏-肉堿在預(yù)防和/或治療一些抗癌劑誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病中的特異性活性。
同樣的理由可以應(yīng)用于描述乙酰基L-肉堿在預(yù)防和/或治療順鉑誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病中的作用的情況(Vitali，G.等，Annals ofOncology，Vol.13，2002，Supplement 5179，659P；Cavaletti，G.等，Journal of Neurology，Vol.249，Suppl.1，June 20021/28，78；Cavaletti，G.和Zanna，C.，European Journal of Cancer，38(2002)1832-7)。
發(fā)明概述現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，協(xié)同地使用(將在下面準(zhǔn)確地定義該術(shù)語)能誘發(fā)外周神經(jīng)病的抗癌劑和乙?；鵏-肉堿會對抗癌劑的誘發(fā)神經(jīng)病的活性產(chǎn)生預(yù)防和/或治療作用。
在本文所述的發(fā)明的上下文中，協(xié)同地使用治療有效量的能誘發(fā)外周神經(jīng)病的抗癌劑，特別是下列家族鉑化合物、紫杉烷類、epothilone類和長春花屬生物堿、法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、沙利度胺、5-氟尿嘧啶、cryptophycin類似物、蛋白酶體抑制劑，和解毒量的乙?；鵏-肉堿或其藥理學(xué)上可接受的鹽之一，產(chǎn)生對抗癌劑的外周神經(jīng)毒性和副作用的有效的保護(hù)作用，而不削弱其功效，從而特別造成大大改善治療對象(無論是人類對象還是動物)的生活質(zhì)量和延長其壽命本身。
本發(fā)明的一個目的是，乙?；鵏-肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于預(yù)防和/或治療由施用能誘發(fā)外周神經(jīng)病的抗癌劑而誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物要以協(xié)同的方式施用給患有所述外周神經(jīng)病或預(yù)期會患所述外周神經(jīng)病的對象，條件是所述的抗癌劑不是紫杉醇或順鉑。
本文所述的發(fā)明的另一個目的是，乙?；鵏-肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽與能誘發(fā)外周神經(jīng)病的抗癌劑的組合，和相關(guān)的藥物組合物。
熟知乙?；鵏-肉堿沒有毒副作用，這使得該化合物的使用、甚至是長期施用都特別安全。
本文所述發(fā)明的實(shí)施還有助于改善治療的患者的生活質(zhì)量；只要想想外周神經(jīng)病引起的身體痛苦。
將以本發(fā)明的實(shí)施方案的形式并借助于實(shí)施例，詳細(xì)描述本文所述的發(fā)明的這些以及其它目的。
在本文所述的發(fā)明的上下文中，術(shù)語“抗腫瘤的”、“抗癌”和“抗增殖的”應(yīng)當(dāng)理解為基本上同義。
發(fā)明詳述在本文所述的發(fā)明的上下文中，“協(xié)同地使用”前述化合物所指的含義中立地為，(i)共同施用，即基本上同時(shí)地或序貫地施用乙?；鵏-肉堿或其藥理學(xué)上可接受的鹽之一和抗癌劑，或(ii)施用組合物，其除了包含任選的藥學(xué)上可接受的賦形劑和/或載體以外，還包含相組合并在混合物中的前述的活性成分。
本文所述的發(fā)明因而既包括共同施用乙?；鵏-肉堿或其藥理學(xué)上可接受的鹽之一和抗癌劑，也包括藥物組合物，其可以經(jīng)口地、腸胃外地或經(jīng)鼻地施用，包括控釋形式，其包含在混合物中的兩種活性成分。
在本發(fā)明的上下文中，共同施用的目的用途是指對于抗癌劑可能的不良作用即外周神經(jīng)病進(jìn)行預(yù)防性的治療(也意指預(yù)防)的可能性。在另一個實(shí)施方案中，通過共同施用的目的用途，本發(fā)明是指對于抗癌劑的不良作用的治療性治療(也意指治療或療法)。在預(yù)防性治療的情況下，乙?；鵏-肉堿的施用應(yīng)當(dāng)考慮抗癌劑治療的需要，已知后者意味著外周神經(jīng)病。施用的開始、后續(xù)方案(即劑量學(xué))和有關(guān)繼續(xù)施用、甚至在抗癌劑治療開始后的決定，應(yīng)當(dāng)在臨床專家人員的知識范圍內(nèi)，還取決于抗癌劑的種類、預(yù)見的不良作用的類型和嚴(yán)重性、患者的狀況。僅僅作為舉例，乙?；鵏-肉堿的施用可以在手術(shù)去除腫瘤之前即刻或之后立即開始，但是在任何情況下都在開始施用抗癌劑之前，在手術(shù)前施用藥物的情形下也是同樣。當(dāng)預(yù)見到抗癌劑的施用是在手術(shù)之前或替代手術(shù)時(shí)，預(yù)防和治療無論在什么情況下都可以應(yīng)用。
共同施用還指試劑包或制品，其包含不同獨(dú)立施用形式的乙?；鵏-肉堿或其藥理學(xué)上可接受的鹽之一和抗癌劑，還有關(guān)于協(xié)同地同時(shí)地或預(yù)定時(shí)間地?cái)z入活性成分的說明書，按照初級護(hù)理醫(yī)生根據(jù)患者狀況制定的給藥方案。該試劑包適用于預(yù)防和治療。在本發(fā)明的不同實(shí)施方案中，該試劑包或制品包含單位劑量，其中含有抗癌劑和乙?；鵏-肉堿。
乙酰基L-肉堿的藥理學(xué)上可接受的鹽是指乙?；鵏-肉堿與不產(chǎn)生毒副作用的酸形成的任何鹽。這些酸是藥理學(xué)家和制藥技術(shù)人員所熟知的。
L-肉堿或烷酰基L-肉堿的藥理學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例為(盡管不只有這些)氯化物；溴化物；碘化物；天冬氨酸鹽；酸式天冬氨酸鹽；檸檬酸鹽；酸式檸檬酸鹽；酒石酸鹽；酸式酒石酸鹽；磷酸鹽；酸式磷酸鹽；延胡索酸鹽；酸式延胡索酸鹽；甘油磷酸鹽；葡萄糖磷酸鹽；乳酸鹽；馬來酸鹽；酸式馬來酸鹽；粘酸鹽；乳清酸鹽，草酸鹽；酸式草酸鹽；硫酸鹽；酸式硫酸鹽；三氯醋酸鹽；三氟醋酸鹽；甲磺酸鹽；雙羥萘酸鹽和酸式雙羥萘酸鹽。所述的鹽在本申請人的幾項(xiàng)專利中公開。
臨床使用的乙?；鵏-肉堿的日常給藥的一個優(yōu)選形式是組合物，其中含有量為0.1～3g、優(yōu)選0.5～3g的乙酰基L-肉堿或等同量的藥學(xué)上可接受的鹽。
本文所述的發(fā)明在預(yù)防或治療外周神經(jīng)病方面是有利的。
實(shí)質(zhì)性的保護(hù)作用是指預(yù)防、減少或消除或者無論以何種方式治療副作用到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著程度。
本文所述的發(fā)明的實(shí)施方案還有助于患者的康復(fù)和延長患者的生命，這得益于治療成功率的提高，因?yàn)榭梢跃S持既定的治療方案或提高化療劑的劑量，而不必因?yàn)榻砂Y中斷治療。
從本文所述的發(fā)明得到的另一個益處與治療對象的生活質(zhì)量有關(guān)；實(shí)際上，如已經(jīng)提到的，消除或者減輕外周神經(jīng)病造成的身體痛苦有利于患者自立的能力。從經(jīng)濟(jì)的觀點(diǎn)看，能明顯節(jié)省用于護(hù)理患者的醫(yī)療設(shè)施或家庭的費(fèi)用負(fù)擔(dān)。
在本文所述的發(fā)明的第一個優(yōu)選實(shí)施方案中，以協(xié)同方式施用乙?；鵏-肉堿和抗癌劑，所述抗癌劑選自下列家族鉑化合物、紫杉烷類、epothilone類和長春花屬生物堿、法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、沙利度胺、5-氟尿嘧啶、cryptophycin類似物、蛋白酶體抑制劑。
在本文所述的發(fā)明的第二個優(yōu)選實(shí)施方案中，乙?；鵏-肉堿已經(jīng)對抗癌劑誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病表現(xiàn)出意外程度的保護(hù)活性，所述抗癌劑選自卡鉑，奧沙利鉑，多西他賽，epothilone，長春瑞濱，長春新堿，法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑R11577，沙利度胺，cryptophycin類似物L(fēng)Y355703，蛋白酶體抑制劑PS341。該保護(hù)作用應(yīng)當(dāng)理解為預(yù)防所述副作用和治療所述保護(hù)作用。
盡管本發(fā)明的發(fā)明人不希望受到理論推測的約束，應(yīng)當(dāng)強(qiáng)調(diào)的是，乙?；鵏-肉堿的所述的保護(hù)活性(預(yù)防性和治療性)是在本領(lǐng)域知識的基礎(chǔ)上完全意料不到的。如在背景技術(shù)部分所討論的，推測乙酰基L-肉堿可能是通過提高還原型谷胱甘肽的水平來對自由基起“清除劑”的作用。在該部分中，還解釋了本發(fā)明中感興趣的抗癌藥物損傷外周神經(jīng)的機(jī)理。關(guān)于鉑家族，人們還熟知自由基清除劑可能會影響藥物活性，因?yàn)樗ㄟ^自由基機(jī)理起作用，所以不建議使用自由基清除劑。
乙酰基L-肉堿(ALC)通過加強(qiáng)神經(jīng)生長因子(NGF)的作用來發(fā)揮其對本文感興趣的抗癌藥物誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病的保護(hù)作用(Cavaletti，G.等，Journal of Neurology，Vol.249，Suppl.1，June 20021/28，78)。本領(lǐng)域廣泛地研究了NGF，作為對順鉑和紫杉醇神經(jīng)毒性的神經(jīng)保護(hù)劑。乙?；鵏-肉堿能夠通過增強(qiáng)不同基因的表達(dá)，強(qiáng)化NGF對PC12細(xì)胞的作用，如微陣列分析所評估的，還報(bào)道了NGF和乙?；鵏-肉堿之間在促進(jìn)PC12神經(jīng)炎后果中的關(guān)系。甚至在慢性的順鉑誘導(dǎo)的感覺神經(jīng)病的動物模型中，還發(fā)現(xiàn)了乙?；鵏-肉堿和NGF之間的另一種明確的關(guān)系。在該模型中，先前已經(jīng)證實(shí)了感覺神經(jīng)病的發(fā)生和NGF循環(huán)水平的降低之間的密切關(guān)系。
在紫杉醇-乙?；鵏-肉堿治療組中，在紫杉醇神經(jīng)毒性的體內(nèi)模型中還觀察到神經(jīng)病的嚴(yán)重性顯著降低。除了減少順鉑治療的動物中的NGF下降的作用外，乙?；鵏-肉堿似乎還能增強(qiáng)對NGF的細(xì)胞反應(yīng)。關(guān)于乙?；鵏-肉堿的保護(hù)作用基礎(chǔ)的分子機(jī)制，在本發(fā)明中進(jìn)行的研究證實(shí)了保護(hù)劑通過組蛋白乙?；?它參與基因表達(dá)的調(diào)節(jié))增強(qiáng)神經(jīng)元的NGF反應(yīng)的能力。乙?；鵏-肉堿的乙?；晦D(zhuǎn)移到NGF-分化的PC12細(xì)胞中的組蛋白上。乙酰基L-肉堿的存在增強(qiáng)了NGF-誘導(dǎo)的組蛋白乙?；?。此外，向PC12細(xì)胞加入乙?；鵏-肉堿顯著地刺激了NGFI-A的表達(dá)，所述的NGFI-A是編碼具有腫瘤抑制劑作用的轉(zhuǎn)錄因子的基因。另外，NGFI-A蛋白參與多種生理過程，并且它被提出在組織修復(fù)中起重要作用?？傊?，本發(fā)明表明，乙?；鵏-肉堿是對本發(fā)明中感興趣的抗癌劑治療后化療誘導(dǎo)的神經(jīng)病的特異性保護(hù)劑。與這一點(diǎn)相關(guān)的是，不會對藥物的抗腫瘤活性產(chǎn)生任何干擾。最后，乙?；鵏-肉堿能增強(qiáng)化療誘導(dǎo)的神經(jīng)病過程中生理性NGF的支持作用，從而避免外源施用NGF產(chǎn)生局部的或全身的副作用的問題，這是該神經(jīng)保護(hù)策略的主要問題。
當(dāng)根據(jù)本文所述的發(fā)明使用ALC時(shí)，沒有發(fā)現(xiàn)對藥物的抗癌行為的不良作用。
ALC可以便利地經(jīng)口施用，為了那個原因，不排除本領(lǐng)域的技術(shù)人員會建議采用的其它給藥途徑，特別是通過注射，要與抗癌劑伴隨地施用，例如，在相同的輸注瓶中，或者按照本領(lǐng)域的技術(shù)人員確立的次序。
由于L-肉堿和其它烷酰基L-肉堿(本文中統(tǒng)稱作“肉堿”)、特別是丙酰基L-肉堿(PLC)對抗癌劑的治療活性表現(xiàn)出有益作用，如前述的WO 00/06134所公開的，可以有利地提供作為保護(hù)劑的乙?；鵏-肉堿和一種或多種“肉堿”以及根據(jù)本發(fā)明的抗癌劑的組合，也是分開的劑量形式、或以某種方式組合。該組合還可以包含其它的抗癌劑，其能誘導(dǎo)大大減輕的副作用，更具體地是外周神經(jīng)病，這是根據(jù)本文所述發(fā)明的組合的結(jié)果。在綜合化療的情況下，后一實(shí)施方案是有利的。還可以有利地向上述組合中加入L-肉堿。
因此，進(jìn)一步明顯有利的是提供作為保護(hù)劑的乙?；鵏-肉堿、作為增效劑的丙?；鵏-肉堿以及一種根據(jù)本發(fā)明的抗癌劑的三元組合，也是分開的劑量形式、或以某種方式組合。該組合還可以包含其它的抗癌劑，其能表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)或誘導(dǎo)大大減輕的副作用，這是根據(jù)本文所述發(fā)明的組合的結(jié)果。在綜合化療的情況下，后一實(shí)施方案是有利的。還可以有利地向上述組合中加入L-肉堿。
本文所述的發(fā)明的一個具體目的是一種藥物組合物，其包含治療有效量的一種根據(jù)本發(fā)明的抗癌劑以及保護(hù)量的乙?；鵏-肉堿和增效量的丙?；鵏-肉堿，它們在與藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑的混合物中。
關(guān)于與工業(yè)應(yīng)用性有關(guān)的那些方面，本文所述的發(fā)明還在一個可行的實(shí)施方案中提供了一種藥盒，其包含a)藥物組合物，其包含治療有效量的抗癌劑；b)藥物組合物，其包含乙?；鵏-肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽，其量適合于針對所述抗癌劑對外周神經(jīng)系統(tǒng)的副作用產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性的保護(hù)作用。根據(jù)本文所述的發(fā)明的藥盒還可以以下述形式存在a)藥物組合物，其包含治療有效量的抗癌劑；b)藥物組合物，其包含乙?；鵏-肉堿，其量適合于針對所述抗癌劑的副作用產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性的保護(hù)作用。
藥盒的指南見上述的WO 00/6134，特別是與其它肉堿組合的情形。
現(xiàn)在，將參考使用奧沙利鉑或epothilone或長春瑞濱作為抗癌劑的優(yōu)選實(shí)施方案說明實(shí)施本文所述發(fā)明的方式。
應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可用其所屬的本領(lǐng)域(也可能在需要時(shí)求助于相鄰技術(shù)領(lǐng)域)的其自己的一般知識完成實(shí)驗(yàn)方案。
我們在下面報(bào)告了最有意義的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，它們適用于證實(shí)通過組合L-肉堿或其衍生物與上述抗癌劑而得到的意外的和令人驚訝的保護(hù)作用。關(guān)于實(shí)驗(yàn)的細(xì)節(jié)，可以參考WO 00/6134和本申請中引用的文獻(xiàn)。
實(shí)施例1乙?；鵏-肉堿對奧沙利鉑誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷谋Ｗo(hù)作用--預(yù)防性治療該研究的目的是證實(shí)和評價(jià)在奧沙利鉑治療前1天施用乙?；鵏-肉堿4周的預(yù)防性的保護(hù)特性。
通過腹膜內(nèi)施用溶解在無菌蒸餾水中的奧沙利鉑(2.7mg/kg/1.5ml)，每周2次、進(jìn)行4周(共給藥8次)，誘導(dǎo)外周神經(jīng)病。
將乙?；鵏-肉堿溶解到蒸餾水中，并皮下給藥。根據(jù)各自的體重，施用100mg/1.5ml/Kg/天的劑量。每天進(jìn)行ALC治療，在奧沙利鉑治療前1天開始，進(jìn)行4周。用載體皮下處理對照組和奧沙利鉑組。
在開始治療前(基礎(chǔ)的)和最后一次施用奧沙利鉑后的那天(最后的)，測定氟烷麻醉下的每只動物中的神經(jīng)傳導(dǎo)速率(NCV)。
以下述方法測定NCV用由0.45氟烷、氧化亞氮和氧組成的氣體混合物麻醉動物。通過將刺激電極放在尾巴的根部、將一對記錄環(huán)電極放在距離刺激電極5和10cm的尾巴遠(yuǎn)端，檢測尾巴中的神經(jīng)傳導(dǎo)速率。
確定神經(jīng)刺激后在2個位點(diǎn)記錄的電位潛伏期(峰至峰)，據(jù)此計(jì)算神經(jīng)傳導(dǎo)速率。
通過用永固墨水標(biāo)記尾巴，使在每只動物上進(jìn)行的重復(fù)實(shí)驗(yàn)的刺激位點(diǎn)和記錄位點(diǎn)都是固定的。
使用Ote Biomedica Phasis II肌電圖機(jī)，使用等于閾值的刺激強(qiáng)度、持續(xù)100微秒，進(jìn)行尾神經(jīng)的記錄和刺激?？紤]到文獻(xiàn)中報(bào)道的神經(jīng)傳導(dǎo)速率取決于動物體溫，必需在整個實(shí)驗(yàn)過程中保持后者恒定，在BM 70002-型動物用溫度調(diào)節(jié)器(Biomedica Mangoni)的輔助下，用直腸探頭進(jìn)行測量。
在基礎(chǔ)條件下和治療5周后，在所有動物組中測定速率。
將結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差；對獨(dú)立的和配對的數(shù)據(jù)，均使用″t″-檢驗(yàn)分析顯著性，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性分界點(diǎn)為p＜0.05。
在尾神經(jīng)上測定到的感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速率的數(shù)據(jù)如下面的表1所示。
表1奧沙利鉑誘導(dǎo)的神經(jīng)病在處于基礎(chǔ)條件和用乙酰基L-肉堿治療后的動物尾上測定的感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速率(m/s)
值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。
t-檢驗(yàn)(獨(dú)立數(shù)據(jù))*＝p＜0.001vs對照§＝p＜0.001vs奧沙利鉑實(shí)施例2乙?；鵏-肉堿對奧沙利鉑誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷谋Ｗo(hù)作用——治療性治療該研究的目的是證實(shí)和評價(jià)在奧沙利鉑治療結(jié)束時(shí)施用乙?；鵏-肉堿持續(xù)3周隨訪期的治療性的保護(hù)特性。
通過腹膜內(nèi)施用溶解在無菌蒸餾水中的奧沙利鉑(3mg/kg/1.5ml)，每周2次、進(jìn)行4周(共給藥8次)，誘導(dǎo)外周神經(jīng)病。
將乙?；鵏-肉堿溶解到蒸餾水中，并在隨訪期間皮下給藥。根據(jù)各自的體重，施用100mg/1.5ml/Kg/天的劑量。在最后一次施用奧沙利鉑后的那天開始ALC治療。
用載體皮下處理對照組和奧沙利鉑組。
在開始治療前(基線)、最后一次施用奧沙利鉑后的那天(最后的)、和在3周隨訪期后的每周(恢復(fù))，測定氟烷麻醉下的每只動物中的神經(jīng)傳導(dǎo)速率(NCV)。
按照實(shí)施例1檢測NCV。
在尾神經(jīng)檢測到的感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速率的數(shù)據(jù)如下面的表2所示。
表2奧沙利鉑誘導(dǎo)的神經(jīng)病在處于基礎(chǔ)條件和用乙?；鵏-肉堿治療后的動物尾上測定的感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速率(m/s)
值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。
t-檢驗(yàn)(獨(dú)立數(shù)據(jù))*＝p＜0.01vs對照；**＝p＜0.005vs對照；***＝p＜0.0001vs對照；§＝p＜0.05vs奧沙利鉑；§§＝p＜0.01vs奧沙利鉑；實(shí)施例3乙?；鵏-肉堿對來自奧沙利鉑誘導(dǎo)的損傷的外周神經(jīng)的保護(hù)作用——治療性的和預(yù)防性的治療用縮爪實(shí)驗(yàn)(Randall-Sellitto)說明機(jī)械性痛覺過敏。使用UgoBasile analgesimeter，通過向左和右后爪施加增大的壓力測定疼痛閾值。將疼痛閾值定義為大鼠縮回其爪時(shí)的壓力(g)。較低的閾值對應(yīng)著對痛覺較高的敏感度。在施用藥物或載體的不同時(shí)間(天)進(jìn)行該行為實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)前一周，使大鼠熟悉實(shí)驗(yàn)方法和研究人員的處置。
使用約10周齡的Wistar雌性大鼠(Charles River)。每周施用3次在鹽水中的奧沙利鉑(3mg/kg，腹膜內(nèi))，在前2周，然后每周2次進(jìn)行2周，然后每周1次。
如下進(jìn)行預(yù)防性的治療從奧沙利鉑治療的第1天，每天腹膜內(nèi)施用奧沙利鉑3mg/kg+皮下施用ALC 100mg/Kg。
如下進(jìn)行治療性的治療從奧沙利鉑治療的第24天，每天腹膜內(nèi)施用奧沙利鉑3mg/kg+皮下施用ALC 100mg/Kg。
疼痛閾值數(shù)據(jù)(Randall-Sellitto)如下面的表3所示。
表3奧沙利鉑誘導(dǎo)的神經(jīng)病在動物后爪上測定的疼痛閾值(g)(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)
ANOVADunnett氏多重比較檢驗(yàn)vs奧沙利鉑。a＝p＜0.05，d＝p＜0.001。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析如下面表4所示。
表4
實(shí)施例4乙?；鵏-肉堿對來自長春瑞濱誘導(dǎo)的損傷的外周神經(jīng)的保護(hù)作用——治療性的和預(yù)防性的治療按照實(shí)施例3進(jìn)行縮爪實(shí)驗(yàn)(Randall-Sellitto)。
使用約3月齡(約350g)的Sprague Dawley雄性大鼠(Harlan)。每周3次施用在鹽水中的長春瑞濱(0.200mg/kg，腹膜內(nèi))，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
如下進(jìn)行預(yù)防性的治療從長春瑞濱治療的第1天，每天(每周6天)腹膜內(nèi)施用長春瑞濱3mg/kg+皮下施用ALC 100mg/Kg。用ALC治療直至第25天。
如下進(jìn)行治療性的治療從長春瑞濱治療的第9天，每天(每周6天)腹膜內(nèi)施用奧沙利鉑3mg/kg+皮下施用ALC 100mg/Kg。用ALC治療直至第25天。
實(shí)驗(yàn)每周進(jìn)行2次。
疼痛閾值數(shù)據(jù)(Randall-Sellitto)如下面的表5所示。
表5長春瑞濱誘導(dǎo)的神經(jīng)病在動物后爪上測定的疼痛閾值(g)(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)
Student′s t檢驗(yàn)vs長春瑞濱a＝p≤0.05，b＝p≤0.02，c＝p≤0.01d＝p≤0.001。
實(shí)施例5乙?；鵏-肉堿對來自長春新堿誘導(dǎo)的損傷的外周神經(jīng)的保護(hù)作用——治療性的和預(yù)防性的治療按照實(shí)施例3進(jìn)行縮爪實(shí)驗(yàn)(Randall-Sellitto)。
使用約3月齡(約350g)的Sprague Dawley雄性大鼠(Harlan)。每周3次地施用在鹽水中的長春新堿(0.150mg/kg，腹膜內(nèi))，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
如下進(jìn)行預(yù)防性的治療每周3次腹膜內(nèi)施用長春新堿0.150mg/kg+每日(每周6天)皮下施用ALC 100mg/Kg。。
如下進(jìn)行治療性的治療從長春新堿治療的第15天，腹膜內(nèi)施用長春新堿0.150mg/kg+每天(每周6天)皮下施用ALC 100mg/Kg。
實(shí)驗(yàn)每周進(jìn)行2次。
疼痛閾值數(shù)據(jù)(Randall-Sellitto)如下面的表6和表7所示。
表6長春新堿誘導(dǎo)的神經(jīng)病在動物后爪上測定的疼痛閾值(g)(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)——預(yù)防性治療
Student′s t檢驗(yàn)vs長春新堿d＝p＜0.001。
表7長春新堿誘導(dǎo)的神經(jīng)病在動物后爪上測定的疼痛閾值(g)(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)——治療性治療
Student′s t檢驗(yàn)vs長春新堿b＝p≤0.02，c＝p≤0.01 d＝p≤0.001。
權(quán)利要求
1.乙酰基L-肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于預(yù)防和/或治療外周神經(jīng)病的藥物中的應(yīng)用，所述外周神經(jīng)病由施用能誘發(fā)外周神經(jīng)病的抗癌劑而誘導(dǎo)，條件是所述的抗癌劑不是紫杉醇或順鉑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述的藥物適于以協(xié)同方式施用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的應(yīng)用，其中所述的能誘導(dǎo)外周神經(jīng)病的抗癌劑選自以下家族鉑化合物、紫杉烷類、epothilone類和長春花屬生物堿、法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、沙利度胺、5-氟尿嘧啶、cryptophycin類似物、蛋白酶體抑制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的應(yīng)用，其中所述的抗癌劑選自卡鉑，奧沙利鉑，多西他賽，epothilone，長春瑞濱，長春新堿，法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑R11577，沙利度胺，cryptophycin類似物L(fēng)Y355703，蛋白酶體抑制劑PS341。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4中的任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述的施用是基本上同時(shí)的。
6.根據(jù)權(quán)利要求2-4中的任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述的施用是序貫的。
7.根據(jù)權(quán)利要求2-5中的任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述的施用是以組合物的形式，所述組合物除了包含任選的藥學(xué)上可接受的賦形劑和/或載體以外，還組合地在混合物中包含所述的乙?；鵏-肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽和所述抗癌劑。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中施用0.1～3g/天的乙酰基L-肉堿或等同量的其藥學(xué)上可接受的鹽。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述的乙酰基L-肉堿的藥理學(xué)上可接受的鹽選自氯化物，溴化物，乳清酸鹽，酸式天冬氨酸鹽，酸式檸檬酸鹽，酸式磷酸鹽，延胡索酸鹽和酸式延胡索酸鹽，馬來酸鹽和酸式馬來酸鹽，酸式草酸鹽，酸式硫酸鹽，葡萄糖磷酸鹽，酒石酸鹽和酸式酒石酸鹽。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-4和6-9中的任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述的藥物有待鑒于所述抗癌劑治療的需要而施用于對象。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的應(yīng)用，其中所述的藥物有待在手術(shù)去除腫瘤之前即刻或之后立即施用。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的應(yīng)用，其中所述的抗癌劑是手術(shù)去除腫瘤的替代方案。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中加入了其它的肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中加入了其它的抗癌劑。
15.一種組合物，其組合地含有a)乙酰基L-肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽；b)能誘發(fā)外周神經(jīng)病的抗癌劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的組合物，其中所述的抗癌劑選自以下家族鉑化合物、紫杉烷類、epothilone類、長春花屬生物堿。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物，其中所述的抗癌劑選自鉑化合物、紫杉烷類、epothilone類和長春花屬生物堿、法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、沙利度胺，5-氟尿嘧啶、cryptophycin類似物、蛋白酶體抑制劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中所述的抗癌劑選自卡鉑，奧沙利鉑，多西他賽，epothilone，長春瑞濱，長春新堿，法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑R11577，沙利度胺，cryptophycin類似物L(fēng)Y355703，蛋白酶體抑制劑PS341。
19.根據(jù)權(quán)利要求15-18中的任一項(xiàng)的組合物，其中所述的乙酰基L-肉堿的藥理學(xué)上可接受的鹽選自氯化物，溴化物，乳清酸鹽，酸式天冬氨酸鹽，酸式檸檬酸鹽，酸式磷酸鹽，延胡索酸鹽和酸式延胡索酸鹽，馬來酸鹽和酸式馬來酸鹽，酸式草酸鹽，酸式硫酸鹽，葡萄糖磷酸鹽，酒石酸鹽和酸式酒石酸鹽。
20.根據(jù)權(quán)利要求15-19中的任一項(xiàng)的組合物，其中加入了其它的肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽。
21.根據(jù)權(quán)利要求15-20中的任一項(xiàng)的組合物，其中加入了其它的抗癌劑。
22.一種藥盒，其包含a)藥物組合物，其包含治療有效量的能誘發(fā)外周神經(jīng)病的抗癌劑；b)藥物組合物，其包含乙酰基L-肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽，其量適合于針對由施用所述抗癌劑誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性的保護(hù)作用。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的藥盒，其中所述的抗癌劑選自鉑化合物、紫杉烷類、epothilone類和長春花屬生物堿、法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、沙利度胺、5-氟尿嘧啶、cryptophycin類似物、蛋白酶體抑制劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的藥盒，其中所述的抗癌劑選自卡鉑，奧沙利鉑，多西他賽，epothilone，長春瑞濱，長春新堿，法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑R11577，沙利度胺，cryptophycin類似物L(fēng)Y355703，蛋白酶體抑制劑PS341。
25.根據(jù)權(quán)利要求22-24中的任一項(xiàng)的藥盒，其中所述的乙酰基L-肉堿的藥理學(xué)上可接受的鹽選自氯化物，溴化物，乳清酸鹽，酸式天冬氨酸鹽，酸式檸檬酸鹽，酸式磷酸鹽，延胡索酸鹽和酸式延胡索酸鹽，馬來酸鹽和酸式馬來酸鹽，酸式草酸鹽，酸式硫酸鹽，葡萄糖磷酸鹽，酒石酸鹽和酸式酒石酸鹽。
26.根據(jù)權(quán)利要求22-25中的任一項(xiàng)的藥盒，其中加入了其它的肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽。
27.根據(jù)權(quán)利要求22-26中的任一項(xiàng)的組合物，其中加入了其它的抗癌劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了乙酰基L－肉堿或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于預(yù)防和/或治療由施用能誘發(fā)外周神經(jīng)病的抗癌劑而誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病的藥物中的應(yīng)用。更具體地，所述的抗癌劑選自以下家族鉑化合物、紫杉烷類、epothilone類和長春花屬生物堿、法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、沙利度胺、5－氟尿嘧啶、cryptophycin類似物、蛋白酶體抑制劑。所述的藥物可以以協(xié)同地方式施用給患有所述外周神經(jīng)病、或預(yù)期會患所述外周神經(jīng)病的對象。實(shí)現(xiàn)了對患者的生活質(zhì)量的有益效果，并提高了抗癌劑的治療指數(shù)。
文檔編號A61K31/221GK1708297SQ200380102216
公開日2005年12月14日 申請日期2003年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月13日
發(fā)明者C·卡瓦扎, C·皮薩諾, L·韋希 申請人:希格馬托制藥工業(yè)公司