專利名稱：一種丹參注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，具體涉及一種丹參注射制劑的主要成分及其注射制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
冠心病、心絞痛在臨床上是常見病、多發(fā)病，近年來隨著人們生活水平的提高，發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。丹參是傳統(tǒng)的活血化瘀常用中藥，臨床上用于治療心絞痛、心肌梗塞等心血管系統(tǒng)疾病有很好的效果?，F(xiàn)代藥理研究表明，丹參的藥理作用主要是對心血管系統(tǒng)，能擴張血管，加快血流，改善微循環(huán)，改變血液粘滯性，增加心肌供血量、供氧量、降低心肌耗氧量等。此外，丹參還具抗腫瘤、抗菌、抗炎等作用。因此，丹參的應(yīng)用十分廣泛。藥理研究表明，丹參中具有活血化瘀活性的有效部位有兩類脂溶性丹參酮類和水溶性丹參酚酸類。脂溶性丹參酮類包括丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I、去氫丹參酮I等成分。藥理研究表明丹參酮IIA具有抗血小板聚集作用、抗血栓作用和對實驗性心肌缺血和再灌注損傷具有保護作用。丹參酮IIA磺酸鈉能通過鈣拮抗作用減少或抑制異丙基腎上腺素引起的心肌線粒體鈣超載，從而起到保護線粒體和心肌細胞因遭受高鈣沖擊而致細胞壞死作用，并能促進缺血心肌ATP的合成。水溶性丹參酚酸類包括丹酚酸A～C、迷迭香酸及其甲酯、丹參素、原兒茶醛、原兒茶酸等成分。藥理研究表明丹參酚酸類成分具有抗血小板聚集作用、抗血栓形成作用、改善微循環(huán)作用、抗氧化損傷和多途徑發(fā)揮心肌保護作用。
目前，丹參注射液采用水煮醇沉工藝(部頒標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-3766-98)，由于脂溶性成分在水中溶解度小或幾乎不溶，所以采用水提醇沉工藝脂溶性成分大部分未被提出或提出很少，并且注射液穩(wěn)定性較差，貯存一定時間后往往出現(xiàn)pH值改變，外觀色澤變深，甚至出現(xiàn)渾濁和沉淀等，使澄明度不合格，因此，丹參注射液的工藝亟需改進與提高。
超臨界流體萃取是一種新型萃取分離技術(shù)，它能夠比較完好地保存中藥有效成分不被破壞或發(fā)生次生化，尤其適合于對熱敏感性強、容易氧化分解的中藥成分的提取。超臨界二氧化碳流體萃取提取效率高，在有效成分得到富集的同時，無溶劑殘留，便于控制產(chǎn)品質(zhì)量。因此，采用超臨界流體萃取技術(shù)對丹參中的脂溶性丹參酮類成分進行提取，可防止對熱不穩(wěn)定的丹參酮降解，并且具有萃取完全的優(yōu)點。
環(huán)糊精以其特殊的“內(nèi)疏水、外親水”的分子結(jié)構(gòu)與許多客體分子形成包結(jié)配合物，在藥學(xué)上主要用于提高藥物在制劑中的穩(wěn)定性，增加難溶性藥物在水中的溶解度等，但β-環(huán)糊精(β-CD)本身的低溶解度限制了它的應(yīng)用，在眾多的環(huán)糊精衍生物中羥丙基β環(huán)糊精(HP-β-CD)衍生物被認(rèn)為是最有前途的高級藥物載體材料。HP-β-CD在水中的溶解度75％，遠遠大于β-CD1.85％(25℃)，比β-CD的水溶解度提高近40倍。難溶性藥物被HP-β-CD包合后，不僅能增加藥物的溶解度和溶解速度，還可以提高藥物生物利用度和穩(wěn)定性。動物實驗表明，HP-β-CD本身安全性好，無毒副作用，并且HP-β-CD已被美國藥典作為藥用輔料收載。因此，采用HP-β-CD包合丹參注射制劑中丹參酮類成分，能很好解決丹參酮類脂溶性成分在注射液中溶解度小的問題。
結(jié)合丹參注射制劑中丹參酮不穩(wěn)定，容易發(fā)生降解以及丹參酮在水中溶解度小的特點，本發(fā)明采用超臨界流體萃取法提取丹參中的脂溶性丹參酮類成分，將丹參酮采用羥丙基β-環(huán)糊精包合，對超臨界萃取后的丹參采用水提，與丹參酮類羥丙基β-環(huán)糊精包合物一起制成注射制劑。專利CN99117379公開了中藥丹參中活性成分超臨界二氧化碳萃取工藝方法，采用夾帶劑提取丹參酮，這樣易提取出極性較大的成分，而本發(fā)明的目的是提取出脂溶性丹參酮類成分供HP-β-CD包合，解決脂溶性成分難溶于水的問題。專利CN01141436.7報道了水溶性丹參酮的制備方法，采用乙醇提取丹參，然后直接用β-環(huán)糊精包合，因采用乙醇提取出的成分較多，除有丹參酮類成分外，水溶性成分如丹參素、原兒茶醛等也會被乙醇提出，這樣直接用β-環(huán)糊精包合，沒有針對性，并且包合所需β-環(huán)糊精量較大，包合效果也不理想。本發(fā)明采用超臨界萃取提取出丹參酮類脂溶性成分，采用HP-β-CD有針對性地進行包合，并且采用HP-β-CD包合比采用β-CD包合好，其水溶性得到大大提高，提高約40倍。采用超臨界流體技術(shù)提取丹參中的丹參酮類成分并對其采用羥丙基β-環(huán)糊精包合，增加了其穩(wěn)定性和水溶性；因此，通過本發(fā)明，解決了丹參酮在注射液中溶解度小、含量少、不穩(wěn)定的問題，使制劑更穩(wěn)定，有效成分含量大大提高，從而使制劑成品的質(zhì)量和臨床療效得到保證。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種有效成分含量高、穩(wěn)定、制備工藝合理的丹參注射制劑及其制備方法。本發(fā)明采用二氧化碳超臨界流體萃取技術(shù)提取丹參中的丹參酮類有效成分，利用羥丙基β-環(huán)糊精(HP-β-CD)對其進行包合，從而增進了丹參酮類成分在注射液中的溶解度，解決了脂溶性成分在注射液中溶解難的問題，提高了制劑的質(zhì)量和臨床療效。對超臨界流體萃取后的丹參藥材粉加水煎煮提取，水提液濃縮后，醇沉純化二次，濃縮至適量，加入丹參酮HP-β-CD包合物，攪拌均勻，用0.2％的活性炭脫色，濾過，低溫真空干燥或冷凍干燥，即得丹參注射制劑的主要成分。取丹參注射制劑的主要成分，加注射用水使溶解，加吐溫-80適量，調(diào)節(jié)pH值，濾過，灌裝，滅菌，即得丹參注射液；取丹參注射制劑的主要成分，加適量注射用水溶解，加入適量凍干賦形劑，冷凍干燥，即得丹參凍干粉針劑。本發(fā)明的丹參注射制劑，有效成分含量高，療效顯著。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)一、藥材的前處理取丹參藥材，揀選、用去離子水洗凈、烘干，粉碎成粗粉。
二、提取、制備工藝1、取丹參粗粉，置超臨界流體萃取器中，萃取2h，得丹參超臨界萃取物；取丹參超臨界萃取物，用適量乙醇溶解，加入到飽和的HP-β-CD溶液中，恒溫攪拌一定時間，置冰箱中冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得HP-β-CD包合物粉末。取超臨界萃取后的丹參粗粉，以去離子水煎煮提取三次，提取液合并，減壓濃縮至每1ml相當(dāng)于2g的生藥，放冷，緩緩加入乙醇使含醇量達75％，冷藏靜置，濾過；上清液減壓回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.15-1.20(50℃)，放冷，加入乙醇使含醇量達80-85％，冷藏靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇至干，得丹參水提取物，備用。將丹參酮HP-β-CD包合物以及丹參水提取物用適量注射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分鐘，濾過，真空低溫干燥和/或冷凍干燥，得丹參注射制劑的主要成分。
取丹參注射制劑的主要成分，用適量注射用水溶解，加入吐溫-80適量，濾過，調(diào)節(jié)pH值，濾過，灌封，滅菌，即得丹參注射液。
取丹參注射制劑的主要成分，加適量注射用水溶解，加入適量凍干賦形劑，攪勻，濾過，調(diào)節(jié)pH值，濾過，灌裝，冷凍干燥，即得注射用丹參凍干粉針。
2、丹參注射制劑主要由丹參酮類羥丙基β-環(huán)糊精包合物、丹參水溶性有效成分組成。
3、丹參酮類羥丙基β-環(huán)糊精包合物采用超臨界萃取技術(shù)提取丹參中的丹參酮類成分，以羥丙基β-環(huán)糊精利用攪拌法進行包合。
4、一種丹參注射用凍干粉針，其凍干賦形劑可以是甘露醇和乳糖中的一種或二種的混合物。
丹參注射制劑對大鼠急性心肌缺血的影響1、實驗儀器與材料動物Wistar大白鼠；垂體后葉素注射液，北京生化制藥廠生產(chǎn)。
2、方法與結(jié)果2.1 丹參注射制劑對垂體后葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響取體重250～300g Wistar大鼠40只，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只，連續(xù)ip給藥7d，劑量見表1。各組動物于末次給藥30min后，腹腔注射25％烏拉坦0.4ml/100g麻醉，仰臥固定，標(biāo)準(zhǔn)電壓1mv＝15mm，走紙速度50mm/s，記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖。舌下靜脈注射垂體后葉素0.75u/kg于5s內(nèi)注射完。每30s記錄一次心電圖。大鼠靜脈注射垂體后葉素1min內(nèi)，大多數(shù)表現(xiàn)為心率減慢，T波高聳，ST段抬高等變化。分別觀察用藥前后30s、1min及50min上T波增殖的變化，從表1丹參注射液與本發(fā)明的丹參注射制劑對垂體后葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響。
T波增值(mV)組別動物數(shù)劑量30s 1min 5min生理鹽水組 100.6ml 0.35±0.12 0.25±0.16 0.18±0.022丹參注射液組100.6ml/kg 0.26±0.06*0.15±0.041* 0.098±0.015*本發(fā)明的丹參100.6ml/kg 0.19±0.05** 0.10±0.034** 0.052±0.011**注射液組維拉帕米105mg/kg0.16±0.020** 0.08±0.032** 0.030±0.018**與生理鹽水組比較*P＜0.05，**P＜0.01從以上結(jié)果可看出，本發(fā)明的丹參注射液能顯著降低30s、1min及5min時的T波增殖，比普通丹參注射液效果更明顯。
具體實施形式實施例11、處方丹參1500g2、提取取上述處方量藥材，揀選、用去離子水洗凈、烘干，粉碎成粗粉。取丹參粗粉，置超臨界流體萃取器中，以22Mpa的萃取壓力，45℃的萃取溫度萃取2小時，得丹參超臨界萃取物。取丹參超臨界萃取物，用適量乙醇溶解，加入到飽和的HP-β-CD溶液中，50℃恒溫攪拌至出現(xiàn)渾濁，繼續(xù)攪拌1.5h，置冰箱中冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得HP-β-CD包合物粉末；取超臨界萃取后的丹參藥粉，以去離子水煎煮提取三次，提取液合并，減壓濃縮至每1ml相當(dāng)于2的生藥，緩緩加入乙醇使含醇量達75％，冷藏靜置，濾過；上清液減壓回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.15-1.20(50℃)，加入乙醇使含醇量達85％，冷藏靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇至干，得丹參水提取物，備用。將丹參酮HP-β-CD包合物與丹參水提取物用適量注射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分鐘，濾過，真空低溫干燥和/或冷凍干燥，得丹參注射制劑的主要成分。
3、制備(1)丹參注射液的制備取丹參注射制劑的主要成分，用適量注射用水溶解，再加入吐溫-80適量，攪勻，濾過，調(diào)節(jié)pH值，濾過，加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得丹參注射液。
(2)丹參凍干粉針劑的制備取丹參注射制劑的主要成分，加適量注射用水溶解，加入凍干賦形劑甘露醇30g，攪勻，濾過，調(diào)節(jié)pH值，濾過，滅菌，冷凍干燥，即得注射用丹參凍干粉針劑。
(3)丹參無菌粉針劑的制備取丹參注射制劑的主要成分，無菌分裝，即得。
實施例21、處方丹參1500g2、提取取上述處方量藥材，揀選、用去離子水洗凈、烘干，粉碎成粗粉。取丹參粗粉，置超臨界流體萃取器中，以22Mpa的萃取壓力，45℃的萃取溫度萃取2小時，得丹參超臨界萃取物。取丹參超臨界萃取物，用適量乙醇溶解，加入到飽和的HP-β-CD溶液中，50℃恒溫攪拌至出現(xiàn)渾濁，繼續(xù)攪拌1.5h，置冰箱中冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得HP-β-CD包合物粉末；取超臨界萃取后的丹參藥粉，以去離子水煎煮提取三次，提取液合并，減壓濃縮至每1ml相當(dāng)于2g的生藥，緩緩加入乙醇使含醇量達75％，冷藏靜置，濾過；上清液減壓回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.15-1.20(50℃)，加入乙醇使含醇量達85％，冷藏靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇至干，得丹參水提取物，備用。將丹參酮HP-β-CD包合物與丹參水提取物用適量注射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分鐘，濾過，真空低溫干燥和/或冷凍干燥，得丹參注射制劑的主要成分。
3、制備(1)丹參注射液的制備取丹參注射制劑的主要成分，用適量注射用水溶解，再加入吐溫-80適量，攪勻，濾過，調(diào)節(jié)pH值，濾過，加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得丹參注射液。
(2)丹參凍干粉針劑的制備取丹參注射制劑的主要成分，加適量注射用水溶解，加入凍干賦形劑甘露醇20g，乳糖10g，攪勻，濾過，調(diào)節(jié)pH值，濾過，滅菌，冷凍干燥，即得注射用丹參凍干粉針劑。
(3)丹參無菌粉針劑的制備取丹參注射制劑的主要成分，無菌分裝，即得。
實施例31、處方丹參1500g2、提取取上述處方量藥材，揀選、用去離子水洗凈、烘干，粉碎成粗粉。取丹參粗粉，置超臨界流體萃取器中，以22Mpa的萃取壓力，45℃的萃取溫度萃取2小時，得丹參超臨界萃取物。取丹參超臨界萃取物，用適量乙醇溶解，加入到飽和的HP-β-CD溶液中，50℃恒溫攪拌至出現(xiàn)渾濁，繼續(xù)攪拌1.5h，置冰箱中冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得HP-β-CD包合物粉末；取超臨界萃取后的丹參藥粉，以去離子水煎煮提取三次，提取液合并，減壓濃縮至每1ml相當(dāng)于2g的生藥，緩緩加入乙醇使含醇量達75％，冷藏靜置，濾過；上清液減壓回收乙醇，濃縮至藥液相對密度為1.15-1.20(50℃)，加入乙醇使含醇量達85％，冷藏靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇至干，得丹參水提取物，備用。將丹參酮HP-β-CD包合物與丹參水提取物用適量注射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分鐘，濾過，真空低溫干燥和/或冷凍干燥，得丹參注射制劑的主要成分。
3、制備
(1)丹參注射液的制備取丹參注射制劑的主要成分，用適量注射用水溶解，再加入吐溫80適量，攪勻，濾過，調(diào)節(jié)pH值，濾過，加注射用水至1000ml，灌封，滅菌，即得丹參注射液。
(2)丹參凍干粉針劑的制備取丹參注射制劑的主要成分，加適量注射用水溶解，加入凍干賦形劑乳糖40g，攪勻，濾過，調(diào)節(jié)pH值，濾過，滅菌，冷凍干燥，即得注射用丹參凍干粉針劑。
(3)丹參無菌粉針劑的制備取丹參注射制劑的主要成分，無菌分裝，即得。
權(quán)利要求
1.一種丹參注射制劑，其特征在于其主要成分是由丹參酮類羥丙基β-環(huán)糊精包合物、丹參水溶性提取物組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參酮類羥丙基β-環(huán)糊精包合物，其特征在于采用超臨界萃取提取丹參中的丹參酮，以羥丙基β-環(huán)糊精利用攪拌法進行包合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參注射制劑，其主要成分的制備方法是取丹參粗粉，置超臨界流體萃取器中，萃取2h，得丹參超臨界萃取物；取丹參超臨界萃取物，用適量乙醇溶解，加入到飽和的羥丙基β-環(huán)糊精溶液中，恒溫攪拌一定時間，置冰箱中冷藏過夜，抽濾，低溫干燥，得羥丙基β-環(huán)糊精包合物粉末。取超臨界萃取后的丹參粗粉，以去離子水煎煮提取三次，提取液合并，減壓濃縮至每1ml相當(dāng)于2g的生藥，放冷，緩緩加入乙醇使含醇量達75％，冷藏靜置，濾過；上清液減壓回收乙醇，濃縮至藥液在50℃時相對密度為1.15-1.20，放冷，加入乙醇使含醇量達80-85％，冷藏靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇至干，得丹參水溶性提取物，備用。將丹參酮HP-β-CD包合物以及丹參水提取物用適量注射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分鐘，濾過，真空低溫干燥和/或冷凍干燥，得丹參注射制劑的主要成分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參注射制劑，它可以是注射液或粉針劑，粉針劑包括無菌粉針劑和凍干粉針劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種丹參注射液，其特征在于取丹參注射制劑的主要成分，用適量注射用水溶解，加吐溫-80適量，濾過，調(diào)節(jié)pH值，灌封，滅菌，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的凍干粉針劑，其特征在于取丹參注射制劑的主要成分，用適量注射用水溶解，加適量凍干賦形劑，混勻，濾過，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，壓蓋，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的凍干粉針劑，其特征在于凍干賦形劑可以是甘露醇和乳糖中一種或二種的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種丹參注射制劑及其制備方法，包括注射液，粉針劑和凍干粉針劑。其特征在于它主要由丹參酮類羥丙基β－環(huán)糊精包合物、丹參水提物組成，采用超臨界流體萃取技術(shù)提取丹參中丹參酮類脂溶性成分，對丹參酮采用羥丙基β－環(huán)糊精(HP－β－CD)包合，從而大大提高了丹參酮類成分在注射液中的溶解度和含量，使丹參注射制劑的質(zhì)量和臨床療效得到明顯提高。本發(fā)明的丹參注射制劑，有效成分含量高，穩(wěn)定性好，療效顯著。
文檔編號A61P9/00GK1546012SQ200310124170
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月15日
發(fā)明者張正生 申請人:張正生