專利名稱：多聚不飽和磷脂酰膽堿的新用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及多聚不飽和磷脂酰膽堿(Poly unsaturated PhosphatidylCholine，簡稱PPC)的用途，尤其涉及其在制藥領域中的用途。
背景技術：
多聚不飽和磷脂酰膽堿是從大豆提取和純化得到的成分多樣但成分分明的多烯磷脂酰膽堿(或稱多烯卵磷脂)的混合物.多聚不飽和卵磷脂已在西歐多國被批準用來治療慢性肝病。
多聚不飽和卵磷脂中含有72-76％的磷脂酰膽堿和24-28％的磷脂，在72-76％的磷脂酰膽堿中兩個最主要成分為雙亞油酸磷脂酰膽堿(32-42％)和棕櫚酸-亞油酸磷脂酰膽堿(18-19％)。
有報告指出，多聚不飽和卵磷脂對在狒猴中由酒精引起的肝纖維化和肝硬化有療效，其作用機理是促進膠原的分解(Lieber CS.等，Gastroenterology，1994，106(1)152-9)。
還有報告指出，血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial GrowthFactor，簡稱VEGF)的過度表達導致明顯的肝癌發(fā)展及新生血管的聚集，腫瘤增長的程度與血管內(nèi)皮生長因子基因的表達有關。血管內(nèi)皮生長因子表達的抑制使已存在的腫瘤生長受到遏制，而與原先腫瘤的大小無關。這些結果表明血管內(nèi)皮生長因子在與內(nèi)皮細胞有關的肝癌細胞發(fā)展中起著關鍵的作用(Yoshiji，H.等，Vascular endothelial growth factor tightlyregulates in vivo development of murine hepatocellular carcinoma cells，Hepatology 28(6)1489-96(1998))。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人等對多聚不飽和卵磷脂抑制血管內(nèi)皮生長因子的表達進行了深入的研究，結果發(fā)現(xiàn)，多聚不飽和卵磷脂可有效抑制血管內(nèi)皮生長因子的表達，并進而對治療和預防肝臟疾病有效，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的目的在于提供多聚不飽和卵磷脂的新用途，即在制藥中的新應用。
更具體地說，本發(fā)明提供多聚不飽和卵磷脂在制備血管內(nèi)皮生長因子表達抑制劑中的用途，在制備肝臟疾病治療劑中的用途，以及含有多聚不飽和卵磷脂作為有效成分的血管內(nèi)皮生長因子表達抑制劑和肝臟疾病治療劑。
具體實施例方式
為更好地理解本發(fā)明，以下給出具體的實驗例和制劑例來說明本發(fā)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實驗例1.實驗藥物采用由Rhone-Poulenc Rorer GmbH(Cologne，Germany)公司生產(chǎn)的多聚不飽和卵磷脂，其組成如下表1所示。
表1PPC的組成

2.實驗動物模型的形式使用8只小鼠(C57B6系)，靜脈注射右旋2-氨基半乳糖，按每公斤體重注射2克，成為右旋2-氨基半乳糖誘導的肝炎小鼠。
3.檢驗在上述2中得到的肝炎小鼠模型中多聚不飽和卵磷脂對血管內(nèi)皮生長因子表達的抑制作用將上述8只肝炎小鼠分成2組，每組4只。其中4只小鼠接受右旋2-氨基半乳糖，另外4只進食含有多聚不飽和卵磷脂的食物，使每天多聚不飽和卵磷脂的進食量在0.5～1.0毫克之間。五天之后，用部分肝臟切除術從每只小鼠的肝臟上切除一葉肝，從中提取出全部的RNA，用于定量RT-PCR分析。
調(diào)節(jié)RNA的濃度至OD260為0.1，然后用此濃度的RNA在PE7700序列檢測儀上做定量RT-PCR。
為此，設計一對PCR引物及一個適用于PE7700序列檢測儀的寡聚核苷酸熒光探針。其引物對的3′引物的序列是5′TCGGTGTTCCCAAAACTG-3′，5′引物的序列是5′-TTTTTTGTCCCACTTGGT3′，寡聚核苷酸熒光探針的序列為熒光標記-5′-TCCCCTGCCCAAGAATGTGC-3′-熒光湮滅。耙位點的序列為VEGFcDNA序列的一部分，即5′-TTTTTTGTCCCACTTGGTGGGGCCAGGGTCCTCTCCCCTGCCCAAGAATGTGCAAGGCCAGGGCATGGGGGCAAAATATGACCCAGTTTTGGGAACACCGACA-3′。
在此實驗中，VEGF cDNA每復制一次，Taq DNA合成酶利用其外切酶作用切下一個探針引物上的熒光分子，以此來定量RT-PCR。在RT-PCR實驗初期，根據(jù)熒光發(fā)射量來推斷VEGF RNA的起始量。這樣，我們可以比較兩組實驗小鼠的不同。
如附圖所示，兩組小鼠ΔCT的差異為3.1，相當于多聚不飽和卵磷脂治療組的VEGF信號減少了10倍。這一數(shù)據(jù)有力地說明，多聚不飽和卵磷脂可以明顯地降低肝組織的VEGF水平，抑制肝組織的血管增生。
制劑例膠囊使用由Rhone-Poulenc Rorer GmbH(Cologne，Germany)公司生產(chǎn)的多聚不飽和卵磷脂，按常法制成軟膠囊，每粒軟膠囊含0.18g多聚不飽和卵磷脂。


圖1是在右旋2-氨基半乳糖誘導的肝炎小鼠中用PPC治療和未治療組的對照圖。圖中橫坐標表示RT-PCR反應的循環(huán)次數(shù)，縱坐標表示熒光標記的信使核糖核酸(mRNA)的拷貝數(shù)。
權利要求
1.多聚不飽和卵磷脂在制備血管內(nèi)皮生長因子表達抑制劑中的用途，其中所述血管內(nèi)皮生長因子表達抑制劑用于制備治療肝臟疾病的藥物，其中所述肝臟疾病是肝纖維化或肝硬化。
全文摘要
本發(fā)明提供一種多聚不飽和卵磷脂的在制備血管內(nèi)皮生長因子表達抑制劑中的新用途，特別是在制備肝臟疾病治療劑中的新用途。含有該多聚不飽和卵磷脂的血管內(nèi)皮生長因子表達抑制劑可顯著降低受損肝組織中激發(fā)的血管內(nèi)皮生長因子表達的水平，抑制肝組織的血管增生。
文檔編號A61P1/00GK1518987SQ200310119898
公開日2004年8月11日 申請日期2000年6月2日 優(yōu)先權日2000年6月2日
發(fā)明者托馬斯·文尼志, 托馬斯 文尼志 申請人:大連萬友貿(mào)易有限公司