專利名稱：非甾類抗炎物質(zhì)、組合物及其使用方法
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技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明涉及一般通式I表示的抗炎化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物、其制備方法和中間體以及這些化合物在治療人和動(dòng)物炎性疾病和病癥中的應(yīng)用。
現(xiàn)有技術(shù)具有不同作用機(jī)制的非甾類抗炎藥物對(duì)特定的炎癥介體起作用，由此提供治療作用。由于不僅在作用機(jī)制、而且在所抑制的特定炎癥介體方面存在差異，所以甾類和非甾類藥物具有不同的抗炎作用特性，由此對(duì)特定的病癥而言，某些藥物可能比其它藥物更為合適。此外，大部分非甾類抗炎藥物并非絕對(duì)具有特異性，并且在以較大劑量或長(zhǎng)期使用時(shí)其應(yīng)用伴隨有不利的副作用。已知許多非甾類抗炎藥物起內(nèi)源性COX-1酶抑制劑的作用，而內(nèi)源性COX-1酶在維持胃粘膜完整性方面極為重要。因此，這些藥物的應(yīng)用通常導(dǎo)致胃粘膜受損乃至出血。(Warner T.D.《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)1999，96，7563-7568)。因此，選擇性抑制COX-2、而不抑制COX-1的活性劑對(duì)治療炎性疾病是優(yōu)選的。另外，已知某些抗炎化合物(諸如茶堿)具有極窄的治療指數(shù)，其應(yīng)用受限。
近來(lái)，F(xiàn)DA批準(zhǔn)特異性阻斷COX-2的非甾類抗炎藥塞來(lái)考昔(celecoxib)用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Luong等《藥物治療學(xué)年鑒》(Ann.Pharmacother.)2000，34，743-760)。COX-2還在許多癌癥和癌前期損害中得到表達(dá)，并且存在選擇性COX-2抑制劑可以用于治療和預(yù)防結(jié)腸直腸癌和其它癌癥的確定證據(jù)(Taketo，M.M.，《國(guó)家癌癥研究院雜志》(J.Natl.Cancer Inst.)1998，90，1609-1620，F(xiàn)ournier等《細(xì)胞生物化學(xué)雜志》(J.Cell Biochem.)增刊2000，34，97-102)。
大環(huán)內(nèi)酯類、諸如大環(huán)內(nèi)酯類抗生素優(yōu)選累積在給予這類分子的受試者的不同細(xì)胞中，尤其是在吞噬細(xì)胞中，諸如單核外周血細(xì)胞、腹膜和肺泡巨噬細(xì)胞；以及支氣管肺泡上皮周圍的液體中(Glaude R.P.等《抗菌劑與化療》(Antimicrob.Agents Chemother.)，1989，33，277-282；Olsen K.M.等《抗菌劑與化療》(Antimicrob.AgentsChemother.)1996，40，2582-2585)。此外，描述了某些大環(huán)內(nèi)酯類相對(duì)弱的炎性作用。例如，近來(lái)描述了紅霉素衍生物(Labro M.T.《抗菌藥與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)，1998，41，37-46；WO00/42055)和阿奇霉素衍生物(EP 0283055)的抗炎作用。還從實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型的體外和體內(nèi)研究中得知了某些大環(huán)內(nèi)酯類的抗炎作用，諸如zimosane-誘導(dǎo)的小鼠腹膜炎(Mikasa等《抗菌藥與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1992，30，339-348)和內(nèi)毒素-誘導(dǎo)的大鼠氣管中性白細(xì)胞累積(《免疫學(xué)雜志》(J.Immunol.)1997，159，3395-4005)。大環(huán)內(nèi)酯類對(duì)細(xì)胞因子、諸如白細(xì)胞介素8(IL-8)(《美國(guó)呼吸疾病保健藥物標(biāo)準(zhǔn)雜志》(Am.J.Respir.Crit.Care Med.)1997，156，266-271)或白細(xì)胞介素5(IL-5)(EP 0775489和EP 0771564)的調(diào)節(jié)作用也是已知的。
在1975年，將TNF-α定義為內(nèi)毒素誘導(dǎo)并在體外和體內(nèi)導(dǎo)致腫瘤壞死的血清因子(Carswell EA等，《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)，1975，723666-3670)。除抗腫瘤作用外，TNF-α還具有許多其它在生物體內(nèi)穩(wěn)態(tài)和病理生理狀況方面重要的生物作用。TNF-α的主要來(lái)源為單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞、T-淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞。
抗-TNF-α抗體(cA2)對(duì)患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的患者具有治療作用這一發(fā)現(xiàn)(Elliott M等，《柳葉刀》(Lancet)，1994，3441105-1110)導(dǎo)致對(duì)尋找能夠作為RA的有效藥物的新TNF-α抑制劑的興趣增加。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種自身免疫性慢性炎癥疾病，其特征在于關(guān)節(jié)發(fā)生不可逆的病理改變。除RA療法外，TNF-α拮抗劑還可以用于許多病理狀況和疾病，諸如脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)和其它關(guān)節(jié)炎性疾病、膿毒癥、膿毒性休克、毒性休克綜合征、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、牛皮癬、腎小球腎炎、紅斑狼瘡、硬皮病、哮喘、惡病質(zhì)、慢性阻塞性非失調(diào)、充血性心力衰竭、胰島素抵抗、肺纖維化、多發(fā)性硬化、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、病毒感染和AIDS。
通過(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)獲得了表示TNF-α的生物重要性的證據(jù)，其中用于TNF-α或其受體的小鼠基因失活。這類動(dòng)物耐受膠原蛋白誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎(Mori L等，《免疫學(xué)雜志》(J.Immunol.)，1996，1573178-3182)并耐受內(nèi)毒素導(dǎo)致的休克(Pfeffer K等，《細(xì)胞》(Cell)，1993，73457-467)。在TNF-α水平增加的動(dòng)物試驗(yàn)中，發(fā)生慢性炎性多關(guān)節(jié)炎，其通過(guò)抑制TNF-α產(chǎn)生得到減輕(Georgopoulos S等，《炎癥雜志》(J.Inflamm.)，1996，4686-97；Keffer J等，《歐洲分子生物學(xué)協(xié)會(huì)雜志》(EMBO J.)，1991，104025-4031)。對(duì)這類炎癥和病理狀況的治療通常包括施用非類固醇抗炎藥且在更嚴(yán)重的情況中給予金鹽、D-青霉胺或甲氨蝶呤。所述的藥物根據(jù)癥狀起作用，但它們不會(huì)使病理狀況停止。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎療法中的新手段基于藥物，諸如替尼達(dá)普、來(lái)氟米特、環(huán)孢素、FK-506并基于抵消TNF-α作用的生物分子。目前存在商購(gòu)的依那西普(etanercept)(Enbrel，Immunex/Wyeth)、即可溶性TNF-α受體的融合蛋白和英夫利昔單抗(infliximab)(Remicade，Centocor)、即小鼠和人嵌合單克隆抗體。除用于RA療法外，依那西普和英夫利昔單抗已被批準(zhǔn)用于克羅恩病療法(Exp.Opin.Invest.Drugs，2000，9103)。
迄今為止尚未描述代表本發(fā)明主題的通式I表示的新化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、前體藥物和包括它們的藥物組合物。
此外，尚未將代表本發(fā)明主題的化合物描述為抗炎物質(zhì)或TNF-α抑制劑或COX-1/COX-2抑制劑或IL-1β抑制劑。因此，尚未描述或提示這類“雜化”(hybrid)大環(huán)內(nèi)酯/NSAID化合物在抗炎中的應(yīng)用，也沒(méi)有描述或提示含有有效量的雜化大環(huán)內(nèi)酯/NSAID化合物的用于治療哺乳動(dòng)物對(duì)象、包括人的炎癥狀態(tài)的藥物劑型。
技術(shù)方案通式I的化合物不同于迄今為止已知化合物的方面在于它們?cè)趯?duì)患有炎癥狀態(tài)的器官或組織聯(lián)用時(shí)結(jié)合了NSAID部分的抗炎特性和大環(huán)內(nèi)酯部分提供的補(bǔ)充的(與大環(huán)內(nèi)酯類優(yōu)先累積的免疫系統(tǒng)細(xì)胞一起)累積特性，并且導(dǎo)致基本上更多地局限于炎癥部分和/或強(qiáng)化對(duì)炎癥的緩解作用。由結(jié)構(gòu)I表示的新化合物的這類作用來(lái)源于大環(huán)內(nèi)酯部分M，這是由于大環(huán)內(nèi)酯類累積在炎癥分布的免疫細(xì)胞內(nèi)的特定藥動(dòng)學(xué)特性所致，所述的免疫細(xì)胞諸如吞噬細(xì)胞，包括多形核細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、肺泡吞噬細(xì)胞等。通式I的化合物具有改善的藥動(dòng)學(xué)和/或安全性分布(甚至對(duì)那些作為更具選擇性的COX-2抑制劑的NSAID而言)，并且存在較少和/或更為良性的副作用。
傳統(tǒng)的非甾類抗炎藥(NSAID)將COX-1和COX-2抑制至改變的程度。吲哚美辛也是非選擇性COX抑制劑，但當(dāng)與大環(huán)內(nèi)酯部分連接時(shí)，它成為應(yīng)顯著減少乃至消除母體化合物胃腸副作用的更具選擇性的COX-2抑制劑。然而，甚至更具選擇性的COX-2抑制劑的NSAID也得益于按照本發(fā)明與大環(huán)內(nèi)酯軛合(conjugation)，至少因?yàn)樗鼈儭灏邢颉逯裂装Y部位，在那里它們可以發(fā)揮抗炎作用，而同時(shí)它們與其它組織或生理過(guò)程的相互作用可以產(chǎn)生副作用。認(rèn)為尚未描述屬于本發(fā)明主題的通式I表示的化合物、這類化合物的異構(gòu)體形式、其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物和包括它們的藥物組合物。此外，尚未將本發(fā)明的化合物描述為抗炎物質(zhì)或嗜酸性細(xì)胞在器官或組織中累積的抑制劑。
本發(fā)明涉及(a)通式I表示的新″雜化″化合物 其中M表示具有在炎性細(xì)胞中累積特性的大環(huán)內(nèi)酯亞單位，D表示具有抗炎、止痛和/或解熱活性的非甾類抗炎亞單位(NSAID)，且L表示共價(jià)連接M和D的連接基；(b)含有上述化合物中的一種或多種的組合物，所述化合物的用量可有效抗炎并由此治療涉及哺乳動(dòng)物、包括人的炎癥的失調(diào)和病癥；和(c)使用這些化合物治療這類失調(diào)和病癥的方法。
本發(fā)明的化合物可有利地提供改善的治療作用和/或改善的副作用分布。
可以并不限于從多元內(nèi)酯環(huán)分子中選擇用于本發(fā)明雜化化合物的合適的大環(huán)內(nèi)酯亞單位，其中″元″指的是環(huán)上的碳原子或雜原子，且″多″是原子數(shù)超過(guò)約10個(gè)，優(yōu)選10-約50個(gè)，更優(yōu)選12-、14-、15-、16-、17-和18-元內(nèi)酯環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類。特別優(yōu)選14-和15-元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯亞單位，最優(yōu)選阿奇霉素及其衍生物和紅霉素及其衍生物。
可以從中選擇的大環(huán)內(nèi)酯亞單位的更具體的非限制性實(shí)例如下(i)大環(huán)內(nèi)酯抗菌素，包括氮雜內(nèi)酯類(azalides)，例如紅霉素、地紅霉素、阿奇霉素、9-二氫-9-脫氧-9a-氮雜-9a-高紅霉素、HMR 3004、HMR 3647、HMR 3787、交沙霉素、紅霉胺(erythromycylamine)、ABT 773、氟紅霉素、克拉霉素、泰洛星、替米考星、竹桃霉素、脫碳霉糖泰樂(lè)菌素(desmycosin)、CP-163505、羅紅霉素、美奧卡霉素和洛他霉素及其衍生物，諸如酮內(nèi)酯類(例如3-酮)；內(nèi)酰胺類(例如8a-或9a-內(nèi)酰胺類)和缺乏一個(gè)或多個(gè)糖部分的衍生物。
(ii)大環(huán)內(nèi)酯免疫抑制劑，諸如FK 506、環(huán)孢菌素、兩性霉素和雷帕霉素；(iii)具有宿主細(xì)胞抑制特性的大環(huán)內(nèi)酯抗真菌藥，諸如巴弗洛霉素、刀球骯霉素、制霉菌素、那他霉素、克念菌素、非律平(filipin)、魯斯霉素(etruscomycin)、曲古霉素(trichomycin)。
用于合成上述并非商購(gòu)的大環(huán)內(nèi)酯類的方法和大環(huán)內(nèi)酯的合成操作一般是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的或可以在下列文獻(xiàn)中找到Denis A等《生物有機(jī)和藥物化學(xué)通訊》(Bioorg.& Med.Chem.Lett)1999，9，3075-3080；Agouridas C.等《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)1998，41，4080-4100；和EP-00680967(1998)；Sun Or Y.等《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)2000，43，1045-1049；US-05747467(1998)；McFarland J.W.等《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)1997，40，1041-1045；Denis A.等《生物有機(jī)和藥物化學(xué)通訊》(Bioorg.& Med.Chem.Lett)1998，8，2427-2432；WO-09951616(1999)；Lartey等《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)1995，38，1793-1798；EP 0984019；WO 98/56801，將這些文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。
其它合適的大環(huán)內(nèi)酯類是已知的，某些公開(kāi)在下列文獻(xiàn)中Bryskier，A.J.等的《大環(huán)內(nèi)酯類、化學(xué)、藥理學(xué)和臨床應(yīng)用》(Macrolides，Chemistry，Pharmacology and Clinical Use)；Arnette BlackwellParis，1993，pp 485-491，14(R)-羥基克拉霉素、紅霉素-11，12-碳酸酯、三-O-乙?；裉颐顾?、螺旋霉素、白霉素、麥迪霉素、rasaramycin，將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考；Ma，Z.等《最新藥物化學(xué)-抗感染藥》(Current Medicinal Chemisty-Anti-Infective Agents)，2002，1，15-34，也將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考；苦霉素、那波霉素、HMR-3562、CP-654743、CP-605006、TE-802、TE-935、TE-943、TE-806、6，11-橋連的酮內(nèi)酯類、CP-544372、FMA-199、A-179461；和Romo，D.等《美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)雜志》(J.Am.Chem.Soc.)1998，120；12237-12254，也將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考。特別參見(jiàn)Brys kier等在487-491頁(yè)上描述的14-和16-元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類的結(jié)構(gòu)和衍生物；和Ma等描述的各種酮內(nèi)酯衍生物和合成，注意所有的結(jié)構(gòu)表和所有的反應(yīng)方案。與NSAIDs軛合后的所有這些大環(huán)內(nèi)酯類屬于本發(fā)明的范圍。上述特別具體命名或參照的大環(huán)內(nèi)酯化合物是商購(gòu)的或其合成方法是已知的。
重要的是大環(huán)內(nèi)酯亞單位來(lái)源于具有累積在補(bǔ)充至炎癥部位的免疫系統(tǒng)細(xì)胞、尤其是吞噬細(xì)胞內(nèi)特性的大環(huán)內(nèi)酯。已知上述定義的大部分內(nèi)酯類化合物具有這種特性。例如14-元大環(huán)內(nèi)酯類，諸如紅霉素及其衍生物；15-元大環(huán)內(nèi)酯類，諸如阿奇霉素及其衍生物以及8a-和9a-內(nèi)酰胺類及其衍生物；16-元大環(huán)內(nèi)酯類，諸如替米考星、脫碳霉糖泰樂(lè)菌素；和螺旋霉素。
累積在特定類細(xì)胞中的大環(huán)內(nèi)酯類的其它實(shí)例可以在下列文獻(xiàn)中找到Pascual A.等《臨床微生物感染》(Clin.Microbiol.Infect.)2001，7，65-69.(“酮內(nèi)酯HMR 3647在人吞噬和非吞噬細(xì)胞中的吸收和胞內(nèi)活性”(Uptake and intracellular activity of ketolide HMR 3647in human phagocytic and non-phagocytic cells))；Hand W.L.等《國(guó)際抗菌藥雜志》(Int.J.Antimicrob.Agents)，2001，18，419-425.(“阿奇霉素在人多形核白細(xì)胞中累積和流出的特性和機(jī)制”(Characteristics and mechanisms of azithromycin accumulation andefflux in human polymorphonuclear leukocytes))；Amsden G.W.《國(guó)際抗菌藥雜志》(Int.J.Antimicrob.Agents)，2001，18，11-15.(“新一代大環(huán)內(nèi)酯類定向于組織的抗菌素”(Advanced-generationmacrolidestissue-directed antibiotics))；Johnson J.D.等《實(shí)驗(yàn)室臨床藥物雜志》(J.Lab.Clin.Med.)1980，95，429-439.(“肺泡巨噬細(xì)胞的抗生素吸收”(Antibiotic uptake by alveolarmacrophages))；Wildfeuer A.等《抗菌藥與化療》(Antimicrob.AgentsChemother.)1996，40，75-79.(“體內(nèi)條件下各種細(xì)胞對(duì)阿奇霉素的吸收及其胞內(nèi)活性”(Uptake of azithromycin by various cells和itsintracellular activity under in vivo conditions))；Scorneaux B.等《家禽科學(xué)》(Poult.Sci.)1998，77，1510-1521.(“替米考星在雞吞噬細(xì)胞中的胞內(nèi)累積、亞細(xì)胞分布和流出”(Intracellularaccumulation，subcellular distribution，and efflux of in chickenphagocytes))；Mtairag E.M.等《抗菌劑與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1994，33，523-536。(“人中性白細(xì)胞體外地紅霉素和紅霉胺吸收的研究”(Investigation of dirithromycin and紅霉胺uptake by human neutrophils in vitro))；Anderson R.等《抗菌劑與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1988，22，923-933.(“新大環(huán)內(nèi)酯抗菌藥克拉霉素(A-56268，TE-031)的細(xì)胞吸收和吞噬細(xì)胞內(nèi)生物活性的體外評(píng)價(jià)”(An in-vitro evaluation of the cellularuptake and intraphagocytic bioactivity of clarithromycin(A-56268，TE-031)，a new macrolide antimicrobial agent))；TasakaY.等《日本抗生素雜志》(Jpn.J.Antibiot.)1988，41，836-840.(“肺泡巨噬細(xì)胞的洛他霉素吸收”(Rokitamycin uptake by alveolarmacrophages))；Harf R.等《抗菌劑與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1988，22，135-140.(“肺泡巨噬細(xì)胞的螺旋霉素吸收”(Spiramycin uptake by alveolar macrophages))，將這些文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。
此外，補(bǔ)充至炎癥部位的免疫系統(tǒng)細(xì)胞、尤其是吞噬細(xì)胞內(nèi)累積活性的存在易于由本發(fā)明領(lǐng)域的普通技術(shù)人員使用用于該目的的眾所周知的試驗(yàn)之一測(cè)定。例如，可以使用Olsen，K.M.等在《抗菌劑與化療》(Anitmicrob.Agents & Chemother.)1996，40，2582-2585中所述的具體步驟。簡(jiǎn)單的說(shuō)，可以通過(guò)Ficoll-Hypaque離心從健康志愿者的靜脈血中獲得受測(cè)試的細(xì)胞、例如多形核白細(xì)胞，隨后進(jìn)行2％葡聚糖沉降。通過(guò)滲透裂解除去紅細(xì)胞并通過(guò)錐蟲(chóng)藍(lán)排除法評(píng)價(jià)PMN。另一方面，可以分離其它細(xì)胞級(jí)分并按照類似方式測(cè)試。將氚代的大環(huán)內(nèi)酯化合物(例如10μM)與2.5×106個(gè)細(xì)胞一起保溫120分鐘(37℃，5％CO2，90％相對(duì)濕度)且隨后通過(guò)離心、例如通過(guò)硅油-石蠟層(86vol％∶14vol％)從含有化合物的上清液中除去細(xì)胞。例如，通過(guò)閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定化合物的量，并且顯著高于背景的得分表明大環(huán)內(nèi)酯累積在測(cè)試細(xì)胞中。參見(jiàn)Bryskier等《大環(huán)內(nèi)酯、化學(xué)、藥理學(xué)和臨床應(yīng)用》(Mcrolides，Chemistry，Pharmacology and Clinical Use)；Arnette BlackwellParis，1993pp 375-386，381頁(yè)，第2欄，第3行。另一方面，不對(duì)該化合物進(jìn)行放射性標(biāo)記，而可以通過(guò)HPLC測(cè)定化合物的量。
可以使用的其它試驗(yàn)方法公開(kāi)在Bryskier，A.J.等的《大環(huán)內(nèi)酯、化學(xué)、藥理學(xué)和臨床應(yīng)用》(Mcrolides，Chemistry，Pharmacology andClinical Use)；Arnette BlackwellParis，1993 pp 375-386中，將該文獻(xiàn)引入作為參考。特別參見(jiàn)380-381頁(yè)上的吞噬細(xì)胞吸收測(cè)定和381、383和385頁(yè)以及382和383頁(yè)上的表對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類吸收和定位的具體描述。
本發(fā)明在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中涉及通式I表示的化合物、其鹽和溶劑化物，其中M特別表示14-或15-元內(nèi)酯環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯亞單位，最優(yōu)選通式II表示的化合物 其中(i)Z和W獨(dú)立為 或鍵，其中Rt和Rs獨(dú)立為H或烷基(優(yōu)選甲基或H)；RM為OH、ORP、烷氧基或取代的烷氧基(Syn或Anti構(gòu)型或其混合物)；RN為H、RP、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷氧基烷基或-C(＝X)-NRtRs；X為O或S；條件是Z和W不能同時(shí)為 或鍵；(ii)U和Y獨(dú)立為H、鹵素、烷基或羥基烷基(優(yōu)選H、甲基或羥基甲基)；(iii)R1為羥基ORP、-O-S2或＝O；(iv)S1為如下通式的糖苷配基(例如去氧糖胺基團(tuán))環(huán)C/5位上的糖部分
其中R8和R9均為氫或一起形成鍵或R9為氫且R8為-N(CH3)Ry，其中Ry為RP、RZ或-C(O)RZ，其中RZ為氫或環(huán)烷基(優(yōu)選環(huán)己基)或烷基(優(yōu)選C1-C7烷基)或鏈烯基(優(yōu)選C2-C7鏈烯基)或炔基(優(yōu)選C2-C7炔基)芳基或雜芳基或可以為被C1-C7烷基或C2-C7鏈烯基或C2-C7炔基或芳基或雜芳基取代的烷基。(Ry優(yōu)選氫、甲基或乙基)；R10為氫或RP；(v)S2為如下通式的糖苷配基(例如克拉定糖基)環(huán)C/3位上的糖部分 其中R3’可以為氫或甲基；且R11和R12獨(dú)立為氫，R11可以為RP或R11和R12共同形成鍵；(vi)R2為氫、羥基、ORP或烷氧基(優(yōu)選C1-C4烷氧基，最優(yōu)選甲氧基)、取代的烷氧基；(vii)A為H或甲基；(viii)B為甲基或環(huán)氧基；(ix)E為氫或鹵素(優(yōu)選氟)；(x)R3為羥基、ORP或烷氧基(優(yōu)選C1-C4烷氧基，最優(yōu)選甲氧基)，取代的烷氧基或R3為可以與R5一起形成″橋″(例如環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯)的基團(tuán)或如果W或Z為 那么R3為與W或Z一起形成″橋″(例如環(huán)氨基甲酸酯)的基團(tuán)；(xi)R4為C1-C4烷基(優(yōu)選甲基)；(xii)R5為氫、羥基、ORP、C1-C4烷氧基、取代的烷氧基或可以與R3一起形成″橋″(例如環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯)的基團(tuán)；(xiii)R6為H或C1-C4烷基(優(yōu)選甲基或乙基)；其中亞單位M含有連接位置，它通過(guò)該位置經(jīng)連接基L與亞單位D連接；所述的連接位置位于下列基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)上a.位于S1、S2或糖苷配基氧上的任意活性羥基、N或環(huán)氧基團(tuán)，條件是S2(或條件是S2和S1均)被裂解；b.位于Z或W上的活性＞N-RN、-NRtRs或＝O；c.位于R1、R2、R3和R5中任意一個(gè)上的活性羥基；d.可以首先被衍生成羥基或-NRtRs基團(tuán)且然后與L的所有或部分連接的任意其它基團(tuán)(例如，OH→＝O→環(huán)氧基→ 一個(gè)或多個(gè)RP基團(tuán)可以獨(dú)立地存在于通式II的大環(huán)內(nèi)酯亞單位上，其中RP表示保護(hù)基，其可以選自烷基(優(yōu)選甲基)、烷酰基(優(yōu)選乙?；?、烷氧羰基(優(yōu)選甲氧羰基或叔丁氧羰基)、芳基甲氧羰基(優(yōu)選芐氧羰基)、芳?；?優(yōu)選苯甲酰基)、芳烷基(優(yōu)選芐基)、烷基甲硅烷基(優(yōu)選三甲基甲硅烷基)或烷基甲硅烷基烷氧基烷基(優(yōu)選三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)?？梢酝ㄟ^(guò)常規(guī)技術(shù)除去氨基保護(hù)基。因此，可以通過(guò)溶劑解、例如通過(guò)在酸性或堿性條件下水解除去例如酰基，如烷?；⑼檠豸驶蚍减；??？梢栽谟写呋瘎?、諸如鈀/活性炭存在的情況下通過(guò)氫解裂解芳基甲氧羰基(芐氧羰基)。
可以將L選為通式IV表示的連接基X1-(CH2)m-Q- (CH2)n-X2IV其中X1選自-CH2-、-OC(＝O)-、-C(＝O)-、NO-、-OC(＝O)NH-或-C(＝O)NH-；X2選自-NH-、-CH2-、-NHC(＝O)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)-或-O；Q為-NH-或-CH2-或不存在；其中-CH2-或-NH-基團(tuán)各自可以任選被C1-C7-烷基、C2-C7-鏈烯基、C2-C7-炔基、C(O)RX、C(O)ORX、C(O)NHRX取代，其中RX可以為C1-C7-烷基、芳基或雜芳基；符號(hào)m和n獨(dú)立為0-4的整數(shù)，條件是如果Q＝NH，那么n不能為0。
不僅對(duì)通式II的NSAIDs和大環(huán)內(nèi)酯類的雜化物、而且對(duì)通式I中的任意軛合物優(yōu)選該連接基的定義。正如本領(lǐng)域中眾所周知的，可以使用其它連接基，條件是它們提供必要的間隔基且可以用于連接通式I的一個(gè)亞單位與另一個(gè)亞單位。例如，參見(jiàn)美國(guó)專利US 6,297,260，將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考，尤其是其權(quán)利要求1和NSAID的具體目錄。
在通式I中，D表示非甾類抗炎亞單位，即非甾類抗炎藥(NSAID)的部分。合適的NSAID包括但不限于抑制環(huán)加氧酶的那些藥物，所述的酶可以導(dǎo)致前列腺素和某些自體激素抑制劑的生物合成，包括各種環(huán)加氧酶的各種同工酶(包括但不限于環(huán)加氧酶-1和-2)抑制劑；且作為環(huán)加氧酶和脂氧化酶抑制劑涉及非甾類抗炎藥(NSAID)，諸如商購(gòu)的NSAID醋氯芬酸、阿西美辛、對(duì)乙酰氨基酚、醋氨沙洛、乙酰水楊酸、乙?；?水楊-2-氨基-4-甲基吡啶-酸、5-氨基乙酰水楊酸、阿氯芬酸、氨洛芬、氨芬酸、氨基安替比林、安吡昔康、阿尼利定、芐達(dá)酸、苯噁洛芬、柏莫洛芬、α-沒(méi)藥醇(α-bisabolol)、溴芬酸、5-溴水楊酸乙酸酯、溴水楊苷、布氯酸、丁布芬、卡洛芬、塞來(lái)考昔、chromoglycate、桂美辛、clindanac、氯吡酸、雙氯芬酸鈉、二氟尼柳、地他唑、屈噁昔康、恩芬那酸、依托度酸、依托芬那酯、聯(lián)苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬度柳、非諾洛芬、芬替酸、非普地醇、flufenac、氟芬那酸、氟尼辛、氟諾洛芬、氟比洛芬、glutametacin、水楊酸乙二醇酯、異丁芬酸、布洛芬、異丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、三苯唑酸、伊索克酸、伊索昔康、酮洛芬、酮咯酸、氯諾昔康、洛索洛芬、甲氧芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、5-氨基水楊酸、甲嗪酸、莫苯唑酸、孟魯司特、萘丁美酮、萘普生、尼氟酸、尼美舒利、奧沙拉秦、奧沙西羅、噁丙嗪、羥布宗、對(duì)乙酰氨基酚、帕沙米特、哌立索唑、苯乙酰水楊酸酯(phenyl-acethyl-salicylate)、保泰松、水楊酸苯酯、吡拉唑酸、吡羅西康、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、reserveratol、醋水楊胺、水楊酰胺、水楊酰胺-O-乙酸(salicylamide-O-acetyl acid)、水楊酰硫酸酯(salicysulphuric acid)、水楊苷、水楊酰胺、雙水楊酯、舒林酸、舒洛芬、suxibutazone、他莫昔芬、替諾昔康、噻洛芬酸、噻拉米特、ticlopridine、替諾立定、托芬那酸、托美丁、tropesin、聯(lián)苯丁酸、希莫洛芬、扎托洛芬、佐美酸、托莫普羅、扎魯司特和環(huán)孢菌素。其它NSAID類和特定的NSAID化合物公開(kāi)在美國(guó)專利US 6,297,260中，將該文獻(xiàn)全部引入作為參考(尤其是在其權(quán)利要求1的一般通式和其中包含的對(duì)NSAID的具體目錄的詳述中)；且thiazulidene NSAIDs公開(kāi)在國(guó)際專利申請(qǐng)WO 01/87890中，將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。
優(yōu)選的NSAID為乙酰水楊酸、吲哚美辛、萘普生、布洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、舒洛芬、氟尼辛、雙氯芬酸鈉和托美丁。
本文中包含的通式中的黑體鍵表示位于紙面水平上；繪制的虛線鍵(dash-drawn bond)表示位于紙面水平下，而虛線(broken line)表示可以位于紙面水平下或其上的鍵。平行實(shí)線和虛線表示單鍵或雙鍵。除非本文另有說(shuō)明，下列術(shù)語(yǔ)具有下文對(duì)其所解釋的含義″烷基″指的是1-10個(gè)碳原子、更優(yōu)選1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和一價(jià)烴基。優(yōu)選的直鏈或支鏈烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基和叔丁基。最優(yōu)選甲基。烷基可以被至多5個(gè)取代基取代，包括鹵素(優(yōu)選氟或氯)、羥基、烷氧基(優(yōu)選甲氧基或乙氧基)、?；?、酰氨基、氰基、氨基、N-(C1-C4)烷氨基(優(yōu)選N-甲氨基或N-乙氨基)、N，N-二(C1-C4-烷基)氨基(優(yōu)選二甲氨基或二乙氨基)、芳基(優(yōu)選苯基)或雜芳基、硫代羰基氨基、酰氧基、氨基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基?；?、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、雜芳基、芳氧基、芳氧基芳基、硝基、羧基、羧基烷基、羧基取代的烷基、羧基-環(huán)烷基、羧基取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基取代的芳基、羧基雜芳基、羧基取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基取代的雜環(huán)基、環(huán)烷基、環(huán)烷氧基、雜芳氧基、雜環(huán)基氧基和氧基羰基氨基。這類取代的烷基屬于本發(fā)明″烷基″的定義范圍。本發(fā)明烷基的定義可以擴(kuò)展至其它帶有烷基部分的基團(tuán)，諸如烷氧基。
″鏈烯基″指的是2-10且優(yōu)選2-6個(gè)碳原子的含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈一價(jià)烴基。鏈烯基可以被與烷基相同的基團(tuán)取代且這類任選取代的鏈烯基包括在術(shù)語(yǔ)″鏈烯基″中。優(yōu)選乙烯基、丙烯基、丁烯基和環(huán)己烯基。
″炔基″指的是帶有2-10且優(yōu)選2-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈且含有至少一個(gè)且優(yōu)選不超過(guò)三個(gè)碳-碳三鍵的直鏈或支鏈一價(jià)烴基。炔基可以被與烷基相同的基團(tuán)取代且這些取代的基團(tuán)屬于該炔基的定義中。優(yōu)選乙炔基、丙炔基和丁炔基。
″環(huán)烷基″指的是帶有3-8個(gè)碳原子的含有任選與芳基或雜芳基稠合的單環(huán)的環(huán)狀基團(tuán)。環(huán)烷基可以被如下對(duì)″芳基″所述的取代基取代，并且取代的環(huán)烷基屬于該″環(huán)烷基″的定義范圍。優(yōu)選的環(huán)烷基為環(huán)戊基和環(huán)己基。
″芳基″指的是帶有6-14個(gè)碳原子的含有單環(huán)、諸如苯基或多稠合環(huán)、諸如萘基的不飽和芳族碳環(huán)基。芳基可以任選進(jìn)一步與脂族基團(tuán)或芳基稠合或可以被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，諸如鹵素(氟、氯和/或溴)、羥基、C1-C7烷基、C1-C7烷氧基或芳氧基、C1-C7烷硫基或芳硫基、烷基磺?；⑶杌虿被蚍遣被?。
″雜芳基″指的是含有2-10個(gè)碳原子和1-4個(gè)雜原子、諸如O、S或N的單環(huán)或二環(huán)芳烴環(huán)。雜芳環(huán)可以任選與另一個(gè)雜芳基、芳基或脂族環(huán)狀基團(tuán)稠合。該類的實(shí)例為呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吲哚、吡啶、噁唑、噻唑、吡咯、吡唑、四唑、嘧啶、吡嗪和三嗪，優(yōu)選呋喃、吡咯、吡啶和吲哚。該術(shù)語(yǔ)包括被如對(duì)上述芳基所述相同的取代基取代的基團(tuán)。
″雜環(huán)基″指的是含有單環(huán)或多環(huán)以及1-10個(gè)碳原子和1-4個(gè)選自氮、硫或氧的雜原子的飽和或不飽和基團(tuán)，其中在稠合環(huán)系中，另一個(gè)環(huán)或其它環(huán)可以為芳基或雜芳基。雜環(huán)基可以被如對(duì)烷基所述的取代基取代且由此取代的雜環(huán)基屬于本定義的范圍。
本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上合適的鹽包括與無(wú)機(jī)酸(例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸或硫酸)或有機(jī)酸(例如酒石酸、乙酸、甲磺酸、三氟乙酸、檸檬酸、馬來(lái)酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、琥珀酸、甲磺酸、草酸和對(duì)甲苯磺酸)形成的鹽。
本發(fā)明還包括通式I化合物的前體藥物，即在對(duì)哺乳動(dòng)物受試者給藥時(shí)在體內(nèi)釋放通式(I)的活性母體藥物的化合物。通過(guò)修飾存在于通式I化合物上的官能基制備通式I化合物的前體藥物，按照這類方式使所述的修飾物可以在體內(nèi)被裂解以釋放母體化合物。前體藥物包括通式I的化合物，其中通式I化合物的羥基、氨基或羧基與任意可以在體內(nèi)被裂解而分別重新生成羥基、氨基或羧基的基團(tuán)結(jié)合。前體藥物的實(shí)例包括但不限于通式I化合物的酯類(例如乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)或在接觸生理pH時(shí)或通過(guò)酶作用被轉(zhuǎn)化成活性母體藥物的任意其它衍生物。
本發(fā)明還包括通式I化合物或其鹽的溶劑化物(優(yōu)選水合物)。
通式I的化合物帶有一個(gè)或多個(gè)手性中心且隨各取代基性質(zhì)的不同，它們還可以具有幾何異構(gòu)體。在原子空間排列上不同的異構(gòu)體稱作″立體異構(gòu)體″。彼此不為鏡像的立體異構(gòu)體稱作″非對(duì)映體″且那些彼此為不能重疊的鏡像的稱作″對(duì)映體″。當(dāng)化合物帶有一個(gè)手性中心時(shí)，出現(xiàn)一對(duì)對(duì)映體是可能的。對(duì)映體的特征可以在于其不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型且由Cahn和Prelog的R-和S-順序法則描述或通過(guò)分子繞偏振光面旋轉(zhuǎn)的方式描述并命名為右旋或左旋(即分別稱作(+)或(-)-異構(gòu)體)。手性化合物可以作為單個(gè)對(duì)映體或作為對(duì)映體混合物存在。含有等比例的對(duì)映體的混合物稱作″外消旋混合物″。本發(fā)明包括通式I化合物的所有各異構(gòu)體。在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中對(duì)特定化合物的描述或命名用以包括各對(duì)映體及其混合物，否則就是其外消旋物。用于測(cè)定立體異構(gòu)體的立體化學(xué)及其拆分的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。
本發(fā)明還包括遇到的syn-anti型立體異構(gòu)體及其混合物，此時(shí)存在肟或類似基團(tuán)。將與肟的末端雙鍵原子連接的最高Cahn Ingold Prelog優(yōu)先順序法則的基團(tuán)與肟的羥基比較。將該立體異構(gòu)體命名為Z(zusammen＝共同)或Syn，條件是肟羥基位于通過(guò)C＝N雙鍵的參考面的同側(cè)上作為最優(yōu)先基團(tuán)；將另一種立體異構(gòu)體命名為E(entgegen＝相反)或Anti。
″藥學(xué)上可接受的賦形劑″指的是用于制備一般安全、無(wú)毒性且既無(wú)生物上又無(wú)其它不需要的作用的藥物組合物的賦形劑且包括對(duì)獸藥應(yīng)用和人藥應(yīng)用而言可接受的賦形劑。本申請(qǐng)中所用的″藥學(xué)上可接受的賦形劑″包括一種和一種以上這類賦形劑。
″治療(Treating)″或″治療(treatment)″狀態(tài)、失調(diào)或病癥包括(1)預(yù)防或延緩在哺乳動(dòng)物中發(fā)生的狀態(tài)、失調(diào)或病癥的臨床癥狀的表現(xiàn)，所述的哺乳動(dòng)物可以患有或傾向于所述的狀態(tài)、失調(diào)或病癥，但尚未發(fā)生或出現(xiàn)所述狀態(tài)、失調(diào)或病癥的臨床或亞臨床癥狀；(2)抑制狀態(tài)、失調(diào)或病癥，即阻止或減緩疾病或其至少一種臨床或亞臨床癥狀的發(fā)生；或(3)減輕疾病，即使?fàn)顟B(tài)、失調(diào)或病癥或其至少一種臨床或亞臨床癥狀退化。
對(duì)治療的受試者的有益性或具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義或至少對(duì)患者或臨床醫(yī)師而言是可感受到的。
″治療有效量″指的是當(dāng)對(duì)哺乳動(dòng)物給藥治療狀態(tài)、失調(diào)或病癥時(shí)足以進(jìn)行這類治療的用量?！逯委熡行Я俊咫S化合物、疾病及其嚴(yán)重程度和所治療哺乳動(dòng)物的身體情況和反應(yīng)性的不同而改變。
急性炎癥的四種傳統(tǒng)癥狀為患病區(qū)域發(fā)紅、升溫、腫脹和疼痛且患病器官功能喪失。
與具體病癥相關(guān)的炎癥癥狀和征候包括·類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎-涉及的關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、溫?zé)岷陀|痛；全身性強(qiáng)直和晨僵；·胰島素依賴性糖尿病-胰島炎；該病可以導(dǎo)致各種與炎性成分相關(guān)的并發(fā)癥，包括視網(wǎng)膜病、神經(jīng)病、腎??；冠狀動(dòng)脈疾病、外圍血管疾病和腦血管疾??；·自身免疫性甲狀腺炎-虛弱、便秘、氣短、面部、手和足浮腫(puffiness)、外周性水腫、心律過(guò)緩；·多發(fā)性硬化-痙攣狀態(tài)、視力模糊、眩暈、肢體虛弱、感覺(jué)異常；·眼色素層視網(wǎng)膜炎-夜視力下降、周邊視力降低；·紅斑狼瘡-關(guān)節(jié)痛、疹、光敏感性、發(fā)熱、肌痛、手和足浮腫、尿液分析異常(血尿、管型尿(cylinduria)、蛋白尿)、腎小球腎炎、認(rèn)知功能障礙、血管血栓形成、心包炎；·硬皮病-雷諾氏??；手、臂、腿和面部腫脹；皮膚增厚；手指和膝疼痛、腫脹強(qiáng)直、胃腸功能障礙、限制性肺??；心包炎；腎衰竭；·具有炎性成分的其它關(guān)節(jié)炎性疾病，諸如類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎和多關(guān)節(jié)炎-發(fā)熱、疼痛、腫脹、觸痛；·其它炎性腦病，諸如腦膜炎、阿爾茨海默病、AIDS癡呆性腦炎-畏光、認(rèn)知功能障礙、記憶損失；·其它炎性的眼部炎癥，諸如視網(wǎng)膜炎-視力下降；·炎性皮膚病，諸如濕疹、其它皮炎(例如特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎)、牛皮癬、UV照射誘發(fā)的灼傷(日光射線和類似的UV源)-紅斑、疼痛、脫屑、腫脹、觸痛；·炎癥性腸病，諸如克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎-疼痛、腹瀉、便秘、直腸出血、發(fā)熱、關(guān)節(jié)炎；·哮喘-氣短、喘鳴；·其它過(guò)敏性疾病，諸如過(guò)敏性鼻炎-噴嚏、癢、鼻漏；·與急性哮喘相關(guān)的疾病，諸如中風(fēng)后的損傷-感覺(jué)缺失、運(yùn)動(dòng)喪失、認(rèn)知喪失；·因心肌缺血導(dǎo)致的心臟組織損傷-疼痛、氣短；·肺損傷，諸如發(fā)生成人呼吸窘迫綜合征的肺損傷-氣短、換氣過(guò)度、氧合作用下降、肺浸潤(rùn)；·伴有感染的炎癥，諸如膿毒癥、膿毒性休克、中毒性休克綜合征-發(fā)熱、呼吸衰竭、心動(dòng)過(guò)速、低血壓、白細(xì)胞增多；·其它與特定器官或組織相關(guān)的炎性疾病，諸如腎炎(例如腎小球腎炎)-少尿、尿液分析異常；
附件炎-發(fā)熱、疼痛、觸痛、白細(xì)胞增多；痛風(fēng)-涉及的關(guān)節(jié)疼痛、觸痛、腫脹和紅斑、血清和/或尿的尿酸升高；膽囊炎-腹痛和觸痛、發(fā)熱、惡心、白細(xì)胞增多；慢性阻塞性肺病-氣短、喘鳴；充血性心力衰竭-氣短、啰音、外周性水腫；II型糖尿病-晚期器官并發(fā)癥，包括心血管、眼、腎和周圍血管疾??；肺纖維化-換氣過(guò)度、氣短、氧合作用下降；血管疾病，諸如動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄-疼痛、感覺(jué)喪失、脈搏下降、功能喪失；和導(dǎo)致移植物排斥的同種異體免疫-疼痛、觸痛、發(fā)熱。
亞臨床癥狀包括、但不限于用于炎癥的診斷標(biāo)記，其表現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn)。一類亞臨床癥狀為免疫學(xué)癥狀，諸如促炎淋巴樣細(xì)胞在器官或組織中的侵入或累積或識(shí)別對(duì)器官或組織特異性的病原體或抗原的活化促炎淋巴樣細(xì)胞局部或周圍的存在?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中公知的技術(shù)測(cè)定淋巴樣細(xì)胞的活化。
″轉(zhuǎn)運(yùn)″至宿主內(nèi)特定部位的活性組分的治療有效量指的是在特定部位產(chǎn)生治療上有效的活性組分的血藥濃度。例如，可以通過(guò)對(duì)宿主局部或全身給予活性組分達(dá)到上述目的。
在通式II表示的化合物中，優(yōu)選Z和W共同為-N(RN)C(O)-、-C(O)N(RN)-、＞C-NRsRt、-C(O)-、＞C＝N-RM、-CH2NRN-或-NRNCH2-，最優(yōu)選-NCH3CH2-、-NHCH2-、-CH2NH-、-C(O)NH、-NHCO-；Rs、Rt為甲基或H；RM為OH或甲氧基；X為O；RN為H、甲基或-C(＝X)-NRtRs；A為H或甲基；U、Y為H、F、甲基或羥甲基；R1為羥基、-O-S2或＝O；
R2為H、羥基或甲氧基；R3為OH、甲氧基或與W或Z形成環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán)；R4為甲基；R5為H、OH、甲氧基或與R3形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán)；連接鍵通過(guò)N/9a或N/8a位上Z的氮或通過(guò)均位于S2糖C/4″位上R12的碳或R11的氧；R6為H、甲基或乙基；R8為H、N(CH3)2、NH(CH3)或N(CH3)CH2CH3；R9為H；連接位置優(yōu)選位于C/3位上，或通過(guò)S1糖C/3′位上或C/11位或W或Z上的氨基或通過(guò)S2糖C/4″位。
還優(yōu)選通式I中的化合物，其中M具有通式II且(i)Z為NCH3，W為CH2，R2為羥基；或(ii)Z為NH，W為＝CO且R2為甲氧基。(該段中所述的化合物可以滿足或可以不滿足前一部分中剩余的上述優(yōu)選條件，但優(yōu)選它們滿足這些條件。)本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及通式I表示的化合物的制備方法。一般來(lái)說(shuō)，可以通過(guò)下列方式獲得通式I的化合物首先使鏈L的一端與大環(huán)內(nèi)酯亞單位M連接，然后使該鏈的另一端與非甾類亞單位D連接；或首先使鏈L的一端與非甾類抗炎亞單位D連接，然后使該鏈的另一端與大環(huán)內(nèi)酯亞單位M連接；或最后，使該鏈的一個(gè)部分與大環(huán)內(nèi)酯亞單位M連接，而使該鏈的另一個(gè)部分與非甾類亞單位D連接，然后使鏈部分的末端以化學(xué)方式連接形成鏈L。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解需要使用用于制備通式I化合物的中間體的被保護(hù)的衍生物?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中公知的方法對(duì)官能基進(jìn)行保護(hù)和脫保護(hù)。羥基或氨基可以被任意羥基或氨基保護(hù)基保護(hù)，例如，如GreenT.W.；Wuts P.G.M.在《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups inOrganic Synthesis)John Wiley和Sons，New York，1999中所述?？梢酝ㄟ^(guò)常規(guī)技術(shù)除去氨基保護(hù)基。例如，可以通過(guò)溶劑解、例如通過(guò)在酸性或堿性條件下水解除去?；?、諸如烷?；?、烷氧羰基和芳酰基。可以在有催化劑、諸如鈀/活性炭存在的情況下通過(guò)氫解裂解芳基甲氧羰基(例如芐氧羰基)。
更具體地說(shuō)，可以通過(guò)下列方法制備通式I中的化合物。
a)可以通過(guò)使通式V表示的非甾類抗炎亞單位與通式VIa表示的大環(huán)內(nèi)酯的游離氨基反應(yīng)生成其中X2為-NH-的通式I化合物，其中通式V的結(jié)構(gòu)式如下 其中L1表示離去基團(tuán)(諸如羥基)，且通式VIa的結(jié)構(gòu)式如下 該反應(yīng)一般與具有活化非甾類抗炎亞單位的羧酸基能力的酸性衍生物進(jìn)行，諸如鹵化物、混合的酸酐類且尤其是碳化二亞胺類(諸如-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳環(huán)二亞胺(EDC)和苯并三唑類)。該反應(yīng)在室溫和惰性氣體、諸如氮或氬氣環(huán)境中并有堿、諸如有機(jī)堿(例如三乙胺)存在的情況下進(jìn)行。該反應(yīng)可能需要幾小時(shí)至幾天才能完成。
通式V表示的非甾類抗炎亞單位是商購(gòu)的。非甾類抗炎亞單位D可以含有-C(O)L1基團(tuán)(諸如游離羧酸基團(tuán))或通過(guò)本領(lǐng)域中公知的方法衍生。
方案I 按照方案I，可選擇地通過(guò)下列步驟衍生含有羥基的NSAID化合物在有吡啶存在情況下的琥珀酸酐的作用，隨后使由此產(chǎn)生的中間體與三乙胺、4-吡咯并吡啶在二氯甲烷中反應(yīng)而生成含有游離羧酸基團(tuán)的NSAID(Huang C.M.等《化學(xué)與生物學(xué)》(Chem.& Biol.)2000，7，453-461，Hess S.等《生物有機(jī)和藥物化學(xué)》(Bioorg.& Med.Chem.)2001，9，1279-1291)。可以使由此產(chǎn)生的NSAID衍生物與連接基大環(huán)內(nèi)酯化合物、諸如通式VIa偶聯(lián)或直接與大環(huán)內(nèi)酯偶聯(lián)。
方案II 按照方案II，可選擇地通過(guò)下列步驟衍生含有氨基的NSAID化合物氫化鈉和叔丁基碘乙酸酯在N，N-二甲基甲酰胺中的作用而產(chǎn)生NSAID的丁氧羰基衍生物，然后使其與三氟乙酸在二氯甲烷中反應(yīng)生成含有游離羧酸基團(tuán)的NSAID(Hess S.等《生物有機(jī)和藥物化學(xué)》(Bioorg.& Med.Chem.)2001，9，1279-1291)?？梢允褂纱水a(chǎn)生的NSAID衍生物與連接基大環(huán)內(nèi)酯化合物、諸如通式VIa偶聯(lián)或直接與大環(huán)內(nèi)酯偶聯(lián)。
方案III
可選擇地，可以按照方案III衍生含有氨基的NSAID化合物，通過(guò)琥珀酸酐在有二甲氨基吡啶、N，N′-二異丙基乙胺存在下的二甲基甲酰胺中的作用產(chǎn)生含有游離羧酸基團(tuán)的NSAID來(lái)進(jìn)行(Pandori M.W.等《化學(xué)與生物學(xué)》(Chem.& Biol.)2002，9，567-573)?？梢允褂纱水a(chǎn)生的NSAID衍生物與連接基大環(huán)內(nèi)酯化合物、諸如通式VIa偶聯(lián)或直接與大環(huán)內(nèi)酯偶聯(lián)。
VIa結(jié)構(gòu)的原料大環(huán)內(nèi)酯亞單位的制備已經(jīng)描述在PCT/HR02/00001中，將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考，將其復(fù)制件作為附錄1。另外參見(jiàn)Bright的美國(guó)專利US4,474,768和Bright，G.M.等《抗生素雜志》(J.Antibiot.)1988，41，1029-1047，將每篇文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考。
例如，當(dāng)L為-K-NH-(其中K為與大環(huán)內(nèi)酯結(jié)合的連接分子L的部分)時(shí)，可以通過(guò)將大環(huán)內(nèi)酯環(huán)上的＞NH基團(tuán)衍生成N-K-NH2基團(tuán)、并使衍生的大環(huán)內(nèi)酯與通式V表示的非甾類抗炎亞單位反應(yīng)而生成通式I的化合物，其中L1為方案IV的離去基團(tuán)。
方案IV 當(dāng)大環(huán)內(nèi)酯上的NH基團(tuán)連接在大環(huán)內(nèi)酯糖環(huán)S1(即去氧糖胺糖)的3′位上時(shí)，也可以按照方案IV進(jìn)行該反應(yīng)
方案V 或當(dāng)大環(huán)內(nèi)酯上的NH基團(tuán)連接在糖環(huán)S2的4′位上時(shí)，可以按照方案VI進(jìn)行該反應(yīng)方案VI 可以通過(guò)下列步驟生成反應(yīng)物大環(huán)內(nèi)酯亞單位將含有克拉定糖上4″位上的羥基取代基的相應(yīng)大環(huán)內(nèi)酯氧化得到4″位上的＝O取代基，將4″位上的 轉(zhuǎn)化成環(huán)氧基 并用合適的反應(yīng)物裂解環(huán)氧基而得到反應(yīng)物大環(huán)內(nèi)酯亞單位(M-CH2-NH-K-NH2)。
b)可以通過(guò)使通式V表示的非甾類抗炎亞單位與通式VIb表示的大環(huán)內(nèi)酯亞單位的游離羥基反應(yīng)生成其中X2為-OC(O)-的通式I表示的化合物
該反應(yīng)一般與具有活化非甾類抗炎亞單位的羧酸基能力的酸性衍生物進(jìn)行，諸如鹵化物(諸如二氯化乙烯EDC))、混合的酸酐類且尤其是碳化二亞胺類。該反應(yīng)一般在室溫和惰性氣體、諸如氮或氬氣環(huán)境中進(jìn)行。該反應(yīng)可能需要幾小時(shí)至幾天才能完成。
通式VIb結(jié)構(gòu)表示的原料大環(huán)內(nèi)酯亞單位是已知的或可以按照對(duì)類似化合物所述的步驟獲得，諸如Costa A.M.等在《四面體通訊》(Tetrahedron Letters)2000，41，3371-3375中所述，將該文獻(xiàn)引入本文作為參考。
例如，當(dāng)連接部分L為-K-O-時(shí)，可以通過(guò)(1)將大環(huán)內(nèi)酯環(huán)上的＞NH基團(tuán)衍生成N-K-OH基團(tuán)和(2)使衍生的大環(huán)內(nèi)酯與非甾類抗炎亞單位D上的游離羧酸基團(tuán)按照方案VII反應(yīng)而生成通式I的化合物方案VII 連接基-K-OH可以如下所述與大環(huán)內(nèi)酯亞單位的伯或仲氮原子連接。使大環(huán)內(nèi)酯亞單位與鏈烯酰基衍生物反應(yīng)，諸如CH2＝CH(CH2)mC(O)O-烷基(例如，甲基丙烯酸酯)。然后諸如使用金屬氫化物(例如LiAlH4)在無(wú)水有機(jī)溶劑中還原酯基(即-C(O)O-烷基)而得到含有連接基-K-OH的大環(huán)內(nèi)酯亞單位(即M-K-OH)。該還原反應(yīng)一般在低溫且優(yōu)選在0℃或0℃以下進(jìn)行。
當(dāng)NH連接在大環(huán)內(nèi)酯糖環(huán)(諸如大環(huán)內(nèi)酯5位上的糖)的3′位上時(shí)，也可以進(jìn)行該反應(yīng)。
c)可以通過(guò)使如下通式表示的大環(huán)內(nèi)酯亞單位與如下通式表示的含有游離氨基的衍生的非甾類抗炎亞單位在諸如乙腈這類溶劑中反應(yīng)制備其中X1為-OC(O)-，Q為-CH2-或NH，且X2為-NH-的通式I表示的化合物；其中表示大環(huán)內(nèi)酯亞單位的通式如下 其中4″為糖S2、諸如克拉定糖上的4位；其中含有游離氨基的衍生的非甾類抗炎亞單位的通式如下 從而得到 可以通過(guò)使合適的胺(含有連接基-K-NH2)與非甾類抗炎藥的羧酸基團(tuán)反應(yīng)生成衍生的非甾類抗炎亞單位(即D-C(O)-NH-K-NH2)。
d)可以通過(guò)使大環(huán)內(nèi)酯亞單位和衍生的含有氨基的非甾類抗炎亞單位如下所示反應(yīng)制備其中X1為-OC(O)NH-且X2為-NH-的通式I表示的化合物。
e)還可以通過(guò)使大環(huán)內(nèi)酯亞單位和含有游離羧酸基團(tuán)的非甾類抗炎亞單位如下所示反應(yīng)制備其中X1為-OC(O)NH-且X2為-NH-的通式I表示的化合物。
f)可以通過(guò)使含有離去基團(tuán)L2(諸如Br)的大環(huán)內(nèi)酯亞單位和非甾類抗炎藥如下所示反應(yīng)制備通式I表示的化合物。
可以通過(guò)裂解連接在大環(huán)內(nèi)酯環(huán)3-位上的糖基且然后使所述的大環(huán)內(nèi)酯與L2-L-L1的試劑反應(yīng)制備原料大環(huán)內(nèi)酯亞單位，其中L2為離去基團(tuán)。
g)可以通過(guò)使含有離去基團(tuán)L2(諸如Br)的大環(huán)內(nèi)酯亞單位和非甾類抗炎藥如下所示反應(yīng)制備通式I表示的化合物。
h)可以通過(guò)使含有離去基團(tuán)L2(諸如Br)的大環(huán)內(nèi)酯亞單位和非甾類抗炎藥如下所示反應(yīng)制備通式I表示的化合物。
傳統(tǒng)上基于糖苷配基的取代模式將16-元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類分成亞家族。該家族的主要原型以白霉素、螺旋霉素和泰洛星為代表。
泰洛星是有代表性的16-元大環(huán)內(nèi)酯類，其含有帶有兩個(gè)雙鍵(tylonolide)和第三個(gè)糖取代基(β-D-mycinose)β-D-mycinose以及與5-羥基連接的二糖的高度取代的糖苷配基。從二糖中水解mycarose得到desmycarosyl-泰洛星(脫碳霉糖泰樂(lè)菌素)。
脫碳霉糖泰樂(lè)菌素上可能的修飾位置 例如，可以通過(guò)對(duì)C-20位醛基進(jìn)行還原氨基化制備16-元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯雜化物。
該反應(yīng)還可以用于17-元氮雜內(nèi)酯類，如8a-氮雜-高脫碳霉糖泰樂(lè)菌素及其衍生物(諸如二-和四氫衍生物)。
R14為氫或羥基
16-元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯衍生的其它可能性為通過(guò)環(huán)氧化轉(zhuǎn)化雙鍵和使用合適的反應(yīng)物(諸如二胺類)裂解環(huán)氧基而得到反應(yīng)劑大環(huán)內(nèi)酯亞單位(M-CH2-NH-K-NH2)。
還可以用羥基胺鹽酸鹽修飾9位上的酮而得到肟且然后還原成胺。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及通式I的化合物在治療炎性疾病、失調(diào)和病癥中的應(yīng)用，所述的性疾病、失調(diào)和病癥的特征在于不需要的炎癥免疫反應(yīng)或與之相關(guān)，尤其是TNF-α和IL-1過(guò)度分泌誘導(dǎo)或與之相關(guān)的所有疾病和病癥。
可以通過(guò)本領(lǐng)域中公知的方法測(cè)定本發(fā)明化合物的治療有效量。由于可以將本發(fā)明的化合物比相應(yīng)單獨(dú)的非甾類抗炎藥更有效地轉(zhuǎn)運(yùn)至所需部位，所以可以給予比非甾類抗炎藥摩爾量更少的化合物而仍然可以獲得相同的治療作用。此外，由于給予該化合物可以產(chǎn)生比使用相應(yīng)非甾類抗炎藥更少的副作用，所以可以增加NSAID的量。因此，下表僅用作指導(dǎo)。以摩爾為基準(zhǔn)，化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其溶劑化物或其前體藥物的治療有效量閾值一般等于或小于非甾類抗炎藥的治療有效量?；衔铩⑵渌帉W(xué)上可接受的鹽、其溶劑化物或其前體藥物的寬和優(yōu)選有效量如下表中所示。
因此，例如，吲哚美辛的優(yōu)選劑量范圍為50-200mg/天，相當(dāng)于140-560μmol/天的范圍。相同的基于摩爾的范圍140-560mol的本發(fā)明雜化化合物為測(cè)定優(yōu)選劑量范圍的起點(diǎn)。對(duì)該手段的精化也屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的范圍。
此外，本發(fā)明涉及藥物組合物，它含有有效量的本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑、諸如載體或稀釋劑。
本發(fā)明藥物組合物的制備包括混合、成粒、壓片和溶解組分的步驟。化學(xué)載體可以是固體或液體形式。固體載體可以為乳糖、蔗糖、滑石、明膠、瓊脂、果膠、硬脂酸鎂、脂肪酸，并不限于此。液體載體可以為糖漿；油，諸如橄欖油、向日葵籽油或大豆油；水；或生理鹽水，并不限于此。類似地，載體還可以含有使活性成分緩釋的成分，諸如硬脂酸甘油酯或甘油二硬脂酸酯?？梢灾苽鋷追N劑型的藥物組合物。如果使用固體載體，那么這些劑型可以包括可以口服給藥的片劑、膠囊形片劑、硬膠囊、粉劑或顆粒，并不限于此。固體載體的量可以改變，但主要在25mg-1g的范圍。如果使用液體載體，那么制劑可以為糖漿劑、乳劑、軟膠囊或無(wú)菌可注射液體或非水液體混懸劑形式。
可以通過(guò)局部或全身給予本發(fā)明的化合物，例如口服、非腸道、皮下粘膜，例如口含、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)和陰道內(nèi)?！宸悄c道″指的是通過(guò)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途經(jīng)。本發(fā)明化合物的相應(yīng)制劑可以用于預(yù)防和治療(預(yù)防、延緩、抑制或減輕)因異?；虿恍枰?過(guò)度、未調(diào)節(jié)或調(diào)節(jié)不良)的炎性免疫反應(yīng)導(dǎo)致或與之相關(guān)的幾種失調(diào)(疾病和其它病理性炎癥情況)，所述的異常或不需要炎性免疫反應(yīng)包括炎癥細(xì)胞因子或其它炎癥介體產(chǎn)生，包括但不限于TNF-α和IL-1β。這些疾病包括自身免疫疾病，諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、眼色素層視網(wǎng)膜炎、紅斑狼瘡、硬皮??；其它具有炎性成分的關(guān)節(jié)炎病，諸如類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎和多關(guān)節(jié)炎；其它炎性腦病，諸如腦膜炎、阿爾茨海默病、AIDS癡呆性腦炎；其它炎性眼部炎癥，諸如視網(wǎng)膜炎；炎性皮膚病，諸如濕疹、其它皮炎(例如特異性皮炎、接觸性皮炎)、牛皮癬、UV照射誘發(fā)的灼傷(日光射線和類似的UV源)；炎癥性腸病，諸如克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎；哮喘；其它過(guò)敏性疾病，諸如過(guò)敏性鼻炎；與急性哮喘相關(guān)的疾病，諸如中風(fēng)后的大腦損傷；因心肌缺血導(dǎo)致的心臟組織損傷；肺損傷，諸如發(fā)生成人呼吸窘迫綜合征的肺損傷；伴有感染的炎癥，諸如膿毒癥、膿毒性休克、中毒性休克綜合征；其它與特定器官或組織相關(guān)的炎性疾病，諸如腎炎(例如腎小球腎炎)；附件炎；痛風(fēng)；膽囊炎；慢性阻塞性肺??；充血性心力衰竭；II型糖尿?。环卫w維化；血管疾病，諸如動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄；和導(dǎo)致移植物排斥的同種異體免疫。
可以通過(guò)用于評(píng)價(jià)炎癥或抗炎作用的任意方法評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的功效。存在許多用于該目的的已知方法，包括但不限于使用超聲造影并結(jié)合注射微氣泡、測(cè)定炎癥細(xì)胞因子(諸如TNF-α、IL-1、IFN-γ)、測(cè)定活化的免疫系統(tǒng)細(xì)胞并觀察(水腫減少、紅斑減少、癢或燒灼感減輕、體溫下降、患病器官功能改善)以及下面提供的任意方法。
在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)、諸如下列實(shí)驗(yàn)中測(cè)定本發(fā)明化合物的治療作用。TNF-α和IL-1β在體外人外周血單核細(xì)胞中分泌的測(cè)定由用Ficoll-PaqueTMPlus(Amersham-Pharmacia)分離PBMC后的肝素化全血制備外周血單核細(xì)胞(PBMC)。為了測(cè)定TNF-α水平，在具有平底的微量滴定板(96孔，F(xiàn)alcon)中的RPMI 1640培養(yǎng)基內(nèi)將總體積為200μl的3.5-5×104個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)18-24小時(shí)，所述的培養(yǎng)基中補(bǔ)充了10％加熱失活的人AB血清(Croatian Centre For Transfusion Medicine，Zagreb)、100個(gè)單位/ml的青霉素、100mg/ml鏈霉素和20mMHEPES(Invitrogen Life Technologies)。在37℃和含有5％CO2的氣體環(huán)境以及90％濕度下保溫細(xì)胞。在陰性對(duì)照中，僅在培養(yǎng)基(NC)中培養(yǎng)細(xì)胞，而在陽(yáng)性對(duì)照中，通過(guò)添加1μg/ml脂多糖(LPS，大腸桿菌血清型0111B4，SIGMA)(PC)刺激TNF-α分泌并在將它們加入到用LPS(TS)刺激的細(xì)胞培養(yǎng)物后測(cè)定測(cè)試物質(zhì)對(duì)TNF-α分泌的作用。通過(guò)ELISA步驟、按照制造商(R & D Systems)的建議測(cè)定細(xì)胞上清液中TNF-α的水平。測(cè)試靈敏度＜3pg/ml TNF-α。如對(duì)TNF-α測(cè)定所述進(jìn)行IL-1β水平的測(cè)定，僅使用1×105個(gè)細(xì)胞/孔和0.1ng/ml的LPS。通過(guò)ELISA(R & D Systems)測(cè)定IL-1β水平。通過(guò)下列等式計(jì)算TNF-α或IL-1β產(chǎn)生的抑制百分比抑制％＝[1-(TS-NC)/(PC-NC)]*100。
將IC50值定義為抑制50％TNF-α產(chǎn)生的物質(zhì)濃度。將表現(xiàn)出20μM或20dμM以下濃度的IC50的化合物視為具有活性。使用Graph Pad Prism軟件計(jì)算IC50。
RAW 264.7細(xì)胞TNF-α分泌的測(cè)定使細(xì)胞生長(zhǎng)在37℃下含有5％CO2的氣體環(huán)境以及90％濕度下在DMEM培養(yǎng)基中的(Invitrogen Life Technologies)10％胎牛血清(FBS)中。將20000個(gè)細(xì)胞/孔平板固定在96孔平板(Falcon)中。在陰性對(duì)照中，僅在培養(yǎng)基(NC)中培養(yǎng)細(xì)胞，而在陽(yáng)性對(duì)照中，通過(guò)添加500pg/ml脂多糖(LPS，大腸桿菌血清型0111B4，SIGMA)(PC)刺激TNF-α分泌，并在將它們加入到用LPS(TS)刺激的細(xì)胞培養(yǎng)物后測(cè)定測(cè)試物質(zhì)對(duì)TNF-α分泌的作用。通過(guò)ELISA、按照制造商(R & D Systems)的建議測(cè)定細(xì)胞上清液中TNF-α的水平。通過(guò)下列等式計(jì)算TNF-α產(chǎn)生的抑制百分比抑制％＝[1-(TS-NC)/(PC-NC)]×100。
將IC50值定義為抑制50％TNF-α產(chǎn)生的物質(zhì)濃度。將表現(xiàn)出10μM或10μM以下濃度的IC50的化合物視為具有活性。
人前列腺素-H合酶-1(hPGH-1)和人前列腺素-H合酶-2(hPGH-2)抑制試驗(yàn)使用PCR、應(yīng)用來(lái)自人胎盤(pán)cDNA文庫(kù)(Stratagene)的Platinum pfxDNA聚合酶(Invitrogen Life Technologies)擴(kuò)增編碼hPGH-1和hPGH-2的基因。用于PGH-1的引物序列為5′ATATAAGCTTGCGCCATGAGCCGGAGTCTTC3′和5′ATATGGATCCTCAGAGCTCTGTGGATGGTCGC3′；用于hPGH-2的引物序列為5′ATATAAGCTTGCTGCGATGCTCGCCCGC3′和5′ATATGGATCCCTACAGTTCAGTTCAGTCGAACGTTC 3′。將PCR產(chǎn)物克隆入pcDNA3.1 Hygro(+)質(zhì)粒(Invitrogen Life Technologies)的HindIII和BamHI限制位點(diǎn)，通過(guò)測(cè)序證實(shí)序列。
對(duì)COS-7細(xì)胞(ATCC)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，在37℃下含有5％CO2的氣體環(huán)境以及90％濕度下，使細(xì)胞在24孔平板(Falcon)內(nèi)的DMEM培養(yǎng)基中的(Invitrogen Life Technologies)中的10％胎牛血清(FBS)中生長(zhǎng)至中完全融合。按照制造商的建議將1μg質(zhì)粒DNA(含有PGH-1或PGH-2基因或pcDNA Hygro 3.1(+)的pcDNA Hygro 3.1(+)作為陰性對(duì)照樣品)與1，5μl Lipofectamine 2000(Invitrogen Life Technologies)合并。轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)，將在DMEM中的測(cè)試化合物加入到細(xì)胞中，但不除去培養(yǎng)基并在40分鐘后，加入花生四烯酸(Sigma)至終濃度為20μM。30分鐘后，取出上清液并用PGE-2試驗(yàn)試劑盒(Cayman)。按照制造商的說(shuō)明測(cè)定PGE-2。在陰性對(duì)照中沒(méi)有檢測(cè)到PGE-2。
通過(guò)下列等式計(jì)算抑制％抑制％＝(1-樣品PGE-2濃度/陽(yáng)性對(duì)照PGE-2濃度)*100小鼠體內(nèi)LPS-誘導(dǎo)的TNF-α過(guò)度分泌的體內(nèi)模型按照已經(jīng)上述方法誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)TNF-α分泌(Badger AM等，J.Pharmac.And Env.Therap.，1996，2791453-1461)。在本試驗(yàn)中，使用8-12周齡的分成6-10只動(dòng)物一組的雄性Balb/C小鼠。僅用溶劑口服給藥治療動(dòng)物(陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照中)或在用LPS(大腸桿菌血清型0111B4，Sigma)處理前30分鐘給予物質(zhì)溶液，劑量為1-25μg/動(dòng)物。2小時(shí)后通過(guò)腹膜內(nèi)注射Roumpun(Bayer)和鹽酸氯胺酮(ketanest)(Parke-Davis)對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死。將每只動(dòng)物的血樣取入“vacutainer”管(BectonDickinson)并按照制造商的建議分離血漿。通過(guò)ELISA(Biosource，R & D Systems)、按照制造商所述的方法測(cè)定血漿中的TNF-α水平。測(cè)試靈敏度＜3pg/ml TNF-α。通過(guò)下列等式計(jì)算TNF-α產(chǎn)生的抑制百分比抑制％＝[1-(TS-NC)/(PC-NC)]*100。
將在10mg/kg劑量下表現(xiàn)出30％或30％以上TNF-α產(chǎn)生抑制的化合物視為具有活性。
將對(duì)上述試驗(yàn)中的四個(gè)和下面的舉例化合物中的三種定量表示的有代表性的結(jié)果列在下面
ND-未測(cè)定用于止痛活性的扭體試驗(yàn)在本試驗(yàn)中，通過(guò)將刺激劑、最常見(jiàn)的是乙酸注入小鼠腹腔誘發(fā)疼痛。動(dòng)物具有指定試驗(yàn)名稱的特征扭體反應(yīng)(Collier HOJ等，《藥物與化療》(Pharmac.Chemother.)，1968，32295-310；Fukawa K等，《藥理學(xué)方法雜志》(J.Pharmacol.Meth.)，1980，4251-259；SchweizerA等，《活性劑的作用》(Agents Actions)，1988，2329-31)。本試驗(yàn)適合于測(cè)定化合物的止痛活性。方法使用8-12周齡的雄性Balb/C小鼠(Charles River，Italy)。對(duì)對(duì)照組在腹膜內(nèi)給予0.6％濃度的乙酸前30分鐘口服給予甲基纖維素，而對(duì)驗(yàn)組在腹膜內(nèi)給予0.6％乙酸(體積0.1ml/10g)前30分鐘口服給予標(biāo)準(zhǔn)品(乙酰水楊酸)或在甲基纖維素中的測(cè)試物質(zhì)。將小鼠各自置于玻璃漏斗中并在20分鐘期限中記錄每只動(dòng)物扭體的次數(shù)。按照下列等式計(jì)算扭體抑制的百分比抑制％＝(對(duì)照組中扭體次數(shù)-試驗(yàn)組中扭體次數(shù)的平均值)/對(duì)照組中扭體的次數(shù)×100。
將表現(xiàn)出與乙酰水楊酸相同活性或優(yōu)于其活性的化合物視為具有活性。
LPS-誘發(fā)的小鼠休克的體內(nèi)模型使用8-12周齡的雄性Balb/C小鼠(Charles River，Italy)。用無(wú)菌鹽水稀釋分離自粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratie marcessans)(Sigma，1-6136)的LPS。首先真皮內(nèi)給予劑量為4μg/小鼠的LPS注射。18-24小時(shí)后，通過(guò)靜脈內(nèi)給予200μg/小鼠劑量的LPS。按照上述方式對(duì)對(duì)照組給予兩次LPS注射。對(duì)試驗(yàn)組在各自給予LPS前半小時(shí)口服所述物質(zhì)。24小時(shí)后觀察存活率。
將在30mg/kg劑量下產(chǎn)生存活率為40％或更好存活率的物質(zhì)視為具有活性。
實(shí)施例1-12的化合物至少在兩次研究試驗(yàn)中表現(xiàn)出活性。不過(guò)，這些結(jié)果僅是對(duì)化合物生物活性的解釋，而不應(yīng)以任何方式來(lái)限定本發(fā)明。
制備方法與實(shí)施例前體非甾類抗炎亞單位


化合物D2為S-(+)-布洛芬；帶有手性中心的其余化合物為外消旋混合物?；衔顳1為吲哚美辛；D3為氟比洛芬；D4為萘普生；D5為酮洛芬；D6為乙酰水楊酸；D7為舒林酸；D8為依托度酸；D9為酮咯酸；D10為舒洛芬；D11為氟尼辛；D12為雙氯芬酸鈉；且D13為托美丁鈉。
大環(huán)內(nèi)酯亞單位
表1，通式IIA
L1＝-(CH2)3-OHL2＝-(CH2)3-NH2L3＝-CH2-NH-(CH2)2-NH2L4＝-C(O)-(CH2)2-NH-(CH2)2-NH2名稱M1-M6相應(yīng)于通式IIA的大環(huán)內(nèi)酯亞單位，其中變量R1-R13如表中指定。
實(shí)施例1化合物1(通式1M＝M1，L＝L1，D＝D1)在氬氣環(huán)境中向吲哚美辛(D1)(200mg；0.56mmole)在干燥DMF(3ml)中的溶液中加入1，1-羰基二咪唑(187mg；在5ml DMF中1.15mmol)。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌24小時(shí)，然后將其加入到化合物ML1(443mg；在3ml DMF中0.56mmole)中。將該反應(yīng)混合物在100℃下加熱48小時(shí)、蒸發(fā)并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到56mg化合物1； MS(m/z)1133[MH]+.IR(KBr)cm-13449，2972，2936，1731，1686，1622，1564，1546，1512，1478，1460，1374，1323，1263，1225，1168，1089，1057，1013，958，925，834，804，756，732。
實(shí)施例2化合物2(通式I；M＝MI，L＝L1，D＝D2)在氬氣環(huán)境中向S-(+)-布洛芬(D2)(115mg；0.56mmole)在干燥DMF(3ml)中的溶液中加入1，1-羰基二咪唑(187mg；在5ml DMF中1.15mmol)。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌24小時(shí)，然后將其加入到化合物ML1(443mg；在3ml DMF中0.56mmole)中。將該反應(yīng)混合物在100℃下加熱48小時(shí)、蒸發(fā)并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到43mg化合物2； MS(m/z)981.7[MH]+.IR(KBr)cm-13483，2971，2937，2873，2787，1733，1655，1638，1561，1511，1459，1421，1379，1332，1248，1167，1109，1055，1013，1000，958，900，836，803，756，728，640。
實(shí)施例3化合物3(通式I；M＝M1，L＝L1，D＝D3)在氬氣環(huán)境中向氟比洛芬(D3)(137mg；0.56mmole)在干燥DMF(3ml)中的溶液中加入1，1-羰基二咪唑(187mg；在5ml DMF中1.15mmol)。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌24小時(shí)，然后將其加入到化合物ML1(443mg；在3ml DMF中0.56mmole)中。將該反應(yīng)混合物在100℃下加熱48小時(shí)、蒸發(fā)并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到46mg化合物3； MS(m/z)1119.5[MH]+.IR(KBr)cm-13452，2973，2937，2879，2829，2777，1734，1688，1659，1625，1582，1565，1546，1512，1461，1420，1379，1329，1267，1171，1109，1054，1013，999，959，899，834，801，767，726，699，640。
實(shí)施例4化合物4(通式I；M＝M1，L＝L2.D＝D1)在氬氣環(huán)境中向吲哚美辛(D1)(104mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)，然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到127mg化合物4；MS(m/z)1131.8[MH]+.IR(KBr)cm-13451，2971，2936，2829，1722，1675，1659，1542，1595，1563，1546，1529，1478，1461，1374，1323，1260，1227，1168，1110，1089，1054，1013，957，927，899，834，806，755。
實(shí)施例5化合物5(通式1；M＝M1，L＝L2.D＝D2)在氬氣環(huán)境中向(S)-(+)-布洛芬(D2)(60mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)且然后蒸發(fā)。用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)而得到239mg化合物5；
MS(m/z)981.0[MH]+.IR(KBr)cm-13433，2971，2936，2872，1720，1686，1655，1561，1545，1511，1460，1378，1264，1167，1109，1054，1013，1000，958，902，835，642。
實(shí)施例6化合物6(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D3)在氬氣環(huán)境中向氟比洛芬(D3)(70mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)且然后蒸發(fā)。用硅膠柱純化，使用CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1洗脫而得到160mg化合物6；MS(m/z)1018.9[MH]+.IR(KBr)cm-13448，2973，2937，2881，2834，2782，1720，1655，1625，1581，1560，1544，1484，1458，1419，1378，1267，1167，1109，1053，1012，958，900，835，767，726，699，641。
實(shí)施例7化合物7(通式1；M＝M1，L＝L2，D＝D4)在氬氣環(huán)境中向萘普生(D4)(67mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)且然后在減壓條件下濃縮。用硅膠柱純化，使用CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1洗脫而得到162mg化合物7；MS(m/z)1004.9[MH]+.IR(KBr)cm-13433，2972，2937，2876，2829，2788，1719，1655，1607，1560，1542，1508，1459，1377，1265，1230，1167，1109，1053，1013，1000，958，928，895，853，809，755，640。
實(shí)施例8化合物8(通式I；M＝M1 L＝L2，D＝D5)在氬氣環(huán)境中向酮洛芬(D5)(74mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)且然后在減壓條件下濃縮。用硅膠柱純化，使用CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1洗脫而得到114mg化合物8；MS(m/z)1028.9[MH]+.IR(KBr)cm-13450，3062，2972，2937，2876，2834，2788，1722，1658，1598，1580，1544，1458，1378，1319，1284，1168，1109，1081，1053，1013，1000，957，902，834，755，723，705，643。
實(shí)施例9化合物9(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D6)在氬氣環(huán)境中向乙酰水楊酸(D6)(52mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)且然后在減壓條件下濃縮。用硅膠柱純化，使用CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1洗脫而得到127mg化合物9；MS(m/z)955[MH]+.
實(shí)施例10化合物10(通式I；M＝M2，L＝L2，D＝D1)將化合物4(120mg；0.1mmole)溶于3mL 0.5 M HCl。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后向該反應(yīng)混合物中加入二氯甲烷并分離各層。將水層調(diào)節(jié)至pH 10并用CH2Cl2提取。用飽和NaHCO3洗滌合并的有機(jī)提取物、用MgSO4干燥并在減壓條件下蒸發(fā)。用硅膠柱純化(洗脫劑EtOAc∶TEA＝96∶4)而得到32mg化合物10。MS(m/z)973.8[MH]+.
實(shí)施例11化合物11(通式I；M＝M2，L＝L2，D＝D2)將化合物5(120mg；0.1mmole)溶于3mL 0.5 M HCl。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后向該反應(yīng)混合物中加入二氯甲烷并分離各層。將水層調(diào)節(jié)至pH 10并用CH2Cl2提取。用飽和NaHCO3洗滌合并的有機(jī)提取物、用MgSO4干燥并在減壓條件下蒸發(fā)。用硅膠柱純化(洗脫劑EtOAc∶TEA＝96∶4)而得到28mg化合物11。
MS(m/z)822.1[MH]+.IR(KBr)cm-13450，2971，2873，1710，1656，1544，1511，1459，1380，1350，1262，1173，1111，1073，1050，978，957，934，898，803，755，634。
實(shí)施例12化合物12(通式I；M＝M2，L＝L2，D＝D5)將化合物8(150mg；0.15mmole)溶于5mL 0.5 M HCl。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后向該反應(yīng)混合物中加入二氯甲烷并分離各層。將水層調(diào)節(jié)至pH 10并用CH2Cl2提取。用飽和NaHCO3洗滌合并的有機(jī)提取物、用MgSO4干燥并在減壓條件下蒸發(fā)。用硅膠柱純化(洗脫劑EtOAc∶TEA＝96∶4)而得到42mg化合物12。
MS(m/z)870.1[MH]+.IR(KBr)cm-13439，3067，2972，2936，2876，1721，1657，1598，1580，1544，1458，1378，1349，1319，1283，1173，1136，1111，1074，1050，1000，956，904， 863，723，705，643。
實(shí)施例13化合物13(通式I；M＝M3，L＝L2，D＝D1)將化合物4(68mg；0.06mmole)溶于10mL甲醇。加入38mg(0.28mmole)的NaOACx3H2O和15mg(0.06mmole)的I2。用500W的鹵素?zé)魧⒃摲磻?yīng)混合物照射2小時(shí)。然后加入2-3滴0.1 M Na2S2O3。隨后在減壓條件下蒸發(fā)溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯，用水和飽和NaHCO3溶液洗滌。用無(wú)水Na2SO4干燥有機(jī)層并蒸發(fā)。用硅膠柱純化產(chǎn)物，溶劑系統(tǒng)為CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1。分離到32mg量的化合物13；MS(m/z)1117.9[MH]+。
實(shí)施例14化合物14(通式1；M＝M4，L＝L2，D＝D1)將化合物13(100mg；0.09mmole)溶于3mL甲醇。向該溶液中加入127μl N，N-二異丙基乙胺和45μl乙基碘。將該反應(yīng)混合物在50℃的溫度下攪拌20小時(shí)。隨后用30mL乙酸乙酯稀釋該體系并用30mL飽和碳酸氫鈉水溶液和30mL水洗滌。用無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)層。通過(guò)減壓蒸發(fā)溶劑。用硅膠柱純化得到的混合物，洗脫劑為CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1。分離到48mg的化合物14；MS(m/z)1145.7[MH]+。
實(shí)施例15化合物15(通式I；M＝M5，L＝L3，D＝D1)在惰性氣體環(huán)境中的10mL干燥二氯甲烷中溶解84mg吲哚美辛D1(0.2mmole)。隨后向該溶液中加入0.25mL三乙胺、53mg羥基苯并三唑、200mg大環(huán)內(nèi)酯ML6(0.2mmole)和157mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。在減壓條件下蒸發(fā)溶劑，并用硅膠柱純化得到的混合物，洗脫劑為CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1。分離到130mg的化合物15；MS(m/z)1188.6[MH]+。
實(shí)施例16化合物16(通式1；M＝M6，L＝L4.D＝D1)在惰性氣體環(huán)境中的10mL干燥二氯甲烷中溶解43mg吲哚美辛D1(0.1mmole)。隨后向該溶液中加入0.12mL三乙胺、32mg羥基苯并三唑、103mg大環(huán)內(nèi)酯ML7(0.1mmole)和82mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。在減壓條件下蒸發(fā)溶劑并用硅膠柱純化得到的混合物，洗脫劑為CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1。分離到80mg的化合物16；MS(m/z)1203.1[MH]+；MS(m/z)981.0[MH]+.IR(KBr)cm-13424，2972，2936，2833，1734，1678，1595，1562，1544，1526，1477，1459，1374，1324，1258，1225，1179，1108，1090，1073，1039，1015，959，926，902，836，798，755，693，666，642。
實(shí)施例17化合物17(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D7)在氬氣環(huán)境中向舒林酸(D7)(103mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)，然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到262mg化合物17；MS(m/z)1130.3[MH]+。
實(shí)施例18化合物18(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D8)在氬氣環(huán)境中向依托度酸(D8)(83mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)，然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到78mg化合物18；MS(m/z)1061.4[MH]+。
實(shí)施例19
化合物19(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D9)在氬氣環(huán)境中向酮咯酸(D9)(74mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)，然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到110mg化合物19；MS(m/z)1029.5[MH]+.IR(KBr)cm-13448，2972，2936，2876，1719，1655，1624，1572，1561，1544，1492，1465，1430，1400，1379，1342，1272，1167，1109，1052，1013，1000，958，894，835，797，758，724，699，670。
實(shí)施例20化合物20(通式1；M＝M1，L＝L2，D＝D10)在氬氣環(huán)境中向舒洛芬(D10)(75mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)，然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到128mg化合物20；MS(m/z)1034.4[MH]+.IR(KBr)cm-13448，3082，2972，2937，2877，2833，2789，1719，1655，1638，1606，1560，1542，1517，1458，1415，1378，1355，1289，1167，1109，1053，1013，1000，958，901，886，860，845，806，753，724，665，640。
實(shí)施例21化合物21(通式I；M＝M1，L＝L2，D＝D11)在氬氣環(huán)境中向氟尼辛(D11)(86mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)，然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到76mg化合物21；MS(m/z)1070，4[MH]+.IR(KBr)cm-13451，2973，2938，2881，1722，1642，1593，1524，1462，1379，1321，1321，1278，1259，1168，1121，1081，1053，1020，958，899，835，795，772，721，666，640。
實(shí)施例22化合物22(通式1M＝M1，L＝L2，D＝D12)在氬氣環(huán)境中向雙氯芬酸鈉(D12)(92mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)，然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到140mg化合物22；MS(m/z)1069.1[MH]+.IR(KBr)cm-13426，3073，2972，2937，2876，2829，2788，1722，1658，1578，1562，1546，1511，1454，1378，1301，1281，1167，1110，1053，1013，999，958，898，836，750，668。
實(shí)施例23化合物23(通式IM＝M1，L＝L2，D＝D13)在氬氣環(huán)境中向托美丁鈉(D13)(80mg；0.29mmole)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入0.380mL(2.73mmole)三乙胺、80mg(0.59mmole)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmole)ML2和235mg(1.23mmole)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí)，然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶MeOH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到183mg化合物23；MS(m/z)1031.3[MH]+.IR(KBr)cm-13448，2972，2937，2876，1774，1719，1655，1624，1601，1561，1545，1509，1477，1458，1376，1265，1180，1167，1110，1076，1053，1012，1000，957，883，834，794，751，669，639，620。
權(quán)利要求
1.通式I的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物及其各非對(duì)映異構(gòu)體 其中M表示大環(huán)內(nèi)酯亞單位；D表示非甾類亞單位；L為與M和D中的每一個(gè)共價(jià)連接的連接分子。
2.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中M表示通式II的基團(tuán) 其中(i)Z和W獨(dú)立為＞C＝O、＞CH2、＞CH-NRtRs、＞N-RN或＞C＝N-RM或鍵，其中Rt和Rs獨(dú)立為氫或烷基；RM為羥基、烷氧基、取代的烷氧基或ORP；RN為氫、RP、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷氧基烷基或-C(X)-NRtRs；其中X為＝O或＝S；條件是Z和W不能同時(shí)為＞C＝O、＞CH2、＞CH-NRtRs、＞N-RN或＞C＝N-RM或鍵；(ii)U和Y獨(dú)立為氫、鹵素、烷基或羥基烷基；(iii)R1為羥基、ORP、-O-S2基團(tuán)或＝O；(iv)S1為下列通式的糖部分 其中R8和R9均為氫或彼此形成鍵，或R9為氫且R8為-N(CH3)Ry，其中Ry為RP、RZ或-C(O)RZ，其中RZ為氫或烷基或鏈烯基或炔基或環(huán)烷基或芳基或雜芳基或被C2-C7-烷基、C2-C7-鏈烯基、C2-C7-炔基、芳基或雜芳基取代的烷基；R10為氫或RP；(v)S2為下列通式的糖部分 其中R3’為氫或甲基；R11為氫、RP或O-R11為與R12和與C/4″碳原子形成＞C＝O或環(huán)氧基的基團(tuán)；R12為氫或與O-R11和與C/4″碳原子形成＞C＝O或環(huán)氧基的基團(tuán)；(vi)R2為氫、羥基、ORP或烷氧基；(vii)A為氫或甲基；(viii)B為甲基或環(huán)氧基；(ix)E為氫或鹵素；(x)R3為羥基、ORP、烷氧基或R3為與R5和與C/11和C/12碳原子形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯的基團(tuán)；或如果W或Z為＞N-RN，則R3為與W或Z形成環(huán)氨基甲酸酯的基團(tuán)；(xi)R4為C1-C4烷基；(xii)R5為氫、羥基、ORP、C1-C4-烷氧基或與R3和與C/11和C/12碳原子形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯的基團(tuán)；(xiii)R6為氫或C1-C4-烷基；其中M含有連接位置，它通過(guò)該位置經(jīng)連接基L與D連接；條件是連接位置位于下列基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)上a)位于S1、S2或糖苷配基氧上的任意活性羥基、氮或環(huán)氧基，條件是S1或/和S2被裂解；b)位于Z或W上的活性＞N-RN或-NRtRs或＝O；c)位于R1、R2、R3和R5中任意一個(gè)上的活性羥基；d)可以首先被衍生成羥基或-NRtRs基團(tuán)的任意其它基團(tuán)；且RP為羥基或氨基保護(hù)基。
3.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中L表示通式IV的基團(tuán)X1-(CH2)m-Q-(CH2)n-X2IV其中X1選自-CH2-、-C(O)-、OC(O)-、N-O-、-OC(O)NH-或-C(O)NH-；X2為-NH-或-NHC(O)-、-OC(O)-、-C(O)-、-O或-CH2-；Q為-NH-或-CH2-或不存在；其中-CH2-或-NH-基團(tuán)各自可以任選被C1-C7-烷基、C2-C7-鏈烯基、C2-C7-炔基、C(O)RX、C(O)ORX、C(O)NHRX取代，其中RX可以為C1-C7-烷基、芳基或雜芳基；符號(hào)m和n獨(dú)立為0-4的整數(shù)，條件是如果Q為NH，那么n不能為0。
4.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中D來(lái)源于NSAID，所述的NSAID選自醋氯芬酸、阿西美辛、對(duì)乙酰氨基酚、醋氨沙洛、乙酰水楊酸、乙?；?水楊-2-氨基-4-甲基吡啶-酸、5-氨基乙酰水楊酸、阿氯芬酸、氨洛芬、氨芬酸、氨基安替比林、安吡昔康、阿尼利定、芐達(dá)酸、苯噁洛芬、柏莫洛芬、α-沒(méi)藥醇、溴芬酸、5-溴水楊酸乙酸酯、溴水楊苷、布氯酸、丁布芬、卡洛芬、塞來(lái)考昔、chromoglycate、桂美辛、clindanac、氯吡酸、雙氯芬酸鈉、二氟尼柳、地他唑、屈噁昔康、恩芬那酸、依托度酸、依托芬那酯、聯(lián)苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬度柳、非諾洛芬、芬替酸、非普地醇、flufenac、氟芬那酸、氟尼辛、氟諾洛芬、氟比洛芬、glutametacin、水楊酸乙二醇酯、異丁芬酸、布洛芬、異丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、三苯唑酸、伊索克酸、伊索昔康、酮洛芬、酮咯酸、氯諾昔康、洛索洛芬、甲氧芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、5-氨基水楊酸、甲嗪酸、莫苯唑酸、孟魯司特、萘丁美酮、萘普生、尼氟酸、尼美舒利、奧沙拉秦、奧沙西羅、噁丙嗪、羥布宗、對(duì)乙酰氨基酚、帕沙米特、哌立索唑、苯乙酰水楊酸酯、保泰松、水楊酸苯酯、吡拉唑酸、吡羅西康、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、reserveratol、醋水楊胺、水楊酰胺、水楊酰胺-O-乙酸、水楊酰硫酸酯、水楊苷、水楊酰胺、雙水楊酯、舒林酸、舒洛芬、suxibutazone、他莫昔芬、替諾昔康、噻洛芬酸、噻拉米特、ticlopridine、替諾立定、托芬那酸、托美丁、tropesin、聯(lián)苯丁酸、希莫洛芬、扎托洛芬、佐美酸、托莫普羅、扎魯司特和環(huán)孢菌素。
5.如權(quán)利要求2中所述的化合物，其中Z和W共同為-N(CH3)-CH2-、-NH-CH2-、-CH2-NH-、-C(O)-NH-或-NH-C(O)-；A和B為甲基；E為氫；R為羥基或甲氧基；S1表示去氧糖胺糖，其中R8選自氫、甲基、氨基、C1-C6烷氨基或C1-C6二烷氨基；R9和R10為氫；R1為羥基或O-S2基團(tuán)，其中S2表示克拉定糖，其中R11為氫或O-R11為與R12和與C/4″碳原子形成＞C＝或環(huán)氧基的基團(tuán)；R12為氫或與O-R11和與C/4″碳原子形成＞C＝O或環(huán)氧基的基團(tuán)；R13為甲基；U為氫；Y為甲基；R6為羥基、甲基或乙基；R5為氫、羥基、甲氧基或與R3和與C/11和C/12碳原子形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán)；R3為羥基或與W或Z形成環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán)，或R3為與R5和與C/11和C/12碳原子形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán)；R4為甲基；條件是連接鍵通過(guò)N/9a位上Z的氮或通過(guò)均在S2糖C/4″位上的R12的碳或R11的氧。
6.如權(quán)利要求3中所述的化合物，其中X1為-CH2-或-OC(O)-；X2為-NHC(O)-；Q為-NH-或不存在。
7.如權(quán)利要求4所述的化合物，其中D來(lái)源于NSAID，所述的NSAID選自S-(+)-布洛芬、吲哚美辛、氟比洛芬、萘普生、酮洛芬、乙酰水楊酸、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、舒洛芬、氟尼辛、雙氯芬酸鈉和托美丁鈉。
8.特征在于如下式的化合物1
9.特征在于如下式的化合物2
10.特征在于如下式的化合物3
11.特征在于如下式的化合物4
12.特征在于如下式的化合物5
13.特征在于如下式的化合物6
14.特征在于如下式的化合物7
15.特征在于如下式的化合物8
16.特征在于如下式的化合物9
17.特征在于如下式的化合物10
18.特征在于如下式的化合物11
19.特征在于如下式的化合物12
20.特征在于如下式的化合物13
21.特征在于如下式的化合物14
22.特征在于如下式的化合物15
23.特征在于如下式的化合物16
24.特征在于如下式的化合物17
25.特征在于如下式的化合物18
26.特征在于如下式的化合物19
27.特征在于如下式的化合物20
28.特征在于如下式的化合物21
29.特征在于如下通式的化合物22
30.特征在于如下式的化合物23
31.通式I化合物的制備方法 該方法包括a)為了得到其中X2為-NHC(O)-的通式I化合物，使通式V的化合物與通式VIa表示的大環(huán)內(nèi)酯的游離氨基反應(yīng)，其中通式V如下 其中L1表示離去基團(tuán)，且通式VIa如下 b)為了得到其中X2為-OC(O)-的通式I化合物，使通式V的化合物與通式VIb表示的大環(huán)內(nèi)酯的游離羥基反應(yīng)， c)為了得到其中X1為-OC(O)-，Q為-NH-且X2為-NHC(O)-的通式I化合物，使如下通式表示的大環(huán)內(nèi)酯 與如下通式表示的化合物的游離氨基反應(yīng)， d)為了得到其中X1為-OC(O)NH-且X2為-NHC(O)-的通式I化合物，使如下通式表示的大環(huán)內(nèi)酯 與如下通式表示的化合物的游離氨基反應(yīng)， e)為了得到其中X1為-CH2-，Q為-NH-且X2為-NHC(O)-的通式I化合物，使如下通式表示的大環(huán)內(nèi)酯 與通式V的化合物反應(yīng)；f)為了得到通式I的化合物，使具有離去基團(tuán)L2的通式VIIf或通式VIIg或通式VIIh表示的大環(huán)內(nèi)酯與非甾類抗炎亞單位的游離羧酸反應(yīng)，其中通式VIIf、通式VIIg、通式VIIh如下
32.藥物組合物，包含如權(quán)利要求1-30中所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
33.如權(quán)利要求1-30中所述的化合物用于制備治療炎性疾病、失調(diào)和病癥的藥物的用途，所述的炎性疾病、失調(diào)和病癥的特征在于不需要的炎性免疫反應(yīng)或與之相關(guān)，尤其是TNF-α和IL-1過(guò)度分泌誘導(dǎo)或與之相關(guān)的所有疾病和病癥。
34.通式I表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物用于制備治療有此需要的對(duì)象中與白細(xì)胞浸潤(rùn)入發(fā)炎組織相關(guān)的炎性病癥和免疫或過(guò)敏性失調(diào)的藥物的用途，包括給予所述的對(duì)象治療有效量的通式I表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
35.權(quán)利要求34所述的用途，其中炎性病癥和免疫失調(diào)選自哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、支氣管炎和囊性纖維化。
36.權(quán)利要求34所述的用途，其中所述的炎性病癥和免疫失調(diào)選自肺、關(guān)節(jié)、眼、腸、皮膚和心臟的炎性病癥或免疫失調(diào)。
37.權(quán)利要求34所述的用途，其中所述的炎性病癥和免疫失調(diào)選自哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、支氣管炎、囊性纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、眼色素層炎、結(jié)膜炎、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、遠(yuǎn)端直腸炎、牛皮癬、濕疹、皮炎、冠狀動(dòng)脈梗死性損害、慢性炎癥、內(nèi)毒素休克和平滑肌增生性失調(diào)。
38.通式I表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物用于制備減輕患病器官或組織炎癥的藥物的用途，包括將治療有效量的通式I表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物遞送至所述的器官或組織。
全文摘要
本發(fā)明涉及(a)通式I表示的新化合物、(b)其藥學(xué)上可接受的鹽、前體藥物和溶劑化物、(c)其制備方法和中間體和(d)它們?cè)谥委熑撕蛣?dòng)物的炎性疾病和失調(diào)中的應(yīng)用其中M表示來(lái)源于具有在炎性細(xì)胞內(nèi)累積特性的大環(huán)內(nèi)酯的大環(huán)內(nèi)酯亞單位(大環(huán)內(nèi)酯部分)，D表示來(lái)源于具有抗炎、止痛和/或解熱活性的非甾類藥物(NSAID)的非甾類亞單位(非甾類部分)，且L表示共價(jià)連接M和D的連接基。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1665829SQ03816092
公開(kāi)日2005年9月7日 申請(qǐng)日期2003年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月8日
發(fā)明者M·默塞普, M·麥西克, L·托馬斯科維克, S·馬科維克 申請(qǐng)人:普利瓦研究院有限公司