專利名稱:作為甾類/非甾類抗炎、抗腫瘤和抗病毒活性分子載體的新化合物、組合物的制作方法
優(yōu)先權(quán)本申請(qǐng)要求2002年7月8日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的60/395,190的優(yōu)先權(quán),將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及(a)由結(jié)構(gòu)I表示的新化合物 其中M表示具有在炎性細(xì)胞內(nèi)累積特性的大環(huán)內(nèi)酯亞單位,V表示抗炎化合物,可以為甾類或非甾類亞單位或抗腫瘤藥亞單位或抗病毒化合物亞單位,并且L表示共價(jià)連接M和V的連接基;(b)所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、前體藥物和溶劑化物;(c)這類化合物的制備方法和中間體;和(d)它們?cè)谥委熑撕蛣?dòng)物炎癥、腫瘤和病毒疾病和病癥中的應(yīng)用。
這類化合物可以作為前體藥物使用,前體藥物將所述化合物轉(zhuǎn)運(yùn)入靶細(xì)胞并在這類靶細(xì)胞內(nèi)釋放高于單獨(dú)化合物一般所達(dá)到的濃度的所述化合物;或這類化合物可以以如所給予的雜交形式具有活性。這些化合物及其應(yīng)用由此是對(duì)增加上述活性組分中的一種或多種的有效性和/或功效和/或減少其副作用的技術(shù)問題的反應(yīng),通過將它們以雜交形式優(yōu)先轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞或靶細(xì)胞鄰近處來實(shí)現(xiàn)。
背景技術(shù):
傳統(tǒng)上可以將抗炎藥分類成甾類和非甾類。甾類抗炎化合物仍然是最有效治療炎性疾病和病癥的藥物,所述的疾病和病癥諸如哮喘、慢性阻塞性肺??;炎性鼻病,諸如過敏性鼻炎、鼻息肉;腸病,諸如克羅恩病、結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎;皮膚炎癥,諸如濕疹、牛皮癬、過敏性皮炎、神經(jīng)性皮炎、瘙癢癥、結(jié)膜炎;自身免疫疾病,諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎;和移植免疫抑制。此外,甾類用作治療各種惡性腫瘤的輔助化療劑,所述的惡性腫瘤包括白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和其它造血系統(tǒng)的惡性腫瘤。除極佳的功效和有效性外,這類藥物還存在大量例如對(duì)碳水化合物代謝、鈣吸收、內(nèi)源性皮質(zhì)類固醇的分泌以及對(duì)垂體、腎上腺皮質(zhì)和胸腺生理功能的不利副作用。近來研發(fā)的甾類對(duì)炎性疾病和過程高度有效,因?yàn)樗鼈円种圃S多炎癥介體,而其全身副作用得到減少。專利申請(qǐng)WO 94/13690、WO 94/14834、WO 92/13873和WO 92/13872中描述了用于局部施用在炎癥部位的所謂″軟″甾類或可水解皮質(zhì)類固醇,而其全身副作用因″軟″甾類在血清中的不穩(wěn)定性而得到減少,其中活性甾類快速水解成失活形式。然而,尚未發(fā)現(xiàn)作為用于控制諸如哮喘或克羅恩病這類疾病所需的在長(zhǎng)期和持續(xù)治療中沒有不利作用的理想甾類。因此,對(duì)具有改善的治療特性和/或較少或較輕度副作用的甾類存在迫切需求。
具有不同作用機(jī)制的非甾類抗炎藥物對(duì)特定的炎癥介體起作用,由此提供治療作用。由于不僅在作用機(jī)制、而且在所抑制的特定炎癥介體方面存在差異,所以甾類和非甾類藥物具有不同的抗炎作用分布,由此對(duì)特定的病癥而言,某些藥物可能比其它藥物更為合適。此外,大部分非甾類抗炎藥物并非絕對(duì)具有特異性,并且在以較大劑量或長(zhǎng)期使用時(shí)其應(yīng)用伴隨有不利的副作用。已知許多非甾類抗炎藥物起內(nèi)源性COX-1酶抑制劑的作用,而內(nèi)源性COX-1酶在維持胃粘膜完整性方面極為重要。因此,這些藥物的應(yīng)用通常導(dǎo)致胃粘膜受損乃至出血。(Warner T.D.《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)1999,96,7563-7568)。因此,選擇性抑制COX-2、而不抑制COX-1的活性劑對(duì)治療炎性疾病是優(yōu)選的。另外,已知某些抗炎化合物(諸如茶堿)具有極窄的治療指數(shù),其應(yīng)用受限。
近來,F(xiàn)DA批準(zhǔn)特異性阻斷COX-2的非甾類抗炎藥塞來考昔(celecoxib)用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Luong等《藥物治療學(xué)年鑒》(Ann.Pharmacother.)2000,34,743-760)。COX-2還在許多癌癥和癌前期損害中得到,并表達(dá)且存在選擇性COX-2抑制劑可以用于治療和預(yù)防結(jié)腸直腸癌和其它癌癥的確定證據(jù)(Taketo,M.M.,《國(guó)家癌癥研究院雜志》(J.Natl.Cancer Inst.)1998,90,1609-1620,F(xiàn)ournier等《細(xì)胞生物化學(xué)雜志》(J.Cell Biochem.)增刊2000,34,97-102)。
在1975年,將TNF-α定義為內(nèi)毒素誘導(dǎo)并在體外和體內(nèi)導(dǎo)致腫瘤壞死的血清因子(Carswell EA等,《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.),1975,723666-3670)。除抗腫瘤作用外,TNF-α還具有許多其它在生物體內(nèi)穩(wěn)態(tài)和病理生理狀況方面重要的生物作用。TNF-α的主要來源為單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞、T-淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞。
抗-TNF-α抗體(cA2)對(duì)患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的患者具有治療作用這一發(fā)現(xiàn)(Elliott M等,《柳葉刀》(Lancet),1994,3441105-1110)導(dǎo)致對(duì)尋找能夠作為RA的有效藥物的新TNF-α抑制劑的興趣增加。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種自身免疫性慢性炎癥疾病,其特征在于關(guān)節(jié)發(fā)生不可逆的病理改變。除RA療法外,TNF-α拮抗劑還可以用于許多病理狀況和疾病,諸如脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)和其它關(guān)節(jié)炎性疾病、膿毒癥、膿毒性休克、毒性休克綜合征、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、牛皮癬、腎小球腎炎、紅斑狼瘡、硬皮病、哮喘、惡病質(zhì)、慢性阻塞性非失調(diào)、充血性心力衰竭、胰島素抵抗、肺纖維化、多發(fā)性硬化、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、病毒感染和AIDS。
兩種不同的反錄病毒、即人免疫缺陷病毒(HIV)1型(HIV-1)或2型(HIV-2)在病原學(xué)上與免疫反應(yīng)性疾病、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)有關(guān)。HIV血清反應(yīng)陽(yáng)性個(gè)體開始無(wú)癥狀,而一般發(fā)生與AIDS相關(guān)的復(fù)合癥狀(ARC),隨后發(fā)展成AIDS。受侵害個(gè)體表現(xiàn)出重度免疫抑制,其使他們先傾向于衰弱以及最終的致命的機(jī)會(huì)性感染。
AIDS病是HIV-1或HIV-2病毒按照其復(fù)雜的病毒生命周期產(chǎn)生的結(jié)果。病毒體的生命周期包括病毒體通過使病毒體保護(hù)外殼表面上的糖蛋白與淋巴細(xì)胞上的CD4糖蛋白結(jié)合而自身附著在宿主人T-4淋巴細(xì)胞免疫細(xì)胞上。一旦附著,病毒體則脫落其糖蛋白外殼、透入宿主細(xì)胞膜并且不包被其RNA。病毒體酶逆錄酶指導(dǎo)RNA轉(zhuǎn)錄成單鏈DNA的過程。病毒RNA被降解且生成第二DNA鏈。此時(shí)雙鏈DNA被整合入人細(xì)胞基因且這些基因用于病毒復(fù)制。RNA聚合酶將整合的病毒DNA轉(zhuǎn)錄成病毒mRNA。病毒RNA被翻譯成前體gag-pol融合多蛋白。然后該多蛋白被HIV蛋白酶裂解得到成熟病毒蛋白。因此,HIV蛋白酶與調(diào)節(jié)裂解過程級(jí)聯(lián)有關(guān),而裂解過程導(dǎo)致病毒顆粒成熟成能夠具有完全傳染性的病毒。
擔(dān)負(fù)殺傷侵入的病毒體的典型人免疫系統(tǒng)負(fù)荷較重,因?yàn)椴《靖腥竞蜌庖呦到y(tǒng)T細(xì)胞。此外,用于生成新病毒體顆粒的酶、即病毒逆錄酶并非極具特異性且產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄錯(cuò)誤,這種轉(zhuǎn)錄錯(cuò)誤導(dǎo)致病毒保護(hù)外殼表面上的糖蛋白連續(xù)改變。這種特異性的缺乏降低了免疫系統(tǒng)的有效性,因?yàn)閷?duì)一種糖蛋白特異性產(chǎn)生的抗體可能對(duì)另一種糖蛋白無(wú)作用,由此減少可用于抗擊病毒的抗體數(shù)量。病毒持續(xù)復(fù)制,而免疫反應(yīng)系統(tǒng)持續(xù)衰弱。在大部分情況中,由于沒有治療介入,所以HIV使宿主免疫系統(tǒng)變衰弱,從而開始發(fā)生機(jī)會(huì)性感染。如果不給予抗病毒藥或免疫調(diào)節(jié)劑或兩者,那么可以導(dǎo)致死亡。
肝炎是主要由病毒且通常較少由某些藥物或毒素(例如醇)導(dǎo)致的肝部炎癥。病毒感染通常通過接觸污染的血液獲得。那些最可能接觸病毒的是共用污染針頭的靜脈內(nèi)藥物使用者,不過,與患有一定形式肝炎的人發(fā)生性接觸也可以擴(kuò)散這種疾病。在某些情況中,接觸污染血液的保健工作者和需要反復(fù)輸血的人已感染了一定形式的肝炎。
已經(jīng)鑒定了三種主要類型的病毒性肝炎,即甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎,不過,至少四種其它病毒可以導(dǎo)致肝炎。甲型肝炎是具有高度傳染性形式的肝炎且是這種疾病的最常見形式。甲型肝炎通常通過污染的食物或水傳播。甲型肝炎的癥狀通常與腸型流感的癥狀類似且大部分患有甲型肝炎的人會(huì)完全康復(fù)。
急性乙型肝炎可能是最嚴(yán)重形式的病毒性肝部感染。其癥狀與甲型肝炎非常相同,但癥狀更為嚴(yán)重且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。甲型肝炎和乙型肝炎的初期癥狀包括食欲差、惡心、嘔吐和發(fā)熱。在肝炎后期,尿變深色且發(fā)生持續(xù)或復(fù)發(fā)性黃疸。約20%的肝炎病例最終發(fā)展成肝硬化(肝臟瘢痕形成)??梢酝ㄟ^評(píng)價(jià)肝功能的血液檢查診斷作為肝炎后果的肝硬化。由肝硬化侵害的肝臟最終也變脆弱。認(rèn)為主要病原體是非甲和非乙型肝炎的丙型肝炎與甲型肝炎和乙型肝炎共有常見的癥狀且患者發(fā)生可以最終導(dǎo)致肝硬化的慢性感染。
腫瘤疾病是由自主的無(wú)法控制的細(xì)胞分裂導(dǎo)致的常見死亡原因。這種分裂可以由下列因素引起1.由致癌劑導(dǎo)致的基因突變;2.病毒;3.激活某些細(xì)胞類型有絲分裂的外部信號(hào)。
用各種有絲分裂和細(xì)胞代謝抑制劑治療腫瘤疾病。然而,特異性已經(jīng)成為使用抗癌藥的主要問題。就抗癌藥而言,藥物需要區(qū)分癌性宿主細(xì)胞與非癌性宿主細(xì)胞。大批抗癌藥在這種水平上無(wú)差別。一般來說,抗癌藥具有負(fù)面的血液作用(例如終止有絲分裂和分解骨髓和淋巴樣組織中形成的成分)和免疫抑制作用(例如受抑的細(xì)胞計(jì)數(shù))以及對(duì)上皮組織(例如腸粘膜)、生殖組織(例如精子發(fā)生異常)和神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重影響。P.Calabresi和B.A.ChabnerGoodman和Gilman《治療劑的藥理學(xué)基礎(chǔ)》(The Pharmacological Basis of Therapeutics)(Pergamon Press,第8版)(pp.1209-1216)。成功使用化療劑作為抗癌藥還受到多藥物抗性現(xiàn)象的阻礙,所述的多藥物抗性為對(duì)廣泛結(jié)構(gòu)不相關(guān)的細(xì)胞毒性抗癌化合物產(chǎn)生耐受性。J.H.Gerlach等,《癌癥調(diào)查》(Cancer Surveys),525-46(1986)。在診斷時(shí)進(jìn)行性藥物抗性的主要原因可能是腫瘤內(nèi)的小群體藥物抗性細(xì)胞所致(例如突變體細(xì)胞)。J.H.Goldie和Andrew J.Coldman,《癌癥研究》(Cancer Research),443643-3653(1984)。用單一藥物治療這類腫瘤首先會(huì)產(chǎn)生緩解,其中腫瘤在尺寸上萎縮作為殺傷主要藥物敏感性細(xì)胞的結(jié)果。由于殺傷了藥物敏感性細(xì)胞,所以剩余的藥物抗性細(xì)胞持續(xù)繁殖且最終控制腫瘤細(xì)胞群。最后,對(duì)癌癥的治療受到甚至同一種類型癌癥中存在顯著的異質(zhì)性的阻礙。例如,某些癌癥具有侵入組織并表現(xiàn)出特征在于轉(zhuǎn)移的生長(zhǎng)侵害過程的能力。這些腫瘤對(duì)患者而言一般愈后極差,并且仍然沒有鑒定這類腫瘤并從非侵害性癌中區(qū)分這類腫瘤的手段,臨床醫(yī)師難以改變療法和/或使其最優(yōu)化。需要的是對(duì)各種腫瘤類型均可靠且特別適合于侵害性腫瘤的特異性抗癌手段。重要的是這種治療必須在最低宿主毒性下有效。因此,必須克服細(xì)胞減少活性藥物胞內(nèi)量的能力以改善細(xì)胞靶向和/或改善抗癌藥的藥動(dòng)學(xué)。
大環(huán)內(nèi)酯類、諸如大環(huán)內(nèi)酯類抗生素優(yōu)選累積在給予這類分子的受試者的不同細(xì)胞中,尤其是在吞噬細(xì)胞中,諸如單核外周血細(xì)胞、多形核細(xì)胞、腹膜和肺泡巨噬細(xì)胞;以及支氣管肺泡上皮周圍的液體中(Glaude R.P.等《抗菌劑與化療》(Antimicrob.AgentsChemother.),1989,33,277-282;Olsen K.M.等《抗菌劑與化療》(Antimicrob.Agents Chemother.)1996,40,2582-2585)。此外,描述了某些大環(huán)內(nèi)酯類相對(duì)弱的炎性作用。例如,近來描述了紅霉素衍生物(Labro M.T.《抗菌藥與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.),1998,41,37-46;WO 00/42055)和阿奇霉素衍生物(EP 0283055)的抗炎作用。還從實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型的體外和體內(nèi)研究中得知了某些大環(huán)內(nèi)酯類的抗炎作用,諸如zimosane-誘導(dǎo)的小鼠腹膜炎(Mikasa等《抗菌藥與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1992,30,339-348)和內(nèi)毒素-誘導(dǎo)的大鼠氣管中性白細(xì)胞累積(《免疫學(xué)雜志》(J.Immunol.)1997,159,3395-4005)。大環(huán)內(nèi)酯類對(duì)細(xì)胞因子、諸如白細(xì)胞介素8(IL-8)(《美國(guó)呼吸疾病保健藥物標(biāo)準(zhǔn)雜志》(Am.J.Respir.Crit.Care Med.)1997,156,266-271)或白細(xì)胞介素5(IL-5)(EP 0775489和EP 0771564)的調(diào)節(jié)作用也是已知的。另外,大環(huán)內(nèi)酯類有利的藥動(dòng)學(xué)分布可以升高化合物的組織、例如在肝中的濃度或增加白細(xì)胞/血漿比值(Girard A.E.等,《抗菌劑與化療》(Antimicrob.Agents Chemother.)31 1987 1948-54;WidlfeuerA.等,《抗菌劑與化療》(Antimicrob.Agents Chemother.)40 1996,75-79)。
為了獲得對(duì)需要選擇活性的疾病具有改善/新活性性能的化合物,使幾種不同活性物質(zhì)與不同類型的連接基連接。已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了紅霉素A衍生物和核酸堿基(尿嘧啶和胸腺嘧啶)或胸腺嘧啶-衍生的核苷的雜化物/軛合物/嵌合體(Costa A.M.等《四面體通訊》(TetrahedronLett.)41,2000,3371-3375)。然而,這類構(gòu)建體沒有表現(xiàn)出對(duì)所需靶物的活性/選擇性。此外,尚未報(bào)導(dǎo)連接基為肽型的大環(huán)內(nèi)酯構(gòu)建體。
引入我們的雜交分子作為連接基的肽連接基能夠使所述分子起前體藥物的作用,從而通過靶細(xì)胞內(nèi)特異性溶酶體裂解釋放V部分。對(duì)其它小分子(在我們的由抗炎、抗腫瘤和抗病毒化合物的雜化物表示的情況中)和大分子或聚合物描述了類似的連接基(Duncan R.等Robinson J.R.和Lee V.H.(eds.)《控釋藥物轉(zhuǎn)運(yùn)基礎(chǔ)和應(yīng)用》(Controlled Drug DeliveryFundamentals and Applications),第2版,1987 581-607,Subr V.等,《控釋研究雜志》(J.ControlledRel.)181992 123-132)。
發(fā)明詳述通式I表示的化合物與現(xiàn)有技術(shù)的化合物的區(qū)別在于,其結(jié)構(gòu)使得它們能夠累積在以影響需要治療的炎性免疫反應(yīng)或腫瘤或感染為靶的器官中和發(fā)生上述情況的細(xì)胞中。還可以升高抑制化合物在對(duì)照射敏感的腫瘤細(xì)胞內(nèi)的胞內(nèi)濃度。通式I化合物的治療作用由具有累積在免疫系統(tǒng)細(xì)胞、特別是吞噬細(xì)胞藥動(dòng)學(xué)特性的大環(huán)內(nèi)酯部分M產(chǎn)生。它使得式I化合物能夠主要通過″控制″補(bǔ)充至活性組分可以發(fā)揮其活性的炎癥或感染或惡性腫瘤部位的炎性極強(qiáng)的細(xì)胞內(nèi)的大環(huán)內(nèi)酯起作用,而并非僅在炎癥或腫瘤或感染部位起作用。按照這類方式,甾類或非甾類抗炎物質(zhì)或抗癌藥或抗病毒化合物不利的全身副作用會(huì)明顯減少乃至消除(應(yīng)注意甾類用作治療惡性腫瘤的輔助療法且本發(fā)明還關(guān)注具有抗腫瘤應(yīng)用的甾類)。在局部或全身施用后,本發(fā)明的雜交分子(如果可釋放,則和/或其組成部分)快速累積在炎癥部位或腫瘤中或感染細(xì)胞或其附近。
近來我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了在這類炎性疾病、失調(diào)和病癥中發(fā)揮改善的治療作用的通式I中的某些化合物 上述結(jié)構(gòu)中的符號(hào)M表示具有在炎性細(xì)胞中累積特性的大環(huán)內(nèi)酯亞單位,S表示抗炎甾類亞單位,并且L表示共價(jià)連接M和S的連接基。我們擁有的普通未審國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/HR02/00001(將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考)中描述了帶有通過鏈L與9-二氫-9-脫氧-9a-氮雜-9a-高紅霉素的N/9a位或與脫-克拉定糖基阿奇霉素衍生物的C/3位或與去氧糖胺基糖(desozaminesugar)的C/2′位連接的甾類亞單位S的化合物。然而,迄今為止尚未描述帶有與9-二氫-9-脫氧-9a-氮雜-9a-高紅霉素的N/9a位上肽連接基連接的甾類亞單位的雜交化合物,它們也具有上述治療作用。也沒有描述帶有與N/9a位上肽連接基連接的非甾類/抗腫瘤/抗病毒亞單位的雜交化合物。也沒有描述帶有與抗病毒或抗腫瘤亞單位連接的大環(huán)內(nèi)酯的雜交化合物。所有這類化合物均屬于本申請(qǐng)的主題。
本發(fā)明涉及(a)通式I表示的新″雜交″化合物 其中M表示具有在炎性細(xì)胞中累積特性的大環(huán)內(nèi)酯亞單位,V表示如下所定義的抗炎甾類或非甾類亞單位或抗腫瘤或抗病毒亞單位,且L表示連接M和V的連接基;(b)含有上述化合物中的一種或多種的組合物,所述化合物的用量可有效抗炎或抗惡性腫瘤或抗病毒,并且由此治療涉及包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物炎癥、惡性腫瘤或病毒感染的失調(diào)和病癥;和(c)使用這些化合物治療這類失調(diào)和病癥的方法。
本發(fā)明的化合物有利地提供了改善的治療作用和/或改善的副作用性能。
用于本發(fā)明雜化化合物的合適的大環(huán)內(nèi)酯亞單位可以選自但不限于多元內(nèi)酯環(huán)分子,其中″元″指的是環(huán)上的碳原子或雜原子,并且″多″是大于約10的原子數(shù)、優(yōu)選10-約50、更優(yōu)選12-、14-、15-、16-、17-和18-元內(nèi)酯環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類。特別優(yōu)選14-和15-元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯亞單位,最優(yōu)選阿奇霉素及其衍生物和紅霉素及其衍生物。
大環(huán)內(nèi)酯亞單位可以選自的分子的更具體的非限制性實(shí)例如下(i)大環(huán)內(nèi)酯抗菌素,包括氮雜內(nèi)酯類(azalides),例如紅霉素、地紅霉素、阿奇霉素、9-二氫-9-脫氧-9a-氮雜-9a-高紅霉素、HMR 3004、HMR 3647、HMR 3787、交沙霉素、紅霉胺(erythromycylamine)、ABT 773、氟紅霉素、克拉霉素、泰洛星、替米考星、竹桃霉素、脫碳霉糖泰樂菌素(desmycosin)、CP-163505、羅紅霉素、美奧卡霉素和洛他霉素及其衍生物,諸如酮內(nèi)酯類(例如3-酮);內(nèi)酰胺類(例如8a-或9a-內(nèi)酰胺類)和缺乏一個(gè)或多個(gè)糖部分的衍生物。
(ii)大環(huán)內(nèi)酯免疫抑制劑,諸如FK 506、環(huán)孢菌素、兩性霉素和雷帕霉素;(iii)具有宿主細(xì)胞抑制特性的大環(huán)內(nèi)酯抗真菌藥,諸如巴弗洛霉素、刀球骯霉素(concanamycin)、制霉菌素、那他霉素、克念菌素、非律平(filipin)、魯斯霉素(efruscomycin)、曲古霉素(trichomycin)。
用于合成上述并非商購(gòu)的大環(huán)內(nèi)酯類的方法和大環(huán)內(nèi)酯的合成操作一般是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的或可以在下列文獻(xiàn)中找到DenisA等《生物有機(jī)和藥物化學(xué)通訊)》(Bioorg.& Med.Chem.Lett)1999,9,3075-3080;Agouridas C.等《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)1998,41,4080-4100;和EP-00680967(1998);Sun Or Y.等《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)2000,43,1045-1049;US-05747467(1998);McFarland J.W.等《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)1997,40,1041-1045;Denis A.等《生物有機(jī)和藥物化學(xué)通訊》(Bioorg.& Med.Chem.Lett)1998,8,2427-2432;WO-09951616(1999);Lartey等《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)1995,38,1793-1798;EP 0984019;WO 98/56801,將這些文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。
其它合適的大環(huán)內(nèi)酯類是已知的,某些公開在下列文獻(xiàn)中Bryskier,A.J.等的《大環(huán)內(nèi)酯類、化學(xué)、藥理學(xué)和臨床應(yīng)用》(Macrolides,Chemistry,Pharmacology and Clinical Use);Arnette BlackwellParis,1993,pp 485-491,14(R)-羥基克拉霉素、紅霉素-11,12-碳酸酯、三-O-乙?;裉颐顾?、螺旋霉素、白霉素、麥迪霉素、rasaramycin,將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考;Ma,Z.等《最新藥物化學(xué)-抗感染藥》(Current MedicinalChemisty-Anti-Infective Agents),2002,1,15-34,也將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考;苦霉素、那波霉素、HMR-3562、CP-654743、CP-605006、TE-802、TE-935、TE-943、TE-806、6,11-橋連的酮內(nèi)酯類、CP-544372、FMA-199、A-179461;特別參見Bryskier等在487-491頁(yè)上描述的14-和16-元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類的結(jié)構(gòu)和衍生物;和Ma等描述的各種酮內(nèi)酯衍生物和合成,注意所有的結(jié)構(gòu)表和所有的反應(yīng)方案。與Ve軛合后的所有這些大環(huán)內(nèi)酯類屬于本發(fā)明的范圍。上述特別具體命名或參照的大環(huán)內(nèi)酯化合物是商購(gòu)的或其合成方法是已知的。
重要的是大環(huán)內(nèi)酯亞單位來源于具有累積在補(bǔ)充至炎癥部位的免疫系統(tǒng)細(xì)胞、尤其是吞噬細(xì)胞內(nèi)特性的大環(huán)內(nèi)酯。已知上述定義的大部分內(nèi)酯環(huán)化合物具有這種特性。例如,14-元大環(huán)內(nèi)酯類、諸如紅霉素及其衍生物、15-元大環(huán)內(nèi)酯類、諸如阿奇霉素及其衍生物以及8a-和9a-內(nèi)酰胺類及其衍生物、16-元大環(huán)內(nèi)酯類、諸如替米考星和脫碳霉糖泰樂菌素和螺旋霉素。
累積在特定類細(xì)胞中的大環(huán)內(nèi)酯類的其它實(shí)例可以在下列文獻(xiàn)中找到Pascual A.等《臨床微生物感染》(Clin.Microbiol.Infect.)2001,7,65-69.(“酮內(nèi)酯HMR 3647在人吞噬和非吞噬細(xì)胞中的吸收和胞內(nèi)活性”(Uptake and intracellular activity of ketolide HMR3647 in human phagocytic and non-phagocytic cells));Hand W.L.等《國(guó)際抗菌藥雜志》(Int.J.Antimicrob.Agents),2001,18,419-425.(“阿奇霉素在人多形核白細(xì)胞中累積和流出的特性和機(jī)制”(Characteristics and mechanisms of azithromycin accumulationand efflux in human polymorphonuclear leukocytes));Amsden G.W.《國(guó)際抗菌藥雜志》(Int.J.Antimicrob.Agents),2001,18,11-15.(“新一代大環(huán)內(nèi)酯類定向于組織的抗菌素”(Advanced-generation macrolidestissue-directedantibiotics));Johnson J.D.等《實(shí)驗(yàn)室臨床藥物雜志》(J.Lab.Clin.Med.)1980,95,429-439.(“肺泡巨噬細(xì)胞的抗菌素吸收”(Antibiotic uptake by alveolar macrophages));Wildfeuer A.等《抗菌藥與化療》(Antimicrob.Agents Chemother.)1996,40,75-79.(“體內(nèi)條件下各種細(xì)胞對(duì)阿奇霉素的吸收及其胞內(nèi)活性”(Uptake ofazithromycin by various cells和its intracellular activityunder in vivo conditions));Scorneaux B.等《家禽科學(xué)》(Poult.Sci.)1998,77,1510-1521.(“替米考星在雞吞噬細(xì)胞中的胞內(nèi)累積、亞細(xì)胞分布和流出”(Intracellular accumulation,subcellulardistribution,and efflux of in chicken phagocytes));MtairagE.M.等《抗菌劑與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1994,33,523-536。(“人中性白細(xì)胞體外地紅霉素和紅霉胺吸收的研究”(Investigation of dirithromycin and erythromycylamineuptake by human neutrophils in vitro));Anderson R.等《抗菌劑與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1988,22,923-933.(“新大環(huán)內(nèi)酯抗菌藥克拉霉素(A-56268,TE-031)的細(xì)胞吸收和吞噬細(xì)胞內(nèi)生物活性的體外評(píng)價(jià)”(An in-vitro evaluation of thecellular uptake and intraphagocytic bioactivity ofclarithromycin (A-56268,TE-031),a new macrolideantimicrobial agent));Tasaka Y.等《日本抗生素雜志》(Jpn.J.Antibiot.)1988,41,836-840.(“肺泡巨噬細(xì)胞的洛他霉素吸收”(Rokitamycin uptake by alveolar macrophages));Harf R.等《抗菌劑與化療雜志》(J.Antimicrob.Chemother.)1988,22,135-140.(“肺泡巨噬細(xì)胞的螺旋霉素吸收”(Spiramycin uptake byalveolar macrophages)),將這些文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。2002年7月8日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/94,671和60/394,670中描述了可以也用于本發(fā)明上下文中的各種大環(huán)內(nèi)酯連接復(fù)合物,將這些文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。
此外,補(bǔ)充至炎癥部位的免疫系統(tǒng)細(xì)胞、尤其是吞噬細(xì)胞內(nèi)累積活性的存在易于由本發(fā)明領(lǐng)域的普通技術(shù)人員使用用于該目的的眾所周知的試驗(yàn)之一測(cè)定。例如,可以使用Olsen,K.M.等在《抗菌劑與化療》(Anitmicrob.Agents & Chemother.)1996,40,2582-2585中所述的具體步驟。簡(jiǎn)單的說,可以通過Ficoll-Hypaque離心從健康志愿者的靜脈血中獲得受測(cè)試的細(xì)胞、例如多形核白細(xì)胞,隨后進(jìn)行2%葡聚糖沉降。通過滲透裂解除去紅細(xì)胞并通過錐蟲藍(lán)排除法評(píng)價(jià)PMN。另一方面,可以分離其它細(xì)胞級(jí)分并按照類似方式測(cè)試。將氚代的大環(huán)內(nèi)酯化合物(例如10μM)與2.5×106個(gè)細(xì)胞一起保溫120分鐘(37℃,5%CO2,90%相對(duì)濕度)且隨后通過離心、例如通過硅油-石蠟層(86vol%14vol%)從含有化合物的上清液中除去細(xì)胞。例如,通過閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定化合物的量,并且顯著高于背景的得分表明大環(huán)內(nèi)酯累積在測(cè)試細(xì)胞中。參見Bryskier等《大環(huán)內(nèi)酯、化學(xué)、藥理學(xué)和臨床應(yīng)用》(Mcrolides,Chemistry,Pharmacology and Clinical Use);Arnette BlackwellParis,1993 pp 375-386,381頁(yè),第2欄,第3行。另一方面,不對(duì)該化合物進(jìn)行放射性標(biāo)記,而可以通過HPLC測(cè)定化合物的量。
可以使用的其它試驗(yàn)方法公開在Bryskier,A.J.等的《大環(huán)內(nèi)酯、化學(xué)、藥理學(xué)和臨床應(yīng)用》(Mcrolides,Chemistry,Pharmacologyand Clinical Use);Arnette BlackwellParis,1993pp 375-386中,將該文獻(xiàn)引入作為參考。特別參見380-381頁(yè)上的吞噬細(xì)胞吸收測(cè)定和381、383和385頁(yè)以及382和383頁(yè)上的表對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類吸收和定位的具體描述。
本發(fā)明在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中涉及通式I表示的化合物、其鹽和溶劑化物,其中M特別表示14-或15-元內(nèi)酯環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯亞單位,最優(yōu)選通式II表示的化合物 其中(i)Z和W獨(dú)立為 或鍵,其中Rt和Rs獨(dú)立為氫或烷基(優(yōu)選甲基或H);RM為OH、ORP、烷氧基或取代的烷氧基(Syn或Anti構(gòu)型或其混合物形式);RN為H、RP、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷氧基烷基或-C(=X)-NRtRs;
X為O或S;條件是Z和W不能同時(shí)為 或鍵;(ii)U和Y獨(dú)立為H、鹵素、烷基或羥基烷基(優(yōu)選H、甲基或羥甲基);(iii)R1為羥基、ORP、-O-S2或=O;(iv)S1為如下通式糖苷配基環(huán)C/5位上的糖部分(例如去氧糖胺(desozamine)基團(tuán)) 其中R8和R9均為氫或一起形成鍵或R9為氫且R8為-N(CH3)Ry,其中Ry為RP、RZ或-C(O)RZ,其中RZ為氫或環(huán)烷基(優(yōu)選環(huán)己基)或烷基(優(yōu)選C1-C7烷基)或鏈烯基(優(yōu)選C2-C7-鏈烯基)或炔基(優(yōu)選C2-C7-炔基)芳基或雜芳基或被C1-C7-烷基或C2-C7-鏈烯基或C2-C7-炔基、芳基或雜芳基取代的烷基(Ry優(yōu)選為氫、甲基或乙基);R10為氫或RP;(v)S2為如下通式的糖苷配基環(huán)C/3位上的糖部分(例如為克拉定糖基) 其中
R3’為氫或甲基;且R11和R12獨(dú)立為氫,R11可以為RP或R11和R12共同形成鍵;(vi)R2為H、羥基、ORP、烷氧基(優(yōu)選C1-C4烷氧基,最優(yōu)選甲氧基)、取代的烷氧基;(vii)A為H或甲基;(viii)B為甲基或環(huán)氧;(ix)E為H或鹵素(優(yōu)選氟);(x)R3為羥基、ORP或烷氧基(優(yōu)選C1-C4烷氧基,最優(yōu)選甲氧基)、取代的烷氧基,或R3為可以與R5合并成″橋″(例如環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯)的基團(tuán);或如果W或Z為 那么R3為可以與W或Z合并成″橋″(例如環(huán)氨基甲酸酯)的基團(tuán);(xi)R4為C1-C4烷基(優(yōu)選甲基);(xii)R5為氫、羥基、ORP、C1-C4-烷氧基、取代的烷氧基或可以與R3合并成橋(例如環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯)的基團(tuán);(xiii)R6為H或C1-C4烷基(優(yōu)選甲基或乙基);其中亞單位M含有連接位置,它通過該位置經(jīng)連接基L與亞單位D連接;所述的連接位置位于下列基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)上a位于S1、S2或糖苷配基氧上的任意活性羥基、N或環(huán)氧基,條件是S2(或條件是S2和S1)被裂解;b位于Z或W上的活性>N-RN、-NRtRs或=O基團(tuán);c位于R1、R2、R3和R5中任意一個(gè)上的活性羥基;d可以首先被衍生成羥基或-NRtRs基團(tuán),然后與L的全部或部分連接的任意其它基團(tuán)(例如,OH→=O→環(huán)氧→ 一個(gè)或多個(gè)RP基團(tuán)可以獨(dú)立地存在于通式II的大環(huán)內(nèi)酯亞單位上,其中RP表示保護(hù)基,其可以選自烷基(優(yōu)選甲基)、烷酰基(優(yōu)選乙?;?、烷氧羰基(優(yōu)選甲氧羰基或叔丁氧羰基)、芳基甲氧羰基(優(yōu)選芐氧羰基)、芳?;?優(yōu)選苯甲?;?、芳烷基(優(yōu)選芐基)、烷基甲硅烷基(優(yōu)選三甲基甲硅烷基)或烷基甲硅烷基烷氧基烷基(優(yōu)選三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)??梢酝ㄟ^常規(guī)技術(shù)除去氨基保護(hù)基。因此,可以通過溶劑解、例如通過在酸性或堿性條件下水解除去例如?;缤轷;?、烷氧羰基或芳?;?。可以在有催化劑、諸如鈀/活性炭存在的情況下通過氫解裂解芳基甲氧羰基(芐氧羰基)。
可以將L選為通式IV表示的連接基X1-(CH2)m-Q-(CH2)n-X2IV其中X1選自-CH2-、-OC(=O)-、-C(=O)-、=NO-、-OC(=O)NH-或-C(=O)NH-;X2選自-NH-、-CH2-、-NHC(=O)-、-OC(=O)-、-C(=O)-或-O;Q為-NH-或-CH2-或不存在;其中-CH2-或-NH-基團(tuán)各自可以任選被C1-C7-烷基、C2-C7-鏈烯基、C2-C7-炔基、C(O)RX、C(O)ORX、C(O)NHRX取代,其中RX可以為C1-C7-烷基、芳基或雜芳基;符號(hào)m和n獨(dú)立為0-4的整數(shù),條件是如果Q=NH,那么n不能為0。
L表示具有約2-約50個(gè)彼此連接的氨基酸的多肽連接基,優(yōu)選三肽或四肽,諸如Gly-Phe-Leu、Gly-Gly-Phe、Gly-Phe-Phe、Gly-Phe-Gly、Gly-Leu-Gly、Gly-Val-Ala、Gly-Phe-Ala、Gly-Leu-Phe、Gly-Leu-Ala、Ala-Val-Ala、Gly-Gly-Phe-Leu、Gly-Phe-Leu-Gly、Gly-Phe-Ala-Leu、Ala-Leu-Ala-Leu、Gly-Phe-Phe-Leu、Gly-Leu-Leu-Gly、Gly-Phe-Tyr-Ala、Gly-Phe-Gly-Phe、Ala-Gly-Val-Phe、Gly-Phe-Phe-Gly,并不限于此。
優(yōu)選的L由通式Gly-(W)p-Gly表示,其中p為0-3的整數(shù)且W為任意的氨基酸或任意氨基酸的組合。
在V為甾類或非甾類抗炎亞單位的情況中,L僅為肽連接基。
V可以表示抗炎甾類或非甾類化合物亞單位或抗腫瘤或抗病毒化合物亞單位。
當(dāng)V為甾類亞單位時(shí),優(yōu)選通式X (ii)其中Ra和Rb彼此獨(dú)立為氫或鹵素;Rc為羥基、烷氧基(優(yōu)選甲氧基)、烷基、硫代氨基甲?;?、氨基甲?;騼r(jià)鍵;Rd和Re彼此獨(dú)立為氫、OH、CH3或C1-C4烷氧基(優(yōu)選甲氧基或正丙氧基)或各自為與其它基團(tuán)(任選烷基或鏈烯基單取代或二取代的)(優(yōu)選2,2-二甲基或2-一丙基或反式-丙烯基環(huán))形成1,3-二氧戊環(huán)的基團(tuán)或價(jià)鍵;Rf為氫、羥基、氯或與它所連接的碳原子一起形成酮基的=O;Rj為氫或氯及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物。
另一方面,本發(fā)明為WO 94/14834中公開的甾類亞單位,其中它們帶有基團(tuán)>CH-S(O)n-Rc而不是基團(tuán)>CH-C(O)-Rc,其中n為0-2的整數(shù)。參見WO 94/14834,將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考,尤其是pp2-3。
更一般而言,用作甾類亞單位源的甾類包括、但不限于皮質(zhì)類固醇(諸如糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素)和雄激素。皮質(zhì)類固醇的非限制性實(shí)例包括皮質(zhì)醇、可的松、氯倍他索、氫化可的松、氟氫可的松、氟氫縮松、氟米松、氟尼縮松、氟輕松、醋酸氟輕松、氟可龍、氟米龍、潑尼松、潑尼松龍、6-α-甲潑尼龍、曲安西龍、阿氯米松、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、地塞米松、安西奈德、可的伐唑、地奈德、去羥米松、二氟可龍、二氟潑尼酯、fluclorolone和二氯松、fluperinidene、氟替卡松、哈西奈德、甲潑尼松、甲潑尼龍、帕拉米松、潑那唑啉、潑尼立定、替可的松、曲安西龍及它們的酸性衍生物,例如醋酸、丙酸、二丙酸、戊酸、磷酸、異煙酸、間磺基苯甲酸、tebutate和半琥珀酸衍生物)。
V可以為非甾類抗炎亞單位,即非甾類抗炎藥(NSAID)的部分,包括那些抑制環(huán)加氧酶的部分,所述的酶可以導(dǎo)致前列腺素和某些自體激素抑制劑的生物合成,包括各種環(huán)加氧酶的各種同工酶(包括、但不限于環(huán)加氧酶-1和-2)抑制劑;且作為環(huán)加氧酶和脂氧化酶抑制劑涉及非甾類抗炎藥(NSAID),諸如商購(gòu)的NSAID醋氯芬酸、阿西美辛、對(duì)乙酰氨基酚、醋氨沙洛、乙酰水楊酸、乙?;?水楊-2-氨基-4-甲基吡啶-酸、5-氨基乙酰水楊酸、阿氯芬酸、氨洛芬、氨芬酸、氨基安替比林、安吡昔康、阿尼利定、芐達(dá)酸、苯噁洛芬、柏莫洛芬、α-沒藥醇(α-bisabolol)、溴芬酸、5-溴水楊酸乙酸酯、溴水楊苷、布氯酸、丁布芬、卡洛芬、塞來考昔(celexocib)、chromoglycate、桂美辛、clindanac、氯吡酸、雙氯芬酸鈉、二氟尼柳、地他唑、屈噁昔康、恩芬那酸、依托度酸、依托芬那酯、聯(lián)苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬度柳、非諾洛芬、芬替酸、非普地醇、flufenac、氟芬那酸、氟尼辛、氟諾洛芬、氟比洛芬、glutametacin、水楊酸乙二醇酯、異丁芬酸、布洛芬、異丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、三苯唑酸、伊索克酸、伊索昔康、酮洛芬、酮咯酸、氯諾昔康、洛索洛芬、甲氧芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、5-氨基水楊酸、甲嗪酸、莫苯唑酸、孟魯司特、萘丁美酮、萘普生、尼氟酸、尼美舒利、奧沙拉秦、奧沙西羅、噁丙嗪、羥布宗、對(duì)乙酰氨基酚、帕沙米特、哌立索唑、苯乙酰水楊酸酯(苯乙酰水楊酸酯(phenyl-acethyl-salicylate))、保泰松、水楊酸苯酯、吡拉唑酸、吡羅西康、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、reserveratol、醋水楊胺、水楊酰胺、水楊酰胺-O-乙酸(salicylamide-O-acetyl acid)、水楊酰硫酸酯(salicysulphuricacid)、水楊苷、水楊酰胺、雙水楊酯、舒林酸、舒洛芬、suxibutazone、他莫昔芬、替諾昔康、噻洛芬酸、噻拉米特、ticlopridine、替諾立定、托芬那酸、托美丁、tropesin、聯(lián)苯丁酸、希莫洛芬、扎托洛芬、佐美酸、托莫普羅、扎魯司特和環(huán)孢菌素。其它NSAID類和特定的NSAID化合物公開在美國(guó)專利US 6,297,260中,將該文獻(xiàn)全部引入作為參考(尤其是在其權(quán)利要求1的一般通式和其中包含的對(duì)NSAID的具體目錄中);且thiazulidene NSAID公開在國(guó)際專利申請(qǐng)WO 01/87890中,將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考)。
優(yōu)選的NSAID為乙酰水楊酸、吲哚美辛、萘普生、布洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、舒洛芬、氟尼辛、雙氯芬酸鈉和托美丁。
V可以表示抗病毒化合物,包括阿昔洛韋、泛昔洛韋、更昔洛韋、西多福韋、拉米夫定、利托那韋、茚地那韋、奈韋拉平、齊多夫定、去羥肌苷、司他夫定、阿巴卡韋、扎西他濱、氨普奈韋、利巴韋林和金剛烷,但不限于此。優(yōu)選的抗病毒化合物為齊多夫定、去羥肌苷和司他夫定。V抗炎表示抗腫瘤藥,包括bicaluatnide、喜樹堿、雌莫司汀磷酸酯、氟他胺、氮芥、塞替派、異環(huán)磷酰胺、羥基脲、博來霉素、紫杉醇、洛莫司汀、伊立替康、甲氨蝶呤、長(zhǎng)春瑞濱、阿那曲唑(anastrazole)、氟尿苷、美法侖、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、絲裂霉素、諾龍、戈舍瑞林、亮丙立德、曲普瑞林、氨魯米特、米托坦、順鉑、苯丁酸氮芥、噴司他丁、克拉屈濱、白消安、依托泊苷、米托蒽醌、伊達(dá)比星、環(huán)磷酰胺、巰嘌呤、硫鳥嘌呤、阿糖胞苷(cytarbine)、環(huán)磷酰胺、多柔比星、柔紅霉素、替尼泊苷和他莫昔芬,但不限于此。優(yōu)選的抗腫瘤藥為甲氨蝶呤、紫杉醇、喜樹堿、多柔比星、泰索帝和托泊替康。
本文中包含的通式中的黑體鍵表示位于紙面水平上;繪制的虛線鍵(dash-drawn bonds)表示位于紙面水平下,而虛線(broken line)表示可以位于紙面水平下或其上的鍵。平行實(shí)線和虛線表示單鍵或雙鍵。除非本文另有說明,下列術(shù)語(yǔ)具有下文對(duì)其所解釋的含義″烷基″指的是1-10個(gè)碳原子、更優(yōu)選1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和一價(jià)烴基。優(yōu)選的直鏈或支鏈烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基和叔丁基。最優(yōu)選甲基。烷基可以被至多5個(gè)取代基取代,包括鹵素(優(yōu)選氟或氯)、羥基、烷氧基(優(yōu)選甲氧基或乙氧基)、酰基、酰氨基、氰基、氨基、N-(C1-C4)烷氨基(優(yōu)選N-甲氨基或N-乙氨基)、N,N-二(C1-C4-烷基)氨基(優(yōu)選二甲氨基或二乙氨基)、芳基(優(yōu)選苯基)或雜芳基、硫代羰基氨基、酰氧基、氨基、脒基、烷基脒基、硫代脒基、氨基酰基、氨基羰基氨基、氨基硫代羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、雜芳基、芳氧基、芳氧基芳基、硝基、羧基、羧基烷基、羧基取代的烷基、羧基-環(huán)烷基、羧基取代的環(huán)烷基、羧基芳基、羧基取代的芳基、羧基雜芳基、羧基取代的雜芳基、羧基雜環(huán)基、羧基取代的雜環(huán)基、環(huán)烷基、環(huán)烷氧基、雜芳氧基、雜環(huán)基氧基和氧基羰基氨基。這類取代的烷基屬于本發(fā)明″烷基″的定義范圍。本發(fā)明烷基的定義可以擴(kuò)展至其它帶有烷基部分的基團(tuán),諸如烷氧基。
″鏈烯基″指的是2-10且優(yōu)選2-6個(gè)碳原子的含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈一價(jià)烴基。鏈烯基可以被與烷基相同的基團(tuán)取代且這類任選取代的鏈烯基包括在術(shù)語(yǔ)″鏈烯基″中。優(yōu)選乙烯基、丙烯基、丁烯基和環(huán)己烯基。
″炔基″指的是帶有2-10且優(yōu)選2-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈且含有至少一個(gè)且優(yōu)選不超過三個(gè)碳-碳三鍵的直鏈或支鏈一價(jià)烴基。炔基可以被與烷基相同的基團(tuán)取代且這些取代的基團(tuán)屬于該炔基的定義中。優(yōu)選乙炔基、丙炔基和丁炔基。
″環(huán)烷基″指的是帶有3-8個(gè)碳原子的含有任選與芳基或雜芳基稠合的單環(huán)的環(huán)狀基團(tuán)。環(huán)烷基可以被如下對(duì)″芳基″所述的取代基取代且取代的環(huán)烷基屬于該″環(huán)烷基″的定義范圍。優(yōu)選的環(huán)烷基為環(huán)戊基和環(huán)己基。
″芳基″指的是帶有6-14個(gè)碳原子的含有單環(huán)、諸如苯基或多稠合環(huán)、諸如萘基的不飽和芳族碳環(huán)基。芳基可以任選進(jìn)一步與脂族基團(tuán)或芳基稠合或可以被一個(gè)或多個(gè)取代基取代,諸如鹵素(氟、氯和/或溴)、羥基、C1-C7烷基、C1-C7烷氧基或芳氧基、C1-C7烷硫基或芳硫基、烷基磺?;⑶杌虿被蚍遣被?。
″雜芳基″指的是含有2-10個(gè)碳原子和1-4個(gè)雜原子、諸如O、S或N的單環(huán)或二環(huán)芳烴環(huán)。雜芳環(huán)可以任選與另一個(gè)雜芳基、芳基或脂族環(huán)狀基團(tuán)稠合。該類的實(shí)例為呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吲哚、呲啶、噁唑、噻唑、吡咯、呲唑、四唑、嘧啶、呲嗪和三嗪,優(yōu)選呋喃、吡咯、吡啶和吲哚。該術(shù)語(yǔ)包括被如對(duì)上述芳基所述相同的取代基取代的基團(tuán)。
″雜環(huán)基″指的是含有單環(huán)或多環(huán)以及1-10個(gè)碳原子和1-4個(gè)選自氮、硫或氧的雜原子的飽和或不飽和基團(tuán),其中在稠合環(huán)系中,另一個(gè)環(huán)或其它環(huán)可以為芳基或雜芳基。雜環(huán)基可以被如對(duì)烷基所述的取代基取代且由此取代的雜環(huán)基屬于本定義的范圍。
″氨基酸″指的是含有氨基和羧酸基團(tuán)的任意化合物。氨基基團(tuán)可以出現(xiàn)在與羧基官能基相鄰的位置上、諸如α-氨基酸上或該分子內(nèi)的任意位置上。氨基酸還可以含有其它官能基,諸如氨基、硫、羧基、甲酰胺、咪唑等。氨基酸可以為合成或天然存在的或修飾的天然存在的氨基酸,諸如正纈氨酸或正亮氨酸。
符號(hào)K在上下文需要時(shí)有時(shí)指與M或V連接的L基團(tuán)的部分。
在制備結(jié)構(gòu)I表示的具有特定藥理活性的化合物中,制備某些新化合物作為制備具有藥理活性的化合物的中間體。本發(fā)明還涉及這類中間體。
本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上合適的鹽包括與無(wú)機(jī)酸(例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸或硫酸)或有機(jī)酸(例如酒石酸、乙酸、甲磺酸、三氟乙酸、檸檬酸、馬來酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、琥珀酸、甲磺酸、草酸和對(duì)甲苯磺酸)形成的鹽。
本發(fā)明還包括通式I化合物的前體藥物,即在對(duì)哺乳動(dòng)物受試者給藥時(shí)在體內(nèi)釋放通式(I)的活性母體藥物的化合物。通過修飾存在于通式I化合物上的官能基制備通式I化合物的前體藥物,按照這類方式使所述的修飾物可以在體內(nèi)被裂解以釋放母體化合物。前體藥物包括通式I的化合物,其中通式I化合物的羥基、氨基或羧基與任意可以在體內(nèi)被裂解而分別重新生成羥基、氨基或羧基的基團(tuán)結(jié)合。前體藥物的實(shí)例包括但不限于通式I化合物的酯類(例如乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)或在接觸生理pH時(shí)或通過酶作用被轉(zhuǎn)化成活性母體藥物的任意其它衍生物。在本段落的內(nèi)容中,″前體藥物″不指釋放V部分的本發(fā)明的雜化物(如本說明書其它地方所述的),而指V部分的衍生物(其可以釋放大環(huán)內(nèi)酯或保持與大環(huán)內(nèi)酯連接)。連接或釋放狀態(tài)的V部分衍生物隨后可以轉(zhuǎn)化成游離形式或與大環(huán)內(nèi)酯連接的活性母體藥物。
本發(fā)明還包括通式I化合物或其鹽的溶劑化物(優(yōu)選水合物)。
通式I的化合物帶有一個(gè)或多個(gè)手性中心且隨各取代基性質(zhì)的不同,它們還可以具有幾何異構(gòu)體。在原子空間排列上不同的異構(gòu)體稱作″立體異構(gòu)體″。彼此不為鏡像的立體異構(gòu)體稱作″非對(duì)映體″且那些彼此為不能重疊的鏡像的稱作″對(duì)映體″。當(dāng)化合物帶有一個(gè)手性中心時(shí),出現(xiàn)一對(duì)對(duì)映體是可能的。對(duì)映體的特征可以在于其不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型且由Cahn和Prelog的R--和S--順序法則描述或通過分子繞偏振光面旋轉(zhuǎn)的方式描述并命名為右旋或左旋(即分別稱作(+)或(-)-異構(gòu)體)。手性化合物可以作為單個(gè)對(duì)映體或作為對(duì)映體混合物存在。含有等比例的對(duì)映體的混合物稱作″外消旋混合物″。本發(fā)明包括通式I化合物的所有各異構(gòu)體。在本說明書和權(quán)利要求中對(duì)特定化合物的描述或命名用以包括各對(duì)映體及其混合物,否則就是其外消旋物。用于測(cè)定立體異構(gòu)體的立體化學(xué)及其拆分的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。
本發(fā)明還包括遇到的syn-anti型立體異構(gòu)體及其混合物,此時(shí)存在肟或類似基團(tuán)。將與肟的末端雙鍵原子連接的最高Cahn IngoldPrelog優(yōu)先順序法則的基團(tuán)與肟的羥基比較。將該立體異構(gòu)體命名為Z(zusammen=共同)或Syn,條件是肟羥基位于通過C=N雙鍵的參考面的同側(cè)上作為最優(yōu)先基團(tuán);將另一種立體異構(gòu)體命名為E(entgegen=相反)或Anti。
″藥學(xué)上可接受的賦形劑″指的是用于制備一般安全、無(wú)毒性且既無(wú)生物上又無(wú)其它不需要的作用的藥物組合物的賦形劑且包括對(duì)獸藥應(yīng)用和人藥應(yīng)用而言可接受的賦形劑。本申請(qǐng)中所用的″藥學(xué)上可接受的賦形劑″包括一種和一種以上這類賦形劑。
″治療(Treating)″或″治療(treatment)″狀態(tài)、失調(diào)或病癥包括(1)預(yù)防或延緩在哺乳動(dòng)物中發(fā)生的狀態(tài)、失調(diào)或病癥的臨床癥狀的表現(xiàn),所述的哺乳動(dòng)物可以患有或傾向于所述的狀態(tài)、失調(diào)或病癥,但尚未發(fā)生或出現(xiàn)所述狀態(tài)、失調(diào)或病癥的臨床或亞臨床癥狀;(2)抑制狀態(tài)、失調(diào)或病癥,即阻止或減緩疾病或其至少一種臨床或亞臨床癥狀的發(fā)生;或(3)減輕疾病,即使?fàn)顟B(tài)、失調(diào)或病癥或其至少一種臨床或亞臨床癥狀退化。
對(duì)治療的受試者的有益性或具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義或至少對(duì)患者或臨床醫(yī)師而言是可感受到的。
″治療有效量″指的是當(dāng)對(duì)哺乳動(dòng)物給藥治療狀態(tài)、失調(diào)或病癥時(shí)足以進(jìn)行這類治療(該措詞如上述所定義)的用量?!逯委熡行Я俊咫S化合物、疾病及其嚴(yán)重程度和所治療哺乳動(dòng)物的身體情況和反應(yīng)性的不同而改變。
急性炎癥的四種傳統(tǒng)癥狀為患病區(qū)域發(fā)紅、升溫、腫脹和疼痛且患病器官功能喪失。
與具體病癥相關(guān)的炎癥癥狀和征候包括·類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎-涉及的關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、溫?zé)岷陀|痛;全身性強(qiáng)直和晨僵;·胰島素依賴性糖尿病-胰島炎;該病可以導(dǎo)致各種與炎性成分相關(guān)的并發(fā)癥,包括視網(wǎng)膜病、神經(jīng)病、腎病;冠狀動(dòng)脈疾病、外周血管疾病和腦血管疾病;·自身免疫性甲狀腺炎-虛弱、便秘、氣短、面部、手和足浮腫(puffiness)、外周性水腫、心律過緩;·多發(fā)性硬化-痙攣狀態(tài)、視力模糊、眩暈、肢體虛弱、感覺異常;·眼色素層視網(wǎng)膜炎-夜視力下降、周邊視力降低;·紅斑狼瘡-關(guān)節(jié)痛、疹、光敏感性、發(fā)熱、肌痛、手和足浮腫、尿液分析異常(血尿、管型尿(cylinduria)、蛋白尿)、腎小球腎炎、認(rèn)知功能障礙、血管血栓形成、心包炎;·硬皮病-雷諾氏?。皇?、臂、腿和面部腫脹;皮膚增厚;手指和膝疼痛、腫脹強(qiáng)直、胃腸功能障礙、限制性肺?。恍陌?;腎衰竭;·具有炎性成分的其它關(guān)節(jié)炎性疾病,諸如類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎和多關(guān)節(jié)炎-發(fā)熱、疼痛、腫脹、觸痛;·其它炎性腦病,諸如腦膜炎、阿爾茨海默病、AIDS癡呆性腦炎-畏光、認(rèn)知功能障礙、記憶損失;·其它炎性的眼部炎癥,諸如視網(wǎng)膜炎-視力下降;·炎性皮膚病,諸如濕疹、其它皮炎(例如特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎)、牛皮癬、UV照射誘發(fā)的灼傷(日光射線和類似的UV源)-紅斑、疼痛、脫屑、腫脹、觸痛;·炎癥性腸病,諸如克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎-疼痛、腹瀉、便秘、直腸出血、發(fā)熱、關(guān)節(jié)炎;·哮喘-氣短、喘鳴;·其它過敏性疾病,諸如過敏性鼻炎-噴嚏、癢、鼻漏;·與急性哮喘相關(guān)的疾病,諸如中風(fēng)后的損傷-感覺缺失、運(yùn)動(dòng)喪失、認(rèn)知喪失;·因心肌缺血導(dǎo)致的心臟組織損傷-疼痛、氣短;·肺損傷,諸如發(fā)生成人呼吸窘迫綜合征的肺損傷-氣短、換氣過度、氧合作用下降、肺浸潤(rùn);·伴有感染的炎癥,諸如膿毒癥、膿毒性休克、中毒性休克綜合征-發(fā)熱、呼吸衰竭、心動(dòng)過速、低血壓、白細(xì)胞增多;
·其它與特定器官或組織相關(guān)的炎性疾病,諸如腎炎(例如腎小球腎炎)-少尿、尿液分析異常;附件炎-發(fā)熱、疼痛、觸痛、白細(xì)胞增多;痛風(fēng)-涉及的關(guān)節(jié)疼痛、觸痛、腫脹和紅斑、血清和/或尿的尿酸升高;膽囊炎-腹痛和觸痛、發(fā)熱、惡心、白細(xì)胞增多;慢性阻塞性肺病-氣短、喘鳴;充血性心力衰竭-氣短、啰音、外周性水腫;II型糖尿病-晚期器官并發(fā)癥,包括心血管、眼、腎和周圍血管疾??;肺纖維化-換氣過度、氣短、氧合作用下降;血管疾病,諸如動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄-疼痛、感覺喪失、脈搏下降、功能喪失;和導(dǎo)致移植物排斥的同種異體免疫-疼痛、觸痛、發(fā)熱。
亞臨床癥狀包括、但不限于用于炎癥的診斷標(biāo)記,其表現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn)。一類亞臨床癥狀為免疫學(xué)癥狀,諸如促炎淋巴樣細(xì)胞在器官或組織中的侵入或累積或識(shí)別對(duì)器官或組織特異性的病原體或抗原的活化促炎淋巴樣細(xì)胞局部或周圍的存在??梢酝ㄟ^本領(lǐng)域中公知的技術(shù)測(cè)定淋巴樣細(xì)胞的活化。
″轉(zhuǎn)運(yùn)″至宿主內(nèi)特定部位的活性組分的治療有效量指的是在特定部位產(chǎn)生治療上有效的活性組分的血藥濃度。例如,可以通過對(duì)宿主局部或全身給予活性組分達(dá)到上述目的。具體的病毒性疾病包括病毒性肝炎(甲型、乙型、丙型、戊型)、流感、病毒性肺炎、病毒性支氣管炎、皰疹感染(單純皰疹病毒、EB病毒(傳染性單核細(xì)胞增多癥)、帶狀皰疹)、脊髓灰質(zhì)炎、AIDS(HIV感染)、成人T-細(xì)胞白血病(ATL)、乳頭狀瘤、麻疹、風(fēng)疹、幼兒急疹、傳染性紅斑、病毒性腦炎、病毒性脊髓炎、巨細(xì)胞病毒感染、流行性腮腺炎、水痘、狂犬病、病毒性腸炎、病毒性心肌炎、病毒性心包炎等。
與具體病癥相關(guān)的病毒感染的癥狀和征候包括病毒負(fù)荷、病毒復(fù)制、病毒活性、病毒血癥、病毒特異性抗原、病毒RNA或DNA、逆錄酶活性、宿主中的抗病毒CTL活性、T-細(xì)胞或CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)(對(duì)HIV而言)。癌癥包括、但不限于下列癌非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病、成纖維細(xì)胞、腎癌、黑素瘤、前列腺癌、CNS癌、骨/肌肉、淋巴瘤和血癌。
與具體病癥相關(guān)的瘤形成癥狀和征候包括腫瘤負(fù)荷、腫瘤大小、受侵害的器官重量、腫瘤復(fù)發(fā)、受試者存活時(shí)間、緩解時(shí)間和程度、癌細(xì)胞生長(zhǎng)、癌細(xì)胞存活、編程性細(xì)胞死亡指數(shù)、轉(zhuǎn)移程度和比例、與特定類型瘤形成相關(guān)的生物標(biāo)記、增殖標(biāo)記、相關(guān)癌基因的活化、與腫瘤相關(guān)的受體功能的調(diào)節(jié)異常、腫瘤特異性抗原和與腫瘤相關(guān)的血管發(fā)生。
識(shí)別對(duì)器官或組織具有特異性病原體或抗原的活化促炎淋巴樣細(xì)胞局部或周圍存在病毒感染或瘤形成的亞臨床癥狀??梢酝ㄟ^本領(lǐng)域中公知的技術(shù)測(cè)定淋巴樣細(xì)胞的活化。其它亞臨床癥狀包括在疾病發(fā)生的任何臨床征候前的各種替代標(biāo)記(諸如上述各類中的那些)的存在和/或量。此外,感染和瘤形成通常伴有腫瘤部位上免疫系統(tǒng)活性增加,所以炎癥征候在此也適用。
在通式II表示的化合物中,優(yōu)選Z和W共同為-N(RN)C(O)-、-C(O)N(RN)-、>C-NRsRt、-C(O)-、>C-N-RM-、-CH2NRN-或-NRNCH2-,最優(yōu)選-NCH3CH2-、-NHCH2-、-CH2NH-、-C(O)NH、-NHCO-;Rs、Rt為甲基或H;RM為OH或甲氧基;X為O;RN為H、甲基或-C(=X)-NRsRt;A為H或甲基;U、Y為H、F、甲基或羥甲基;R1為羥基、-O-S2或=O;R2為H、羥基或甲氧基;
R3為OH、甲氧基或與W或Z形成環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán);R4為甲基;R5為H、OH、甲氧基或與R3形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán);連接鍵通過N/9a或N/8a位上Z的氮或通過均位于S2糖C/4″位上R12的碳或R11的氧;R6為H、甲基或乙基;R8為H、N(CH3)2、NH(CH3)N(CH3)CH2CH3;R9為H;連接位置優(yōu)選位于C/3位上或通過S1糖C/3′位上或C/11位或W或Z上的氨基或通過S2糖C/4″位。
還優(yōu)選通式I中的化合物,其中M具有通式II且(i)Z為NCH3,W為CH2,R2為羥基;或(ii)Z為NH,W為=CO且R2為甲氧基。(該段中所述的化合物可以滿足或可以不滿足前一部分中剩余的上述優(yōu)選條件,但優(yōu)選它們滿足這些條件。)本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及通式I表示的化合物的制備方法。一般來說,可以通過下列方式獲得通式I的化合物首先使鏈的一端與大環(huán)內(nèi)酯連接,然后使該鏈的另一端與V連接;或首先使鏈的一端與V連接,然后使該鏈的另一端與大環(huán)內(nèi)酯連接;或最后,使該鏈的一個(gè)部分與大環(huán)內(nèi)酯連接,而使該鏈的另一個(gè)部分與V連接,然后使鏈部分的末端以化學(xué)方式連接形成鏈L。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解需要使用用于制備通式I化合物的中間體的被保護(hù)的衍生物??梢酝ㄟ^本領(lǐng)域中公知的方法對(duì)官能基進(jìn)行保護(hù)和脫保護(hù)。羥基或氨基可以被任意羥基或氨基保護(hù)基保護(hù),例如,如Green T.W.;Wuts P.G.M.在《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(ProtectiveGroups in Organic Synthesis)John Wiley和Sons,New York,1999中所述。另外參見上述有關(guān)通式I的保護(hù)基的討論??梢酝ㄟ^常規(guī)技術(shù)除去氨基保護(hù)基。例如,可以通過溶劑解、例如通過在酸性或堿性條件下水解除去?;?、諸如烷?;?、烷氧羰基和芳?;???梢栽谟写呋瘎?、諸如鈀/活性炭存在的情況下通過氫解裂解芳基甲氧羰基(例如芐氧羰基)。
更具體地說,可以通過下列方法制備通式I中的化合物a)可以通過使通式VI化合物與通式VIIa表示的大環(huán)內(nèi)酯的游離氨基反應(yīng)生成通式I的化合物,其中X2為-NHC(O)-,其中通式VI的結(jié)構(gòu)式如下 其中L1表示離去基團(tuán)(諸如羥基),且通式VIIa的結(jié)構(gòu)式如下 其中K是與大環(huán)內(nèi)酯亞單位連接的連接分子L的部分。
該反應(yīng)一般與具有活化羧酸基能力的酸性衍生物進(jìn)行,諸如鹵化物、混合的酸酐類且尤其是碳化二亞胺類,諸如-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳環(huán)二亞胺(EDC)和苯并三唑類。該反應(yīng)在室溫和惰性氣體、諸如氮或氬氣環(huán)境中并有堿、諸如有機(jī)堿(例如三乙胺)存在的情況下進(jìn)行。該反應(yīng)可能需要幾小時(shí)至幾天才能完成。
例如,當(dāng)L為-K-NH2時(shí),可以通過將大環(huán)內(nèi)酯環(huán)上的>NH基團(tuán)衍生成>N-K-NH2基團(tuán)并使衍生的大環(huán)內(nèi)酯如下所示與通式VI的化合物反應(yīng)生成通式I的化合物。
例如,當(dāng)通式II的大環(huán)內(nèi)酯亞單位上的>NH基團(tuán)連接在C/3′或N/9a位上時(shí)可以進(jìn)行該反應(yīng)。
通式VI表示的化合物是商購(gòu)的或它們可以通過包括本領(lǐng)域中公知的方法之一來源于亞單位V。
通式VIIa的原料大環(huán)內(nèi)酯的制備描述在PCT HR 02/0001中,將該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考。另外參見美國(guó)專利US4,474,768和Bright,G.M.等《抗菌素雜志》(J.Antibiot.)1988,41,1029-1047,將每篇文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考。
b)可以通過使通式VI的化合物與通式VIIb表示的大環(huán)內(nèi)酯的游離羥基反應(yīng)生成通式I表示的化合物,其中X2為-OC(O)- 該反應(yīng)一般與具有活化羧酸基能力的酸性衍生物進(jìn)行,諸如鹵化物(諸如二氯化乙烯EDC))、混合的酸酐類且尤其是碳化二亞胺類。該反應(yīng)一般在室溫和惰性氣體、諸如氮或氬氣環(huán)境中進(jìn)行。該反應(yīng)可能需要幾小時(shí)至幾天才能完成。
例如,當(dāng)連接部分L為-K-O-時(shí),可以通過(1)將大環(huán)內(nèi)酯環(huán)上的>NH基團(tuán)衍生成>N-K-OH基團(tuán)和(2)使衍生的大環(huán)內(nèi)酯如下所示與通式VI表示的化合物反應(yīng)而生成通式I的化合物 連接基-K-OH可以如下所述與大環(huán)內(nèi)酯的仲氮原子連接。使大環(huán)內(nèi)酯與鏈烯?;苌锓磻?yīng),諸如CH2=CH(CH2)m-2C(O)O-烷基(例如,甲基丙烯酸酯)。然后諸如使用金屬氫化物(例如liAlH4)在無(wú)水有機(jī)溶劑中還原酯基(即-C(O)O-烷基)而得到含有連接基-K-OH的大環(huán)內(nèi)酯(即M-K-OH)。該還原反應(yīng)一般在低溫且優(yōu)選在0℃或0℃以下進(jìn)行。
例如,當(dāng)>NH基團(tuán)連接在通式II表示的大環(huán)內(nèi)酯亞單位的C/3′或N/9a位上時(shí),也可以進(jìn)行該反應(yīng)。
通式VIIb的原料大環(huán)內(nèi)酯是已知化合物或可以按照對(duì)類似化合物所述的步驟獲得,諸如描述在Costa,A.M.等《四面體通訊》(Tetrahedron Letters)2000,41,3371-3375中的方法,將該文獻(xiàn)引入本文作為參考。
c)可以通過使通式VIIc表示的大環(huán)內(nèi)酯與通式VIb表示的化合物反應(yīng)制備通式I表示的化合物,其中X1為-OC(O)-,Q位-NH-且X2為-NHC(O)-,
其中通式VIIc的結(jié)構(gòu)式如下 其中通式VIb的結(jié)構(gòu)式如下 從而得到 例如,當(dāng)OH基團(tuán)連接在通式II表示的大環(huán)內(nèi)酯亞單位的C/6或C/4″位上時(shí),可以進(jìn)行該反應(yīng)。
通過使相應(yīng)的鹵代烷?;扰c大環(huán)內(nèi)酯上游離OH反應(yīng)生成通式VIIc表示的大環(huán)內(nèi)酯。
可以通過使適宜的胺(含有連接基-K-NH2)與通式VI的化合物反應(yīng)生成通式VIb表示的化合物。
d)可以通過使通式VIId表示的大環(huán)內(nèi)酯如下所示與通式VIb的化合物反應(yīng)制備通式I表示的化合物,其中X1為-OC(O)NH-且X2為-NHC(O)-。
例如,當(dāng)兩個(gè)游離OH基團(tuán)連接在通式II表示的大環(huán)內(nèi)酯亞單位的C/11或C/12位上時(shí),可以進(jìn)行該反應(yīng)。
可以通過使含有兩個(gè)鄰位羥基取代基的大環(huán)內(nèi)酯亞單位上的乙基碳酸酯反應(yīng)生成通式VIId表示的反應(yīng)劑大環(huán)內(nèi)酯;e)可以通過使通式VIIe表示的大環(huán)內(nèi)酯和通式VIa表示的化合物如下所示反應(yīng)制備通式I表示的化合物,其中X1為-CH2-,Q為-NH-且X2為-NHC(O)-。
例如,當(dāng)OH基團(tuán)連接在通式II表示的大環(huán)內(nèi)酯亞單位的C/4″位上時(shí),可以進(jìn)行該反應(yīng)。
可以通過下列步驟生成通式VIIe表示的反應(yīng)劑大環(huán)內(nèi)酯氧化相應(yīng)的含有羥基的大環(huán)內(nèi)酯而得到取代基( 結(jié)構(gòu)式);轉(zhuǎn)化成環(huán)氧基( 結(jié)構(gòu)式);并用適宜的反應(yīng)劑(例如乙二胺)裂解環(huán)氧基。
f)可以通過使含有離去基團(tuán)L2(諸如Br)的通式VIIf表示的大環(huán)內(nèi)酯和通式VIc表示的亞單位V如下所示反應(yīng)制備通式I表示的化合物。
例如,可以通過裂解連接在用通式VIIf表示的大環(huán)內(nèi)酯亞單位C/3-位上的糖基且然后使所述的大環(huán)內(nèi)酯與L3-K-L2試劑反應(yīng)制備通式VIIf的原料大環(huán)內(nèi)酯,其中L2和L3為離去基團(tuán)。
g)可以通過使含有離去基團(tuán)L2(諸如Br)的通式VIIg表示的大環(huán)內(nèi)酯和通式VIc的亞單位V如下所示反應(yīng)制備通式I表示的化合物。
例如,可以通過使含有連接在通式II表示的大環(huán)內(nèi)酯亞單位C/2′位上的游離OH的大環(huán)內(nèi)酯與通式L3-C(O)-K-L2試劑反應(yīng)制備通式VIIg的原料大環(huán)內(nèi)酯,其中L2和L3為離去基團(tuán)。
h)還可以通過使含有離去基團(tuán)L2(諸如Br)的式VIIh大環(huán)內(nèi)酯和通式VIc的亞單位V如下所示反應(yīng)制備通式I表示的化合物。
i)還可以通過使由含有游離羥基的亞單位V制備的通式VIIIa表示的亞單位V與通式VIIa表示的大環(huán)內(nèi)酯如下所示反應(yīng)制備通式I表示的化合物(Huang C.M.等《化學(xué)與生物學(xué)》(Chem.& Biol.)2000,7,453-461;Hess S.等《生物有機(jī)與藥物化學(xué)》(Bioorg.& Med.Chem.)2001,9,1279-1291)。
j)還可以通過使由含有游離氨基的亞單位V制備的通式VIIIb(Pandori M.W.等《化學(xué)與生物學(xué)》(Chem.& Biol.)2002,9,567-573)或VIIIc(Hess S.等《生物有機(jī)與藥物化學(xué)》(Bioorg.& Med.Chem.)2001,9,1279-1291)表示的亞單位V與通式VIIa表示的大環(huán)內(nèi)酯如下所示反應(yīng)制備通式I表示的化合物。
下列實(shí)施例解釋了通式I化合物的制備方法且并不以任何方式來限定本發(fā)明。
可以按照Huang C.M.等在《化學(xué)與生物學(xué)》(Chemistry & Biology),7,2000,453-461所述的步驟制備琥珀酸紫杉醇方案1)。
可以按照Kra lovec J.等在《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)32,1989,2426-2431所述的步驟制備γ-甲基-N′-[4-[N-[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]-N-甲基氨基]苯甲?;鵠-L-谷氨酸酯(2)(方案2)。
可以按照專利申請(qǐng)US4943579制備喜樹堿-20-O-半琥珀酸酯(方案3)。
可以按照Giammona G.等在《控釋雜志》(J.Control.Release)54,1998,321-331中所述的步驟制備5′-O-琥珀酰齊多夫定(m=1)(方案4)。
方案1紫杉醇-大環(huán)內(nèi)酯雜化物的合成方案2甲氨蝶呤-大環(huán)內(nèi)酯雜化物的合成
方案3喜樹堿-大環(huán)內(nèi)酯雜化物的合成
方案4齊多夫定(AZT)-大環(huán)內(nèi)酯雜化物的合成 傳統(tǒng)上基于糖苷配基的取代模式將16-元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類分成亞家族。該家族的主要原型以白霉素、螺旋霉素和泰洛星為代表。
泰洛星是有代表性的16-元大環(huán)內(nèi)酯類,其含有帶有兩個(gè)雙鍵(tylonolide)和第三個(gè)糖取代基(β-D-mycinose)以及與5-羥基連接的二糖的高度取代的糖苷配基。從二糖中水解mycarose得到desmycarosyl-泰洛星(脫碳霉糖泰樂菌素)。
脫碳霉糖泰樂菌素上可能的修飾位置 例如,可以通過對(duì)C-20位醛基進(jìn)行還原氨基化制備16-元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯雜化物。
該反應(yīng)還可以用于17-元氮雜內(nèi)酯類,如8a-氮雜-高脫碳霉糖泰樂菌素及其衍生物(諸如二-和四氫衍生物)。
另一方面,16-元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯的衍生可以通過轉(zhuǎn)化雙鍵(例如環(huán)氧化)和使用合適的反應(yīng)物(諸如二胺類)裂解環(huán)氧基而得到大環(huán)內(nèi)酯(M-O-NH-K-NH2)來進(jìn)行。
還可以用羥基胺鹽酸鹽修飾C/9位上的酮而得到肟且然后還原成胺。
當(dāng)L為肽連接基時(shí),下面的實(shí)例中解釋了通式I化合物的合成途經(jīng)(V為帶有游離氨基的甾類、非甾類抗炎、抗病毒和抗腫瘤亞單位)
當(dāng)L為肽連接基時(shí),下面的實(shí)例中解釋了通式I化合物的合成途經(jīng)(V為帶有游離羧基的甾類、非甾類抗炎、抗病毒和抗腫瘤亞單位)
可以通過使用一般公知的步驟制備通式I表示的化合物的鹽,諸如例如使結(jié)構(gòu)I的化合物與相應(yīng)的堿或酸在適宜溶劑或溶劑混合物、例如醚類(乙醚)或醇類(乙醇、丙醇或異丙醇)中反應(yīng)。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及通式I的化合物在治療特征在于不需要的炎癥免疫反應(yīng)或與之相關(guān)的炎性疾病、失調(diào)和病癥中的應(yīng)用,尤其是TNF-α和IL-1過度分泌誘導(dǎo)或與之相關(guān)的所有疾病和病癥(抗癌、抗病毒)。
可以通過本領(lǐng)域中公知的方法測(cè)定本發(fā)明化合物的治療有效量。由于可以將本發(fā)明的化合物比相應(yīng)單獨(dú)的藥物更有效地轉(zhuǎn)運(yùn)至所需部位,所以可以給予比抗炎、抗腫瘤和抗病毒藥物摩爾量更少量的化合物而仍然可以獲得相同的治療作用。此外,由于本發(fā)明的活性組分被靶物攝入,所以本發(fā)明的活性組分不再接觸其它組織,預(yù)計(jì)其給藥會(huì)產(chǎn)生較少的副作用,這使得允許增加最大耐受的抗炎、抗腫瘤和抗病毒用量。因此,下表僅用作指導(dǎo)。以摩爾為基準(zhǔn),化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、其溶劑化物或其前體藥物的治療有效量閾值一般等于或小于抗炎、抗腫瘤和抗病毒藥物的治療有效量?;衔?、其藥學(xué)上可接受的鹽、其溶劑化物或其前體藥物的寬和優(yōu)選有效量如下表中所示。
因此,例如,吲哚美辛的優(yōu)選劑量范圍為50-200mg/天,相當(dāng)于140-560μmol/天的范圍。相同的基于摩爾的范圍140-560mol的本發(fā)明雜化化合物為測(cè)定優(yōu)選劑量范圍的起點(diǎn)。對(duì)該手段的精化也屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的范圍。
此外,本發(fā)明涉及藥物組合物,它含有有效量的本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑、諸如載體或稀釋劑。
本發(fā)明藥物組合物的制備包括混合、成粒、壓片和溶解組分的步驟?;瘜W(xué)載體可以是固體或液體形式。固體載體可以為乳糖、蔗糖、滑石、明膠、瓊脂、果膠、硬脂酸鎂、脂肪酸,并不限于此。液體載體可以為糖漿;油,諸如橄欖油、向日葵籽油或大豆油;水;或生理鹽水,并不限于此。類似地,載體還可以含有使活性成分緩釋的成分,諸如硬脂酸甘油酯或甘油二硬脂酸酯??梢灾苽鋷追N劑型的藥物組合物。如果使用固體載體,那么這些劑型可以包括可以口服給藥的片劑、膠襄形片劑、硬膠囊、粉劑或顆粒,并不限于此。固體載體的量可以改變,但主要在25mg-1g的范圍。如果使用液體載體,那么制劑可以為糖漿劑、乳劑、軟膠囊或無(wú)菌可注射液體或非水液體混懸劑形式。
可以通過局部或全身給予本發(fā)明的化合物,例如口服、非腸道、皮下粘膜,例如口服、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)和陰道內(nèi)?!宸悄c道″指的是通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途經(jīng)。本發(fā)明化合物的相應(yīng)制劑可以用于預(yù)防和治療(預(yù)防、延緩、抑制或減輕)因異常或不需要(過度、未調(diào)節(jié)或調(diào)節(jié)不良)的炎性免疫反應(yīng)導(dǎo)致或與之相關(guān)的幾種失調(diào)(疾病和其它病理性炎癥情況),所述的異?;虿恍枰仔悦庖叻磻?yīng)包括炎癥細(xì)胞因子或其它炎癥介體產(chǎn)生,包括但不限于TNF-α和IL-1β。這些疾病包括自身免疫疾病,諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、眼色素層視網(wǎng)膜炎、紅斑狼瘡、硬皮?。黄渌哂醒仔猿煞值年P(guān)節(jié)炎病,諸如類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎和多關(guān)節(jié)炎;其它炎性腦病,諸如腦膜炎、阿爾茨海默病、AIDS癡呆性腦炎;其它炎性眼部炎癥,諸如視網(wǎng)膜炎;炎性皮膚病,諸如濕疹、其它皮炎(例如特異性皮炎、接觸性皮炎)、牛皮癬、UV照射誘發(fā)的灼傷(日光射線和類似的UV源);炎癥性腸病,諸如克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎;哮喘;其它過敏性疾病,諸如過敏性鼻炎;與急性哮喘相關(guān)的疾病,諸如中風(fēng)后的大腦損傷;因心肌缺血導(dǎo)致的心臟組織損傷;肺損傷,諸如發(fā)生成人呼吸窘迫綜合征的肺損傷;伴有感染的炎癥,諸如膿毒癥、膿毒性休克、中毒性休克綜合征;其它與特定器官或組織相關(guān)的炎性疾病,諸如腎炎(例如腎小球腎炎);附件炎;痛風(fēng);膽囊炎;慢性阻塞性肺??;充血性心力衰竭;II型糖尿??;肺纖維化;血管疾病,諸如動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄;和導(dǎo)致移植物排斥的同種異體免疫。
在下列體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中測(cè)定本發(fā)明化合物的生物活性2.結(jié)合人糖皮質(zhì)激素受體的試驗(yàn)通過反向聚合酶鏈反應(yīng)克隆用于人糖皮質(zhì)激素受體α同種型的基因(EMBL Acc.No.M10901)。按照制造商(Qiagen)的說明從人外周血淋巴細(xì)胞中獲得總RNA、在50℃時(shí)用AMV逆轉(zhuǎn)錄酶(Roche)經(jīng)45分鐘轉(zhuǎn)錄成cDNA,并使用特異性引物1)5′ATATGGATCCCTGATGGACTCCAAAGAATCATTAACTCC3′;和2)5′ATATCTCGAGGGCAGTCACTTTTGATGAAACAGAAG3′和pfx聚合酶(Invitrogen)擴(kuò)增基因,PCR條件為94℃下變性30秒,55℃下退火30秒,68℃下3分鐘,總計(jì)36個(gè)循環(huán);最終的延伸步驟在68℃下進(jìn)行7分鐘。將得到的反應(yīng)產(chǎn)物克隆入Bluescript KS質(zhì)粒(Stratagene)的XhoI/BamHI、通過雙脫氧熒光法與M13和M13rev引物(Microsynth)進(jìn)行測(cè)序,然后將其克隆入pcDNA3.1hygro(+)質(zhì)粒(Invitrogen Life Technologies)的XhoI/BamHI位點(diǎn)。將1×105個(gè)COS-1細(xì)胞接種在12-孔平板(Falcon)內(nèi)含有10%FBS(Biowhitaker)的DMEM培養(yǎng)基(Invitrogen LifeTechnologies)中,并在37℃下和含有5%CO2的氣體環(huán)境中培養(yǎng)至70%融合。除去培養(yǎng)基且每孔加入在500μl DMEM中的1μg的DNA、7μl的PLUS試劑和2μl的Lipofectamine(Life Technologies)。在37℃下和含有5%CO2的氣體環(huán)境中保溫細(xì)胞并在5小時(shí)后加入相同體積的20%FBS/DMEM。24小時(shí)后,完全改變培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染后48小時(shí),加入不同濃度的測(cè)試化合物和在DMEM培養(yǎng)基中的24nM[3H]地塞米松(Pharmacia)。將細(xì)胞在37℃下和含有5%CO2的氣體環(huán)境中保溫90分鐘、用PBS緩沖液(Sigma)洗滌3次、冷卻至4℃(pH=7.4)且然后在Tris緩沖液(pH=8.0)(Sigma)中用0.2%SDS(Sigma)裂解。在加入U(xiǎn)ltimaGold XR(Packard)閃爍液后,用Tricarb(Packard)β-閃爍計(jì)數(shù)器讀取殘余的放射性。
3.作為編程性細(xì)胞死亡誘導(dǎo)結(jié)果的小鼠T-細(xì)胞雜交瘤13增殖抑制的試驗(yàn)在96-孔平板中,使用10%FBS制備一式三份的測(cè)試甾類在RPMI培養(yǎng)基(Instituted of Immunology,Zagreb)中的稀釋液。向該化合物溶液中加入20000個(gè)細(xì)胞/孔并在37℃下和含有5%CO2的氣體環(huán)境中保溫過夜,然后加入1μCi[3H]胸苷(Pharmacia)并將該混合物再保溫3小時(shí)。通過施加真空用GF/C濾器(Packard)收集細(xì)胞。在每孔上加入30μl Microscynt O閃爍液(Packard)并用β-閃爍計(jì)數(shù)器(Packard)測(cè)定引入的放射性。通過使用米非司酮(Sigma)拮抗增殖抑制作用證實(shí)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)編程性細(xì)胞死亡的特異性。
小鼠肺嗜曙紅細(xì)胞增多模型將體重為20-25g的雄性Balb/C小鼠隨機(jī)分組并在第0天和第14天通過腹膜內(nèi)注射卵清蛋白(OVA,Sigma)致敏。在第20天時(shí),通過i.n.(鼻內(nèi))施用OVA(陽(yáng)性對(duì)照或試驗(yàn)組)或PBS(陰性對(duì)照)對(duì)小鼠進(jìn)行攻擊測(cè)試。鼻內(nèi)施用OVA后48小時(shí),麻醉動(dòng)物并用1mL的PBS沖洗肺。將細(xì)胞在Cytospin 3細(xì)胞離心機(jī)(Shandon)中分離。用Diff-Quick(Dade)給細(xì)胞染色并通過對(duì)至少100個(gè)細(xì)胞進(jìn)行微分計(jì)數(shù)測(cè)定嗜酸性細(xì)胞的百分比。
將氟替卡松和倍氯米松用作標(biāo)準(zhǔn)抗炎物質(zhì)。
每天通過鼻內(nèi)或腹膜內(nèi)給予不同劑量的化合物,2天后進(jìn)行激發(fā)性試驗(yàn)并直到該試驗(yàn)完成。將化合物作為在羧甲基纖維素或在乳糖溶液中的混懸液形式給藥。
大鼠皮質(zhì)酮抑制和胸腺體積減小的模型將體重為200-250g的雄性Wistar大鼠隨機(jī)分組。通過皮下途經(jīng)施用測(cè)試化合物和標(biāo)準(zhǔn)糖皮質(zhì)激素,每天一次,持續(xù)3天。在第3天時(shí),對(duì)大鼠施加寒冷壓力(4℃,1小時(shí))、用硫噴妥(Thiopenetal)(Pliva Inc.)麻醉并用肝素取血。從每只動(dòng)物體內(nèi)摘除完整的胸腺并立即稱重。將血漿儲(chǔ)存在-70℃下至檢測(cè)為止。用氯仿(5mL)從1mL血漿或從在PBS中的皮質(zhì)酮標(biāo)準(zhǔn)稀釋液中提取皮質(zhì)酮,用0.1M NaOH洗滌干擾化合物并加入硫酸H2O∶C2H5OH=8∶2∶1。60分鐘后測(cè)定熒光,激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為470/530。
b)TNF-α和IL-1β在體外人外周血單核細(xì)胞中分泌的測(cè)定由用Ficoll-PaqueTMPlus(Amersham-Pharmacia)分離PBMC后的肝素化全血制備外周血單核細(xì)胞(PBMC)。為了測(cè)定TNF-α水平,在具有平底的微量滴定板(96孔,F(xiàn)alcon)中的RPMI 1640培養(yǎng)基內(nèi)將總體積為200μl的3.5-5×104個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)18-24小時(shí),所述的培養(yǎng)基中補(bǔ)充了10%加熱失活的人AB血清(Croatian Centre For TransfusionMedicine,Zagreb)、100個(gè)單位/ml的青霉素、100mg/ml鏈霉素和20mM HEPES(Invitrogen Life Technologies)。在37℃和含有5%CO2的氣體環(huán)境以及90%濕度下保溫細(xì)胞。在陰性對(duì)照中,僅在培養(yǎng)基(NC)中培養(yǎng)細(xì)胞,而在陽(yáng)性對(duì)照中,通過添加1μg/ml脂多糖(LPS,大腸桿菌血清型0111B4,SIGMA)(PC)刺激TNF-α分泌并在將它們加入到用LPS(TS)刺激的細(xì)胞培養(yǎng)物后測(cè)定測(cè)試物質(zhì)對(duì)TNF-α分泌的作用。通過ELISA、按照制造商(R&D Systems)的建議測(cè)定細(xì)胞上清液中TNF-α的水平。測(cè)試靈敏度<3pg/ml TNF-α。如對(duì)TNF-α測(cè)定所述進(jìn)行IL-1β水平的測(cè)定,僅使用1×105個(gè)細(xì)胞/孔和0.1ng/ml的LPS。通過ELISA(R & D Systems)測(cè)定IL-1β水平。通過下列等式計(jì)算TNF-α或IL-1β產(chǎn)生的抑制百分比抑制%=[1-(TS-NC)/(PC-NC)]×100。
將IC50值定義為抑制50%TNF-α產(chǎn)生的物質(zhì)濃度。將表現(xiàn)出20μM或20μM以下濃度的IC-50的化合物視為具有活性。使用Graph PadPrism軟件計(jì)算IC-50。
c)RAW 264.7細(xì)胞TNF-α分泌的測(cè)定使細(xì)胞生長(zhǎng)在37℃下含有5%CO2的氣體環(huán)境以及90%濕度下在DMEM培養(yǎng)基中的(Invitrogen Life Technologies)10%胎牛血清(FBS)中。將20 000個(gè)細(xì)胞/孔平板固定在96孔平板(Falcon)中。在陰性對(duì)照中,僅在培養(yǎng)基(NC)中培養(yǎng)細(xì)胞,而在陽(yáng)性對(duì)照中,通過添加500pg/ml脂多糖(LPS,大腸桿菌血清型0111B4,SIGMA)(PC)刺激TNF-α分泌,并在將它們加入到用LPS(TS)刺激的細(xì)胞培養(yǎng)物后測(cè)定測(cè)試物質(zhì)對(duì)TNF-α分泌的作用。通過ELISA、按照制造商(R&D Systems)的建議測(cè)定細(xì)胞上清液中TNF-α的水平。通過下列等式計(jì)算TNF-α產(chǎn)生的抑制百分比抑制%=[1-(TS-NC)/(PC-NC)]×100。
將IC-50值定義為抑制50%TNF-α產(chǎn)生的物質(zhì)濃度。將表現(xiàn)出10μM或10μM以下濃度的IC-50的化合物視為具有活性。
人前列腺素-H合酶-1(hPGH-1)和人前列腺素-H合酶-2(hPGH-2)抑制試驗(yàn)使用PCR、應(yīng)用來自人胎盤cDNA文庫(kù)(Stratagene)的Platinumpfx DNA聚合酶(Invitrogen Life Technologies)擴(kuò)增編碼hPGH-1和hPGH-2的基因。用于PGH-1的引物序列為5′ATATAAGCTTGCGCCATGAGCCGGAGTCTTC3′和5′ATATGGATCCTCAGAGCTCTGTGGATGGTCGC3′;用于hPGH-2的引物序列為5′ATATAAGCTTGCTGCG ATGCTCGCCCGC3′和5′ATATGGATCCCTACAGTTCAGTTCAGTCGAACGTTC3′。將PCR產(chǎn)物克隆入pcDNA3.1 Hygro(+)質(zhì)粒(Invitrogen Life Technologies)的HindIII和BamHI限制位點(diǎn),通過測(cè)序證實(shí)序列。
對(duì)COS-7細(xì)胞(ATCC)進(jìn)行轉(zhuǎn)染,在37℃下含有5%CO2的氣體環(huán)境以及90%濕度下,使細(xì)胞在24孔平板(Falcon)內(nèi)的DMEM培養(yǎng)基中的(Invitrogen Life Technologies)中的10%胎牛血清(FBS)中生長(zhǎng)至中完全融合。按照制造商的建議將1μg質(zhì)粒DNA(含有PGH-1或PGH-2基因或pcDNA Hygro 3.1(+)的pcDNA Hygro 3.1(+)作為陰性對(duì)照樣品)與1,5μl Lipofectamine 2000(Invitrogen Life Technologies)合并。轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí),將在DMEM中的測(cè)試化合物加入到細(xì)胞中,但不除去培養(yǎng)基并在40分鐘后,加入花生四烯酸(Sigma)至終濃度為20μM。30分鐘后,取出上清液并用PGE-2試驗(yàn)試劑盒(Cayman)按照制造商的說明測(cè)定PGE-2。在陰性對(duì)照中沒有檢測(cè)到PGE-2產(chǎn)生。
通過下列等式計(jì)算抑制%抑制%=(1-樣品PGE-2濃度/陽(yáng)性對(duì)照PGE-2濃度)*100d)小鼠體內(nèi)LPS-誘導(dǎo)的TNF-α過度分泌的體內(nèi)模型按照已經(jīng)上述方法誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)TNF-α分泌(Badger AM等,J.Pharmac.And Env.Therap.,1996,2791453-1461)。在本試驗(yàn)中,使用8-12周齡的分成6-10只動(dòng)物一組的雄性Balb/C小鼠。僅用溶劑口服給藥治療動(dòng)物(陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照中)或在用LPS(大腸桿菌血清型0111B4,Sigma)處理前30分鐘給予物質(zhì)溶液,劑量為1-25μg/動(dòng)物。2小時(shí)后通過腹膜內(nèi)注射Roumpun(Bayer)和鹽酸氯胺酮(Parke-Davis)對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂死。將每只動(dòng)物的血樣取入“vacutainer”管(BectonDickinson)并按照制造商的建議分離血漿。通過ELISA(Biosource,R&D Systems)、按照制造商所述的方法測(cè)定血漿中的TNF-α水平。測(cè)試靈敏度<3pg/ml TNF-α。通過下列等式計(jì)算TNF-α產(chǎn)生的抑制百分比抑制%=[1-(TS-NC)/(PC-NC)]*100。
將在10mg/kg劑量下表現(xiàn)出30%或30%以上TNF-α產(chǎn)生抑制的化合物視為具有活性。
e)用于止痛活性的扭體試驗(yàn)在本試驗(yàn)中,通過將刺激劑、最常見的是乙酸注入小鼠腹腔誘發(fā)疼痛。動(dòng)物具有指定試驗(yàn)名稱的特征扭體反應(yīng)(Collier HOJ等,《藥物與化療》(Pha rmac.Chemother.),1968,32295-310;Fukawa K等,《藥理學(xué)方法雜志》(J.Pharmacol.Meth.),1980,4251-259;Schweizer A等,《活性劑的作用》(Agents Actions),1988,2329-31)。本試驗(yàn)適合于測(cè)定化合物的止痛活性。方法使用8-12周齡的雄性Balb/C小鼠(Charles River,Italy)。對(duì)對(duì)照組在腹膜內(nèi)給予0.6%濃度的乙酸前30分鐘口服給予甲基纖維素,而對(duì)驗(yàn)組在腹膜內(nèi)給予0.6%乙酸(體積0.1ml/10g)前30分鐘口服給予標(biāo)準(zhǔn)品(乙酰水楊酸)或在甲基纖維素中的測(cè)試物質(zhì)。將小鼠各自置于玻璃漏斗中并在20分鐘期限中記錄每只動(dòng)物扭體的次數(shù)。按照下列等式計(jì)算扭體抑制的百分比抑制%=(對(duì)照組中扭體次數(shù)-試驗(yàn)組中扭體次數(shù)的平均值)/對(duì)照組中扭體的次數(shù)×100。
將表現(xiàn)出與乙酰水楊酸相同活性或優(yōu)于其活性的化合物視為具有活性。
LPS-誘發(fā)的小鼠休克的體內(nèi)模型使用8-12周齡的雄性Balb/C小鼠(Charles River,Italy)。用無(wú)菌鹽水稀釋分離自粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratie marcessans)(Sigma,1-6136)的LPS。首先真皮內(nèi)給予劑量為4μg/小鼠的LPS注射。18-24小時(shí)后,通過靜脈內(nèi)給予200μg/小鼠劑量的LPS。按照上述方式對(duì)對(duì)照組給予兩次LPS注射。對(duì)試驗(yàn)組在各自給予LPS前半小時(shí)口服所述物質(zhì)。24小時(shí)后觀察存活率。
將在30mg/kg劑量下產(chǎn)生存活率為40%或更好存活率的化合物視為具有活性。
如果化合物在上述試驗(yàn)中的至少兩種中表現(xiàn)出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(通過Student氏t-檢驗(yàn),p<0.05),那么認(rèn)為這些化合物具有活性。所用化合物的摩爾量低于發(fā)揮如文獻(xiàn)中報(bào)導(dǎo)的輕度抗炎作用的大環(huán)內(nèi)酯的閾值量(大約30μm)。
(ii)用于篩選對(duì)HIV復(fù)制的抑制作用的體外試驗(yàn)HIV-1轉(zhuǎn)染T4-細(xì)胞系。預(yù)先證實(shí)MT-4(Koyanagi等《國(guó)際癌癥雜志》(Int.J.Cancer),36,445-451,1985)對(duì)用作靶細(xì)胞系的HIV高度敏感。將抑制HIV-誘導(dǎo)的致細(xì)胞病變作用作為終點(diǎn)。使用分光光度法、通過MTT的原位減少估計(jì)HIV-和模擬-感染細(xì)胞的存活率。將50%細(xì)胞毒性濃度定義為將模擬-感染的對(duì)照樣品的吸收度降低50%的化合物濃度。將化合物在HIV-感染細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)的保護(hù)百分比計(jì)算為使用指定濃度測(cè)試化合物在HIV-感染細(xì)胞中測(cè)定的光密度。測(cè)定細(xì)胞毒性作用和保護(hù)作用之比。
(iii)用于篩選對(duì)HCV復(fù)制的抑制作用的體外試驗(yàn)使用Lohmann等報(bào)導(dǎo)的方法的改進(jìn)方法測(cè)定新化合物的活性[V.Lohmann等《科學(xué)》(Science),1999,285,110-113]。
將含有HCV復(fù)制子的細(xì)胞系用于證實(shí)新化合物抑制HCV復(fù)制子RNA在細(xì)胞中復(fù)制的能力。抑制HCV復(fù)制子RNA復(fù)制使細(xì)胞中復(fù)制子RNA減少,可以使用對(duì)這種RNA進(jìn)行特異性定量的方法測(cè)定這種減少。
本試驗(yàn)基于使用報(bào)道基因作為胞內(nèi)HCV復(fù)制子RNA水平的單純示值讀數(shù)的構(gòu)思。為了這一目的,將Renilla熒光素酶基因?qū)刖o隨內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(IRES)序列后的復(fù)制子構(gòu)建體NK5.1的第一開放可讀框(Krieger等,《病毒學(xué)雜志》(J.Virol.)754614),并通過來自口蹄疫病毒的自切割肽2A與新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(NPTII)基因融合(Ryan & Drew,EMBO Vol 13928-933)。在體外轉(zhuǎn)錄后,將RNA電穿孔入人肝細(xì)胞瘤Huh7細(xì)胞并分離和平展G418-抗性菌落。證實(shí)穩(wěn)定選擇的細(xì)胞系含有復(fù)制HCV次基因組RNA,且復(fù)制子表達(dá)的Renilla熒光素酶活性反映了其在細(xì)胞中在RNA水平。
就試驗(yàn)過程而言,將在含有5%胎牛血清(FCS)(Invitrogen cat no.10106-169)的Dulbecco′s MEM Invitrogen cat no.3196 6-021)中培養(yǎng)的Renilla熒光素酶HCV復(fù)制子細(xì)胞以5000個(gè)細(xì)胞/孔平板固定在96-孔平板上并保溫過夜。24小時(shí)后,向細(xì)胞中加入在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中不同稀釋的化學(xué)化合物,然后在37℃下進(jìn)一步保溫3天。將平板試驗(yàn)一式兩份進(jìn)行,一份為不透明的白色且一份為透明的,目的是平行測(cè)定化合物的活性和細(xì)胞毒性,從而確保觀察到的活性并非因?qū)?xì)胞增殖的減少作用所致。
在保溫結(jié)束時(shí),收集白色平板上的細(xì)胞并通過使用雙重-熒光素酶報(bào)道基因檢測(cè)系統(tǒng)(Promega cat no.E1960)測(cè)定熒光素酶的活性。下面段落中所述的所有試劑均包括在制造商的試劑盒中且附帶的制造商的說明用于制備試劑。簡(jiǎn)單的說,每孔用20μL PBS(磷酸緩沖鹽水;pH 7.0)洗滌細(xì)胞并用25μL 1x被動(dòng)溶解緩沖液溶解,此后在室溫下保溫20分鐘。向每個(gè)孔中加入100微升的LAR II試劑。然后將平板插入微平板發(fā)光計(jì)(Packard)并將100μL Stop & Glo試劑注入每孔并測(cè)定發(fā)光。可以根據(jù)熒光素酶活性降低百分比與藥物濃度的關(guān)系圖計(jì)算將復(fù)制子水平相對(duì)于未處理的細(xì)胞的對(duì)照值減少50%所需的藥物濃度IC50。
抗腫瘤活性的體外試驗(yàn)將EL-4細(xì)胞系用于體外篩選抗腫瘤活性。使細(xì)胞生長(zhǎng)在37℃、5%CO2和90%相對(duì)濕度下補(bǔ)充了10%FBS(Invitrogen)的DMEM培養(yǎng)基(Invitrogen)中。試驗(yàn)在96孔平板上進(jìn)行,化合物的稀釋度為10-5至10-10M且使用30000個(gè)細(xì)胞/孔。24小時(shí)處理后,加入3H標(biāo)記的胸苷(Amersham),持續(xù)4小時(shí)。用應(yīng)用GF/C濾器(Packard)的細(xì)胞收集儀(Packard)收集細(xì)胞。加入閃爍液(Microscint 20,Packard)并對(duì)閃爍進(jìn)行計(jì)數(shù)。
如下計(jì)算抑制作用抑制%=(1-CPM樣品/CPM陽(yáng)性對(duì)照)*100。L1210腹膜內(nèi)腫瘤模型在第0天給DBA2小鼠(雄性9-12周,20-30g)腹膜內(nèi)注射106個(gè)存活細(xì)胞。隨后在第1、2和3天用單劑量或多劑量通過腹膜內(nèi)給予順鉑或雜化化合物治療動(dòng)物。每天給單位稱重且每天觀察2次腫瘤生長(zhǎng)的征候。如果體重降為低于原始體重的80%或如果觀察到其它嚴(yán)重的毒理學(xué)問題,則處死動(dòng)物。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)注意到了總體解剖學(xué)的改變。B16黑素瘤腹膜內(nèi)模型給雄性C57BL/6 J小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)(i.p)接種106個(gè)存活B16F10細(xì)胞。在第0天注射細(xì)胞并在隨后的1天經(jīng)腹膜內(nèi)注射作為單劑量或多劑量的游離順鉑或雜化化合物。如上所述監(jiān)測(cè)動(dòng)物。
B16黑素瘤皮下模型給雄性C57BL/6 J小鼠經(jīng)皮下(s.c.)接種105個(gè)存活B16F10細(xì)胞。使腫瘤建立至面積約為50-70mm2,根據(jù)二正交直徑的產(chǎn)物測(cè)定。通過腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)注射2、5、10、15mg Pt/kg的游離順鉑或雜化化合物19-21來治療帶有皮下腫瘤的動(dòng)物。
合成方法和實(shí)施例中間體的制備中間體A 將2-氯三苯甲基氯樹脂(1eq=0,5mmol,600mg)放入安裝了粗玻璃料過濾器的玻璃柱上并在DCM中溶脹10分鐘。然后過濾樹脂并用DCM洗滌3次。在用DMF洗滌后,通過添加2.0mL 0.6M氨基酸在DMF中的溶液和0,630ml N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)給樹脂加載N-R-Fmoc-甘氨酸并混合。5分鐘后,加入0,315ml DIPEA。在混合50分鐘后,加入0,5ml量的甲醇。10分鐘后,過濾樹脂并用DCM、DMF和甲醇洗滌10次。
脫保護(hù)制備哌啶在DMF中的不同溶液并如下傾倒在珠上5%哌啶/DMF 10分鐘(大約10ml)30%哌啶/DMF 15分鐘(大約10ml)50%哌啶/DMF 30分鐘(大約10ml)脫保護(hù)后,用DMF洗滌樹脂。
將第二種氨基酸Fmoc-亮氨酸(1060mg,3mmol)和2-(1 H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基糖醛酸鎓(uronium)六氟磷酸鹽(tetramethyluronium hexafluorophosphate)(HBTU)溶于3mL DMF并快速加入0.216mL(5mmol)DIPEA,并且同時(shí)加入到反應(yīng)管內(nèi)的到單體/樹脂混合物中。
封端制備10eq(2,04ml)乙酸酐和10eq(3,48ml)DIPEA在5ml DMF中的溶液。將2,5ml該溶液加入到反應(yīng)混合物中5分鐘。另起一段如下用哌啶在DMF中的溶液使第二種氨基酸脫保護(hù)30%哌啶/DMF 2分鐘(大約10ml)30%哌啶/DMF 2分鐘(大約10ml)30%哌啶/DMF 5分鐘(大約10ml)30%哌啶/DMF 5分鐘(大約10ml)并用大量DMF洗滌。
對(duì)下列氨基酸重復(fù)相同的偶聯(lián)脫保護(hù)步驟第三種氨基酸Fmoc-苯丙氨酸1162mg,3mmolHBTU,1081mg/3ml DMFDIPEA,0,87ml;和第四種氨基酸Fmoc-甘氨酸,892mg,3mmolHBTU,1081mg/3ml DMFDI PEA,0,87ml;隨后過濾并用DMF洗滌。
向反應(yīng)管內(nèi)的四肽/樹脂混合物中加入地塞米松酸(567mg,3eq)、HBTU(540mg,3,8eq)和0,435ml DIPEA在3ml DMF中的混合物、混合并保持過夜。
封端將0,5ml乙酸酐和0,5ml DIPEA在3ml DMF中的溶液加入到反應(yīng)混合物中5分鐘,隨后用DCM、DMF和MeOH洗滌并在真空下干燥。
從樹脂中裂解將10ml 50%三氟乙酸在DCM中的溶液傾倒在珠上并混合15分鐘。通過過濾除去試劑并用DCM洗滌珠2x。再使用10ml酸重復(fù)相同步驟。蒸發(fā)收集的溶劑以除去過量的TFA并加入一定量的乙醚。分離到60,1mg中間體A。MS(m/z)753.3[MH]+
實(shí)施例I化合物1(地塞米松-Gly-Phe-Leu-Gly-阿奇霉素) 在惰性氣體環(huán)境中將中間體A(57mg;0.076mmole)溶于干燥CH2Cl2(5mL)并在0℃下冷卻。加入0.115mL N,N-二異丙基乙胺和20,5mg 1-羥基苯并三唑,隨后添加化合物9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨基丙基)-9a-高紅霉素A(60mg;0.076mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(57,6mg,0,30mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí),然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積且用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶CH3OH∶NH4OH=6∶1∶0.1)。得到14mg化合物1;MS(m/z)1527,3[MH]+.IR(cm-1)/KBr3415,2969,2939,2874,1664,1528,1458,1378,1262,1168,1107,1054,1013,959,894,803,702.
中間體B
將2-氯三苯甲基氯樹脂(1eq=0,5mmol,600mg)放入安裝了粗玻璃料過濾器的玻璃柱上并在DCM中溶脹10分鐘。然后過濾樹脂并用DCM洗滌3次。在用DMF洗滌后,通過添加2.0mL 0.6M氨基酸在DMF中的溶液和0,630ml N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)給樹脂加載N-R-Fmoc-甘氨酸并混合。5分鐘后,加入0,315ml DIPEA。在混合50分鐘后,加入0,5ml量的甲醇。10分鐘后,過濾樹脂并用DCM、DMF和甲醇洗滌10次。
脫保護(hù)制備哌啶在DMF中的不同溶液并如下傾倒在珠上5%哌啶/DMF 10分鐘(大約10ml)30%哌啶/DMF 15分鐘(大約10ml)50%哌啶/DMF 30分鐘(大約10ml)脫保護(hù)后,用DMF洗滌樹脂。
將第二種氨基酸Fmoc-亮氨酸(1060mg,3mmol)和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基糖醛酸鎓六氟磷酸鹽(tetramethyluronium hexafluorophosphate)(HBTU)溶于3mL DMF并快速加入0.216mL(5mmol)DIPEA,同時(shí)加入到反應(yīng)管內(nèi)的單體/樹脂混合物中。
封端制備10eq(2,04ml)乙酸酐和10eq(3,48ml)DIPEA在5ml DMF中的溶液。將2,5ml該溶液加入到反應(yīng)混合物中5分鐘。
如下用哌啶在DMF中的溶液使第二種氨基酸脫保護(hù)30%哌啶/DMF 2分鐘(大約10ml)30%哌啶/DMF 2分鐘(大約10ml)30%哌啶/DMF 5分鐘(大約10ml)30%哌啶/DMF 5分鐘(大約l0ml)并用大量DMF洗滌。
對(duì)下列氨基酸重復(fù)相同的偶聯(lián)脫保護(hù)步驟第三種氨基酸Fmoc-苯丙氨酸1162mg,3mmol
HBTU,1081mg/3ml DMFDIPEA,0,87ml;和第四種氨基酸Fmoc-甘氨酸,892mg,3mmolHBTU,1081mg/3ml DMFDIPEA,0,87ml;僅在偶聯(lián)第四種氨基酸后不除去Fmoc保護(hù)基。
過濾并用DMF洗滌后,從樹脂中取出產(chǎn)物將10ml50%三氟乙酸在DCM中的溶液傾倒在珠上并混合15分鐘。通過過濾除去試劑并用DCM洗滌珠2x。再使用10ml酸重復(fù)相同步驟。蒸發(fā)收集的溶劑以除去過量的TFA并加入一定量的乙醚。分離到109,1mg中間體B1。MS(m/z)715,6(MH)+ 中間體B1將2-氯三苯甲基氯樹脂(1eq=0,352mmol,326mg)放入安裝了粗玻璃料過濾器的玻璃柱上并在DCM中溶脹10分鐘。然后過濾樹脂并用DCM洗滌3次。在用DMF洗滌后,通過添加溶于2mL DMF中的259mg(0,422mmol)和0,150ml N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)給樹脂加載化合物B1并混合。5分鐘后,加入0,230ml DIPEA。在混合50分鐘后,加入0,355ml量的甲醇。10分鐘后,過濾樹脂并用DCM、DMF和甲醇洗滌10次。
脫保護(hù)制備哌啶在DMF中的不同溶液并如下傾倒在珠上5%哌啶/DMF 10分鐘(大約10ml)30%哌啶/DMF 15分鐘(大約10ml)50%哌啶/DMF 30分鐘(大約10ml)脫保護(hù)后,用DMF洗滌樹脂。
將377mg(1,055mmol)吲哚美辛和533mg(1,41mmol)2-(1-H-苯并三唑-1基)-1,1,3,3-四甲基糖醛酸鎓六氟磷酸鹽(tetramethyluronium hexafluorophosphate)(HBTU)溶于3mL DMF并快速加入0.602mL(3,52mmol)DIPEA,同時(shí)加入到反應(yīng)管內(nèi)的聚合物/樹脂混合物中。
封端將0,5ml乙酸酐和0,5ml DIPEA在3ml DMF中的溶液加入到反應(yīng)混合物中5分鐘、過濾并用DCM、DMF和MeOH洗滌。
從樹脂中裂解將10ml 50%三氟乙酸在DCM中的溶液傾倒在珠上并混合15分鐘。通過過濾除去試劑并用DCM洗滌珠2x。再使用10ml酸重復(fù)相同步驟。蒸發(fā)收集的溶劑以除去過量的TFA并加入一定量的乙醚。分離到210,8mg產(chǎn)物、即中間體B。MS(m/z)732,66[MH]+實(shí)施例II化合物2(吲哚美辛-Gly-Phe-Leu-Gly-阿奇霉素) 在惰性氣體環(huán)境中將中間體B(200mg;0,27mmol)溶于干燥CH2Cl2(5mL)。加入0.416mL(2,14mmol)N,N-二異丙基乙胺和74mg(0,55mmol)1-羥基苯并三唑,隨后添加化合物9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨基丙基)-9a-高紅霉素A(216,6mg;0.27mmole)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(188mg,1,09mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí),然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積并用硅膠柱純化(洗脫劑CHCl3∶CH3OH∶NH4OH=6∶1∶0.1)。得到70mg化合物2;MS(m/z)1505,8[MH]+.IR(cm-1)/KBr3654,3633,3425,3084,2970,2936,1720,1652,1637,1545,1439,l368,1309,1230,1179,1111,1089,1055,1013,867,803,739,700,643.
實(shí)施例III按照實(shí)施例I的一般步驟并取代其中適宜的反應(yīng)物得到下列化合物 化合物3R1=F;R2=F;R3=OH化合物4R1=F;R2=H;R3=H化合物5R1=F;R2=F;R3=H化合物6R1=H;R2=F;R3=OH實(shí)施例IV
按照實(shí)施例II的一般步驟并取代其中適宜的反應(yīng)物得到下列化合物V-Gly-Phe-Leu-Gly-M
實(shí)施例V化合物19在氬氣環(huán)境中向琥珀酸紫杉醇(1當(dāng)量)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入9當(dāng)量的三乙胺、2當(dāng)量的1-羥基苯并三唑、1當(dāng)量的9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨基丙基)-9a-高紅霉素A和4當(dāng)量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí),然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積且用硅膠柱純化,使用氯仿、甲醇和氨作為洗脫劑。色譜產(chǎn)物的特征在于具有如下結(jié)構(gòu)式
實(shí)施例VI化合物20在氬氣環(huán)境中向琥珀酸喜樹堿(1當(dāng)量)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入9當(dāng)量的三乙胺、2當(dāng)量的1-羥基苯并三唑、1當(dāng)量的9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨基丙基)-9a-高紅霉素A和4當(dāng)量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí),然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積且用硅膠柱純化,使用氯仿、甲醇和氨作為洗脫劑。色譜產(chǎn)物的特征在于具有如下結(jié)構(gòu)式
實(shí)施例VII化合物21在氬氣環(huán)境中向γ-甲基-N’-[4-[N-[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]-N-甲氨基]苯甲?;鵠-L-谷氨酸酯(1當(dāng)量)在干燥DMF中的溶液中加入2當(dāng)量的1,1-羰基二咪唑(在5ml DMF中)。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌24小時(shí),然后加入1當(dāng)量的在干燥DMF中的化合物9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-羥基丙基)-9a-高紅霉素A。將該反應(yīng)混合物在100℃下加熱48小時(shí),然后蒸發(fā)并用硅膠柱純化,使用氯仿、甲醇和氨作為洗脫劑。色譜產(chǎn)物的特征在于具有如下結(jié)構(gòu)式
實(shí)施例VIII化合物22在氬氣環(huán)境中向5′-O-琥珀酰齊多夫定(1當(dāng)量)在干燥CH2Cl2(5ml)中的溶液中加入9當(dāng)量的三乙胺、2當(dāng)量的1-羥基苯并三唑、1當(dāng)量的9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨基丙基)-9a-高紅霉素A和4當(dāng)量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下和氬氣流中攪拌24小時(shí),然后在減壓條件下蒸發(fā)至小體積且用硅膠柱純化,使用氯仿、甲醇和氨作為洗脫劑。色譜產(chǎn)物的特征在于具有如下結(jié)構(gòu)式
縮寫Pyr吡啶NEt3三乙胺4-PP4-吡咯并吡啶DMAP2,6-二甲氨基吡啶DIPEAN,N′-二異丙基乙胺DMF二甲基甲酰胺TFA三氟乙酸
權(quán)利要求
1.通式I的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物及其各非對(duì)映異構(gòu)體 其中M表示具有在炎性細(xì)胞內(nèi)累積特性的大環(huán)內(nèi)酯亞單位;V為抗炎甾類亞單位或非甾類抗炎亞單位或抗腫瘤亞單位或抗病毒亞單位,且L為與M和V各自共價(jià)連接的連接分子。
2.權(quán)利要求1的化合物,其中M表示通式II的基團(tuán) 其中(i)Z和W獨(dú)立為>C=O、>CH2、>CH-NRtRs、>N-RN或>C=N-RM或鍵,其中Rt和Rs獨(dú)立為氫或烷基;RM為羥基、烷氧基、取代的烷氧基或ORP;RN為氫、RP、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷氧基烷基或-C(X)-NRtRs;其中X為=O或=S;條件是Z和W不能同時(shí)為>C=O、>CH2、>CH-NRtRs、>N-RN或>C=N-RM或鍵;(ii)U和Y獨(dú)立為氫、鹵素、烷基或羥基烷基;(iii)R1為羥基、ORP、-O-S2基團(tuán)或=O;(iv)S1為下式的糖部分 其中R8和R9均為氫或一起形成鍵,或R9為氫且R8為-N(CH3)Ry,其中Ry為RP、RZ或-C(O)RZ,其中RZ為氫或烷基或鏈烯基或炔基或環(huán)烷基或芳基或雜芳基或被C2-C7-烷基、C2-C7-鏈烯基、C2-C7-炔基、芳基或雜芳基取代的烷基;R10為氫或RP;(v)S2為下式的糖部分 其中R3’為氫或甲基;R11為氫、RP或O-R11為與R12和與C/4″碳原子形成>C=O或環(huán)氧基的基團(tuán);R12為氫或與O-R11和與C/4″碳原子形成>C=O或環(huán)氧基的基團(tuán);(vi)R2為氫、羥基、ORP或烷氧基;(vii)A為氫或甲基;(viii)B為甲基或環(huán)氧基;(ix)E為氫或鹵素;(x)R3為羥基、ORP、烷氧基或R3為與R5和與C/11和C/12碳原子形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯的基團(tuán);或如果W或Z為>N-RN,那么R3為與W或Z形成環(huán)氨基甲酸酯的基團(tuán);(xi)R4為C1-C4烷基;(xii)R5為氫、羥基、ORP、C1-C4-烷氧基或與R3和與C/11和C/12碳原子形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯的基團(tuán);(xiii)R6為氫或C1-C4-烷基;其中M含有連接位置,它通過該位置經(jīng)連接基L與V連接;條件是連接位置位于下列基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)上a)位于S1、S2或糖苷配基氧上的任意活性羥基、氮或環(huán)氧基,條件是S1或/和S2被裂解;b)位于Z或W上的活性>N-RN或-NRtRs或=O;c)位于R1、R2、R3和R5中任意一個(gè)上的活性羥基;d)可以首先被衍生成羥基或-NRtRs基團(tuán)的任意其它基團(tuán);且RP為羥基或氨基保護(hù)基。
3.如權(quán)利要求1中所述的化合物,其中L表示通式IV組中的成員X1-(CH2)m-Q-(CH2)n-X2IV其中X1選自-CH2-、-C(O)-、OC(O)-、N-O-、-OC(O)NH-或-C(O)NH-;X2為-NH-或-NHC(O)-、-OC(O)-、-C(O)-、-O或-CH2-;Q為-NH-或-CH2-或不存在;其中-CH2-或-NH-基團(tuán)各自可以任選被C1-C7-烷基、C2-C7-鏈烯基、C2-C7-炔基、C(O)RX、C(O)ORX、C(O)NHRX取代,其中RX可以為C1-C7-烷基、芳基或雜芳基;符號(hào)m和n獨(dú)立為0-4的整數(shù),條件是如果Q為NH,那么n不能為0;且V僅為抗腫瘤亞單位或抗病毒亞單位。
4.權(quán)利要求1的化合物,其中L表示肽連接基,包含約2-約50個(gè)氨基酸的多肽。
5.如權(quán)利要求1中所述的化合物,其中V表示通式X組中的成員 其中Ra和Rb獨(dú)立地表示氫或鹵素;Rc為羥基、烷氧基、烷基、硫代氨基甲?;?、氨基甲酰基或價(jià)鍵;Rd和Re獨(dú)立地表示氫、羥基、甲基或C1-C4-烷氧基或各自為與另一個(gè)形成1,3-二氧戊環(huán)的基團(tuán)或價(jià)鍵;Rf為氫、羥基、氯或與它所連接的碳原子形成酮基;Rj為氫或鹵素。
6.權(quán)利要求1的化合物,其中V來源于NSAID,所述的NSAID選自醋氯芬酸、阿西美辛、對(duì)乙酰氨基酚、醋氨沙洛、乙酰水楊酸、乙?;?水楊-2-氨基-4-甲基吡啶-酸、5-氨基乙酰水楊酸、阿氯芬酸、氨洛芬、氨芬酸、氨基安替比林、安吡昔康、阿尼利定、芐達(dá)酸、苯噁洛芬、柏莫洛芬、α-沒藥醇、溴芬酸、5-溴水楊酸乙酸酯、溴水楊苷、布氯酸、丁布芬、卡洛芬、塞來考昔、chromoglycate、桂美辛、clindanac、氯吡酸、雙氯芬酸鈉、二氟尼柳、地他唑、屈噁昔康、恩芬那酸、依托度酸、依托芬那酯、聯(lián)苯乙酸、芬布芬、芬克洛酸、芬度柳、非諾洛芬、芬替酸、非普地醇、flufenac、氟芬那酸、氟尼辛、氟諾洛芬、氟比洛芬、glutametacin、水楊酸乙二醇酯、異丁芬酸、布洛芬、異丁普生、吲哚美辛、吲哚洛芬、三苯唑酸、伊索克酸、伊索昔康、酮洛芬、酮咯酸、氯諾昔康、洛索洛芬、甲氧芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、5-氨基水楊酸、甲嗪酸、莫苯唑酸、孟魯司特、萘丁美酮、萘普生、尼氟酸、尼美舒利、奧沙拉秦、奧沙西羅、噁丙嗪、羥布宗、對(duì)乙酰氨基酚、帕沙米特、哌立索唑、苯乙酰水楊酸酯、保泰松、水楊酸苯酯、吡拉唑酸、吡羅西康、吡洛芬、普拉洛芬、丙替嗪酸、reserVeratol、醋水楊胺、水楊酰胺、水楊酰胺-O-乙酸、水楊酰硫酸酯、水楊苷、水楊酰胺、雙水楊酯、舒林酸、舒洛芬、suxibutazone、他莫昔芬、替諾昔康、噻洛芬酸、噻拉米特、ticlopridine、替諾立定、托芬那酸、托美丁、tropesin、聯(lián)苯丁酸、希莫洛芬、扎托洛芬、佐美酸、托莫普羅、扎魯司特和環(huán)孢菌素。
7.權(quán)利要求1的化合物,其中V來源于抗腫瘤化合物,所述的抗腫瘤化合物選自bicaluatnide、喜樹堿、雌莫司汀磷酸酯、氟他胺、氮芥、塞替派、異環(huán)磷酰胺、羥基脲、博來霉素、紫杉醇、洛莫司汀、伊立替康、甲氨蝶呤、長(zhǎng)春瑞濱、阿那曲唑、氟尿苷、美法侖、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、絲裂霉素、諾龍、戈舍瑞林、亮丙立德、曲普瑞林、氨魯米特、米托坦、順鉑、苯丁酸氮芥、噴司他丁、克拉屈濱、白消安、依托泊苷、米托蒽醌、伊達(dá)比星、環(huán)磷酰胺、巰嘌呤、硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、環(huán)磷酰胺、多柔比星、柔紅霉素、替尼泊苷、他莫昔芬、泰索帝和托泊替康。
8.權(quán)利要求1的化合物,其中V來源于抗病毒化合物,所述的抗病毒化合物選自阿昔洛韋、泛昔洛韋、更昔洛韋、西多福韋、拉米夫定、利托那韋、茚地那韋、奈韋拉平、齊多夫定、去羥肌苷、司他夫定、阿巴卡韋、扎西他濱、氨普奈韋、利巴韋林和金剛烷。
9.權(quán)利要求2的化合物,其中Z和W共同為-N(CH3)-CH2-、-NH-CH2-、-CH2-NH-、-C(O)-NH-或-NH-C(O)-;A和B為甲基;E為氫;R2為羥基或甲氧基;S1表示去氧糖胺糖,其中R8選自氫、甲基、氨基、C1-C6烷基氨基或C1-C6二烷氨基;R9和R10為氫;R1為羥基或O-S2基團(tuán),其中S2表示克拉定糖,其中R11為氫或O-R11為與R12和與C/4″碳原子形成>C=或環(huán)氧基的基團(tuán);R12為氫或與O-R11和與C/4″碳原子形成>C=O或環(huán)氧基的基團(tuán);R13為甲基;U為氫;Y為甲基;R6為羥基、甲基或乙基;R5為氫、羥基、甲氧基或與R3和與C/11和C/12碳原子形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán);R3為羥基或與W或Z形成環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán),或R3為與R5和與C/11和C/12碳原子形成環(huán)碳酸酯或環(huán)氨基甲酸酯橋的基團(tuán);R4為甲基;條件是連接鍵通過N/9a位上Z的氮或通過均在S2糖C/4″位上的R12的碳或R11的氧。
10.權(quán)利要求3的化合物,其中X1為-CH2-或-OC(O)-;X2為-NHC(O)-;Q為-NH-或不存在。
11.權(quán)利要求6的化合物,其中V來源于NSAID,所述的NSAID選自S-(+)-布洛芬、吲哚美辛、氟比洛芬、萘普生、酮洛芬、乙酰水楊酸、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、舒洛芬、氟尼辛、雙氯芬酸鈉和托美丁鈉。
12.權(quán)利要求7的化合物,其中V來源于抗腫瘤化合物,所述的抗腫瘤化合物選自甲氨蝶呤、紫杉醇、喜樹堿和多柔比星。
13.權(quán)利要求8的化合物,其中V來源于抗病毒化合物,所述的抗病毒化合物選自齊多夫定、去羥肌苷和司他夫定組成的組。
14.如下式的化合物
15.如下式的化合物
16.如下式的化合物
17.如下式的化合物
18.如下式的化合物
19.如下式的化合物
20.如下式的化合物
21.如下式的化合物
22.如下式的化合物
23.如下式的化合物
24.如下式的化合物
25.如下式的化合物
26.如下式的化合物
27.如下式的化合物
28.如下式的化合物
29.如下式的化合物
30.如下式的化合物
31.如下式的化合物
32.如下式的化合物
33.如下式的化合物
34.如下式的化合物
35.如下式的化合物
36.通式I化合物的制備方法 包括a)為了得到其中X2為-NHC(O)-的通式I化合物,使通式VI的化合物與通式VIIa表示的大環(huán)內(nèi)酯游離氨基反應(yīng),其中通式VI如下 其中L1表示離去基團(tuán),且通式VIIa如下 b)為了得到其中X2為-OC(O)-的通式I化合物,使通式VI的化合物與通式VIIb表示的大環(huán)內(nèi)酯游離羥基反應(yīng), c)為了得到其中X1為-OC(O)-、Q為-NH-且X2為-NHC(O)-的通式I化合物,使通式VIIc表示的大環(huán)內(nèi)酯 與通式VIb表示的化合物的游離氨基反應(yīng), d)為了得到其中X1為-OC(O)NH-且X2為-NHC(O)-的通式I化合物,使通式VIId表示的大環(huán)內(nèi)酯 與通式VIb表示的化合物的游離氨基反應(yīng);e)為了得到其中X1為-CH2-、Q為-NH-且X2為-NHC(O)-的通式I化合物,使通式VIIe表示的大環(huán)內(nèi)酯 與通式VI的化合物反應(yīng);f)為了得到通式I的任意L化合物,使含有離去基團(tuán)L2的通式VIIf或通式VIIg或通式VIIh表示的大環(huán)內(nèi)酯與通式VIc表示的非甾類抗炎亞單位的游離羧酸反應(yīng),其中通式VIIf、通式VIIg、通式VIIh如下 其中通式VIc如下
37.藥物組合物,包含如權(quán)利要求1的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
38.治療炎性疾病、失調(diào)和病癥的方法,所述炎性疾病、失調(diào)和病癥的特征在于不需要的炎性免疫反應(yīng)或與之相關(guān),尤其是TNF-α和IL-1過度分泌誘導(dǎo)或與之相關(guān)的疾病和病癥,該方法包括給予患有所述失調(diào)或病癥之一的對(duì)象權(quán)利要求1的化合物。
39.在需要的對(duì)象中治療與白細(xì)胞浸潤(rùn)入發(fā)炎組織相關(guān)的炎性病癥或免疫或過敏性失調(diào)的方法,包括給予所述的對(duì)象治療有效量的通式I表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
40.權(quán)利要求39的方法,其中所述的病癥或失調(diào)選自哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、支氣管炎和囊性纖維化。
41.權(quán)利要求39的方法,其中所述的炎性病癥或失調(diào)選自肺、關(guān)節(jié)、眼、腸、皮膚和心臟的炎性病癥或免疫失調(diào)。
42.權(quán)利要求39的方法,其中所述的炎性病癥或失調(diào)選自哮喘、成人呼吸窘迫綜合征、支氣管炎、囊性纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、眼色素層炎、結(jié)膜炎、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、遠(yuǎn)端直腸炎、牛皮癬、濕疹、皮炎、冠狀動(dòng)脈梗死性損害、慢性炎癥、內(nèi)毒素休克和平滑肌增生性失調(diào)。
43.減輕患病器官或組織炎癥的方法,包括將治療有效量的通式I表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物遞送至所述的器官或組織。
44.治療病毒性疾病、失調(diào)和病癥的方法,包括給予患有所述疾病或失調(diào)之一的對(duì)象有效量的權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
45.權(quán)利要求44所述的方法,其中所述的病毒性疾病為HIV。
46.減輕病毒感染的征候或癥狀或標(biāo)記的方法,包括給予存在所述征候或癥狀或標(biāo)記的對(duì)象治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
47.治療病毒感染的癥狀或征候或標(biāo)記的方法,包括給予存在所述征候或癥狀或標(biāo)記的對(duì)象治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
48.權(quán)利要求47所述的方法,其中所述的癥狀或征候選自所述對(duì)象中的病毒負(fù)荷、病毒復(fù)制、病毒活性、病毒血癥、病毒特異性抗原、病毒RNA、病毒DNA、逆轉(zhuǎn)錄酶活性、抗病毒細(xì)胞毒性細(xì)胞活性和所述對(duì)象的T-細(xì)胞或CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)。
49.治療瘤形成的癥狀或征候或標(biāo)記的方法,包括給予存在所述癥狀或征候的對(duì)象治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
50.權(quán)利要求49所述的方,其中所述瘤形成的癥狀或征候選自腫瘤負(fù)荷、腫瘤大小、患病器官重量、腫瘤復(fù)發(fā)、存活時(shí)間、對(duì)象緩解的時(shí)間長(zhǎng)度或程度、癌細(xì)胞生長(zhǎng)、癌細(xì)胞存活、編程性細(xì)胞死亡指數(shù)、轉(zhuǎn)移程度或轉(zhuǎn)移速率、與特定類型瘤形成相關(guān)的生物標(biāo)記、增殖標(biāo)記、與受體功能相關(guān)的腫瘤相關(guān)癌基因調(diào)節(jié)障礙的激活、腫瘤特異性抗原和與腫瘤相關(guān)的血管發(fā)生。
51.治療瘤形成的方法,包括給予患有瘤形成的對(duì)象治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
52.權(quán)利要求4所述的化合物,其中所述的多肽選自Gly-Phe-Leu、Gly-Gly-Phe、Gly-Phe-Phe、Gly-Phe-Gly、Gly-Leu-Gly、Gly-Val-Ala、Gly-Phe-Ala、Gly-Leu-Phe、Gly-Leu-Ala、Ala-Val-Ala、Gly-Gly-Phe-Leu、Gly-Phe-Leu-Gly、Gly-Phe-Ala-Leu、Ala-Leu-Ala-Leu、Gly-Phe-Phe-Leu、Gly-Leu-Leu-Gly、Gly-Phe-Tyr-Ala、Gly-Phe-Gly-Phe、Ala-Gly-Val-Phe和Gly-Phe-Phe-Gly。
全文摘要
本發(fā)明涉及(a)通式I表示的新化合物,其中M表示來源于具有在炎性細(xì)胞內(nèi)累積特性的大環(huán)內(nèi)酯的大環(huán)內(nèi)酯亞單位(大環(huán)內(nèi)酯部分),V表示抗炎甾類或非甾類亞單位或抗腫瘤或抗病毒亞單位,并且L表示共價(jià)連接M和V的連接基;(b)所述新化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、前體藥物和溶劑化物;(c)其制備方法和中間體;和(d)它們?cè)谥委熑撕蛣?dòng)物的炎性/腫瘤/病毒性疾病和病癥中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/585GK1665831SQ03816097
公開日2005年9月7日 申請(qǐng)日期2003年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月8日
發(fā)明者M·默塞普, M·麥西克, L·托馬斯科維克, S·馬科維克 申請(qǐng)人:普利瓦研究院有限公司