專利名稱：雷諾嗪在用于制備治療心律失常藥劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療心臟心律失常的方法，包括給予可調(diào)節(jié)特異心臟離子通道的活性的化合物，同時(shí)將不希望的副作用減至最低程度。
背景技術(shù)：
心臟本質(zhì)上是一種負(fù)責(zé)循環(huán)全身血液的泵。在正常執(zhí)行功能的心臟中，這種循環(huán)是由電脈沖的產(chǎn)生所引起，例如，其根據(jù)循環(huán)系統(tǒng)的需要增加或降低心率和/或收縮力。
可將心臟的電脈沖進(jìn)行電檢測(cè)和顯示(心電圖，EKG)，而EKG的電波形由可接受的習(xí)慣表征為“PQRST”復(fù)合波。PQRST復(fù)合波包括P波，其表示心房去極化波；QRS復(fù)合波，其表示心室去極化波；以及T波，其表示心細(xì)胞的復(fù)極化。因而，P波與心上室的活動(dòng)有關(guān)，而QRS復(fù)合波和T波均反映下室的活動(dòng)。
如果電信號(hào)以某種方式受到干擾，心臟的有效泵送作用則可能惡化，乃至完全停止。心臟的規(guī)則節(jié)律性搏動(dòng)的失調(diào)是在心臟病中所看到的最常見(jiàn)的障礙之一。不規(guī)則節(jié)律(心律失常)可以是較輕的煩擾，或可以表示嚴(yán)重的問(wèn)題。例如，心律失常可表示心肌、瓣膜、或動(dòng)脈的潛在的異常，并且包括心臟搏動(dòng)太慢(心動(dòng)過(guò)緩)的情況以及心臟搏動(dòng)太快(心動(dòng)過(guò)速)的情況。
心動(dòng)過(guò)速有兩個(gè)一般變種室上性心動(dòng)過(guò)速和室性心動(dòng)過(guò)速。
室上性心動(dòng)過(guò)速包括陣發(fā)性室上性心動(dòng)過(guò)速(PSVT)、心房纖顫、心房撲動(dòng)、AV結(jié)折返、以及沃-帕-懷綜合征(WPW)。室上性心動(dòng)過(guò)速(SVT)是一種疾病，其中穿過(guò)心臟的電脈沖是異常的，這是由于在心臟的下室之上的某處有心臟問(wèn)題。SVT可涉及140至250次/分的心律(正常為約70至80次/分)。
室性心動(dòng)過(guò)速包括室性心動(dòng)過(guò)速本身、以及心室顫動(dòng)和尖端扭轉(zhuǎn)(TdP)。室性心動(dòng)過(guò)速(VT)是在心室中產(chǎn)生的快速心律。VT傾向于打斷心室肌的有規(guī)則的收縮，因此心室的射血能力經(jīng)常顯著下降。與過(guò)度心率相結(jié)合，其可以降低在VT期間實(shí)際上由心臟泵送的血液量至危險(xiǎn)水平。因此，雖然具有VT的患者有時(shí)可以感覺(jué)相對(duì)良好，但除了普遍存在的心悸之外，他們經(jīng)常遭受極度的暈眩、喪失意識(shí)、乃至猝死。作為一般規(guī)則，VT并不發(fā)生在沒(méi)有潛在心臟病的患者中。對(duì)于患有潛在心臟病的人，下述通常是正確的左心室功能越差，產(chǎn)生威脅生命的室性心動(dòng)過(guò)速的風(fēng)險(xiǎn)就越大。
室性心動(dòng)過(guò)速可出現(xiàn)在心肌缺血狀態(tài)如不穩(wěn)定心絞痛、慢性心絞痛、變異型心絞痛、心肌梗死、急性冠狀綜合征，以及另外出現(xiàn)在心力衰竭(急性和慢性)。
有一種疾病稱作復(fù)極化的異常延長(zhǎng)、或長(zhǎng)QT間期綜合征(LQTS)，其反映于在Q波和T波(如由EKG所測(cè)量的)之間比平均間隔更長(zhǎng)的間隔。QT時(shí)間的延長(zhǎng)使患者變得易受非常迅速的、異常心律(“心律失?！?(稱作尖端扭轉(zhuǎn))的攻擊。當(dāng)心律失常發(fā)生時(shí)，沒(méi)有血液從心臟泵出，進(jìn)而腦快速得不到血液，引起突然喪失意識(shí)(暈厥)并潛在地導(dǎo)致猝死。
LQTS是由心臟離子通道的功能不良或藥物所引起。這些通道調(diào)控鉀離子、鈉離子、以及鈣離子的流動(dòng)，其流入和流出細(xì)胞產(chǎn)生心臟的電活性。具有LQTS的患者通常沒(méi)有可識(shí)別的潛在的結(jié)構(gòu)性心臟病。LQTS可以是遺傳的，在某些情況下傾向于產(chǎn)生室性心動(dòng)過(guò)速的特定變種，例如運(yùn)動(dòng)、給予某些藥劑、乃至在睡眠期間?？商鎿Q地，患者可以獲得LQTS，例如通過(guò)暴露于某些處方藥物。
LQTS的獲得形式可以由藥劑引起。例如，在用奎尼丁治療的患者中尖端扭轉(zhuǎn)(TdP)的發(fā)病率估計(jì)在2.0到8.8％的范圍內(nèi)。DL-索他洛爾與在1.8到4.8％范圍內(nèi)的發(fā)病率有關(guān)。對(duì)于更新型III類(lèi)抗心律失常藥已描述類(lèi)似的發(fā)病率，如多非利特和伊布利特。事實(shí)上，數(shù)目不斷增加的非心血管藥也已顯示出聚集和/或沉淀TdP。據(jù)報(bào)道50種以上的商業(yè)上可獲得的藥物可以引起TdP。此問(wèn)題似乎更頻繁地產(chǎn)生自新藥物而數(shù)目已從最近幾年的市場(chǎng)上推出(例如，普尼拉明、特羅地林，以及在某些國(guó)家特非那定、阿司咪唑和西沙必利)。研究已表明，藥物誘發(fā)性TdP主要由于復(fù)極化分散的增加的結(jié)果而感染，其從屬于心室心肌的固有電異質(zhì)性的增大。
大多數(shù)能夠產(chǎn)生延長(zhǎng)復(fù)極化和獲得性LQTS的藥劑分類(lèi)成主要通過(guò)四種不同機(jī)制之一進(jìn)行作用(1)K電流IKs和IKr之一或兩者的延遲，實(shí)例是奎尼丁、N-乙酰普魯卡因酰胺、銫、索他洛爾、溴芐銨、氯非銨、以及其他新型III類(lèi)抗心律失常藥(此作用可以被活化K通道的藥物特異地拮抗，如吡那地爾和色滿卡林)；(2)抑制Ito，如在4-氨基吡啶的情況下，其顯示出延長(zhǎng)復(fù)極化和誘導(dǎo)EADs，優(yōu)先在犬心包下M細(xì)胞中，據(jù)報(bào)道其具有顯著的Ito；(3)ICa的增加，如在Bay K 8644的情況下(這種作用可由鈣通道阻滯劑所逆轉(zhuǎn))；(4)INa失活的延遲，如在烏頭堿、藜蘆定、蛙毒素、DPI、以及?？舅?ATX)、anthopleurin-A(AP-A)和ATX-II的情況下(此作用可以被阻斷INa、和/或緩慢滅活鈉電流的藥物所拮抗，如利多卡因和美西律)。由于這些藥物(例如，利多卡因和美西律)可以縮短延長(zhǎng)的復(fù)極化，因而它們也可以抑制由最初的兩種機(jī)制所誘導(dǎo)的EADs。
引起LQTS和TdP的藥物清單正持續(xù)地增加。照字義，任何可以延長(zhǎng)QT的藥劑都可以誘導(dǎo)LQTS。TdP的發(fā)病率還未與藥物的血漿濃度相聯(lián)，已知其促使這種心律失常。然而，高血漿濃度，起因于這些藥物中一些藥物的過(guò)量或降低的代謝，可以增加促使TdP的風(fēng)險(xiǎn)。這種降低的代謝可起因于伴隨使用其他干擾細(xì)胞色素P450酶的藥物。據(jù)報(bào)道干擾與TdP相關(guān)的某些藥物代謝的藥物包括內(nèi)吸收的酮康唑和結(jié)構(gòu)上類(lèi)似藥物(氟康唑、伊曲康唑、甲硝唑)；5-羥色胺重?cái)z取抑制劑(氟西汀、氟伏沙明、舍曲林)、以及其他抗抑郁藥(奈法唑酮)、人免疫缺陷病毒(HIV)蛋白酶抑制劑(茚地那韋、利托那韋、沙奎那韋)；二氫吡啶鈣通道阻滯劑(非洛地平、尼卡地平、硝苯地平)和紅霉素，以及其他大環(huán)內(nèi)酯抗生素。葡萄柚和葡萄柚汁也可以通過(guò)干擾細(xì)胞色素P450酶與某些藥物相互作用。某些藥物已與TdP相聯(lián)，并不是因?yàn)樗鼈冄娱L(zhǎng)QT時(shí)間，而是因?yàn)樗鼈冎饕荘4503A4的抑制劑，并由此增加其他QT延長(zhǎng)劑的血漿濃度。最好的實(shí)例是酮康唑和伊曲康唑，其是該酶的有效抑制劑并由此在特非那定、阿司咪唑、或西沙必利治療期間引起TdP。從另一方面來(lái)說(shuō)，藥物相關(guān)TdP的發(fā)病率對(duì)于某些藥物是非常低的diphyhydramine、氟康唑、奎寧、鋰、吲達(dá)帕胺、以及加壓素。還應(yīng)該注意，TdP可以起因于在含有內(nèi)科疾病的患者中如肝功能不良或先天性LQTS、或在那些電解質(zhì)失調(diào)(特別是低鉀血癥和低鎂血癥)的患者中使用引起QT延長(zhǎng)的藥物。
然而，有一些抗心律失常藥，已知其延長(zhǎng)QT時(shí)間但并不誘導(dǎo)TdP。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，這類(lèi)藥物的共同特性是能夠同時(shí)抑制其他離子電流如INa通道、和/或ICa通道。
當(dāng)在若干基因之一中發(fā)生突變時(shí)則發(fā)生遺傳形式的LQTS，這些基因產(chǎn)生或“編碼”離子通道之一，其調(diào)控電復(fù)極化。至少有五種不同形式的遺傳LQTS，稱為L(zhǎng)QT1、LQT2、LQT3、LQT4、以及LQT5。它們最初的特點(diǎn)在于EKG軌跡的不同形狀，而其后則與特異性基因突變相聯(lián)。來(lái)自KCNQ1(KVLQT1)或KCNE1(MinK)基因突變的LQT1形式是最常見(jiàn)的，其占大約5 5-60％的基因型患者。來(lái)自HERG或KCNE2(MiRP1)突變的LQT2形式是其次，占約35-40％，而來(lái)自SCN5A突變的LQT3形式占約3-5％。具有兩種突變的患者似乎少于所有患者的1％，但當(dāng)用更新的遺傳技術(shù)研究更多的患者時(shí)這可以變化。
突變體基因引起形成異常通道，而當(dāng)這些通道不能適當(dāng)發(fā)揮作用時(shí)，心臟的電恢復(fù)則需要更長(zhǎng)的時(shí)間，其表現(xiàn)為延長(zhǎng)的QT時(shí)間。例如，在心臟鈉離子通道中氨基酸殘基1505-1507(KPQ)的遺傳性缺失，由SCN5A編碼，會(huì)引起嚴(yán)重的常染色體顯性LQT3綜合征，其與致死室性心律失常有關(guān)。在39％的LQT3患者中致死心律失常發(fā)生在睡眠或休息期間，大概由于過(guò)量后期鈉離子電流異常地延長(zhǎng)復(fù)極化，特別在低心率，由此有利于產(chǎn)生早期后除極(EADs)和異位搏動(dòng)。在中心肌中優(yōu)選減慢復(fù)極化可進(jìn)一步增強(qiáng)復(fù)極化的透壁分散并引起單向阻斷和折返性心律失常。在其他32％的LQT3患者中，致死心臟事件是由運(yùn)動(dòng)或情緒所引發(fā)。
據(jù)最近報(bào)道，心臟鈉通道基因SCN5A的變異體與非裔美國(guó)人的心律失常有關(guān)。單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SCCP)和DNA序列分析揭示了在SCN5A的密碼子1102中C到A的雜合易位，其引起酪氨酸(Y1102)取代絲氨酸(S1102)。S1102是位于細(xì)胞內(nèi)序列中的保守殘基，而細(xì)胞內(nèi)序列連接通道的域II和域III。這些研究者發(fā)現(xiàn)，Y1102等位基因增加了心律失常敏感性。研究發(fā)現(xiàn)，QTc(校正的QT)被胺碘酮顯著延長(zhǎng)，導(dǎo)致尖端扭轉(zhuǎn)室性心動(dòng)過(guò)速。
需要一種藥劑來(lái)以降低心律失常和TdP風(fēng)險(xiǎn)的方式治療或預(yù)防遺傳性或獲得性LQTS。先前已證明雷諾嗪是治療心絞痛的有效藥劑，其對(duì)心率或血壓不會(huì)帶來(lái)或帶來(lái)最小程度的影響。現(xiàn)在意外地，我們發(fā)現(xiàn)雷諾嗪及其相關(guān)化合物是預(yù)防和/或治療遺傳性或獲得性心律失常的有效藥劑。
意外地，我們發(fā)現(xiàn)，抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道的化合物呈現(xiàn)這種優(yōu)選的活性范圍。這樣的化合物可延長(zhǎng)室性動(dòng)作電位時(shí)程，增加心室有效不應(yīng)期，降低TDR，增加APD，并且不會(huì)產(chǎn)生EADs。例如，雷諾嗪，其已知可用于治療心絞痛和充血性心力衰竭，已發(fā)現(xiàn)借助于其在并不阻斷鈣通道的劑量水平可以抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道的能力可用于治療室性心動(dòng)過(guò)速。這是特別意想不到的，因?yàn)槊绹?guó)專利第4,567,264號(hào)(其結(jié)合于此作為參考)披露了雷諾嗪是抑制鈣離子通道的心選擇性藥物，并且提出由于其阻斷鈣通道的效應(yīng)它可以用于治療包括心律失常的許多疾病狀態(tài)。然而，我們已發(fā)現(xiàn)，雷諾嗪在對(duì)鈣通道具有很小或沒(méi)有影響的水平起有效抗心律失常藥的作用。這種在治療量水平對(duì)鈣通道活性沒(méi)有或最低程度的影響是有利的，因?yàn)樗梢韵娝苤拟}離子通道抑制劑的效應(yīng)(例如，血壓的變化)，當(dāng)治療患者的心律失常時(shí)這些效應(yīng)是不需要的。我們還發(fā)現(xiàn)，雷諾嗪可以有效地抑制EADs和引發(fā)的活性，其是給予藥物的副作用，如奎尼丁和索他洛爾。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供新穎和有效的治療VT的方法，其重建竇性心律同時(shí)實(shí)際上沒(méi)有不希望的副作用，如平均動(dòng)脈壓、血壓、心率的變化，或其他有害效應(yīng)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供治療哺乳動(dòng)物心律失常的有效方法。相應(yīng)地，在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療哺乳動(dòng)物心律失常的方法，包括給予治療量的化學(xué)式I的化合物 化學(xué)式I其中R1、R2、R3、R4以及R5每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氰基、三氟甲基、鹵基(halo)、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫?；⒌图?jí)烷基磺?；⒒騈-可選取代的烷基酰氨基，若R1是甲基，則R4不是甲基；或R2和R3一起形成-OCH2O-；R6、R7、R8、R9以及R10每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)?；被驶谆?、氰基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫?；?、低級(jí)烷基磺?；?、或二低級(jí)烷基氨基；或R6和R7一起形成-CH＝CH-CH＝CH-；或
R7和R8一起形成-O-CH2O-；R11和R12每個(gè)獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；以及W是氧或硫；或其異構(gòu)體、或化學(xué)式I的化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽或酯。
優(yōu)選的化合物是雷諾嗪，其命名為N-(2，6-二甲基苯基)-4-[2-羥基-3-(2-甲氧基苯氧基)丙基]-1-哌嗪乙酰胺{也稱為1-[3-(2-甲氧基苯氧基)-2-羥基丙基]-4-[(2，6-二甲基苯基)-氨羰基甲基]-哌嗪}，作為外消旋混合物、或其異構(gòu)體、或其藥用鹽。它優(yōu)選在抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道但不抑制鈣通道或其他離子通道的劑量水平給予。雷諾嗪，作為外消旋混合物或異構(gòu)體，可以配制成游離堿或藥用鹽。如果配制成藥用鹽，則二氫氯化物鹽是優(yōu)選的。
在第二個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第三個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療哺乳動(dòng)物心律失常的方法，包括以抑制后期INa離子通道的劑量水平給予雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。優(yōu)選的是治療量，其抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道。更優(yōu)選的是治療量，其抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道但不抑制鈣通道。
在一個(gè)優(yōu)選具體實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物以一種方式給予，該方式提供至少350±30ng/mL的化學(xué)式I的化合物的血漿水平，時(shí)間至少為12小時(shí)。
在第二個(gè)優(yōu)選具體實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物作為緩釋劑型給予，其將化學(xué)式I的化合物的血漿濃度維持在小于4000ng/mL的最大值，優(yōu)選在約350至約4000ng堿/mL之間，時(shí)間至少為12小時(shí)。
在第三個(gè)優(yōu)選具體實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物以一種劑型給予，該劑型含有約10mg和700mg之間的化學(xué)式I的化合物?；瘜W(xué)式I的優(yōu)選化合物是雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
在第四個(gè)優(yōu)選具體實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物以一種劑型給予，該劑型提供每升該劑型約1至約30微摩爾的劑量水平。優(yōu)選的是給予一種劑型，其提供每升該劑型約1至約10微摩爾的劑量水平。
在第四個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種預(yù)防哺乳動(dòng)物心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第五個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療哺乳動(dòng)物心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第六個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療獲得性心律失常(由處方藥物或其他化學(xué)藥品引起的心律失常)的方法，包括將有效治療量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。優(yōu)選地，將劑型給予由于對(duì)奎尼丁的敏感性而患有心律失常的哺乳動(dòng)物。
在第七個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種預(yù)防獲得性心律失常(由對(duì)處方藥物或其他化學(xué)藥品的敏感性所引起的心律失常)的方法，包括將有效治療量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第八個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療遺傳性心律失常(由基因突變引起的心律失常)的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第九個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種預(yù)防遺傳性心律失常(由基因突變引起的心律失常)的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在患有遺傳決定的先天性LQTS的哺乳動(dòng)物中預(yù)防心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在患有遺傳決定的先天性LQTS的哺乳動(dòng)物中治療心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十二個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種預(yù)防尖端扭轉(zhuǎn)的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十三個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在受LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中預(yù)防心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十四個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在受LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中治療心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十五個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在受LQT1、LQT2、以及LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中預(yù)防心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十六個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在受LQT1、LQT2、以及LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中治療心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十七個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在受LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中減輕心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十八個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在受LQT1、LQT2、以及LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中減輕心律失常的方法，包括將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物。
在第十九個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種預(yù)防心律失常的方法，包括對(duì)適當(dāng)群體篩選SCN5A基因突變并將有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或其藥用鹽給予受這種基因突變折磨的患者。對(duì)于SCN5A基因突變而言，優(yōu)選的適當(dāng)群體是那部分不具有鈉通道的正常功能的群體。
在第二十個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療哺乳動(dòng)物室性心動(dòng)過(guò)速同時(shí)將不希望的副作用減至最低程度的方法。
在第二十一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療哺乳動(dòng)物室性心動(dòng)過(guò)速(其由于藥物治療的結(jié)果而產(chǎn)生)的方法，包括在給予引起TdP(作為副作用)的藥物之前、之后、或同時(shí)，給予治療量的抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道的化合物。優(yōu)選地，將劑型給予由于對(duì)奎尼丁或索他洛爾的敏感性而患有心律失常的哺乳動(dòng)物。
在第二十二個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在心臟受損的哺乳動(dòng)物中治療室性心動(dòng)過(guò)速的方法，包括在抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道但不抑制鈣通道的劑量水平給予治療量的化學(xué)式I的化合物。
在第二十三個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療心律失?；蚴倚孕膭?dòng)過(guò)速的方法，其是通過(guò)以一種方式給予作為大丸劑的化學(xué)式I的化合物，該方式提供至少350±30ng/mL的化學(xué)式I的化合物的血漿水平，時(shí)間至少為12小時(shí)。
在第二十四個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療心律失常或室性心動(dòng)過(guò)速的方法，其是通過(guò)以一種方式給予作為緩釋劑型的化學(xué)式I的化合物，其將化學(xué)式I的化合物的血漿水平維持在小于4000ng/mL的最大值，優(yōu)選在約350至約4000ng堿/mL之間，時(shí)間至少為12小時(shí)。
在第二十五個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療心律失常的方法，其中化學(xué)式I的化合物或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽或酯是通過(guò)大丸劑或緩釋組合物給予。
在第二十六個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療心律失常的方法，其中化學(xué)式I的化合物或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽或酯是靜脈內(nèi)給予。
在第二十七個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種將化學(xué)式I的化合物或其異構(gòu)體、或化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽或酯用于治療哺乳動(dòng)物的心律失常。
在第二十八個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種治療室性心動(dòng)過(guò)速的方法，其出現(xiàn)在心肌缺血狀態(tài)如不穩(wěn)定心絞痛、慢性心絞痛、變異型心絞痛、心肌梗死、急性冠狀綜合征，以及另外出現(xiàn)在心力衰竭(急性和慢性)中。
縮寫(xiě)詞APD動(dòng)作電位時(shí)程BCL基礎(chǔ)周長(zhǎng)EAD早期后除極ECG和EKG心電圖IKr快速鉀通道整流電流IKs慢速鉀通道整流電流INa，L后期鈉通道電流epi cells心外膜細(xì)胞endo cells心內(nèi)膜細(xì)胞LQTS長(zhǎng)QT間期綜合征M cells來(lái)源于心臟的中心肌區(qū)域的細(xì)胞
RMP靜息膜電位TdP尖端扭轉(zhuǎn)TDR復(fù)極化的透壁分散VT室性心動(dòng)過(guò)速
圖1是來(lái)自傳導(dǎo)系統(tǒng)的假設(shè)動(dòng)作電位和產(chǎn)生它的電流的時(shí)間進(jìn)程之間的關(guān)系。
圖2是正常搏動(dòng)傳播。
圖3是在犬左心室肌細(xì)胞中雷諾嗪對(duì)延遲整流電流(IKr)的快速活化成分的影響。A在250msec脈沖至30mV期間記錄的典型的電流軌跡，其是從-40mV的保持電勢(shì)，然后在雷諾嗪(50μM)之前和之后復(fù)極化回到-40mV。細(xì)胞浸在含有5μM硝苯地平的蒂羅德溶液中。B雷諾嗪對(duì)IKr的抑制效應(yīng)的濃度-反應(yīng)曲線。IKr被測(cè)量為在250msec去極化脈沖至30mV之后、復(fù)極化至-40mV時(shí)的尾電流(n＝5-8)。
圖4是雷諾嗪抑制延遲整流電流(IKs)的慢速活化成分。A典型的IKs電流軌跡，記錄自對(duì)犬左心室心外膜肌細(xì)胞所做的典型實(shí)驗(yàn)，在存在和存在100μM雷諾嗪的情況下。電流的誘發(fā)是從-50mV的保持電勢(shì)通過(guò)去極化步驟至30mV時(shí)間為3sec，接著復(fù)極化步驟至0mV(4.5sec)。IKs被測(cè)量為在復(fù)極化步驟以后記錄的尾電流。雷諾嗪(100μM)幾乎完全阻斷IKs而抑制效應(yīng)在沖洗時(shí)被完全逆轉(zhuǎn)。B雷諾嗪對(duì)IKs(測(cè)量為在3sec去極化步驟至30mV之后、復(fù)極化步驟至0mV所誘發(fā)的尾電流)的抑制效應(yīng)的濃度-反應(yīng)曲線(n＝5-14)，在有5μM E-4031和5μM硝本地平的情況下。數(shù)值表示歸一化尾電流的平均值±標(biāo)準(zhǔn)平均誤差。雷諾嗪抑制IKs，其中IC50為13.4μM。
圖5是雷諾嗪不影響犬心室肌細(xì)胞中的IK1。A示出的是典型的電流軌跡，其是在暴露于雷諾嗪(100μM)之前和之后、在從-40mV的保持電勢(shì)電壓步驟至900msec試驗(yàn)電勢(shì)(在-100和0mV之間)期間所記錄。B穩(wěn)定狀態(tài)I-V關(guān)系，通過(guò)標(biāo)出在900msec脈沖端點(diǎn)測(cè)量的電流水平所繪制而成，其是作為試驗(yàn)電壓的函數(shù)。高達(dá)100μM濃度的雷諾嗪并不改變IK1。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)平均誤差(n＝6)。
圖6是在基礎(chǔ)周長(zhǎng)(BCL)為2000msec([K+]0＝4mM)的情況下雷諾嗪對(duì)心外膜和M細(xì)胞動(dòng)作電位的影響。A示出的是重疊跨膜動(dòng)作電位，在基線條件下和在加入逐漸更高濃度的雷諾嗪(1-100μM)以后所記錄。B和C曲線圖標(biāo)出雷諾嗪對(duì)動(dòng)作電位時(shí)程的濃度依賴效應(yīng)(APD50和APD90)。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。*-p＜0.05，與對(duì)照比較。
圖7是在基礎(chǔ)周長(zhǎng)為500msec([K+]0＝4mM)的情況下雷諾嗪對(duì)心外膜和M細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程(APD50和APD90)的影響。曲線圖標(biāo)出雷諾嗪對(duì)動(dòng)作電位時(shí)程(APD50和APD90)的濃度依賴效應(yīng)。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。*-p＜0.05，與對(duì)照比較。
圖8是雷諾嗪對(duì)動(dòng)作電位(Vmax)的上升支的上升速率的影響。示出的是重疊動(dòng)作電位(B)和相應(yīng)的微分上升支(dV/dt，A)，在基線條件下和在存在10和100μM雷諾嗪的情況下所記錄(BCL＝500msec)。C雷諾嗪對(duì)降低Vmax的影響的濃度-反應(yīng)關(guān)系曲線。
圖9是在基礎(chǔ)周長(zhǎng)為2000msec以及[K+]0＝2mM的情況下所記錄的雷諾嗪對(duì)心外膜和M細(xì)胞動(dòng)作電位的影響。A示出的是重疊跨膜動(dòng)作電位，在不存在和存在雷諾嗪(1-100μM)的條件下所記錄。B和C曲線圖標(biāo)出雷諾嗪對(duì)動(dòng)作電位時(shí)程(APD50和APD90)的濃度依賴效應(yīng)。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。*-p＜0.05，與對(duì)照比較。
圖10是在基礎(chǔ)周長(zhǎng)為500msec([K+]0＝2mM)的情況下雷諾嗪對(duì)心外膜和M細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程(APD50和APD90)的影響。曲線圖標(biāo)出雷諾嗪對(duì)動(dòng)作電位時(shí)程(APD50和APD90)的濃度依賴效應(yīng)。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。*-p＜0.05，與對(duì)照比較。
圖11是從上到下，每個(gè)圖片顯示ECG軌跡和跨膜動(dòng)作電位，在基礎(chǔ)周長(zhǎng)(BCL)為2000msec的情況下記錄自動(dòng)脈灌注的犬左心室楔標(biāo)本的中心肌(M區(qū)域)和心外膜(Epi)。重疊信號(hào)描述基線條件(對(duì)照)和在1-100μM濃度范圍內(nèi)雷諾嗪的影響。A利用含有4mM KCl的蒂羅德溶液對(duì)楔進(jìn)行灌注來(lái)進(jìn)行。B利用含有2mM KCl的蒂羅德溶液來(lái)進(jìn)行。
圖12是復(fù)合數(shù)據(jù)用曲線圖說(shuō)明在暴露于雷諾嗪(1-100μM)之前和之后的APD90(Epi和M的)和QT時(shí)間值(A，C)以及APD50值(B，D)。A，B4mM KCl。C，D2mM KCl。BCL＝2000msec。
圖13是在M細(xì)胞標(biāo)本中雷諾嗪對(duì)抑制d-索他洛爾誘導(dǎo)的早期后除極(EAD)的影響。A和B重疊跨膜動(dòng)作電位，記錄自兩個(gè)M細(xì)胞標(biāo)本，在對(duì)照條件下，在有IKr阻斷(100μM d-索他洛爾)的情況下，以及在繼續(xù)有d-索他洛爾的情況下在加入逐步增加濃度的雷諾嗪(5、10、以及20μM)以后。基礎(chǔ)周長(zhǎng)＝2000msec。
圖14是雷諾嗪對(duì)后期INa的阻斷，利用穿孔膜片電壓鉗技術(shù)所記錄。ATTX敏感電流被示出，在對(duì)照溶液中(黑色軌跡)和在20μM雷諾嗪之后(紅色軌跡)。B2-8個(gè)細(xì)胞的濃度-反應(yīng)曲線簡(jiǎn)圖。
圖15是雷諾嗪對(duì)Ito的影響。電流是在100ms步驟至-10(較小的向外電流)、0、以及10mV期間進(jìn)行記錄。Ito是在對(duì)照溶液中(左，黑色軌跡)、以及在加入50uM雷諾嗪以后4min(右，紅色軌跡)進(jìn)行記錄。
圖16是雷諾嗪對(duì)Ito的影響的匯總數(shù)據(jù)，在3個(gè)試驗(yàn)電勢(shì)下，濃度為10μM(9個(gè)細(xì)胞)、20μM(9個(gè)細(xì)胞)、50uM(6個(gè)細(xì)胞)、以及100μM(7個(gè)細(xì)胞)。
圖17是歸一化Ito和雷諾嗪的影響。這些數(shù)據(jù)和圖4提供的數(shù)據(jù)相同。
圖18是頂部圖片顯示INa-Ca在對(duì)照溶液、加入100μM雷諾嗪之后4min(分鐘)、以及回到對(duì)照溶液之后(紅色軌跡)的重疊軌跡。下部圖片顯示濃度-反應(yīng)曲線。
圖19是在單個(gè)圖形中，IKr、IKs、ICa、INa，late(后期)、以及INaCa的濃度-反應(yīng)曲線。IKr、IKs、以及后期INa顯示類(lèi)似的對(duì)雷諾嗪的敏感性，而INaCa和ICa是相當(dāng)少敏感的。
圖20是雷諾嗪對(duì)浦肯野(Purkinje)纖維動(dòng)作電位的影響。A和B曲線圖標(biāo)出在BCL為500(A)和2000(B)msec情況下雷諾嗪(1-100μM)對(duì)動(dòng)作電位時(shí)程(APD50和APD90)的濃度依賴效應(yīng)。C和D重疊跨膜動(dòng)作電位，其是在BCL為500(C)和2000(D)msec情況下，在基線條件下以及在加入逐漸更高濃度的雷諾嗪之后所記錄。([K+]0＝4mM)。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。*-p＜0.05，與對(duì)照比較。
圖21是雷諾嗪對(duì)動(dòng)作電位(Vmax)的上升支的上升速率的濃度依賴效應(yīng)。示出的是重疊動(dòng)作電位(B)和相應(yīng)的微分上升支(dV/dt，A)，在不存在和存在雷諾嗪(1-100μM)的條件下所記錄(BCL＝500msec)。C雷諾嗪對(duì)降低Vmax的影響的濃度-反應(yīng)關(guān)系曲線。
圖22是在有低[K+]0的情況下雷諾嗪對(duì)浦肯野(Purkinje)纖維動(dòng)作電位的影響。A和B曲線圖標(biāo)出在BCL為500(A)和2000(B)msec情況下雷諾嗪(1-100μM)對(duì)動(dòng)作電位時(shí)程(APD50和APD90)的濃度依賴效應(yīng)。([K+]0＝3mM)。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。*-p＜0.05，與對(duì)照比較。
圖23是在浦肯野(Purkinje)纖維標(biāo)本中雷諾嗪對(duì)抑制d-索他洛爾誘導(dǎo)的早期后除極(EAD)的影響。示出的是重疊跨膜動(dòng)作電位，記錄自浦肯野纖維標(biāo)本，在有IKr阻斷(100μM d-索他洛爾)的情況下，以及在繼續(xù)有d-索他洛爾的情況下在加入逐步增加濃度的雷諾嗪(5以及10μM)以后?；A(chǔ)周長(zhǎng)＝8000msec。
圖24A和B是索他洛爾的全部電生理數(shù)據(jù)。示出的是索他洛爾對(duì)右和左心室ERP的影響，單位是ms。
圖25A和B是索他洛爾的全部電生理數(shù)據(jù)。示出的是索他洛爾對(duì)QT時(shí)間和QRS時(shí)間的影響，單位是ms。
圖26是雷諾嗪的全部電生理數(shù)據(jù)。示出的是雷諾嗪對(duì)右和左心室ERP的影響，單位是ms。
圖27是雷諾嗪的全部電生理數(shù)據(jù)。示出的是雷諾嗪對(duì)平均ERP-LV的影響。
圖28是雷諾嗪的全部電生理數(shù)據(jù)。示出的是雷諾嗪對(duì)QT時(shí)間的影響，單位是ms。
圖29是雷諾嗪的全部電生理數(shù)據(jù)。示出的是雷諾嗪對(duì)QRS時(shí)間的影響。
圖30是雷諾嗪對(duì)后期INa的阻斷，利用動(dòng)作電位電壓鉗技術(shù)所記錄。ATTX敏感電流被示出，在對(duì)照溶液中和在20μM雷諾嗪之后。測(cè)量是在兩個(gè)光標(biāo)(cursors)處進(jìn)行，對(duì)應(yīng)于電壓20mV和-28mV。在20mV抑制最大，但在存在雷諾嗪的情況下，在-28mV仍然有一些TTX敏感電流。在存在雷諾嗪的情況下，在動(dòng)作電位初期也仍然有TTX敏感電流。
圖31是雷諾嗪對(duì)INa，late的阻斷。BCL＝2000ms。濃度-反應(yīng)曲線的簡(jiǎn)圖。誤差線條(error bars)是±標(biāo)準(zhǔn)平均誤差，細(xì)胞數(shù)目為3-11個(gè)細(xì)胞。
圖32是雷諾嗪對(duì)INa，late的阻斷。BCL＝300ms。濃度-反應(yīng)曲線的簡(jiǎn)圖。誤差線條是±標(biāo)準(zhǔn)平均誤差，細(xì)胞數(shù)目為6-10個(gè)細(xì)胞。
圖33是在慢和快速刺激下雷諾嗪對(duì)INa，late的影響的簡(jiǎn)化數(shù)據(jù)。誤差線條是±標(biāo)準(zhǔn)平均誤差，細(xì)胞數(shù)目為6-12個(gè)細(xì)胞。
圖34是在3、10、以及30μmol/L的條件下，雷諾嗪對(duì)肌細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程的影響。
圖35是在30μmol/L的條件下，雷諾嗪對(duì)肌細(xì)胞的影響，其首先在2Hz(赫茲)、然后在0.5Hz進(jìn)行起搏。
圖36是在不存在和存在3、10、以及30μmol/L雷諾嗪的情況下測(cè)量的APD50和APD90的比較，起搏頻率為0.5、1以及2Hz。
圖37是雷諾嗪的影響，在各種起搏頻率下縮短APD50和APD90。歸一化為對(duì)照的百分?jǐn)?shù)。
圖38是在5μmol/L時(shí)奎尼丁對(duì)肌細(xì)胞的動(dòng)作電位時(shí)程的影響，在0.25Hz下起搏。在10μmol/L下雷諾嗪減弱奎尼丁的影響。
圖39是奎尼丁和/或雷諾嗪對(duì)EADs的影響。研究發(fā)現(xiàn)，10μmol/L的雷諾嗪有效抑制奎尼丁誘導(dǎo)的EADs。
圖40是奎尼丁和/或雷諾嗪對(duì)觸發(fā)激動(dòng)的影響。研究發(fā)現(xiàn)，10μmol/L的雷諾嗪有效抑制奎尼丁誘導(dǎo)的觸發(fā)激動(dòng)。
圖41是在1、3、10、以及30μmol/L下ATXII和/或雷諾嗪對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞中動(dòng)作電位時(shí)程的影響。
圖42是在1、3、10、以及30μmol/L下ATXII和/或雷諾嗪對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞中動(dòng)作電位時(shí)程的影響。在低到1μmol/L的濃度雷諾嗪有效地消除ATXII誘導(dǎo)的EADs和觸發(fā)激動(dòng)。
圖43是在1、3、10、以及30μmol/L下ATXII和/或雷諾嗪對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞中動(dòng)作電位時(shí)程的影響。在低到1μmol/L的濃度雷諾嗪有效地消除ATXII誘導(dǎo)的EADs和觸發(fā)激動(dòng)。
圖44是在1、3、10、以及30μmol/L下ATXII和/或雷諾嗪對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞中動(dòng)作電位時(shí)程的影響。在低到1μmol/L的濃度雷諾嗪有效地消除ATXII誘導(dǎo)的EADs和觸發(fā)激動(dòng)。
圖45是在1、3、10、以及30μmol/L下ATXII和/或雷諾嗪對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞中動(dòng)作電位時(shí)程的影響。在低到1μmol/L的濃度雷諾嗪有效地消除ATXII誘導(dǎo)的EADs和觸發(fā)激動(dòng)。
圖46是在1、3、10、以及30μmol/L下ATXII和/或雷諾嗪對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞中動(dòng)作電位時(shí)程的影響。在低到1μmol/L的濃度雷諾嗪有效地消除ATXII誘導(dǎo)的EADs和觸發(fā)激動(dòng)。
圖47是在K-H緩沖液灌注豚鼠分離的心臟模型中10μM的ATXII和雷諾嗪對(duì)誘導(dǎo)的EAD和MAP延長(zhǎng)的影響。在低到10μM的濃度雷諾嗪減少或有效地消除ATXII誘導(dǎo)的EADs和MAP延長(zhǎng)。
圖48是ATXII對(duì)VT的影響。ATXII(20nM)誘導(dǎo)VT，自發(fā)性VT和起搏誘導(dǎo)的VT。
圖49是ATXII(20nM)和雷諾嗪對(duì)誘導(dǎo)的VT的影響。在30μM的濃度雷諾嗪減少或有效地消除ATXII誘導(dǎo)的VT。
圖50是ATXII(20nM)和雷諾嗪對(duì)誘導(dǎo)的EAD和ΔMAP的影響。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供了治療、降低、或預(yù)防心律失常發(fā)病率的方法。
正常心律(竇性心律)起因于動(dòng)作電位(APs)，其是通過(guò)多個(gè)心細(xì)胞上的離子通道的高度整合電生理行為所產(chǎn)生。鈉、鈣以及鉀通道是確定心臟動(dòng)作電位形狀和時(shí)程的最重要的通道。簡(jiǎn)而言之，鈉和鈣通道的激活導(dǎo)致正電荷離子流入各個(gè)心細(xì)胞，引起膜的去極化。相反地，鉀通道的打開(kāi)允許正電荷流出這些細(xì)胞，并且在很大程度上終止動(dòng)作電位并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行復(fù)極化(圖1)。
APs在起搏點(diǎn)自它們的起點(diǎn)進(jìn)行傳播，通過(guò)竇房結(jié)，通過(guò)心房肌，然后通過(guò)房室結(jié)(AV)，通過(guò)浦肯野(Purkinje)傳導(dǎo)系統(tǒng)，以及最后到心室。
心律失常，在心臟中沖動(dòng)引發(fā)和傳播的正常順序的打斷，可以起因于原發(fā)性心血管疾病、肺障礙、自律障礙、全身性障礙、藥物相關(guān)副作用、遺傳效應(yīng)(基因突變)、或電解質(zhì)失衡。
正常竇性心律和心律失?？稍陔娦膱D(ECGs)上變得可見(jiàn)。ECG電位變化的圖形軌跡，其是由心肌的興奮所引起并在身體表面進(jìn)行檢測(cè)。從心電圖可以測(cè)量心率；PR間隔時(shí)間(intervalduration)，其反映V結(jié)傳導(dǎo)時(shí)間；QRS時(shí)程，其反映在心室中的傳導(dǎo)時(shí)間；以及QT時(shí)間，其是室性動(dòng)作電位時(shí)程的測(cè)量。在竇性心律期間產(chǎn)生的ECG的圖像示于圖2。
室性心動(dòng)過(guò)速是由增強(qiáng)的自發(fā)節(jié)律性、后除極以及觸發(fā)的自律性和折返所引起。增強(qiáng)的自發(fā)節(jié)律性發(fā)生在通常顯示自發(fā)的舒張期去極化的細(xì)胞中。B-adreneric刺激、低鉀血癥、以及心肌細(xì)胞的機(jī)械牽張可增加4期斜率并因而加速起搏點(diǎn)速率，而乙酰膽堿通過(guò)降低4期斜率和通過(guò)超極化可降低起搏點(diǎn)速率。當(dāng)沖動(dòng)從增強(qiáng)的正常或異常自發(fā)節(jié)律性區(qū)域傳播以刺激其余的心臟心律失常結(jié)果。
后除極和觸發(fā)的自律性發(fā)生在某些病理生理?xiàng)l件下，其中正常心臟動(dòng)作電位被打斷或繼之以異常去極化。如果這種異常去極化達(dá)到閾值，它又可以產(chǎn)生次級(jí)上升支，然后其可以傳播并產(chǎn)生異常節(jié)律。這些異常次級(jí)上升支僅發(fā)生在初始正常、或“觸發(fā)”上升支以后，因而稱為觸發(fā)節(jié)律。公認(rèn)有兩種主要形式的觸發(fā)節(jié)律(1)延遲后除極(DAD)，其可以發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)鈣過(guò)載條件下(心肌缺血、腎上腺素能應(yīng)激等等)。如果這種后極化達(dá)到閾值，則可以發(fā)生次級(jí)觸發(fā)搏動(dòng)或多次搏動(dòng)，以及；(2)當(dāng)心臟動(dòng)作電位有明顯的延長(zhǎng)時(shí)早期后除極(EADs)經(jīng)常發(fā)生。當(dāng)此發(fā)生時(shí)，3期復(fù)極化可以被EAD打斷。當(dāng)潛在的心律較慢、細(xì)胞外K+較低、以及存在某些延長(zhǎng)動(dòng)作電位時(shí)程的藥物時(shí)，體外EAD中介觸發(fā)和臨床心律失常是最常見(jiàn)的。EADs起因于動(dòng)作電位的復(fù)極化階段凈向內(nèi)電流的增加。
TdP是用許多不同類(lèi)型藥物進(jìn)行治療時(shí)常見(jiàn)和嚴(yán)重的副作用；并且可以由EADs和作為結(jié)果而產(chǎn)生的觸發(fā)所引起。然而，有其他測(cè)量TdP風(fēng)險(xiǎn)的疾病，包括低鉀血癥、低鎂血癥、低鈣血癥、高度房室傳導(dǎo)阻滯、先天性障礙、以及重度心動(dòng)過(guò)緩。
長(zhǎng)QT間期綜合征(LQTS)是由心臟細(xì)胞中蛋白結(jié)構(gòu)(稱作離子通道)的功能不良所引起。這些通道調(diào)控離子的流動(dòng)，如鉀、鈉、以及鈣分子。這些離子流入和流出細(xì)胞可產(chǎn)生心臟的電效能。這些通道的異?？梢允谦@得性的或遺傳的。獲得性形式通常由處方藥物引起。
當(dāng)在若干基因之一中發(fā)生突變時(shí)，則發(fā)生遺傳形式，這些基因產(chǎn)生或“編碼”離子通道之一，其調(diào)控電復(fù)極化。突變體基因產(chǎn)生要形成的異常通道，而當(dāng)這些異常通道不像正常通道那樣有效時(shí)，心臟的電恢復(fù)則需要更長(zhǎng)的時(shí)間。這在心電圖(ECG、EKG)上表現(xiàn)為延長(zhǎng)的QT時(shí)間。QT延長(zhǎng)使心臟易受多形VTs的攻擊，其中的一種是快速、異常的心律，稱作“尖端扭轉(zhuǎn)”。
先天性LQTS是由6種基因中至少一種基因的突變所引起。
*KVLQT1的新穎突變的純合載體具有耶-蘭綜合征。KVLQT1和MinK共同裝配以形成IKs通道。
列于上表的LQT疾病和離子通道對(duì)于獲得性LQTS和對(duì)于遺傳LQTS是相同的。
應(yīng)該注意到，如果在哺乳動(dòng)物中存在LQTS的遺傳或獲得性形式，并且已出現(xiàn)VT的癥狀，那么給予化學(xué)式I的化合物，尤其是雷諾嗪，可降低VT的發(fā)生和/或頻率。如果存在LQTS的遺傳或獲得性形式，但沒(méi)有VT的癥狀，那么給予化學(xué)式I的化合物，尤其是雷諾嗪，可預(yù)防VT的發(fā)作。
已知戊巴比妥鈉可以延長(zhǎng)QT時(shí)間，但也降低復(fù)極化的透壁分散。它是通過(guò)最顯著地抑制IKr、IKs和INa來(lái)實(shí)現(xiàn)。透壁分散降低表現(xiàn)為在心外膜和心內(nèi)膜細(xì)胞中比在M細(xì)胞中具有更大延長(zhǎng)的APD。戊巴比妥鈉在M細(xì)胞中還抑制d-索他洛爾誘導(dǎo)的EAD活性。因而，盡管其具有延長(zhǎng)QT的作用，但戊巴比妥并不誘導(dǎo)TdP。
已知胺碘酮可以延長(zhǎng)QT并以較低的實(shí)例誘導(dǎo)TdP。研究發(fā)現(xiàn)，胺碘酮通過(guò)在心外膜和心內(nèi)膜細(xì)胞中比在M細(xì)胞中表現(xiàn)出更大延長(zhǎng)的APD可以降低復(fù)極化的透壁分散。胺碘酮阻斷心臟中的鈉、鉀和鈣通道。當(dāng)長(zhǎng)期給予時(shí)(30-40mg/kg/天，口服30-45天)，它還抑制IKr阻滯劑d-索他洛爾誘導(dǎo)復(fù)極化的明顯分散或EAD活性的能力。
研究發(fā)現(xiàn)，在來(lái)自犬左心室的動(dòng)脈灌注的楔標(biāo)本中雷諾嗪優(yōu)先延長(zhǎng)心外膜(epc)細(xì)胞的APD90。研究發(fā)現(xiàn)在更高濃度下透壁分散的降低更顯著，因?yàn)槔字Z嗪還縮短M細(xì)胞的APD90同時(shí)延長(zhǎng)心外膜細(xì)胞的APD90。
在來(lái)自犬左心室的分離肌細(xì)胞中還進(jìn)行了試驗(yàn)以確定是否雷諾嗪誘導(dǎo)EADs以及雷諾嗪對(duì)后期鈉電流和鈣電流的作用是否能夠拮抗浦肯野(Purkinje)纖維中d-索他洛爾進(jìn)行的EAD誘導(dǎo)。在存在雷諾嗪的情況下沒(méi)有觀察到EADs。研究發(fā)現(xiàn)。雷諾嗪在低到5微摩爾/L的濃度可以抑制d-索他洛爾誘導(dǎo)的EADs。
還發(fā)現(xiàn)雷諾嗪阻斷鈣通道，但這是在遠(yuǎn)高于藥物治療濃度(～2至8μM)的濃度(296微摩爾/L)下進(jìn)行的。
因而，即使雷諾嗪表現(xiàn)出延長(zhǎng)的QT時(shí)間，它不會(huì)誘導(dǎo)EADs或TdP。
因?yàn)槔字Z嗪可以引起延長(zhǎng)的QT時(shí)間，因而雷諾嗪可以增加心室肌細(xì)胞的APD時(shí)程。表面EKG的QT時(shí)間反映心室復(fù)極化的時(shí)程。
研究發(fā)現(xiàn)，雷諾嗪降低了豚鼠肌細(xì)胞的APD(在沖洗時(shí)可逆轉(zhuǎn))。還發(fā)現(xiàn)在有奎尼丁的情況下雷諾嗪可以降低APD。已知奎尼丁可以觸發(fā)EADs或TdP。研究發(fā)現(xiàn)雷諾嗪抑制奎尼丁誘導(dǎo)的EADs和其他觸發(fā)激動(dòng)。
ATXII(海葵毒素)可以放慢鈉通道開(kāi)放狀態(tài)的失活，觸發(fā)EADs，延長(zhǎng)QT時(shí)間，以及在復(fù)極化的透壁分散中引起急速上升，這是由于在M細(xì)胞中APD更大延長(zhǎng)的的結(jié)果。數(shù)據(jù)表明，在有ATXII的情況下雷諾嗪引起APD的減少。因而，雷諾嗪抑制由ATXII誘導(dǎo)的EADs。ATXII是鈉離子激活劑，其與LTQ3綜合征(其導(dǎo)致TdP)極為相似。因而，雷諾嗪并不導(dǎo)致TdP，而是抑制由ATX引起的TdP。
定義如在本說(shuō)明書(shū)中所使用的，下述單詞和詞組一般具有如以下所述的含義，除非它們?cè)谄渲惺褂玫纳舷挛闹斜硎酒渌x。
“氨羰基甲基”指具有以下結(jié)構(gòu)的基團(tuán) 其中A表示連接點(diǎn)。
“鹵基”或“鹵素”指氟基、氯基、溴基、或碘基。
“低級(jí)?；敝妇哂幸韵陆Y(jié)構(gòu)的基團(tuán) 其中R是如本文所定義的低級(jí)烷基，而A表示連接點(diǎn)，并且包括這樣的基團(tuán)，如乙?；?、丙酰基、正丁?；鹊?。
“低級(jí)烷基”指1-4個(gè)碳的無(wú)支鏈的飽和烴鏈，如甲基、乙基、正丙基、以及正丁基。
“低級(jí)烷氧基”指-OR基團(tuán)，其中R是如本文所定義的低級(jí)烷基。
“低級(jí)烷基硫”指-SR基團(tuán)，其中R是如本文所定義的低級(jí)烷基。
“低級(jí)烷基亞硫酰基”指以下化學(xué)式的基團(tuán) 其中R是如本文所定義的低級(jí)烷基，而A表示連接點(diǎn)。
“低級(jí)烷基磺?；敝敢韵禄瘜W(xué)式的基團(tuán) 其中R是如本文所定義的低級(jí)烷基，而A表示連接點(diǎn)。
“N-可選取代的烷基酰氨基”指具有以下結(jié)構(gòu)的基團(tuán) 其中R獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基而R′是如本文所定義的低級(jí)烷基，以及A表示連接點(diǎn)。
術(shù)語(yǔ)“藥物”指處方藥物以及非處方藥物和所有的藥劑。
“異構(gòu)體”指具有相同原子質(zhì)量和原子序數(shù)但具有一種或多種不同物理或化學(xué)性能的化合物?；瘜W(xué)式I的化合物的所有異構(gòu)體都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
“可選的”或“可選地”指隨后描述的事件或情況可能發(fā)生或可能不發(fā)生，并且該描述包括其中所述事件或情況發(fā)生的例子以及不發(fā)生的例子。
術(shù)語(yǔ)“治療有效量”指化學(xué)式I的化合物的量，當(dāng)給予需要這類(lèi)治療的哺乳動(dòng)物時(shí)，其足以達(dá)到治療目的，如下面所定義。治療有效量會(huì)隨受治療者和要治療的疾病狀態(tài)、受治療者的體重和年齡、疾病狀態(tài)的嚴(yán)重程度、給藥方式等等不同而不同，其對(duì)該領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，很容易加以確定。
術(shù)語(yǔ)“治療”或“處理”指對(duì)哺乳動(dòng)物疾病的任何治療，包括(i)預(yù)防疾病，即，使引起疾病的臨床癥狀不顯現(xiàn)；(ii)抑制疾病，即，阻止臨床癥狀的發(fā)展；和/或(iii)緩解疾病，即，使臨床癥狀消退。
心律失常指任何異常心率。心動(dòng)過(guò)緩指異常緩慢的心率而心動(dòng)過(guò)速指異?？焖俚男穆?。如在本文所使用的，心律失常的治療包括治療室上性心動(dòng)過(guò)速如心房纖顫、心房撲動(dòng)、AV結(jié)折返性心動(dòng)過(guò)速、房性心動(dòng)過(guò)速，和室性心動(dòng)過(guò)速(VTs)，包括特發(fā)性室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)、預(yù)激綜合征、以及尖端扭轉(zhuǎn)(TdP)。
竇性心律指正常心率。
術(shù)語(yǔ)“心臟受損哺乳動(dòng)物”指具有心臟病理性疾病狀態(tài)的哺乳動(dòng)物，例如，心絞痛、充血性心力衰竭、缺血等等。
在許多情況下，由于存在氨基和/或羧基或類(lèi)似的基團(tuán)，本發(fā)明的化合物可以形成酸式和/或堿式鹽。術(shù)語(yǔ)“藥用鹽(藥學(xué)上可接受的鹽)”是指這樣的鹽，其保留化學(xué)式I的化合物的生物功效和性能，并且其并不是在生物上或其它方面不理想的。藥用堿加成鹽可以通過(guò)無(wú)機(jī)堿和有機(jī)堿來(lái)制備。衍生自無(wú)機(jī)堿的鹽，包括，僅作為例子的，鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、和鎂鹽。衍生自有機(jī)堿的鹽，包括但不限于伯胺、仲胺、以及叔胺的鹽，例如烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、取代的烷基胺、二(取代的烷基)胺、三(取代的烷基)胺、鏈烯基胺、二鏈烯基胺、三鏈烯基胺、取代的鏈烯基胺、二(取代的烯基)胺、三(取代的烯基)胺、環(huán)烷基胺、二(環(huán)烷基)胺、三(環(huán)烷基)胺、取代的環(huán)烷基胺、二取代的環(huán)烷基胺、三取代的環(huán)烷基胺、環(huán)烯基胺、二(環(huán)烯基)胺、三(環(huán)烯基)胺、取代的環(huán)鏈烯基胺、二取代的環(huán)鏈烯基胺、三取代的環(huán)鏈烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、雜芳基胺、二雜芳基胺、三雜芳基胺、雜環(huán)胺、二雜環(huán)胺、三雜環(huán)胺、混合的二胺和三胺，其中在胺上的至少兩個(gè)取代基不同并且選自由烷基、取代的烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)鏈烯基、取代的環(huán)鏈烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)、以及類(lèi)似物組成的組。還包括下述胺，即其中兩個(gè)或三個(gè)取代基，與氨基氮一起，形成雜環(huán)基或雜芳基。
適合胺的特定實(shí)例包括，僅作為例子的如，異丙胺、三甲胺、二乙胺、三(異丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、三甲胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡堿、普魯卡因、海巴明、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、嗎啉、N-乙基哌啶以及類(lèi)似物。
藥用酸加成鹽可以通過(guò)無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸來(lái)制備。衍生自無(wú)機(jī)酸的鹽包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及類(lèi)似物的鹽。衍生自有機(jī)酸的鹽包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋(píng)果酸、丙二酸、丁二酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、苯乙醇酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸、以及類(lèi)似物的鹽。
在本文所用的“藥用載體(藥學(xué)上可接受的載體)”包括任何和所有的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑、以及類(lèi)似物。這類(lèi)在藥物活性物質(zhì)方面的介質(zhì)和藥劑的應(yīng)用是本技術(shù)領(lǐng)域所熟知的。除了在任何與活性成分不相容的常規(guī)介質(zhì)和藥劑范圍內(nèi)，可以設(shè)想其在治療組合物方面的應(yīng)用。輔助活性成分也可以結(jié)合到該組合物中。
藥物組合物和給藥本發(fā)明的化合物通常以藥物組合物的形式給予。因而本發(fā)明提供藥物組合物，其含有作為活性成分，一種或多種本發(fā)明的化合物、或其藥用鹽或酯，以及一種或多種藥用賦形劑；載體，包括惰性固態(tài)稀釋劑和填充劑；稀釋劑，包括無(wú)菌水溶液和各種有機(jī)溶劑；滲透增強(qiáng)劑；增溶劑；以及佐劑。本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)給予或與其他治療藥劑共同給予。這樣的組合物以制藥技術(shù)領(lǐng)域中公知方式進(jìn)行制備(參見(jiàn)，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences，MacePublishing Co.，Philadelphia，PA 17thEd.(1985)以及“ModernPharmaceutics”，Marcel Dekker，Inc.3rdEd.(G.S.Banker&C.T.Rhodes，Eds.))。
本發(fā)明的化合物可以通過(guò)任何具有類(lèi)似效用的可接受的給藥方式以單劑量或多劑量給予，例如，正如在那些結(jié)合于本文作為參考的專利和專利申請(qǐng)中所描述的，包括直腸、口腔、鼻內(nèi)、和經(jīng)皮途徑，通過(guò)動(dòng)脈內(nèi)注射、靜脈內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、胃腸道外給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、口服、局部給藥、作為吸入劑，或經(jīng)過(guò)浸漬或涂布裝置如支架，例如，或插入動(dòng)脈的圓柱狀聚合物。
一種給藥方式為胃腸外給藥，尤其是通過(guò)注射。本發(fā)明新型的組合物可結(jié)合于其中用于注射給藥的形式，包括水或油懸浮液、或乳濁液，采用芝麻油、玉米油、棉子油、或花生油、以及酏劑、甘露醇、右旋糖、或無(wú)菌水溶液，以及類(lèi)似的藥物載體。通常也將鹽水溶液用于注射，但在本發(fā)明中是較少優(yōu)選的。也可以使用乙醇、丙三醇、丙二醇、液態(tài)聚乙二醇、及其類(lèi)似物(以及其合適的混合物)、環(huán)糊精衍生物、和植物油。適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性可以通過(guò)如下方法來(lái)保持，例如，包衣的使用，如卵磷脂，在分散的情況下通過(guò)保持所需要的顆粒尺寸，以及通過(guò)使用表面活性劑?？赏ㄟ^(guò)使用各種抗菌劑和抗真菌劑來(lái)達(dá)成預(yù)防微生物的作用，例如，對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、乙基汞硫代水楊酸鈉、及其類(lèi)似物。
可注射的無(wú)菌溶液的制備如下在具有如上文所列舉的各種其它成分的適當(dāng)溶劑中加入所需量的化學(xué)式I的化合物，如果需要的話，接著通過(guò)過(guò)濾滅菌。一般，分散劑的制備如下將各種經(jīng)滅菌的活性成分加入無(wú)菌載體中，其包括基本的分散介質(zhì)和以上所列舉的所需的其它成分。在無(wú)菌粉末用于制備可注射無(wú)菌溶液的情況下，優(yōu)選的制備方法是采用真空干燥和冰凍干燥技術(shù)，其從先前無(wú)菌過(guò)濾的溶液產(chǎn)生活性成分粉末以及任何額外的所需成分的粉末。
口服給藥是給予化學(xué)式I的化合物的另一種途徑。給藥可通過(guò)膠囊或腸溶衣片劑、或類(lèi)似物。在制備包括化學(xué)式I的至少一種化合物的藥物組合物時(shí)，活性成分通常用賦形劑稀釋和/或封裝在這樣的載體中，以致可以呈現(xiàn)膠囊劑、小藥囊、紙、或其它包裝物形式。當(dāng)賦形劑用作稀釋劑時(shí)，它可以是固體、半固體、或液體材料(如上所述)，就活性成分而言，其起到賦形劑、載體、或介質(zhì)的作用。因此，該組合物的形式可以是片劑、丸劑、散劑、錠劑、小藥囊、扁囊劑、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液、糖漿劑、氣霧劑(作為固體或在液體介質(zhì)中)、含有例如高達(dá)10％重量活性化合物的軟膏劑、軟膠囊劑和硬膠囊劑、可注射無(wú)菌溶液、以及無(wú)菌封裝的散劑。
合適賦形劑的一些例子包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯樹(shù)膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃芪膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、無(wú)菌水、糖漿、以及甲基纖維素。配方也包括潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂、和礦物油；濕潤(rùn)劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑如羥苯甲酯和羥苯丙酯；甜味劑；以及增香劑。
通過(guò)采用本領(lǐng)域已知的方法可以配制出本發(fā)明的組合物，在對(duì)患者給藥后，可提供活性成分的快速、持續(xù)、或延緩釋放。用于口服給藥的控釋給藥系統(tǒng)包括含有聚合物涂布的貯囊或藥物-聚合物基體劑型的滲透泵系統(tǒng)和溶解系統(tǒng)?？蒯屜到y(tǒng)的實(shí)例在美國(guó)專利第3,845,770號(hào)、第4,326,525號(hào)、第4,902,514號(hào)、第5,616,345號(hào)、以及WO 0013687中給出。本發(fā)明使用方法的另一個(gè)配方采用透皮遞藥裝置(“貼劑”)。這類(lèi)透皮貼劑可用于提供本發(fā)明化合物在受控量下的連續(xù)或不連續(xù)注入。用于遞藥的透皮貼劑的結(jié)構(gòu)和使用是本領(lǐng)域熟知的。例如，參見(jiàn)美國(guó)專利第5,023,252號(hào)、第4,992,445號(hào)、和第5,001,139號(hào)。這類(lèi)貼劑構(gòu)成用于連續(xù)、脈沖、或按需要給藥。
這些組合物優(yōu)選配制成單位劑型。術(shù)語(yǔ)“單位劑型”指物理上分離的單位，適用于人類(lèi)和其它哺乳動(dòng)物的單位劑量，每個(gè)單位包括預(yù)定量的活性材料，其經(jīng)計(jì)算以產(chǎn)生所需要的治療效應(yīng)，以及合適的藥物賦形劑(例如，片劑、膠囊劑、和針劑)?；瘜W(xué)式I的化合物在寬劑量范圍內(nèi)是有效的，并且通常給予有效藥物量。優(yōu)選地，對(duì)于口服給藥而言，每劑量單位含有10mg至2g的化學(xué)式I的化合物，更優(yōu)選的是10至700mg，而對(duì)于胃腸外給藥來(lái)說(shuō)，優(yōu)選的是10至700mg的化學(xué)式I的化合物，更優(yōu)選的是約50至200mg。然而，需要理解的是，實(shí)際給予的化學(xué)式I的化合物的量將由醫(yī)生根據(jù)相關(guān)的情況決定，包括要治療的疾病、選擇的給藥途徑、給予的實(shí)際化合物及其相對(duì)活性、每個(gè)患者的年齡、體重和反應(yīng)、患者癥狀的嚴(yán)重程度以及類(lèi)似情況。
為了制備片劑這樣的固體組合物，主要的活性成分與藥物賦形劑混合形成含有本發(fā)明化合物的均相混合物的固體預(yù)制劑組合物。當(dāng)提到這些預(yù)制劑組合物為均相時(shí)，它是指活性成分均勻地分散到整個(gè)組合物中，從而使該組合物可以容易地細(xì)分成等效的單位劑型，如片劑、丸劑、和膠囊劑。
本發(fā)明的片劑或丸劑可以進(jìn)行包衣或通過(guò)其它方式進(jìn)行混合以提供劑型，其具有作用時(shí)間長(zhǎng)，或保護(hù)免受胃的酸性條件的作用的優(yōu)點(diǎn)。例如，片劑或丸劑可包括內(nèi)部劑量成分和外部劑量成分，后者以包封的形式裹住前者。這兩種成分可用腸溶層隔開(kāi)，該腸溶層用于阻止成分在胃中的崩解并使得內(nèi)部成分完整無(wú)損地送入十二指腸或被延緩釋放。各種材料都可用于腸溶層或包衣，這些材料包括許多高分子酸以及高分子酸與紫膠、十六烷醇、和乙酸纖維素的混合物。
在一個(gè)具體實(shí)施例中，配制本發(fā)明的優(yōu)選組合物，以便給予患者以后提供活性成分的快速、持續(xù)、或延遲釋放，尤其是緩釋劑型。本發(fā)明的最優(yōu)選化合物是雷諾嗪，將其命名為(±)-N-(2，6-二甲基-苯基)-4-[2-羥基-3-(2-甲氧基苯氧基)丙基]-1-哌嗪-乙酰胺。除非另有說(shuō)明，在本說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例中使用的雷諾嗪血漿濃度指的是雷諾嗪游離堿。
用于吸入劑或吹入劑的組合物包括藥用溶液或有機(jī)溶劑、或其混合物、以及粉末。液體或固體組合物可以包含適當(dāng)?shù)娜缟衔乃龅乃幱觅x形劑。優(yōu)選地，這些組合物可通過(guò)口服或鼻吸入途徑給予，產(chǎn)生局部或系統(tǒng)的效應(yīng)。存在于優(yōu)選的藥用溶劑中的組合物可通過(guò)使用惰性氣體進(jìn)行霧化。霧化的溶液可通過(guò)霧化裝置直接吸入或者霧化裝置與面罩吸入器、或間歇式正壓呼吸機(jī)相連。從以適當(dāng)方式遞送成分的裝置可給予溶液、懸浮劑、或粉末組合物，優(yōu)選口服或鼻內(nèi)給藥。
雷諾嗪的靜脈內(nèi)劑型是通過(guò)無(wú)菌填充方法進(jìn)行制備，具體如下。在適當(dāng)?shù)娜萜髦?，將所需量的右旋糖一水合物溶解于注射用?WFI)，其大約為最后一次投料重量的78％。在連續(xù)攪拌下，將所需量的雷諾嗪游離堿加入右旋糖溶液。為了促進(jìn)雷諾嗪的溶解，用0.1N或1N鹽酸溶液將溶液pH調(diào)節(jié)到指標(biāo)3.88-3.92。另外，0.1NHCl或1.0N NaOH可以用來(lái)將溶液最終調(diào)節(jié)到指標(biāo)pH3.88-3.92。雷諾嗪溶解后，用WFI將一次投料量調(diào)節(jié)到最終重量。在證實(shí)已滿足處理過(guò)程中的規(guī)范以后，用通過(guò)兩個(gè)0.2μm無(wú)菌過(guò)濾器的無(wú)菌過(guò)濾對(duì)雷諾嗪本體溶液進(jìn)行滅菌。其后，無(wú)菌雷諾嗪本體溶液在無(wú)菌條件下被填充進(jìn)無(wú)菌玻璃小瓶并在無(wú)菌條件下用無(wú)菌塞子塞住。然后將塞住的小瓶用清潔的頂部翻轉(zhuǎn)(flip-top)的鋁封層進(jìn)行密封。
利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法并根據(jù)本專利披露的內(nèi)容，本發(fā)明的化合物可以通過(guò)例如擴(kuò)散滲入進(jìn)支架，或如以凝膠形式涂布于支架。
雷諾嗪的靜脈內(nèi)劑型是通過(guò)無(wú)菌填充方法進(jìn)行制備，具體如下。在適當(dāng)?shù)娜萜髦校瑢⑺枇康挠倚且凰衔锶芙庥谧⑸溆盟?WFI)，其大約為最后一次投料重量的78％。在連續(xù)攪拌下，將所需量的雷諾嗪游離堿加入右旋糖溶液。為了促進(jìn)雷諾嗪的溶解，用0.1N或1N鹽酸溶液將溶液pH調(diào)節(jié)到3.88-3.92的指標(biāo)。另外，0.1N HCl或1.0N NaOH可以用來(lái)將溶液最終調(diào)節(jié)到目標(biāo)pH3.88-3.92。雷諾嗪溶解后，用WFI將一次投料量調(diào)節(jié)到最終重量。在證實(shí)已滿足處理過(guò)程中的規(guī)范以后，用通過(guò)兩個(gè)0.2μm無(wú)菌過(guò)濾器的無(wú)菌過(guò)濾對(duì)雷諾嗪本體溶液進(jìn)行滅菌。其后，無(wú)菌雷諾嗪本體溶液在無(wú)菌條件下被填充進(jìn)無(wú)菌玻璃小瓶并在無(wú)菌條件下用無(wú)菌塞子塞住。然后將塞住的小瓶用清潔的頂部翻轉(zhuǎn)的鋁封層密封。
本發(fā)明的優(yōu)選緩釋劑型優(yōu)選為壓制片劑的形式，包括化合物和部分中和的pH依賴性粘合劑的緊密混合物，其中粘合劑在從胃中pH(通常大約2)到腸中pH(通常大約5.5)的范圍內(nèi)控制在水介質(zhì)中的溶解速率。
為了保證化合物的持續(xù)釋放，可以選擇一種或多種pH依賴性粘合劑以控制化合物的溶解分布，這樣當(dāng)劑型通過(guò)胃和胃腸道時(shí)，劑型就可以緩慢并連續(xù)地釋放藥物。在緩釋劑型中pH依賴性粘合劑的溶解控制能力特別重要，這是因?yàn)槿绻衔镝尫盘?“劑量?jī)A倒(dose-dumping)”)那么含有足夠兩次日給藥的化合物的緩釋劑型可引起不良副作用。
相應(yīng)地，適用于本發(fā)明的pH依賴性粘合劑是那些粘合劑，其在片劑滯留在胃(此處pH是低于約4.5)中期間抑制藥物從片劑快速釋放，并且其在下部胃腸道(此處pH通常大于約4.5)促進(jìn)從劑型釋放治療量的化合物。在制藥領(lǐng)域已知的作為“腸溶”粘合劑和包衣材料的許多材料具有所需要的pH溶解性能。這些材料包括苯二甲酸衍生物如乙烯基聚合物和共聚物的苯二甲酸衍生物；羥烷基纖維素、烷基纖維素、乙酸纖維素、羥烷基乙酸纖維素、纖維素醚、烷基乙酸纖維素、及其偏酯；以及低級(jí)烷基丙烯酸和低級(jí)烷基丙烯酸酯的聚合物和共聚物，及其偏酯。
可以與化合物一起使用以產(chǎn)生緩釋劑型的優(yōu)選的pH依賴性粘合劑材料是甲基丙烯酸共聚物。甲基丙烯酸共聚物是甲基丙烯酸與中性丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯(如丙烯酸乙酯或甲基丙烯酸甲酯)的共聚物。最優(yōu)選的共聚物是甲基丙烯酸共聚物-C型USP(其是甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物，具有在46.0％和50.6％之間的甲基丙烯酸單元)。這樣的共聚物可購(gòu)自Rhm Pharma，作為EudragitL 100-55(作為粉末)或L30D-55(作為在水中的30％的分散體)。其他可以單獨(dú)使用或與緩釋劑型聯(lián)合使用的pH依賴性粘合劑材料包括羥丙基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、醋酞纖維素、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯、聚乙烯吡咯烷酮鄰苯二甲酸酯、以及類(lèi)似物。一種或多種pH依賴性粘合劑可存在于本發(fā)明的劑型中，其數(shù)量范圍是從約1至約20wt％、更好從約5至約12wt％、并且最好約10wt％。
在口服劑型中一種或多種pH依賴性粘合劑可以用于緩釋劑型。應(yīng)該注意到，pH依賴性粘合劑和粘度增強(qiáng)劑，如羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、中性聚甲基丙烯酸酯、以及類(lèi)似物，它們本身并不提供所需的溶解控制，其是由可識(shí)別的pH依賴性粘合劑所提供。pH依賴性粘合劑存在于本發(fā)明的劑型中，其數(shù)量范圍是從約1至約10wt％、更好從約1至約3wt％、并且最好約2.0wt％。
如表1所示，本發(fā)明的優(yōu)選化合物雷諾嗪在pH高于約6.5的水溶液中是相對(duì)不溶的，而在低于約pH6溶解度開(kāi)始顯著增加。在以下的實(shí)施例中，雷諾嗪在水中的溶液或pH高于6的溶液是由雷諾嗪二氫氯化物構(gòu)成。在以下實(shí)施例的討論部分中，雷諾嗪的濃度(作為實(shí)驗(yàn)的結(jié)果而得出)計(jì)算為雷諾嗪游離堿。
表1
在劑型中增加pH依賴性粘合劑含量可在pH低于4.5(是胃中pH的特征)時(shí)降低化合物的緩釋劑型的釋放速率。由粘合劑形成的腸溶性包衣是較少可溶的并在高于pH4.5可增加相對(duì)釋放速率，其中化合物的溶解度較低。pH依賴性粘合劑的適當(dāng)選擇便于在pH4.5之上化合物從劑型有更快的釋放速率，同時(shí)顯著影響在低pH時(shí)的釋放速率。粘合劑的部分中和促進(jìn)粘合劑轉(zhuǎn)化成膠乳狀薄膜，其圍繞各個(gè)顆粒而形成。相應(yīng)地，選擇pH依賴性粘合劑的類(lèi)型和數(shù)量及部分中和組合物的量以精密控制化合物自劑型的溶解速率。
本發(fā)明的劑型應(yīng)具有足量的pH依賴性粘合劑以產(chǎn)生緩釋劑型，從該緩釋劑型可以控制化合物的釋放速率，以致在低pHs(低于約4.5)溶解速率顯著變慢。在甲基丙烯酸共聚物C型USP(EudragitL 100-55)的情況下，適當(dāng)數(shù)量的pH依賴性粘合劑是在5％和15％之間。pH依賴性粘合劑通常具有從約1至約20％的粘合劑甲基丙烯酸，其中羧基被中和。然而，優(yōu)選地，中和程度的范圍是從約3至6％。緩釋劑型也可以含有與化合物和pH依賴性粘合劑緊密摻合的藥物賦形劑。藥用賦形劑可以包括，例如，pH依賴性粘合劑或成膜劑如羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、中性聚甲基丙烯酸酯(例如，甲基丙烯酸甲酯/丙烯酸乙酯共聚物，由Rhm Pharma在商標(biāo)EudragitNE下進(jìn)行出售)、淀粉、明膠、糖類(lèi)、羧甲基纖維素、以及類(lèi)似物。其他有用的藥物賦形劑包括稀釋劑如乳糖、甘露醇、干淀粉、微晶纖維素等等；表面活性劑如聚氧乙烯山梨醇酐酯、山梨醇酐酯等等；以及著色劑和增香劑。也可選地存在潤(rùn)滑劑(如滑石粉和硬脂酸鎂)和其他壓片助劑。
本發(fā)明的緩釋劑型的化合物含量按重量計(jì)算較好為約50％至約95％或更多、更好在約70％至約90％之間、并且最好從約70至約80％；pH依賴性粘合劑含量在5％和40％之間、優(yōu)選在5％和25％之間、并且更優(yōu)選在5％和15％之間；而劑型的剩余部分包括pH依賴性粘合劑、填充劑、以及其他可選的賦形劑。本發(fā)明的一些優(yōu)選緩釋劑型列于下面的表2。
表2成分 重量?jī)?yōu)選的重量 最優(yōu)選的重量范圍(％)范圍(％)范圍(％)活性成分 0-9570-90 75微晶纖維素(填充劑)1-355-1510.6甲基丙烯酸共聚物 1-355-12.5 10.0氫氧化鈉 0.1-1.0 0.2-0.6 0.4羥丙基甲基纖維素 0.5-5.0 1-3 2.0硬脂酸鎂 0.5-5.0 1-3 2.0
本發(fā)明的緩釋劑型的制備如下緊密混合(干混合)化合物和pH依賴性粘合劑以及任何可選的賦形劑。然后在有強(qiáng)堿水溶液的情況下使干混合的混合物成顆粒，其中強(qiáng)堿水溶液是噴到混合的粉末。顆粒被干燥，篩選，與可選的潤(rùn)滑劑(如滑石粉或硬脂酸鎂)混合，然后壓制成片劑。優(yōu)選的強(qiáng)堿水溶液是堿金屬氫氧化物溶液，如氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液，優(yōu)選氫氧化鈉水溶液(可選地含有高達(dá)25％的水混溶溶劑如低級(jí)醇)。
生成的片劑可以涂布以可選的成膜劑，用于識(shí)別、掩蔽味道、以及使吞咽更容易。成膜劑通常存在的數(shù)量范圍是在片劑重量的2％和4％之間。適當(dāng)?shù)某赡┦潜炯夹g(shù)領(lǐng)域公知的并且包括羥丙基甲基纖維素、陽(yáng)離子甲基丙烯酸酯共聚物(二甲基氨乙基甲基丙烯酸酯/甲基丁基甲基丙烯酸酯共聚物-EudragitE，Rhm Pharma)、以及類(lèi)似物。這些成膜劑可以可選地含有著色劑、增塑劑、以及其他輔助成分。
優(yōu)選地，壓制片劑具有足以耐8Kp壓力的硬度。片劑大小將主要取決于在片劑中化合物的量。這些片劑將包括300至1100mg的化合物游離堿。優(yōu)選地，這些片劑所含化合物游離堿的數(shù)量范圍是400-600mg、650-850mg、以及900-1100mg。
為了影響溶解速率，對(duì)濕式混合含化合物的粉末的時(shí)間進(jìn)行控制。優(yōu)選地，總的粉末混合時(shí)間，即粉末暴露于氫氧化鈉溶液的時(shí)間，將在1-10分鐘的范圍內(nèi)，并且優(yōu)選2-5分鐘。在成粒以后，從顆粒機(jī)取出顆粒并放置在約60℃的流化床干燥器中進(jìn)行干燥。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，這些方法產(chǎn)生緩釋劑型，當(dāng)化合物作為其游離堿而不是作為藥用上更常見(jiàn)的二氫氯化物鹽或作為另一個(gè)鹽或酯時(shí)，這些緩釋劑型在給藥后提供較低的峰值血漿水平但有效的化合物血漿濃度高達(dá)12小時(shí)和更長(zhǎng)。游離堿的使用提供至少一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在片劑中化合物的比例可以增加，因?yàn)橛坞x堿的分子量?jī)H為二氫氯化物重量的85％。已這種方式，可以實(shí)現(xiàn)遞送有效量的化合物，同時(shí)限制劑量單位的物理大小。
效用和試驗(yàn)本方法可有效治療對(duì)同時(shí)抑制IKr、IKs及后期INa通道有反應(yīng)的疾病。這種疾病包括VT，以特發(fā)性室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)、預(yù)激綜合征、及尖端扭轉(zhuǎn)為例。
如在以下實(shí)施例中所描述的，進(jìn)行活性試驗(yàn)，并用對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)的方法。
下述實(shí)施例用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明。這些實(shí)施例絕不是限制本發(fā)明的范圍，而是表明如何制備和應(yīng)用本發(fā)明的化合物。在這些實(shí)施例中，所有溫度都是攝氏溫度。
下述實(shí)施例說(shuō)明了含有化學(xué)式I的化合物的典型藥物劑型的制備。
實(shí)施例1制備含有以下成分的硬質(zhì)膠囊數(shù)量成分(mg/膠囊劑)活性成分30.0淀粉305.0硬脂酸鎂5.0混合以上成分并填充進(jìn)入硬質(zhì)凝膠膠囊中。
實(shí)施例2用以下成分制備片劑成分(mg/片劑)活性成分25.0纖維素，微晶200.0膠體二氧化硅10.0硬脂酸 5.0將成分混合并擠壓以形成片劑。
實(shí)施例3制備含有以下成分的干粉吸入劑型成分重量％活性成分5乳糖95將活性成分與乳糖混合，而混合物則加入干粉吸入裝置。
實(shí)施例4每個(gè)含有30mg活性成分的片劑的制備如下數(shù)量成分(mg/片劑)活性成分30.0mg淀粉45.0mg微晶纖維素 35.0mg聚乙烯吡咯烷酮4.0mg(作為10％的無(wú)菌水溶液)羧甲基淀粉鈉4.5mg硬脂酸鎂0.5mg滑石粉1.0mg總計(jì)120mg
活性成分、淀粉、和纖維素通過(guò)一個(gè)20目美國(guó)篩(No.20meshU.S.sieve)并徹底地進(jìn)行混合。聚乙烯吡咯烷酮溶液與生成的粉末混合，然后通過(guò)一個(gè)16目美國(guó)篩(No.16mesh U.S.sieve)。如此制備的顆粒在50℃至60℃干燥，并通過(guò)一個(gè)16目美國(guó)篩。先前通過(guò)30目美國(guó)篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、和滑石粉加入到顆粒中，混合后，在壓片機(jī)上進(jìn)行擠壓以得到每個(gè)重量為120mg的片劑。
實(shí)施例5每個(gè)含有25mg活性成分的栓劑的制備如下成分含量活性成分25mg飽和脂肪酸甘油酯，達(dá)2,000mg活性成分通過(guò)60目美國(guó)篩并懸浮在飽和脂肪酸甘油酯中，該脂肪酸甘油酯利用所需的最低熱量進(jìn)行熔化。然后，將混合物注入公稱2.0g的栓劑模具中并使其冷卻。
實(shí)施例6每個(gè)含有50mg活性成分/5.0mL劑量的混懸劑的制備如下成分含量活性成分 50.0mg黃原膠 4.0mg羧甲基纖維素鈉(11％)50.0mg微晶纖維素(89％)蔗糖 1.75g苯甲酸鈉 10.0mg香料和著色劑 按所需之量?jī)艋_(dá) 5.0mL
將活性成分、蔗糖、和黃原膠進(jìn)行混合，通過(guò)10目美國(guó)篩，然后與先前制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉的水溶液混合。攪拌加入用水稀釋的苯甲酸鈉、香料、與著色劑。然后加入足夠的水以生成所需要的容積。
實(shí)施例7皮下劑型可制備如下成分?jǐn)?shù)量活性成分 5.0mg玉米油 1.0mL實(shí)施例8制備注射用制劑，其具有下述組分成分含量活性成分 2.0mg/ml甘露醇，美國(guó)藥典(USP)50mg/ml葡萄糖酸，美國(guó)藥典(USP) 適量(pH5-6)水(蒸餾，無(wú)菌) 適量至1.0ml氮?dú)?，美?guó)處方集(NF) 適量實(shí)施例9制備局部用制劑，其具有以下組成成分克活性成分 0.2-10山梨糖醇酯類(lèi)(Span 60) 2.0吐溫(Tween 60) 2.0礦物油 5.0凡士林 0.10羥苯甲酸甲酯(methyl paraben) 0.15對(duì)羥苯甲酸丙酯(propyl paraben) 0.05BHA(丁基化羥基苯甲醚) 0.01水 適量至100除水之外，合并所有上述其它成分并加熱到60℃，同時(shí)攪拌。然后，在60℃下加入足量的水，同時(shí)劇烈攪拌，以便對(duì)成分進(jìn)行乳化，然后加入適量至100g的水。
下述實(shí)施例證明本發(fā)明的化合物的效用。
實(shí)施例10I.在來(lái)自犬左心室的分離肌細(xì)胞、組織和動(dòng)脈灌注的楔標(biāo)本中雷諾嗪的電生理效應(yīng)A.材料和方法用肝素(180IU/kg)對(duì)體重20-25kg的狗進(jìn)行抗凝然后用戊巴比妥(30-35mg/kg，靜脈注射)進(jìn)行麻醉。通過(guò)左開(kāi)胸術(shù)打開(kāi)胸部，切除心臟并放在冷心臟麻痹液中([K+]0＝8mmol/L，4℃)。所有實(shí)驗(yàn)方案與動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)(Institutional Aminal Care and UseCommittee)建立的準(zhǔn)則一致。
1.對(duì)分離的犬心室肌細(xì)胞的電壓鉗研究肌細(xì)胞是通過(guò)酶分離分離自由左旋支冠狀動(dòng)脈提供的左心室游離壁的楔形切片。在本研究中使用來(lái)自左心室的心外膜和中心肌區(qū)域的細(xì)胞。
在分離中使用的蒂羅德溶液含有(單位mM)135 NaCl、5.4KCl、1MgCl2、0或0.5CaCl2、10葡萄糖、0.33 NaH2PO4、10 N-2-羥乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)，而pH用NaOH調(diào)節(jié)到7.4。
向內(nèi)整流鉀電流(IK1)、緩慢延遲的整流鉀電流(IKS)、以及快速延遲的整流鉀電流(IKr)在37℃下利用傳統(tǒng)的全細(xì)胞電壓鉗構(gòu)型進(jìn)行記錄。用來(lái)分離特定離子電流的外部溶液和吸管溶液的組成總結(jié)于表3。
表3
IK1是利用外部溶液進(jìn)行測(cè)量，外部溶液含有3μM哇巴因苷元和5μM硝苯地平以分別阻斷鈉-鉀泵和L型鈣電流(ICa，L)。IKs的測(cè)量是在有5μM E-4031和5μM硝苯地平的情況下進(jìn)行以阻斷IKr和ICa。當(dāng)記錄IKr時(shí)，在外部溶液中存在5μM硝苯地平。
分離的肌細(xì)胞放置在倒置顯微鏡載物臺(tái)上的溫度受控的0.5ml室中(Medical System，Greenvale，NY)并以2ml/min的速率超融合。距離細(xì)胞100μm放置的8套管石英微支管(ALA ScientificInstruments公司，Westbury，NY)被用來(lái)施加雷諾嗪，濃度(單位μM)為0.1、0.5、1.0、5.0、10、及100.0。以電壓鉗方式操作Axopatch 1D放大器(Axon Instruments，F(xiàn)oster City，CA)以記錄電流。全細(xì)胞電流在5kHz下用3極低通Bessel濾波器進(jìn)行濾波，在2-5kHz之間進(jìn)行數(shù)字化(Digidata 1200A，Axon Instruments)存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)。使用Clampex 7獲取和分析軟件(Axon Instruments)來(lái)記錄和分析離子電流。吸管尖端電阻是1.0-2.0MΩ而密封電阻大于5GΩ。串聯(lián)電阻的電子補(bǔ)償平均為76％。對(duì)本文報(bào)道的電壓作膜片(patch)電極尖端電位方面的校正。細(xì)胞膜和膜片吸管之間的密封最初形成在含有1mM CaCl2的外部溶液中。3M KCl-瓊脂橋被用在Ag/AgCl接地電極和外部溶液之間以避免在切換到實(shí)驗(yàn)溶液時(shí)產(chǎn)生地電位。
通過(guò)從-50mV的保持電勢(shì)去極化到40mV 3sec、接著復(fù)極化步驟到0mV(4.5sec)來(lái)誘導(dǎo)IKs。由復(fù)極化誘導(dǎo)的時(shí)間相關(guān)尾電流被稱為IKs。這種實(shí)驗(yàn)方案每20sec重復(fù)5次。Ito未受到阻斷，但它對(duì)我們的IKs測(cè)量結(jié)果幾乎沒(méi)有影響，原因在于其快速和完全失活。所有測(cè)量結(jié)果是在斑點(diǎn)破裂后5-12分鐘(min)獲得，因?yàn)樵诖似陂g沒(méi)有觀察到顯著的IKs減少。
IKr是測(cè)量為時(shí)間相關(guān)尾電流，其是在-40mV的電位在較短的250ms去極化脈沖至30mV以后所誘導(dǎo)。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)平均誤差。IKr是在900msec電壓步驟(施加自-40mV的保持電勢(shì))至試驗(yàn)電位(在-100mV至0mV的范圍內(nèi))期間所記錄，并且被稱為在試驗(yàn)脈沖末端的穩(wěn)定電流的5msec平均值。
2.在分離犬心室心外膜和M區(qū)域組織中動(dòng)作電位研究心外膜和中心肌(M)細(xì)胞標(biāo)本(大約1×0.5×0.15cm的條)是分離自左心室。組織薄片放置在組織浴(5ml容積，流速為12ml/min)中允許平衡至少4小時(shí)，同時(shí)用充氧蒂羅德溶液(pH＝7.35，t0＝＝37±0.5℃)進(jìn)行超融合并利用場(chǎng)刺激置于2Hz的基礎(chǔ)周長(zhǎng)(BCL)。蒂羅德溶液的組成(單位mM)為NaCl 129、KCl 4、NaH2PO40.9、NaHCO320、CaCl21.8、MgSO40.5、及D-葡萄糖5.5。
動(dòng)作電位記錄跨膜電位是利用標(biāo)準(zhǔn)玻璃微電極進(jìn)行記錄，其中微電極填充以2.7M KCl(10-20MΩDC電阻)并連接于高輸入阻抗放大系統(tǒng)(World Precision Instruments，Sarasota，F(xiàn)L，美國(guó))。放大信號(hào)顯示于Tektronix(Beaverton，OR，美國(guó))示波器并放大(型號(hào)1903-4可編程放大器[Cambridge Electronic Designs(C.E.D.)，Cambridge，英國(guó)])，數(shù)字化(型號(hào)1401 AD/DA系統(tǒng)[C.E.D.])，分析(Spike 2獲取和分析模塊[C.E.D.])，并存儲(chǔ)于磁性介質(zhì)。
研究實(shí)驗(yàn)方案動(dòng)作電位是記錄自心外膜和M細(xì)胞參數(shù)。對(duì)照記錄是在4-6小時(shí)平衡期以后獲得。在1、5、10、50、及100μM的濃度測(cè)定了雷諾嗪的影響，其中在加入每種藥物濃度以后30分鐘開(kāi)始記錄。雷諾嗪作用的速率相關(guān)性是在300、500、800、1000、2000、5000msec的基礎(chǔ)起搏周長(zhǎng)(BCL)下通過(guò)記錄跨膜動(dòng)作電位來(lái)測(cè)定。提供了在500和2000msec基礎(chǔ)周長(zhǎng)下記錄的數(shù)據(jù)。
測(cè)量了以下動(dòng)作電位參數(shù)1)在50％和90％復(fù)極化時(shí)的動(dòng)作電位時(shí)程。
2)振幅3)過(guò)沖4)靜息膜電位5)動(dòng)作電位(Vmax)的上升支的上升速率Vmax是在對(duì)照條件下以及在有10和100μM雷諾嗪的情況下進(jìn)行記錄。Vmax是在BCL為500msec的條件下進(jìn)行測(cè)量。
因?yàn)橐阎图?xì)胞外鉀離子可促進(jìn)藥物誘發(fā)APD延長(zhǎng)和早期后除極，因而進(jìn)行了兩套分開(kāi)的實(shí)驗(yàn)，一組在正常[K+]0(4mM)而另一組具有較低[K+]0(2mM)。
3.在動(dòng)脈灌注犬左心室楔標(biāo)本中動(dòng)作電位研究尺寸大約為12mm×35mm×12mm的透壁左心室楔是解剖自左心室壁的中部至基底前區(qū)域而左前下行冠狀動(dòng)脈的對(duì)角分支被插上套管以遞送灌注液(蒂羅德溶液)。蒂羅德溶液的組成(單位mM)為NaCl 129、KCl 4、NaH2PO40.9、NaHCO320、CaCl21.8、MgSO40.5、以及D-葡萄糖5.5；pH＝7.4。利用含有2mM KCl的蒂羅德溶液進(jìn)行了一組單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)。
跨膜動(dòng)作電位是利用浮動(dòng)微電極記錄自心外膜(EPI)和心內(nèi)膜下區(qū)域(M)。透壁假心電圖(ECG)是利用兩個(gè)K-瓊脂電極(1.1mm，內(nèi)徑)進(jìn)行記錄，其中K-瓊脂電極是置于離標(biāo)本的心外膜(+)和心內(nèi)膜(-)表面大約1cm處并沿著與跨膜記錄相同的軸。
允許心室楔在室中平衡2小時(shí)，同時(shí)利用接觸心內(nèi)膜表面的銀雙向電極在2000msec的基礎(chǔ)周長(zhǎng)進(jìn)行起搏。在缺血達(dá)到40-50mmHg的灌注壓之前設(shè)定恒定的流速。通過(guò)用同樣的加熱器/循環(huán)浴加熱灌注液和鄰近的圍繞組織腔的水室，溫度維持在37±0.5℃。組織腔的頂部未覆蓋部分在每次實(shí)驗(yàn)中用塑料板覆蓋其表面的約75％以進(jìn)一步防止熱損失；剩余的25％保持未覆蓋以安置和操作ECG電極和浮動(dòng)微電極。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間標(biāo)本被完全浸泡在細(xì)胞外溶液中。
QT時(shí)間定義為在QRS復(fù)合波的初期偏移和接近T波的未端部分的最陡斜部分的切線穿過(guò)等電位線的點(diǎn)之間的時(shí)間間隔。
B.研究實(shí)驗(yàn)方案實(shí)驗(yàn)系列1為了測(cè)定復(fù)極化時(shí)間(在50和90％復(fù)極化[分別為APD50和APD90]時(shí)的動(dòng)作電位時(shí)程和QT時(shí)間[ECG])的變化以及在用雷諾嗪(1-100μM的濃度范圍)灌注標(biāo)本后組織對(duì)心律失常發(fā)生的易傷性。[K+]0＝4mM。
跨膜動(dòng)作電位是利用玻璃浮動(dòng)微電極記錄自心外膜(Epi)、心內(nèi)膜下區(qū)域(M區(qū)域)。同時(shí)記錄透壁ECG。
a.穩(wěn)態(tài)刺激基礎(chǔ)周長(zhǎng)(BCL)是從300到2000msec不等以檢查雷諾嗪濃度為1、5、10、50、和100μM時(shí)復(fù)極化時(shí)間(APD和ECG)的速率相關(guān)變化。
b.程序性電刺激(PES)在給予每個(gè)藥物濃度前后對(duì)心外膜表面施加過(guò)早刺激以誘導(dǎo)心律失常。在2000msec的循環(huán)時(shí)間之內(nèi)，在每個(gè)第五或第十個(gè)基本搏動(dòng)(S1)之后供給單脈沖(S2)一次。S1-S2偶聯(lián)間期逐漸減小直到遇到不應(yīng)性(S2刺激是2-3msec時(shí)程，強(qiáng)度等于舒張閾值的3-5倍)。
實(shí)驗(yàn)系列2為了測(cè)定復(fù)極化時(shí)間(在50和90％復(fù)極化[分別為APD50和APD90]時(shí)的動(dòng)作電位時(shí)程和QT時(shí)間[ECG])的變化以及在用雷諾嗪(1-100μM的濃度范圍)灌注標(biāo)本后標(biāo)本對(duì)心律失常發(fā)生的易傷性。[K+]0＝2mM。
a.穩(wěn)態(tài)刺激在基礎(chǔ)周長(zhǎng)(BCL)為500和2000的條件下進(jìn)行。
b.程序性電刺激(PES)見(jiàn)上文。
藥物雷諾嗪二氫氯化物用100％蒸餾水稀釋成50mM的儲(chǔ)備溶液。對(duì)于每個(gè)實(shí)驗(yàn)制備新鮮的藥物。
統(tǒng)計(jì)利用單向重復(fù)測(cè)量方差分析(ANOVA)再加上Bonferroni檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
實(shí)施例11雷諾嗪對(duì)IKr、IKs、以及IK1的影響雷諾嗪以濃度依賴方式抑制IKr和IKs，但并不改變IK1。IKr是測(cè)量為在-40mV、在250msec激活脈沖至30mV之后的時(shí)間依賴性尾電流。圖3A表示在對(duì)照溶液中和在50μM雷諾嗪之后記錄的電流。IKr幾乎被該濃度的雷諾嗪完全阻斷。圖3B表示抑制IKr尾電流的濃度-反應(yīng)關(guān)系曲線，其中IC50為11.5μM。
IKs由3sec步驟至+40mV所誘導(dǎo)并測(cè)量為在后退至0mV之后所記錄的峰值時(shí)間依賴性尾電流。圖4A所示的是在對(duì)照條件下、在100μM雷諾嗪之后、以及在沖洗藥物之后所記錄的電流。雷諾嗪(100μM)主要消除在0mV記錄的尾電流并且這種效應(yīng)在沖洗后被完全逆轉(zhuǎn)。抑制IKs尾電流的濃度-反應(yīng)關(guān)系曲線說(shuō)明于圖4B，其中指出IC50為13.4μM。
向內(nèi)整流電流IK1是利用穿孔膜片電壓鉗技術(shù)進(jìn)行記錄。圖5A顯示在-100和0mV電壓之間(以10mV間隔遞增)、在對(duì)照條件下(左圖片)以及在有100μM雷諾嗪的情況下所記錄的IK1。在此和5個(gè)類(lèi)似實(shí)驗(yàn)中，雷諾嗪并不改變向內(nèi)整流電流。圖片B標(biāo)出復(fù)合數(shù)據(jù)，說(shuō)明電流-電壓關(guān)系，其構(gòu)造自在每個(gè)試驗(yàn)脈沖的未端測(cè)量的平均電流。
實(shí)施例12在分離犬心室組織中動(dòng)作電位研究在[K+]0＝4mM和BCL＝2000msec時(shí)，雷諾嗪引起M細(xì)胞標(biāo)本中APD50和APD90的濃度依賴性縮短(圖6)。在某些標(biāo)本中，雷諾嗪產(chǎn)生雙相效應(yīng)在低濃度時(shí)延長(zhǎng)APD而在高濃度時(shí)則縮短APD(圖4A)。心外膜復(fù)極化較少受該藥物的影響，顯示傾向于APD延長(zhǎng)。在中等雷諾嗪濃度下復(fù)極化的透壁分散被減少而在更高濃度下則幾乎被消除。
在BCL為500msec時(shí)，雷諾嗪引起心外膜組織中APD的濃度依賴性延長(zhǎng)而在M細(xì)胞標(biāo)本中則引起APD的濃度依賴性縮短。在濃度為100μM時(shí)，心外膜APD超過(guò)M細(xì)胞的APD。從而，復(fù)極化的透壁分散被減少或消除。在雷諾嗪的最高濃度(100μM)，透壁復(fù)極化梯度發(fā)生逆轉(zhuǎn)。值得注意的是，在心外膜標(biāo)本中雷諾嗪誘導(dǎo)APD90的使用依賴性延長(zhǎng)，即，在更快的速率下延長(zhǎng)更大(圖6和圖7)。
為了評(píng)估雷諾嗪對(duì)INa的作用，測(cè)量了動(dòng)作電位(Vmax)的上升支的上升速率。雷諾嗪引起Vmax的下降。這種效應(yīng)在10μM時(shí)是適中的(n.s.)，但在100μM雷諾嗪的情況下則更顯著(圖8)。
在高達(dá)50μM的濃度時(shí)，在M細(xì)胞標(biāo)本中雷諾嗪對(duì)振幅、過(guò)沖、以及靜息膜電位產(chǎn)生很小至沒(méi)有影響(表4)。
表4雷諾嗪(單位μM)BCL＝500msec
數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，對(duì)所有試驗(yàn)組，n＝5，*-p＜0.05，與對(duì)照比較在試驗(yàn)的最高劑量(100μM)下，雷諾嗪引起0相位振幅的下降。動(dòng)作電位的過(guò)沖以及靜息膜電位被降低，雖然這些并沒(méi)有達(dá)到統(tǒng)計(jì)顯著性。
在心外膜標(biāo)本中，雷諾嗪對(duì)靜息膜電位、過(guò)沖、以及0相位振幅產(chǎn)生很小至沒(méi)有影響(表5)。
表5雷諾嗪(單位μM)BCL＝500msec
數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，除100.0μM雷諾嗪(n＝2)之外，n＝4。在剩余的兩個(gè)心外膜標(biāo)本中，100.00μM雷諾嗪產(chǎn)生過(guò)度的APD延長(zhǎng)，導(dǎo)致復(fù)極化交替和/或2∶1反應(yīng)。
在有低[K+]0和慢速率(BCL＝2000msec)的情況下，雷諾嗪并不引起M細(xì)胞的APD90發(fā)生顯著變化，但引起APD50濃度依賴性縮短(圖9)。相反，在心外膜中，該藥物幾乎沒(méi)有引起APD50的變化，但引起APD90的濃度依賴性延長(zhǎng)。復(fù)極化的透壁分散顯著減弱。
在BCL為500msec時(shí)，雷諾嗪幾乎沒(méi)有引起M細(xì)胞的復(fù)極化的變化，但在心外膜中引起APD90的顯著濃度依賴性延長(zhǎng)(圖10)。
實(shí)施例13在動(dòng)脈灌注犬左心室楔標(biāo)本中動(dòng)作電位研究圖11中的每個(gè)圖片顯示在基礎(chǔ)周長(zhǎng)(BCL)為2000msec時(shí)以及在不存在和存在雷諾嗪(1-100μM)的情況下，記錄自動(dòng)脈灌注犬左心室楔標(biāo)本的中心肌(M區(qū)域)和心外膜(Epi)的ECG和跨膜動(dòng)作電位。該藥物的這些效應(yīng)是用含有4mM(左圖片)或2mM(右圖片)KCl的冠狀灌注液進(jìn)行研究。
在存在4mM KCl的情況下，雷諾嗪并不顯著改變APD90，但在高濃度藥物(50和100μM)下則顯著減少APD50。相反，在存在2mM KCl的情況下，在濃度為5-100μM時(shí)雷諾嗪顯著延長(zhǎng)APD90，但在任何濃度下并不顯著改變APD50(表6)。
在[K+]0為4mM時(shí)，雷諾嗪延長(zhǎng)心外膜的APD90大于延長(zhǎng)M細(xì)胞的APD90。因此，復(fù)極化的透壁分散被降低，雖然這并沒(méi)有達(dá)到顯著水平。在[K+]0為2mM時(shí)，雷諾嗪延長(zhǎng)M細(xì)胞的APD90大于延長(zhǎng)心外膜的APD90，這導(dǎo)致復(fù)極化的透壁分散的增加，其也沒(méi)有達(dá)到顯著水平(表7)。
圖12顯示雷諾嗪對(duì)APD90和QT時(shí)間(頂部圖片)以及對(duì)APD50(底部圖片)的濃度依賴效應(yīng)的復(fù)合數(shù)據(jù)。在[K+]0為4mM的情況下，在任何藥物濃度下QT和APD90幾乎不受影響；在50和100μM濃度下APD50顯著縮短。在[K+]0為2mM的情況下，在雷諾嗪濃度大于5μM時(shí)，M細(xì)胞的QT和APD50稍微延長(zhǎng)，而APD50幾乎不受影響。
表6犬左心室楔4mM[KCl]0，BCL＝2000
*p＜0.05，與對(duì)照比較 n≤4
表7犬左心室楔2mM[KCl]0，BCL＝2000
*p＜0.05，與對(duì)照比較 n≤4表8強(qiáng)調(diào)以下事實(shí)并未觀察到自發(fā)地產(chǎn)生尖端扭轉(zhuǎn)心律失常，在任何涉及犬左心室楔標(biāo)本的程序下它們也不能由程序性電刺激所誘導(dǎo)。在對(duì)照條件下或在任何濃度的雷諾嗪以后沒(méi)有觀察到心律失常。
表8雷諾嗪誘導(dǎo)的尖端扭轉(zhuǎn)
在用任何濃度的雷諾嗪進(jìn)行預(yù)處理的組織或楔標(biāo)本中既沒(méi)有觀察到早期后除極也沒(méi)有觀察到延遲后除極。實(shí)際上，雷諾嗪證明是可有效抑制通過(guò)M細(xì)胞標(biāo)本暴露于其他IKr阻滯劑(如d-索他洛爾)所誘導(dǎo)的EADs，如圖13所說(shuō)明的。D-索他洛爾產(chǎn)生復(fù)極化的顯著延長(zhǎng)并在M細(xì)胞標(biāo)本中誘導(dǎo)EADs。雷諾嗪濃度依賴性地縮短動(dòng)作電位并消除EADs。在4/4M細(xì)胞標(biāo)本中觀察到雷諾嗪(5-20μM)抑制EAD活性和縮短APD的類(lèi)似效應(yīng)。
實(shí)施例14II.在分離的犬左心室肌細(xì)胞中雷諾嗪對(duì)后期INa、ICa、Ito、以及INa-Ca的電生理效應(yīng)A.材料和方法1.對(duì)分離的犬心室肌細(xì)胞的電壓鉗研究給予成年雄性雜種狗180IU/kg肝素(鈉鹽)，然后用35mg/kg(靜脈注射)戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，其心臟被快速切除并放在蒂羅德溶液中。單肌細(xì)胞是通過(guò)酶分離獲自由左旋支冠狀動(dòng)脈提供的左心室游離壁的楔形切片。使用了來(lái)自左心室的心外膜和中心肌區(qū)域的細(xì)胞。所有程序與動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)建立的準(zhǔn)則一致。
在分離中使用的蒂羅德溶液含有(單位mM)135 NaCl、5.4KCl、1 MgCl2、0或0.5 CaCl2、10葡萄糖、0.33 NaH2PO4、10 N-2-羥乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)，而pH用NaOH調(diào)節(jié)到7.4。
在37℃下利用標(biāo)準(zhǔn)膜片電極記錄了L型鈣電流(ICa)、瞬變向外電流(Ito)、以及鈉-鈣交換電流(INa-Ca)。外部溶液和吸管溶液的組成分別示于表9和表10。后期INa是利用穿孔膜片技術(shù)進(jìn)行記錄。
表9外部溶液
表10內(nèi)部溶液
將分離的細(xì)胞放置在倒置顯微鏡載物臺(tái)上的溫度受控的0.5ml室中(Medical System，Greenvale，NY)并以2ml/min的速率進(jìn)行超融合。距離細(xì)胞100μm放置的10套管石英微支管(ALA ScientificInstruments公司，Westbury，NY)被用來(lái)施加雷諾嗪、河豚毒素(TTX)、或鎘。以電壓鉗方式操作Axopatch 200A放大器(AxonInstruments，F(xiàn)oster City，CA)以在37℃下記錄電流。全細(xì)胞電流在5kHz下用4極低通Bessel濾波器進(jìn)行濾波，在2-5kHz之間進(jìn)行數(shù)字化(Digidata 1200A，Axon Instruments)并存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)。使用pClamp 8.2軟件(Axon Instruments)來(lái)記錄和分析離子電流。吸管尖端電阻是1.0-1.5MΩ而密封電阻大于5GΩ。串聯(lián)電阻的電子補(bǔ)償平均為76％。對(duì)報(bào)道的電壓作膜片電極尖端電位方面的校正。細(xì)胞膜和膜片吸管之間的密封最初形成在含有1mM CaCl2的蒂羅德溶液中。3M KCl-瓊脂橋被用在Ag/AgCl接地電極和外部溶液之間以避免在切換到實(shí)驗(yàn)溶液時(shí)產(chǎn)生地電位。
在水中制備河豚毒素(TTX)并以1∶100的比例稀釋，以在外部溶液中獲得10μM的最終濃度。在水中制備50mM濃度的雷諾嗪并在外部溶液中稀釋到1-800μM范圍內(nèi)的最終濃度。
ICa被定義為峰值向內(nèi)電流減去在試驗(yàn)脈沖末端的電流。外部溶液含有10μM TTX以阻斷后期INa的穩(wěn)定態(tài)分量。在誘發(fā)800ms斜線上升至-60mV以及15ms步驟至-50mV以滅活鈉通道和保持電壓控制之前細(xì)胞在-90mV靜息20秒，后面立即是500ms步驟至0mV以記錄對(duì)照溶液中的ICa。這種程序以0.5Hz的速率對(duì)每個(gè)藥物濃度重復(fù)5次。雷諾嗪的穩(wěn)態(tài)效應(yīng)測(cè)量為在序列的第5脈沖期間ICa的分?jǐn)?shù)變化。在半對(duì)數(shù)尺度上畫(huà)出了ICa的變化對(duì)藥物濃度的關(guān)系曲線并擬合到對(duì)數(shù)方程。
后期INa被定義為在試驗(yàn)脈沖至-30mV的最后5ms內(nèi)所測(cè)量的平均TTX敏感電流。在500ms脈沖的起初發(fā)生的電壓控制的瞬時(shí)損失并不影響在脈沖的末端測(cè)量的電流。一系列以1Hz速率重復(fù)的500ms脈沖被用來(lái)測(cè)定穩(wěn)態(tài)阻斷。在半對(duì)數(shù)尺度上標(biāo)繪出在第10個(gè)脈沖期間后期INa的下降，其是作為藥物濃度的函數(shù)，并且擬合到對(duì)數(shù)方程。
Ito是在存在300μM CdCl2(以阻斷ICa)的情況下進(jìn)行記錄，并且被定義為峰值向外電流減去在試驗(yàn)脈沖末端的穩(wěn)定電流。保持電勢(shì)是-80mV并在誘發(fā)100ms脈沖至-10、0、及10mV之前進(jìn)行5ms脈沖至-50mV，其是以0.1Hz的速率進(jìn)行重復(fù)。在加入每個(gè)藥物濃度4分鐘以后評(píng)估了雷諾嗪的效應(yīng)。結(jié)果沒(méi)有標(biāo)繪成對(duì)數(shù)函數(shù)，因?yàn)槔字Z嗪對(duì)Ito具有最低效應(yīng)。作為替代，所有結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。雙尾t檢驗(yàn)用來(lái)確定平均值之間的差異。
為了借助于正常鈣瞬變狀態(tài)引發(fā)INa-Ca，3ms脈沖至-50mV之后是5ms步驟至0mV以激活I(lǐng)Ca和鈣瞬變狀態(tài)。此兩步驟程序后面立即是到-80mV的脈沖以記錄INa-Ca。INa-Ca被看作是傳輸?shù)目傠姾?pA×ms)。電壓鉗程序之前是一系列10個(gè)脈沖至20mV，其以0.5Hz的速率傳送并繼之以6秒的靜息以維持SR的鈣負(fù)荷。在半對(duì)數(shù)尺度上標(biāo)繪出INa-Ca的下降，其是作為藥物濃度的函數(shù)，并且擬合到對(duì)數(shù)方程。
實(shí)施例15圖14A顯示在對(duì)照溶液中以及在20μM雷諾嗪加入外部溶液4分鐘后的TTX敏感電流。圖14B顯示類(lèi)似實(shí)驗(yàn)的概括結(jié)果，其中雷諾嗪(5-50μM)被加入外部溶液。后期INa的半抑制發(fā)生在21μM的藥物濃度。
在-10、0、及10mV的試驗(yàn)電勢(shì)測(cè)定了雷諾嗪對(duì)Ito的影響。Ito是非常耐雷諾嗪的抑制作用。圖15顯示在對(duì)照溶液中(左圖片)和在加入50μM雷諾嗪4分鐘后所記錄的電流。藥物將峰值Ito減少不足10。
在10mV時(shí)，濃度為50μM的雷諾嗪將Ito減少10±2％(6個(gè)細(xì)胞，p＜0.001)。在-10和0mV時(shí)雷諾嗪的影響并沒(méi)有達(dá)到顯著程度。在試驗(yàn)電勢(shì)0和10mV時(shí)，濃度為100μM的雷諾嗪分別將Ito減少16±3％和17±4％(7個(gè)細(xì)胞，p＜0.001)。在任何試驗(yàn)電壓下，濃度為10μM(9個(gè)細(xì)胞)和20μM(9個(gè)細(xì)胞)的雷諾嗪沒(méi)有影響。示于圖16的結(jié)果被歸一化到每個(gè)對(duì)照電流并總結(jié)于圖17。
圖18的頂部圖片顯示在對(duì)照溶液中、在加入100μM雷諾嗪4分鐘以后、以及在回到對(duì)照溶液以后INa-Ca的重疊軌跡。圖18的下部圖片顯示獲自3-14個(gè)細(xì)胞的濃度-反應(yīng)曲線。雷諾嗪抑制INa-Ca的IC50是91μM。
圖19顯示在單個(gè)圖形中IKr、IKs、ICa、后期INa、以及INaCa的濃度-反應(yīng)曲線。在試驗(yàn)的最高濃度(100μM)Ito的抑制不足以產(chǎn)生完整的曲線。IKr、IKs、及后期INa顯示類(lèi)似的對(duì)雷諾嗪的敏感性。
實(shí)施例16III.在分離的犬浦肯野纖維中雷諾嗪的電生理效應(yīng)A.材料和方法用肝素對(duì)體重20-25kg的狗進(jìn)行抗凝然后用戊巴比妥(30-35mg/kg，靜脈注射)進(jìn)行麻醉。通過(guò)左開(kāi)胸術(shù)打開(kāi)胸部，切除心臟并放在冷心臟麻痹液中([K+]0＝8mmol/L，4℃)。自由流動(dòng)的浦肯野纖維是分離自左心室和右心室。標(biāo)本是放置在組織浴(5ml容積，流速為12ml/min)中并允許平衡至少30分鐘，同時(shí)用充氧蒂羅德溶液(pH＝7.35，t0＝37±0.5℃)進(jìn)行超融合并利用點(diǎn)刺激置于1Hz的基礎(chǔ)周長(zhǎng)(BCL)。蒂羅德溶液的組成(單位mM)如下NaCl 129、KCl 4、NaH2PO40.9、NaHCO320、CaCl21.8、MgSO40.5、及D-葡萄糖5.5。
動(dòng)作電位記錄跨膜電位是利用標(biāo)準(zhǔn)玻璃微電極進(jìn)行記錄，其中微電極填充以2.7M KCl(10-20MΩDC電阻)并連接于高輸入阻抗放大系統(tǒng)(World Precision Instruments，Sarasota，F(xiàn)L，美國(guó))。放大信號(hào)顯示于Tektronix(Beaverton，OR，美國(guó))示波器并放大(型號(hào)1903-4可編程放大器[Cambridge Electronic Designs(C.E.D.)，Cambridge，英國(guó)])，數(shù)字化(型號(hào)1401 AD/DA系統(tǒng)[C.E.D.])，分析(Spike 2獲取和分析模塊[C.E.D.])，然后存儲(chǔ)于磁性介質(zhì)(個(gè)人計(jì)算機(jī))。
B.研究試驗(yàn)方案對(duì)照記錄是在30分鐘平衡期以后獲得。測(cè)定了雷諾嗪的增加的濃度(1、5、10、50、以及100μM)，其中在加入每種藥物濃度以后20分鐘開(kāi)始記錄。雷諾嗪作用的速率相關(guān)性是在300、500、800、1000、2000、及5000msec的基礎(chǔ)周長(zhǎng)(BCL)下通過(guò)記錄動(dòng)作電位來(lái)評(píng)估。在本報(bào)告中，僅提供500和2000msec基礎(chǔ)周長(zhǎng)，作為相對(duì)快速和緩慢起搏速率的代表。
測(cè)量了以下動(dòng)作電位參數(shù)a.在50％(APD50)和90％(APD90)復(fù)極化時(shí)的動(dòng)作電位時(shí)程。
b.振幅c.過(guò)沖d.靜息膜電位e.動(dòng)作電位(Vmax)的上升支(upstroke)的上升速率。
因?yàn)橐阎图?xì)胞外鉀離子可促進(jìn)藥物誘發(fā)APD延長(zhǎng)和早期后除極，我們?cè)谟姓?4mM)和低(3mM)[K+]0的情況下測(cè)定了雷諾嗪的效應(yīng)。
在最后階段種，我們?cè)u(píng)定了雷諾嗪對(duì)由d-索他洛爾(100μM)、一種相當(dāng)特異的IKr阻滯劑所誘導(dǎo)的EADs的影響。
雷諾嗪二氫氯化物用蒸餾水稀釋以制成50mM的儲(chǔ)備溶液。對(duì)于每個(gè)實(shí)驗(yàn)制備新鮮的藥物。
統(tǒng)計(jì)利用單向重復(fù)測(cè)量方差分析(ANOVA)再加上Bonferroni檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
實(shí)施例17正常細(xì)胞外鉀離子濃度(4mM)雷諾嗪(1-100μM)對(duì)浦肯野纖維的復(fù)極化產(chǎn)生濃度依賴和速率相關(guān)效應(yīng)(圖20)。低濃度的雷諾嗪(1-10μM)不產(chǎn)生效應(yīng)或產(chǎn)生相對(duì)較小的APD縮短。在快和慢速率下高濃度的雷諾嗪(50和100μM)顯著縮短APD50。相反，在慢起搏速率下APD90被顯著縮短，但在快起搏速率下則沒(méi)有(圖20)。在藥物的任何濃度下沒(méi)有觀察到EAD的征兆。
為了評(píng)估雷諾嗪對(duì)INa的影響，我們測(cè)定了藥物對(duì)動(dòng)作電位(Vmax)的上升支的上升速率的影響。在濃度為50和100μM時(shí)雷諾嗪引起Vmax的顯著下降(圖21)，表明藥物對(duì)INa的抑制。
在濃度為1-50μM時(shí)，雷諾嗪對(duì)振幅、過(guò)沖、或靜息膜電位產(chǎn)生很小至沒(méi)有影響(表11)。
此實(shí)驗(yàn)在經(jīng)過(guò)7種不同方式處理的大豆產(chǎn)品上進(jìn)行。樣品A是磨成粉的大豆(Sunlight Foods Corporation，Taipei County，Taiwan)。樣品B是樣品A經(jīng)約8-15kGyγ-射線輻射后得到的大豆粉。樣品C是萃取掉大豆粉中的油之后得到的大豆粉(Central Soya Company，Inc.，F(xiàn)ort Weyne，IN生產(chǎn)的Soyafluff 200W)。樣品D是用去殼大豆和水制成的豆?jié){粉，然后過(guò)濾、加熱并噴霧干燥(DevansoyFarms，Carroll，Iowa)，并受到約7-9kGyγ-射線的輻射。樣品E是通過(guò)混合大豆和水，加熱混合物一夜，然后在該混合物中加入1，3-丁二醇得到的豆?jié){粉(Flavosterone SB，購(gòu)自Ichimam Pharcos Co.，Ltd，Gifu Japan)。樣品F是通過(guò)混合大豆和水，加熱混合物一夜，然后在該混合物中加入乙醇得到的豆?jié){粉(Flavosterone SB，購(gòu)自Ichimaru Pharcos Co.，Ltd，Gifu Japan)。樣品G是大豆蛋白質(zhì)的提取物(Vegeseryl HGP LS 8572，購(gòu)自Laboratories SerobiologiquesS.A.，Pulnoy，F(xiàn)rance)。這些大豆產(chǎn)品均與大豆胰蛋白酶抑制劑(STI)(Sigma)比較。
不同的大豆制劑對(duì)底物胰蛋白酶分裂的抑制百分比用Microsoft Excel軟件計(jì)算，結(jié)果列于表1。
表1
0＝3.0mM；BCL＝500msec數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，n＝5，*p＜0.05，與對(duì)照比較大于5-10μM的濃度顯著縮短APD50。如同更高水平的[K+]0一樣，高濃度雷諾嗪(50和100μM)顯著降低0相位振幅和動(dòng)作電位過(guò)沖。從來(lái)沒(méi)有觀察到EADs。
雷諾嗪抑制d-索他洛爾誘導(dǎo)的EADs在6個(gè)浦肯野纖維標(biāo)本的4個(gè)標(biāo)本中特異IKr阻滯劑d-索他洛爾(100μM)誘導(dǎo)EAD活性。雷諾嗪，在低到5μM的濃度，在4個(gè)浦肯野纖維標(biāo)本的4個(gè)標(biāo)本中迅速地消除d-索他洛爾誘導(dǎo)的EADs(圖23)。更高水平的雷諾嗪(10μM)產(chǎn)生動(dòng)作電位的更大縮短。
實(shí)施例18IV.在經(jīng)麻醉的狗中雷諾嗪對(duì)QT延長(zhǎng)和心律失常誘導(dǎo)的影響與索他洛爾比較A.材料和方法狗用Atravet(0.07/mg/kg sc)預(yù)處理，15分鐘后用氯胺酮(5.3mg/kg iv)和安定(0.25mg/kg iv)、接著用異氟烷(1-2％)麻醉，用插管法治療并進(jìn)行機(jī)械通氣。然后，通過(guò)射頻消融使它們進(jìn)行AV阻斷。進(jìn)行正中胸骨切開(kāi)術(shù)，然后導(dǎo)管插入股動(dòng)脈用于記錄血壓(BP)并插入兩個(gè)股靜脈用于輸注試驗(yàn)藥物。雙向電極被插入兩個(gè)心室，用于程序性刺激測(cè)定不應(yīng)期(額外刺激技術(shù))，以及用于在各種受控基礎(chǔ)周長(zhǎng)(BCLs)下評(píng)估QT時(shí)間和QRS時(shí)程。TdP是由去氧腎上腺素的激發(fā)所誘導(dǎo)，其是作為10、20、30、40、以及50μg/kg的推注靜脈劑量給予。在每個(gè)劑量以后，連續(xù)監(jiān)測(cè)ECG以檢測(cè)心律失常。在給予去氧腎上腺素以后BP總是上升，然后提供足夠的時(shí)間(至少10分鐘)以便在給予去氧腎上腺素的下一劑量之前使BP正常化。試驗(yàn)藥物效應(yīng)是根據(jù)以下程序進(jìn)行評(píng)估。
數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)平均誤差。用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較。雙尾概率＜0.05被認(rèn)為是表明具有統(tǒng)計(jì)顯著性。在數(shù)據(jù)表中，*代表P＜0.05，**代表P＜0.01。
B.研究設(shè)計(jì)(實(shí)驗(yàn)方案)輸注試驗(yàn)藥物第1組(5只狗)靜脈注射給予索他洛爾，負(fù)荷劑量為8mg/kg而維持劑量為4mg/kg/hr。第2組(6只狗)5只狗接受雷諾嗪0.5mg/kg靜脈注射負(fù)荷，接著是分別為1.0、3.0、及15mg/kg/hr的第一次、第二次、及第三次連續(xù)靜脈輸注(ivinfusion)。1只狗接受雷諾嗪1.5mg/kg靜脈注射負(fù)荷，接著是輸注15和30mg/kg/hr。在開(kāi)始維持輸注(對(duì)于索他洛爾)20分鐘以后或在開(kāi)始每個(gè)靜脈輸注速率(對(duì)于雷諾嗪)30分鐘以后，在BCLs為300、400、600、及1000ms下獲得電生理測(cè)量結(jié)果(右和左心室ERP、QT和QRS)。然后，給予去氧腎上腺素加強(qiáng)劑量，其中在每個(gè)藥物輸注速率下給予所有劑量，并監(jiān)測(cè)任何心律失常。
實(shí)施例19表13總結(jié)了在模型中索他洛爾的前心律失常(proarrhythmic)效應(yīng)(二聯(lián)律、三聯(lián)律、尖端扭轉(zhuǎn)、以及尖端扭轉(zhuǎn)退化成心室顫動(dòng))。
表13在索他洛爾組中心律失常發(fā)病率
VT＝室性心動(dòng)過(guò)速，VF＝心室顫動(dòng)，mono＝單形的，tdp＝尖端扭轉(zhuǎn)，CL＝周長(zhǎng)，sot＝索他洛爾，PE10、20、30、40、50分別＝10、20、30、40、50μg/kg去氧腎上腺素。
5只狗中的兩只在沒(méi)有去氧腎上腺素激發(fā)的情況下患有前心律失常(proarrhythmia)，而所有5只狗在去氧腎上腺素激發(fā)后患有原心律失常。所有這些狗最后死于退化成心室顫動(dòng)的尖端扭轉(zhuǎn)，其是由索他洛爾輸注和去氧腎上腺素推注的結(jié)合所誘導(dǎo)。索他洛爾以反向使用依賴方式增加右心室(RV)和左心室(LV)有效不應(yīng)期(表14以及圖24A和圖24B)。索他洛爾以顯著的反向使用依賴方式增加QT時(shí)間并且不影響QRS時(shí)程(表15以及圖25A和圖25B)。
表14索他洛爾對(duì)右和左心室ERP的影響(ms)平均ERP RVBCL CTLsot 8+41000 206.00±8.86 255.50±9.56**600 191.00±7.1223.50±9.07**400 174.00±7.85 195.67±7.53**300 162.00±6.82 181.33±8.21**平均ERP LVBCL CTLsot 8+41000 252.50±17.5 286.25±16.25**600 227.50±12.5 262.50±27.5**400 202.50±15 226.25±21.25300 182.50±10 201.25±18.75BCL＝基礎(chǔ)周長(zhǎng)Sot 8+4＝8mg/kg的索他洛爾靜脈注射負(fù)荷劑量+0mg/kg/hr的維持劑量
CTL＝對(duì)照*p＜0.05**p＜0.01表15對(duì)QT和QRS時(shí)間(ms)的影響QT QTBCLBCLSE CTL SE sot8+4CTLsot 8+41000 332.70±77.00 440.93**±76.93 1000 26.7±2.37 14.06±5.39600 309.85±73.60 354.67**±74.73 60021.33±2.50 15.54±3.11400 262.73±74.53 299.14*±73.53 40017.37±2.38 16.75±3.76300 238.40±74.07 266.40*±74.07 30016.95±1.86 13.11±3.68對(duì)于接受標(biāo)準(zhǔn)雷諾嗪輸注實(shí)驗(yàn)方案的5只狗可以獲得其結(jié)果。高劑量狗在30mg/kg/hr輸注期間死于泵衰竭，對(duì)該狗不可能進(jìn)行室性心律失常和電生理研究。表16總結(jié)了在有雷諾嗪的情況下的心律失常發(fā)病率，其中根據(jù)和上述對(duì)于索他洛爾的一樣的實(shí)驗(yàn)方案單獨(dú)和與去氧腎上腺素推注(10-50μg/kg)一起。在雷諾嗪輸注(有或沒(méi)有去氧腎上腺素推注)期間我們不能誘導(dǎo)任何尖端扭轉(zhuǎn)和/或心室顫動(dòng)。
表16在雷諾嗪組中心律失常發(fā)病率
Rano＝雷諾嗪，VT＝室性心動(dòng)過(guò)速，IDV＝心室自身逸搏，CL＝周長(zhǎng)，PE＝去氧腎上腺素，inf.＝輸注雷諾嗪稍微增加ERP(平均增加不大于約10％)，且沒(méi)有反向使用依賴性(表17A和B以及圖26和27)。QT時(shí)間適度地增加(最大增加大約為10％)但不顯著，其中最大效應(yīng)在每小時(shí)3mg/kg并且在更高劑量下會(huì)降低(表18A和B以及圖28和29)。
表17A雷諾嗪對(duì)右和左心室ERP(ms)的影響平均ERP-RV+標(biāo)準(zhǔn)誤差BCLCTL 0.5+1 3 151000 240.20±9.9 254.00*±9.31 249.50±6.19253.16±7.77600218.50±8.93227.50±8.87224.50±4.83229.50±6.19400194.00±6.83201.50±6.45199.66±3.75206.50±5.79300175.00±5.25182.84±6.67181.00±2.32185.00±5.76表17B雷諾嗪對(duì)右和左心室ERP(ms)的影響平均ERP-LV+標(biāo)準(zhǔn)誤差BCLCTL 0.5+1 3 151000 252.16±14.13 259.38±18.18 265.43±19.42 260.43±19.32600226.16±11.29 233.13±12.43 238.13±13.25 237.50±14.11400198.50±9.7 204.38±11.01 211.45±9.2 215.00±10.05300180.50±7.18185.00±8.1 189.38±8.32196.88*±7.53表18A雷諾嗪對(duì)QT時(shí)間(ms)的影響平均QT±標(biāo)準(zhǔn)誤差BCLCTL 0.5+1 3 151000 348.40±9.07352.52±9.05384.02±13.9369.80±11.6600318.20±8.58323.50±7.74345.00±10.04 336.34±11.43400285.40±6.02286.50±5.76306.46±10.38 302.18±9.33300263.60±6.61266.16±6.36272.72±6.09274.82±6.48
表18B雷諾嗪對(duì)QRS時(shí)間的影響平均QT±標(biāo)準(zhǔn)誤差BCLCTL0.5+1 3 151000 72.10±2.9672.51±3.3574.24±2.9 78.50±2.660070.90±3.2771.68±2.9473.72±2.2974.84*±2.5640071.37±3.5372.36±3.3973.18±2.5776.82±3.0630070.65±3.5273.60±2.8 73.26±2.3378.48*±2.8實(shí)施例20在動(dòng)作電位電壓鉗期間雷諾嗪對(duì)后期INa的影響給予成年雄性雜種狗180IU/kg肝素(鈉鹽)然后用35mg/kg(靜脈注射)戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，其心臟被快速切除并放在蒂羅德溶液中。單肌細(xì)胞是通過(guò)酶分離獲自由左旋支冠狀動(dòng)脈提供的心室游離壁的楔形切片。使用了來(lái)自左心室的中心肌區(qū)域的細(xì)胞。所有程序與動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)建立的準(zhǔn)則一致。
在分離中使用的蒂羅德溶液含有(單位mM)135 NaCl、5.4KCl、1 MgCl2、0或0.5 CaCl2、10葡萄糖、0.33 NaH2PO4、10 N-2-羥乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)，而pH用NaOH調(diào)節(jié)到7.4。使用的外部溶液和內(nèi)溶液的組成總結(jié)于表19。
表19
在37℃下利用標(biāo)準(zhǔn)膜片電極記錄后期INa。將分離的細(xì)胞放置在倒置顯微鏡載物臺(tái)上的溫度受控的0.5ml室中(Medical System，Greenvale，NY)并以2ml/min的速率進(jìn)行超融合。距離細(xì)胞100μm放置的4套管石英微支管(ALA Scientific Instruments公司，Westbury，NY)被用來(lái)施加雷諾嗪和河豚毒素(TTX)。在管線中的加熱器(Harvard/Warner，Holliston，MA)被用來(lái)維持在石英微支管內(nèi)的溶液的溫度。以電壓鉗方式操作Axopatch 700A放大器(AxonInstruments，F(xiàn)oster City，CA)以在37℃下記錄電流。全細(xì)胞電流在5kHz下用4極低通Bessel濾波器進(jìn)行濾波，在2-5kHz之間進(jìn)行數(shù)字化(Digidata 1200A，Axon Instruments)并存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)。使用pClamp 8.2軟件(Axon Instruments)來(lái)記錄和分析離子電流。吸管尖端電阻是1.0-1.5MΩ而密封電阻大于5GΩ。串聯(lián)電阻的電子補(bǔ)償平均為76％。對(duì)報(bào)道的電壓作膜片電極尖端電位方面的校正。細(xì)胞膜和膜片吸管之間的密封最初形成在含有1mM CaCl2的蒂羅德溶液中。將3M KCl-瓊脂橋用在Ag/AgCl接地電極和外部溶液之間以避免在切換到實(shí)驗(yàn)溶液時(shí)產(chǎn)生地電位。
在水中制備河豚毒素(TTX)并以1∶100的比例稀釋，以在外部溶液中獲得10μM的最終濃度。在水中制備5mM濃度的雷諾嗪二氫氯化物并在外部溶液中稀釋到1-50μM范圍內(nèi)的最終濃度。
INa，late是在一系列30個(gè)脈沖期間以300和2000ms的重復(fù)率進(jìn)行記錄。在該系列的最后5個(gè)脈沖期間的電流被平均以降低噪聲，而后期INa被定義為T(mén)TX敏感電流。在無(wú)藥物溶液中、在加入雷諾嗪后2至4分鐘、以及緊接著在加入10μM TTX以后對(duì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行重復(fù)以完全阻斷INa，late。
動(dòng)作電位而不是矩形脈沖被用于電壓鉗INa，late。在BCL為300ms下，測(cè)量是在中間通過(guò)在13mV電壓的坪以及在3期復(fù)極化(在-28mV的電壓)期間進(jìn)行。在BCL為2000ms下，測(cè)量是在20mV和-28mV的電壓下在類(lèi)似位置進(jìn)行。在半對(duì)數(shù)尺度上畫(huà)出了后期ICa的下降(作為藥物濃度的函數(shù))并擬合到對(duì)數(shù)方程。
圖30顯示在對(duì)照溶液中以及在20μM雷諾嗪加入外部溶液3分鐘后的TTX敏感電流。每2000ms對(duì)細(xì)胞加以脈沖，脈沖數(shù)為30。該圖顯示，坪電流比鈉電流(在動(dòng)作電位箝位后期所記錄)對(duì)雷諾嗪更敏感。在20mV抑制最大，但在有雷諾嗪的情況下，在-28mV仍然有一些TTX敏感電流。
圖31顯示類(lèi)似實(shí)驗(yàn)的簡(jiǎn)明結(jié)果，其中雷諾嗪(1-50μM)被加入外部溶液。后期INa的半抑制分別發(fā)生在5.9μM和20.8μM的藥物濃度。圖32顯示在坪期間抑制更有效，甚至在細(xì)胞每300ms被加以脈沖時(shí)。
圖33顯示類(lèi)似實(shí)驗(yàn)的復(fù)合數(shù)據(jù)，其中雷諾嗪被加入外部溶液。當(dāng)以2000ms和300ms的基礎(chǔ)周長(zhǎng)加以脈沖時(shí)，后期INa的半抑制分別發(fā)生在20.8μM和11.5μM的藥物濃度。
實(shí)施例21雷諾嗪對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞的動(dòng)作電位時(shí)程的影響心室肌細(xì)胞的分離單心室肌細(xì)胞分離自成年雄性豚鼠(Harlan)的心臟。簡(jiǎn)而言之，心臟以下述次序灌注以熱(35℃)和充氧溶液1)蒂羅德溶液，含有(單位mmol/L)140 NaCl、4.6 KCl、1.8 CaCl2、1.1 MgSO4、10葡萄糖、以及5 HEPES，pH7.4，5分鐘；2)無(wú)鈣離子溶液，含有(單位mmol/L)100 NaCl、30 KCl、2 MgSO4、10葡萄糖、5 HEPES、20牛磺酸、以及5丙酮酸鹽，pH7.4，5分鐘；以及3)無(wú)鈣離子溶液，含有sollagenase(120單位/ml)和白蛋白(2mg/ml)，20分鐘。在灌注的最后，心室被移走，切碎，然后在3#溶液中輕輕地振蕩10分鐘。分離的細(xì)胞收集自細(xì)胞懸浮液。
動(dòng)作電位時(shí)程的測(cè)量肌細(xì)胞被放置在記錄室中并在35℃用蒂羅德溶液進(jìn)行超融合。借助于超融合液施加藥物。利用填充以溶液的玻璃微電極測(cè)量動(dòng)作電位，其中溶液含有(單位mmol/L)120天冬氨酸鉀、20 KCl、1MgCl2、4 Na2ATP、0.1 Na3GTP、10葡萄糖、1 EGTA、以及10 HEPES(pH7.2)。微電極電阻是1-3MΩ。使用Axopatch-200放大器、DigiData-1200A接口以及pCLAMP6軟件來(lái)進(jìn)行電生理測(cè)量。動(dòng)作電位是由在各種頻率(如指出的)下施加的5ms去極化脈沖所誘導(dǎo)。動(dòng)作電位時(shí)程是在50％(APD50)和90％(APD90)復(fù)極化下進(jìn)行測(cè)量。當(dāng)對(duì)藥物的反應(yīng)已達(dá)到穩(wěn)定的最大值時(shí)進(jìn)行測(cè)量。
實(shí)驗(yàn)方案1)在0.5、1、或2Hz頻率下對(duì)心室肌細(xì)胞進(jìn)行電刺激。每個(gè)肌細(xì)胞用3、10、以及30μmol/L雷諾嗪進(jìn)行處理。從4個(gè)肌細(xì)胞測(cè)定了在每個(gè)起搏頻率下雷諾嗪對(duì)動(dòng)作電位時(shí)程的影響。
2)在0.25Hz頻率下誘發(fā)了動(dòng)作電位，并在有5μmol/L奎尼丁的情況下檢查了雷諾嗪(10μmol/L)對(duì)動(dòng)作電位時(shí)程的影響。對(duì)4個(gè)肌細(xì)胞進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。
統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)平均誤差。將成對(duì)t檢驗(yàn)(Student’st-test)用于成對(duì)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，然后，單向重復(fù)測(cè)量ANOVA再加上Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)用于多重比較。p值＜0.05被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)顯著的。
在各種起搏頻率下雷諾嗪的影響在不存在藥物的情況下，在0.5(n＝4)、1(n＝4)以及2(n＝1)Hz的刺激頻率下測(cè)量的APD50和APD90分別為250±20、221±18、以及208±9ms、和284±22、251±20、以及245±9ms。因而，增加起搏頻率導(dǎo)致動(dòng)作電位時(shí)程的速率相關(guān)縮短。與起搏頻率無(wú)關(guān)，雷諾嗪引起APD50和APD90的中等和濃度依賴縮短。圖34顯示3、10、以及30μmol/L雷諾嗪降低在0.5、1、或2Hz下受刺激的肌細(xì)胞的動(dòng)作電位時(shí)程。由雷諾嗪引起的動(dòng)作電位時(shí)程的縮短在清除藥物后是部分地可逆的。
圖35顯示獲自單肌細(xì)胞的結(jié)果，其中單肌細(xì)胞首先在2Hz、然后在0.5Hz進(jìn)行起搏。在兩個(gè)起搏頻率下，雷諾嗪(30μmol/L)引起動(dòng)作電位時(shí)程的類(lèi)似縮短。在不存在和存在3、10、及30μmol/L雷諾嗪的情況下并在0.5、1、及2Hz的起搏頻率下測(cè)量的APD50和APD90的比較示于圖36。在各種起搏頻率下由雷諾嗪引起的APD50和APD90的縮短被歸一化為對(duì)照的百分?jǐn)?shù)，并示于圖37。
在有奎尼丁的情況下雷諾嗪的影響圖38A顯示奎尼丁(5μmol/L)增加在0.25Hz下被起搏的肌細(xì)胞的動(dòng)作電位時(shí)程。雷諾嗪(10μmol/L)被證明已減弱奎尼丁的影響。
除延長(zhǎng)動(dòng)作電位時(shí)程以外，已知奎尼丁還可以誘導(dǎo)早期后除極(EADs)、觸發(fā)激動(dòng)、以及尖端扭轉(zhuǎn)。如圖39和40所示，奎尼丁(2.5μmol/L)誘導(dǎo)EADs和觸發(fā)激動(dòng)。研究發(fā)現(xiàn)，雷諾嗪(10μmol/L)可以有效抑制奎尼丁誘導(dǎo)的EADs(圖39)和觸發(fā)激動(dòng)(圖40)。
實(shí)施例22按照實(shí)施例21的程序和實(shí)驗(yàn)方案，在有雷諾嗪的情況下對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞進(jìn)行了電刺激，其是單獨(dú)或在有ATXII[海葵毒素，已知可以模擬LQT3綜合征，其是通過(guò)放慢自開(kāi)放狀態(tài)的鈉離子通道失活并借此增加心肌細(xì)胞的峰值和后期鈉離子電流(INa)]的情況下進(jìn)行。已知ATXII可以誘導(dǎo)早期后除極(EADs)、觸發(fā)激動(dòng)、以及室性心動(dòng)過(guò)速。
研究發(fā)現(xiàn)，ATXII(10-40nmol/L)明顯增加在50％復(fù)極化(APD50)下測(cè)量的動(dòng)作電位時(shí)程從273±9ms到1,154±61ms(n＝20，p＜0.001)，如圖41所示，并且在所有細(xì)胞中誘導(dǎo)EADs。常常觀察到多個(gè)EADs和產(chǎn)生的持續(xù)去極化。低到1μmol/L濃度的雷諾嗪有效地消除ATXII誘導(dǎo)的EADs和觸發(fā)激動(dòng)。濃度為1、3、10、及30μmol/L的雷諾嗪顯著地(p＜0.001)減弱由ATXII引起的APD50的延長(zhǎng)，分別為60±4％(n＝7)、80±2％(n＝7)、86±2％(n＝12)、及99±1％(n＝8)，如圖42、43、44、45、以及46所示。這些圖形描述5個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)。
實(shí)施例23為了研究雷諾嗪對(duì)ATXII誘導(dǎo)的MAP(單相動(dòng)作電位)時(shí)程延長(zhǎng)、EADs、以及室性心動(dòng)過(guò)速(VT)的影響，使用了K-H緩沖液灌注的豚鼠分離心臟模型。
研究發(fā)現(xiàn)ATXII(10-20nM)在4個(gè)沒(méi)有快速室性心律失常的心臟中延長(zhǎng)MAPD906％。在10/14豚鼠分離心臟中ATXII明顯誘導(dǎo)EADs和多形VT。在有ATXII的情況下，5、10、及30μM的雷諾嗪顯著抑制EADs和VT，特別是持續(xù)VT。在消除雷諾嗪以后雷諾嗪的保護(hù)效應(yīng)是可逆的。這些結(jié)果示于圖47至圖50。
圖47顯示對(duì)照、ATXII(20nM)、及ATXII(20nM)加上雷諾嗪(10μM)的MAP和ECG。該圖表明雷諾嗪降低了ATXII誘導(dǎo)的EAD和MAP延長(zhǎng)。
圖48顯示ATXII(20nM)誘導(dǎo)VT的MAP和ECG，自發(fā)VT或起搏誘導(dǎo)的VT。
圖49顯示雷諾嗪降低了ATXII誘導(dǎo)的VT。該圖顯示單獨(dú)ATXII(20nM)和ATXII(20nM)加上雷諾嗪(30μM)的MAP和ECG。
圖50顯示雷諾嗪(10μM)逆轉(zhuǎn)了ATXII誘導(dǎo)的EAD和ΔMAP。
實(shí)施例24為了測(cè)定雷諾嗪是否抑制ATX-II誘導(dǎo)的1)EADs和觸發(fā)激動(dòng)(TA)、以及2)室性心動(dòng)過(guò)速(VT)，分別使用了豚鼠心室肌細(xì)胞和分離的心臟。
利用全細(xì)胞膜片電極技術(shù)記錄動(dòng)作電位。室性單相動(dòng)作電位和電圖是記錄自分離的心臟。ATX-II(10-20nmol/L)增加在50％復(fù)極化(APD50)下測(cè)量的APD從271±7ms到1,148±49ms(n＝24，p＜0.001)，并且在所有細(xì)胞中誘導(dǎo)EADs。常常觀察到多個(gè)EADs和持續(xù)去極化。濃度≥1μmol/L的雷諾嗪消除ATX-II誘導(dǎo)的EADs和TA。濃度為0.1、0.3、1、3、10、以及30μmol/L的雷諾嗪顯著地(p＜0.001)降低由ATX-II引起的APD50的延長(zhǎng)，分別為29±1％(n＝5)、47±1％(n＝5)、63±3％(n＝11)、79±1％(n＝10)、86±2％(n＝12)、以及99±1％(n＝8)。雷諾嗪(10μmol/L)還抑制由2.5μmol/L奎尼丁(n＝2)誘導(dǎo)的EADs和TA。在10/14分離心臟中ATX-II(10-20nmol/L)引起EADs和VT；5-30μmol/L的雷諾嗪顯著降低ATX-II誘導(dǎo)的EADs并終止TVs。
實(shí)施例25為了測(cè)定INa(L)的ATX-II(其模擬SCN5A突變)的增加是否促進(jìn)E-4031和293B(延遲整流電流(IK)的快速和慢速成分的鉀通道阻滯劑)延長(zhǎng)APD和誘導(dǎo)EADs的效應(yīng)，以及雷諾嗪是否逆轉(zhuǎn)ATX-II和鉀離子阻滯劑的效應(yīng)，使用了豚鼠心室肌細(xì)胞以及分離的心臟。
分別在50％(APD50)和90％(MAPD90)復(fù)極化下測(cè)量了豚鼠分離肌細(xì)胞和心臟的室性APD。低濃度的ATX-II(3nmol/L)僅稍微增加APD506±2％。然而，當(dāng)施加E-4031或293B時(shí)，ATX-II大大地加強(qiáng)這些鉀離子阻滯劑延長(zhǎng)APD的效應(yīng)。在不存在和存在ATX-II的情況下，APD50分別被E-4031(1μmol/L)增加11±2％和104±41％，而APD50被293B(30μmol/L)增加40±7％和202±59％。此外，在存在ATX-II的情況下E-4031和293B誘導(dǎo)EADs，但在不存在ATX-II的情況下E-4031和293B則不誘導(dǎo)EADs。在存在ATX-II加上E-4031或293B的情況下雷諾嗪(10μmol/L)完全消除EADs并顯著地逆轉(zhuǎn)APD50的延長(zhǎng)約70％。ATX-II(7nmol/L)、E-4031(1μmol/L)、以及293B(1μmol/L)分別單獨(dú)增加MAPD9032±0.1％、30.1±0.1％、以及6.3±0.2％。當(dāng)施加ATX-II時(shí)，E-4031和293B增加MAPD90分別為127.1±0.4％和3 1.6±0.1％。在存在ATX-II加上E-4031的情況下雷諾嗪(10μmol/L)顯著降低MAPS9024.5±0.1％，而在存在ATX-II加上293B的情況下雷諾嗪(10μmol/L)則降低MAPS908.3±0.1％。
權(quán)利要求
1.一種治療哺乳動(dòng)物心律失常的方法，包括給予有效治療量的化學(xué)式I的化合物 化學(xué)式I其中R1、R2、R3、R4以及R5每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氰基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫酰基、低級(jí)烷基磺?；?、或N-可選取代的烷基酰氨基，若R1是甲基，則R4不是甲基；或R2和R3一起形成-OCH2O-；R6、R7、R8、R9以及R10每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)酰基、氨羰基甲基、氰基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫?；⒌图?jí)烷基磺?；?、或二低級(jí)烷基氨基；或R6和R7一起形成-CH＝CH-CH＝CH-；或R7和R8一起形成-O-CH2O-；R11和R12每個(gè)獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；以及W是氧或硫；或其異構(gòu)體、或化學(xué)式I的化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽或酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化學(xué)式I的化合物是雷諾嗪，其被命名為N-(2，6-二甲基苯基)-4-[2-羥基-3-(2-甲氧基苯氧基)丙基]-1-哌嗪乙酰胺，或其異構(gòu)體，或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化學(xué)式I的化合物是以抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道但不抑制鈣通道的劑量水平給予。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中雷諾嗪為藥用鹽形式。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述藥用鹽是二氫氯化物鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中雷諾嗪為游離堿形式。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給予包括抑制后期INa離子通道的劑量水平。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給予包括抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道的劑量水平。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給予包括抑制IKr、IKs、以及后期INa離子通道但不抑制鈣通道的劑量水平。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化學(xué)式I的化合物是以提供至少350±30ng/mL的所述化學(xué)式I的化合物的血漿水平、時(shí)間至少為12小時(shí)的方式給予。
11.一種治療哺乳動(dòng)物心律失常的方法，包括給予化學(xué)式I的化合物 化學(xué)式I其中R1、R2、R3、R4以及R5每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氰基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫酰基、低級(jí)烷基磺?；?、或N-可選取代的烷基酰氨基，若R1是甲基時(shí)，則R4不是甲基；或R2和R3一起形成-OCH2O-；R6、R7、R8、R9以及R10每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)酰基、氨羰基甲基、氰基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫?；?、低級(jí)烷基磺?；?、或二低級(jí)烷基氨基；或R6和R7一起形成-CH＝CH-CH＝CH-；或R7和R8一起形成-O-CH2O-；R11和R12每個(gè)獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；以及W是氧或硫；或其異構(gòu)體、或化學(xué)式I的化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽或酯，作為緩釋劑型，其維持所述化學(xué)式I的化合物的血漿濃度在小于4000ng/mL的最大值，優(yōu)選在約350至約4000ng堿/mL之間，時(shí)間至少為12小時(shí)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中化學(xué)式I的化合物是以含有在約10mg和700mg之間的化學(xué)式I的化合物的劑型給予。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述化學(xué)式I的化合物是雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物是以每升劑型提供約1至約30微摩爾的劑量水平的劑型給予。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述劑型提供每升劑型約1至約10微摩爾的劑量水平。
16.一種治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物心律失常的方法，包括給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
17.一種治療或預(yù)防獲得性心律失常(由對(duì)處方藥物或其他化學(xué)藥品的敏感性所引起的心律失常)的方法，包括給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物有效治療量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
18.一種治療或預(yù)防遺傳性心律失常(由基因突變所引起的心律失常)的方法，包括給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
19.一種治療或預(yù)防在具有遺傳決定的先天性LQTS的哺乳動(dòng)物中心律失常的方法，包括給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
20.一種預(yù)防尖端扭轉(zhuǎn)的方法，包括給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
21.一種治療或預(yù)防在受LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中心律失常的方法，包括給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
22.一種治療或預(yù)防在受LQT1、LQT2、以及LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中心律失常的方法，包括給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
23.一種減輕在受LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中心律失常的方法，包括給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
24.一種減輕在受LQT1、LQT2、以及LQT3折磨的哺乳動(dòng)物中心律失常的方法，包括給予對(duì)其需要的哺乳動(dòng)物有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
25.一種預(yù)防心律失常的方法，包括對(duì)適當(dāng)群體篩選SCN5A基因突變并給予受所述基因突變折磨的患者有效量的雷諾嗪、或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
26.一種治療哺乳動(dòng)物室性心動(dòng)過(guò)速的方法，包括給予需要這種治療的哺乳動(dòng)物有效治療劑量的化學(xué)式I的化合物 化學(xué)式I其中R1、R2、R3、R4以及R5每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氰基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫?；⒌图?jí)烷基磺?；?、或N-可選取代的烷基酰氨基，若R1是甲基，則R4不是甲基；或R2和R3一起形成-OCH2O-；R6、R7、R8、R9以及R10每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)?；濒驶谆?、氰基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫酰基、低級(jí)烷基磺?；⒒蚨图?jí)烷基氨基；或R6和R7一起形成-CH＝CH-CH＝CH-；或R7和R8一起形成-O-CH2O-；R11和R12每個(gè)獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；以及W是氧或硫；或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽或酯，其同時(shí)抑制IKr、IKs、以及后期鈉離子通道。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述化合物在并不抑制心臟鈣離子通道的劑量水平抑制心臟IKr、IKs、以及后期鈉離子通道。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述室性心動(dòng)過(guò)速是尖端扭轉(zhuǎn)。
29.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述化合物是雷諾嗪，其被命名為N-(2，6-二甲基苯基)-4-[2-羥基-3-(2-甲氧基苯氧基)丙基]-1-哌嗪乙酰胺，或其異構(gòu)體，或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽。
30.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中為有效地調(diào)節(jié)所述心臟IKr、IKs、以及后期鈉離子通道而沒(méi)有調(diào)節(jié)所述心臟鈣離子通道所需的劑量水平提供所述化合物的血漿水平在1-100μM之間。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中為有效地調(diào)節(jié)所述心臟IKr、IKs、以及后期鈉離子通道而沒(méi)有調(diào)節(jié)所述心臟鈣離子通道所需的劑量水平提供所述化合物的血漿水平在1-50μM之間。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中為有效地調(diào)節(jié)所述心臟IKr、IKs、以及后期鈉離子通道而沒(méi)有調(diào)節(jié)所述心臟鈣離子通道所需的劑量水平提供所述化合物的血漿水平在1-20μM之間。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中為有效地調(diào)節(jié)所述心臟IKr、IKs、以及后期鈉離子通道而沒(méi)有調(diào)節(jié)所述心臟鈣離子通道所需的劑量水平提供所述化合物的血漿水平在1-10μM之間。
34.一種治療心臟受損哺乳動(dòng)物室性心動(dòng)過(guò)速的方法，包括給予需要這種治療的哺乳動(dòng)物有效治療劑量的調(diào)節(jié)所述心臟IKr、IKs、及后期鈉離子通道而沒(méi)有調(diào)節(jié)所述心臟鈣離子通道的化合物。
35.一種治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物藥物誘發(fā)性室性心動(dòng)過(guò)速的方法，包括給予需要這種治療的哺乳動(dòng)物有效治療量的抑制所述心臟IKr、IKs、以及后期鈉離子通道的化合物。
36.一種治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物遺傳性室性心動(dòng)過(guò)速的方法，包括給予需要這種治療的哺乳動(dòng)物有效治療量的抑制所述心臟IKr、IKs、以及后期鈉離子通道的化合物。
37.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物是通過(guò)大丸劑或緩釋組合物給予。
38.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物是靜脈內(nèi)給予。
39.化學(xué)式I的化合物用于治療哺乳動(dòng)物心律失常的應(yīng)用， 化學(xué)式I其中R1、R2、R3、R4以及R5每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氰基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫?；⒌图?jí)烷基磺?；?、或N-可選取代的烷基酰氨基，若R1是甲基，則R4不是甲基；或R2和R3一起形成-OCH2O-；R6、R7、R8、R9以及R10每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)?；?、氨羰基甲基、氰基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫?；?、低級(jí)烷基磺?；?、或二低級(jí)烷基氨基；或R6和R7一起形成-CH＝CH-CH＝CH-；或R7和R8一起形成-O-CH2O-；R11和R12每個(gè)獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；以及W是氧或硫；或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽或酯。
40.一種治療出現(xiàn)在心肌缺血如不穩(wěn)定心絞痛、慢性心絞痛、變異型心絞痛、心肌梗死、急性冠狀綜合征、以及另外出現(xiàn)在心力衰竭(急性和/或慢性)中的室性心動(dòng)過(guò)速的方法，包括給予有效治療量的化學(xué)式I的化合物 化學(xué)式I其中R1、R2、R3、R4以及R5每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氰基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫酰基、低級(jí)烷基磺?；⒒騈-可選取代的烷基酰氨基，若R1是甲基，則R4不是甲基；或R2和R3一起形成-OCH2O-；R6、R7、R8、R9以及R10每個(gè)獨(dú)立地是氫、低級(jí)?；?、氨羰基甲基、氰基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、三氟甲基、鹵基、低級(jí)烷基硫、低級(jí)烷基亞硫?；?、低級(jí)烷基磺酰基、或二低級(jí)烷基氨基；或R6和R7一起形成-CH＝CH-CH＝CH-；或R7和R8一起形成-O-CH2O-；R11和R12每個(gè)獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；以及W是氧或硫；或其異構(gòu)體、或所述化合物或其異構(gòu)體的藥用鹽或酯。
全文摘要
本發(fā)明提供了以將不希望的副作用減至最低程度的方式治療心律失常的方法，其中心律失常包括心動(dòng)過(guò)速，如特發(fā)性室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)、以及尖端扭轉(zhuǎn)(TdP)。
文檔編號(hào)A61P9/06GK1646127SQ03807871
公開(kāi)日2005年7月27日 申請(qǐng)日期2003年4月4日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月4日
發(fā)明者路易斯·貝拉爾迪內(nèi)利, 查爾斯·安茨葉列維奇, 布倫特·布萊克本 申請(qǐng)人:Cv醫(yī)藥有限公司