專利名稱：姜黃素在制備治療肺病的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物在醫(yī)藥中的用途，具體地說，是姜黃素在制備治療肺病的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
各種肺部疾患是一種嚴(yán)重危害人民健康的疾病。塵肺病是我國的主要職業(yè)病，2002年共報告塵肺病新病例12248例，較2001年增加了16.6％。在職業(yè)病總病例數(shù)中，塵肺病占82.6％。在各類塵肺病例中，煤工塵肺和矽肺仍為主要病種。截止2002年，我國塵肺病累積病例581377名，其中仍存活患者442200例。例如我國今年流行的非典肺炎SARS就造成了影響全國的疾病突發(fā)事件。又例如肺結(jié)核，據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，全球已有近1/3的人口已經(jīng)感染了結(jié)核菌，每年新發(fā)生結(jié)核病人870萬例，每年死于結(jié)核病達(dá)200萬例。全球目前有結(jié)核病病人2000萬例。在紀(jì)念“世界防治結(jié)核病日”之際，“制止結(jié)核病”世界行動組織公布的一項統(tǒng)計數(shù)字顯示，目前全球每天仍然有5000人死于結(jié)核病，而每年罹患結(jié)核病的人超過800萬。結(jié)核病仍然是危害人類健康的一種重要疾病。我國是世界上22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，結(jié)核病患者居世界第二位，其中80％在農(nóng)村。結(jié)核病是我國農(nóng)村因病致貧、因病返貧的主要疾病之一。據(jù)2000年調(diào)查顯示，我國現(xiàn)有結(jié)核菌感染者4億人，結(jié)核病患者500萬人，其中傳染性肺結(jié)核病患者200萬人；每年因患結(jié)核病死亡的人數(shù)達(dá)到13萬人。如不能有效控制，今后十年我國將新增結(jié)核病患者2000-3000萬人，會嚴(yán)重制約我國經(jīng)濟和社會的發(fā)展。呼吸系統(tǒng)疾病是影響我國人口死亡率的重要病種。對國民經(jīng)濟和社會發(fā)展造成了很大的影響。開發(fā)治療肺病的新藥非常迫切和重要。
目前，國家還沒有一種正式抗塵肺的化學(xué)藥物。
我們單位開展了以檸檬酸鋁為主的防治塵肺的藥物研究二十多年。雖然檸檬酸鋁對于塵肺有一定的療效，但是還沒有成為國家正式藥物。
姜黃素是我國傳統(tǒng)中藥姜黃中的主要成份。也是食物色素之一。近年來人們不斷開發(fā)姜黃素的藥用價值。例如保肝作用和抗炎作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供姜黃素的新用途，即在制備治療肺病的藥物中的新應(yīng)用。
其中所述肺病包括各種原因引起的肺纖維化，包括各種肺間質(zhì)疾病，尤其塵肺如矽肺，膠原性疾病所致肺纖維化，以及新近出現(xiàn)的冠狀病毒變種引起的SARS導(dǎo)致的肺纖維化等。
不同病種的肺間質(zhì)纖維化改變都從肺泡炎開始，在發(fā)展和修復(fù)過程中導(dǎo)致肺纖維化的傾向和機理有共同之處。本發(fā)明采用向氣管單側(cè)注入石英粉塵30mg/只的方法造成大鼠實驗性矽肺模型。將大鼠隨機分為矽肺組、姜黃素治療組、姜黃素對照組、正常組等。處理組染塵后藥物灌胃100mg/kg，觀察期定為4周。動物在麻醉狀態(tài)下解剖后迅速腹腔動脈取血，摘取肺臟及其他臟器，分作病理和生化分析。主要指標(biāo)包括各臟器重量和臟器系數(shù)；肺羥脯氨酸含量；銅藍(lán)蛋白活度單位；常規(guī)HE觀察肺病理變化。最后結(jié)果矽肺組和治療組單位肺羥脯氨酸含量、肺羥脯氨酸總量和銅藍(lán)蛋白活度單位都存在顯著性差異。四周的肺病理都有明顯變化。藥物對照組和正常組各項指標(biāo)沒有明顯差異，從而，證實了本發(fā)明的姜黃素可有效用于抗肺纖維化。
本發(fā)明的另一目的是提供含有有效量的姜黃素的藥物組合物，該藥物組合物還可以含有藥學(xué)可接受的載體，如賦型劑等，和其它一種或多種添加劑如香味劑，甜味劑等。
以姜黃素進行肺炎治療時，它可以以粉劑、粒劑、片劑、膠囊、丸劑和液體藥劑等形式口服給藥。姜黃素的有效藥劑，是通過與適當(dāng)?shù)乃幱脫交煳?，如賦形劑、粘合劑、滲透劑、潤滑劑等混合而配制成的。其中，姜黃素的重量比優(yōu)選不低于30％。
劑量隨患者的病情、患者的年齡和體重而改變。在口服給藥情況下，劑量通常為成年人100～1000mg/kg/天，優(yōu)選為250～500mg/kg/天。
在藥物的安全性方面，大鼠的急性經(jīng)口LD50＞5g/kg。長期給予大鼠500mg/kg80天未發(fā)現(xiàn)毒性。另外在體外和動物體內(nèi)長期給藥姜黃素具有一定抗腫瘤發(fā)生的作用，也提示其有比較好的安全性。
本發(fā)明的優(yōu)點是首次發(fā)現(xiàn)姜黃素用一定治療實驗性塵肺的作用。塵肺是一種以肺部炎癥反應(yīng)和纖維化為主的肺部。由于姜黃素具有一定抗纖維化的作用，提示在其它有肺部纖維化病變的應(yīng)用價值。我國有塵肺患者40多萬人。
另外，姜黃素制備方法簡單，結(jié)構(gòu)比較簡單，理化性質(zhì)研究的比較透徹。
附圖簡述

圖1是藥效學(xué)試驗中各組的每克肺羥脯氨酸含量結(jié)果圖，其中，a，與正常組比較p＜0.05，b，與矽肺組比較，p＜0.05。
圖2是藥效學(xué)試驗中各組的肺羥脯氨酸總量結(jié)果圖。其中，a，與正常組比較p＜0.05，b，與矽肺組比較，p＜0.05。
圖3是各組的銅藍(lán)蛋白活度結(jié)果圖其中，a，與正常組比較p＜0.05，b，與矽肺組比較，p＜0.05。
下面提供的實施例用于進一步闡明本發(fā)明，而不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。
實施例取姜黃素(Sigma公司，純度95％)100g，羥乙基纖維素10g，壓片制成片劑，放在常溫干燥的器皿中備用。
本發(fā)明姜黃素的藥效學(xué)試驗材料與方法動物雄性Wistar大鼠。體重180-200克。北大醫(yī)學(xué)部動物科學(xué)部提供。
按實驗方式不同，將動物按體重隨機分為七組，每一實驗組分為病理組織化學(xué)觀察和生化測定兩部分。每組各用5只大鼠。觀察期為4周。
1.矽肺組乙醚麻醉大鼠，單側(cè)氣管注入30mg石英粉，四周后處死。
2.姜黃素治療組染塵后的2天始姜黃素灌胃100mg/kg天，四周后處死。
3.姜黃素對照組正常大鼠，姜黃素灌胃100mg/kg天，四周后處死。
4.正常對照四周組不給任何藥劑，四周后處死。
5、西藥治療組染塵后的2天始布洛芬灌胃100mg/kg天，四周后處死。
6、西藥對照組正常大鼠，布洛芬灌胃100mg/kg天，四周后處死。
石英粉和姜黃素石英粉由中國預(yù)防科學(xué)院提供。粉塵直徑＜5μm占99.5％以上。游離二氧化硅含量為97.7％(焦磷酸法測定)。
姜黃素由化學(xué)試劑Sigma公司提供，純度為95％。
主要儀器和設(shè)備1.切片機 2.顯微鏡 3.天平 4.分光光度計主要測定方法與指標(biāo)1.肺樣本制備處死動物均在各實驗觀察期注射姜黃素后第三天進行。腹注1ml 1.5％戊巴比妥溶液麻醉動物。然后股動脈放血處死大鼠。迅速解剖動物，取出心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胸腺，肉眼觀察變化，在去離子水中漂洗去掉血液成分。用濾紙吸去水分，稱量各臟器；將臟器分為兩部分，一部分準(zhǔn)備進行病理組織切片，另一作生化分析部分則放入低溫冰箱中保存。
2、觀察指標(biāo)心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胸腺重量和臟器系數(shù)3、肺肺羥脯氨酸含量(mg)含量的測定4、銅藍(lán)蛋白活度的測定5、常規(guī)HE觀察肺病理變化數(shù)據(jù)處理方法使用SPSS公司出品的SPSS8.0統(tǒng)計軟件進行成組方差分析。
結(jié)果與分析肺臟給藥四周后實驗結(jié)果(1)肺濕重和肺臟器系數(shù)矽肺組和治療組都明顯升高，與正常組存在顯著性差異。藥物對照組與正常組無差別。矽肺組明顯升高，與藥物對照組和治療組兩組都存在顯著性差別。
(2)肺羥脯氨酸總量(圖2)和每克肺羥脯氨酸含量(圖1)姜黃素對照組、矽肺組和姜黃素治療組都明顯升高，與正常組存在顯著性差異。矽肺組明顯升高，與藥物對照組、治療組存在顯著性差別。
(3)銅藍(lán)蛋白活度(圖3)矽肺組明顯升高，并且與正常組存在顯著性差異。姜黃素對照組、姜黃素治療組兩組與正常組無差別，姜黃素治療組優(yōu)于西藥治療組和對照組。矽肺組明顯升高，與姜黃素對照組和姜黃素治療組存在顯著性差異。
表1 給藥四周肺臟實驗結(jié)果(x±s，n＝5)測定指標(biāo) 正常對照組 姜黃素對照組矽肺4周組 姜黃素治療組 布洛芬治療組肺濕重1.570±0.2011.770±0.3434.782±0.793a4.037±1.395ab4.633±0.297a(g)肺臟器系數(shù)(％) 0.518±0.0410.745±0.1422.131±0.370a1.284±0.853a，b1.806±0.235a肺羥脯氨酸總量(mg) 1.646±1.6464.191±2.287a13.320±5.187a8.786±3.694a，b8.724±2.828a，b每克肺羥脯氨酸含量1.053±0.2382.312±1.018a3.273±0.222a2.143±0.148a，b1.916±0.681a，b(mg/g)銅藍(lán)蛋白活度(U) 31.840±8.617 34.140±6.584 68.567±6.407a16.165±12.017b47.720±19.241ba與正常對照組比較，P＜0.05b與矽肺四周組比較，P＜0.052.其他臟器給藥四周實驗結(jié)果
(1)體重矽肺組、藥物對照組、治療組三組明顯降低，與正常對照組存在顯著性差異。
(2)心臟臟器系數(shù)(％)矽肺組、治療組兩組明顯升高，與正常對照組存在顯著性差異；矽肺組明顯升高，與藥物對照組存在顯著性差異。
(3)腎臟重量矽肺組明顯降低，與正常對照組存在顯著性差異。腎臟臟器系數(shù)(％)矽肺組、藥物對照組、治療組明顯升高，與正常對照組存在顯著性差異。
(4)胸腺臟器系數(shù)(％)矽肺組明顯升高，與正常對照組、藥物對照組、治療組存在顯著性差異。
表2 其他臟器給藥四周實驗結(jié)果(x±s，n＝5)正常對照組矽肺4周組 中藥對照組 中藥治療4周組 布洛芬治療組體重(g) 303±16 226±32a239±28a246±45a259±32a心臟重量(g) 1.028±0.124 0.930±0.051 0.830±0.106 0.978±0.1760.g41±0.135心臟臟器系數(shù) 0.340±0.03 0.414±0.042a0.348±0.019 0.400±0.063a0.364±0.040(％)肝臟重量(g) 9.937±0.136 8.312±1.002 8.444±0.798 8.875±2.410 9.048±1.200肝臟臟器系數(shù) 3.278±0.250 3.691±0.335 3.550±0.188 3.634±0.958 3.485±0.076(％)脾臟重量(g) 0.736±0.176 0.669±0.224 0.821±0.463 0.714±0.203 0.821±0.128脾臟臟器系數(shù) 0.241±0.046 0.290±0.066 0.334±0.149 0.290±0.059 0.316±0.019(％)腎臟重量(g) 1.961±0.110 1.695±0.189a1.818±0.166 1.817±0.142 1.909±0.257腎臟臟器系數(shù) 0.648±0.021 0.752±0.040a0.771±0.122a0.748±0.085a0.735±0.032a(％)胸腺重量(g) 0.300±0.049 0.461±0.185 0.293±0.126 0.337±0.2090.374±0.109胸腺臟器系數(shù) 0.099±0.015 0.203±0.069a0.119±0.038 0.130±0.059b0.146±0.042(％)a與正常對照組比較，P＜0.05b與矽肺4周組比較，P＜0.05病理結(jié)果本實驗用常規(guī)HE染色法觀察了矽肺病變和纖維化程度。矽肺組病變的結(jié)節(jié)部分在纖維化程度上重于姜黃素治療組。且病變范圍大。矽結(jié)節(jié)較典型。
附肺羥脯氨酸含量的測定用氯胺T法，以羥脯氨酸水平來代表膠原蛋白含量。將全肺切碎混勻，稱取1g肺組織，勻漿后定容到10ml，吸取1ml，再加入6當(dāng)量HCl1.5ml，混勻后20磅高壓消化1小時，取出消化液后加入10當(dāng)量NaOH0.9ml，再用1當(dāng)量HCl或NaOH調(diào)PH值至5-7左右，最后用蒸餾水定容到5ml。按下表向各管添加液體。
表3 肺羥脯氨酸含量的測定方法空白 標(biāo)1標(biāo)2標(biāo)3標(biāo)4標(biāo)5標(biāo)6樣品離心液(ml) 0.1羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液(ml) 0 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.10蒸餾水(ml) 1.00 0 0.20 0.40 0.60 0.80 0.90檸檬酸緩沖液(ml)0.50.50.50.50.50.50.50.5氯胺T(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1混勻，充分氧化6分鐘過氯酸(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1混勻，終止氧化5分鐘對二甲氨基苯甲醛1 1 1 1 1 1 1 1(ml)混勻，100℃水浴2分鐘冰水冷卻，562nm波長比色繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算各樣品羥脯氨酸含量銅藍(lán)蛋白的測定將所取血液離心制成血清，每一份樣品均分樣品管和空白管，每管加液如下表4 銅藍(lán)蛋白的測定方法樣品管空白管血清(ml) 0.05 0.050.1M醋酸緩沖液(ml) 2.0 1.00.1％疊氮鈉溶液(ml)0 1.0加液后將各管和0.25％對苯二胺鹽酸在37℃水浴放置5分鐘，向各管加0.25％對苯二胺鹽酸1ml，37℃水浴30分鐘，再向每管加1.5M疊氮鈉1滴，530nm波長下用0.5cm比色杯比色。用下式計算銅藍(lán)蛋白活性銅藍(lán)蛋白活性單位(光密度/30分鐘100毫升血清)＝光密度×100/血清0.1毫升＝光密度×100肺羥脯氨酸含量包括肺羥脯氨酸總量和單位肺羥脯氨酸含量。而肺羥脯氨酸含量代表了肺膠原的含量，肺膠原的含量正代表了矽肺纖維化的程度。從以上結(jié)果可以看出，單位肺羥脯氨酸含量有顯著性差異，姜黃素治療組優(yōu)于矽肺組。
關(guān)于血清銅藍(lán)蛋白，矽肺組明顯升高，并且與正常組存在顯著性差異。姜黃素對照組、治療組兩組與正常組無差別。姜黃素對照組和治療組兩組都與矽肺組存在顯著性差別。這是因為銅藍(lán)蛋白作為一種炎癥反應(yīng)蛋白，可以保護細(xì)胞膜防止過氧化，炎癥反應(yīng)越強烈，銅藍(lán)蛋白活度越高，反之亦然。矽肺組動物體內(nèi)發(fā)生嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，銅藍(lán)蛋白活度增高。而藥物對照組、正常組不言而喻，其體內(nèi)幾乎不存在炎性反應(yīng)，因此銅藍(lán)蛋白活度也低。對于治療組，開始時機體炎癥反應(yīng)較強，在給予姜黃素抗炎治療后，炎性減弱，銅藍(lán)蛋白活度降低。
權(quán)利要求
1.姜黃素在制備治療肺病的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述肺病包括各種原因引起的肺纖維化，例如包括各種肺間質(zhì)疾病，尤其塵肺如矽肺，膠原性疾病所致肺纖維化，以及新近出現(xiàn)的冠狀病毒變種引起的SARS導(dǎo)致的肺纖維化等。
3.可用于抗肺纖維化的含有有效量的姜黃素的藥物組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的藥物組合物，特征在于姜黃素的含量不少于30wt％。
全文摘要
本發(fā)明涉及姜黃素在制備治療肺病的藥物中的應(yīng)用，所述肺病包括各種原因引起的肺纖維化，例如包括各種肺間質(zhì)疾病，尤其塵肺如矽肺，膠原性疾病所致肺纖維化，以及新近出現(xiàn)的冠狀病毒變種引起的SARS導(dǎo)致的肺纖維化等。
文檔編號A61P11/00GK1579377SQ0314975
公開日2005年2月16日 申請日期2003年8月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月5日
發(fā)明者張寶旭 申請人:北京大學(xué)