專利名稱：用于白細(xì)胞活化和增殖的口服組合物的制作方法
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及可以通過(guò)促進(jìn)白細(xì)胞活化和增殖對(duì)患免疫缺陷疾病或免疫抑制的主體產(chǎn)生有益健康效果的含有酵母細(xì)胞的口服組合物。本發(fā)明還涉及制造這種口服組合物的方法以及這種組合物的使用方法。
2.發(fā)明背景2.1免疫缺陷疾病免疫系統(tǒng)保護(hù)機(jī)體不受潛在有害物質(zhì)的損害，如微生物、毒素、癌細(xì)胞、和來(lái)自他人的血液和組織。免疫系統(tǒng)是高度專業(yè)性細(xì)胞、一個(gè)循環(huán)系統(tǒng)(獨(dú)立于血管)和多個(gè)器官的復(fù)合體。淋巴管、淋巴節(jié)、以及位于扁桃腺、胸腺、肝、脾、闌尾、派爾結(jié)和骨髓中的淋巴樣組織一起形成修復(fù)損傷、為機(jī)體排除感染的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。
免疫系統(tǒng)的主要細(xì)胞是淋巴細(xì)胞，包括巨嗜細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和白細(xì)胞。作為淋巴系統(tǒng)主要細(xì)胞的淋巴細(xì)胞與巨嗜細(xì)胞和中性粒細(xì)胞相比相對(duì)較小。主要有兩類白細(xì)胞(1)B細(xì)胞，它們來(lái)源于骨髓中的母細(xì)胞(干細(xì)胞)，并成熟為漿細(xì)胞；和(2)T細(xì)胞，它們形成于干細(xì)胞從骨髓遷移到胸腺時(shí)，在胸腺中它們進(jìn)行分裂、成熟和從非己分化為自體。還包括自然殺傷細(xì)胞，它們比B細(xì)胞和T細(xì)胞稍大，不需要B細(xì)胞和T細(xì)胞所需的成熟和分化過(guò)程，可以直接殺死入侵細(xì)胞。
B細(xì)胞是所謂抗體介導(dǎo)的免疫或體液免疫的組成部分。當(dāng)受到抗原(在機(jī)體中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的外源物質(zhì))刺激時(shí)，B淋巴細(xì)胞成熟為能產(chǎn)生IgM、IgG、IgA、IgE和IgD五類抗體(其受體專用于結(jié)合特異的抗原)之一的細(xì)胞。另一方面，T細(xì)胞負(fù)責(zé)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫或細(xì)胞免疫、負(fù)責(zé)刺激B細(xì)胞，T細(xì)胞又可分為輔助T細(xì)胞(CD4+)、抑制性T細(xì)胞、和細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CD8+)。T淋巴細(xì)胞依賴于稱為主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的獨(dú)特細(xì)胞表面分子識(shí)別抗原片段，攻擊并摧毀它們識(shí)別為抗原的疾病細(xì)胞。
免疫缺陷疾病是一類免疫系統(tǒng)功能不足的各種疾病，其使得感染更常見(jiàn)、更頻繁，造成異常的重度、持久癥狀。免疫缺陷疾病可以是生來(lái)就有的(先天性)和/或后天獲得的(獲得性)。獲得性免疫缺陷疾病的一些病因包括遺傳和代謝性疾病(例如糖尿病、唐氏綜合征、腎功能衰竭、營(yíng)養(yǎng)不良、鐮狀細(xì)胞貧血病)、抑制免疫系統(tǒng)的化學(xué)藥品和治療(例如腫瘤化療、皮質(zhì)類固醇、免疫抑制性藥物、放射治療)，感染(例如水痘、巨細(xì)胞病毒感染、風(fēng)疹、傳染性單核細(xì)胞增多癥、麻疹、重度細(xì)菌或真菌感染、重癥結(jié)核)、血液病和血液相關(guān)腫瘤(例如粒細(xì)胞缺乏癥、再生障礙性貧血、組織細(xì)胞增多病、骨髓纖維化、骨髓瘤)、燒傷、脾切除、酒精性肝硬化、慢性肝炎、正常老化、結(jié)節(jié)病和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等。
一些免疫缺陷疾病是可以預(yù)防或治療的。強(qiáng)烈推薦注意飲食、保持良好的衛(wèi)生以及戒煙、戒毒。對(duì)可以產(chǎn)生抗體的可以接種滅活的(而非活的)疫苗。在感染癥狀出現(xiàn)前或剛出現(xiàn)時(shí)可以給予抗體?？梢栽鰪?qiáng)免疫系統(tǒng)的藥物包括左旋咪唑、異丙肌苷和胸腺激素。通過(guò)輸入或注射免疫球蛋白可以將低水平的抗體提高。一些試驗(yàn)性方法，例如胎胸腺細(xì)胞和胎肝細(xì)胞的移植、酶療法和基因療法，有時(shí)是有用的。對(duì)于白細(xì)胞不正常的患者一般不進(jìn)行輸血，除非對(duì)供血先照射以防止在受血者血液中產(chǎn)生攻擊。另外，骨髓移植有時(shí)可以治療嚴(yán)重的免疫系統(tǒng)缺陷。
雖然藥物治療、疫苗、輸血和骨髓移植對(duì)預(yù)防和/或控制感染性疾病是有用的，但仍需要更有效、毒性更低的治療免疫抑制或免疫缺陷疾病的更好的治療形式和途徑，特別是臨床醫(yī)生更多關(guān)注患者的生活質(zhì)量時(shí)更是如此。本發(fā)明提供了一種用含酵母的口服組合物進(jìn)行免疫疾病治療和免疫缺陷控制的替代途徑，以促進(jìn)白細(xì)胞的活化和增殖。2.2基于酵母的組合物已有酵母和其成分被開(kāi)發(fā)用于飲食補(bǔ)充劑或者藥物。但沒(méi)有現(xiàn)有技術(shù)方法使用在電磁場(chǎng)中培養(yǎng)的酵母來(lái)生產(chǎn)促進(jìn)白細(xì)胞活化和增殖的產(chǎn)品。以下是酵母和其成分現(xiàn)有應(yīng)用的一些例子美國(guó)專利6,197,295公開(kāi)了一種可以用作飲食補(bǔ)充劑的富含硒的干酵母產(chǎn)品。酵母株Saccharomyces boulardii sequela PY 31(ACTT 74366)在硒鹽存在下培養(yǎng)，其含有300到約6000ppm的細(xì)胞內(nèi)硒。還公開(kāi)了該含硒酵母產(chǎn)品與化療藥物聯(lián)合給藥減少流感樣癥狀的方法。
美國(guó)專利6,143,731公開(kāi)了一種含有來(lái)自酵母的全β-葡聚糖的飲食添加劑，給予動(dòng)物或人時(shí)，能提供食物纖維來(lái)源、糞便膨脹劑、短鏈脂肪酸來(lái)源，降低膽固醇和LDL水平并提高HDL水平。
美國(guó)專利5,504,079公開(kāi)了一種利用具有高免疫生物活性的改性酵母葡聚糖刺激免疫應(yīng)答的方法。這種改性葡聚糖制劑與天然物質(zhì)相比含有高比例的β(1-6)→β(1-3)糖苷鍵。這種改性葡聚糖由酵母屬酵母的細(xì)胞壁通過(guò)用堿提取細(xì)胞并用乙酸或葡聚糖酶處理提取的葡聚糖而制成。也見(jiàn)相關(guān)的美國(guó)專利5,082,936。
美國(guó)專利4,348,483公開(kāi)了一種制備具有高細(xì)胞內(nèi)鉻含量的鉻酵母產(chǎn)品的方法。該方法包括讓酵母細(xì)胞在控制的酸性pH值下吸收鉻，然后加入營(yíng)養(yǎng)物誘導(dǎo)該酵母細(xì)胞生長(zhǎng)。該酵母細(xì)胞經(jīng)干燥用作飲食補(bǔ)充劑。
這里引述這些文獻(xiàn)并不是承認(rèn)任何這些所引述的文獻(xiàn)為相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)，或承認(rèn)所引述的文獻(xiàn)對(duì)本申請(qǐng)權(quán)利要求的專利性有實(shí)質(zhì)性影響。所有關(guān)于這些文獻(xiàn)的日期或內(nèi)容的陳述都是以申請(qǐng)人現(xiàn)有信息為基礎(chǔ)的，并不等于承認(rèn)這些文獻(xiàn)的日期或內(nèi)容的正確性。
3.發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及用于通過(guò)促進(jìn)白細(xì)胞活化和增殖治療免疫缺陷疾病或免疫抑制的生物組合物或口服組合物。在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供含有能對(duì)患有免疫缺陷疾病或處于免疫抑制狀態(tài)的主體產(chǎn)生有益健康效果的活酵母的生物組合物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制備這種生物組合物的方法，以及使用該生物組合物的方法。
具體講，本發(fā)明的方法包括在一系列電磁場(chǎng)存在下培養(yǎng)酵母細(xì)胞，使酵母細(xì)胞呈代謝活性。所用的電磁場(chǎng)各自以五個(gè)頻率范圍之一和一個(gè)寬范圍的場(chǎng)強(qiáng)確定。起始酵母細(xì)胞是市場(chǎng)上有售的和/或公眾可以獲得的，例如(但不限于)釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。本發(fā)明制備生物組合物的方法還包括在電磁場(chǎng)存在下在植物提取物和動(dòng)物胃液中調(diào)理或馴化所述活化酵母細(xì)胞。
所述制備方法可包括在電磁場(chǎng)存在下在大規(guī)模培養(yǎng)中擴(kuò)大被活化并調(diào)理酵母細(xì)胞的數(shù)量，采取質(zhì)量控制措施和包裝。本發(fā)明的藥物組合物包括活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞和一種或多種藥物可接受的賦形劑或載體。可以向所述生物組合物中加入其他成分如維生素和/或嬌味劑，以形成本發(fā)明的口服組合物。這種額外的載體和成分可以提高口服組合物的有益健康效果、藥理特性和感官特性。在制造過(guò)程中，活化的或活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞可以被干燥，并保存一段時(shí)間。
本發(fā)明的生物或口服組合物由相關(guān)主體攝食或者用作待摻入相關(guān)主體食物中的添加劑。本發(fā)明包括含有活化并調(diào)理酵母細(xì)胞的飲食補(bǔ)充劑和營(yíng)養(yǎng)組合物。優(yōu)選所述主體是人類。
在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的生物或口服組合物用于通過(guò)促進(jìn)白細(xì)胞的活化和增殖在免疫缺陷疾病或免疫抑制主體中產(chǎn)生有益健康效果。
4.附圖簡(jiǎn)述

圖1酵母細(xì)胞的活化和調(diào)理。1.酵母細(xì)胞培養(yǎng)物；2.容器；3.電磁場(chǎng)源；4.電極。
圖2酵母細(xì)胞的大規(guī)模增殖。5.第一容器；6.第二容器；7.第三容器；8.酵母細(xì)胞培養(yǎng)物；9.電磁場(chǎng)源。
5.發(fā)明詳細(xì)描述本發(fā)明涉及可對(duì)免疫抑制或免疫缺陷主體產(chǎn)生有益健康效果的生物組合物。本發(fā)明提供該生物組合物的制備方法以及使用該生物組合物的方法。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供含有酵母的生物組合物。與傳統(tǒng)的酵母在食品加工中的應(yīng)用不同，本發(fā)明的酵母細(xì)胞不是作為作用于食物成分的酶的來(lái)源。這些酵母不是作為主體的主要營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，酵母細(xì)胞也不是用作物質(zhì)的載體，如金屬鹽的載體。本發(fā)明的酵母在口服或與食物一起由主體攝取時(shí)是活的。雖不拘于任何理論或機(jī)制，發(fā)明人相信本發(fā)明的培養(yǎng)條件激活和/或擴(kuò)增了酵母細(xì)胞中的某種基因或一組基因的表達(dá)，使得酵母細(xì)胞可以高效地刺激動(dòng)物的免疫系統(tǒng)，包括特異的和非特異的免疫反應(yīng)。使用本發(fā)明的生物組合物所提供的有益健康效果已在動(dòng)物免疫抑制或免疫缺陷模型中得到證實(shí)，顯示出白細(xì)胞計(jì)數(shù)的提高。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制備本發(fā)明生物組合物中之酵母細(xì)胞的方法。起始材料是易于從市場(chǎng)上獲得或從公共微生物保藏機(jī)構(gòu)獲得的普通酵母細(xì)胞。本發(fā)明的方法包括可重復(fù)應(yīng)用來(lái)激活酵母細(xì)胞的一套培養(yǎng)條件。本發(fā)明方法中所用培養(yǎng)條件的關(guān)鍵特征是施用于生長(zhǎng)中的活酵母細(xì)胞培養(yǎng)物的具有確定頻率范圍和場(chǎng)強(qiáng)的一系列交變的電磁場(chǎng)。該方法還包括調(diào)理或馴化被活化的活酵母細(xì)胞以適應(yīng)主體胃的酸性環(huán)境的步驟。這些方法中使用的電磁場(chǎng)可以在各種規(guī)模下重復(fù)設(shè)置，從而使得甚至可以大規(guī)模制造本發(fā)明的生物組合物。通過(guò)小心控制培養(yǎng)條件，可以將普通的酵母細(xì)胞可重復(fù)地、成常規(guī)地活化轉(zhuǎn)變成本發(fā)明的酵母細(xì)胞。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供口服組合物的制造方法，所述口服組合物含有本發(fā)明的活化并調(diào)理的酵母和其他成分，包括但不限于，藥物可接受的載體或賦形劑、維生素、草藥提取物、礦物質(zhì)、氨基酸、調(diào)味劑、著色劑或防腐劑。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明的生物組合物可以添加到主體食用的食物中。如相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員所知，可以使用許多方法將本發(fā)明的生物或口服組合物與食物混合，而保持酵母細(xì)胞存活。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，就在食用前將含有本發(fā)明活酵母細(xì)胞的培養(yǎng)液直接加入到食物中。也可以在食用前將干酵母粉配制然后直接加入到食物中。
在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的口服組合物可以由主體直接攝取或直接喂給主體。例如，主體可以直接飲用含有活化并調(diào)理酵母細(xì)胞的培養(yǎng)液或其提取部分。含有干酵母細(xì)胞的口服組合物也可以以固體劑型給予主體。
雖然不是必需的，本發(fā)明的生物或口服組合物可以與其他治療形式如(但不限于)外科手術(shù)、化療藥物、抗感染藥物、輸血、骨髓移植、疫苗和放射療法聯(lián)合或交替使用。因?yàn)楸景l(fā)明的生物組合物是口服給藥的，專業(yè)醫(yī)護(hù)人員的幫助在該組合物的給藥中一般不是必需的。
在下面的5.1節(jié)中描述本發(fā)明的酵母細(xì)胞和其制造方法。5.2節(jié)中描述本發(fā)明生物組合物在患免疫缺陷疾病或免疫抑制狀態(tài)的主體中的應(yīng)用。
5.1酵母細(xì)胞培養(yǎng)物的制備該生物組合物中的酵母細(xì)胞是在交變電磁場(chǎng)的存在下、在合適的培養(yǎng)基中，在一段時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)多個(gè)酵母細(xì)胞而制備的。該方法包括第一個(gè)步驟-活化酵母細(xì)胞，和第二個(gè)步驟-調(diào)理已活化的酵母細(xì)胞?；罨^(guò)程包括在一組特定頻率和場(chǎng)強(qiáng)的五個(gè)電磁場(chǎng)中培養(yǎng)酵母細(xì)胞。調(diào)理過(guò)程包括在電磁場(chǎng)存在下、在含植物提取物和動(dòng)物胃液的培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)一步培養(yǎng)已活化的酵母細(xì)胞。活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞可以在合適的條件下干燥后以干細(xì)胞的形式儲(chǔ)存?；罨⒄{(diào)理的干酵母細(xì)胞日后可以用于本發(fā)明生物組合物的大規(guī)模生產(chǎn)培養(yǎng)過(guò)程。本發(fā)明的各種培養(yǎng)過(guò)程可以是批次過(guò)程，也可以是連續(xù)過(guò)程。
5.1.1酵母在各種實(shí)施方案中，酵母屬(Saccharomyces)、假絲酵母屬(Candida)、Crebrothecium、地霉菌屬(Geotrichum)、漢遜酵母屬(Hansenula)、克勒克酵母屬(Kloechera)、油脂酵母屬(Lipomyces)、畢赤酵母屬(Pichia)、紅冬孢酵母屬(Rhodosporidium)、紅酵母屬(Rhodotorula)、球擬酵母屬(Torulopsis)、絲孢酵母屬(Trichosporon)和維克氏酵母屬(Wicherhamia)等屬類的酵母可用于本發(fā)明。通常優(yōu)選用于食品加工的真菌。
酵母菌株的非限定性例子包括酵母屬菌株AS2.311；栗酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe Linder)AS2.214、AS2.248、AS2.249、AS2.255、AS2.257、AS2.259、AS2.260、AS2.274、AS2.994、AS2.1043、AS2.1149、AS2.1178、IFFI 1056；清酒酵母(Saccharomyces sake Yabe)ACCC2045；葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum Beijer)IFFI 1023、IFFI1032、IFFI 1044、IFFI 1072、IFFI 1205、IFFI 1207；魯氏酵母(Saccharomycesrouxii Boutroux)AS2.178、AS2.180、AS2.370、AS2.371；釀酒酵母卵形變種(Saccharomyces cerevisiae Hansen Var.ellipsoideus)ACCC2043、AS2.2、AS2.3、AS2.8、AS2.53、AS2.163、AS2.168、AS2.483、AS2.541、AS2.559、AS2.606、AS2.607、AS2.611、AS2.612；卡爾斯伯根糖酵母(Saccharomyces carlsbergensis Hansen)AS2.162、AS2.189、AS2.200、AS2.216、AS2.265、AS2.377、AS2.417、AS2.420、AS2.440、AS2.441、AS2.443、AS2.444、AS2.459、AS2.595、AS2.605、AS2.638、AS2.742、AS2.745、AS2.748、AS2.1042；橙黃紅酵母(Rhodotorula aurantiaca(Saito)Ladder)AS2.102、AS2.107、AS2.278、AS2.499、AS2.694、AS2.703、AS2.704和AS2.1146；釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)ACCC2034、ACCC2035、ACCC2036、ACCC2037、ACCC2038、ACCC2039、ACCC2040、ACCC2041、ACCC2042、AS2.1、AS2.4、AS2.11、AS2.14、AS2.16、AS2.56、AS2.69、AS2.70、AS2.93、AS2.98、AS2.101、AS2.109、AS2.110、AS2.112、AS2.139、AS2.173、AS2.182、AS2.196、AS2.242、AS2.336、AS2.346、AS2.369、AS2.374、AS2.375、AS2.379、AS2.380、AS2.382、AS2.393、AS2.395、AS2.396、AS2.397、AS2.398、AS2.399、AS2.400、AS2.406、AS2.408、AS2.409、AS2.413、AS2.414、AS2.415、AS2.416、AS2.422、AS2.423、AS2.430、AS2.431、AS2.432、AS2.451、AS2.452、AS2.453、AS2.458、AS2.460、AS2.463、AS2.467、AS2.486、AS2.501、AS2.502、AS2.503、AS2.504、AS2.516、AS2.535、AS2.536、AS2.558、AS2.560、AS2.561、AS2.562、AS2.576、AS2.593、AS2.594、AS2.614、AS2.620、AS2.628、AS2.631、AS2.666、AS2.982、AS2.1190、AS2.1364、AS2.1396、IFFI 1001、IFFI 1002、IFFI 1005、IFFI1006、IFFI 1008、IFFI 1009、IFFI 1010、IFFI 1012、IFFI 1021、IFFI 1027、IFFI 1037、IFFI 1042、IFFI 1045、IFFI 1048、IFFI 1049、IFFI 1050、IFFI1052、IFFI 1059、IFFI 1060、IFFI 1062、IFFI 1202、IFFI 1203、IFFI 1209、IFFI 1210、IFFI 1211、IFFI 1212、IFFI 1213、IFFI 1215、IFFI 1220、IFFI1221、IFFI 1224、IFFI 1247、IFFI 1248、IFFI 1251、IFFI 1270、IFFI 1277、IFFI 1289、IFFI 1290、IFFI 1291、IFFI 1292、IFFI 1293、IFFI 1297、IFFI1300、IFFI 1301、IFFI 1302、IFFI 1307、IFFI 1308、IFFI 1309、IFFI 1310、IFFI 1311、IFFI 1331、IFFI 1335、IFFI 1336、IFFI 1337、IFFI 1338、IFFI1339、IFFI 1340、IFFI 1345、IFFI 1348、IFFI 1396、IFFI 1397、IFFI 1399。優(yōu)選的酵母菌株包括但不限于釀酒酵母AS2.501、AS2.502、AS2.503、AS2.504、AS2.535、AS2.558、AS2.560、AS2.561、AS2.562。
通常，本發(fā)明可用的酵母菌株可以從私人或公共實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)物中獲得，或者從公共菌種保藏中心獲得，如美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，美國(guó)弗吉尼亞州，馬納薩斯，大學(xué)路10801號(hào)，郵編20110-2209；以及中國(guó)科學(xué)院微生物研究所中國(guó)微生物保藏管理委員會(huì)中國(guó)普通微生物保藏管理中心(CGMCC)，中國(guó)北京海淀區(qū)2714信箱，郵編100080。
下述第6和第7節(jié)中給出了使用釀酒酵母菌株IFFI 1202的本發(fā)明的非限定性實(shí)施例。
雖然優(yōu)選使用純酵母菌株，但并不限于以純酵母菌株開(kāi)始制備本發(fā)明的酵母細(xì)胞。該生物組合物中的酵母細(xì)胞可以通過(guò)不同種或菌株的酵母細(xì)胞混合培養(yǎng)獲得。酵母細(xì)胞混合物的成分可以用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)酵母鑒定技術(shù)來(lái)確定。
在本發(fā)明的各種實(shí)施方案中，應(yīng)用了酵母處理、轉(zhuǎn)移和儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。雖然無(wú)菌條件不是必需的，但在實(shí)施本發(fā)明的生產(chǎn)方法中，特別是當(dāng)該生物組合物用于人類時(shí)，無(wú)菌條件或干凈的環(huán)境是非常有利的。生產(chǎn)方法可以采用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)操作，以符合產(chǎn)品安全和質(zhì)量控制的行政要求。
5.1.2電磁場(chǎng)本文使用的術(shù)語(yǔ)“交變電磁場(chǎng)”、“電磁場(chǎng)”或“EM場(chǎng)”是同義詞。本發(fā)明可用的電磁場(chǎng)可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的各種方法產(chǎn)生。圖1是示范裝置的說(shuō)明圖。電磁波源(3)產(chǎn)生具有所需頻率和場(chǎng)強(qiáng)的電磁場(chǎng)。該電磁波源由一個(gè)或多個(gè)能產(chǎn)生電磁波的信號(hào)發(fā)生器組成，所述電磁波優(yōu)選為正弦波，優(yōu)選頻率范圍為8000MHz-13000MHz。這樣的信號(hào)發(fā)生器為本領(lǐng)域所熟知(例如位于美國(guó)加利福尼亞Palo Alto的惠普公司生產(chǎn)的HP 83721B和HP83741A)。也可以使用能夠產(chǎn)生較窄頻率范圍信號(hào)的信號(hào)發(fā)生器。如果需要，可以用信號(hào)放大器來(lái)增強(qiáng)輸出信號(hào)，由此增加電磁場(chǎng)的強(qiáng)度。
電磁場(chǎng)可以通過(guò)多種方式作用于培養(yǎng)物，包括將酵母細(xì)胞緊靠與電磁波源相連的信號(hào)發(fā)射器放置。一般將酵母細(xì)胞置于由非電導(dǎo)體材料制成的容器中，這些材料包括塑料、樹(shù)脂、玻璃和陶瓷，但不僅限于此。
在一個(gè)實(shí)施方案中，由浸沒(méi)于酵母細(xì)胞培養(yǎng)物(1)中的電極(4)形式的信號(hào)發(fā)射器施加電磁場(chǎng)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，一塊金屬板置于絕緣容器底部(2)，形成一個(gè)電極；另一個(gè)電極由多個(gè)置于容器內(nèi)部的金屬線或金屬管組成，它們的排列使電磁場(chǎng)的能量能夠均勻分布于培養(yǎng)物中。優(yōu)選銅制的電極。在垂直設(shè)置的培養(yǎng)容器中，金屬線或金屬管的末梢位于距離容器底部3-30厘米的位置(即距底部為容器高度的2％至10％)。表1提供了一些電極線和絕緣容器的典型尺寸。但表1中的尺寸只用于舉例說(shuō)明，不應(yīng)理解為僅限于這些尺寸。表1
所用電極線的數(shù)目取決于培養(yǎng)物的體積和電極線的直徑。例如，10升或10升以下的培養(yǎng)物可以使用2到3條直徑在0.5-2.0毫米之間的電極線。對(duì)于10-100升的培養(yǎng)物，電極線或管的直徑可以為3.0-5.0毫米。對(duì)于100-1000升的培養(yǎng)物，電極線或管的直徑可以為6.0-15.0毫米。對(duì)于1000升以上的培養(yǎng)物，電極線或管的直徑可以為20.0-25.0毫米。
5.1.3酵母細(xì)胞的活化根據(jù)本發(fā)明，制備本發(fā)明活化酵母細(xì)胞的方法包括在一組五個(gè)交變電磁場(chǎng)中培養(yǎng)酵母細(xì)胞。
培養(yǎng)過(guò)程首先是將所選的酵母菌株接種物(例如5.1.1節(jié)中描述的酵母細(xì)胞中的一種)接種于1000毫升培養(yǎng)基中，使該培養(yǎng)物的起始細(xì)胞密度大于約1×108個(gè)/1000毫升。例如，可以使用釀酒酵母IFFI 1202菌株。初始培養(yǎng)物可以為更大規(guī)模的培養(yǎng)提供菌種。培養(yǎng)物的溫度保持在28℃到32℃的范圍，培養(yǎng)22到30小時(shí)后再置于電磁場(chǎng)中，典型的情況是在30℃培養(yǎng)28小時(shí)。
培養(yǎng)過(guò)程優(yōu)選在溶解氧濃度為0.025到0.08mol/m3的條件下進(jìn)行，更優(yōu)選0.04mol/m3。氧氣水平可以通過(guò)本領(lǐng)域所知的任何常規(guī)方法來(lái)控制，包括攪拌和/或發(fā)泡，但不僅限于此。
最優(yōu)選該培養(yǎng)過(guò)程在含有能被酵母細(xì)胞吸收的養(yǎng)分源的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行。表2提供了本發(fā)明中用來(lái)培養(yǎng)酵母細(xì)胞的一種示例性的培養(yǎng)基。
表2
通常，糖類等碳水化合物，例如蔗糖、葡萄糖、果糖、右旋糖、麥芽糖、木糖等以及淀粉，可以單獨(dú)或聯(lián)合作為培養(yǎng)基中可吸收碳的來(lái)源使用。培養(yǎng)基中碳水化合物的精確用量部分取決于培養(yǎng)基中的其它成分，但通常介于培養(yǎng)基重量的約0.1％到5％之間，優(yōu)選大約0.2％到2％。這些碳源在培養(yǎng)基中可以單獨(dú)或聯(lián)合使用?？梢該饺肱囵B(yǎng)基中的無(wú)機(jī)鹽包括能夠提供鈉、鈣、磷酸根、硫酸根、碳酸根等離子的常規(guī)鹽。營(yíng)養(yǎng)性的無(wú)機(jī)鹽的非限制性實(shí)例有KH2PO4、(NH4)2HPO4、CaCO3、MgSO4、NaCl和CaSO4。
需要注意的是，表2中提供的培養(yǎng)基的成分不是限定性的。該方法的規(guī)模可以根據(jù)需要按比例增減。考慮到操作的和經(jīng)濟(jì)上的因素，例如培養(yǎng)的規(guī)模和培養(yǎng)基成分的本地供應(yīng)等，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行各種不同的改進(jìn)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，一組五個(gè)電磁場(chǎng)作用于酵母細(xì)胞培養(yǎng)物，每個(gè)電磁場(chǎng)具有在一給定范圍內(nèi)的不同頻率組和在一給定范圍內(nèi)的不同場(chǎng)強(qiáng)組。
第一個(gè)電磁場(chǎng)的頻率范圍在9921到9930MHz之間，場(chǎng)強(qiáng)范圍在220到240mV/cm之間，可以通過(guò)本領(lǐng)域所知的任何方法作用于培養(yǎng)物，如5.1.2節(jié)中描述的設(shè)備。酵母培養(yǎng)物置于第一個(gè)電磁場(chǎng)中約36個(gè)小時(shí)。
第二個(gè)電磁場(chǎng)的頻率范圍在10121到10130MHz之間，場(chǎng)強(qiáng)范圍在225到245mV/cm之間。酵母培養(yǎng)物置于第二個(gè)電磁場(chǎng)中約18個(gè)小時(shí)。
第三個(gè)電磁場(chǎng)的頻率范圍在12141到12150MHz之間，場(chǎng)強(qiáng)范圍在235到255mV/cm之間。酵母培養(yǎng)物置于第三個(gè)電磁場(chǎng)中約38個(gè)小時(shí)。
第四個(gè)電磁場(chǎng)的頻率范圍在12831到12840MHz之間，場(chǎng)強(qiáng)范圍在270到290mV/cm之間。酵母培養(yǎng)物置于第四個(gè)電磁場(chǎng)中約24個(gè)小時(shí)。
第五個(gè)電磁場(chǎng)的頻率范圍在12871到12880MHz之間，場(chǎng)強(qiáng)范圍在250到270mV/cm之間。酵母培養(yǎng)物置于第五個(gè)電磁場(chǎng)中約20個(gè)小時(shí)。
在次優(yōu)選的實(shí)施方案中，酵母細(xì)胞可以按照不同順序在這五個(gè)電磁場(chǎng)中培養(yǎng)。在其它實(shí)施方案中，磁場(chǎng)特征在上述范圍內(nèi)的一組電磁場(chǎng)可以用來(lái)激活酵母細(xì)胞。從一個(gè)電磁場(chǎng)切換到另一個(gè)電磁場(chǎng)時(shí)，酵母細(xì)胞可以在同一個(gè)容器中、使用同一套電磁波發(fā)生器和發(fā)射器。被活化酵母細(xì)胞可以通過(guò)本領(lǐng)域所知的多種方法從培養(yǎng)物中回收，并在低于約0℃到4℃的溫度儲(chǔ)存。從液體培養(yǎng)物中回收的被活化酵母細(xì)胞可以經(jīng)干燥處理以粉末的形式保存。優(yōu)選每克酵母細(xì)胞粉末中所含酵母細(xì)胞數(shù)量大于約1×1010個(gè)。
5.1.4酵母細(xì)胞的調(diào)理根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)在有動(dòng)物胃提取物(例如胃液)的條件下培養(yǎng)活化的酵母細(xì)胞，可以對(duì)其性能加以優(yōu)化。上述動(dòng)物的生理學(xué)特點(diǎn)應(yīng)與將服用此生物組合物的主體相似。該額外的調(diào)理過(guò)程使活化的酵母細(xì)胞可以適應(yīng)并耐受主體胃中的酸性環(huán)境。調(diào)理本發(fā)明被活化酵母細(xì)胞的方法包括在至少一組兩個(gè)交變電磁場(chǎng)存在下在上述物質(zhì)中進(jìn)行培養(yǎng)。
培養(yǎng)過(guò)程開(kāi)始時(shí)，將每克含約1010個(gè)細(xì)胞的干燥的活化酵母約10克(按5.1.3節(jié)中所述方法制成)接種于1000毫升的調(diào)理培養(yǎng)基中。培養(yǎng)中的相同數(shù)目的酵母細(xì)胞也可以作為接種物。每1000毫升調(diào)理培養(yǎng)基中含大約700毫升動(dòng)物胃液和約300毫升野山楂汁。該方法的規(guī)?？筛鶕?jù)需要按比例增減。
動(dòng)物的胃液可以從新鮮屠宰動(dòng)物的胃內(nèi)容物中獲得。該動(dòng)物優(yōu)選在潔凈的環(huán)境中飼養(yǎng)，并喂以標(biāo)準(zhǔn)飼料，優(yōu)選無(wú)菌飼料(當(dāng)然，上述要求并非為絕對(duì)必要)。例如，將120天的豬的胃內(nèi)容物與2000毫升蒸餾水混合，無(wú)攪拌、靜置6小時(shí)。取上清液作為調(diào)理培養(yǎng)用的胃液。豬的胃液可以對(duì)多種哺乳動(dòng)物包括人類使用的酵母細(xì)胞進(jìn)行調(diào)理。其它收集胃液的方法包括將混合物離心或過(guò)濾以去除碎屑和/或微生物。通過(guò)以上方法獲得的胃液可以儲(chǔ)存于4℃。
野山楂汁是野山楂果實(shí)的提取物。將果實(shí)切片，風(fēng)干，優(yōu)選水分小于約8％(如果需要可以使用商用干燥器)，粉碎干果實(shí)至小于約20目，每500克粉碎的野山楂與1500毫升水混合。將混合物無(wú)攪拌地靜置6小時(shí)，收集上清液作為調(diào)理過(guò)程用的野山楂汁。其它收集山楂汁的方法包括將混合物離心或過(guò)濾。優(yōu)選在無(wú)菌條件下進(jìn)行收集和儲(chǔ)存步驟。
將被活化的酵母細(xì)胞置于第一個(gè)電磁場(chǎng)中進(jìn)行培養(yǎng)。該電磁場(chǎng)可以利用5.1.2節(jié)中描述的設(shè)備或本領(lǐng)域所知的其它方法施加。該電磁場(chǎng)的頻率范圍是12831到12840MHz，場(chǎng)強(qiáng)范圍是290到320mV/cm。溫度保持在28℃到32℃，典型溫度是30℃。酵母培養(yǎng)物置于該第一個(gè)電磁場(chǎng)中約36到42小時(shí)，優(yōu)選36小時(shí)。
然后，將活化的酵母細(xì)胞置于第二個(gè)電磁場(chǎng)中進(jìn)行培養(yǎng)，其電磁場(chǎng)特性為頻率12871到12880MHz，場(chǎng)強(qiáng)約290到310mV/cm。溫度保持在28℃到32℃，典型溫度是30℃。酵母培養(yǎng)物置于第二個(gè)電磁場(chǎng)中約28到32小時(shí)，優(yōu)選30小時(shí)。
在次優(yōu)選的實(shí)施方案中，酵母細(xì)胞可以按照不同順序置于上述電磁場(chǎng)中進(jìn)行培養(yǎng)。在其它實(shí)施方案中，磁場(chǎng)特性在上述范圍內(nèi)的一組電磁場(chǎng)可以用來(lái)調(diào)理酵母細(xì)胞。從一個(gè)電磁場(chǎng)切換到另一個(gè)電磁場(chǎng)時(shí)，酵母細(xì)胞可以在同一個(gè)容器中、使用同一套電磁波發(fā)生器和發(fā)射器?；罨慕湍讣?xì)胞可以通過(guò)本領(lǐng)域所知的多種方法從培養(yǎng)物中回收，并在低于約0℃到4℃的溫度下儲(chǔ)存。
活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞可以在生物組合物中直接使用，或作為大規(guī)模生產(chǎn)的初始培養(yǎng)物。從液體培養(yǎng)物中回收的活化的酵母細(xì)胞可以經(jīng)干燥處理以粉末的形式儲(chǔ)存。優(yōu)選該粉末中酵母細(xì)胞的數(shù)量大于約每克1×1010個(gè)。
5.1.5大規(guī)模生產(chǎn)本發(fā)明還包括大規(guī)模生產(chǎn)本發(fā)明生物組合物的方法。按5.1.3和5.1.4節(jié)方法制備的活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞經(jīng)過(guò)大規(guī)模繁殖，制成本發(fā)明生物組合物。該方法包括在一個(gè)或多個(gè)電磁場(chǎng)中培養(yǎng)酵母細(xì)胞一段時(shí)間，用新鮮培養(yǎng)液稀釋生長(zhǎng)中的酵母細(xì)胞，并重復(fù)此過(guò)程。該方法可以是批次的也可以是連續(xù)的。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，安裝一套三個(gè)容器(5，6，7)，每個(gè)容器中有一組電極可以產(chǎn)生5.1.2節(jié)中所述的電磁場(chǎng)，并各含1000升培養(yǎng)基，見(jiàn)圖2。培養(yǎng)基包含列于表3中的可被酵母細(xì)胞吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。表3
野山楂汁是新鮮野山楂果實(shí)的提取物。將果實(shí)洗凈、風(fēng)干或用商用干燥器干燥至水分含量小于約8％。將干燥的果實(shí)粉碎至小于約20目，按照每100公斤粉碎果實(shí)400升水的比例與水混合，在28℃到30℃條件下連續(xù)攪拌12小時(shí)。混合物經(jīng)1000轉(zhuǎn)/分鐘離心收集上清液，按上述方法使用。這些步驟優(yōu)選在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
酸棗汁是新鮮酸棗樹(shù)果實(shí)的提取物。將果實(shí)洗凈、干燥至水分含量小于約8％。將干燥的果實(shí)粉碎至小于約20目，按照每100公斤粉碎果實(shí)400升水的比例與水混合，在28℃到30℃條件下連續(xù)攪拌12小時(shí)。混合物經(jīng)1000轉(zhuǎn)/分鐘離心收集上清液，按上述方法使用。這些步驟優(yōu)選在無(wú)菌條件下操作。
五味子汁是中國(guó)五味子屬(Schisandra chinensis)植物新鮮漿果的提取物。將果實(shí)洗凈、干燥至水分含量小于約8％。將干燥的果實(shí)粉碎至小于約20目，按照每100公斤粉碎果實(shí)400升水的比例與水混合，在28℃到30℃條件下連續(xù)攪拌12小時(shí)?；旌衔锝?jīng)1000轉(zhuǎn)/分鐘離心收集上清液，按上述方法使用。這些步驟優(yōu)選在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
大豆汁的制備是將大豆洗凈、干燥至水分含量小于約8％。將干燥的大豆粉碎至小于約20目，按照每30公斤粉碎大豆130升水的比例與水混合，在28℃到30℃條件下連續(xù)攪拌12小時(shí)?；旌衔锝?jīng)1000轉(zhuǎn)/分鐘離心收集上清液，按上述方法使用。這些步驟優(yōu)選在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
將活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞接種于第一個(gè)容器中。將按照5.1.3節(jié)和5.1.4節(jié)方法制備的酵母干粉約1000克加入1000升培養(yǎng)基中。每克酵母干粉約含約1010個(gè)酵母細(xì)胞。也可以使用液體培養(yǎng)基中等量的酵母細(xì)胞替代脫水酵母細(xì)胞。
第一個(gè)容器(5)中，酵母細(xì)胞被置于一組兩個(gè)電磁場(chǎng)中。第一個(gè)電磁場(chǎng)，可以通過(guò)5.1.2節(jié)中的設(shè)備施加，頻率范圍是12831到12840MHz，優(yōu)選12836MHz；場(chǎng)強(qiáng)范圍是300到320mV/cm，優(yōu)選316mV/cm為優(yōu)選。酵母培養(yǎng)物置于第一個(gè)電磁場(chǎng)中約16小時(shí)。然后，將酵母培養(yǎng)物置于第二個(gè)電磁場(chǎng)中約12小時(shí)，該磁場(chǎng)的頻率范圍是12871到12880MHz，優(yōu)選12872MHz；場(chǎng)強(qiáng)范圍是310到330mV/cm，優(yōu)選316mV/cm。將酵母細(xì)胞從第一個(gè)容器轉(zhuǎn)移至第二個(gè)容器中，該容器內(nèi)有1000升培養(yǎng)基。實(shí)際上首批酵母培養(yǎng)物被新鮮培養(yǎng)基稀釋了約50％。
第二個(gè)容器(6)中，酵母細(xì)胞仍被置于一組兩個(gè)電磁場(chǎng)中，頻率與第一個(gè)容器中的電磁場(chǎng)頻率相似，但場(chǎng)強(qiáng)略高。第一個(gè)電磁場(chǎng)的場(chǎng)特性如下頻率范圍12831到12840MHz，優(yōu)選12836MHz；場(chǎng)強(qiáng)范圍330到350mV/cm，優(yōu)選334mV/cm。酵母培養(yǎng)物置于該電磁場(chǎng)中約24小時(shí)。然后，酵母培養(yǎng)物被置于第二個(gè)電磁場(chǎng)中約12小時(shí)。該電磁場(chǎng)的頻率范圍是12871到12880MHz，優(yōu)選12872MHz；場(chǎng)強(qiáng)范圍是320到340mV/cm，優(yōu)選334mV/cm。將第二個(gè)容器中的酵母細(xì)胞轉(zhuǎn)移至第三個(gè)容器中，該容器內(nèi)有1000升培養(yǎng)基。第二批酵母培養(yǎng)物再次被新鮮培養(yǎng)基稀釋了約50％。
在第三個(gè)容器(7)中，酵母細(xì)胞仍被置于兩個(gè)電磁場(chǎng)中，頻率與在第一個(gè)容器和第二個(gè)容器中所用的電磁場(chǎng)頻率相似，但是場(chǎng)強(qiáng)較低。第一個(gè)電磁場(chǎng)的場(chǎng)特性如下頻率范圍12831到12840MHz，優(yōu)選12836MHz；場(chǎng)強(qiáng)范圍250到270mV/cm，優(yōu)選263mV/cm。酵母培養(yǎng)物置于該電磁場(chǎng)中約24小時(shí)。其后，酵母培養(yǎng)物被置于第二個(gè)電磁場(chǎng)中約12小時(shí)。該電磁場(chǎng)的頻率范圍是12871到12880MHz；場(chǎng)強(qiáng)范圍約是250到270mV/cm，優(yōu)選263mV/cm。
此階段最后的酵母細(xì)胞培養(yǎng)物可以直接作為本發(fā)明的生物組合物使用，或用于制成本發(fā)明中所包含的其它組合物。能夠加強(qiáng)組合物保健作用、藥理學(xué)特性和/或感官特性的其它成分也可以加入其中。為了保持組合物的生物存活力和新鮮程度，后續(xù)和包裝工藝優(yōu)選在低于室溫的溫度下進(jìn)行，更優(yōu)選0℃到4℃。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)培養(yǎng)基中酵母細(xì)胞的典型濃度為至少每毫升約103個(gè)細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中應(yīng)用了質(zhì)量控制和包裝的標(biāo)準(zhǔn)方法，口服組合物包裝在盛裝液體的容器中，每個(gè)容器內(nèi)約30到50毫升或100毫升的活酵母細(xì)胞培養(yǎng)物。酵母細(xì)胞的濃度為每毫升至少4×103個(gè)或更多酵母細(xì)胞，例如每毫升約104個(gè)細(xì)胞。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞可以按照下述方法干燥。首先將酵母細(xì)胞培養(yǎng)物在75到100g條件下離心10到20分鐘，去除上清液。該含水量最高85％的沉淀物在第一個(gè)干燥器中干燥5分鐘，溫度不超過(guò)60±2℃，使酵母細(xì)胞迅速進(jìn)入休眠狀態(tài)。然后將酵母細(xì)胞在第二個(gè)干燥器中干燥約8分鐘，溫度不超過(guò)65±2℃，以進(jìn)一步去除水分。將該含水量最高12％的干燥酵母細(xì)胞冷卻至室溫。用標(biāo)準(zhǔn)制藥方法將干燥酵母細(xì)胞以不同固體劑型進(jìn)行包裝，每個(gè)劑量形式中含預(yù)定量的干燥物質(zhì)。優(yōu)選每克干燥物中含至少106個(gè)酵母細(xì)胞。
通常將活性成分與液態(tài)載體或細(xì)粉末狀固態(tài)載體均勻、密切混合，制成組合物。
5.1.6優(yōu)選實(shí)施方案在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種制備含活化并調(diào)理酵母細(xì)胞的生物組合物的方法，所述方法包含任何順序的下列步驟(a)在頻率為9923MHz和場(chǎng)強(qiáng)為233mV/cm的第一電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(b)在頻率為10127MHz和場(chǎng)強(qiáng)為240mV/cm的第二電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(c)在頻率為12145MHz和場(chǎng)強(qiáng)為247mV/cm的第三電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(d)在頻率為12836MHz和場(chǎng)強(qiáng)為272mV/cm的第四電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(e)在頻率為12872MHz和場(chǎng)強(qiáng)為252mV/cm的第五電磁場(chǎng)和電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；在上述五個(gè)步驟最后一步完成后，以任何順序進(jìn)行下列步驟(f)在頻率為12836MHz和場(chǎng)強(qiáng)為296mV/cm的第六電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中，在含野山楂汁和哺乳動(dòng)物胃液的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(g)在頻率為12872MHz和場(chǎng)強(qiáng)為302mV/cm的第七電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中，在含野山楂汁和哺乳動(dòng)物胃液的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)酵母細(xì)胞。
本發(fā)明包括上述方法結(jié)束后獲得的活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞。酵母細(xì)胞優(yōu)選為釀酒酵母IFFI 1202菌株。這些酵母細(xì)胞可以用于下述方法，進(jìn)一步增加活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞數(shù)量。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種大規(guī)模生產(chǎn)含活化并調(diào)理酵母細(xì)胞的生物組合物的方法，所述方法包括在含野山楂汁、酸棗汁、五味子汁和大豆汁的培養(yǎng)基中，在一組或多組電磁場(chǎng)中培養(yǎng)用本節(jié)上文所述優(yōu)選實(shí)施方案制備的活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞。每一組電磁場(chǎng)包括下述順序的兩個(gè)電磁場(chǎng)
(h)頻率為12836MHz、場(chǎng)強(qiáng)為250-350mV/cm的第八個(gè)電磁場(chǎng)；(i)頻率為12872MHz、場(chǎng)強(qiáng)為250-340mV/cm的第九個(gè)電磁場(chǎng)。
該組電磁場(chǎng)可以重復(fù)若干次，例如三次。
5.2使用方法5.2.1制劑本發(fā)明生物組合物的活性成分為依上述方法制備的活化并調(diào)理的活酵母細(xì)胞，并選擇性含有藥物可接受的載體或賦形劑，和/或其它成分。其它可以加入本發(fā)明生物組合物的成分包括草藥提取物、維生素、氨基酸、金屬鹽、金屬螯合劑、著色劑、增味劑和防腐劑等，但不僅限于此。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明適于口服的組合物可以是獨(dú)立單位，如膠囊劑、扁囊劑或片劑，每個(gè)獨(dú)立單位含預(yù)定量的活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞；也可以是粉劑、顆粒劑，或水性液體或非水性液體中的溶液或懸浮液，水包油乳液或油包水液態(tài)乳液。通常這樣制備該組合物，將活性成分與液態(tài)載體和/或細(xì)粉末狀固態(tài)載體或兩者兼有均勻、密切混合，然后，如果需要，將產(chǎn)品定型成想要的形式。這種產(chǎn)品根據(jù)劑量和使用情況可以作為藥物或飲食補(bǔ)充劑。
本發(fā)明的口服組合物還可以含有粘合劑(例如預(yù)膠化玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；粘合或填充劑(例如乳糖、戊聚糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石或硅石)；崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或羥基乙酸淀粉鈉)；或濕潤(rùn)劑(例如十二烷基硫酸鈉)。這些片劑或膠囊劑可以按本領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)行包衣。
口服液體制劑例如可以是溶液、糖漿劑或懸浮劑，或者它們可以被制成干燥產(chǎn)品，用前再用水或其它適宜的液體配制。用來(lái)重配干產(chǎn)品的液體溫度應(yīng)低于65℃。這些液體制劑可以通過(guò)常規(guī)方法制備，并應(yīng)用藥物可接受的添加劑，如懸浮劑(例如山梨糖醇漿、纖維素衍生物或氫化食用油脂)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)；非水性賦形劑(例如杏仁油、油性酯、乙醇或分餾植物油)；和防腐劑(例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯或山梨酸)。如下所述，適當(dāng)加入緩沖鹽、矯味劑、著色劑和甜味劑，也可以將該制劑制成近似食品的產(chǎn)品。
該生物組合物的任何劑型都可以向主體提供有效劑量。劑型包括片劑、膠囊劑、分散劑、懸浮劑、溶液、膠囊等等。片劑和膠囊劑因?yàn)橐子诜枚蔀樽钣欣目诜┬?，其中使用上述固體藥物載體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，優(yōu)選的劑型是細(xì)胞懸浮劑，每毫升懸浮劑中至少含1×103個(gè)酵母細(xì)胞。片劑例如可以通過(guò)與任選的一種或多種助劑一起壓縮或模制而成。壓縮片劑可以通過(guò)將粉狀或顆粒狀等自由流動(dòng)的活化并調(diào)理的干酵母細(xì)胞，任意與粘合劑、滑潤(rùn)劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或分散劑混合，置于適宜的機(jī)器中壓縮制成。優(yōu)選該組合物是含500到700毫克(大于1×106個(gè)細(xì)胞/克)粉末狀活酵母細(xì)胞的膠囊。優(yōu)選劑量為每天2到4個(gè)膠囊。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以直接將含活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞的生物組合物加入食物當(dāng)中，通過(guò)正常進(jìn)餐來(lái)攝取有效量的酵母細(xì)胞。在活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞保持存活的前提下，可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的任何方法在天然或加工食品中加入或摻入該生物組合物。本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)組合物優(yōu)選在溫度約0℃到4℃的條件下制備和儲(chǔ)存。這里使用的“食物”一詞廣義地指任何用來(lái)提供營(yíng)養(yǎng)以維持或促進(jìn)包括人類在內(nèi)的動(dòng)物生長(zhǎng)的液體或固體物質(zhì)。多種食品或飲料可以用來(lái)組成含本發(fā)明活化并調(diào)理酵母細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)組合物，包括但不限于果汁、草藥提取物、茶類飲料、乳制品、大豆制品(如豆腐)和稻米產(chǎn)品。
5.2.2患有免疫缺陷性疾病或免疫抑制的主體的使用本發(fā)明進(jìn)一步提供使用本發(fā)明生物組合物的各種方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，該生物組合物作為藥物用來(lái)治療、緩解和減輕免疫缺陷性疾病或免疫抑制。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該生物組合物用作飲食的補(bǔ)充劑、健康食品或健康飲料。使用方法包括給予主體有效量的生物組合物。該生物組合物可以以液體或固體的形式口服，或通過(guò)給飼管腸內(nèi)給藥。這里使用的“有效量”一詞是指對(duì)免疫缺陷疾病或免疫抑制的情況，足以提供治療作用或有益健康效果的量。
根據(jù)本發(fā)明，該生物組合物可以對(duì)患有免疫抑制或免疫缺陷疾病的主體產(chǎn)生有益健康的效果。優(yōu)選主體為人類。需要使用該組合物的主體是被診斷為處于免疫抑制狀態(tài)或有該疾病任何階段癥狀的主體。這里“免疫缺陷疾病”和“免疫抑制”包括但不限于先天性免疫缺陷疾病和獲得性免疫缺陷疾病，或各種免疫抑制疾病，包括由下列原因造成的免疫抑制遺傳和代謝性疾病(例如糖尿病、唐氏綜合征、腎功能衰竭、營(yíng)養(yǎng)不良、鐮狀細(xì)胞貧血病)、抑制免疫系統(tǒng)的化學(xué)藥品和治療(例如腫瘤化療、皮質(zhì)類固醇、免疫抑制性藥物、放射治療)，感染(例如水痘、巨細(xì)胞病毒感染、風(fēng)疹、人類免疫缺陷病毒感染(愛(ài)滋病)、傳染性單核細(xì)胞增多癥、麻疹、重度細(xì)菌或真菌感染、重癥結(jié)核)、血液病和腫瘤(例如粒細(xì)胞缺乏癥、再生障礙性貧血、組織細(xì)胞增多病、白血病、淋巴瘤、骨髓纖維化、骨髓瘤)、燒傷、脾切除、酒精性肝硬化、慢性肝炎、正常老化、結(jié)節(jié)病和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等。
主體可以是正在同時(shí)接受其他抗免疫缺陷疾病或相應(yīng)癥狀治療的患者，也可以是已經(jīng)接受了一種治療(例如輸血和骨髓移植)并似乎有臨床免疫力的患者。本發(fā)明的生物組合物可以作為任何治療方案的輔助療法，這些方案包括但不限于抗生素、藥物療法、疫苗、輸血和骨髓移植。
主體可以沒(méi)有被診斷患有免疫缺陷疾病，但是因?yàn)檫z傳因素和/或環(huán)境因素易患此病或是此病的高危人群。主體也可以是具有免疫缺陷疾病高危特征的人，如免疫系統(tǒng)功能減弱、接受抗炎癥藥物治療、營(yíng)養(yǎng)不良或處于應(yīng)激狀態(tài)的主體。
對(duì)于不同的主體，該生物組合物治療和有益健康的效果表現(xiàn)為限制、抑制、緩解或減輕免疫抑制或免疫缺陷疾病的癥狀，增加不同種類外周血白細(xì)胞的數(shù)目，提高主體的生活質(zhì)量，和/或減少成功治療(例如輸血、骨髓移植)后復(fù)發(fā)的幾率。與免疫缺陷疾病或免疫抑制有關(guān)的體征和癥狀，包括但不限于蒼白、消瘦、皮疹、膿皰、濕疹、血管破裂、脫發(fā)、紫癜、結(jié)膜發(fā)紅(結(jié)膜炎)、淋巴結(jié)腫大、耳膜穿孔結(jié)痂、鼻腔結(jié)痂、腹瀉、嚴(yán)重腹脹和體重減輕。
特別是，本發(fā)明提供一種促進(jìn)主體(例如人類)白細(xì)胞活性和增殖或增加白細(xì)胞數(shù)目的方法，包括使主體口服本發(fā)明的生物組合物。本發(fā)明還提供一種縮短患有免疫抑制或免疫缺陷疾病主體的康復(fù)時(shí)間的方法，包括使該主體口服本發(fā)明的生物組合物。
主體需要的有效劑量隨治療病情和病情嚴(yán)重程度而有所不同。劑量也會(huì)隨年齡、體重和患者的個(gè)體反應(yīng)有所變化，同時(shí)給藥頻率也可能發(fā)生變化。通常，每天服用活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞的總劑量是約105到5×106個(gè)細(xì)胞，優(yōu)選約4×105到約13×105個(gè)細(xì)胞，頓服或分次服用(口服)。例如，每日優(yōu)選口服用量是約7×105到約9×105個(gè)細(xì)胞，而作為飲食補(bǔ)充劑每日口服量是約5×105到6×105個(gè)細(xì)胞。療程應(yīng)為至少13周。某些情況下所用劑量需要超出上述劑量范圍，這一點(diǎn)對(duì)本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。酵母細(xì)胞可以服用一段時(shí)間，直到細(xì)菌和病毒引起的癥狀和/或感染已被控制，或疾病已經(jīng)部分或完全消退。其次，值得注意的是，營(yíng)養(yǎng)學(xué)家、飲食學(xué)家、臨床醫(yī)生或主管治療的內(nèi)科醫(yī)生根據(jù)患者個(gè)體反應(yīng)知道如何及何時(shí)中止、調(diào)整或結(jié)束使用該生物組合物作為藥物或飲食補(bǔ)充劑。
本發(fā)明生物組合物對(duì)免疫抑制或免疫缺陷疾病的發(fā)生及其嚴(yán)重程度的療效可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的任何方法進(jìn)行監(jiān)控，包括但不限于a)用本領(lǐng)域熟知的檢測(cè)方法觀察不同種類白細(xì)胞數(shù)目、生物活性和形態(tài)的變化；b)檢測(cè)細(xì)胞因子等生物指標(biāo)水平的變化。
通過(guò)下述實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，該實(shí)施例詳細(xì)描述了為研究本發(fā)明活化并調(diào)理酵母細(xì)胞的療效和安全性所做的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
6.實(shí)施例下述實(shí)施例利用Wistar大鼠免疫缺陷疾病或免疫抑制模型舉例說(shuō)明了本發(fā)明生物組合物的效果。
環(huán)磷酰胺是一種常用的腫瘤化療藥，可以減少治療中患者的白細(xì)胞數(shù)目。給Wistar大鼠喂食環(huán)磷酰胺也可以使大鼠白細(xì)胞數(shù)目減少，與使用環(huán)磷酰胺治療的腫瘤患者白細(xì)胞減少情況相似。因此，本實(shí)驗(yàn)用環(huán)磷酰胺建立白細(xì)胞數(shù)目減少的Wistar大鼠動(dòng)物模型。
生物組合物依5.1節(jié)和其中各部分所述方法制備，每毫升含103個(gè)活化并調(diào)理的釀酒酵母IFFI1202菌株酵母細(xì)胞。
6.1準(zhǔn)備動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所用的動(dòng)物為Wistar大鼠，雌雄各半，3～4個(gè)月大，平均體重約80～100克(由中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物所提供)。大鼠被分為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組，每組10只大鼠。每組重復(fù)三次(即共用120只大鼠)。
6.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)第一天，給三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠(AY、NY和CK1組)喂食環(huán)磷酰胺，每千克體重60毫克。實(shí)驗(yàn)第10天，給三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠喂食環(huán)磷酰胺，每千克體重20毫克。實(shí)驗(yàn)第14天，給三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠喂食環(huán)磷酰胺，每千克體重20毫克。實(shí)驗(yàn)第21天，給三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠喂食環(huán)磷酰胺，每千克體重30毫克。繼續(xù)飼養(yǎng)大鼠7天，一共飼養(yǎng)28天。
實(shí)驗(yàn)第1天到28天，AY組大鼠同時(shí)喂食生物組合物，每天2次，間隔12小時(shí)，每次1毫升；給NY組大鼠喂食未經(jīng)處理的酵母細(xì)胞，每天2次，每次1毫升；給CK1組的大鼠喂食生理鹽水，每天兩次，每次1毫升。
CK2組的大鼠不使用任何化療藥物，每天喂食生理鹽水2次，每次1毫升，共28天。
從大鼠尾動(dòng)脈采血。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定實(shí)驗(yàn)第1天處理前、處理后第7天、14天、21天、28天大鼠血中白細(xì)胞的數(shù)目。
6.3結(jié)果表4顯示各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠白細(xì)胞數(shù)。
表4白細(xì)胞計(jì)數(shù)(×103/mm3)
與每天兩次接受1毫升未經(jīng)處理酵母細(xì)胞的大鼠(NY組)和每天兩次接受1毫升生理鹽水的大鼠(CK1組)相比，每天兩次接受1毫升本發(fā)明生物組合物的大鼠(AY組)白細(xì)胞數(shù)目降低最少(是前兩組的4倍多)。此外，盡管繼續(xù)喂食環(huán)磷酰胺，處理兩周后AY組大鼠血白細(xì)胞數(shù)目開(kāi)始恢復(fù)。處理4周結(jié)束時(shí)，AY組大鼠血中白細(xì)胞數(shù)目恢復(fù)到喂食環(huán)磷酰胺前的正常水平。相反，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，NY組和CK1組大鼠的白細(xì)胞數(shù)目仍然很低。
7.實(shí)施例下述實(shí)施例利用Beagle犬免疫缺陷疾病或免疫抑制模型舉例說(shuō)明本發(fā)明生物組合物的效果。
環(huán)磷酰胺是一種常用的腫瘤化療藥，可以減少治療中患者的白細(xì)胞數(shù)目。給Beagle犬靜脈注射環(huán)磷酰胺也可以減少犬的白細(xì)胞數(shù)目，與接受環(huán)磷酰胺治療的腫瘤患者白細(xì)胞減少的情況相似。因此，該實(shí)驗(yàn)使用環(huán)磷酰胺建立白細(xì)胞數(shù)目減少的Beagle犬動(dòng)物模型。
生物組合物依5.1節(jié)和其中各部分所述方法制備，每毫升中含103個(gè)活化并調(diào)理的釀酒酵母IFFI1202菌株酵母細(xì)胞。
7.1準(zhǔn)備動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所用的動(dòng)物為Beagle犬，雌雄各半，12～14個(gè)月大(由中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物所提供)。犬被分為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組，每組10只(即共用40只犬)。
7.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)第1天，給三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的犬(AY、NY、CK1組)靜脈注射環(huán)磷酰胺，每千克體重10毫克。實(shí)驗(yàn)第3天，給三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的犬靜脈注射環(huán)磷酰胺，每千克體重10毫克。實(shí)驗(yàn)第14天，給三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的犬靜脈注射環(huán)磷酰胺，每千克體重15毫克。繼續(xù)飼養(yǎng)14天，共飼養(yǎng)28天。
與此同時(shí)，從實(shí)驗(yàn)的第1天到第28天，給AY組犬每天兩次喂食生物組合物，每次10毫升，間隔12小時(shí)。給NY組犬每天兩次喂食未經(jīng)處理的酵母細(xì)胞10毫升，CK1組犬每天兩次喂食生理鹽水10毫升。
CK2組犬不注射環(huán)磷酰胺，只是每天兩次喂食生理鹽水10毫升，共28天。
抽取犬的靜脈血。用血球計(jì)數(shù)器測(cè)定實(shí)驗(yàn)第1天處理前、處理后第7天、第14天、第21天和第28天血中的白細(xì)胞數(shù)。
7.3結(jié)果表5顯示各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組白細(xì)胞數(shù)目。
表5白細(xì)胞計(jì)數(shù)(×103/mm3)
與每天兩次接受10毫升未經(jīng)處理酵母細(xì)胞的犬(NY組)和每天兩次接受10毫升生理鹽水的犬(CK1組)相比，每天兩次接受10毫升本發(fā)明生物組合物的犬(AY組)白細(xì)胞數(shù)目降低最少(是前兩組的4倍多)。此外，盡管繼續(xù)使用環(huán)磷酰胺，用生物組合物處理兩周后AY組犬的白細(xì)胞數(shù)目開(kāi)始恢復(fù)。處理4周后，AY組犬白細(xì)胞數(shù)目恢復(fù)到使用環(huán)磷酰胺前的正常水平，甚至更高。相反，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，NY組和CK1組犬的白細(xì)胞數(shù)目仍然很低。
本發(fā)明不限于所述的特定實(shí)施方案的范疇，這些方案僅用于說(shuō)明本發(fā)明的某些特點(diǎn)，功能相當(dāng)?shù)姆椒ê统煞忠苍诒景l(fā)明的范圍之內(nèi)。實(shí)際上，借助上文的有關(guān)描述和附圖，本說(shuō)明書(shū)所述實(shí)施方案以外的各種變化方案對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。上述變化方案應(yīng)在附后的權(quán)利要求范圍內(nèi)。
本說(shuō)明書(shū)所提及的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)均作為參考文獻(xiàn)引入本說(shuō)明書(shū)中，如同逐一明確指明作為參考文獻(xiàn)引入本說(shuō)明書(shū)一樣。
權(quán)利要求
1.一種含有活化酵母細(xì)胞的生物組合物，其中所述酵母細(xì)胞通過(guò)包含任何順序的下列步驟的方法制備(a)在頻率為9921-9930MHz和場(chǎng)強(qiáng)為220-240mV/cm的第一電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(b)在頻率為10121-10130MHz和場(chǎng)強(qiáng)為225-245mV/cm的第二電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(c)在頻率為12141-12150MHz和場(chǎng)強(qiáng)為235-255mV/cm的第三電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(d)在頻率為12831-12840MHz和場(chǎng)強(qiáng)為270-290mV/cm的第四電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(e)在頻率為12871-12880MHz和場(chǎng)強(qiáng)為250-270mV/cm的第五電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞。
2.一種含有活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞的生物組合物，其中所述酵母細(xì)胞通過(guò)包含任何順序的下列步驟的方法制備(a)在頻率為9921-9930MHz和場(chǎng)強(qiáng)為220-240mV/cm的第一電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(b)在頻率為10121-10130MHz和場(chǎng)強(qiáng)為225-245mV/cm的第二電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(c)在頻率為12141-12150MHz和場(chǎng)強(qiáng)為235-255mV/cm的第三電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(d)在頻率為12831-12840MHz和場(chǎng)強(qiáng)為270-290mV/cm的第四電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(e)在頻率為12871-12880MHz和場(chǎng)強(qiáng)為250-270mV/cm的第五電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；在上述五個(gè)步驟最后一步完成后，還包含任何順序的下列步驟(f)在頻率為12831-12840MHz和場(chǎng)強(qiáng)為290-320mV/cm的第六電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中，在含有野山楂汁和哺乳動(dòng)物胃液的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；以及(g)在頻率為12871-12880MHz和場(chǎng)強(qiáng)為290-310mV/cm的第七電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中，在含有野山楂汁和哺乳動(dòng)物胃液的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)酵母細(xì)胞。
3.一種含有活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞的生物組合物，其中權(quán)利要求2的活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞在任何順序的下述電磁場(chǎng)存在下，在含有野山楂汁、酸棗汁、五味子汁和大豆汁的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一次或多次(h)頻率為12831-12840MHz和場(chǎng)強(qiáng)為300-320mV/cm的第八電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組；和(i)頻率為12871-12880MHz和場(chǎng)強(qiáng)為310-330mV/cm的第九電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組。
4.權(quán)利要求1、2或3的生物組合物，其中所述活化的、或活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞是酵母屬的細(xì)胞。
5.權(quán)利要求1、2或3的生物組合物，其中所述活化的、或活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞是釀酒酵母菌株IFFI 1202的細(xì)胞。
6.權(quán)利要求1、2或3的生物組合物，其中所述活化的、或活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞的濃度為約每毫升103個(gè)細(xì)胞。
7.權(quán)利要求1、2或3的生物組合物，其中所述活化的、或活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞是干燥的。
8.含有權(quán)利要求2或3的活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞的組合物，其中所述活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞被包裝為固體劑型。
9.權(quán)利要求8的組合物，其中每個(gè)固體劑量形式含有約5×105到7×105個(gè)酵母細(xì)胞。
10.一種藥物組合物，其含有權(quán)利要求2或3的活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞和藥物可接受的載體。
11.一種飲食補(bǔ)充劑，其含有權(quán)利要求2或3的活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞和選自下組的一種或多種成分維生素、氨基酸、金屬螯合物、植物提取物、著色劑、增味劑和防腐劑。
12.一種營(yíng)養(yǎng)組合物，其含有權(quán)利要求2或3的活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞和選自下組的食品果汁飲料、茶飲料、乳制品、大豆制品和稻米制品。
13.一種制備含活化酵母細(xì)胞的生物組合物的方法，所述方法包括任何順序的下列步驟(a)在頻率為9921-9930MHz和場(chǎng)強(qiáng)為220-240mV/cm的第一電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(b)在頻率為10121-10130MHz和場(chǎng)強(qiáng)為225-245mV/cm的第二電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(c)在頻率為12141-12150MHz和場(chǎng)強(qiáng)為235-255mV/cm的第三電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(d)在頻率為12831-12840MHz和場(chǎng)強(qiáng)為270-290mV/cm的第四電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(e)在頻率為12871-12880MHz和場(chǎng)強(qiáng)為250-270mV/cm的第五電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞。
14.一種制備含有活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞的生物組合物的方法，所述方法包括任何順序的下列步驟(a)在頻率為9921-9930MHz和場(chǎng)強(qiáng)為220-240mV/cm的第一電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(b)在頻率為10121-10130MHz和場(chǎng)強(qiáng)為225-245mV/cm的第二電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(c)在頻率為12141-12150MHz和場(chǎng)強(qiáng)為235-255mV/cm的第三電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(d)在頻率為12831-12840MHz和場(chǎng)強(qiáng)為270-290mV/cm的第四電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；(e)在頻率為12871-12880MHz和場(chǎng)強(qiáng)為250-270mV/cm的第五電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；在上述五個(gè)步驟最后-步完成后，還包含任何順序的下列步驟(f)在頻率為12831-12840MHz和場(chǎng)強(qiáng)為290-320mV/cm的第六電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中，在含有野山楂汁和哺乳動(dòng)物胃液的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)酵母細(xì)胞；以及(g)在頻率為12871-12880MHz和場(chǎng)強(qiáng)為290-310mV/cm的第七電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組中，在含有野山楂汁和哺乳動(dòng)物胃液的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)酵母細(xì)胞。
15.一種制備含活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞的生物組合物的方法，所述方法包括在所述順序的下述電磁場(chǎng)存在下，在含有野山楂汁、酸棗汁、五味子汁和大豆汁的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)按權(quán)利要求13的方法制備的化活并調(diào)理的酵母細(xì)胞(h)頻率為12831-12840MHz和場(chǎng)強(qiáng)為300-320mV/cm的第八電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組；和(i)頻率為12871-12880MHz和場(chǎng)強(qiáng)為310-330mV/cm的第九電磁場(chǎng)或電磁場(chǎng)組。
16.權(quán)利要求14或15的方法，其還包括在培養(yǎng)步驟后干燥所述活化并調(diào)理的酵母細(xì)胞。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述干燥步驟包括(i)在不超過(guò)65℃的溫度下干燥一段時(shí)間使酵母細(xì)胞休眠；和(b)在不超過(guò)70℃的溫度下干燥一段時(shí)間以將水分含量減低到5％以下。
18.權(quán)利要求14或15的方法，其中所述酵母細(xì)胞是釀酒酵母菌株IFFI 1202的細(xì)胞。
19.一種提高患有免疫缺陷疾病的哺乳動(dòng)物白細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法，包括口服給予所述哺乳動(dòng)物有效量的權(quán)利要求2或3的生物組合物。
20.一種減緩哺乳動(dòng)物中免疫缺陷癥狀的方法，包括口服給予所述哺乳動(dòng)物有效量的權(quán)利要求2或3的生物組合物。
21.權(quán)利要求1 9的方法，其中生物組合物中的所述酵母細(xì)胞為釀酒酵母細(xì)胞。
22.權(quán)利要求19的方法，其中生物組合物中的所述酵母細(xì)胞為釀酒酵母菌株IFFI 1202的細(xì)胞。
23.權(quán)利要求20的方法，其中生物組合物中的所述酵母細(xì)胞為釀酒酵母細(xì)胞。
24.權(quán)利要求20的方法，其中生物組合物中的所述酵母細(xì)胞是釀酒酵母菌株IFFI 1202的細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及保健食品、保健飲料和保健補(bǔ)充劑。本發(fā)明涉及含有能提高動(dòng)物免疫功能的酵母細(xì)胞的生物組合物。本發(fā)明涉及該生物組合物的制造方法，以及利用該生物組合物通過(guò)促進(jìn)白細(xì)胞活化和增殖對(duì)免疫缺陷疾病或免疫抑制的患者產(chǎn)生有益健康效果的方法。
文檔編號(hào)A61K41/00GK1481825SQ0314838
公開(kāi)日2004年3月17日 申請(qǐng)日期2003年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月28日
發(fā)明者張令玉 申請(qǐng)人:歐亞生物科技有限公司