專(zhuān)利名稱(chēng)：具有降糖降脂活性的非環(huán)1，3－二羰基ppar雙激活化合物及其藥用制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有降糖降酯治療作用的全新小分子化合物的合成及其藥用制劑的生產(chǎn)技術(shù)。
背景技術(shù)：
代謝綜合癥包括2型糖尿病以及相關(guān)的并發(fā)癥，如肥胖、心血管疾病、異常脂血癥等，這些疾病對(duì)社會(huì)和經(jīng)濟(jì)有相當(dāng)大的影響。雖然目前對(duì)2型糖尿病的治療可提高機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性，但對(duì)預(yù)防心血管并發(fā)癥卻基本無(wú)能為力。因此，人們對(duì)開(kāi)發(fā)既能增加胰島素敏感性又有降低膽固醇/甘油三酯作用的藥物具有極大的興趣。
糖尿病是多種基因紊亂而導(dǎo)致的疾病，目前它困擾著全球相當(dāng)一部分人群。它分為兩種類(lèi)型(1)1型糖尿病或胰島素依賴(lài)型糖尿病(IDDM)，患者分泌極少或根本不分泌胰島素(胰島素是一種調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的激素)；(2)2型糖尿病或非胰島素依賴(lài)型糖尿病(NIDDM)。2型糖尿病患者血漿胰島素的濃度與正常人是基本相同的，但是，患者的機(jī)體卻對(duì)胰島素具有抵抗作用，因而會(huì)進(jìn)一步影響糖和脂肪在對(duì)胰島素敏感的組織即肌肉、肝臟和脂肪組織中的代謝，并且2型糖尿病患者血漿中胰島素的濃度不足以克服這種抵抗作用。糖尿病患者中90％患的是2型糖尿病。這種代謝異常疾病的特征是高血糖，并會(huì)引起精神系統(tǒng)病變、腎病、視網(wǎng)膜病、高甘油三酯血癥、肥胖和其他心血管病等代謝綜合癥。
2型糖尿病的治療通常包括控制飲食、鍛煉身體和口服降血糖藥劑，一般這些藥劑包括磺酰脲類(lèi)藥物和雙胍類(lèi)藥物。但是，服用磺酰脲類(lèi)藥物效率不高，并且存在諸多副作用，如導(dǎo)致低血糖癥和肥胖。服用雙胍類(lèi)藥物則會(huì)導(dǎo)致乳液酸毒癥、嘔吐和腹瀉等副作用。因此對(duì)于2型糖尿病來(lái)說(shuō)，研制一種既可控制血糖濃度又沒(méi)有較大副作用的藥劑具有重要意義。近來(lái)，一類(lèi)名叫噻唑烷二酮的化合物通過(guò)提高胰島素敏感性而具有降低血糖的作用，它不促使胰臟分泌胰島素，也不會(huì)引起不希望的低血糖，即便增大劑量也是如此。噻唑烷二酮是PPARγ的激活劑，它通過(guò)誘發(fā)和調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞的分化來(lái)產(chǎn)生上述效果。這類(lèi)能激活PPARγ的化合物(如GSK公司的Avandia和Lilly/Tekada公司的Actos)在臨床上已被證明能用于治療2型糖尿病。PPARγ的激活和葡萄糖代謝(主要通過(guò)在肌肉中降低對(duì)胰島素的抵抗作用)的確切聯(lián)系還沒(méi)有被完全闡明。其起鏈接作用的是脂肪組織而不是肌肉細(xì)胞中的自由脂肪酸，通過(guò)它激活PPARγ，繼而產(chǎn)生脂蛋白脂肪酶、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和乙酰輔酶A合成酶。由于底物競(jìng)爭(zhēng)和代謝路徑補(bǔ)償，這反過(guò)來(lái)會(huì)顯著降低血漿中自由脂肪酸的濃度，從而實(shí)現(xiàn)從脂肪酸的氧化到葡萄糖的氧化的轉(zhuǎn)換。葡萄糖的氧化主要發(fā)生在處于高代謝狀態(tài)的組織如骨骼肌中，這就會(huì)降低這些組織對(duì)胰島素的抵抗力。另外，激活PPARγ能調(diào)節(jié)控制葡萄糖和能量平衡的一些基因，這也將會(huì)使血糖濃度降低(T.M.Wilson等.“The PPARsfromorphan receptors to drug discovery”J.Med.Chem.2000 43527-50；A.Chawla等“Nuclear receptors and lipid physiologyOpening the X-files”，Science 2001 2941866-70)。
盡管噻唑烷二酮類(lèi)是很好的抗2型糖尿病制劑，但其嚴(yán)重的副作用如心臟增生肥大、血液稀釋和肝毒已限制了它的臨床應(yīng)用。據(jù)報(bào)道，在美國(guó)和日本已發(fā)生了多起因藥物對(duì)肝臟有害而導(dǎo)致肝損傷或致死的事件。另外，選擇性PPARγ配體促使脂肪細(xì)胞分化和白色脂肪堆積，因而導(dǎo)致肥胖的發(fā)生。肥胖與2型糖尿病密切相關(guān)，它既能誘發(fā)2型糖尿病，也會(huì)因2型糖尿病而產(chǎn)生。這些不良后果最終會(huì)損害機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性。因此，2型糖尿病患者需要一種安全有效的制劑來(lái)治療該病，這種制劑應(yīng)具有雙重活性，既可提高機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性，又可通過(guò)調(diào)節(jié)自由脂肪酸和甘油三酯的含量降低白色脂肪的沉積。
PPARγ是核受體超家族中的一員，它主要在脂肪組織中表達(dá)。這個(gè)家族中的另一個(gè)成員PPARα主要在肝臟組織中表達(dá)，能被一類(lèi)叫fibrates的配體激活并產(chǎn)生降低甘油三酯和膽固醇含量的作用。PPARα能刺激過(guò)氧化物酶的增殖，加速脂肪酸的氧化，從而減少血液中的脂肪酸含量(Keller和WahliTrends Endocrin Metab 1993，4291-296)。最近有報(bào)道指出，PPARδ作為脂代謝的調(diào)節(jié)者有廣泛的“燃燒”脂肪的作用。體外實(shí)驗(yàn)中，在脂肪和骨骼肌細(xì)胞中激活PPARδ有助于脂肪酸的氧化和利用。在PPARα表達(dá)量很低的脂肪組織中，激活PPARδ可以特異地誘導(dǎo)與脂肪酸氧化和能量消耗相關(guān)基因的表達(dá)，從而達(dá)到改善脂類(lèi)含量和減肥的效果。更重要的是，這些激活了PPARδ的動(dòng)物對(duì)高脂飲食和遺傳因素(Lepr(db/db))誘導(dǎo)的肥胖都有完全的抵抗作用。在用PPARδ激活劑短暫處理Lepr(db/db)小鼠后可使堆積的脂肪消耗，而PPARδ缺陷的小鼠用高脂飲食處理則會(huì)造成肥胖(Wang YXet al.，Cell 2003 Apr 18；113(2)159-70)。
PPARα、PPARγ和PPARδ均與維甲酸X受體形成異二聚體。RXR/PPAR異二聚體因此也在控制細(xì)胞糖、脂平衡和脂肪細(xì)胞分化方面起了重要作用。已有報(bào)道表明，一些新的化合物包括PPARγ的激活劑和PPARα/PPARγ的雙激活劑在預(yù)防和治療人和動(dòng)物的代謝綜合癥方面有很好的效果(WO00/08002，WO01/57001Al，US6054453，EP088317B1，WO97/25042，WO02/26729 A2和US6353018B1)。因此，篩選新的具有PPARα、PPARγ和PPARδ激活劑性能的化合物對(duì)代謝異常疾病的綜合治療有非常重要的意義。這些代謝異常疾病包括糖尿病、高血壓、肥胖、胰島素抵抗、高甘油三酯血癥、高血糖、高膽固醇、動(dòng)脈周樣硬化、冠心病和其他心血管病等代謝綜合癥。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明目的之一在于公開(kāi)一類(lèi)基于PPAR核受體設(shè)計(jì)的具有選擇性激活PPAR-α和PPAR-γ能力的治療與代謝綜合癥如I型及II型糖尿病、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化，高血脂癥，肥胖等相關(guān)的化合物；本發(fā)明目的之二在于公開(kāi)這一類(lèi)所述的化合物的制備方法；本發(fā)明目的之三在于公開(kāi)這一類(lèi)所述的化合物作為治療與代謝綜合癥相關(guān)的疾病如I型及II型糖尿病、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化，高血脂癥，肥胖等病癥藥物制備方法。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如通式(I)所示 其中，環(huán)A為五元環(huán)或六元環(huán)，可以是含有一個(gè)或多個(gè)雜原子(O、S或N原子)的雜環(huán)，可以是飽和環(huán)，也可以是含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的不飽和環(huán)。環(huán)A可以含有一個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、羥基、硝基、氰基、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、氨烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳烷氧基烷基、羥烷基、硫代烷基、雜環(huán)取代基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)芳基、雜環(huán)芳氧基、雜環(huán)芳烷氧基、?；?、酰氧基、氨基、烷氨基、芳氨基或芳烷氨基；環(huán)B為五元環(huán)或六元環(huán)，可以是含有一個(gè)或多個(gè)雜原子(O、S或N原子)的雜環(huán)，可以是飽和環(huán)，也可以是含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的不飽和環(huán)，還可以是芳香環(huán)。環(huán)A可以含有一個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、羥基、硝基、氰基、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、氨烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳烷氧基烷基、羥烷基、硫代烷基、雜環(huán)取代基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)芳基、雜環(huán)芳氧基、雜環(huán)芳烷氧基、?；?、酰氧基、氨基、烷氨基、芳氨基或芳烷氨基；X、Y分別為O、S或NR6，其中R6可以是H或C1-3烷基；Z為O、S或NR7，其中R7可以是H、烷基、芳烷基或芳基；Q為O、S或NR7，其中R7可以是H、烷基、芳烷基或芳基；R1、R2、R3分別為H、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、氨烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳烷氧基烷基、羥烷基、硫代烷基、雜環(huán)取代基、鹵素、羥基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)芳基、雜環(huán)芳氧基、雜環(huán)芳烷氧基、酰基、酰氧基、氨基、烷氨基、芳氨基或芳烷氨基；R4、R5分別為H、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、雜環(huán)取代基、芳基或雜環(huán)芳基；Ar為芳撐、雜環(huán)芳撐或二價(jià)雜環(huán)基團(tuán)，可以含有一個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、氨基、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或芳基；n為1～6的整數(shù)。
本發(fā)明所述的治療與代謝綜合癥如糖尿病相關(guān)的化合物的優(yōu)選方法之一如通式(1)所示，其中環(huán)A為六員環(huán)；環(huán)B為六員芳香環(huán)；X、Y分別為O；Z為O或NR7，其中R7可以是H、烷基、芳烷基或芳基；Q為O或NR7，其中R7可以是H、烷基、芳烷基或芳基；R1、R2、R3分別為H或烷基；R4、R5分別為H或烷基；Ar為芳撐；n為2。
本發(fā)明所述的治療與代謝綜合癥如糖尿病相關(guān)的化合物的優(yōu)選方法之二如通式(1)所示，其中環(huán)A為六員飽和環(huán)；環(huán)B為苯環(huán)；X、Y分別為O；Z為O或NR7，其中R7為H；Q為O或NR7，其中R7為H；R1、R2、R3分別為H；R4、R5分別為H或甲基；Ar為苯環(huán)；n為2。
本發(fā)明包括如通式(II)所示的中間體 其中，環(huán)A、環(huán)B、X、Y、Ar和n同前所述；T為-CHO或-R1C＝C(COOMe)2，其中R1同前所述。
本發(fā)明所述的“烷基”，包括直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、正戊基、異戊基、正己基、異己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等；本發(fā)明所述的“芳烷基”，是指含有芳環(huán)的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，如芐基、苯乙基、3-苯基丙基、1-萘甲基等；本發(fā)明所述的“雜環(huán)芳烷基”，是指含有雜原子芳環(huán)的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，如2-呋喃甲基、3-呋喃甲基、2-吡啶甲基等；本發(fā)明所述的“氨基烷基”，是指與氨基相連的烷基，如氨基乙基、1-氨基丙基、1-氨基丙基等；本發(fā)明所述的“烷氧基烷基”，是指與烷氧基相連的烷基，如甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基等；本發(fā)明所述的“芳氧基烷基”，是指與芳氧基相連的烷基，如苯氧基甲基、苯氧基十二烷基、1-萘氧基乙基等；本發(fā)明所述的“芳烷氧基烷基”，是指與芳烷氧基相連的烷基，如芐氧基甲基、3-苯丙氧基乙基等；本發(fā)明所述的“羥基烷基”，是指與羥基相連的烷基，如羥乙基、1-羥基丙基、2-羥基丙基等；本發(fā)明所述的“硫代烷基”，是指與基團(tuán)SR相連的烷基，如硫甲基、甲硫甲基、苯硫甲基等；本發(fā)明所述的“雜環(huán)”，是指含一個(gè)或多個(gè)雜原子(氮、氧或硫)的飽和或不飽和雜環(huán)，如四氫吡咯、二氫吡咯、二氫吡唑、哌啶、嗎啉、咪唑、吡啶等；本發(fā)明所述的“鹵素”，為氟、氯、溴、碘；本發(fā)明所述的“烷氧基”，是指烷基與氧原子相連所形成的基團(tuán)，其中，氧原子具有自由成鍵能力，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基等；本發(fā)明所述的“芳基”，包括含取代基或不含取代基的芳環(huán)，取代基可以是鹵素、氨基、羥基、烷基或烷氧基，如苯基、萘基等；本發(fā)明所述的“芳氧基”，是指芳基與氧原子相連所形成的基團(tuán)，其中，氧原子具有自由成鍵能力，如苯氧基、1-萘氧基、2-萘氧基等；本發(fā)明所述的“芳基烷氧基”，是指含有芳基的烷氧基，其中，氧原子具有自由成鍵能力，如芐氧基、苯乙氧基、1-萘基甲氧基等；本發(fā)明所述的“雜環(huán)芳基”，是指含有一個(gè)或多個(gè)雜原子(O、S或N原子)的五員、六員單環(huán)或九員、十員雙環(huán)芳香取代基，如呋喃、硫酚、吡咯、咪唑、三唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、喹啉、吲哚、苯并咪唑等；本發(fā)明所述的“雜環(huán)芳氧基”，是指雜環(huán)芳基與氧原子相連所形成的基團(tuán)，其中，氧原子具有自由成鍵能力，其雜環(huán)芳基可以是吡咯、咪唑、三唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、喹啉、吲哚、苯并咪唑等；本發(fā)明所述的“雜環(huán)芳基烷氧基”，是指雜環(huán)芳基烷基與氧原子相連所形成的基團(tuán)，其中，氧原子具有自由成鍵能力，其雜環(huán)芳基烷基如2-呋喃甲基、3-呋喃甲基、2-吡啶甲基等；本發(fā)明所述的“?；?，是指烷基與羰基相連所形成的基團(tuán)，如乙酰基、丙酰基、丁?；?、戊酰基等。
本發(fā)明所述的“?；趸?，是指?；c氧原子相連所形成的基團(tuán)，其中，氧原子具有自由成鍵能力，如乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基等。
本發(fā)明所述的“烷基胺基”，是指烷基與氨基的氮原子相連所形成的基團(tuán)，其中，氮原子具有自由成鍵能力，如甲胺基、乙胺基、丙胺基、丁胺基、環(huán)丙胺基、環(huán)戊胺基、環(huán)己胺基等；
本發(fā)明所述的“芳基胺基”，是指芳基與氨基的氮原子相連所形成的基團(tuán)，其中，氮原子具有自由成鍵能力，如苯胺基、萘胺基等；本發(fā)明所述的“芳烷基胺基”，是指芳烷基與氨基的氮原子相連所形成的基團(tuán)，其中，氮原子具有自由成鍵能力，如芐胺基、苯乙氨基、3-苯丙氨基、1-萘甲基胺基等；本發(fā)明所說(shuō)的化合物的合成路線如下所示 化合物1與對(duì)溴乙氧基苯甲醛反應(yīng)，得到苯甲醛的衍生物2，收率為40-45％；化合物2與丙二酸二甲酯進(jìn)行Knoevenagel縮合反應(yīng)，得到化合物3，收率為92-98％；將化合物3用5％鈀碳催化劑進(jìn)行催化氫化，得到化合物4；將化合物4用等摩爾量的NaOH水解，得到單酯化合物5a(Z＝O，Q＝O，R4＝H，R5＝CH3)，收率為90-95％；將化合物4用雙倍摩爾量的NaOH水解，得到雙酸化合物5b(Z＝O，Q＝O，R4＝H，R5＝H)，收率為94-98％；將化合物5a的酰氯與氨水進(jìn)行Schotten-Baumann反應(yīng)，得到單酰胺化合物5c(Z＝NH，Q＝O，R4＝H，R5＝CH3)，收率為52-58％；將化合物5c進(jìn)行水解，得到化合物5d(Z＝NH，Q＝O，R4＝H，R5＝H)，收率為65-69％。
本發(fā)明所說(shuō)的藥用制劑為藥物常用的劑型，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿、液劑、懸浮劑、針劑。可以?xún)?nèi)含香料、甜味劑、液體或固體填料或稀釋劑。該制劑中最多可含有65％的有效成分，通常含有0.5～40％的有效成分，較佳含量為1～20％，最佳含量為1～10％，其余組分為載體填料、稀釋劑或溶劑。
本發(fā)明所說(shuō)的藥用載體輔料或稀釋劑，包括《藥用賦形劑手冊(cè)》(美國(guó)藥學(xué)協(xié)會(huì)，1986年10月)所列的載體填料，但并不局限于這些載體填料。
通式(1)所說(shuō)的化合物在臨床上可以通過(guò)口服或注射方式對(duì)哺乳動(dòng)物(包括人)進(jìn)行用藥，其中尤以口服方式最佳。用藥劑量為每日0.01～200mg/kg體重，較佳用藥劑量為每日0.01～100mg/kg體重，最佳用藥劑量為每日0.1～50mg/kg體重，同時(shí)，最佳劑量視個(gè)體而定，通常開(kāi)始時(shí)劑量較小，然后逐漸增加用量。
下面結(jié)合實(shí)例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅僅局限于這些實(shí)例。本發(fā)明所述的百分比除特別注明外，均為重量百分比。
實(shí)施例12，5-二氯-2，5-二甲基己烷的制備 在反應(yīng)瓶中加入25毫升(341.8mmol)氯化亞砜、20.0克(136.8mmol)2，5-二甲基-2，5-己二醇及250毫升二氯甲烷，于室溫下攪拌反應(yīng)4小時(shí)。然后加入250毫升蒸餾水。分離下層有機(jī)相，用10％NaHCO3洗滌(2×250毫升)，無(wú)水MgSO4干燥，蒸除溶劑得13.4克(73％)目標(biāo)化合物，1H NMR(CDCl3)δ1.57(s，12H，CH3)；1.92(s，4H，CH2)。
實(shí)施例25，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘酚的制備 在反應(yīng)瓶中加入3.0克(22.5mmol)三氯化鋁、15.0克(81.9mmol)2，5-二氯-2，5-二甲基己烷及50毫升二氯甲烷，于室溫下攪拌10分鐘，向其中滴加含有7.7克(81.9mmol)苯酚的50毫升二氯甲烷溶液，滴加完畢，于35℃反應(yīng)4小時(shí)。待反應(yīng)混合物冷卻后，到入200克冰水中，用乙醚萃取(3×80毫升)。分離有機(jī)相，用10％NaHCO3洗滌(2×150毫升)，無(wú)水MgSO4干燥，蒸除溶劑得粗產(chǎn)品，以無(wú)水乙醇重結(jié)晶得15.2克(84％)目標(biāo)化合物。
實(shí)施例3
4-(2-溴乙氧基)苯甲醛的制備 在反應(yīng)瓶中加入3.70克(54.0mmol)KOH、50毫升乙醇、6.00克(49.1mmol)4-羥基苯甲醛和46.15克(245.7mmol)1，2-二溴乙烷，回流反應(yīng)8小時(shí)，冷卻，真空濃縮。將殘留物溶于水，用二氯甲烷萃取(3×50毫升)，水洗(3×50毫升)，用無(wú)水MgSO4干燥，濃縮的粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用乙醇重結(jié)晶得4.6克(41％)目標(biāo)化合物。
實(shí)施例44-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯甲醛的制備 在反應(yīng)瓶中加入0.67克(9.80mmol)KOH、30毫升乙醇、2.00克(9.8mmol)5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘酚和2.25克(9.80mmol)4-(2-溴乙氧基)苯甲醛，回流反應(yīng)8小時(shí)，冷卻至-5℃，過(guò)濾收集固體沉淀，水洗，干燥，得1.60克(46.4％)目標(biāo)化合物。
實(shí)施例54-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯亞甲基丙二酸二甲酯的制備
在反應(yīng)瓶中加入1.50克(4.26mmol)4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯甲醛、30毫升甲苯、1.69克(12.78mmol)丙二酸二甲酯和催化量的醋酸哌啶，回流反應(yīng)8小時(shí)，同時(shí)通過(guò)分水器除去反應(yīng)中生成的水。反應(yīng)畢，冷卻，真空濃縮得1.95克(98％)目標(biāo)化合物。
實(shí)施例64-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯的制備 在反應(yīng)瓶中加入2.55克(5.47mmol)4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯亞甲基丙二酸二甲酯、20毫升甲醇、150毫升1，4-二氧六環(huán)、1.2克5％的鈀-碳催化劑，通入氫氣，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)至不在吸收氫氣為止。過(guò)濾，將濾液真空濃縮得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用醋酸乙酯重結(jié)晶得2.45克(96％)目標(biāo)化合物。HRMS(C28H36O6)計(jì)算值(％)468.5902；實(shí)測(cè)值(％)468.5905。元素分析(C28H36O6)計(jì)算值(％)C，71.77；H，7.74；實(shí)測(cè)值(％)C，71.52；H，7.76。
實(shí)施例7
2-(甲氧基羰基)-3-[4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸的制備 在反應(yīng)瓶中加入0.50克(1.07mmol)4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯、4.3毫升甲醇和2.1毫升四氫呋喃，冷卻至0℃，加入0.59毫升2M(1.18mmol)的NaOH溶液，室溫反應(yīng)2小時(shí)，真空濃縮除去溶劑。將殘留物溶于10毫升飽和Na2CO3溶液，并用10毫升醋酸乙酯洗滌。將水相用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，然后用醋酸乙酯(3×15毫升)萃取。將醋酸乙酯萃取液分別用10毫升水和10毫升鹽水洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，濃縮得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用醋酸乙酯重結(jié)晶得0.45克(93％)目標(biāo)化合物。HRMS(C27H34O6)計(jì)算值(％)454.5634；實(shí)測(cè)值(％)454.5634。元素分析(C27H34O6)計(jì)算值(％)C，71.34；H，7.54；實(shí)測(cè)值(％)C，71.42；H，7.52。
實(shí)施例82-[4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基]丙二酸的制備 在反應(yīng)瓶中加入1.50克(3.21mmol)4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯、12.9毫升甲醇、6.4毫升四氫呋喃和8.01毫升2M(16.03mmol)的NaOH溶液，室溫反應(yīng)2小時(shí)，真空濃縮除去溶劑。將殘留物溶于10毫升飽和Na2CO3溶液，并用10毫升醋酸乙酯洗滌。將水相用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，然后用醋酸乙酯(3×15毫升)萃取。將醋酸乙酯萃取液分別用20毫升水和20毫升鹽水洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，濃縮得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用醋酸乙酯重結(jié)晶得1.38克(98％)目標(biāo)化合物。HRMS(C26H32O6)計(jì)算值(％)440.5365；實(shí)測(cè)值(％)440.5363。元素分析(C26H32O6)計(jì)算值(％)C，70.89；H，7.32；實(shí)測(cè)值(％)C，70.72；H，7.36。
實(shí)施例92-(氨基甲?；?-3-[4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸甲酯的制備 在反應(yīng)瓶中加入2.40克(5.29mmol)2-(甲氧基羰基)-3-[4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸、20毫升苯和0.76克(6.34mmol)氯化亞砜，80℃反應(yīng)90分鐘，然后真空濃縮除去溶劑。向殘留物中加入5.49毫升28％(79.30mmol)的氨水，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)30分鐘，加入20毫升醋酸乙酯，用鹽水洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，濃縮得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用乙醇重結(jié)晶得1.35克(56％)目標(biāo)化合物。HRMS(C27H35NO)計(jì)算值(％)453.5786；實(shí)測(cè)值(％)453.5784。元素分析(C27H35NO)計(jì)算值(％)C，71.50；H，7.78；N，3.09；實(shí)測(cè)值(％)C，71.52；H，7.76；N，3.12。
實(shí)施例102-(氨基甲?；?-3-[4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸的制備 在反應(yīng)瓶中加入0.50克(1.10mmol)2-(氨基甲?；?-3-[4-[2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸甲酯、5毫升甲醇、5毫升四氫呋喃和0.44毫升2.5M(1.10mmol)的NaOH溶液，室溫反應(yīng)15小時(shí)，真空濃縮除去溶劑。將殘留物溶于20毫升水，用3M鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，過(guò)濾、水洗得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用甲醇重結(jié)晶得0.35克(68％)目標(biāo)化合物。HRMS(C26H33NO5)計(jì)算值(％)439.5518；實(shí)測(cè)值(％)439.5516。元素分析(C26H33NO5)計(jì)算值(％)C，71.05；H，7.57；N，3.19；實(shí)測(cè)值(％)C，71.08；H，7.60；N，3.16。
實(shí)施例114-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯甲醛的制備 在反應(yīng)瓶中加入0.67克(9.80mmol)KOH、30毫升乙醇、1.45克(9.8mmol)5，6，7，8-四氫-2-萘酚和2.25克(9.80mmol)4-(2-溴乙氧基)苯甲醛，回流反應(yīng)8小時(shí)，冷卻至-5℃，過(guò)濾收集固體沉淀，水洗，干燥，得1.39克(48.0％)目標(biāo)化合物。
實(shí)施例124-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯亞甲基丙二酸二甲酯的制備 在反應(yīng)瓶中加入1.26克(4.26mmol)4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯甲醛、30毫升甲苯、1.69克(12.78mmol)丙二酸二甲酯和催化量的醋酸哌啶，回流反應(yīng)8小時(shí)，同時(shí)通過(guò)分水器除去反應(yīng)中生成的水。反應(yīng)畢，冷卻，真空濃縮得1.21克(96％)目標(biāo)化合物。
實(shí)施例134-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯的制備 在反應(yīng)瓶中加入2.24克(5.47mmol)4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯亞甲基丙二酸二甲酯、20毫升甲醇、150毫升1，4-二氧六環(huán)、1.2克5％的鈀-碳催化劑，通入氫氣，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)至不在吸收氫氣為止。過(guò)濾，將濾液真空濃縮得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用醋酸乙酯重結(jié)晶得2.16克(96％)目標(biāo)化合物。HRMS(C24H28O6)計(jì)算值(％)412.4827；實(shí)測(cè)值(％)412.4825。元素分析(C24H28O6)計(jì)算值(％)C，69.99；H，6.84；實(shí)測(cè)值(％)C，69.82；H，6.88。
實(shí)施例14
2-(甲氧基羰基)-3-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸的制備 在反應(yīng)瓶中加入0.44克(1.07mmol)4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯、4.3毫升甲醇和2.1毫升四氫呋喃，冷卻至0℃，加入0.59毫升2M(1.18mmol)的NaOH溶液，室溫反應(yīng)2小時(shí)，真空濃縮除去溶劑。將殘留物溶于10毫升飽和Na2CO3溶液，并用10毫升醋酸乙酯洗滌。將水相用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，然后用醋酸乙酯(3×15毫升)萃取。將醋酸乙酯萃取液分別用10毫升水和10毫升鹽水洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，濃縮得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用醋酸乙酯重結(jié)晶得0.38克(90％)目標(biāo)化合物。HRMS(C23H26O6)計(jì)算值(％)398.4558；實(shí)測(cè)值(％)398.4556。元素分析(C23H26O6)計(jì)算值(％)C，69.33；H，6.58；實(shí)測(cè)值(％)C，69.32；H，6.59。
實(shí)施例152-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基]丙二酸的制備 在反應(yīng)瓶中加入1.28克(3.21mmol)4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯、12.9毫升甲醇、6.4毫升四氫呋喃和8.01毫升2M(16.03mmol)的NaOH溶液，室溫反應(yīng)2小時(shí)，真空濃縮除去溶劑。將殘留物溶于10毫升飽和Na2CO3溶液，并用10毫升醋酸乙酯洗滌。將水相用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，然后用醋酸乙酯(3×15毫升)萃取。將醋酸乙酯萃取液分別用20毫升水和20毫升鹽水洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，濃縮得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用醋酸乙酯重結(jié)晶得1.17克(95％)目標(biāo)化合物。HRMS(C22H24O6)計(jì)算值(％)384.4290；實(shí)測(cè)值(％)384.4291。元素分析(C22H24O6)計(jì)算值(％)C，68.74；H，6.29；實(shí)測(cè)值(％)C，68.69；H，6.31。
實(shí)施例162-(氨基甲?；?-3-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸甲酯的制備 在反應(yīng)瓶中加入2.10克(5.29mmol)2-(甲氧基羰基)-3-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸、20毫升苯和0.76克(6.34mmol)氯化亞砜，80℃反應(yīng)90分鐘，然后真空濃縮除去溶劑。向殘留物中加入5.49毫升28％(79.30mmol)的氨水，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)30分鐘，加入20毫升醋酸乙酯，用鹽水洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，濃縮得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用乙醇重結(jié)晶得1.09克(52％)目標(biāo)化合物。HRMS(C23H27NO5)計(jì)算值(％)397.4711；實(shí)測(cè)值(％)397.4713。元素分析(C23H27NO5)計(jì)算值(％)C，69.50；H，6.85；N，3.52；實(shí)測(cè)值(％)C，69.62；H，6.83；N，3.53。
實(shí)施例172-(氨基甲?；?-3-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸的制備
在反應(yīng)瓶中加入0.44克(1.10mmol)2-(氨基甲?；?-3-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸甲酯、5毫升甲醇、5毫升四氫呋喃和0.44毫升2.5M(1.10mmol)的NaOH溶液，室溫反應(yīng)15小時(shí)，真空濃縮除去溶劑。將殘留物溶于20毫升水，用3M鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，過(guò)濾、水洗得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品用甲醇重結(jié)晶得0.28克(66％)目標(biāo)化合物。HRMS(C22H25NO5)計(jì)算值(％)383.4442；實(shí)測(cè)值(％)383.4444。元素分析(C22H25NO5)計(jì)算值(％)C，68.91；H，6.57；N，3.65；實(shí)測(cè)值(％)C，68.82；H，6.55；N，3.67。
實(shí)施例184-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯(CS01300012)、2-(甲氧基羰基)-3-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸(CS01300013)和2-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基]丙二酸(CS01300014)在體外實(shí)驗(yàn)中顯示出RXR/PPAR-α異二聚體激活劑的活性，見(jiàn)表一。
螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)對(duì)化合物激活RXR/PPAR-α異二聚體活性的分析。用PCR的方法從脂肪組織中克隆到全長(zhǎng)的PPAR-αcDNA，所用的引物序列1為5′-acgtgcttcctgcttcataga-3′，序列2為5′-cctgagattagccacctccc-3′，將擴(kuò)增到的PCR產(chǎn)物插入表達(dá)載體后測(cè)序鑒定。報(bào)告基因用Promega公司的熒光素酶檢測(cè)載體pGL3-Promoter構(gòu)建，在它上游插入了三個(gè)拷貝的PPAR反應(yīng)元件pHD(序列3為5′-gatcctctcctttgacctattgaactattacctacatttga-3′)。轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)用SMMC-7721細(xì)胞在96孔板中進(jìn)行，在轉(zhuǎn)報(bào)告基因的同時(shí)共轉(zhuǎn)RXR和PPAR-α基因，轉(zhuǎn)染24小時(shí)后加入待檢測(cè)的化合物和陽(yáng)性藥物WY(WY14，643)，并使溶劑DMSO的終濃度保持在0.1％。化合物作用24小時(shí)后裂解細(xì)胞并進(jìn)行熒光素酶活性的檢測(cè)。
實(shí)施例194-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯(CS01300012)、2-(甲氧基羰基)-3-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]苯基]丙酸(CS01300013)和2-[4-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基]丙二酸(CS01300014)在體外實(shí)驗(yàn)中顯示出RXR/PPAR-γ異二聚體激活劑的活性，見(jiàn)表二。
螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)對(duì)化合物激活RXR/PPAR-γ異二聚體活性分析。用PCR的方法從人的脂肪組織中克隆到全長(zhǎng)的PPAR-γcDNA，所用的引物序列4為5′-ggggtacctgcttcagcagcgtgttcga-3′，序列5為5′-gctctagatgttggcagtggctcaggac-3′，將擴(kuò)增到的PCR產(chǎn)物插入表達(dá)載體后測(cè)序鑒定。報(bào)告基因用Promega公司的熒光素酶檢測(cè)載體pGL3-Promoter構(gòu)建，在它上游插入了一個(gè)拷貝的PPAR反應(yīng)元件(序列6為5′-cgcgttcctttccgaacgtgacctttgtcctggtccccttttgct-3′)。轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)用SMMC-7721細(xì)胞在96孔板中進(jìn)行，在轉(zhuǎn)報(bào)告基因的同時(shí)共轉(zhuǎn)RXR和PPAR-γ基因，轉(zhuǎn)染24小時(shí)后加入待檢測(cè)的化合物和陽(yáng)性藥物Ros(Rosiglitazone)，并使溶劑DMSO的終濃度保持在0.1％?；衔镒饔?4小時(shí)后裂解細(xì)胞并進(jìn)行熒光素酶活性的檢測(cè)。
實(shí)施例204-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯(CS01300012)在db/db小鼠實(shí)驗(yàn)中具有降血糖的作用，見(jiàn)表三。
8周齡的雄性db/db小鼠(來(lái)自杰克森實(shí)驗(yàn)室)分成4組，每組10只，分別按圖上的劑量連續(xù)喂藥9天，所有動(dòng)物都在標(biāo)準(zhǔn)條件下飼養(yǎng)(12小時(shí)白天/黑夜，22℃)，在第9天給藥3小時(shí)后取尾血測(cè)定血糖。
實(shí)施例214-[2-(5，6，7，8-四氫-2-萘氧基)乙氧基]芐基丙二酸二甲酯(CS01300012)在db/db小鼠實(shí)驗(yàn)中能有效降低甘油三脂，見(jiàn)表四。
8周齡的雄性db/db小鼠(來(lái)自杰克森實(shí)驗(yàn)室)分成4組，每組10只，分別按圖上的劑量連續(xù)喂藥9天，所有動(dòng)物都在標(biāo)準(zhǔn)條件下飼養(yǎng)(12小時(shí)白天/黑夜，22℃)，在第9天給藥3小時(shí)后取尾血測(cè)定血脂。
權(quán)利要求
1.一種具有降酯和降糖活性的非環(huán)1，3-二羰基PPAR雙激活化合物，其特征在于，該化合物的立體異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、水合物、酯及其鹽的結(jié)構(gòu)通式如下所示 其中，環(huán)A為五元環(huán)或六元環(huán)，可以是含有一個(gè)或多個(gè)雜原子(O、S或N原子)的雜環(huán)，可以是飽和環(huán)，也可以是含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的不飽和環(huán)。環(huán)A可以含有一個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、羥基、硝基、氰基、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、氨烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳烷氧基烷基、羥烷基、硫代烷基、雜環(huán)取代基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)芳基、雜環(huán)芳氧基、雜環(huán)芳烷氧基、酰基、酰氧基、氨基、烷氨基、芳氨基或芳烷氨基；環(huán)B為五元環(huán)或六元環(huán)，可以是含有一個(gè)或多個(gè)雜原子(O、S或N原子)的雜環(huán)，可以是飽和環(huán)，也可以是含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的不飽和環(huán)，還可以是芳香環(huán)。環(huán)A可以含有一個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、羥基、硝基、氰基、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、氨烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳烷氧基烷基、羥烷基、硫代烷基、雜環(huán)取代基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)芳基、雜環(huán)芳氧基、雜環(huán)芳烷氧基、?；?、酰氧基、氨基、烷氨基、芳氨基或芳烷氨基；X、Y分別為O、S或NR6，其中R6可以是H或C1-3烷基；Z為O、S或NR7，其中R7可以是H、烷基、芳烷基或芳基；Q為O、S或NR7，其中R7可以是H、烷基、芳烷基或芳基；R1、R2、R3分別為H、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、氨烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳烷氧基烷基、羥烷基、硫代烷基、雜環(huán)取代基、鹵素、羥基、烷氧基、芳基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)芳基、雜環(huán)芳氧基、雜環(huán)芳烷氧基、?；ⅤＱ趸?、氨基、烷氨基、芳氨基或芳烷氨基；R4、R5分別為H、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、雜環(huán)取代基、芳基或雜環(huán)芳基；Ar為芳撐、雜環(huán)芳撐或二價(jià)雜環(huán)基團(tuán)，可以含有一個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、氨基、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基或芳基；n為1～6的整數(shù)。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物的優(yōu)選方法之一為環(huán)A為六元環(huán)；環(huán)B為六元芳香環(huán)；X、Y分別為O；Z為O或NR7，其中R7可以是H、烷基、芳烷基或芳基；Q為O或NR7，其中R7可以是H、烷基、芳烷基或芳基；R1、R2、R3分別為H或烷基；R4、R5分別為H或烷基；Ar為芳撐；n為2。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物的優(yōu)選方法之二為環(huán)A為六元飽和環(huán)；環(huán)B為苯環(huán)；X、Y分別為O；Z為O或NR7，其中R7為H；Q為O或NR7，其中R7為H；R1、R2、R3分別為H；R4、R5分別為H或甲基；Ar為苯環(huán)；n為2。
4.如權(quán)利要求1所述化合物，其特征在于，所述化合物的中間體的立體異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、水合物、酯、及其鹽的結(jié)構(gòu)通式如下所示 其中，環(huán)A、環(huán)B、X、Y、Ar和n同權(quán)利要求1所述；T為-CHO或-R1C＝C(COOMe)2，其中R1同權(quán)利要求1所述。
5.如權(quán)利要求4所述的化合物，其特征在于，所述化合物的中間體的優(yōu)選方法之一為環(huán)A為六元飽和環(huán)；環(huán)B為苯環(huán)；X、Y分別為O；Ar為苯環(huán)；n為2。
6.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物的立體異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、水合物、酯、及其鹽，可以通過(guò)以下反應(yīng)步驟進(jìn)行制備a)將化合物1轉(zhuǎn)變成苯甲醛的衍生物2； b)將化合物2與丙二酸二甲酯進(jìn)行縮合反應(yīng)得到化合物3； c)將化合物3催化氫化得到化合物4； d)將化合物4轉(zhuǎn)變成其它1，3-二羰基化合物5；
7.如權(quán)利要求6所述的合成方法，其特征在于a)第一步反應(yīng)，在氫氧化鉀存在下，將化合物1與對(duì)溴乙氧基苯甲醛反應(yīng)，得到苯甲醛的衍生物2；b)第二步反應(yīng)，在催化量的醋酸哌啶存在下，化合物2與丙二酸二甲酯進(jìn)行Knoevenagel縮合反應(yīng)，得到化合物3；c)第三步反應(yīng)，將化合物3用5％鈀碳催化劑進(jìn)行催化氫化，得到化合物4；d)第四步反應(yīng)，將化合物4進(jìn)行水解，或通過(guò)其它常見(jiàn)反應(yīng)，得到化合物5。
8.如權(quán)利要求1所述的化合物的用于激活核受體的藥用制劑，可以治療或預(yù)防與核受體調(diào)節(jié)相關(guān)的疾病。其特征在于，其制劑所述化合物的由活性成分以及藥用載體、輔料或稀釋劑組成。
9.如權(quán)利要求8所述的核受體，其特征在于，該核受體為RXR受體及PPAR受體。
10.如權(quán)利要求8所述的藥用制劑，其特征在于，其所含有效成分的含量介于0.05～100mg之間。
11.如權(quán)利要求8所述的藥用制劑，其特征在于，其所含有效成分的含量介于0.1～50mg之間。
12.如權(quán)利要求8所述的疾病，其特征在于，包括I型糖尿病、II型糖尿病、脂質(zhì)紊亂、X綜合癥、心血管疾病、冠狀動(dòng)脈疾病、高血膽固醇和肥胖癥。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種非環(huán)1，3－二羰基化合物及其制備方法與應(yīng)用，其結(jié)構(gòu)如通式(I)所示，其中，環(huán)A、環(huán)B、R
文檔編號(hào)A61P3/00GK1515534SQ03140230
公開(kāi)日2004年7月28日 申請(qǐng)日期2003年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月18日
發(fā)明者魯先平, 李志斌, 廖晨鐘, 石樂(lè)明, 劉振德, 寧志強(qiáng), 馬保順, 山松, 鄧沱 申請(qǐng)人:深圳微芯生物科技有限責(zé)任公司