專利名稱：一種具有抗病毒作用的復(fù)合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)合物及其制備方法，特別是涉及一種具有抗病毒作用的復(fù)合物及其制備方法。
苦味葉下珠或珠子草中的多酚類化合物是其抗乙肝病毒的有效組份，但因多酚類化合物極易氧化而失去活性，使其在實(shí)際應(yīng)用中受到很大的限制。
一種新的具有抗病毒作用的復(fù)合物，優(yōu)選由10-50％苦味葉下珠總多酚與50-90％殼聚糖組成。
所述復(fù)合物，優(yōu)選25-40％苦味葉下珠總多酚與60-75％殼聚糖；所述復(fù)合物的一種制備方法為殼聚糖的制備將分子量60-200萬殼聚糖溶于1-4％乙酸溶液中，配成1-5％殼聚糖溶液；苦味葉下珠總多酚的制備方法為鮮苦味葉下珠全草切碎，用水蒸氣加熱2-8分鐘，加13-17倍量水浸泡1-2小時(shí)，加熱提取20-40分鐘，取提取液，藥渣再提取1-3次，每次加水量均為提取藥量的13-17倍并提取20-40分鐘，合并提取液，濾過，然后將濾液通過D101聚苯乙烯型大孔吸附樹脂柱，棄去濾出液，用藥材量2-4倍量的水洗滌柱體，棄去洗滌液，再用為藥材量的2-4倍60-80％乙醇洗脫至洗脫液三氯化鐵顯色反應(yīng)陰性，收集乙醇洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對密度為1∶1，即得苦味葉下珠總多酚濃縮液，濃縮液中的總多酚含量采用普魯士藍(lán)法測定，濃縮液中的總多酚含量為75-85％；向已制備的殼聚糖溶液中加入適量甘油和表面活性劑，殼聚糖、表面活性劑和甘油的比例為1∶1∶0.05.然后加入苦味葉下珠苦味葉下珠總多酚濃縮液，在熱水浴中攪拌10-30分鐘，濾去不溶物，濾液加1-3％的NaOH調(diào)節(jié)濾液的PH至中性，最后濾液經(jīng)冷凍干燥磨粉即得；冷凍干燥時(shí)，先將濾液置低溫冰箱中冷凍至負(fù)30-40度，然后放入冷凍干燥機(jī)中，干燥12-24小時(shí)。
上述表面活性劑可選用聚乙二醇類等非離子表面活性劑和明膠等天然表面活性劑。
本發(fā)明還公開一種藥物制劑，含有1％-99％的苦味葉下珠總多酚-殼聚糖復(fù)合物和99％-1％的賦形劑，優(yōu)選含有30％-80％的苦味葉下珠總多酚-殼聚糖復(fù)合物和70％-20％的藥用賦形劑，最好含有60％-70％的苦味葉下珠總多酚-殼聚糖復(fù)合物和40％-30％的賦形劑。
按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明的復(fù)合物加入輔料制備成多種臨床藥物劑型，包括口服制劑或非腸道給藥的劑型。所說的口服制劑選自于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑中的任何一種；所說的非腸道給劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當(dāng)中的一種。
所述輔料是指常規(guī)的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑等。
以下實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
本發(fā)明復(fù)合物，即可有效防止總多酚活性組份的氧化，提高其穩(wěn)定性，又提高了該活性組份的生物利用度和抗病毒劑抗菌活性。實(shí)驗(yàn)例1體外抗乙肝病毒活性試驗(yàn)1.材料和方法1.1.試驗(yàn)細(xì)胞試驗(yàn)使用2.2.15細(xì)胞。該細(xì)胞是HBV DNA轉(zhuǎn)染人類肝癌細(xì)胞株HcPG2所建立的。由美國Mountain Sinal Medical Center提供。采用完全MEM培養(yǎng)液置于CO2孵箱中培養(yǎng)。CO2濃度5％，氧氣濃度95％。
1.2.試驗(yàn)藥物苦味葉下珠總多酚提取物和苦味葉下珠-殼多糖復(fù)合物各5克，用去離子水充分溶解，分別配成2、1、0.5、0.25、0.125(mg/ml)五個(gè)濃度的水溶液，藥液粗濾后再經(jīng)0.2μm的微孔濾膜過濾除菌后備用。
1.3.試驗(yàn)方法細(xì)胞用0.25％的胰酶消化，按1×105細(xì)胞/孔接種于24孔板，1×106細(xì)胞/瓶接種于25毫升培養(yǎng)瓶，48小時(shí)后換用含有不同藥物濃度的培養(yǎng)液，每4天換一次，共三次，12天后收集24孔板上清，采用HBsAg和HBeAg固相放射免疫測定試劑盒檢測HBsAg和HBeAg.HBsAg和HBeAg的抑制率按下式計(jì)算抑制率＝(試驗(yàn)孔P/N-對照孔P/N÷對照孔P/N-2.1)×100％2.結(jié)果2.1.對HBsAg的抑制作用試驗(yàn)結(jié)果見下表。
藥物濃度(mg/ml)藥物0.5 0.25 0.125總多酚 83.06 52.47 25.31總多酚-殼聚糖復(fù)合物 100 97.31 73.062.2.對HBeAg的抑制作用試驗(yàn)結(jié)果見下表。
藥物濃度(mg/ml)藥物0.5 0.25 0.125總多酚82.64 54.2927.51總多酚-殼聚糖復(fù)合物 100 98.8475.01實(shí)驗(yàn)例2對流感病毒的抑制作用1、實(shí)驗(yàn)材料流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1，由南京醫(yī)科大學(xué)微生物教研室提供。昆明種小鼠，體重18-22克，由山西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供。病毒唑(Virazole)注射液，南京第三制藥廠生產(chǎn)?？辔度~下株總多酚和苦味葉下株總多酚-殼聚糖復(fù)合物按以上方法由本公司科研中心制備。
2、方法和結(jié)果健康昆明種小鼠50只，分為正常，流感病毒肺炎模型，Virazole，苦味葉下株總多酚和苦味葉下株總多酚-殼聚糖復(fù)合物五組，每組10只，雌雄各半。取10倍LD50量的流感病毒滴鼻感染小鼠肺部，正常組吸入生理鹽水30μl/只，感染后2小時(shí)，分別給予小鼠Virazole(25mg/kg，im)苦味葉下株總多酚和苦味葉下株總多酚-殼聚糖復(fù)合物(500mg/只，ig)，模型和正常對照組均給與生理鹽水0.5ml，連續(xù)給藥5天，每天三次，連續(xù)觀察15天。試驗(yàn)結(jié)果見下表。
組別 劑量 死亡率(％) 死亡保護(hù)率 生存時(shí)間(天)(％)正常組 ………15模型組 …100 …6.3±4.1Virazole 25mg/kg 12^(p＜0.01)9113.4±4.2^(p＜0.01)總多酚 500mg/只23*(p＜0.05)7311.1±2.89*(p＜0.05)總多酚-殼聚糖 500mg/只8**(p＜0.001) 9315**(p＜0.01)實(shí)驗(yàn)例3藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)分別將苦味葉下株總多酚和它的殼聚糖復(fù)合物裝入塑料瓶內(nèi)，于60度恒溫干燥箱中放置10天，分別于第0，1，2，4，5，7，10天時(shí)取樣，按以上方法測定其總多酚含量。測定結(jié)果見下表。
藥物樣品 總多酚含量(％，d)0 1 2 4 57 10總多酚 100 98.693.784.279.9 68.258.1總多酚-殼聚糖100 98.898.298.798.8 98.598.6結(jié)論以上實(shí)驗(yàn)例的研究結(jié)果表明，利用本發(fā)明的制備工藝將苦味葉下珠總多酚制成苦味葉下珠總多酚-殼聚糖復(fù)合物不僅可大大提高苦味葉下珠總多酚的穩(wěn)定性，而且也可大大提高苦味葉下珠總多酚的抗病毒活性.
以下實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。實(shí)施例1苦味葉下珠總多酚-殼聚糖復(fù)合物制備殼聚糖溶液制備，將殼聚糖(分子量大于60萬，購于南通雙林生物制品有限公司)溶于1.5％的乙酸溶液中，配成2％的殼聚糖溶液；苦味葉下株總多酚制備，鮮苦味葉下珠全草切碎，用水蒸氣迅速加熱2-5分鐘，加15倍量水浸泡1小時(shí)，加熱提取30分鐘，取提取液，藥渣再提取兩次，每次加水量均為提取藥量的15倍并提取30分鐘，合并三次提取液，濾過，然后將濾液通過D101大孔吸附樹脂柱，棄去濾出液，用藥材量三倍量的水洗滌柱體，棄去洗滌液，再用為藥材量的三倍70％乙醇洗脫至洗脫液三氯化鐵顯色反應(yīng)陰性，收集乙醇洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對密度為1∶1，即得苦味葉下株總多酚濃縮液。在2％的殼聚糖溶液100ml中加入適量0-2％甘油和表面活性劑(吐溫80，1-2％)，然后加入制得的苦味葉下珠濃縮液100克，在熱水浴中攪拌約15分鐘，濾去不溶物，濾液加1％的NaOH調(diào)節(jié)濾液的PH至中性，最后濾液經(jīng)冷凍干燥磨粉即得。冷凍干燥時(shí)，先將濾液置低溫冰箱中冷凍至負(fù)35度，然后放入冷凍干燥機(jī)中，干燥20小時(shí)。實(shí)施例2苦味葉下珠總多酚-殼聚糖復(fù)合物500g、藥用淀粉1000g，混合均勻，裝入0#膠囊，每粒0.35g，每次口服1-2粒，每日兩次。實(shí)施例3苦味葉下珠總多酚-殼聚糖復(fù)合物1000g、藥用淀粉500g，混合均勻，用適量乙醇制粒，經(jīng)整粒機(jī)整粒，壓片，每片0.25g，口服，每次1-2片，每日兩次。實(shí)施例4苦味葉下株總多酚-殼聚糖復(fù)合物10g、丙二醇20ml，聚乙二醇-40050ml，注射用水300ml，混合，水浴加熱30分鐘，加苯甲醇50ml，再用注射用水加至1000ml，在超聲波中處理10分鐘，再水浴上加熱30分鐘，調(diào)PH值5.5-6.5，過濾澄明，灌封，滅菌即得。每支2ml，肌肉注射，一次2ml，一日1-2次。
權(quán)利要求
1.一種具有抗病毒作用的復(fù)合物，其特征在于該復(fù)合物是由10-50％苦味葉下珠總多酚與50-90％殼聚糖組成。
2.如權(quán)利要求2所述的復(fù)合物，其特征在于該復(fù)合物是由25-40％苦味葉下珠總多酚與60-75％殼聚糖組成。
3.一種具有抗病毒作用的復(fù)合物，其特征在于該復(fù)合物是由10-50％苦味葉下珠總多酚與50-90％天然高分子或合成高分子組成，天然高分子包括蛋白質(zhì)、殼聚糖、纖維素、瓊脂糖；合成高分子包括聚丙烯酸、聚苯乙烯、聚乙烯乙酸酯、聚乙烯吡咯咯烷酮。
4.如權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法為殼聚糖的制備將分子量60-200萬殼聚糖溶于1-4％乙酸溶液中，配成1-5％殼聚糖溶液；苦味葉下珠總多酚的制備方法為鮮苦味葉下珠全草切碎，用水蒸氣加熱2-8分鐘，加13-17倍量水浸泡1-2小時(shí)，加熱提取20-40分鐘，取提取液，藥渣再提取1-3次，每次加水量均為提取藥量的13-17倍并提取20-40分鐘，合并提取液，濾過，然后將濾液通過D101聚苯乙烯型大孔吸附樹脂柱，棄去濾出液，用藥材量2-4倍量的水洗滌柱體，棄去洗滌液，再用為藥材量的2-4倍60-80％乙醇洗脫至洗脫液三氯化鐵顯色反應(yīng)陰性，收集乙醇洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對密度為1∶1，即得苦味葉下珠總多酚濃縮液，濃縮液中的總多酚含量采用普魯士藍(lán)法測定，濃縮液中的總多酚含量為75-85％；向已制備的殼聚糖溶液中加入適量甘油和表面活性劑，殼聚糖、表面活性劑和甘油的比例為1∶1∶0.05.然后加入苦味葉下珠苦味葉下珠總多酚濃縮液，在熱水浴中攪拌10-30分鐘，濾去不溶物，濾液加1-3％的NaOH調(diào)節(jié)濾液的PH至中性，最后濾液經(jīng)冷凍干燥磨粉即得。
5.如權(quán)利要求4所述的復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法為殼聚糖溶液制備，將分子量大于60萬殼聚糖溶于1.5％的乙酸溶液中，配成2％的殼聚糖溶液；苦味葉下株總多酚制備，鮮苦味葉下珠全草切碎，用水蒸氣迅速加熱2-5分鐘，加15倍量水浸泡1小時(shí)，加熱提取30分鐘，取提取液，藥渣再提取兩次，每次加水量均為提取藥量的15倍并提取30分鐘，合并三次提取液，濾過，然后將濾液通過D101大孔吸附樹脂柱，棄去濾出液，用藥材量三倍量的水洗滌柱體，棄去洗滌液，再用為藥材量的三倍70％乙醇洗脫至洗脫液三氯化鐵顯色反應(yīng)陰性，收集乙醇洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對密度為1∶1，即得苦味葉下株總多酚濃縮液；在2％的殼聚糖溶液100ml中加入0-2％甘油和表面活性劑，吐溫80，1-2％，然后加入制得的苦味葉下珠濃縮液100克，在熱水浴中攪拌約15分鐘，濾去不溶物，濾液加1％的NaOH調(diào)節(jié)濾液的PH至中性，最后濾液經(jīng)冷凍干燥磨粉即得。
6.如權(quán)利要求4或5所述的復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法中所述的表面活性劑可選用聚乙二醇或聚乙二醇類非離子表面活性劑或明膠天然表面活性劑。
7.如權(quán)利要求6所述的復(fù)合物的制備方法，其特征在于該方法中所述的冷凍干燥為先將濾液置低溫冰箱中冷凍至負(fù)30-40度，然后放入冷凍干燥機(jī)中，干燥12-24小時(shí)。
8.如權(quán)利要求1-3所述的復(fù)合物，其特征在于該復(fù)合物可加入輔料制備成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑、注射劑、氣霧劑、栓劑中的任一種臨床藥物制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的復(fù)合物，其特征在于所述藥物制劑是由30％-80％的苦味葉下珠總多酚-殼聚糖復(fù)合物和70％-20％的藥用賦形劑組成。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物制劑，其特征在于該藥物制劑是由60％-70％的苦味葉下珠總多酚-殼聚糖復(fù)合物和40％-30％的賦形劑組成。
11.如權(quán)利要求所述的1-3所述的復(fù)合物在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
12.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于在制備抗乙肝病毒藥物中的應(yīng)用。
13.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于在制備抗流感病毒藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明者公開了一種具有抗病毒作用的復(fù)合物及其制備方法，復(fù)合物由10－50％苦味葉下珠總多酚與50－90％殼聚糖組成，制備時(shí)由1－5％殼聚糖溶液中加入適量甘油和表面活性劑，殼聚糖、表面活性劑和甘油的比例為1∶1∶0.05，然后加入苦味葉下珠總多酚濃縮液，在熱水浴中攪拌10－30分鐘，濾去不溶物，濾液加1－3％的NaOH調(diào)節(jié)濾液的pH至中性，最后濾液經(jīng)冷凍干燥磨粉即得復(fù)合物。本發(fā)明復(fù)合物，即可有效防止總多酚活性組份的氧化，提高其穩(wěn)定性，又提高了該活性組份的生物利用度和抗病毒劑抗菌活性。
文檔編號A61K31/722GK1457797SQ0313714
公開日2003年11月26日 申請日期2003年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月5日
發(fā)明者梁衛(wèi), 史躍年, 馮前進(jìn) 申請人:廣西半宙制藥股份有限公司