專利名稱：一種治療子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的復(fù)方中藥及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療婦科雌激素生長依賴性疾病疾病復(fù)方中藥及制備方法，特別是涉及治療子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的復(fù)方中藥及制備方法。
背景技術(shù)：
子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生和發(fā)展需要機(jī)體維持相當(dāng)程度的雌激素水平，是一種雌激素生長依賴性疾病，只發(fā)生在育齡期婦女。絕經(jīng)后，雌激素水平明顯下降，上述疾病不再發(fā)展，逐漸消退。因此，使用抑制雌激素生物效應(yīng)的藥物有助于抑制這兩種疾病的發(fā)展。
中藥葛根含有葛根異黃酮，具有與雌激素類似的母核結(jié)構(gòu)，可以和雌激素受體結(jié)合，但是它產(chǎn)生的雌激素生物效應(yīng)很微弱，只有17羥β雌二醇生物效應(yīng)的1/1000至1/10000。因此，根據(jù)體內(nèi)雌激素水平的高低，葛根異黃酮在發(fā)揮生物效應(yīng)時，可以表現(xiàn)為類雌激素活性，也可以表現(xiàn)為抗雌激素活性。對于雌激素水平高的育齡期婦女，葛根異黃酮表現(xiàn)為抗雌激素活性，降低體內(nèi)分泌雌激素的生物效應(yīng)。
桂枝茯苓丸來源于《金匾要略》，由桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮和桃仁各等份構(gòu)成，具有活血化淤、抗炎、抗腫瘤的效果。根據(jù)該中藥復(fù)方制成的中成藥桂枝茯苓膠囊，近年用于治療子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥，取得一定療效。
近年來使用抗孕激素藥物米非司酮治療子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥也顯示出一定療效，提示孕激素與這兩種疾病有關(guān)。近年來還證明子宮內(nèi)膜異位癥是一種自身免疫性疾病。莪術(shù)屬于破血消瘕類中藥，具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤和抗孕激素的作用。
發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)證明，桂枝茯苓丸和莪術(shù)均有抑制子宮肌瘤和異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞生長的作用，而且，在桂枝茯苓丸的基礎(chǔ)上加味莪術(shù)，可以增加這種抑制作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在使用從葛根提取的葛根異黃酮或大豆提取的大豆異黃酮造成的低雌激素生物效應(yīng)的環(huán)境中，這種抑制作用更明顯增加，并且誘導(dǎo)了子宮肌瘤細(xì)胞和異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡。
所以，在使用具有抑制雌激素生物效應(yīng)的中藥破壞子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的生長環(huán)境的基礎(chǔ)上，配合促使它們凋亡的中藥，就可以使這兩種疾病的病理組織細(xì)胞逐漸凋亡、消散，從而達(dá)到治療目的。
發(fā)明人進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)證明，聯(lián)合使用抑制雌激素生物效應(yīng)的中藥和活血化淤、破血消瘕、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的中藥，對子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的療效，高于單用任何一類中藥的療效。因?yàn)槿橄傩∪~增生等乳腺良性包塊也屬于雌激素生長依賴性疾病，所以發(fā)明人推論，本發(fā)明的復(fù)方中藥對乳腺良性包塊也有較好的療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開的復(fù)方中藥的配方為抑制雌激素生物效應(yīng)的中藥(或中藥提取的抗雌激素生物效應(yīng)的異黃酮)與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的中藥的復(fù)方，具有破血消瘕、活血化淤、抗炎鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抑制雌激素生物效應(yīng)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，用于治療子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥，達(dá)到協(xié)同治療、提高療效的目的。
根據(jù)發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)，得出對子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥有效的復(fù)方中藥由下述中藥組成葛根、茯苓、桂枝、芍藥、牡丹皮、桃仁、莪術(shù)。
在該復(fù)方中藥的配方中，葛根可以用大豆替換，具體的實(shí)施方法是在使用茯苓、桂枝、芍藥、牡丹皮、桃仁、莪術(shù)的中藥制劑中加入與葛根的有效成分葛根異黃酮等效的大豆異黃酮。同樣的原理和方法，也可以使用其它的等效的異黃酮(例如紅花苜宿異黃酮)。
在該復(fù)方中藥中，這些中藥的用量比例按重量的份數(shù)計(jì)算，葛根可為5-30份、茯苓可為2-20份、桂枝可為2-20份、赤芍可為2-20份、牡丹皮可為2-20份、桃仁2-20份、莪術(shù)2-20份。而較適宜的用量比例，葛根可為10-20份、茯苓可為5-15份、桂枝可為5-15份、赤芍可為5-15份、牡丹皮可為5-15份、桃仁5-15份、莪術(shù)5-15份。而最適宜的用量比例，葛根15份、茯苓10份、桂枝10份、赤芍10份、牡丹皮10份、桃仁10份、莪術(shù)10份。
將上述中藥按用量比例稱取，粉碎成粗粉。將桂枝、桃仁和莪術(shù)粗粉混合，置于中間有不銹鋼網(wǎng)的提取罐內(nèi)，加入6倍量的水，浸泡過夜，罐外安裝冷凝器，其后接揮發(fā)油接收器，該接收器通過底部的不銹鋼管與提取罐形成回流系統(tǒng)(TNG-100型多功能提取濃縮裝置，成都永泰制藥機(jī)械廠)。加熱至沸點(diǎn)，在約0.4kg壓力下回流8小時，收集油層即得，收率0.5％。然后在該提取罐中加入其它中藥粗粉與殘?jiān)旌?，補(bǔ)加水和乙醇，使成十倍于藥材量的60％乙醇水溶液，在70℃溫度下動態(tài)提取60分鐘，重復(fù)提取，共三次。將三次提取液合并，減壓濃縮，真空干燥，粉碎成棕色粉末，收率15.6％。
根據(jù)藥物制劑的制備原則，以及臨床使用原則，將該復(fù)方中藥的兩類提取物混合，加入一定比例的藥用輔料，可以制成臨床使用的膠囊、包衣片劑、顆粒劑等口服制劑。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行更進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例1葛根提取物、桂枝茯苓丸復(fù)方提取物、莪術(shù)提取物以及這三種提取物的再復(fù)方對培養(yǎng)中人子宮肌瘤細(xì)胞生長的影響1、材料(1)試劑DMETM培養(yǎng)液(Gibco Brl)、膠原酶I型(Sigma Co.)、胎牛血清(FBS)、青霉素、鏈霉素(Life Technologies Co.)、溴化四唑藍(lán)(MTT)(Fluka ChemieAG.)、DMSO(Amers Co.)(2)器材CO2培養(yǎng)箱(Shimatsu Co.)，酶標(biāo)儀(Sorin Co.)，流式細(xì)胞儀(EPICSl型，Coulter Co.)2、方法手術(shù)取得的子宮肌瘤組織，用PBS洗凈，剪碎，置含800u/ml膠原酶的DMEM培養(yǎng)液中在37℃下孵育4h，其間吹打4次。消化結(jié)束后在1000RPM下離心5min，收集肌瘤細(xì)胞，用含1％抗生素的DMEM培養(yǎng)液洗滌3次，錐蟲藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞，以2×105細(xì)胞/ml的密度接種于24孔板，用含10％FBS(V/V)的DMEM在CO2培養(yǎng)120h，細(xì)胞長至50％以上密度時，分別加入5種藥物提取物如下(1)桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁復(fù)方提取物溶液(簡稱A液，后同)50μl。每1ml從5g生藥材中按常規(guī)方法提取濃縮。
(2)莪術(shù)提取物溶液(簡稱B液，后同)50μl。每1ml從1g生藥材中按常規(guī)方法提取濃縮。
(3)葛根提取物溶液(簡稱C液，后同)50μl。每1ml從1g生藥材中按常規(guī)方法提取濃縮。
(4)A+B液，50μl。桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪術(shù)復(fù)方提取物溶液。每1ml從6g生藥材中按常規(guī)方法提取濃縮。
(5)A+B+C液，50μl。桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪術(shù)、葛根復(fù)方提取物溶液。每1ml從7.5g生藥材中按常規(guī)方法提取濃縮。
(6)3％(w/v)大豆異黃酮溶液(簡稱D液，后同)，50μl。
(7)A+B+D液，50μl。桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪術(shù)復(fù)方提取物溶液。每1ml從6g生藥材按常規(guī)方法提取濃縮，并加入大豆異黃酮使其濃度達(dá)到3％(w/v)。
對照加50μl生理鹽水，繼續(xù)培養(yǎng)24小時，拍照后進(jìn)行MTT檢測。
3、結(jié)果(1)MTT檢測每孔加MTT(5mg/ml)100μl培養(yǎng)4h，棄培液后每孔加DMSO 1ml振蕩5min，于490nm波長讀數(shù)。結(jié)果見表1。
表1 MTT法細(xì)胞染色OD值

(2)流式細(xì)胞儀測定采用和MTT法同樣的細(xì)胞培養(yǎng)法，用碘化丙啶(PI)一步熒光插入法進(jìn)行細(xì)胞核DNA染色，用200目尼龍網(wǎng)過濾后上機(jī)檢測。結(jié)果見表2。
表2培養(yǎng)細(xì)胞的流式細(xì)胞儀測定

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MTT法試驗(yàn)時，A+B+C液組OD值最低，A+B+D液組OD值與之接近，提示這兩組活細(xì)胞最少，A+B+C液和A+B+D液對培養(yǎng)中的子宮肌瘤細(xì)胞的生長的抑制作用比A+B液的大，提示C液或D液造成的低雌激素生物效應(yīng)環(huán)境增加了A+B液對培養(yǎng)中的子宮肌瘤細(xì)胞的生長的抑制。流式細(xì)胞儀測定法試驗(yàn)時，A+B+C液組的凋亡指數(shù)最高，SPF值下降最明顯。其中，A+B+C液組的凋亡指數(shù)與對照組、A液組和A+B液組比較，均顯著增加(p＜0.05)。
實(shí)施例2葛根提取物、桂枝茯苓丸復(fù)方提取物、莪術(shù)提取物以及這三種提取物的再復(fù)方對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的異位子宮內(nèi)膜的生長的影響1、材料雌性未交配SD大鼠，220-250g，合格證號醫(yī)動字24101101(由四川省醫(yī)科院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供)。
藥物提取物同實(shí)施例1。
2、方法子宮內(nèi)膜異位癥動物模型的建立采用陰道涂片檢查的方法，選擇動情周期未4-5天、連續(xù)有兩個正常動情周期的大鼠，在動情期手術(shù)。3％的戊巴比妥鈉(1.5ml/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，常規(guī)消毒后開腹，將右側(cè)子宮中上段長2cm的兩端結(jié)扎，從子宮血管袢的對側(cè)切開漿膜和基層，向兩側(cè)分離達(dá)子宮血管袢后切除，將剩下的裸子宮內(nèi)膜穿過腹肌固定于皮下和腹肌之間。分兩層關(guān)腹。清潔環(huán)境飼養(yǎng)。
50只動物模型，分5組，每組10只，分別是模型對照組、A液組、A+B液組、A+B+C液組，分別每日灌胃生理鹽水2ml/kg、A液2ml/kg、A+B液2ml/kg、A+B+C液各2ml/kg。給藥21天后處死動物，比較異位子宮內(nèi)膜的外觀和病理檢查(HE染色，光鏡)結(jié)果。
3、結(jié)果結(jié)果見表3。A+B+C液對異位子宮內(nèi)膜的生長有明顯抑制作用，療效優(yōu)于A液或A+B液。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在使用抑制雌激素生物效應(yīng)的C液的基礎(chǔ)上，A+B液抑制異位子宮內(nèi)膜生長的療效明顯提高。
表3不同給藥組異位子宮內(nèi)膜的外觀和病理檢查結(jié)果

實(shí)施例3本發(fā)明的復(fù)方中藥膠囊劑的制備1、配方本發(fā)明的復(fù)方中藥揮發(fā)油提取物 1g本發(fā)明的復(fù)方中藥乙醇水溶液提取物 312g預(yù)膠化淀粉 73g50％乙醇 適量微粉硅膠 4g羧甲基淀粉鈉 10g制成 1000粒2、制備方法稱取配方量本發(fā)明的復(fù)方中藥乙醇水溶液提取物，預(yù)膠化淀粉充分混勻，加入50％乙醇制軟材，用20目篩網(wǎng)過篩制粒；在60-70℃干燥。將干顆粒與配方量的微粉硅膠和羧甲基淀粉鈉混合，用20目篩網(wǎng)整粒；將配方量的本發(fā)明的復(fù)方中藥的揮發(fā)油提取物用適量無水乙醇溶解后，噴入干燥顆粒中攪拌混勻；充填膠囊，每顆膠囊內(nèi)容物為0.4g；成品檢驗(yàn)合格后包裝即得。
實(shí)施例4本發(fā)明的復(fù)方中藥包衣片的制備1、配方本發(fā)明的復(fù)方中藥揮發(fā)油提取物1g本發(fā)明的復(fù)方中藥乙醇水溶液提取物312g預(yù)膠化淀粉 75g3％羥丙甲纖維素水溶液 適量硬脂酸鎂2g羧甲基淀粉鈉10g制成1000片2、包衣液配方(1000ml)聚丙烯酸樹脂IV 25g聚乙二醇600010g
蓖麻油 10ml聚山梨醇酯-80 10ml色素 適量無水乙醇加至 1000ml3、制備方法稱取配方量本發(fā)明的復(fù)方中藥乙醇水溶液提取物，預(yù)膠化淀粉充分混勻，加入3％羥丙甲纖維素水溶液制軟材，用14目篩網(wǎng)過篩制粒；在60-70℃下干燥；將干顆粒與配方量的硬脂酸鎂和羧甲基淀粉鈉混合，用14目篩網(wǎng)整粒；將配方量的本發(fā)明的復(fù)方中藥的揮發(fā)油提取物用適量無水乙醇溶解后，噴入干燥顆粒中攪拌混勻；壓片；包衣；成品檢驗(yàn)合格后包裝即得。
實(shí)施例5本發(fā)明的復(fù)方中藥顆粒劑的制備1、配方本發(fā)明的復(fù)方中藥揮發(fā)油提取物1g本發(fā)明的復(fù)方中藥乙醇水溶液提取物312g蔗糖粉 4687g制成1000袋2、制備方法稱取配方量本發(fā)明的復(fù)方中藥乙醇水溶液提取物、蔗糖粉，混勻，加入適量水制軟材，用12目篩網(wǎng)過篩制粒；60-70℃干燥，12目篩整粒。在顆粒中噴灑揮發(fā)油乙醇液，混合均勻，待乙醇揮發(fā)后分裝入袋。
實(shí)施例6使用本發(fā)明的復(fù)方中藥治療子宮肌瘤61例子宮肌瘤，年齡均在48歲以上，均存在不同程度的月經(jīng)量增多，B超檢查肌瘤最大徑大于等于3cm。治療前檢查肝腎功能和血常規(guī)未發(fā)現(xiàn)異常。隨機(jī)分為3組。第1組23例，使用中成藥桂枝茯苓膠囊治療，口服使用，三顆t.i.d.。第2組25例，使用本發(fā)明例3的配方和方法制備的膠囊治療，口服使用，三顆t.i.d.。第3組17例，使用安慰劑(淀粉膠囊)治療，口服使用，三顆t.i.d.。各組療程均為4個月。各組患者在治療期間不使用其它治療。治療結(jié)束后隨訪12個月，均未停經(jīng)。療效結(jié)果見表4。療效判斷標(biāo)準(zhǔn)與治療前B超檢查相比較，同一個肌瘤最大徑消退超過50％的病人數(shù)量超過病人總數(shù)的50％為有效，否則無效。使用t檢驗(yàn)比較各組間百分率的差異的顯著性。
表4本發(fā)明復(fù)方中藥和其組成中藥對子宮肌瘤的療效

注*表示與安慰劑對照組比較p＜0.05。
表示第2組與第1組比較p＜0.05。
治療過程中各組病人中均沒有發(fā)生中、重度肝功能損害和粒細(xì)胞＜3000個/μl等毒副反應(yīng)。
由表4可見，在肌瘤消退、月經(jīng)量恢復(fù)正常，以及停藥后月經(jīng)量再次增多等方面，使用本發(fā)明的復(fù)方中藥的第2組的療效明顯優(yōu)于安慰劑組，而使用中成藥桂枝茯苓膠囊的第1組的療效，在月經(jīng)量恢復(fù)正常，以及停藥后月經(jīng)量再次增多等方面，與安慰劑組的療效相比無明顯差異，而與第2組的療效相比有明顯差異。因此，使用本發(fā)明的復(fù)方中藥治療子宮肌瘤的療效明顯優(yōu)于安慰劑組和中成藥桂枝茯苓膠囊組。本臨床試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明提出的治療雌激素依賴性良性疾病的理論和由該理論指導(dǎo)下發(fā)明的復(fù)方中藥對屬于這類疾病之一的子宮肌瘤有較好的療效。
權(quán)利要求
1.一種治療子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的復(fù)方中藥，由葛根、桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪術(shù)組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥，其葛根的有效成分為葛根異黃酮，并且可以用等效劑量大豆異黃酮或紅花苜宿異黃酮或其它等效劑量的異黃酮代替。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥，組成該復(fù)方的各味中藥的用量比例按重量份數(shù)計(jì)算為葛根可為5-30份、茯苓可為2-20份、桂枝可為2-20份、赤芍可為2-20份、牡丹皮可為2-20份、桃仁2-20份、莪術(shù)2-20份。而較適宜的用量比例為葛根可為10-20份、茯苓可為5-15份、桂枝可為5-15份、赤芍可為5-15份、牡丹皮可為5-15份、桃仁5-15份、莪術(shù)5-15份。而最適宜的用量比例為葛根15份、茯苓10份、桂枝10份、赤芍10份、牡丹皮10份、桃仁10份、莪術(shù)10份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、3所述的復(fù)方中藥的制備方法，先將上述中藥按用量比例稱取，粉碎成粗粉。將桂枝、桃仁和莪術(shù)粗粉混合，置于中間有不銹鋼網(wǎng)的提取罐內(nèi)，加入6倍量的水，浸泡過夜，罐外安裝冷凝器，其后接揮發(fā)油接收器，該接收器通過底部的不銹鋼管與提取罐形成回流系統(tǒng)。加熱至沸點(diǎn)，在約0.4kg壓力下回流8小時，收集油層即得，收率0.5％；然后在該提取罐中加入其它中藥粗粉與殘?jiān)旌?，補(bǔ)加水和乙醇，使成十倍于藥材量的60％乙醇水溶液，在70℃溫度下動態(tài)提取60分鐘，重復(fù)提取，共三次。將三次提取液合并，減壓濃縮，真空干燥，粉碎成棕色粉末，收率15.6％；根據(jù)藥物制劑的制備原則，以及臨床使用原則，將該復(fù)方中藥的兩類提取物混合，加入一定比例的藥用輔料，可以制成臨床使用的膠囊、包衣片劑和顆粒劑以及其它藥物制劑學(xué)上和臨床使用上可行的劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于治療子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的復(fù)方中藥及其制備方法；該復(fù)方由葛根、桂枝、茯苓、赤芍、牡丹皮、桃仁、莪術(shù)組成，制備成適合臨床使用的膠囊、包衣片劑、顆粒劑以及其它藥物制劑學(xué)上和臨床使用上可行的劑型。
文檔編號A61K31/7042GK1579432SQ0313559
公開日2005年2月16日 申請日期2003年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月15日
發(fā)明者唐小海 申請人:成都市藥友科技發(fā)展有限公司