專利名稱：一種治療冠心病心絞痛的藥物及其藥理作用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療冠心病心絞痛的藥物，具體涉及以中草藥為原料經(jīng)特定工藝制成的制劑，本發(fā)明還公開了其藥理作用。
背景技術(shù)：
冠心病心絞痛是指由于冠狀動脈硬化或痙攣導(dǎo)致心肌缺血、缺氧所引起的心絞痛，約占心絞痛患者的90％。目前，西藥治療心絞痛的方法主要以擴張血管、降低血粘度、抗血小板聚集、抗凝血為主。應(yīng)用的藥物為硝酸酯、亞硝酸酯類、β-受體阻滯劑、鈣拮抗劑、溶栓劑等，但由于其存在較大的毒副作用，不宜長期使用，且大多數(shù)藥物為針對癥狀的治療，對于病程的進展無較大的作用。
丹參為唇形科鼠尾草植物丹參(Salvia miltiorrhiza Beg.)干燥的根。在我國治療冠心病心絞痛方面，已有近千年的使用歷史，最早記載于東漢的《神農(nóng)本草經(jīng)》，并列為上品，具有行氣止痛，寧心安神，清熱涼血，活血化瘀等功效。
研究表明，丹參的活性成分主要有兩類一類是以丹參酮為代表的脂溶性有效部位；另一類則是以丹酚酸為代表的水溶性有效部位。近年來研究認(rèn)為，水溶性有效成分是活血化瘀的有效成分。例如，丹酚酸A對缺血再灌注引起的心肌細胞損傷有明顯的保護作用，總丹酚酸表現(xiàn)出較強的抗缺血再灌注性心律失常作用；丹酚酸A、丹酚酸B以及總丹酚酸對小鼠腦缺血再灌注引起的腦損傷有保護作用，可以減少腦組織中MDA含量；丹酚酸抗血栓作用；丹酚酸對肝、腎的保護作用；丹酚酸具有很強的抗氧化作用，可以清除超氧陰離子和釋基自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，等等。(杜冠華等，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2000，20(5)10～14)。
迄今為止，丹參水溶性部位的提取方法多為水提后過樹脂柱，例如，Takashi Tanaka等報道的丹參多酚酸鹽的提取方法(Chemical Pharmaceutical Bulletin，1989，37(2)，340～344)，另外，KojiHase等(Planta Medica，1997，63，22～26)、徐亞明等(中國專利CN1247855A，2000年3月公開)、劉平等(中國專利CN1270809A，2000年10月公開)、黎蓮娘等(中國專利，申請?zhí)?1142288.2，申請日2001年9月)亦采用類似的方法從丹參中提取酚酸類化合物。以上方法的共同缺陷之一是必須對水提取液進行濃縮，由于丹參水溶性部位穩(wěn)定性與處理時的溫度高低和處理時間的長短等有較大關(guān)系，故一般采取減壓濃縮的方式，但好的減壓濃縮設(shè)備較為昂貴，如工藝中反復(fù)的減壓濃縮，會使工藝復(fù)雜化，造成工業(yè)生產(chǎn)成本很高，嚴(yán)重阻礙其工業(yè)化生產(chǎn)的實現(xiàn)。另一缺陷是產(chǎn)率較低，一般為2～3％，低的產(chǎn)率亦限制了這些方法在工業(yè)上的應(yīng)用。
本發(fā)明采用丹參水提取后，加酸調(diào)節(jié)pH值，過濾后，經(jīng)過樹脂的分離純化，使其總酚酸含量達70％以上，與合適的輔料制成制劑。動物試驗表明對預(yù)防和治療冠心病心絞痛具有非常顯著的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種療效確切的治療和預(yù)防冠心病、心絞痛的藥物。
本發(fā)明的另一目的是提供該藥物的藥理作用。
本發(fā)明通過以下方案予以實施。
a)取粉碎后的丹參藥材，加熱水提取，濾過，合并濾液；b)濾液調(diào)節(jié)pH值，棄去沉淀，取上清液；c)上清液經(jīng)大孔樹脂吸附并用水除去雜質(zhì)；d)用低級醇洗脫大孔樹脂，收集洗脫液；e)濃縮洗脫液，成干粉。
其中步驟a)中，水提取次數(shù)為兩次，第一次加水量為藥材量的6～8倍，提取時間為1～3小時，第二次加水量為藥材量的4～6倍，提取時間為1～2小時；其中優(yōu)化條件為第一次加水量為藥材量的7倍，提取時間為2小時，第二次加水量為藥材量的5倍，提取時間為1.5小時。
步驟b)中，調(diào)節(jié)濾液pH值至1～5，調(diào)節(jié)濾液pH值所用的酸為無機酸；其中優(yōu)選條件為pH值調(diào)節(jié)至1～4，最佳pH值為2，調(diào)節(jié)濾液pH值所用的酸為鹽酸。
步驟d)中，吸附于大孔樹脂上的有效成分用含水的C1～C5的低級醇洗脫，洗脫濃度為30～80％；其中C1～C5的低級醇分別為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、戊醇、異戊醇，優(yōu)選為乙醇；優(yōu)選濃度為50～80％，最佳濃度為70％。
步驟e)中，濃縮洗脫液的溫度為60℃以下，由于以酚酸類成分為代表的丹參水溶性部位高溫容易氧化分解，所以選擇此溫度進行濃縮、干燥，對其有效成分不有影響，實際效果令人滿意。
采用本發(fā)明方法制得的丹參水溶性有效部位提取物，可以制成任何一種藥劑學(xué)上的劑型，也可以配合其他藥物或組分一起制成制劑使用。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢1.工藝簡捷。本發(fā)明丹參采用熱水提取，經(jīng)酸調(diào)節(jié)pH值后，濾過，濾液直接上大孔樹脂柱進行分離。其中用酸調(diào)節(jié)pH值的方法來代替了現(xiàn)有技術(shù)中的濃縮、醇沉等一些看似簡單而在工業(yè)生產(chǎn)上實際較為復(fù)雜的工藝程序，尤其是省卻了對水溶液的濃縮，使工藝設(shè)備更為簡單。同時，上柱前調(diào)節(jié)pH值，還可以去掉很多雜質(zhì)，保證了干粉中丹酚酸B的含量不低于60％。另外，從附圖可以看出圖1(采用對比例方法得到高效液相圖譜)與圖2(采用本發(fā)明方法得到高效液相圖譜)相比，其產(chǎn)物中的雜質(zhì)峰D，圖1明顯小于圖2；除此以外，峰A和B的比例發(fā)生了明顯地改變；其中的峰C為指標(biāo)成分丹酚酸B，比較兩種方法可以看出，本發(fā)明方法明顯高于對比例方法。
2.有效成分損失少。本發(fā)明避免了因濃縮過程中溫度高、時間長等不利因素對丹參水溶性有效部位穩(wěn)定性的影響，減少了有效成分的損失。
3.產(chǎn)率高，且總酚酸含量高。從對比例和實施例1～5可以看出，現(xiàn)有技術(shù)的成品(丹參總酚酸干粉)收率一般為生藥量的3.6％，成品中總酚酸的含量為72.1％，丹酚酸含量為58.9％；而采用本發(fā)明方法得到的成品收率一般在4.59～4.80％之間，成品中總酚酸的含量在74.7～76.2％，丹酚酸含量為62.9～65.3％，明顯高于現(xiàn)有技術(shù)所采用的方法，雜質(zhì)少，質(zhì)量高。
4.成本低。本發(fā)明由于省卻反復(fù)濃縮、醇沉等所需的工藝設(shè)備(特別是水溶液的濃縮設(shè)備)，工業(yè)設(shè)備成本較低；本發(fā)明的丹參總酚酸產(chǎn)率高，且丹參總酚酸含量與現(xiàn)有技術(shù)的含量相近或高于現(xiàn)有技術(shù)的含量，即同樣的生藥量可生產(chǎn)出更多質(zhì)量相同或質(zhì)量更高的產(chǎn)品，成本低而效益高。
5.動物實驗研究也說明了依本發(fā)明的方法制備的丹參水溶性有效部位的有益效果。
實驗例下面通過動物實驗，觀察通過本方法得到的丹參水溶性有效部位對麻醉犬心肌梗塞范圍的影響，說明本發(fā)明的有益效果。
1.試驗材料(1)藥物受試藥，采用本發(fā)明的方法所制得的丹參水溶性有效部位。
(2)丹參片，上海中藥三廠生產(chǎn)，批號980605。
(3)0.9％氯化鈉注射液，北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號9900210222。
2.方法動物經(jīng)戊巴比妥鈉(30m/kg)靜脈麻醉，氣管插管，連接SC-2型電動呼吸機左側(cè)第四肋間開胸，暴露心臟，剪開心包，做心包床；分離冠狀動脈左旋支，放置電磁流量計探頭，測定心臟冠脈血流量；分離冠狀動脈前降支中段，穿線以備結(jié)扎，造成急性實驗性心肌缺血模型；縫置多點固定式心外膜電極，連接多道生理記錄儀，描記心外膜電圖。結(jié)扎冠脈15分鐘，進行記錄，作為給藥前對照值，經(jīng)十二指腸給予實驗藥物或生理鹽水，于藥后15、30、45、60、90、120、180分鐘記錄30個標(biāo)測點心外膜電圖，以S-T段升高大于2mV為判斷標(biāo)準(zhǔn)，計算心肌缺血程度(S-T段升高總mv數(shù)∑-ST)及心肌缺血范圍(S-T段升高總點數(shù)N-ST)。
藥后180分鐘記錄完畢，立即取下心臟，生理鹽水沖洗，稱量全心重，在心臟結(jié)扎線以下，平行于冠狀溝均勻地將心室部分橫切5片，然后，置于硝基四氮唑蘭(N-BT)染液中，常溫染色15分鐘。以彩色病理圖像分析系統(tǒng)(MPIAS-500)測量每片心肌雙側(cè)的梗塞區(qū)(N-BT非染色區(qū))與非梗塞區(qū)(N-DT染色區(qū))，計算每片心肌的面積，心室總面積和梗塞區(qū)總面積。計算梗塞區(qū)占心室及占全心臟的百分比。實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理，以t檢驗判斷其顯著性。
3.結(jié)果對犬急性心肌梗塞范圍的影響結(jié)果見下表，定量組織學(xué)N-BT染色法顯示心肌梗塞范圍，生理鹽水對照組動物心肌梗塞區(qū)分別占心臟及心室的8.48±0.48％和20.66±1.99％；受試藥組動物心肌梗塞區(qū)域占心臟2.60±0.60％及心室的7.71±0.81％，與生理鹽水對照組比較均有非常顯著的差異(均P＜0.001)，同時受試藥組動物心肌梗塞程度低于丹參片組，具有顯著差異(P＜0.01)。
各給藥組對犬急性心肌梗塞范圍的影響(n＝5)組別 劑量/kg 心臟面積mm2心室面積mm2梗塞區(qū)面積mm2梗塞區(qū)/心臟 梗塞區(qū)/心室生理鹽水 3ml 13494.2±1091.4 5228.6±646.01110.05±218.018.48±0.48 20.66±1.99丹參片 2g 12792.9±2272.0 5123.7±585.1429.2±90.9***3.17±0.88***9.05±2.18***受試藥 2g 16328.3±6037.6 4983.1±529.5367.2±55.8***2.60±0.60***▲▲7.71±0.81***▲▲注與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001；與丹參片組對比▲▲P＜0.01。


圖1為采用對比例方法得到的丹參提取物的高效液相譜圖；圖2為采用本發(fā)明實施例二方法得到的丹參提取物的高效液相譜圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合對比例和實施例對本發(fā)明作進一步的說明，下述該實施例僅用于說明本發(fā)明而對本發(fā)明沒有限制。
對比例按專利申請文獻(中國專利，申請?zhí)?1142288.2，申請日2001年9月)的方法制備丹參總酚酸丹參500g粉碎成粗粉，加去離子水在100℃加熱提取2次。第一次加7倍量的水，加熱2小時；第二次加5倍量水加熱1小時。提取液在50℃減壓濃縮至500ml，冷卻，所得濃縮液通過大孔吸附樹脂(D101型)，用去離子水洗至流出液無α-萘酚反應(yīng)，繼續(xù)用50％乙醇洗脫得洗脫液3000ml。洗脫液經(jīng)減壓濃縮，得干粉18.0g，即丹參水溶性部位提取物。成品收率為生藥量的3.6％，經(jīng)檢測其成品含總酚酸72.1％，丹酚酸B為58.9％。
丹參總酚酸和丹酚酸B的檢測方法按專利申請文獻(中國專利，申請?zhí)?1142288.2，申請日2001年9月)的方法進行測定。
(1)丹酚酸B用HPLC法測定，檢測波長288nm，標(biāo)準(zhǔn)品丹酚酸B由天津天士力集團現(xiàn)代中藥研究所提供，純度98.0％。
(2)丹參總酚酸含量＝F(A-B)+B其中A為分光光度法測定以丹酚酸B為對照計算的總酚酸含量B為高效液相色譜法測定的丹酚酸B含量F為校正因子0.626實施例一丹參500g粉碎成粗粉，加去離子水在100℃微沸狀態(tài)下加熱提取2次。第一次加6倍水，加熱1小時第二次加4倍量水分別加熱1小時。合并提取液用10％鹽酸調(diào)pH值為1后，濾過，收集濾液，上大孔吸附樹脂(D101型)，用去離子水沖洗至中性，繼續(xù)用80％甲醇洗脫，待色帶下來即收集此色帶。55℃減壓濃縮，成干粉，得丹參水溶性有效部位24.05g，成品收率為生藥量的4.80％。按專利申請文獻(中國專利，申請?zhí)?1142288.2，申請日2001年9月)的方法進行測定，成品含總酚酸75.9％，丹酚酸B為64.9％。
實施例二丹參500g粉碎成粗粉，加去離子水在80℃加熱提取2次。第一次7量倍水，加熱2小時；第二次加5倍量水分別加熱1.5小時。提取液用10％鹽酸調(diào)pH值為2后，濾過，收集濾液上大孔吸附樹脂(D101型)，用去離子水沖洗至中性，繼續(xù)用70％乙醇洗脫，待色帶下來即收集此色帶。50℃減壓濃縮，成干粉，得丹參水溶性有效部位23.75g，成品收率為生藥量的4.75％。按專利申請文獻(中國專利，申請?zhí)?1142288.2，申請日2001年9月)的方法進行測定，成品含總酚酸76.2％，丹酚酸B為65.3％。
實施例三丹參500g粉碎成粗粉，加去離子水在100℃微沸狀態(tài)下加熱提取2次。第一次加8量倍水，加熱3小時；第二次各加6倍量水分別加熱2小時。提取液用10％硫酸調(diào)pH值為3后，濾過，收集濾液上大孔吸附樹脂(AB-8型)，用去離子水沖洗至中性，繼續(xù)用60％丙醇洗脫，待色帶下來即收集此色帶。45℃減壓濃縮，成干粉，得丹參水溶性有效部位22.95g，成品收率為生藥量的4.59％。按專利申請文獻(中國專利，申請?zhí)?1142288.2，申請日2001年9月)的方法進行測定，成品含總酚酸74.7％，丹酚酸B為64.2％。
實施例四丹參500g粉碎成粗粉，加去離子水在100℃微沸狀態(tài)下加熱提取2次。第一次加7.5量倍水，加熱2.5小時；第二次各加5.5倍量水分別加熱2小時。提取液用10％鹽酸調(diào)pH值為4后，濾過，收集濾液上大孔吸附樹脂(AB-8型)，用去離子水沖洗至中性，繼續(xù)用50％丁醇洗脫，待色帶下來即收集此色帶。40℃減壓濃縮，成干粉，得丹參水溶性有效部位23.25g，成品收率為生藥量的4.65％。按專利申請文獻(中國專利，申請?zhí)?1142288.2，申請日2001年9月)的方法進行測定，成品含總酚酸75.1％，丹酚酸B為63.8％。
實施例五丹參500g粉碎成粗粉，加去離子水在100℃微沸狀態(tài)下加熱提取2次。第一次加7.5量倍水，加熱2.5小時；第二次各加5.5倍量水分別加熱2小時。提取液用10％鹽酸調(diào)pH值為5后，濾過，收集濾液上大孔吸附樹脂(AB-8型)，用去離子水沖洗至中性，繼續(xù)用30％戊醇洗脫，待色帶下來即收集此色帶。40℃減壓濃縮，成干粉，得丹參水溶性有效部位23.35g，成品收率為生藥量的4.67％。按專利申請文獻(中國專利，申請?zhí)?1142288.2，申請日2001年9月)的方法進行測定，成品含總酚酸75.0％，丹酚酸B為62.9％。
權(quán)利要求
1.一種丹參有效部位的提取方法，其特征在于包括a.取粉碎后的丹參藥材，加熱水提取，濾過，合并濾液；b.濾液調(diào)節(jié)pH值，棄去沉淀，取上清液；c.上清液經(jīng)大孔樹脂吸附并用水除去雜質(zhì)；d.用低級醇洗脫大孔樹脂，收集洗脫液；e.濃縮洗脫液，成干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟a中水提取兩次，第一次加水量為藥材量的6～8倍，提取時間為1～3小時，第二次加水量為藥材量的4～6倍，提取時間為1～2小時。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟a中水提取兩次，第一次加水量為藥材量的7倍，提取時間為2小時，第二次加水量為藥材量的5倍，提取時間為1.5小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟b中調(diào)節(jié)濾液pH值至1～5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟b中調(diào)節(jié)濾液pH值至1～4。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟b中調(diào)節(jié)濾液pH值至2。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟b中調(diào)節(jié)濾液pH值所用的酸為無機酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟b中調(diào)節(jié)濾液pH值所用的酸為鹽酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟c中的大孔樹脂為苯乙烯型多孔性吸附樹脂。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟d中吸附于大孔樹脂上的有效成分用含水的C1～C5的低級醇洗脫。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的制備方法，其特征在于步驟d中吸附于大孔樹脂上的有效成分用含水的C1～C5的低級醇洗脫，洗脫濃度為30～80％。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的制備方法，其特征在于步驟d中吸附于大孔樹脂上的有效成分用含水的C1～C5的低級醇洗脫，洗脫濃度為50～80％。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的制備方法，其特征在于步驟d中吸附于大孔樹脂上的有效成分用含水的乙醇，洗脫濃度為70％。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟e中濃縮洗脫液的溫度為60℃以下。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參有效部位的提取方法，其特征包括a.取粉碎后的丹參藥材，加水提取兩次，第一次加6倍水，加熱1小時第二次加4倍量水分別加熱1小時，加熱水提取，濾過，棄去沉淀，取上清液；b.采用10％鹽酸將上述濾液pH值調(diào)至1.0，濾過，收集濾液，c.上清液經(jīng)大孔樹脂吸附并用水除去雜質(zhì)；d.用80％甲醇洗脫大孔樹脂，收集洗脫液；e.55℃下減壓濃縮洗脫液，成干粉。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參有效部位的提取方法，其特征包括a.取粉碎后的丹參藥材，加水提取兩次，第一次加7倍水，加熱2小時第二次加5倍量水分別加熱1.5小時，加熱水提取，濾過，棄去沉淀，取上清液；b.采用10％鹽酸將上述濾液pH值調(diào)至2.0，濾過，收集濾液，c.上清液經(jīng)大孔樹脂吸附并用水除去雜質(zhì)；d.用70％乙醇洗脫大孔樹脂，收集洗脫液；e.50℃下減壓濃縮洗脫液，成干粉。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參有效部位的提取方法，其特征包括a.取粉碎后的丹參藥材，加水提取兩次，第一次加8倍水，加熱3小時第二次加6倍量水分別加熱2小時，加熱水提取，濾過，棄去沉淀，取上清液；b.采用10％鹽酸將上述濾液pH值調(diào)至3.0，濾過，收集濾液，c.上清液經(jīng)大孔樹脂吸附并用水除去雜質(zhì)；d.用60％丙醇洗脫大孔樹脂，收集洗脫液；e.45℃下減壓濃縮洗脫液，成干粉。
18.一種治療冠心病心絞痛的藥物，其特征在于含有權(quán)利要求1～17任何一種方法所制備的丹參有效部位。
19.根據(jù)權(quán)利要求1～17所述任一方法制備的丹參有效部位在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于所說的藥物具有改善急性心肌缺血和心肌梗塞的作用；具有減輕心肌缺血再灌注的損傷的作用；具有增加冠脈血流量，擴張血管、增加靜脈血氧含量，降低心肌耗氧指數(shù)，改善心肌缺血的作用；具有抑制血小板聚集的作用；具有體外抑制血栓形成的作用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療冠心病心絞痛中藥的制備方法，它是丹參制成的制劑，其中丹參采取水提、酸調(diào)節(jié)pH值、過濾、上大孔吸附樹脂、低級醇洗脫、低溫濃縮成干粉，制成制劑。本發(fā)明還公開了該中藥的藥理作用。
文檔編號A61P7/02GK1548130SQ0313086
公開日2004年11月24日 申請日期2003年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月20日
發(fā)明者張文生, 黃芝娟, 李德坤, 岳洪水, 魏峰 申請人:天津天士力制藥股份有限公司