專利名稱：抗癌藥秋水仙堿微球凍干劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑，特別是涉及用于制備抗癌藥物新型制劑的一種抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法。
背景技術(shù)：
微球(Microparticle)是由生物可降解的高分子材料組成的封閉性小球狀體，有文獻(xiàn)報導(dǎo)，微球是靶向給藥系統(tǒng)的一種新劑型，微球進(jìn)入體內(nèi)后主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，使藥物蓄積在肝、脾和骨髓等巨噬細(xì)胞豐富的組織器官中。微球增加了局部藥物濃度，提高藥物療效；同時減少藥物在全身的分布，降低藥物毒副作用。微球生物相容性好，無毒或無免疫原性，安全可靠。微球在許多疾病的治療中顯示了明顯的優(yōu)越性，是當(dāng)今先進(jìn)的第四代藥物傳輸系統(tǒng)。
秋水仙堿(Colchicin)是從百合科植物麗江山慈菇Iphigenia indica Kunth etBenth.的球莖粉末經(jīng)80-90％乙醇回流提取，濃縮，浸膏用適量水提取，過濾。水液用2％H2SO4調(diào)pH為2.0，氯仿萃取，5％NaOH水溶液洗滌，Na2SO4干燥濃縮，得膠狀物，經(jīng)乙醇、氯仿結(jié)晶得到的一種生物堿，是一種卓酚酮類化合物。臨床用于治療癌癥，秋水酰堿對細(xì)胞有絲分裂有明顯的抑制作用，能抑制癌細(xì)胞的增長，臨床用于治療癌癥，特別對乳腺癌有一定療效，對原發(fā)性痛風(fēng)有一定作用，秋水仙堿在治療肝損傷及纖維化方面有作用。綜上所述，秋水仙堿是一個有廣泛應(yīng)用前景的抗癌傳統(tǒng)藥。國內(nèi)外還沒有秋水仙堿微球的相關(guān)文獻(xiàn)報道。國內(nèi)有關(guān)秋水仙堿微球凍干劑也無相關(guān)專利、文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種靶向性高、固體型的抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法，其特征在于將聚乙烯醇溶解于蒸餾水中，加入氯化鈉調(diào)整溶液為與血漿等滲的水溶液；將秋水仙堿與氰基丙烯酸酯共溶于有機(jī)溶劑中，并高速注入到聚乙烯醇的氯化鈉水溶液中，加熱，攪拌，在水相中加入表面活性劑，凍干保護(hù)劑，進(jìn)行真空冷凍干燥，得到白色、疏松、流動性好的粉末狀的固體秋水仙堿微球凍干劑。其秋水仙堿微球凍干劑，由下列重量份數(shù)比的成分組成秋水仙堿 100-1000聚氰基丙烯酸酯 500-1000表面活性劑 50-100聚乙烯醇 20-100氯化鈉 9000氨基乙酸 100-1000聚氰基丙烯酸酯 700-800毫克聚乙烯醇 10-100毫克所述用于制備抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法包括以下步驟1)置備下述重量及體積份數(shù)比的原料秋水仙堿 200-800毫克聚氰基丙烯酸酯 700-800毫克聚乙烯醇 10-100毫克表面活性劑 40-80毫克氯化鈉 9000毫克凍干保護(hù)劑 100-1000毫克有機(jī)溶劑 500-1000毫升蒸餾水 1000毫升2)將聚乙烯醇先用水溶解，水相中加入表面活性劑，加入氯化鈉，得到與血漿等滲的水溶液；3)將秋水仙堿與氰基丙烯酸酯共溶于有機(jī)溶劑中，并高速注入到上述水溶液中，并持續(xù)攪拌，溶液溫度維持在40℃～50℃；4)有機(jī)相迅速擴(kuò)散到水相，形成O/W或W/O型乳劑，加熱，采用磁力攪拌，揮發(fā)除盡有機(jī)溶劑；5)將得到的混懸液離心，并用蒸餾水洗滌至無有機(jī)溶劑和表面活性劑殘留；
6)將得到的微球固體沉淀物用0.9％生理鹽水溶解，加入凍干保護(hù)劑，攪拌30-50分鐘后，進(jìn)行真空冷凍干燥；7)真空冷凍干燥，得到白色、疏松、流動性好的粉末狀固體型秋水仙堿微球凍干劑；8)稱重、分裝于10ml安瓿中，充氮?dú)?，封口，滅菌，即為成品?br> 所述真空冷凍干燥是在-50℃～-60℃，0.5～0.1mPa條件下進(jìn)行的。
所述有機(jī)溶劑優(yōu)選氯仿、二氯甲烷、乙醇或任意兩種的混合物。
所述表面活性劑選自Tween-80、Tween-20、Span-80、Span-20、Poloxamer或它們的混合物。
所述凍干保護(hù)劑選自氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖或它們的混合物。
本發(fā)明的有益效果是用上述方法制備的秋水仙堿微球凍干劑用0.9％生理鹽水溶解，則立即分散成均勻的秋水仙堿微球水溶液，其有效活性成分為其中的秋水仙堿微球，掃描電鏡測得水合后脂質(zhì)體的平均粒徑小于1μm，75％的粒子粒徑在200-300μm之間。由于本發(fā)明的秋水仙堿微球凍干劑水合后，秋水仙堿微球的粒徑小，可以在生物體內(nèi)兼容。由微球?yàn)檩d體的藥物在生物體內(nèi)可降解、無毒性，具有能識別變異細(xì)胞的靶向性等特點(diǎn)。秋水仙堿微球的粒徑小，對肝、脾組織有天然的靶向性，因此提高了抗肝癌藥秋水仙堿在肝組織中的積累，提高了秋水仙堿對肝癌的治療作用。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了樣品的安全性考察，包括刺激性試驗(yàn)和溶血性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)動物均未見有刺激性異常反應(yīng)，秋水仙堿微球凍干劑安全可靠，無刺激性，并且沒有溶血反應(yīng)。本發(fā)明生產(chǎn)秋水仙堿微球凍干劑的方法工藝簡單，不需要特殊的設(shè)備，因而生產(chǎn)成本低，適合于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為秋水仙堿標(biāo)準(zhǔn)品HPCE圖。
圖2為秋水仙堿血漿標(biāo)準(zhǔn)品HPCE圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明是一種靶向性高、固體型的抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法。將聚乙烯醇溶解于蒸餾水中，加入氯化鈉調(diào)整溶液為與血漿等滲的水溶液；將秋水仙堿與氰基丙烯酸酯共溶于機(jī)溶劑中，并高速注入到聚乙烯醇的氯化鈉水溶液中，加熱，攪拌，在水相中加入表面活性劑及凍干保護(hù)劑，進(jìn)行真空冷凍干燥，得到白色、疏松、流動性好的粉末狀的固體秋水仙堿微球凍干劑，其秋水仙堿微球凍干劑的重量份數(shù)比的成分組成秋水仙堿 100-1000聚氰基丙烯酸酯500-1000聚乙烯醇 20-100表面活性劑50-100氯化鈉9000氨基乙酸 100-1000有機(jī)溶劑 500-1000毫升蒸餾水1000毫升其中，優(yōu)選的是由下列重量份數(shù)比的成分組成；秋水仙堿 200-800聚氰基丙烯酸酯700-800聚乙烯醇 10-100表面活性劑40-80氯化鈉9000氨基乙酸 100-1000有機(jī)溶劑 700-800毫升蒸餾水1000毫升所述用于制備抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法包括以下步驟1)置備下述重量及體積份數(shù)比的原料
秋水仙堿 200-800毫克聚氰基丙烯酸酯800毫克聚乙烯醇 20毫克表面活性劑40-80毫克氯化鈉9000毫克凍干保護(hù)劑100-1000毫克有機(jī)溶劑 500-1000毫升蒸餾水1000毫升2)將聚乙烯醇先用水溶解，水相中加入表面活性劑，加入氯化鈉，得到與血漿等滲的水溶液；3)將秋水仙堿與氰基丙烯酸酯共溶于有機(jī)溶劑中，并高速注入到上述水溶液中，并持續(xù)攪拌，溶液溫度維持在40℃～50℃；4)有機(jī)相迅速擴(kuò)散到水相，形成O/W或W/O型乳劑，加熱，采用磁力攪拌，揮發(fā)除盡有機(jī)溶劑；5)將得到的混懸液離心，并用蒸餾水洗滌至無有機(jī)溶劑和表面活性劑殘留；6)將得到的微球固體沉淀物用0.9％生理鹽水溶解，加入凍干保護(hù)劑，攪拌30-50分鐘后，進(jìn)行真空冷凍干燥；7)真空冷凍干燥，得到白色、疏松、流動性好的粉末狀固體型秋水仙堿微球凍干劑；8)稱重、分裝于10ml安瓿中，充氮?dú)?，封口，滅菌，即為成品?br> 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
實(shí)施例11)、置備下述重量及體積的原料秋水仙堿 250毫克聚氰基丙烯酸酯 800毫克聚乙烯醇 20毫克表面活性劑 40毫克氯化鈉 9000毫克氨基乙酸500毫克氯仿500毫升蒸餾水 1000毫升2)、精密稱取聚乙烯醇20毫克，先用500ml重蒸水充分溶脹，待聚乙烯醇充分溶脹后，繼續(xù)加入另外500ml水和40毫克表面活性劑，再加9.0g氯化鈉調(diào)整水溶液至與血漿等滲，磁力攪拌器500rpm攪拌，并保持溶液溫度維持在20℃；3)、配制1.0mg/ml的秋水仙堿氯仿溶液250ml，置于500ml大燒杯中，備用；4)、用氯仿250ml充分溶解配制800毫克聚氰基丙烯酸酯，置于另一500ml大燒杯中，備用；5)、取等量的秋水仙堿與氰基丙烯酸酯有機(jī)溶劑共同混合均勻，置于1000ml大燒杯中，備用。
6)、用100ml注射器分次高速注入磁力攪拌的聚乙烯醇水溶液中，即可得到半透明秋水仙堿的乳濁液，水溶液溫度維持在40℃～50℃；7)、持續(xù)加熱(40℃～50℃)和高速攪拌上述乳濁液至將有機(jī)溶劑揮發(fā)除凈，最終得到白色混懸液；8)、將得到的混懸液離心，并用蒸餾水多次洗滌，至無有機(jī)溶劑和表面活性劑殘留；9)、將得到的納米粒固體沉淀物用0.9％生理鹽水溶解，加入凍干保護(hù)劑，攪拌；10)、將含有凍干保護(hù)劑的秋水仙堿微球混懸液置于廣口大直徑的平底容器中，-55℃，0.3mPa條件下真空冷凍干燥24小時，即得白色、疏松、流動性好的粉末狀固體型秋水仙堿微球凍干劑。
實(shí)施例2
與實(shí)施例1的步驟相同，不同的是原料的配方如下秋水仙堿 400毫克聚氰基丙烯酸酯600毫克聚乙烯醇 40毫克表面活性劑50毫克氯化鈉9000毫克氨基乙酸 800毫克有機(jī)溶劑 800毫升蒸餾水1000毫升實(shí)施例3與實(shí)施例1的步驟相同，不同的是原料的配方如下秋水仙堿 800毫克聚氰基丙烯酸酯500毫克聚乙烯醇 50毫克表面活性劑40毫克氯化鈉9000毫克氨基乙酸 1000毫克有機(jī)溶劑 1000毫升蒸餾水1000毫升實(shí)施例3、秋水仙堿微球分析方法的建立試驗(yàn)中建立了高效毛細(xì)管電泳法測定秋水仙堿生物體內(nèi)藥物動力學(xué)的方法，該法所需試驗(yàn)樣品量小，最低檢測限為0.03mg/ml，樣品峰型好，秋水仙堿與生物樣品雜質(zhì)分離效果良好，高效毛細(xì)管電泳法的檢測在線、快捷、迅速。典型色譜圖如圖1、圖2所示。
從圖1和圖2可以看出，在以上色譜條件下，秋水仙堿出峰時間短，5分鐘樣品峰全部出完，峰型銳，無拖尾現(xiàn)象。血漿樣品中雜質(zhì)在1～3.47分鐘出峰，而秋水仙堿在4～5分鐘出峰，生物樣品雜質(zhì)與秋水仙堿分離效果良好，符合分離要求，可以作為秋水仙堿生物體內(nèi)藥物動力學(xué)測定方法。秋水仙堿微球凍干劑生物體內(nèi)樣品高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)檢測方法的條件如下。
分離介質(zhì)30mmol.L-1的硼酸溶液(NaOH調(diào)至pH10.0)；分離電壓15.0KV，柱溫20℃，壓力進(jìn)樣2.0sec，檢測波長254nm，毛細(xì)管47cm×50μm；有效長度40cm。
實(shí)施例4、秋水仙堿微球凍干劑的粒徑測定取秋水仙堿微球，重蒸水溶解，用ζ電位粒徑儀觀察。ζ電位粒徑儀測得本發(fā)明秋水仙堿微球水合后脂質(zhì)體的平均粒徑小于1μm，75％的粒子粒徑在200-300nm之間。
實(shí)施例5、秋水仙堿微球凍干劑的刺激性試驗(yàn)1)小白鼠靜脈注射法試驗(yàn)方法選擇健康昆明種小白鼠10只，體重20.0～25.0g，隨機(jī)分兩組。一組5只小鼠，尾靜脈注射0.2ml秋水仙堿微球凍干劑注射液，對照組5只小鼠，尾靜脈注射同劑量0.9％生理鹽水。給藥后一小時內(nèi)，觀察到給藥小鼠無任何異常行為，無刺激性反應(yīng)，小鼠活動和飲食不受影響，所注射的秋水仙堿微球凍干劑注射液對血管無刺激性；給小鼠尾靜脈注射后，對小鼠血管靜脈組織無刺激損傷作用。
2)小白鼠腹腔注射法試驗(yàn)方法選擇健康昆明種小白鼠10只，體重20.0-25.0g，隨機(jī)分兩組。一組5只小鼠，腹腔注射0.1ml秋水仙堿微球注射液，對照組5只小鼠，腹腔注射同劑量0.9％生理鹽水。觀察給藥后至給藥后一小時內(nèi)，觀察到給藥小鼠無任何異常行為，無刺激性扭體反應(yīng)，小鼠活動和飲食不受影響，所注射的秋水仙堿微球注射液無刺激性。
同時本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了對所制備樣品的安全性考察，包括刺激性試驗(yàn)和溶血性試結(jié)果表明，秋水仙堿微球凍干劑安全、可靠，無刺激性，并且沒有溶血反應(yīng)。
在上述各實(shí)驗(yàn)中，試驗(yàn)動物均未見有刺激性異常反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)果表明，秋水仙堿微球凍干劑安全可靠。
由于本發(fā)明的秋水仙堿微球凍干劑水合后，秋水仙堿微球的粒徑小，對肝、脾組織有天然的靶向性，因此提高了抗肝癌藥秋水仙堿在肝組織中的積累，提高了秋水仙堿對肝癌的治療作用。因此本發(fā)明的秋水仙堿微球凍干劑是一種抗癌藥物新劑型。同時，由于將秋水仙堿微球凍干劑以固體的形式貯存，臨用前加入分散介質(zhì)分散形成溶液型微球，方便了儲存、運(yùn)輸。
權(quán)利要求
1.一種抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑，其特征在于將聚乙烯醇溶解于蒸餾水中，加入氯化鈉調(diào)整溶液為與血漿等滲的水溶液；將秋水仙堿與氰基丙烯酸酯共溶于有機(jī)溶劑中，并高速注入到聚乙烯醇的氯化鈉水溶液中，加熱，攪拌，在水相中加入表面活性劑，凍干保護(hù)劑，進(jìn)行真空冷凍干燥，得到白色、疏松、流動性好的粉末狀的固體秋水仙堿微球凍干劑；其秋水仙堿微球凍干劑，由下列重量份數(shù)比的成分組成秋水仙堿 100-1000聚氰基丙烯酸酯500-1000聚乙烯醇 20-100表面活性劑50-100氯化鈉9000氨基乙酸 100-1000有機(jī)溶劑 500-1000毫升蒸餾水1000毫升
2.一種抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法，其特征在于所述用于制備抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法包括以下步驟1)置備下述重量及體積份數(shù)比的原料秋水仙堿 100-1000聚氰基丙烯酸酯500-1000聚乙烯醇 20-100表面活性劑50-100氯化鈉9000氨基乙酸 100-1000有機(jī)溶劑 500-1000毫升蒸餾水1000毫升2)將聚乙烯醇先用水溶解，水相中加入表面活性劑，加入氯化鈉，得到與血漿等滲的水溶液；3)將秋水仙堿與氰基丙烯酸酯共溶于有機(jī)溶劑中，并高速注入到上述水溶液中，并持續(xù)攪拌，溶液溫度維持在40℃～50℃；4)有機(jī)相迅速擴(kuò)散到水相，形成O/W或W/O型乳劑，加熱，采用磁力攪拌，揮發(fā)除盡有機(jī)溶劑；5)將得到的混懸液離心，并用蒸餾水洗滌至無有機(jī)溶劑和表面活性劑殘留；6)將得到的微球固體沉淀物用0.9％生理鹽水溶解，加入凍干保護(hù)劑，攪拌30-50分鐘后，進(jìn)行真空冷凍干燥；7)真空冷凍干燥，得到白色、疏松、流動性好的粉末狀固體型秋水仙堿微球凍干劑；8)稱重，分裝于10ml安瓿中，充氮?dú)?，封口，滅菌，即為成品?br> 3.根據(jù)權(quán)利要求2所述抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法，其特征在于所述真空冷凍干燥是在-50℃～-60℃，0.5～0.1mPa條件下進(jìn)行的。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑優(yōu)選氯仿、二氯甲烷、乙醇或任意兩種的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法，其特征在于所述表面活性劑選自Tween-80、Tween-20、Span-80、Span-20、Poloxamer或它們的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述抗癌藥物秋水仙堿微球凍干劑的制備方法，其特征在于所述凍干保護(hù)劑選自氨基乙酸、山梨糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖或它們的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了屬于藥物制劑的抗癌藥秋水仙堿微球凍干劑的制備方法。將聚乙烯醇溶解于蒸餾水中，加入氯化鈉調(diào)整溶液為與血漿等滲的水溶液；將秋水仙堿與氰基丙烯酸酯共溶于機(jī)溶劑中，并高速注入到聚乙烯醇的氯化鈉水溶液中，加熱，攪拌，在水相中加入表面活性劑及凍干保護(hù)劑，進(jìn)行真空冷凍干燥，得到白色、疏松、流動性好的粉末狀的固體秋水仙堿微球凍干劑。臨床用于治療癌癥，秋水酰堿對細(xì)胞有絲分裂有明顯的抑制作用，能抑制癌細(xì)胞的增長；對乳腺癌、原發(fā)性痛風(fēng)、在治療肝損傷及纖維化方面有作用。秋水仙堿微球凍干劑是一個有廣泛應(yīng)用前景的新型抗癌藥。生產(chǎn)秋水仙堿微球凍干劑的方法工藝簡單，不需要特殊的設(shè)備，因而生產(chǎn)成本低，適合于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61K9/19GK1533765SQ0312144
公開日2004年10月6日 申請日期2003年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月31日
發(fā)明者羅國安, 張奇, 王義明, 李德華 申請人:清華大學(xué)