專利名稱：一種抗肝纖維化的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療肝病的藥物，尤其是一種抗肝纖維化的藥物(商品名可博利-2號(hào))。
目前國(guó)內(nèi)有許多治療肝纖維化的中藥復(fù)方。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中都有一定的抗肝纖維化作用，然而在臨床研究中卻缺乏雙盲對(duì)照，另一方面對(duì)中藥抗肝纖維化的機(jī)理研究較少，應(yīng)從基因水平甚至后基因水平研究，可能對(duì)實(shí)踐會(huì)有更大的指導(dǎo)作用。
脂質(zhì)體是1967年英國(guó)首先發(fā)現(xiàn)，但真正用于臨床是1971年，70年代沈陽(yáng)藥科大學(xué)在國(guó)內(nèi)首次研制成功。脂質(zhì)體主要由磷脂和膽固醇組成雙層包膜應(yīng)為。水溶性物質(zhì)通過(guò)適當(dāng)?shù)募夹g(shù)可包裹在包膜內(nèi)，脂溶性物質(zhì)則包裹在雙層之間。
脂質(zhì)體的作用特點(diǎn)(1)靶向性，以抗癌藥物為例，脂質(zhì)體包封藥物后，在組織內(nèi)的分布情況改變很大，組織對(duì)藥物攝取量大大增加。如阿糖胞苷脂質(zhì)體靜脈注射后16小時(shí)，包封藥物在組織中的濃度比游離藥物大68倍。邱德凱等人用脂質(zhì)體包封冬蟲(chóng)夏草多糖治療慢性肝炎患者發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)脂質(zhì)體包封冬蟲(chóng)夏草多糖治療慢性肝炎可以大大提高患者的NK細(xì)胞活性，INF-r(干擾素)，外周血淋巴細(xì)胞膜的細(xì)胞介素2受體(MIL-2R)表達(dá)的細(xì)胞介素2(IL-2)水平與治療前相比P＜0.05或P＜0.01。而且證明脂質(zhì)體包封冬蟲(chóng)夏草多糖提高上述免疫指標(biāo)比不包封的冬蟲(chóng)夏草多糖療效明顯好。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05。鄧英杰等研究了黃芪多糖脂質(zhì)體的制備和穩(wěn)定性，用均勻設(shè)計(jì)方法進(jìn)一步證明了黃芪多糖脂質(zhì)體比黃芪多糖普通制劑和空白脂質(zhì)體具有更加顯著的免疫效果。文獻(xiàn)還報(bào)道，脂質(zhì)體包封藥物可以提高藥物活性5～10倍。(2)包在脂質(zhì)體內(nèi)藥物被體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬細(xì)胞作為外來(lái)異物的吞噬。有的是融合作用(Fusion)，即脂質(zhì)體的膜材與細(xì)胞膜構(gòu)成物相似而融合進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。凡帶電荷和中性液體的脂質(zhì)體主要通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞作用進(jìn)入溶酶體，然后裂解釋放藥物。由于溶酶體的通透性有限，故分子較大的藥物就不能釋放到細(xì)胞的其它部位，而融合作用往往不受這種限制，因此脂質(zhì)體的釋放藥物是具有選擇性的。(3)延緩釋藥，藥物包封在脂質(zhì)體后在體內(nèi)延緩釋放后，延長(zhǎng)作用時(shí)間。(4)控制藥物在組織內(nèi)分布和在血液內(nèi)清除率。通過(guò)改變脂質(zhì)體的面積大小，表面電荷和組成成份，可以改變脂質(zhì)體在給藥部位消除速度及進(jìn)入靶區(qū)的速度。
制備脂質(zhì)體的材料，脂質(zhì)體的膜材主要由磷脂與膽固醇構(gòu)成，這兩種成份不但是形成脂質(zhì)體雙分子的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且本身也具有極重要的生理功能，由它們形成的“人工生物膜”易被機(jī)體消化分解，不像合成微囊(如人工尼龍微囊)那樣往往在機(jī)體中難以排除。脂質(zhì)體包封中藥，目前多以包封單味中藥為主，如包封冬蟲(chóng)夏草多糖、包封黃芪多糖、包封丹參等，對(duì)于包封復(fù)方中藥較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是研制出一種治療肝纖維化的中藥復(fù)方，能改善肝功能、增高白蛋白，降低球蛋白，使肝纖維化得以改善。
本發(fā)明采取的技術(shù)方案是選取以下中藥復(fù)方制得冬蟲(chóng)夏草菌絲體2～2.5重量份、黃芪12～15重量份、丹參12～15重量份、首烏4～5重量份、枸杞5～6重量份、太子參5～6重量份。采用大豆卵磷脂∶蛋黃卵磷脂＝7∶3比例制的脂質(zhì)體包封上方提取液。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)或積極效果發(fā)明人從1997年開(kāi)始研制可博利-2號(hào)口服液，治療乙型肝炎后肝硬化失代償期至今已有5年，治療200余例肝炎后肝硬化及400多例慢性乙型肝炎后病人。治療結(jié)果顯示(1)經(jīng)過(guò)口服三個(gè)月能使丙二醛(MDA)由治療前32.19±7.74下降至19.23±4.75(μmol/L)；透明質(zhì)酸從治療前546.12±77.97下降至398.39±84.81(mg/mL)；丙二醛(MDA)治療前與治療后相比，P＜0.05；與對(duì)照組相比，P＜0.05；透明質(zhì)酸(HA)治療前與治療后相比，P＜0.05。乙肝病毒侵入人體后引起肝損害的機(jī)理很多，其中之一是自由基增多；另一方面慢性肝炎病人腸道內(nèi)毒素吸收增加都可以使自由基增多。自由基一方面損害肝細(xì)胞，使肝細(xì)胞破壞，另一方面引起炎癥，釋放出多種細(xì)胞因子，從而貯脂細(xì)胞轉(zhuǎn)化成為纖維細(xì)胞，加重肝纖維化。本制劑可以減少自由基則減少肝纖維化沉積，有利于慢性肝炎恢復(fù)，有利于抑制肝纖維化的發(fā)展；(2)有利于白蛋白的合成，服用可博利-2號(hào)口服液三個(gè)月后使患者白蛋白從28±4.32增至32.69±4.64(g/L)，P＜0.01，與對(duì)照組相比，P＜0.05，說(shuō)明可博利-2號(hào)口服液能促進(jìn)肝細(xì)胞的功能，促進(jìn)白蛋白的合成。(3)增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。治療前可溶性白介素2受體(SIL-2R)明顯高于正常人，治療后明顯下降，與治療前相比較，P＜0.01；與對(duì)照組相比較，P＜0.05。IL-2是細(xì)胞免疫關(guān)鍵性的細(xì)胞因子之一，IL-2增高反映細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)，IL-2與可溶性受體結(jié)合后喪失一定活性，因此SIL-2R增高則使細(xì)胞免疫功能下降；相反，SIL-2R下降則反映免疫功能的增強(qiáng)，本方治療3個(gè)月測(cè)定患者SIL-2R普遍下降。因本院條件限制，無(wú)法測(cè)定IL-2。(4)提高垂體-性腺軸功能。慢性肝炎患者常常存在垂體-性腺軸功能障礙，表現(xiàn)為男性睪丸酮(T)下降，女性雌二醇(E2)增加，垂體促卵泡生成素的下降，經(jīng)治療后可明顯增高，尚在統(tǒng)計(jì)之中。
采用CCL4誘導(dǎo)的肝硬化模型，然后用可博利-2號(hào)口服液和干擾素注射作為對(duì)照觀察組，結(jié)果表明(1)大劑量可博利-2號(hào)口服液和干擾素可顯著降低肝羥脯氨基酸含量(P＜0.05＝。羥脯氨基酸是膠原纖維特有的氨基酸，測(cè)定羥脯氨基酸可一定程序上反映肝纖維化程度，羥脯氨基酸愈高說(shuō)明肝纖維化愈重，反之愈然。(2)肝臟病理學(xué)檢查，與空白組比較，模型組纖維化程度明顯增高(P＜0.01＝。與模型組比較，可博利-2號(hào)口服液和干擾素均能降低肝纖維化程度(P＜0.01或P＜0.05＝。
該口服液還做了毒理試驗(yàn)，按衛(wèi)生部《中藥新藥研究指南)》中藥三類毒理有關(guān)的要求觀察可博利-2號(hào)口服液長(zhǎng)期給藥的毒性反應(yīng)，劑量設(shè)置相當(dāng)于臨床用量80、40、20倍，給藥三個(gè)月。結(jié)果，血液生化學(xué)指標(biāo)檢查表明，可博利-2號(hào)口服液無(wú)論小、中、大劑量雖能引起一些變化，如大劑量組白蛋白比空白對(duì)照組低，其中小劑量組血清總蛋白和大劑量組球蛋白升高，可博利-2號(hào)口服液中劑量組的尿素氮(BUN)降低無(wú)臨近病理意義。其它指標(biāo)如谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽固醇(THO)、血糖(GLU)、肌肝無(wú)明顯變化，與空白對(duì)照組均無(wú)顯著性差異。病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組1例(1/12)灶性脂肪變，2例(2/12)腦有淀粉樣小體；可博利-2號(hào)口服液中劑量組3例(3/12)有灶性脂肪變，1例(1/12)腦有淀粉樣小體；大劑量有3例(3/12)肝有灶性脂肪變，2例(2/12)腦有淀粉樣小體。上述病理改變正常動(dòng)物都可能出現(xiàn)，給藥組與空白對(duì)照組無(wú)明顯差別。其它器官如心臟、脾、腎、腎上腺、胸腺、胃、小腸、膀胱、睪丸、卵巢等臟器病理組織學(xué)檢查無(wú)異常發(fā)現(xiàn)。連續(xù)給藥三個(gè)月及停藥半個(gè)月，臟器系數(shù)檢查亦無(wú)異常。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)表明，可博利-2號(hào)口服液無(wú)明顯毒性作用，因而認(rèn)為按擬用臨床劑量、給藥途徑和使用療程應(yīng)用可博利-2號(hào)口服液是安全的。
生產(chǎn)工藝流程參見(jiàn)附圖
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實(shí)施例以制備30000mL可博利-2號(hào)口服液為例。
分別稱取黃芪14kg，丹參14kg，枸杞5.5kg，首烏5kg，太子參5kg，冬蟲(chóng)夏草菌絲體2.5kg，卵磷脂210g，蛋黃卵磷脂90g，膽固醇100g，維生素E 500mg。
1、中藥有效成份提取將太子參用滲漉法提取，溶劑為95％乙醇10000mL，滲漉液回收乙醇制得藥液(1)備用，藥渣另具保存；取丹參加入95％25000mL回流提取兩次，每次2小時(shí)，提取液回收乙醇制得藥液(2)備用，藥渣另具保存；取枸杞、首烏、黃芪與太子參藥渣、丹參藥渣加水300000mL煎煮3次，每次2小時(shí)，合并煎液，濃縮約3小時(shí)至稠膏狀(相對(duì)密度約1.30)，加入95％乙醇使含醇量達(dá)60％，放置24小時(shí)，取上清液回收乙醇，得藥液(3)備用。
2、冬蟲(chóng)夏草多糖提取取冬蟲(chóng)夏草菌絲體加水15000mL煎煮3次，每次2小時(shí)，合并煎液，濃縮至15000mL，備用。
3、脂質(zhì)體膜材制備取卵磷脂、蛋黃卵磷脂、膽固醇置于玻璃瓶中，加入400mL氯仿溶解后，加入維生素E，旋轉(zhuǎn)玻璃瓶，使氯仿安全揮發(fā)，制成脂質(zhì)體膜材。
4、可博利-2號(hào)口服液制備將冬蟲(chóng)夏草多糖溶液、藥液(1)、藥液(2)和藥液(3)加入脂質(zhì)體膜材中，放置2小時(shí)后，攪拌10小時(shí)，超聲20分鐘，加磷酸鹽緩沖液至30000mL，灌封，滅菌，檢驗(yàn)，包裝即得。
可博利-2號(hào)口服液包封情況可博利-2號(hào)口服液經(jīng)廣西農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心電子顯微鏡檢驗(yàn)，證實(shí)脂質(zhì)體包封藥物，粒徑100～200mm，且分布均勻。
包封率測(cè)定采用透析測(cè)定包封率，經(jīng)廣西玉林市紅十字會(huì)醫(yī)院藥劑科檢驗(yàn)，脂質(zhì)體對(duì)冬蟲(chóng)夏草多糖的包封率為40％～0％之間。
采用超聲處理后，能使大多數(shù)多室脂質(zhì)體變?yōu)閱问抑|(zhì)體。
我們采用脂質(zhì)體包封冬蟲(chóng)夏草多糖、丹參、黃芪等，商品名可博利-2號(hào)(CPL-2)治療肝炎后肝硬化30例，結(jié)果證明該藥在改善肝功能，增高白蛋白，降低球蛋白，同時(shí)可通過(guò)清除氧自由基，使體內(nèi)MDA降低，從而使肝纖維化(HA)得以改善。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證明這一點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.一種抗肝纖維化的藥物，其特征是選取以下中藥復(fù)方制得冬蟲(chóng)夏草菌絲體2～2.5重量份、黃芪12～15重量份、丹參12～15重量份、首烏4～5重量份、枸杞5～6重量份、太子參5～6重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗肝纖維化藥物，其特征是采用大豆卵磷脂∶蛋黃卵磷脂＝7∶3比例制的脂質(zhì)體包封上方提取液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種抗肝纖維化的藥物，采用中藥復(fù)方冬蟲(chóng)夏草菌絲體、黃芪、丹參、首烏、枸杞、太子參制得，用脂質(zhì)體包封復(fù)方中藥提取液。本制劑可以減少自由基則減少肝纖維化沉積，有利于慢性肝炎恢復(fù)，改善肝功能，通過(guò)清除氧自由基，使體內(nèi)MDA降低，從而使肝纖維化得以改善。有利于抑制肝纖維化的發(fā)展；促進(jìn)肝細(xì)胞的功能，促進(jìn)白蛋白的合成。增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及提高垂體－性腺軸功能。且使用安全。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1456220SQ0311851
公開(kāi)日2003年11月19日 申請(qǐng)日期2003年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月21日
發(fā)明者趙勝利 申請(qǐng)人:趙勝利