專利名稱：20(s)－喜樹堿的藥學(xué)上可接受的鹽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽、它們的衍生物、它們的類似物、它們的互變異構(gòu)體形式、它們的立體異構(gòu)體、它們的多晶型物和包含它們的藥學(xué)上可接受的組合物。
本發(fā)明還涉及一種用于制備上述的藥學(xué)上可接受的鹽、它們的衍生物、它們的類似物、它們的互變異構(gòu)體形式、它們的立體異構(gòu)體、它們的多晶型物，和包含它們的藥學(xué)上可接受的組合物的方法。
由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽用于治療黑素瘤、前列腺、白血病、淋巴瘤、非小肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌或腎癌。
本發(fā)明涉及包含通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽或它們的混合物的藥物組合物。
由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽在穩(wěn)定性和溶解度方面具有明顯的制劑和散裝操作優(yōu)點。
在我們最近授權(quán)的美國專利6,177,439B1中，我們公開和描述了新的式(II)的化合物
其中R1、R2、R3和R4獨立地代表氫或代表選自以下的基團羥基、低級烷氧基、低級烷?；⑾趸?、氰基、鹵素、羧基、氨基、取代的氨基，其中所述氨基被一或二取代，且所述取代基選自低級烷基、低級鹵代烷基、芐基、苯甲酰基、羧基、酰氨基或低級烷基氨基、低級烷基或取代的低級烷基，其中所述的取代基選自羥基、低級鹵代烷基、芐基、低級烷氧基、芐氧基、氰基、硝基、氨基或低級烷基氨基；或者R2和R3一起代表-O(CH2)n-O-，其中n＝1或2，R1、R2、R3和R4中的每一個不相同，除了R1、R2、R3和R4中的每一個為氫；R5代表氫、低級烷基、取代的低級烷基，其中所述取代基選自羥基、鹵素、低級烷氧基、芐氧基、羧基、酰氨基或氨基，其中所述氨基被一取代或二取代，且所述取代基選自低級烷基、低級鹵代烷基、芐基或苯甲?；敯被欢〈鷷r，所述取代基獨立地或與連接的氮原子一起形成式(A)的飽和5或6元雜環(huán)； 其中當式(A)為5元環(huán)時Y代表O、S、NH或CH2，當式(A)為6元環(huán)時Y代表CH2；或者R5代表低級芳烷基，其中所述芳基選自苯基，聯(lián)苯或萘基；而R6代表苯基或芐基，其中所述苯基可以未被取代或被選自以下的一、二或三取代基取代鹵素、低級烷氧基、氰基、硝基、低級烷基、氨基或取代的氨基，其中所述氨基被低級烷基一取代或二取代；環(huán)烷基或環(huán)烷基低級烷基，其中所述環(huán)具有3-7個環(huán)原子，所有的該環(huán)原子為碳；被式(B)的飽和5或6元雜環(huán)取代的低級烷基 當式(B)為5元環(huán)時，X代表CH或N，并且Y代表O、S、NH或CH2，當式(B)為6元環(huán)時，X代表CH或N并且Y代表CH2；取代的苯甲酰基，其中所述取代基選自低級烷基、低級鹵代烷基、鹵素、低級烷氧基、硫代烷氧基、氰基、硝基、酰氨基、氨基或低級烷基氨基；低級鏈烯基；取代的低級烷基或取代的低級鏈烯基，其中所述取代基選自鹵素、羥基、低級烷氧基、芳氧基、硫、硫代烷基、硫代芳基、芳基，其中所述芳基選自苯基、聯(lián)苯基或萘基；雜芳基、其中所述雜芳基選自吡啶基、喹啉、異喹啉、吲哚、吡咯、呋喃、苯并呋喃、噻吩、噻唑烷或咪唑；羧基、氰基、硝基酰氨基或氨基，其中所述氨基可以未被取代或被一或二取代，其中所述取代基選自羥基、低級烷基、低級鹵代烷基、芐基、苯甲?；?、低級烷氧基、羧基、酰氨基或低級烷基氨基，當所述氨基被二取代時，取代基獨立地或與連接的氮原子一起形成式(A)的飽和5元或6元雜環(huán)基團， 當式(A)為5元環(huán)時，Y代表O、S、NH或CH2，當式(A)為6元環(huán)時，Y代表CH2；或者R6代表取代的低級烷?；?，其中所述取代基選自鹵素、低級烷氧基、芳氧基、硫、硫代烷基、硫代芳基、芳基，其中所述芳基選自苯基、聯(lián)苯基或萘基；雜芳基，其中所述雜芳基選自吡啶基、喹啉、異喹啉、吲哚、吡咯、呋喃、苯并呋喃、噻吩、噻唑烷或咪唑；羧基、氰基、硝基、酰氨基或氨基，其中所述氨基未被取代或被一或二取代，其中所述取代基選自羥基、低級烷基、低級鹵代烷基、芐基、苯甲?；?、低級烷氧基、羧基、酰氨基、氨基或低級烷基氨基，當所述的氨基被二取代時，所述取代基獨立地或與連接的氮原子一起形成式(A)的飽和5或6元雜環(huán)基團， 當式(A)為5元環(huán)時，Y代表O、S、NH或CH2；當式(A)代表6元環(huán)時，Y代表CH2；而當R1代表羥基、氨基或硝基時，R2、R3、R4和R5代表氫，并且R6代表氫、低級烷基、烷?；虮郊柞；?。
背景技術(shù)：
已報道幾種密切相關(guān)的喜樹堿衍生物和它們的類似物用于治療癌癥。現(xiàn)有技術(shù)中描述的這些化合物中的一些如下列(i)EP公開0074256A1、US專利4473692&4545880公開式(III)的化合物 其中R1代表氫原子、烷基、羥基、烷氧基或酰氧基；R2代表氫原子、烷基、芳烷基、羥基甲基、羧基甲基或酰氧基甲基，而R3代表基團-XR′(其中R′為氫原子、烷基或?；?，并且X為氧原子或硫原子)、硝基、氨基、烷基氨基、酰基氨基或鹵原子，附帶條件是當R1和R2都為氫原子時，R3不應(yīng)為羥基、甲氧基或乙酰氧基。
這些化合物的一個實例如式(IIIa)所示 (ii)GB專利2056973公開了通過將任選在X或Y處引入取代基然后對這些取代基和/或其它取代基進行修飾而制備式(IV)的化合物及其水溶性堿金屬鹽 其中X為H、CH2OH、COOH、烷基、芳烷基或基團CH2OR1或CH2OR2，其中R1為烷基或酰基，并且R2為低級烷基，Y為H、OH或基團OR3，其中R3為低級烷基或?；?，而Z為H或酰基，其中排除某些組合。
這些化合物一個實例如式(IVa)所示。
(iii)歐洲公開EP 321122公開了式(III)的拓撲替康(topotecan)，它已上市， 發(fā)明目的因此本發(fā)明的主要目的是提供具有良好穩(wěn)定性和溶解度的由通式(I)的20(S)-喜樹堿衍生物形成的藥學(xué)上可接受的鹽、它們的類似物、它們的互變異構(gòu)體形式、它們的立體異構(gòu)體、它們的多晶型物和包含它們或它們的混合物的藥學(xué)上可接受的組合物，這些物質(zhì)可以用于治療黑素瘤、前列腺、白血病、淋巴瘤、非小肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、腎癌或其它耐受藥物如阿霉素(Adriomycin)、拓撲替康、伊立替康、順鉑(Cisplatinate)等的癌，具有較好的功效、效力和較低的毒性。
本發(fā)明的另一目的是提供一種用于制備由以上定義的通式(I)的20(S)-喜樹堿衍生物形成的藥學(xué)上可接受的鹽、它們的類似物、它們的互變異構(gòu)體形式、它們的立體異構(gòu)體和它們的多晶型物的方法。
本發(fā)明的另一目的是提供包含由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽、它們的類似物、它們的衍生物、它們的互變異構(gòu)體、它們的立體異構(gòu)體、它們的多晶型物或混合物并組合適宜的載體、溶劑、稀釋劑和其它通常用于制備這些組合物的介質(zhì)的藥物組合物。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽 它們的衍生物、它們的類似物、它們的互變異構(gòu)體形式、它們的立體異構(gòu)體、它們的多晶型物和藥學(xué)上可接受的組合物，其中R1代表取代的(C1-C6)烷基，其中所述取代基選自一(C1-C6)烷基氨基或二(C1-C6)烷基氨基；R2代表羥基；R3、R4和R5代表氫；而R6代表氫、取代的(C1-C6)烷基，其中所述取代基選自鹵素，羥基或(C1-C6)烷氧基。
R1代表的適宜的基團選自取代的(C1-C6)烷基如取代的甲基、取代的乙基、取代的正丙基、取代的異丙基等；其中所述取代基選自(C1-C6)烷基氨基如甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、異丙基氨基等或二(C1-C6)烷基氨基如二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基等。
R6代表的適宜的基團選自氫或取代的(C1-C6)烷基如取代的甲基、取代的乙基、取代的正丙基、取代的異丙基等；其中所述取代基選自鹵素原子，如氟、氯、溴、碘；羥基或(C1-C6)烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基等。
根據(jù)本發(fā)明的特別有用的化合物包括10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-[20(S)，5(R)]-喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-[20(S)，5(S)]-喜樹堿鹽酸鹽；
10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-[20(S)，5(RS)]-喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2’-羥基乙氧基)-[20(S)，5(R)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-羥基乙氧基)-[20(S)，5(S)]-喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-羥基乙氧基)-[20(S)，5(RS)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-甲氧基乙氧基)-[20(S)，5(R)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-甲氧基乙氧基)-[20(S)，5(S)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-甲氧基乙氧基)-[20(S)，5(RS)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)-[20(S)，5(R)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)-[20(S)，5(S)]喜樹堿鹽酸鹽；和10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)-[20(S)，5(RS)]喜樹堿鹽酸鹽。
本發(fā)明提供一種由通式(I)的化合物形成藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，所述方法包括使式(II)的化合物與化學(xué)計量的適宜的酸，在溶劑存在下，在20-100℃的溫度下反應(yīng)2-9小時的時間， 其中所有的符號如前面定義。
所用的式(II)的化合物可以是光學(xué)純的形式或外消旋形式，并可以由美國專利6,177,439 B1報道的方法制備。
所述藥學(xué)上可接受的鹽可以通過式(I)的化合物與以下物質(zhì)反應(yīng)而制備選自鹽酸或氫溴酸的氫鹵酸、乙酸、硫酸、硝酸、磷酸、硼酸、高氯酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸，甲磺酸、苯甲酸、抗壞血酸、水楊酸、苯磺酸等。所用的溶劑可以選自酮如丙酮、二乙基酮、甲基乙基酮或它們的混合物、甲醇、乙醇、正己烷、乙酸乙酯、苯、二乙基胺、甲醛、氯仿、二氯甲烷或它們的混合物。
構(gòu)成本發(fā)明部分的由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽的不同的多晶型物可以通過在不同的條件下將由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽結(jié)晶而制備。例如，將常用的不同溶劑或它們的混合物用于結(jié)晶；在不同的溫度下結(jié)晶；不同的冷卻方式；在結(jié)晶期間從快速結(jié)晶變化到緩慢結(jié)晶。還可以通過加熱或熔解化合物然后逐漸或快速冷卻而得到多晶型物。多晶型物的存在可以通過固體探針NMR光譜、IR光譜、差示掃描量熱法(DSC)、粉末X射線衍射或這種其它技術(shù)確定。
構(gòu)成本發(fā)明部分的化合物的立體異構(gòu)體可以采用常規(guī)的拆分立體異構(gòu)體混合物的方法，使用單一非對映異構(gòu)體形式的由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽而制備。Jaques等人，在″Enantiomers，Racemates和Resolution″(Wiley Interscience，1981)中編輯了常用的方法。
本發(fā)明提供一種包含由以上定義的通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽所形成的鹽、它們的衍生物、它們的類似物、它們的互變異構(gòu)體形式、它們的立體異構(gòu)體、它們的多晶型物、它們的藥學(xué)上可接受的溶劑化物并組合常規(guī)的藥用載體、稀釋劑等的藥物組合物，所述組合物可用于治療白血病、淋巴瘤、非小肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、腎癌或其它耐受藥物如阿霉素、拓撲替康、伊立替康、順鉑(Cisplatinate)等的癌。
藥物組合物可以是常用的形式，例如片劑、膠囊、粉末劑、糖漿、溶液、懸浮液等，可以包含調(diào)味劑、甜味劑等，處在適宜的固體或液體載體或稀釋劑中，或者在適宜的無菌介質(zhì)中形成注射溶液或懸浮液。這種組合物通常包含1-20wt％，優(yōu)選1-10wt％的活性化合物，組合物的剩余部分為藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或溶劑。
適宜的藥學(xué)上可接受的載體包括固體填充劑或稀釋劑和無菌水溶液或有機溶液。這種藥物組合物中的活性成分將以足以提供在上述范圍內(nèi)的目標劑量的數(shù)量而存在。因此，對于口服給藥，活性成分可以與適宜的固體或液體載體或稀釋劑組合形成膠囊、片劑、粉末劑、糖漿、溶液、懸浮液等。如果需要的話，藥物組合物可以包含附加的組分如調(diào)味劑、甜味劑、賦形劑等。對于腸胃外給藥，可以將活性成分與無菌含水或有機介質(zhì)組合形成注射溶液或懸浮液。例如，可以使用芝麻或花生油、丙二醇水溶液等溶液，以及化合物的水溶性藥學(xué)上可接受的酸加成鹽或與堿形成的鹽的水溶液。還可以將含有溶于聚羥基化蓖麻油的活性成分的水溶液用于注射液。然后可以將以這種方式制備的注射液進行靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下或肌內(nèi)給藥，其中對人優(yōu)選肌內(nèi)給藥。
對于鼻給藥，所述制劑可以包含溶解或懸浮在液體載體，特別是含水載體中的本發(fā)明的活性成分，用于氣溶膠應(yīng)用。載體可以包含添加劑如穩(wěn)定劑如丙二醇、表面活性劑、吸收增強劑如卵磷脂(磷脂酰膽堿)或環(huán)糊精或防腐劑如對羥基苯甲酸酯類。
含有滑石和/或糖類載體粘合劑等的片劑、糖衣丸或膠囊特別適于任何口服應(yīng)用。優(yōu)選片劑、糖衣丸或膠囊的載體包括乳糖、玉米淀粉和/和馬鈴薯淀粉。在可以使用甜味賦形劑的情況下可以使用糖漿或酏劑。
如以上定義的由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽在臨床上通過口、鼻、肺、透皮或腸胃外、直腸、埋植、皮下、靜脈內(nèi)、尿道內(nèi)、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、眼溶液或軟膏施用于哺乳動物、包括人。優(yōu)選口服途徑給藥，它更為方便并避免可能的注射疼痛和刺激。但是，在患者由于疾病或其它異常而不能吞咽藥物或者在口服之后吸收受損的情況下，進行腸胃外給藥是必需的。通過任一途徑，劑量范圍為大約0.01至大約100mg/kg患者體重/天，或者優(yōu)選大約0.01至大約30mg/kg體重/天，以單一劑量或作為分開的劑量給藥。但是，受治療的個體受試者的最佳劑量將由負責治療的人來確定，通常最初以較小的劑量給藥，然后增大以確定最合適的劑量。
本發(fā)明的化合物成功地在黑素瘤、前列腺、白血病、淋巴瘤、非小肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、腎癌或其它耐受藥物如阿霉素(Adriomycin)、拓撲替康、伊立替康、順鉑(Cisplatinate)等的癌癥的治療中施用。這由體外和體內(nèi)動物實驗來證明。
在以下提供的實施例中詳細地解釋本發(fā)明，這些實施例僅以例示的方式提供，因而不應(yīng)將其理解為對本發(fā)明保護范圍的限定。
制備110-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-20(S)-喜樹堿 向溶于乙醇(20ml)的10-羥基-9-N，N-二甲基氨基乙基-20(S)-喜樹堿(200mg)[根據(jù)以下所述的方法制備(1)J.L.Wood等人，inJ.Org Chem.，5739-5740(1995)；(2)A.Pochini等人，inSynthesis，906(1983)]和氯化鐵(200mg)的混合物中滴加硫酸(2ml)，并在80℃下加熱20小時。在真空下除去過量的酸和乙醇，用碳酸鉀溶液中和殘余物，并用乙酸乙酯萃取。用水、鹽水洗滌有機層，并用無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑得到固體物質(zhì)。通過硅膠柱色譜法，使用甲醇-氯仿作為洗脫劑純化固體殘余物得到10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-乙氧基-20(S)-喜樹堿(160mg)，為黃色粉末。
將10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-乙氧基-20(S)-喜樹堿(160mg)溶于乙醇(10ml)，并用50％HCl(10ml)處理。將溶液加熱回流20小時。在反應(yīng)結(jié)束時，除去過量的水和乙醇作為共沸混合物，用碳酸鉀溶液中和殘余物，并用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機層，并用無水硫酸鈉干燥。在通過用乙酸乙酯-氯仿作為洗脫劑進行硅膠柱色譜法純化之后濃縮溶劑得到10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-20(S)喜樹堿(100mg)，mp245℃。
1H-NMR(DMSO)δ11.7(s，可交換D2O，1H)，10.0(s，可交換D2O，1H)，8.95(s，1H)，8.10(d，J＝10.0Hz，1H)，7.70(d，J＝10.0Hz，1H)，7.20(s，1H)，6.95(s，0.5H)，6.85(s，1H)，5.40(s，2H)，4.70(s，2H)，2.40(s，6H)，1.95-1.80(m，2H)，0.95-0.75(m，3H)。
制備210-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-羥基乙氧基)-20(S)喜樹堿 向溶于乙二醇(8ml)的10-羥基-9-N，N-二甲基氨基乙基-20(S)-喜樹堿(50mg)[根據(jù)以下所述的方法制備(1)J.L.Wood等人，inJ.Org Chem.，5739-5740(1995)；(2)A.Pochini等人，inSynthesis，906(1983)]和氯化鐵(50mg)的混合物中滴加硫酸(0.6ml)，并在90℃下加熱10小時。在真空下除去過量的酸和乙二醇，用碳酸鉀溶液中和殘余物，并用5％甲醇-乙酸乙酯萃取。用水、鹽水洗滌有機層，并用無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑得到固體物質(zhì)。通過硅膠柱色譜法，使用甲醇-氯仿作為洗脫劑純化固體殘余物得到10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2’-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿(25mg)，為黃色粉末。mp220℃。
1H-NMR(DMSO)δ11.7(s，可交換D2O，1H)，9.90(s，可交換D2O，1H)，8.85(s，1H)，8.20(d，J＝10.0Hz，1H)，7.70(d，J＝10.0Hz，1H)，7.20(s，1H)，6.95(s，0.5H)6.85(s，0.5H)，5.40(s，2H)，4.75(s，2H)，3.90-3.70(m，4H)，2.80(s，6H)，1.95-1.75(m，2H)，0.95-0.75(m，3H)。
制備310-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)-20(S)-喜樹堿 向懸浮在二氯甲烷(10ml)中的10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-20(S)喜樹堿(50mg)(在制備1中得到)和硫酸(0.1ml)的混合物中加入2-氟乙醇(0.2ml)，并將混合物在回流溫度下加熱12小時。用水終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。用水、鹽水洗滌有機層，并濃縮至干。殘余物用丙酮-氯仿作為洗脫劑進行硅膠柱色譜法純化之后得到10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)-20(S)-喜樹堿(25mg).mp200℃。
1H-NMR(DMSO)δ8.97(s，1H)，8.18(d，J＝9.4Hz，1H)，7.78(d，J＝9.4Hz，1H)，7.19-7.17(s，1H)，6.94(s，1H)，6.88(s，1H)，5.40(br，s，2H)，4.80(br，s，2H)，4.70(m，2H)，4.20(m，2H)，2.80(br，s，3H)，1.87(br，m，2H)，0.88(br，m，3H)。
實施例1
10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-20(S)-喜樹堿鹽酸鹽 將10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-20(S)喜樹堿(50mg)(在制備1中得到)、0.4N HCl水溶液(5ml)的混合物加熱并攪拌4小時。然后將乙酸乙酯(40ml)分3批傾入反應(yīng)混合物中。每次回流約10分鐘。傾析有機層。用10％丙酮氯仿洗滌。最后在約80℃下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中將水層蒸發(fā)為苯共沸物。用乙酸乙酯洗滌所得的固體并干燥。
1H-NMR(DMSO，200MHz)δ11.78(s，1H)，10.0(bs，1H)，8.9(s，1H)，8.1(dd，2H)，7.18(d，1H)，6.9(d，1H)，5.4(s，2H)，4.7(s，2H)，2.8(d，6H)，1.8(bs，2H)，0.9(bs，3H)。
實施例210-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-羥基乙氧基)-20(S)喜樹堿鹽酸鹽 將10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-羥基乙氧基)20(S)-喜樹堿(60mg)(在制備2中得到)和0.4 N HCl水溶液(6ml)的混合物加熱并攪拌4小時。然后將乙酸乙酯(50ml)分3批傾入反應(yīng)混合物中。每次回流約10分鐘。傾析有機層。用10％丙酮氯仿洗滌。最后在約80℃下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中將水層蒸發(fā)為苯共沸物。用乙酸乙酯洗滌所得的固體并干燥。
1H-NMR(DMSO，200MHz)δ8.63(s，1H)，7.95(d，1H)，7.4(m，2H)，6.9(d，1H)，5.4(dd，2H)，4.3-3.3(bs，8H)，2.5(s，6H)，1.9(q，2H)，0.9(t，3H)。
實施例310-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)-20(S)-喜樹堿鹽酸鹽 將10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)20(S)-喜樹堿(5g)溶于0.1N鹽酸(120ml)，并過濾除去不溶物質(zhì)。連續(xù)地用乙酸乙酯(25ml×4)洗滌濾液，并凍干水溶液。凍干后，在室溫下和真空下將所得的產(chǎn)物干燥16小時，并用乙醇(50ml)和己烷(100ml)結(jié)晶。將產(chǎn)物過濾并在真空和室溫下干燥24小時。產(chǎn)率4.5g。
1H-NMR(DMSO，200MHz)δ8.97(s，1H)，8.18(d，J＝9.4Hz，1H)，7.78(d，J＝9.4Hz，1H)，7.19-7.17(s，1H)，6.94(s，1H)，6.88(s，1H)，5.40(br，s，2H)，4.80(br，s，2H)，4.70(m，2H)，4.20(m，2H)，2.80(br，s，3H)，1.87(br，m，2H)，0.88(br，m，3H)。
抗癌活性本發(fā)明制備的化合物對不同的人腫瘤細胞系表現(xiàn)出非常好的體外抗癌活性。
針對代表8種不同類型的癌的細胞系組篩選每種試驗化合物。在典型的方法中，將1×104細胞接種到在100μL體積的含有抗菌素和10％FCS的RPMI 1640培養(yǎng)基中的96孔平板的每孔。
在37℃下，在CO2存在下培養(yǎng)平板。24小時后，在5份范圍為100至0.01μM的10倍稀釋液中評價試驗化合物。向每個試驗孔中加入100μL試驗化合物溶液，將含有載體的培養(yǎng)基加到對照孔中，并進一步培養(yǎng)平板。培養(yǎng)48小時后，通過硫羅丹明B(sulforhodamine B)法終止平板培養(yǎng)。
然后通過自動分光光度平板讀數(shù)器，在515nm的波長下讀取與蛋白質(zhì)質(zhì)量成比例的光密度。將讀數(shù)轉(zhuǎn)入微計算機，并計算平均50％生長抑制(GI50)和平均總生長抑制。本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出抗癌活性，這可以從下表1提供的數(shù)據(jù)看出
表1對不同細胞系的生長抑制(GI50)和總生長抑制(TGI)值(實施例1)
表2對不同細胞系的生長抑制(GI50)和總生長抑制(TGI)值(實施例2)
表3對不同細胞系的生長抑制(GI50)和總生長抑制(TGI)值(實施例3)
HPLC法測定的溶解度室溫下將過量的化合物在pH為5.0的0.5ml 0.1M乙酸鈉緩沖液中浸泡24小時。將溶液過濾通過0.45微米PVDF注射過濾器(Gelman Sciences)。將濾液以不同體積(10&20μl)注射到HPLC。記錄色譜圖。由校準曲線外推所記錄的反應(yīng)，并計算化合物的溶解度(J.Med.Chem.，1995，38，400)。
表4HPLC法測定的溶解度
單一劑量口服藥代動力學(xué)研究動物將雄性瑞士白化病小鼠(20-30g)用于實驗，將動物保持在標準實驗室條件下，并任意自由地獲取飼料和水。實驗前使動物禁食過夜(約15小時)，在此期間它們?nèi)我庾杂傻孬@取水。
制劑和給藥準確稱取等于10mg的數(shù)量的藥物，將其轉(zhuǎn)移到清潔的研缽中，并研磨得到細粉。向其中加入500μl DMSO(10％)得到澄清溶液。向其中加入4.5ml羧甲基纖維素鈉(鈉CMC)以組成5ml的體積。
以動物體重為基準，通過口管飼法施用適宜體積(以克為單體的體重×10＝待給藥劑量的μl數(shù))的制備溶液。
動物實驗服藥后，在指定的時間點(0.5、1、2，3、5，8和12h)，從眼眶后叢中收集100μl血液至0.5ml含有EDTA(5μl 200mg/ml在MilliQ水中的溶液)的eppendorff管中。以12,800rpm將血液離心2分鐘，分離血漿，并立即不遲延地取血分析，以評價內(nèi)酯和羧酸酯形式的化合物。
生物分析方法將50μl血漿轉(zhuǎn)移到清潔的2ml微離心管。向此管中加入冰冷的甲醇(450μl)，并攪拌混合15秒以萃取化合物。在12,800rpm的干燥離心管中將這些內(nèi)容物離心2分鐘。將澄清的上清液分離至保持在4℃下的300μl自動取樣器小瓶中，并將20μl的此液體注射到HPLC柱中。
HPLC條件HPLC系統(tǒng)(Shimadzu)由系統(tǒng)控制器(SCL-10AVP)、等度泵(Isocratic pump)(LC-10ATVP)、自動取樣器(SIL-10ADVP)、熒光檢測器(RF-10AXL)組成，而25℃下的柱式烘箱(CTO-10ASVP)由Class-VP軟件控制。用以1.0ml/分流速泵出的流動相[1％TEAA(pH＝5.5)∶乙腈∶MeOH＝80∶15∶5)，通過柱(Supelcosil-LC318，5μ，4.6×250mm，300°A)洗脫樣品，并用設(shè)定在Ex.370nm/Em.537nm下的熒光檢測器檢測洗脫液。大約的RT為羧酸酯(CA1＝4.1分，CA2＝4.8分)和內(nèi)酯(LA1＝7.9分，LA2＝11.6分)。
濃度的校準和確定關(guān)于藥物濃度的確定，分別繪制關(guān)于羧酸酯和內(nèi)酯形式的藥物與內(nèi)標的峰面積比率對濃度(范圍0.05-10μg/ml)的圖，并利用軟件″Sigma Plot″(Jandel Scientific version，2.0，USA)應(yīng)用線性回歸。得到相關(guān)系數(shù)(r2)為0.99或更好。
計算和數(shù)據(jù)分析分別通過非隔室模型分析計算羧酸酯和內(nèi)酯形式的藥代動力學(xué)參數(shù)。由原始數(shù)據(jù)直接得到最大血漿濃度(Cmax)和對應(yīng)的時間(Tmax)。通過線性和對數(shù)線性梯形總和得到直至最后可計量時間點的血漿濃度對時間曲線下的面積AUC(o-t)。通過加合C最后/Kel而將AUC(0-t)外推至無窮大(即AUC(0-∞))，其中C最后代表最后可測時間濃度，而Kel代表表觀最終速率常數(shù)。Kel通過對log-最終階段的藥物轉(zhuǎn)化濃度進行線性回歸而計算。最終消除階段的半衰期利用關(guān)系式t1/2＝0.693/Kel得到。
表4藥代動力學(xué)參數(shù)(實施例3)
權(quán)利要求
1.由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽、 它們的衍生物、它們的類似物、它們的互變異構(gòu)體形式、它們的立體異構(gòu)體、它們的多晶型物和它們的藥物組合物，其中R1代表取代的(C1-C6)烷基，其中所述取代基選自一(C1-C6)烷基氨基或二(C1-C6)烷基氨基；R2代表羥基；R3、R4和R5代表氫；和R6代表氫、取代的(C1-C6)烷基，其中所述取代基選自鹵素、羥基或(C1-C6)烷氧基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1代表取代的(C1-C6)烷基，其中所述取代基選自二甲基氨基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2的藥學(xué)上可接受的鹽，所述的鹽通過用選自以下的酸處理通式(I)的化合物而獲得選自鹽酸或氫溴酸的氫鹵酸，乙酸，硫酸，硝酸，磷酸，硼酸，高氯酸，酒石酸，馬來酸，檸檬酸，甲磺酸，苯甲酸，抗壞血酸，水楊酸或苯磺酸。
4.特別有用的本發(fā)明的化合物，所述化合物包括10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-[20(S)，5(R)]-喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-[20(S)，5(S)]-喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-羥基-[20(S)，5(RS)]-喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-羥基乙氧基)-[20(S)，5(R)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-羥基乙氧基)-[20(S)，5(S)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-羥基乙氧基)-[20(S)，5(RS)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-甲氧基乙氧基)-[20(S)，5(R)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-甲氧基乙氧基)-[20(S)，5(S)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-甲氧基乙氧基)-[20(S)，5(RS)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)-[20(S)，5(R)]喜樹堿鹽酸鹽；10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)-[20(S)，5(S)]喜樹堿鹽酸鹽，和10-羥基-9-N，N-二甲基氨基甲基-5-(2′-氟代乙氧基)-[20(S)，5(RS)]喜樹堿鹽酸鹽。
5.一種由通式(I)的化合物形成藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，所述方法包括使式(II)的化合物與化學(xué)計量的適宜的酸，在溶劑存在下，在20-100℃的溫度下反應(yīng)2-9小時的時間， 其中所有的符號如前面定義。
6.一種藥物組合物，所述組合物包含有效量的如權(quán)利要求1和4定義的由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽 以及藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或溶劑化物。
7.如權(quán)利要求6所要求的藥物組合物，所述組合物為片劑、膠囊、粉末劑、糖漿、溶液或懸浮液的形式。
8.一種治療黑素瘤、前列腺、白血病、淋巴瘤、非小肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌或腎癌的方法，所述方法包括給需要的患者施用有效量的如權(quán)利要求1和4所要求的由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽。
9.一種藥物組合物，所述組合物包含有效量的如權(quán)利要求1和4定義的由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或溶劑化物。
10.如權(quán)利要求9定義的藥物組合物，所述組合物為片劑、膠囊、粉末劑、糖漿、溶液或懸浮液的形式。
全文摘要
本發(fā)明涉及由通式(I)的化合物形成的藥學(xué)上可接受的鹽、它們的衍生物、它們的類似物、它們的互變異構(gòu)體形式、它們的立體異構(gòu)體、它們的多晶型物和包含它們的藥學(xué)上可接受的組合物。本發(fā)明還涉及一種用于制備上述藥學(xué)上可接受的鹽、它們的衍生物、它們的類似物、它們的互變異構(gòu)體形式、它們的立體異構(gòu)體、它們的多晶型物和包含它們的藥學(xué)上可接受的組合物的方法。
文檔編號A61K9/48GK1575292SQ02821084
公開日2005年2月2日 申請日期2002年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月25日
發(fā)明者S·波托庫奇, S·杜維里, S·拉杰古帕爾 申請人:雷迪實驗室有限公司