專利名稱：測定嘧啶代謝能力的制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制劑，該制劑能有效用來確定和評價(jià)單個(gè)被試者嘧啶代謝能力，即嘧啶代謝紊亂的存在、不存在和程度等。更具體而言，本發(fā)明涉及一種制劑，通過使用呼氣等，該制劑能容易地確定單個(gè)被試者代謝不同的氟尿嘧啶藥物，如5-氟尿嘧啶等的能力。此外，本發(fā)明涉及這種制劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
5-氟尿嘧啶(下文有時(shí)稱作“5-FU”)及其衍生物(如替加氟(tegafur)、卡莫氟(carmofur)和去氧氟尿苷(doxifluridine))是氟尿嘧啶藥物，這些藥物目前被當(dāng)作抗癌藥物廣泛地使用。
在肝中，5-FU的降解和失活主要是通過嘧啶代謝途徑中的一系列嘧啶代謝酶的作用。具體而言，如

圖1所示，施加到體內(nèi)的5-FU首先在嘧啶代謝途徑中的第一個(gè)酶，二氫嘧啶脫氫酶作用下被代謝成5-氟-二氫尿嘧啶(下文有時(shí)稱作“FDHU”)；然后在嘧啶代謝途徑中的第二個(gè)酶，二氫嘧啶酶(下文有時(shí)稱作“DHPase”)的作用下被代謝成氟-β-脲基丙酸(下文有時(shí)稱作“F-β-UPA”)；緊接著，在嘧啶代謝途徑的第三個(gè)酶，脲基丙酸酶(下文有時(shí)稱作“β-UPase”)的作用下被代謝成氟-β-丙氨酸(下文有時(shí)稱作F-β-丙氨酸)和CO2(代謝終產(chǎn)物)。
據(jù)報(bào)道，施加到體內(nèi)的大約80％的5-FU是在嘧啶代謝途徑中降解的(癌癥(Phila)，68，499-501，1991)。而DPD(第一個(gè)酶)是這個(gè)代謝途徑中的限速酶(Cancer Res.(癌癥研究)，472203-2206，1987)。因此，對DPP缺失或DPP活性降低的被試者施用5-FU或其他氟尿嘧啶藥物，可能會(huì)導(dǎo)致血液中氟尿嘧啶藥物濃度異常升高，從而引起嚴(yán)重的副作用(如骨髓抑制和消化癥狀等)，原因是氟尿嘧啶沒有被正常代謝(Cancer Inves.(癌癥調(diào)查)，11(2)239-240，1993)。此外，已知DPD活性在不同個(gè)體中有顯著變化，并且在不同性別中也不同(J.Clin.Oncol.(臨床腫瘤學(xué)雜志)，122248-2253，1994；Adv.Exp.Med.Biol.(實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)生物學(xué)進(jìn)展)，431811-816，1998)。
因此，在歐洲和美國，為了預(yù)防5-FU和其他氟尿嘧啶藥物的副作用，急需對每一個(gè)被試者嘧啶代謝紊亂的存在、不存在及程度進(jìn)行診斷，尤其是對由DPD缺陷和DPD活性降低引起的嘧啶代謝紊亂進(jìn)行診斷。
已經(jīng)建立了一種診斷DPD缺陷的方法，其中外周血單核細(xì)胞的DPD活性被確定(Cancer Res.(癌癥研究)，535433-5438，1993；Phermacogenetics，4301-306，1994；J.Inherited.Metab.Dis.(遺傳性代謝疾病雜志)16574-576，1993)。然而，這種方法并不適合診斷癌癥患者，這些患者是待施用氟尿嘧啶藥物的被試者，因?yàn)檫@種方法涉及使用放射性物質(zhì)及復(fù)雜的預(yù)處理。
最近在遺傳分析技術(shù)上的進(jìn)展促進(jìn)了DPD基因缺失的診斷。此外，又有許多關(guān)于DPD基因多態(tài)性的報(bào)道，而DPD基因多態(tài)性會(huì)引起DPD活性下降。然而，DPD基因多態(tài)性和DPD活性之間的關(guān)系還沒被闡明。這樣，在遺傳信息的基礎(chǔ)上，很難評價(jià)DPD活性是存在還是不存在，尤其是DPD活性的程度。
在這種情況下，即氟尿嘧啶藥物在抗癌治療中被證明是有效的，并且其作用被許多能抑制DPD酶(氟尿嘧啶藥物的代謝酶)活性的藥物所增強(qiáng)的情況下，為了預(yù)測或防止氟尿嘧啶藥物治療所帶來的副作用，需要開發(fā)一種診斷被試者嘧啶代謝能力的簡單方法，換句話說，提前診斷嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或紊亂的程度。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述情況，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種制劑，這種制劑能輕易地確定和評價(jià)單個(gè)被試者中的嘧啶代謝能力。具體而言，第一個(gè)目的是提供一種制劑，這種制劑能用來確定單個(gè)被試者的嘧啶代謝行為，并能容易地評價(jià)代謝能力，即被試者中嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或者紊亂的程度。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種方法，這種方法能確定單個(gè)被試者中嘧啶代謝行為以及輕易地評估代謝能力，即被試者中嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或紊亂的程度。
本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種方法，這種方法用來篩選適合施用氟尿嘧啶藥物的被試者。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，被試者的嘧啶代謝能力，即嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或代謝紊亂的程度，能通過給被試者施用一種同位素標(biāo)記的嘧啶化合物以及測定呼氣中同位素標(biāo)記的CO2的排出行為(包括排出量、排出速率以及隨著時(shí)間的流逝，數(shù)量和速率的變化)來輕易地加以評估。根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人確信利用上述同位素標(biāo)記的嘧啶化合物，根據(jù)單個(gè)被試者中嘧啶代謝行為的確定結(jié)果，通過排除一些被試者，這些被試者由于極高的嘧啶代謝能力而沒有出現(xiàn)預(yù)料的氟尿嘧啶藥物治療效果，以及排除那些由于極低的氟尿嘧啶代謝能力而出現(xiàn)令人害怕的副作用的被試者，有可能篩選出適合施用氟尿嘧啶藥物，如5-FU等的被試者。此外，根據(jù)這些被試者中氟尿嘧啶代謝能力，有可能評價(jià)氟尿嘧啶藥物的清除率，從而給單個(gè)被試者建立一個(gè)更有效的氟尿嘧啶藥物的劑量用法(配方、劑量、劑量數(shù)等)。本發(fā)明就是基于這些發(fā)現(xiàn)而完成的。
本發(fā)明提供一些制劑，這些制劑用來確定嘧啶代謝能力，如下列1-8條所描述1.一種確定嘧啶代謝能力的制劑，包含作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物，在這些化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被同位素標(biāo)記。
1-1.一種確定嘧啶代謝能力的制劑，包含作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物，在這些化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被同位素標(biāo)記，以及包含可藥用的載體。
2，根據(jù)第1條所述的制劑，其中嘧啶化合物是嘧啶代謝酶，二氫嘧啶脫氫酶的底物或這種底物的前體。
3.根據(jù)第1條所述的制劑，其中嘧啶代謝化合物是二氫嘧啶酶和脲基丙酸酶的底物，這兩種酶的任一個(gè)都是嘧啶代謝酶。
4.根據(jù)第1或第2條所述的制劑，其中嘧啶化合物是選自尿嘧啶、5-氟尿嘧啶和胸腺嘧啶中的至少一種。
5.根據(jù)第1或第2條所述的制劑，其中嘧啶化合物是選自去氧氟尿苷、替加氟和卡莫氟中的至少一種二氫嘧啶脫氫酶的底物前體。
6.根據(jù)第1或第3條所述的制劑，其中嘧啶代謝化合物是選自二氫尿嘧啶、5-氟二氫尿嘧啶、二氫胸腺嘧啶、β-脲基丙酸、氟-β-脲基丙酸以及β-脲基異丁酸中的至少一種。
7.根據(jù)第1-6條中任一條所述的的制劑，包含作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物，在這些化合物中，碳和氧中的至少一種被同位素標(biāo)記，這種制劑在給被試者施用后能產(chǎn)生同位素標(biāo)記的CO2。
8.根據(jù)第1-7條中任一條所述的制劑，其中同位素是選自13C、14C、18O和15N中的至少一種。
通過測定被試者嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的代謝行為(這些行為在下文有時(shí)稱作“嘧啶代謝行為”)，尤其是這種化合物的代謝物的排出行為(包括排出量，排出速率以及隨著時(shí)間的流逝，數(shù)量和速率的變化)，根據(jù)本發(fā)明確定嘧啶代謝能力的制劑，能被用來確定和評價(jià)單個(gè)被試者的嘧啶代謝能力。因此，本發(fā)明用來確定嘧啶代謝能力的制劑也能被表達(dá)成確定嘧啶代謝行為的制劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了確定嘧啶代謝能力的方法，如下列9～10-1條所描述9.一種確定嘧啶代謝能力的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1-8條中任一條所述的制劑，然后檢測從身體排出的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為。
9-1.根據(jù)第9條所述的確定嘧啶代謝能力的方法，其中同位素標(biāo)記的代謝產(chǎn)物選自同位素標(biāo)記的CO2、同位素標(biāo)記的β-丙氨酸、同位素標(biāo)記的氟-β-丙氨酸以及同位素標(biāo)記的β-氨基異丁酸中的至少一種。
10.一種確定嘧啶代謝能力的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1-8條中任一條所述的制劑，然后檢測呼氣中同位素標(biāo)記的CO2的排出行為。
10-1.根據(jù)第10條所述的方法，其中第4條的制劑被用作確定嘧啶代謝能力的制劑。
上述這些確定嘧啶代謝能力的方法也能被表達(dá)成確定嘧啶代謝行為的方法，因?yàn)檫@些方法是通過檢測嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的排出行為(嘧啶代謝行為)而實(shí)施的。
本發(fā)明也提供了用來評價(jià)嘧啶代謝能力的方法，如下列第11～12-2條所描述。
11.一種評價(jià)被試者中嘧啶代謝能力的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1～8條中任一條所述的制劑，檢測從身體排出的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，然后評價(jià)從被試者中獲得的排出行為。
11-1.根據(jù)第11條所述的方法，其中同位素標(biāo)記的代謝產(chǎn)物選自同位素標(biāo)記的CO2、同位素標(biāo)記的β-丙氨酸、同位素標(biāo)記的氟-β-丙氨酸以及同位素標(biāo)記的β-氨基異丁酸中的至少一種。
11-2.根據(jù)第11條或11-1條所述的方法，其中被試者的排出行為通過和具有正常嘧啶代謝能力的健康被試者的相應(yīng)排出行為比較來進(jìn)行評價(jià)。
12.一種評價(jià)被試者中嘧啶代謝能力的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1-8中任一條所述的制劑，檢測呼氣中同位素標(biāo)記的CO2的排出行為，然后評價(jià)從被試者中獲得的排出行為。
12-1.根據(jù)第12條所述的方法，其中第4條所述的制劑被用作確定嘧啶代謝能力的制劑。
12-2.根據(jù)第12或第12-1條所述的方法，其中被試者的排出行為通過和具有正常嘧啶代謝能力的健康被試者的相應(yīng)排出行為比較來進(jìn)行評價(jià)。
本發(fā)明也提供用來確定被試者中嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或程度的方法，如下列第13～14-1條所描述
13.一種確定被試者中嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或程度的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1-8條中任一條所述的制劑，檢測同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，然后將被試者中獲得的排出行為和具有正常嘧啶代謝能力的健康被試者的相應(yīng)排出行為進(jìn)行比較。
13-1.根據(jù)第13條所述的方法，其中同位素標(biāo)記的代謝產(chǎn)物選自同位素標(biāo)記的CO2、同位素標(biāo)記的β-丙氨酸、同位素標(biāo)記的氟-β-丙氨酸以及同位素標(biāo)記的β-氨基異丁酸中的至少一種。
14.一種確定被試者中嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或程度的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1-8條中任一條所述的制劑，檢測呼氣中同位素標(biāo)記的CO2的排出行為，然后將被試者中獲得的排出行為和具有正常嘧啶代謝能力的健康被試者的相應(yīng)排出行為進(jìn)行比較。
14-1.根據(jù)第14條所述的方法，其中第4條所述的制劑被用作確定嘧啶代謝能力的制劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種方法，這種方法可用于篩選適合氟尿嘧啶給藥的被試者，如下列第15～17條所描述15.一種篩選適合氟尿嘧啶給藥的被試者的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1～8條中任一條所述的制劑，檢測同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，然后根據(jù)從被試者中獲得的排出行為來確定適合的氟尿嘧啶給藥。
15-1.根據(jù)第15條所述的方法，其中同位素標(biāo)記的代謝產(chǎn)物選自同位素標(biāo)記的CO2、同位素標(biāo)記的β-丙氨酸、同位素標(biāo)記的氟-β-丙氨酸以及同位素標(biāo)記的β-氨基異丁酸中的至少一種。
15-2.根據(jù)第15或第15-1條所述的方法，其中氟尿嘧啶給藥的適應(yīng)性是通過將被試者的排出行為或從中獲得的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和具正常嘧啶代謝能力的健康被試者的相應(yīng)排出行為或藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行比較而確定的。
16.一種篩選適合氟尿嘧啶給藥的被試者的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1～8條中任一條所述的制劑，檢測呼氣中同位素標(biāo)記的CO2的排出行為，然后根據(jù)從被試者中獲得的排出行為來確定氟尿嘧啶給藥的適應(yīng)性。
16-1.根據(jù)第16條所述的方法，其中第4條所述的制劑被用作確定嘧啶代謝能力的制劑。
16-2.根據(jù)第16或第16-1條所述的方法，其中氟尿嘧啶給藥適應(yīng)性是通過將被試者CO2的排出行為或從中獲得的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和具正常嘧啶代謝能力的健康被試者的相應(yīng)CO2的排出行為或藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行比較而確定的。
17.根據(jù)第15～16-2條中任一條所述的方法，其中氟尿嘧啶藥物是一種抗癌藥物，選自5-氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟和去氧氟尿苷。
此外，本發(fā)明還包括下列實(shí)施方案18.一種評價(jià)氟尿嘧啶在被試者中清除率的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1～8條中任一條所述的制劑，檢測同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，然后根據(jù)從被試者中獲得的排出行為來評價(jià)氟尿嘧啶藥物的清除率。
19.一種為被試者建立氟尿嘧啶藥物劑量用法的方法，包括下列步驟給被試者施用根據(jù)第1～8條中任一條所述的制劑，檢測同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，然后根據(jù)獲得的排出行為來確定被試者的嘧啶代謝能力，并且根據(jù)嘧啶代謝能力為被試者建立氟尿嘧啶藥物的劑量用法(配方、劑量、劑量的數(shù)目、服藥的頻率等)。
20.嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物在生產(chǎn)用于確定嘧啶代謝能力的制劑上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
21.嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物或含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的組合物在確定被試者中嘧啶代謝能力上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
21-1.含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物和可藥用載體的組合物在確定被試者嘧啶代謝能力上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
22.嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物或含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的組合物在評價(jià)被試者嘧啶代謝能力上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
22-1.含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物和可藥用載體的組合物在評價(jià)被試者嘧啶代謝能力上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
23.嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物或含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的組合物在確定被試者嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或程度上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
23-1.含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物和可藥用載體的組合物在確定被試者嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或程度上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
24.嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物或含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的組合物在評價(jià)被試者中氟尿嘧啶藥物的清除率上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
24-1.含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物和可藥用載體的組合物在評價(jià)被試者中氟尿嘧啶藥物的清除率上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
25.嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物或含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的組合物在為被試者確立氟尿嘧啶藥物的劑量用法上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
25-1.含有作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物和可藥用載體的組合物在為被試者確立氟尿嘧啶藥物的劑量用法上的應(yīng)用，在所述嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。
如在本文中使用的“嘧啶代謝途徑”意思是指體內(nèi)代謝途徑，其參與了一系列具有嘧啶骨架的化合物，如嘧啶的降解。在嘧啶代謝途徑中，參與降解反應(yīng)的酶被稱作“嘧啶代謝酶”。“嘧啶代謝酶”既指嘧啶代謝途徑中參與每個(gè)降解反應(yīng)的單個(gè)酶，也包括嘧啶代謝途徑中的一系列酶。如圖1所示，具嘧啶骨架的化合物(下文有時(shí)也稱作“嘧啶化合物”)，如尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、胸腺嘧啶等，在嘧啶代謝途徑中，通過三種酶反應(yīng)被轉(zhuǎn)變成代謝終產(chǎn)物。如這里使用的“代謝終產(chǎn)物”和“代謝物”指的是通過嘧啶代謝途徑中的一系列酶的作用所產(chǎn)生的終產(chǎn)物，另一方面，代謝過程中酶反應(yīng)產(chǎn)生的產(chǎn)物稱作“代謝中間產(chǎn)物”。
附圖的簡單描述圖1所示為嘧啶化合物(尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5-FU)和胸腺嘧啶)，通過一些列嘧啶代謝酶(二氫嘧啶脫氫酶(DPD)、二氫嘧啶酶(DHPase)和β-脲基丙酸酶(β-UPase)的降解行為(代謝行為)。
圖2所示為實(shí)施例1中獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在這些結(jié)果中，根據(jù)本發(fā)明用于確定嘧啶代謝能力的制劑，通過靜脈內(nèi)施用給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。在實(shí)施例1中，靜脈內(nèi)注射2-13C標(biāo)記的尿嘧啶后，隨著時(shí)間的流逝，觀察健康動(dòng)物(-◆-)和尿嘧啶代謝紊亂的模式動(dòng)物(-■-)呼氣中排出的13CO2的行為。制劑施用后，呼氣在不同的時(shí)間被收集，時(shí)間以橫坐標(biāo)表示，呼氣中排出的13CO2數(shù)量以Δ13C值(‰)以縱坐標(biāo)表示，即在制劑未施用之前呼氣中的δ13C值(‰)(13CO2和12CO2濃度比)和制劑施用后每個(gè)收集時(shí)間呼氣中的δ13C值(‰)之間的區(qū)別(同樣適用于圖3和圖4)。
圖3所示的是實(shí)施例2中獲得的結(jié)果，在這個(gè)結(jié)果中，根據(jù)本發(fā)明用于確定嘧啶代謝能力的制劑通過口腔施用給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。在實(shí)施例2中，在口腔施用2-13C標(biāo)記的尿嘧啶后，隨著時(shí)間的流逝，觀察健康動(dòng)物(-◆-)和具尿嘧啶代謝紊亂的模式動(dòng)物(-■-)呼氣中排出的13CO2行為。
圖4所示為實(shí)施例3中獲得的結(jié)果，在這個(gè)結(jié)果中，用于確定嘧啶代謝能力的制劑含有不同濃度的2-13C標(biāo)記的尿嘧啶，通過口服施用給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，隨著時(shí)間的流逝，觀察呼氣中排出的13CO2的行為(Δ13C值(‰))。2-13C標(biāo)記的尿嘧啶的劑量如下10μmol/kg體重(-●-)、20μmol/kg體重(-■-)、40μmol/kg體重(-▲-)以及80μmol/kg體重(-×-)。
圖5是一個(gè)圖表，在這個(gè)圖表中，2-13C標(biāo)記的尿嘧啶的劑量(μmol/kg體重)以橫坐標(biāo)表示，在從實(shí)施例3(圖4)獲得的結(jié)果中所確定的2-13C標(biāo)記的尿嘧啶的每一個(gè)劑量處曲線下的面積(AUC‰·小時(shí))以縱坐標(biāo)表示。
圖6是一個(gè)圖表，在這個(gè)圖表中，2-13C標(biāo)記的尿嘧啶的劑量(μmol/kg體重)以橫坐標(biāo)表示，在從實(shí)施例3(圖4)獲得的結(jié)果中所確定的2-13C標(biāo)記的尿嘧啶的每一個(gè)劑量處，呼氣中的最大2-13CO2濃度(Cmax)以縱坐標(biāo)表示。
實(shí)施本發(fā)明的最好方式(1)用于確定嘧啶代謝能力的制劑。
根據(jù)本發(fā)明，用于確定嘧啶代謝能力的制劑包含作為活性成分的嘧啶化合物，在所述化合物中，碳、氧和氮原子中的至少一種被同位素標(biāo)記。
本發(fā)明中使用的嘧啶化合物包括很多種化合物，這些化合物具有嘧啶骨架，并且優(yōu)選是那些充當(dāng)嘧啶代謝酶，尤其是二氫嘧啶脫氫酶(DPD)，即體內(nèi)嘧啶代謝途徑中的第一個(gè)酶的底物的化合物。這種嘧啶化合物的特定例子包括尿嘧啶、胸腺嘧啶以及它們的衍生物。任何衍生物只要能充當(dāng)DPD的底物，可以不加限制地使用。這些衍生物能通過嘧啶代謝途徑轉(zhuǎn)變成代謝終產(chǎn)物，并以呼氣或尿液的形式排出。這種衍生物的特定例子包括尿嘧啶的鹵化物，如5-氟尿嘧啶和5-溴尿嘧啶等。優(yōu)選的嘧啶化合物例子包括尿嘧啶、胸腺嘧啶和5-氟尿嘧啶。
除了上述直接充當(dāng)DPD底物的化合物外，有用的嘧啶化合物包括充當(dāng)DPD的間接底物的化合物，即前體(包括前體藥物(prodrug))，它們在體內(nèi)被降解或代謝成DPD的底物(如尿嘧啶、胸腺嘧啶和5-氟尿嘧啶)。這些前體的例子包括尿嘧啶的前體，如胞嘧啶、尿苷及其磷酸鹽(例如尿苷一磷酸)；胸腺嘧啶的前體，如5-甲基胞嘧啶、胸苷及其磷酸鹽(例如胸苷酸)；以及5-氟尿嘧啶的前體(前體藥物)，如替加氟、卡莫氟和去氧氟尿苷等。
本發(fā)明的制劑可包括代替嘧啶化合物的化合物，這種化合物作為活性成分，對應(yīng)于嘧啶化合物(下文有時(shí)也稱作“嘧啶代謝化合物”)的代謝中間產(chǎn)物。這種嘧啶代謝化合物的例子包括充當(dāng)DHPase(嘧啶代謝途徑的第二個(gè)酶)底物的化合物，如二氫尿嘧啶、二氫胸腺嘧啶及其衍生物(例如二氫尿嘧啶的鹵化物，如5-氟尿嘧啶) (這些化合物下文有時(shí)也被稱作“第一個(gè)代謝化合物”)，以及充當(dāng)β-UPase(嘧啶代謝途徑中的第三個(gè)酶)底物的化合物，如β-脲基丙酸、β-脲基異丁酸及其衍生物(例如β-脲基丙酸的鹵化物，如氟-β-脲基丙酸)(這些化合物在下文有時(shí)也被稱作“第二代謝化合物”)。
嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物作為制劑活性成分，用來確定嘧啶代謝能力，其特征在于這個(gè)化合物分子中的碳、氧和氮原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素。同位素沒有限制，特定的同位素例子包括13C、14C、18O、15N等。這些同位素可以是放射性的，也可以是非放射性的，但從安全角度來考慮，非放射性的13C、18O或15N是優(yōu)選的。
用在本發(fā)明中的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物分子中有一個(gè)同位素或有相同或不同元素的兩個(gè)或更多個(gè)同位素。盡管沒有限制，但優(yōu)選的是標(biāo)記嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中碳原子或一個(gè)或多個(gè)氧原子，這樣通過嘧啶代謝途徑產(chǎn)生的CO2中至少一部分(C或O)被標(biāo)記上同位素。這種化合物的例子包括那些在嘧啶骨架的第2位碳原子被同位素標(biāo)記的化合物。特定的例子包括2-13C標(biāo)記的尿嘧啶和2-13C標(biāo)記的氟尿嘧啶等。
用這樣的同位素標(biāo)記嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的方法沒有限制，而且可以是常規(guī)的方法(Sasaki，“5.1臨床診斷中穩(wěn)定同位素的應(yīng)用”Kagaku no Ryoki(Journal of Japanese Chemistry(日本化學(xué)雜志))107，穩(wěn)定同位素在醫(yī)學(xué)、制藥和生物中的應(yīng)用，第149-163頁(1975)，NankodoKajiwara，RADIOISOTOPES(放射性同位素)，41，45-48(1992)等)。一些用這些同位素標(biāo)記的嘧啶化合物和嘧啶代謝化合物都可以在市場上得到，而且這些商品使用方便。
本發(fā)明的制劑可以以任何形式適合本發(fā)明的目的。合適形式的例子包括包括注射液、靜脈注射液、栓劑、滴眼液、鼻溶液和其它腸胃外形式；以及溶液(包括糖漿)、懸浮液、乳濁液、片劑(包衣或未包衣的)、膠囊、藥丸、粉末、微細(xì)顆粒、顆粒和其它口服形式。
本發(fā)明的制劑可基本上由作為活性成分的同位素標(biāo)記的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物組成，但根據(jù)制劑的形式(劑量形式)，可能是一個(gè)組合物(確定嘧啶代謝能力的組合物)，這個(gè)組合物進(jìn)一步包含在本領(lǐng)域通常使用的可藥用載體或添加劑，只要本發(fā)明的制劑的作用和效果不被削弱。
在這種組合物中，作為活性成分的同位素標(biāo)記的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的比例是沒有限制的，可以是組合物100wt.％的1-95wt.％。這個(gè)比例在上述的范圍中能進(jìn)行合適的調(diào)節(jié)。
例如，當(dāng)上述組合物形成片劑時(shí)，有用的載體包括，例如，乳糖、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸鈣、高嶺土、晶體纖維素、硅酸以及其他賦形劑；簡單糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明膠溶液、羧甲基纖維素、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮以及其他粘合劑，干淀粉、藻酸鈉、瓊脂粉、昆布多糖粉、碳酸氫鈉、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、月桂基硫酸鈉、硬脂酸甘油單酯、淀粉、乳糖以及其他崩解劑；蔗糖、硬脂酸、可可脂、氫化油以及其他崩解抑制劑；季銨堿、月桂基硫酸鈉以及其他吸收加速劑；甘油、淀粉及其他濕潤劑；淀粉、乳糖、高嶺土、皂土、膠體硅酸及其他吸附劑；純化的滑石粉、硬脂酸、硼酸粉、聚乙二醇及其他潤滑劑。此外，片劑是那些帶有普通涂蓋層的片劑(如蔗糖包衣的片劑、明膠包衣的片劑或膜包衣的片劑)、雙層片劑或多層片劑。
當(dāng)把確定嘧啶代謝能力的組合物形成藥丸時(shí)，有用的載體包括，例如，葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、高嶺土、滑石粉及其他賦形劑；阿拉伯膠粉、西黃耆膠粉、明膠及其他的粘合劑；以及昆布多糖、瓊脂及其他崩解劑。
膠囊按例行方式制備，根據(jù)本發(fā)明將活性成分和上述任何載體進(jìn)行混合，然后將這種混合物填充進(jìn)硬的明膠膠囊和軟膠囊等。
用于栓劑中的有用的載體包括，例如，聚乙二醇、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠及半合成的甘油酯。
當(dāng)這種制劑的制備形式是注射液時(shí)，將注射液、乳濁液或懸浮液滅菌，優(yōu)選與血液等滲。制備注射液的有用的稀釋劑包括，例如，水、乙醇、聚乙二醇(macrogol)、丙二醇、乙氧基化異十八烷醇、聚氧基化異十八烷醇和聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯。注射液可能包括氯化鈉、葡萄糖或甘油，它們的數(shù)量足以生成等滲溶液。此外，普通的增溶劑，緩沖液和潤膚劑等也能被加入到這種注射液中。
進(jìn)一步，本發(fā)明上述任何形式的制劑包括可藥用的添加劑，如顏料、防腐劑、香料、氣味改善劑、味道改善劑、甜味劑或穩(wěn)定劑。上述載體和添加劑既可單個(gè)使用也能組合使用。
在每單位劑量的本發(fā)明制劑中，同位素標(biāo)記的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物(活性成分)的量取決于測試樣品和使用的活性成分的種類而發(fā)生變化，一般不能限定。這樣，根據(jù)情況可以合理的調(diào)節(jié)和確立數(shù)量。例如，同位素標(biāo)記的尿嘧啶，如2-13C標(biāo)記的尿嘧啶，被用作同位素標(biāo)記的嘧啶化合物(活性成分)時(shí)，每單位劑量的制劑包含1-1000mg/體重，優(yōu)選10-100mg/體重的同位素標(biāo)記的尿嘧啶。當(dāng)另一種嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物被用作活性成分時(shí)，它的數(shù)量根據(jù)上述范圍進(jìn)行調(diào)整。當(dāng)一種同位素標(biāo)記的氟尿嘧啶藥物，如同位素標(biāo)記的5-氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶前體被用作同位素標(biāo)記的嘧啶化合物時(shí)，這種藥物按優(yōu)選以一定量施用，以便這種藥物在醫(yī)藥上的效果不會(huì)對被試者產(chǎn)生不利的影響。例如，一個(gè)優(yōu)選的數(shù)量是每單位劑量1-300mg/體重，盡管只要滿足上述的條件，對其是沒有限制的。
當(dāng)本發(fā)明的制劑被施用給具正常嘧啶代謝能力，即一系列嘧啶代謝酶(DPD、DPHase和β-UPase)能正常行使功能的被試者(下文有時(shí)稱作“健康被試者”)時(shí)，在制劑中充當(dāng)活性成分的嘧啶化合物如圖1所示被代謝性降解。
例如，尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5-FU)或胸腺嘧啶，作為嘧啶化合物在DPD(嘧啶代謝途徑的第一個(gè)酶)作用下，在體內(nèi)分別被降解成二氫尿嘧啶、5-氟二氫尿嘧啶(FDHU)或二氫胸腺嘧啶，然后在DHPase(嘧啶代謝途徑的第二個(gè)酶)的作用下，分別被降解成β-脲基丙酸、氟-β-脲基丙酸(F-β-UPA)、β-脲基異丁酸，又進(jìn)一步在β-UPase(嘧啶代謝途徑中的第三個(gè)酶)作用下分別被降解成β-丙氨酸、氟-β-丙氨酸(F-β-丙氨酸)或β-氨基異丁酸和CO2。
當(dāng)制劑含有充當(dāng)DHPase的底物的嘧啶代謝化合物(第一個(gè)代謝化合物)，如二氫脲嘧啶、FDHU或二氫胸腺嘧啶作為活性成分時(shí)，這個(gè)化合物在健康被試者中，通過DHPase的作用，被降解成β-脲基丙酸，F(xiàn)-β-UPA或β-脲基異丁酸，然后在β-UPase(第三個(gè)酶)的作用下被進(jìn)一步降解成β-丙氨酸、F-β-丙氨酸或β-氨基異丁酸和CO2。
當(dāng)制劑含有充當(dāng)β-Upase的底物的嘧啶代謝化合物(第二個(gè)代謝化合物)，如β-脲基丙酸、F-β-UPA或β-脲基異丁酸作為活性成分時(shí)，這個(gè)化合物在健康被試者中，通過β-UPase的作用，被降解成β-丙氨酸、F-β-丙氨酸或β-氨基異丁酸和CO2。
代謝終產(chǎn)物CO2在呼氣中排出，而β-丙氨酸、F-β-丙氨酸或β-氨基異丁酸則主要是在尿液中排出。當(dāng)排出時(shí)，根據(jù)作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的同位素標(biāo)記位點(diǎn)，代謝終產(chǎn)物(CO2、β-丙氨酸、F-β-丙氨酸或β-氨基異丁酸)中至少有一種被標(biāo)記上同位素。這樣，同位素標(biāo)記被當(dāng)作一種指標(biāo)去檢測測試樣品中代謝終產(chǎn)物(當(dāng)CO2被標(biāo)記上時(shí)就是呼氣，而當(dāng)β-丙氨酸，F(xiàn)-β-丙氨酸或β-氨基異丁酸被標(biāo)記上時(shí)便是尿液)的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量和排出速率的行為)。
使用本發(fā)明的制劑，通過檢測上述代謝終產(chǎn)物的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量和排出速率的行為)，可對單個(gè)被試者中的嘧啶代謝能力加以確定和評價(jià)。
具體而言，本發(fā)明的制劑通過口服或腸胃外途徑給被試者施用，并將從身體排出的同位素標(biāo)記的代謝物進(jìn)行檢測，這樣，被試者中嘧啶代謝能力(嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或紊亂的程度(下降/上升))能由獲得的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量和排出速率的行為)而得到確定。
從身體排出的代謝物取決于制劑中所用的活性成分的種類而發(fā)生變化。例如，當(dāng)這種制劑中包含同位素標(biāo)記的尿嘧啶或同位素標(biāo)記的尿嘧啶前體作為活性成分時(shí)，代謝終產(chǎn)物便是同位素標(biāo)記的β-丙氨酸或同位素標(biāo)記的CO2。當(dāng)這種制劑中包含同位素標(biāo)記的5-氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶前體(前體藥物)作為活性成分時(shí)，代謝終產(chǎn)物便是同位素標(biāo)記的氟-β-丙氨酸或同位素標(biāo)記的CO2。當(dāng)這種制劑中包含同位素標(biāo)記的胸腺嘧啶或同位素標(biāo)記的胸腺嘧啶前體作為活性成分時(shí)，代謝終產(chǎn)物便是同位素標(biāo)記的β-氨基異丁酸或同位素標(biāo)記的CO2。
優(yōu)選地，本發(fā)明制劑包含，作為一種活性成分的同位素標(biāo)記的嘧啶化合物或同位素標(biāo)記的嘧啶化合物的前體，這些化合物或化合物的前體使得呼氣中同位素標(biāo)記的CO2以代謝結(jié)果排出。使用這樣一種制劑，被試者的嘧啶代謝能力(嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或程度(下降/上升))能通過同位素標(biāo)記的CO2的排出行為(隨時(shí)間流逝排出量和排出速率的行為)得以確定，通過口服或腸胃外途徑給被試者施用制劑，并且檢測呼氣中排出的同位素標(biāo)記的CO2，可以獲得被試者的嘧啶代謝能力。
當(dāng)制劑中包括作為活性成分的嘧啶化合物，這種化合物產(chǎn)生同位素標(biāo)記的化合物而不是同位素標(biāo)記的CO2，如β-丙氨酸、F-β-丙氨酸或β-氨基異丁酸時(shí)，排出物如尿液或汗液可取代呼氣用作測試樣品。
例如，被試者中的嘧啶代謝能力可以通過例如比較由上述檢測獲得的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量和排出速率的行為)和具正常嘧啶代謝能力的健康被試者中的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為得以評價(jià)。健康被試者中的排出行為以同樣方式檢測。進(jìn)一步，取代或者除了同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，將從被試者排出行為(排出量的過渡曲線)中獲得的曲線下的面積(AUC)，排出速率(尤其是起始排出速率)，最大的排出濃度(Cmax)，或者相似參數(shù)，優(yōu)選地是藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，和健康被試者中相應(yīng)的參數(shù)進(jìn)行比較。
嘧啶代謝酶(DPD，DHPase和β-UPase中的至少一種)的缺失或存在可以通過同位素標(biāo)記的代謝物排出的不存在或存在來確定，而不用和健康被試者的排出行為進(jìn)行比較。此外，被試者中嘧啶代謝能力下降或上升的存在或不存在(嘧啶代謝紊亂)及代謝紊亂的程度可以通過比較被試者中排出行為或從中獲得的參數(shù)和健康被試者中相應(yīng)的排出行為或參數(shù)而加以確定。
當(dāng)一種排出物，如尿液或汗液用作測試樣品時(shí)，從測試樣品中獲得的同位素標(biāo)記的嘧啶化合物(或同位素標(biāo)記的嘧啶代謝化合物)，同位素標(biāo)記的代謝中間產(chǎn)物以及同位素標(biāo)記的代謝終產(chǎn)物，通過組合使用分離技術(shù)，如液相色譜和氣相色譜可以被同時(shí)分離，并一次性進(jìn)行分析。因此，同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為可以被選擇性進(jìn)行檢測。
如上所述，嘧啶代謝途徑由三步有一系列嘧啶代謝酶(DPD、DHPase和β-UPase)參與的酶反應(yīng)組成。使用含有嘧啶代謝途徑中的第一個(gè)酶(DPD)的底物或其前體(兩者都用同位素進(jìn)行標(biāo)記)作為活性成分的制劑，從施用制劑而獲得的代謝終產(chǎn)物的排出行為中，被試者中嘧啶代謝能力可以被評價(jià)。在這種情況下，通過考慮基于第二個(gè)酶(DHPase)和第三個(gè)酶(β-UPase)的嘧啶代謝能力，被試者中第一個(gè)酶(DPD)的缺失或存在，或其活性下降或上升(紊亂)的程度可以被評價(jià)?；诘诙€(gè)酶(DHPase)和第三個(gè)酶(β-UPase)的嘧啶代謝能力可由下列步驟發(fā)現(xiàn)給被試者施用一種用于檢測嘧啶代謝能力的制劑，這種制劑中包括作為活性成分的第二個(gè)酶(DHPase)的底物(同位素標(biāo)記的化合物)；檢測從身體中排出的代謝終產(chǎn)物；以及評價(jià)從檢測中獲得的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量和排出速率等的行為)。
被試者中基于第二個(gè)酶(DPD)的嘧啶代謝能力能從代謝終產(chǎn)物的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量和排出速率等的行為)中得以評價(jià)，所述代謝終產(chǎn)物通過施用包括第二種酶(DHPase)的底物(同位素標(biāo)記的化合物)的制劑獲得。在這種情況下，被試者嘧啶代謝途徑中的基于第三個(gè)酶(β-UPase)的嘧啶代謝能力也應(yīng)該考慮。基于第三個(gè)酶(β-UPase)的嘧啶代謝能力可由下列步驟發(fā)現(xiàn)給被試者施用一種制劑，這種制劑中包括第三個(gè)酶(β-UPase)的底物(同位素標(biāo)記的化合物)；檢測從身體中排出的代謝終產(chǎn)物；以及評估獲得的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量和排出速率等的行為)。
本發(fā)明的制劑能被合適地用來檢測單個(gè)被試者中嘧啶代謝紊亂(下降/上升)的存在或不存在，或用于檢測和評價(jià)紊亂的程度。具體而言，基于單個(gè)被試者中DPD的缺失或其活性的下降或上升，制劑能被合適地用來檢測和評價(jià)嘧啶代謝紊亂的存在，缺失或紊亂的程度(下降/上升)，所述制劑包含作為活性成分的DPD的底物，如尿嘧啶、胸腺嘧啶或其衍生物(例如5-氟尿嘧啶)，底物標(biāo)記有同位素。因此，根據(jù)本發(fā)明用于確定嘧啶代謝能力的制劑也能被表達(dá)成用于檢測嘧啶代謝紊亂的制劑、用于測定嘧啶代謝紊亂的制劑和用于診斷嘧啶代謝紊亂的制劑等。
(2)確定嘧啶代謝能力的方法本發(fā)明也提供一種確定被試者中嘧啶代謝能力的方法。這種方法通過利用上述用于確定嘧啶代謝能力的制劑可容易地得以實(shí)施。
具體而言，被試者中嘧啶代謝能力可以按如下步驟進(jìn)行確定。將上述制劑施用給嘧啶代謝能力有待確定的動(dòng)物(尤其是哺乳動(dòng)物)或人被試者。然后，收集呼氣、尿液、汗液或其他排出物作為測試樣品，并從樣品中排出的同位素標(biāo)記的代謝物的數(shù)量檢測出同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量和排出速率等的行為)。
測試樣品中同位素標(biāo)記的代謝物的檢測和分析可以通過常規(guī)的分析技術(shù)，如液體閃爍計(jì)數(shù)、質(zhì)譜、紅外光譜分析、發(fā)射光譜分析或核磁共振波譜分析，選擇哪種技術(shù)取決于使用的同位素是放射性的還是非放射性的。
體內(nèi)嘧啶代謝受到一系列嘧啶代謝酶的影響。身體中吸收的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物主要被嘧啶代謝酶代謝成CO2和其他代謝物(β-丙氨酸、F-β-丙氨酸或β-氨基異丁酸等)，并從身體中排出。這樣，要檢測的同位素標(biāo)記的代謝物的優(yōu)選例子包括同位素標(biāo)記的CO2、同位素標(biāo)記的β-丙氨酸、同位素標(biāo)記的F-β-丙氨酸和同位素標(biāo)記的β-氨基異丁酸。
取決于施用的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物中的同位素標(biāo)記位點(diǎn)，根據(jù)所產(chǎn)生的同位素標(biāo)記的代謝物的類型選擇本發(fā)明檢測方法中使用的樣品。因此，當(dāng)同位素標(biāo)記的代謝物是CO2，合適的樣品是呼氣；當(dāng)標(biāo)記的代謝物是β-丙氨酸、F-β-丙氨酸或β-氨基異丁酸，合適的樣品是尿液。如果從樣品收集的難易程度來看，呼氣是優(yōu)選的，而從同時(shí)分析代謝終產(chǎn)物和中間產(chǎn)物的可行性來看，尿液又是優(yōu)選的。
作為確定嘧啶代謝能力的優(yōu)選方法，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種方法，這種方法包括給被試者施用確定嘧啶代謝能力的制劑，以及檢測呼氣中排出的同位素標(biāo)記的CO2的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量和排出速率的行為)。
優(yōu)選的方法是用一種包含作為活性成分的同位素標(biāo)記的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物的制劑，這些化合物被設(shè)計(jì)成產(chǎn)生同位素標(biāo)記的CO2作為代謝終產(chǎn)物。這樣的同位素標(biāo)記的嘧啶化合物的特定例子包括在嘧啶骨架第2位上有同位素標(biāo)記碳原子的化合物，優(yōu)選的是2-13C標(biāo)記的尿嘧啶或2-13C標(biāo)記的5-氟尿嘧啶，更優(yōu)選的是2-13C標(biāo)記的尿嘧啶。
當(dāng)13C被用作同位素，呼氣中排出的13CO2的數(shù)量可以通過傳統(tǒng)的13C-Breath試驗(yàn)檢測(Bunseki Kagaku(Analytical Chemistry(分析化學(xué)))，第31卷，第450-453頁(1982)；HELICOBACTER(螺旋桿菌)，第3卷，第1期，第49-53頁(1998)等)。
每個(gè)被試者嘧啶代謝能力根據(jù)用上述方法檢測的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量或排出速率的行為)進(jìn)行評價(jià)。具體而言，每個(gè)被試者的嘧啶代謝能力可由下列步驟評價(jià)給被試者施用本發(fā)明的制劑；檢測尿液、呼氣或其他排出物中同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量或排出速率的行為)；以及將這樣獲得的排出行為和健康被試者中相應(yīng)的排出行為進(jìn)行比較。
優(yōu)選地，包含作為活性成分的2-13C標(biāo)記的尿嘧啶或2-13C標(biāo)記的5-氟尿嘧啶的制劑給被試者施用，檢測被試者呼氣中排出的同位素標(biāo)記的CO2的排出行為，以及將獲得的排出行為和健康被試者中同位素標(biāo)記的CO2的相應(yīng)的排出行為進(jìn)行比較。具體而言，呼氣中同位素標(biāo)記的CO2(例如13CO2)的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量或排出速率的行為)如下列方式所示在給被試者施用本發(fā)明的制劑后，呼氣中13CO2和12CO2的比率(13CO2/12CO2的濃度比，δ13C值)隨著時(shí)間的流逝而檢測，從測量的δ13C值和制劑施用前被試者的δ13C值之間的差異計(jì)算二氧化碳Δ值(‰)，然后根據(jù)呼氣收集時(shí)間(制劑施用后流逝的時(shí)間)將Δ值(‰)劃成曲線制表。為了比較被試者中同位素標(biāo)記的CO2的排出行為和健康被試者的排出行為，例如，將上面獲得的圖表和表示健康被試者中排出行為的圖表進(jìn)行比較，健康被試者中排出行為通過和上述同樣的方式獲得。
進(jìn)一步，本發(fā)明的方法的實(shí)施方法是取代或除了同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，將從被試者的排出行為(排出量的過渡曲線排出曲線)中獲得的曲線下的面積(AUC)、排出速率(尤其是起始排出速率)、最大的排出濃度(Cmax)或相似的參數(shù)，優(yōu)選的是藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，和健康被試者中相應(yīng)的參數(shù)進(jìn)行比較。用這種方式，有可能評價(jià)被試者嘧啶代謝能力下降或上升(嘧啶代謝紊亂)的存在或不存在，或者紊亂的程度。
嘧啶代謝途徑的第一個(gè)酶DPD的缺失或存在，可以通過同位素標(biāo)記的代謝物排出的不存在或存在來確定，而不用和健康被試者進(jìn)行比較。
當(dāng)尿液、汗液或另外的排出物用作測試樣品時(shí)，其中含有的同位素標(biāo)記的嘧啶化合物(或同位素標(biāo)記的嘧啶代謝化合物)、同位素標(biāo)記的代謝物中間物和同位素標(biāo)記的代謝終產(chǎn)物可以被同時(shí)分離，并通過組合使用分離技術(shù)如液相色譜和氣相色譜一次性分析。這樣，同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為可以被選擇性檢測。
如上所述，本發(fā)明使得檢測單個(gè)被試者中嘧啶代謝能力紊亂(下降或上升)的存在或不存在，或測定紊亂的程度成為可能。因此，根據(jù)本發(fā)明，檢測或評價(jià)嘧啶代謝能力的方法也能定義成檢測單個(gè)被試者中嘧啶代謝能力紊亂(下降或上升)的存在或不存在的方法，檢測被試者嘧啶代謝能力紊亂(下降或上升)程度的方法，或評價(jià)被試者嘧啶代謝能力紊亂(下降或上升)的存在、不存在或程度的方法。
3)適合施用氟尿嘧啶藥物的被試者的篩選方法利用本發(fā)明的方法評價(jià)被試者的嘧啶代謝能力，從中可以預(yù)測被試者對施用多種氟尿嘧啶藥物的適宜性。因此，本發(fā)明提供了一種方法，可以篩選適于施用氟尿嘧啶藥物的被試者。根據(jù)本發(fā)明，在適合氟尿嘧啶藥物施用的被試者中，優(yōu)選(包括人的動(dòng)物(哺乳動(dòng)物)，優(yōu)選人)那些施用氟尿嘧啶藥物，如5-FU或其前體藥物后，根據(jù)本領(lǐng)域常識，能得到一般預(yù)期的治療效果，而沒有嚴(yán)重副作用的被試者。在更寬的意義上，適合氟尿嘧啶藥物施用的被試者包括那些施用氟尿嘧啶藥物后不引起嚴(yán)重副作用的被試者(包括人的動(dòng)物(哺乳動(dòng)物))，或那些能得到預(yù)料的氟尿嘧啶藥物治療效果的被試者(包括人的動(dòng)物(哺乳動(dòng)物))。
通過操作本發(fā)明用于檢測和評價(jià)嘧啶代謝能力的方法，本發(fā)明的篩選方法可以在將施用嘧啶藥物的被試者(將要用嘧啶藥物處理的被試者)，如癌癥患者中實(shí)施。具體而言，將本發(fā)明的制劑施用給被試者；一種分泌物，如呼氣或尿液，收集起來作為測試樣品；測試樣品中排出的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為(隨著時(shí)間的流逝，排出數(shù)量或排出速率的行為)加以檢測；以及被試者施用氟尿嘧啶的藥物適宜性可以根據(jù)獲得的排出行為得以確定。
例如，當(dāng)同位素標(biāo)記的代謝物的排出在被試者中沒有被觀察到，則可以確定，被試者由于嘧啶代謝途徑中嘧啶代謝酶(DPD、DHPase和β-UPase中至少一種)的缺失而缺乏嘧啶代謝能力，因此它不適合施用氟尿嘧啶藥物。當(dāng)同位素標(biāo)記的代謝物的排出在被試者中被觀察到，通過比較被試者中同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為或從中獲得的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和健康被試者中相應(yīng)的參數(shù)或排出行為，可以確定被試者適合施用氟尿嘧啶藥物。當(dāng)被試者從排出行為或其參數(shù)中評價(jià)出來的嘧啶代謝能力極度低于健康被試者的嘧啶代謝能力時(shí)，則預(yù)期會(huì)出現(xiàn)副作用。另一方面，當(dāng)被試者的嘧啶代謝能力顯著高于健康被試者的嘧啶代謝能力時(shí)，則渴望的治療效果達(dá)不到。在兩種情況下，可以確定被試者并不適合施用氟尿嘧啶藥物。
進(jìn)一步，當(dāng)基于同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和嘧啶代謝能力(優(yōu)選地，通過一種方法，而不是本發(fā)明的方法所確定的嘧啶代謝能力)之間的相關(guān)性(相關(guān)圖)，更優(yōu)選的是藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和氟尿嘧啶藥物施用的適宜性之間的相關(guān)性(相關(guān)圖)，在大量隨機(jī)挑選的被試者中提前被發(fā)現(xiàn)時(shí)，通過將基于采用本發(fā)明方法所測定的排出行為的參數(shù)應(yīng)用到相關(guān)圖上，可確定被試者對氟尿嘧啶藥物施用的適宜性。
從通過本發(fā)明的方法評價(jià)的被試者的嘧啶代謝能力，確定被試者中氟尿嘧啶藥物的清除率也是有可能的，或者建立一個(gè)氟尿嘧啶藥物的劑量用法(配方(劑型、組成等)、劑量、劑量數(shù)等)。
具體而言，被試者(將要施用氟尿嘧啶藥物的患者)中嘧啶代謝能力可以在施用氟尿嘧啶藥物之前，通過上述的評價(jià)方法進(jìn)行評價(jià)，以致氟尿嘧啶藥物的清除率能從嘧啶代謝能力中得以確定，并且根據(jù)這種清除率，氟尿嘧啶藥物的用法(配方(劑型、組成等)、劑量、劑量數(shù)等)能夠建立起來。氟尿嘧啶藥物的例子包括5-氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟、去氧氟尿苷等，它們已被當(dāng)成抗癌藥物。
為了防止副作用，用這種方式，在被試者中降解一種氟尿嘧啶藥物的能力可以提前評價(jià)，這使得預(yù)測氟尿嘧啶藥物在患有嘧啶代謝紊亂，如DPD缺陷或DPD活性下降的患者中施用時(shí)的副作用風(fēng)險(xiǎn)成為可能。因此，本發(fā)明的方法在預(yù)防由施用氟尿嘧啶藥物引發(fā)的副作用中是有用的。
實(shí)施例提供下列例子是為了更詳細(xì)的闡述本發(fā)明，而不是旨在限制本文權(quán)利要求書的范圍。
實(shí)施例1在第2位上是13C標(biāo)記的碳原子的尿嘧啶(2-13C標(biāo)記的尿嘧啶)被用作同位素標(biāo)記的嘧啶化合物。制備一種制劑并檢測其在確定嘧啶代謝能力上是否有用處，這種制劑包含2-13C標(biāo)記的尿嘧啶作為活性成分，以靜脈注射液形式制成，用于確定嘧啶代謝能力。
(1)用于確定嘧啶代謝能力的制劑的生產(chǎn)尿嘧啶-2-13C(Cambridge Isotope Laboratory)(300毫克)溶解在24毫升0.1N的NaOH/鹽水溶液中(是從200毫升0.1N NaOH/鹽水溶液中量出來的，這種溶液是用生理鹽水稀釋2ml的10N NaOH/鹽水溶液而制備的)，以靜脈注射液形式得到了用于確定嘧啶代謝能力的制劑，在(每4毫升注射液包含50毫克尿嘧啶-2-13C)。
(2)(E)-5-(2-溴代乙烯基)-尿嘧啶制劑的制備(E)-5-(2-溴代乙烯基)-尿嘧啶已知是二氫嘧啶脫氫酶(DPD)的抑制劑(Cancer Research(癌癥研究)46，1094-1101，1986年3月，第1094-1101頁)。(E)-5-(2-溴代乙烯基)-尿嘧啶(250毫克)和阿拉伯膠(2.25克)混合在一起，將混合物揉和，同時(shí)加入少量水，以制成45毫升的懸浮液(每15毫升懸浮液中包含83.3毫克(E)-5-(2-溴代乙烯基)-尿嘧啶)。
(3)實(shí)驗(yàn)禁食的畢爾格狗(beagle dog)被當(dāng)作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。在1組中(n＝3)，上面制備的確定嘧啶代謝能力的制劑通過靜脈注射(50毫克/身體)(測試組)。在2組中(n＝3)，首先口服(E)-5-(2-溴代乙烯基)-尿嘧啶制劑(DPD抑制劑)(83.3毫克/身體)，1小時(shí)后，確定嘧啶代謝能力的制劑用和1組(對照組尿嘧啶代謝紊亂動(dòng)物模型)相似的方法通過靜脈注射(50毫克/身體)。在兩組中，呼氣在確定嘧啶代謝能力的制劑施用前和制劑施用后的15、30、45、60、75、90、105、120、135、150、180、210和240分鐘時(shí)被收集。收集的呼氣中排出的13C標(biāo)記的CO2的濃度通過GC-MS分析儀檢測(ABCA-G，Europa Scientific)。
圖2所示為測試組(-◆-)和對照組(-■-)的結(jié)果。在這個(gè)圖中，縱坐標(biāo)上標(biāo)繪的是Δ13C值(‰)，它是確定嘧啶代謝能力的制劑施用前收集的呼氣樣品和制劑施用后的每個(gè)時(shí)間收集的呼氣樣品之間δ13C值(‰) (呼氣中13CO2/12CO2濃度的比值)的差異，橫坐標(biāo)標(biāo)繪的是制劑施用后收集呼氣的時(shí)間。
正如圖2中一目了然，在測試組中，觀察到2-13C標(biāo)記的尿嘧啶得以代謝，并在呼氣中以13CO2排出。另一方面，在通過提前施用DPD的抑制劑人為創(chuàng)造尿嘧啶紊亂的動(dòng)物模型(對照組)中，觀察到了呼氣中排出的13CO2顯著降低。這樣，通過檢查呼氣中13CO2的排出行為，就證明了使用含有2-13C標(biāo)記的尿嘧啶作為活性成分的本發(fā)明制劑(通過靜脈注射的方式)，使得檢測和評價(jià)尿嘧啶代謝紊亂(尿嘧啶代謝能力的下降)的存在或不存在成為可能，尿嘧啶代謝紊亂是由DPD活性的抑制或降低引起的。
實(shí)施例2確定嘧啶代謝能力的制劑以口服形式制備，采用和實(shí)施例1中相同的2-13C標(biāo)記的尿嘧啶作為活性成分，并且對其檢測確定嘧啶代謝能力的有用性。
(1)確定嘧啶代謝能力的制劑的制備2-13C標(biāo)記的尿嘧啶(Cambridge Isotope Laboratory)(300毫克)溶解在24毫升0.1N的NaOH/鹽水溶液中(是從200毫升0.1N NaOH/鹽水溶液中量出來的，這種溶液是用生理鹽水稀釋2ml的10N NaOH/鹽水溶液而制備的)。然后加入水，以口服形式得到了60毫升確定嘧啶代謝能力的制劑(每10毫升口服溶液包含50毫克2-13C標(biāo)記的尿嘧啶)。
(2)實(shí)驗(yàn)禁食的畢爾格狗被當(dāng)作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。在1組中(n＝3)，上面制備的確定嘧啶代謝能力的制劑以口服施用(50毫克/10毫升/身體)(測試組)。在2組中(n＝3)，以實(shí)施例1(2)中相同的方式制備的(E)-5-(2-溴代乙烯基)-尿嘧啶制劑(DPD抑制劑)通過口服施用(83.3毫克/15毫升/身體)，1小時(shí)后，確定嘧啶代謝能力的制劑用和1組(對照組尿嘧啶代謝紊亂動(dòng)物模型)相同的方式通過口服施用(50毫克/10毫升/身體)。在兩組中，通過口服施用確定嘧啶代謝能力的制劑后，為了洗凈殘留在試管中的制劑，用制劑施用中使用的試管強(qiáng)制性口服施用10毫升水。在兩組中，呼氣在確定嘧啶代謝能力的制劑施用前和制劑施用后的15、30、45、60、75、90、105、120、135、150、180、210和240分鐘時(shí)收集。收集的呼氣中排出的13C標(biāo)記的CO2的濃度用和實(shí)施例1相同的方式來檢測，使用GC-MS分析儀(ABCA-G，Europa Scientific)。圖3所示為測試組(-◆-)和對照組(-■-)的結(jié)果。在圖3中，橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)的定義和實(shí)施例1中的相同。
正如圖3一目了然，在測試組中，當(dāng)本發(fā)明中的制劑通過口服施用后，觀察到2-13C標(biāo)記的尿嘧啶得以代謝，并在呼氣中以13CO2排出，和靜脈施用的情況(實(shí)施例1)類似。另一方面，在通過提前施用DPD的抑制劑人為創(chuàng)造尿嘧啶紊亂的動(dòng)物模型(對照組)中，呼氣中排出的13CO2顯著地降低。這樣，通過檢查呼氣中13CO2的排出行為，就證明了包含作為活性成分的2-13C標(biāo)記的尿嘧啶的本發(fā)明制劑的使用(以口服形式)，使得檢測和評價(jià)尿嘧啶代謝紊亂(尿嘧啶代謝能力的下降)的存在或不存在成為可能，尿嘧啶代謝紊亂是由DPD活性的抑制或降低引起的。
實(shí)施例1和實(shí)施例2中獲得的結(jié)果證明了本發(fā)明制備的制劑，通過使用呼氣，能用來輕易和準(zhǔn)確地確定體內(nèi)嘧啶代謝紊亂的存在或不存在(嘧啶代謝能力下降或上升)。
實(shí)施例3在50毫升份的0.05N NaOH中，分別溶入56.5毫克、113.1毫克、226.2毫克和452.3毫克2-13C標(biāo)記的尿嘧啶(Cambridge IsotopeLaboratory)，以制得濃度各為10μmol/ml、20μmol/ml、40μmol/ml和80μmol/ml的溶液。這些溶液用狗用口腔試管強(qiáng)制性口服施用給禁食的雄性畢爾格狗(n＝3)，用量是1ml/kg體重(劑量10、20、40和80μmol/kg)，此后，水以2ml/kg體重的數(shù)量強(qiáng)制性口服施用給狗。呼氣在施用前以及施用后15、30、45、60、75、90、105、120、135、150、180、210和240分鐘時(shí)分別收集，然后，測量呼氣中13C標(biāo)記的CO2濃度，以及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(曲線下的面積(AUC)以及最大的13C標(biāo)記的CO2濃度(Cmax))從呼氣中獲得的13C標(biāo)記的CO2濃度過渡曲線中計(jì)算出來。
圖4所示為呼氣中13C標(biāo)記的CO2濃度的過渡曲線。圖5和圖6分別表示劑量(μmol/kg體重)和曲線下面積(AUC)的關(guān)系，以及呼氣中劑量和最大的13C標(biāo)記的CO2濃度(Cmax)的關(guān)系。
圖4顯示呼氣中13C標(biāo)記的CO2濃度在施用后15-30分鐘達(dá)到最大值，然后快速下降。如圖5和圖6所示，AUC和Cmax相對劑量的圖表是幾乎通過原點(diǎn)的直線，這表明劑量和AUC以及劑量和Cmax是線性關(guān)系。這意味著呼氣中2-13C標(biāo)記的尿嘧啶的排出動(dòng)力學(xué)在劑量為10-80μmol/kg體重時(shí)是線性的。
當(dāng)含有2-13C標(biāo)記的尿嘧啶的本發(fā)明制劑以40μmol/kg體重的劑量通過口服施用給嘧啶代謝能力未知的被試者，以及從呼氣中13C標(biāo)記的CO2濃度中測量最大的13C標(biāo)記的CO2濃度(Cmax)，并發(fā)現(xiàn)是50‰時(shí)，從圖6可以確定，被試者中的嘧啶代謝能力降低到正常嘧啶代謝能力的大約1/2。(在圖6中，Cmax＝50‰對應(yīng)于其中2-13C標(biāo)記的尿嘧啶按20μmol/kg體重施用的情形)。
制劑實(shí)施例1把甘露醇(1400毫克)和2-13C標(biāo)記的尿嘧啶(Cambridge IsotopeLaboratory)(100毫克)混合在一起，用常規(guī)方法配制成顆粒。
制劑實(shí)施例2把甘露醇(900毫克)和2-13C標(biāo)記的尿嘧啶(Cambridge IsotopeLaboratory)(100毫克)混合在一起，并配制成微小顆粒。
工業(yè)實(shí)用性根據(jù)本發(fā)明用于確定嘧啶代謝能力的制劑或方法使得利用呼氣來非侵入性評價(jià)單個(gè)被試者中嘧啶代謝能力成為可能。具體而言，本發(fā)明的制劑和方法能合適地用來檢測嘧啶代謝紊亂(下降或上升)的存在或不存在，嘧啶代謝紊亂是由嘧啶代謝酶缺失或其活性下降或上升引起的，或用來檢測和評估紊亂的程度。這樣，氟尿嘧啶藥物如5-氟尿嘧啶的治療效果或副作用可以通過使用本發(fā)明的制劑或方法，評估被試者中嘧啶代謝能力而得以預(yù)測。換句話說，本發(fā)明的制劑和方法在篩選適合施用氟尿嘧啶藥物的被試者方面是有用的。這種篩選防止由藥物引起的嚴(yán)重副作用，進(jìn)一步，使用本發(fā)明的制劑或方法，根據(jù)確定的嘧啶代謝能力，可以建立一種適合單個(gè)被試者的氟尿嘧啶藥物的劑量用法。因此，本發(fā)明的制劑和方法使用氟尿嘧啶藥物可有助于一種安全、有效的治療(癌癥治療)。
權(quán)利要求
1.一種用于確定嘧啶代謝能力的制劑，其包含作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物，在所述化合物中，碳、氧和氮原子中至少一種被標(biāo)記上同位素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中嘧啶化合物是二氫嘧啶脫氫酶的底物或該底物的前體，二氫嘧啶脫氫酶是嘧啶代謝酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中嘧啶代謝化合物是二氫嘧啶酶或β-脲基丙酸酶的底物，這兩種酶均是嘧啶代謝酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中嘧啶化合物是選自尿嘧啶、5-氟尿嘧啶和胸腺嘧啶中的至少一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中嘧啶化合物是選自去氧氟尿苷、替加氟和卡莫氟中的至少一種二氫嘧啶脫氫酶底物前體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中嘧啶代謝化合物是選自二氫尿嘧啶、5-氟二氫尿嘧啶、二氫胸腺嘧啶、β-脲基丙酸、氟-β-脲基丙酸和β-脲基異丁酸中的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其包含作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物，在所述化合物中，碳和氧原子中的至少一種被標(biāo)記上同位素，所述制劑在給被試者施用后能產(chǎn)生同位素標(biāo)記的CO2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中同位素是選自13C、14C、18O和15N中的至少一種。
9.一種確定嘧啶代謝能力的方法，其包括如下步驟給被試者施用權(quán)利要求1所述的制劑，并檢測從身體排出的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為。
10.一種確定嘧啶代謝能力的方法，其包括如下步驟給被試者施用權(quán)利要求1所述的制劑，并檢測呼氣中同位素標(biāo)記的CO2的排出行為。
11.一種評價(jià)被試者中嘧啶代謝能力的方法，其包含如下步驟給被試者施用權(quán)利要求1所述的制劑，檢測從身體排出的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，以及評價(jià)從被試者中獲得的排出行為。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其包含下列步驟給被試者施用權(quán)利要求1所述的制劑，檢測呼氣中同位素標(biāo)記的CO2的排出行為，以及評價(jià)從被試者中獲得的CO2的排出行為。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其包含如下步驟給被試者施用權(quán)利要求1所述的制劑，檢測同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，以及將被試者中獲得的排出行為或從中獲得的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和具正常嘧啶代謝能力的健康被試者中相應(yīng)的排出行為或參數(shù)進(jìn)行比較。
14.一種確定被試者嘧啶代謝紊亂的存在、不存在或程度的方法，其包含如下步驟給被試者施用權(quán)利要求1所述的制劑，檢測從身體排出的同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，以及評價(jià)從被試者中獲得的排出行為。
15.一種篩選適合施用氟尿嘧啶藥物的被試者的方法，其包含如下步驟給被試者施用權(quán)利要求1所述的制劑，檢測同位素標(biāo)記的代謝物的排出行為，以及根據(jù)被試者中獲得的排出行為來確定施用氟尿嘧啶藥物的適宜性。
16.一種篩選適合施用氟尿嘧啶藥物的被試者的方法，其包含如下步驟給被試者施用權(quán)利要求1所述的制劑，檢測呼氣中同位素標(biāo)記的CO2的排出行為，以及根據(jù)被試者中獲得的CO2的排出行為來確定施用氟尿嘧啶藥物的適宜性。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中氟尿嘧啶藥物選自5-氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟和去氧氟尿苷中的至少一種抗癌藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種方法，用來檢測和評價(jià)單個(gè)被試者代謝不同氟尿嘧啶藥物，如5－氟尿嘧啶的能力。這些氟尿嘧啶藥物在嘧啶代謝途徑中被降解。本發(fā)明也提供一種用于檢測和評價(jià)的制劑。本發(fā)明的實(shí)施步驟如下施用一種制劑用于確定嘧啶代謝能力，這種制劑包含作為活性成分的嘧啶化合物或嘧啶代謝化合物，所述化合物充當(dāng)嘧啶代謝酶的底物，其中碳、氧和氮原子中至少一種被標(biāo)記上同位素，以及根據(jù)排出的代謝物的行為評價(jià)體內(nèi)嘧啶代謝能力。
文檔編號A61K49/18GK1498116SQ0280642
公開日2004年5月19日 申請日期2002年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2001年3月13日
發(fā)明者稲田睦, 池井暢浩, 野野村英二, 入江康夫, 夫, 浩, 田睦, 英二 申請人:大塚制藥株式會(huì)社, 大 制藥株式會(huì)社