專利名稱：用于改進(jìn)抗炎治療的細(xì)胞靶向的免疫細(xì)胞特異性大環(huán)內(nèi)酯化合物與抗炎化合物的共軛物的制作方法
技術(shù)問題本發(fā)明涉及通用結(jié)構(gòu)I所示新的抗炎化合物、其鹽和溶劑化物、其制備方法及這些化合物在治療人類和動(dòng)物的炎性疾病和病癥中的應(yīng)用。
現(xiàn)有技術(shù)抗炎藥物分為甾族和非甾族的。甾族抗炎化合物仍是治療炎性疾病和病癥如哮喘、慢性阻塞性肺病、炎性鼻病如過敏性鼻炎、鼻息肉、腸道疾病如克羅恩氏病、結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、皮炎如濕疹、牛皮癬、過敏性皮炎、神經(jīng)性皮炎、瘙癢癥、結(jié)膜炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中最有效的。除優(yōu)異的效力和療效之外，此類藥物對(duì)例如對(duì)碳水化合物代謝、鈣吸收、內(nèi)生皮質(zhì)甾族化合物的分泌以及對(duì)腦垂體、腎上腺皮質(zhì)和胸腺的生理機(jī)能也有許多不利的影響。迄今開發(fā)的甾族化合物對(duì)炎性病癥和過程很有效，因?yàn)樗鼈円种圃S多炎性介導(dǎo)物而其全身不利效應(yīng)減小。專利申請(qǐng)WO94/13690、WO94/14834、WO92/13873和WO92/13872公開了設(shè)計(jì)用于在發(fā)炎部位局部施用的所謂“軟”甾族化合物或可水解的皮質(zhì)甾族化合物，而因“軟”甾族化合物在血清中的不穩(wěn)定性使其全身不利效應(yīng)減小，所述活性甾族化合物在血清中極快地水解成非活性形式。但還需尋找在如控制哮喘或克羅恩氏病等疾病所需的長(zhǎng)期連續(xù)治療中沒有不利效應(yīng)的理想的甾族化合物，一直在深入地尋找和開發(fā)具有改善的治療性能的甾族化合物。
不同機(jī)理的非甾族抗炎藥物對(duì)特殊的炎癥介導(dǎo)物起作用，從而提供治療作用。由于作用機(jī)理不同和對(duì)特殊炎癥介導(dǎo)物的抑制作用不同，甾族和非甾族藥物有不同的抗炎效果特征，因而在特定的病情中可擇一或擇優(yōu)地使用。不幸的是非甾族抗炎藥物不是絕對(duì)特異性的，而且以較大濃度或長(zhǎng)期使用時(shí)顯示出不利效應(yīng)。已知許多非甾族抗炎藥物作為內(nèi)生COX-1酶的抑制劑，該酶在保持胃粘膜的完整性方面極為重要。因此，使用這些藥物導(dǎo)致許多患者胃粘膜損傷和出血。對(duì)于某些抗炎藥物(茶堿)而言，已知其治療指數(shù)極窄，限制了它們的使用。
大環(huán)內(nèi)酯抗生素在不同機(jī)體細(xì)胞內(nèi)、尤其是吞噬細(xì)胞如單核外周血細(xì)胞、腹膜和肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)以及圍繞支氣管肺胞上皮的液體中積累(Glaude R.P.et al，Antimicrob.Agents Chemother.，331989，277-282；Olsen K.M.et al，Antimicrob.AgentsChemother.，40 1996，2582-2585)。此外，該文獻(xiàn)中還描述了某些大環(huán)內(nèi)酯的較弱抗炎作用。因此，近來已描述了紅霉素衍生物(J.Antimicrob.Chemother.，41，1998，37-46；WO 00/42055)和阿齊霉素衍生物(EP 0283055)的抗炎作用。從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體外和體內(nèi)研究如小鼠中zimosane誘導(dǎo)的腹膜炎(J.Antimicrob.Chemother.30，1992，339-348)和小鼠氣管中內(nèi)毒素誘導(dǎo)的中性白細(xì)胞的聚集(J.Immunol.159，1997，3395-4005)也知道了某些大環(huán)內(nèi)酯的抗炎作用。大環(huán)內(nèi)酯對(duì)細(xì)胞因子如白細(xì)胞間介素8(IL-8)(Am.J.Respir.Crit.Care.Med.156，1997，266-271)或白細(xì)胞間介素5(IL-5)(EP0775489和EP0771564)的調(diào)節(jié)作用也是已知的。
技術(shù)方案結(jié)構(gòu)I的化合物在其作用機(jī)理方面不同于迄今已知的化合物，特征在于選擇性在上述炎性病癥和疾病的靶器官和細(xì)胞中積累。結(jié)構(gòu)I所示新化合物的此作用因所述特異性藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)由大環(huán)內(nèi)酯部分M而產(chǎn)生。此藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)使結(jié)構(gòu)I所示化合物能通過抑制炎癥介導(dǎo)物的產(chǎn)生而僅在炎癥細(xì)胞本身內(nèi)專門在發(fā)炎部位起作用。以此方式避免皮質(zhì)甾族和非甾族抗炎化合物的不利的全身效應(yīng)。局部施用后，所述分子迅速積聚在炎癥細(xì)胞內(nèi)，在其中通過抑制細(xì)胞因子和趨化因子(chemokines)以及其它炎癥介導(dǎo)物的產(chǎn)生從而抑制炎癥。根據(jù)已知和確定的現(xiàn)有技術(shù)，迄今尚未描述作為本發(fā)明目的的結(jié)構(gòu)I所示化合物、其藥理上可接受的鹽及包含其的藥物制劑。此外，作為本發(fā)明目的的化合物均未描述作為抗炎物質(zhì)或發(fā)炎組織中嗜酸粒細(xì)胞積累的抑制劑。
本發(fā)明的目的是結(jié)構(gòu)I所示新化合物、其鹽和溶劑化物 其中M代表具有在炎癥細(xì)胞中積累的性質(zhì)的大環(huán)內(nèi)酯亞單元，A代表抗炎亞單元，其可以是甾族或非甾族的，L代表連接M和A的鏈，以及這些化合物在治療炎性疾病和病癥中改進(jìn)的療效。
更具體地，本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)I所示化合物、其鹽和溶劑化物，其中M代表下式所示大環(huán)內(nèi)酯亞單元 其中R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基
-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基 R4和R5也可一起形成羰基，條件是R1則為甲基； 其中R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4可為有1-4個(gè)碳原子的烷基，優(yōu)選甲基；
其中R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示的氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基 R4和R5也可一起形成羰基，條件是R1則為甲基； 其中
R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示的氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基 其中R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基
R5可為有1-4個(gè)碳原子的任何烷基，優(yōu)選甲基； 其中R1為氫或乙酰基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基 R5可為有1-4個(gè)碳原子的任何烷基，優(yōu)選甲基，
A為下式所示抗炎亞單元 其中Z代表氧或NH基，R1為氫或羥基或O-?；騉-烷基，R2代表氫或甲基，可定位在α-或β-位，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴，1，2-位可代表雙或單碳-碳鍵； 其中Z代表氧或NH基，R1為氫或羥基或O-?；騉-烷基，R2代表氫或?；?，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，
其中鹵素指氟、氯或溴； 或其立體異構(gòu)形式，其中所述1，2-位代表飽和或不飽和雙鍵，其中Z代表氧或NH基，R1為氫、有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，R2為氫、有1-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，條件是R1和R2不同時(shí)為氫，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴； 或其立體異構(gòu)形式，其中所述1，2-位代表飽和或不飽和雙鍵，其中Z為氧或NH基，
R1為氫、有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，R2為氫、有1-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，條件是R1和R2不同時(shí)為氫，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴； 或其立體異構(gòu)形式，其中所述1，2-位代表飽和或不飽和雙鍵，R1為氫、有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，R2為氫、有1-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，條件是R1和R2不同時(shí)為氫，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴，優(yōu)選氟；
其中Z為氧或NH基，R1為氫或有自由氫的羥基或羥基或O-?；騉-烷基，R2為氫或甲基，可定位在α-或β-位，R2為氫或有1-4個(gè)碳原子的酸基，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴，優(yōu)選氟，1，2-位可代表雙或單碳-碳鍵，并且L為下式的鏈-CR1R2(CR3R4)nCR5R6-，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6可為氫、C1-C4-烷基、芳基、甲氧基、鹵素、羥基或巰基，其中n為1-10，和一或多個(gè)-CR3R4-基可被另外帶有氫或C1-C4烷基或芳基的氧、硫、芳環(huán)或氨基取代，或者R1、R2、R3、R4、R5、R6也可一起形成鏈中的一或多個(gè)雙或三鍵，從而形成鏈烯基或鏈炔基，條件是至少一個(gè)亞甲基位于L連接基的端部。
所述鏈通過官能團(tuán)如酰胺、尿酸酯(ureates)、氨基甲酸酯、醚、酯或通過烷基-烷基或碳-碳鍵共價(jià)地連接亞單元M和A。
如果沒有其它規(guī)定，本發(fā)明中所用術(shù)語如下定義。
“烷基”指由其衍生出基團(tuán)的一價(jià)烷烴(烴)，其可以是直鏈、支鏈、環(huán)狀或直鏈和環(huán)狀烴和支鏈和環(huán)狀烴的組合。優(yōu)選的直鏈或支鏈烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基和叔丁基。優(yōu)選的環(huán)烷基包括環(huán)戊基和環(huán)己基。烷基還代表包括或被環(huán)烷基部分間斷的直鏈或支鏈烷基。
“烯基”指包含至少一個(gè)碳-碳雙鍵的烴基，為直鏈、支鏈、環(huán)狀或直鏈和環(huán)狀烴和支鏈和環(huán)狀烴的組合。主要指乙烯基、丙烯基、丁烯基和環(huán)己烯基。如前面針對(duì)“烷基”所述，烯基也可以是直鏈、支鏈或環(huán)狀的，其中所述烯基的一部分可包括雙鍵，討論取代烯基時(shí)也可被取代。烯基還代表包括或被環(huán)烯基部分間斷的直鏈或支鏈烯基。
“炔基”指包括至少一個(gè)和至多三個(gè)碳-碳三鍵的直鏈或支鏈的烴基。主要指乙炔基、丙炔基和丁炔基。
“芳基”指芳環(huán)如苯基、取代苯基或類似基團(tuán)以及稠環(huán)如萘基等。芳基包括碳原子之間有交替的雙鍵(共振)的含有至少6個(gè)碳原子的至少一個(gè)環(huán)或共有10個(gè)碳原子的兩個(gè)環(huán)(主要為苯基和萘基環(huán))。芳基還可被一或兩個(gè)取代基取代，所述取代基可以是鹵素(氟、氯或溴)和羥基、C1-C7烷基、C1-C7烷氧基或芳氧基、C1-C7烷硫基或芳硫基、烷基磺?；?、氰基或氨基。
本發(fā)明另一目的涉及結(jié)構(gòu)I所示化合物的制備方法。
這些化合物可由通用結(jié)構(gòu)A1至A6所示相應(yīng)的甾族部分(其中所有基團(tuán)和符號(hào)都有針對(duì)亞結(jié)構(gòu)A1至A6所定義的意義)和通用結(jié)構(gòu)M1至M6所示大環(huán)內(nèi)酯中間體通過適當(dāng)?shù)腖官能基團(tuán)使它們連接而制備。以類似方式也可用非甾族抗炎亞單元通過它們適于鍵合的自由官能團(tuán)制備結(jié)構(gòu)I所示化合物。
由結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所示甾族亞單元的羧酸，其如文獻(xiàn)中所述制備(Suzuki，T.et al，Chem.Soc.，Perkin Trans.1 1998，3831-3836)、(McLean，H.M.et al，J.Pharm.Sci.1994，83，476-480)、(Little，R.J.et al，Pharm.Res.1999，16，961-967)、(Kertesz D.J.et al，J.Org.Chem.1986，51，2315-2328)、(Bodor N.S.US4，710 495，1987)，可制備通式I的化合物，其中利用在無水二氯甲烷中在堿如三乙胺存在下在室溫下氬氣流中用碳二亞胺(carboxydiimide)和苯并三唑(HOBT)活化形成酰胺鍵(方案1)。
方案1
大環(huán)內(nèi)酯亞單元與甾族亞單元的連接通過酯鍵發(fā)生時(shí)，所述合成通過大環(huán)內(nèi)酯中間體M7進(jìn)行。
方案2所述大環(huán)內(nèi)酯2’位的酯化可通過在無水二氯甲烷中在新戊酰氯、三乙胺和二甲氨基吡啶(DMAP)存在下與鹵素取代的酸反應(yīng)完成，從而形成中間體M7用于與亞單元A的羧酸連接(方案2)。
在如結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所示甾族亞單元的情況下，該中間體可進(jìn)一步與亞單元A的羧基官能團(tuán)反應(yīng)。
該反應(yīng)在無水DMF中在堿如碳酸鉀(K2CO3)存在下在氬氣流中進(jìn)行，產(chǎn)生所述酸的鉀鹽，在其與大環(huán)內(nèi)酯中間體的反應(yīng)中得到本發(fā)明化合物I(方案3)。
方案3所述大環(huán)內(nèi)酯亞單元指M2(3位不合克拉定糖的大環(huán)內(nèi)酯)時(shí)，也可通過酯鍵與抗炎亞單元A偶聯(lián)，此時(shí)需制備中間體M8和M9(方案4)。
方案4
與亞單元A的羧基的酯化作用因大環(huán)內(nèi)酯M9(也是反應(yīng)性的)的被保護(hù)的2’羥基而選擇性地發(fā)生。
方案5來自M1所示大環(huán)內(nèi)酯亞單元的結(jié)構(gòu)I的化合物的合成由中間體進(jìn)行，所述中間體的合成描述在Agouridas C.，J.Med.Chem.1998，41，4080-4100中，以其中所述方式并用其中所述試劑合成。由所述中間體M10，利用碳酸鉀在無水DMF中于室溫下與帶有羧基官能團(tuán)的抗炎亞單元A反應(yīng)合成結(jié)構(gòu)I的化合物(方案6)。
方案6包含化合物M3作為大環(huán)內(nèi)酯單元的通用結(jié)構(gòu)I的化合物通過使改性的抗炎單元A8與大環(huán)內(nèi)酯M3連接合成，大環(huán)內(nèi)酯M3按已經(jīng)提及的方法(Agouridas C.，J.Med.Chem.1998，41，4080-4100)制備。所述抗炎中間體A8由抗炎化合物的酸和相應(yīng)被保護(hù)的二胺(僅從一側(cè)進(jìn)行Boc-保護(hù))在羥基苯并三唑和EDC存在下在適合的溶劑優(yōu)選二氯甲烷或DMF中制備。獲得相應(yīng)的酰胺A7之后，末端氨基的脫保護(hù)用TFA在二氯甲烷中于室溫下進(jìn)行(方案7)。
方案7
使按方案7得到的中間體在乙腈中于氮?dú)饬飨屡c用碳二亞胺活化并在2’，4”位包含被保護(hù)羥基的大環(huán)內(nèi)酯亞單元M12反應(yīng)(方案8)。
方案8如果所述甾族亞單元如通用結(jié)構(gòu)A5所示，其中所有基團(tuán)和基團(tuán)都有上述定義中所述意義，則與大環(huán)內(nèi)酯基團(tuán)的偶聯(lián)反應(yīng)通過按文獻(xiàn)(HU 55409)得到的中間體A9和大環(huán)內(nèi)酯羥基的酯化進(jìn)行(方案9)。
方案9本發(fā)明另一目的涉及通用結(jié)構(gòu)I的化合物作為抗炎、抗過敏和免疫調(diào)節(jié)劑的用途，取決于發(fā)炎部位其可以不同方式給藥，例如經(jīng)皮、口服、面頰、直腸、腸道外或需要在呼吸道內(nèi)局部施用時(shí)通過吸入法給藥。
本發(fā)明另一目的涉及此藥物形式的化合物的制劑以實(shí)現(xiàn)所述活性化合物I的最佳生物利用率。對(duì)于經(jīng)皮給藥而言，可以軟膏或霜?jiǎng)⒛z或洗劑形式制備化合物I。軟膏、霜?jiǎng)┖湍z可用水或油基在添加適當(dāng)乳化劑或膠凝劑(配制凝膠形式時(shí))的情況下配制。劑型對(duì)于呼吸吸入尤為重要，其中化合物I在加壓下可為氣溶膠形式。對(duì)于所有氣霧劑形式而言，建議使預(yù)先在乳糖、葡萄糖、高級(jí)脂肪酸、琥珀酸二辛酯磺酸鈉鹽中或最優(yōu)選在羧甲基纖維素中均化的化合物I微粉化以達(dá)到大多數(shù)粒子的粒徑為5μm。對(duì)于吸入劑型而言，可使所述氣溶膠與用于噴射活性物質(zhì)的推進(jìn)劑混合。
吸入法施用的化合物I可以微粉化顆粒的干粉形式使用。
所述化合物也可摻入用于治療克羅恩氏病的制劑中，可口服或直腸給藥。用于口服使用的制劑必須這樣配制以使所述化合物能在腸的發(fā)炎部分被生物利用。這可通過緩釋制劑的不同組合實(shí)現(xiàn)。如果化合物I以灌腸劑形式使用，該化合物還可用于治療克羅恩氏病和炎性腸道疾病，對(duì)其可使用適合的制劑。
作為本發(fā)明目的的所述化合物的適合制劑可用于預(yù)防或治療不同的疾病和炎性病癥包括哮喘、慢性阻塞性肺病、炎性鼻病如過敏性鼻炎、鼻息肉、腸道疾病如克羅恩氏病、結(jié)腸炎、腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、皮炎如濕疹、牛皮癬、過敏性皮炎、神經(jīng)性皮炎、瘙癢癥、結(jié)膜炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
本發(fā)明化合物的療效在以下體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中測(cè)定。
與人類糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合的試驗(yàn)通過逆聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)克隆α-異構(gòu)形式的人糖皮質(zhì)激素受體的基因。按制造商(Qiagen)的說明書從人外周血淋巴細(xì)胞中分離全部RNA，用AMV逆轉(zhuǎn)錄酶(Roche)轉(zhuǎn)錄至cDNA中，通過特異性引物繁殖所述基因1)5’ATATGGATCCCTGATGGACTCCAAAGAATCATTAACTCC 3’2)5’ATATCTCGAGGGCAGTCACTTTTGATGAAACAGAAG3’將所得反應(yīng)產(chǎn)物克隆至Bluescript KS質(zhì)粒(Stratagene)的XhoI/BamHI位點(diǎn)，用M13和M13rev引物(Mycrosynth)通過雙脫氧熒光法測(cè)序，然后克隆至pcDNA3.1 hygro(+)質(zhì)粒(Invitrogen)的XhoI/BamHI位點(diǎn)。將1×105COS-1細(xì)胞接種至12孔平板(Falcon)的具有10％FBS(Biowhitaker)的DMEM培養(yǎng)基(Life Technologies)中，在有5％CO2的氣氛中于37℃下培養(yǎng)至70％匯合。除去培養(yǎng)基，每個(gè)孔中加入在500μl DMEM中的1μg DNA、7μl PLUS試劑和2μlLipofectamine(Life Technologies)。使細(xì)胞在有5％CO2的氣氛中于37℃下孵育，5小時(shí)后加入相同體積的20％FBS/DMEM。24小時(shí)后所述培養(yǎng)基完全改變。轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，加入在DMEM培養(yǎng)基中的不同濃度的測(cè)試化合物和24nM[3H]地塞米松(Pharmacia)。使細(xì)胞在有5％CO2的氣氛中于37℃下孵育90分鐘，用PBS緩沖液(Sigma)洗三遍，冷卻至4℃(pH＝7.4)，然后溶于有0.2％SDS(Sigma)的Tris緩沖液(Sigma)中。加入U(xiǎn)ltimaGold XR(Packard)閃爍液之后，在Tricarb(Packard)β-閃爍計(jì)數(shù)器中讀取殘余放射性。
化合物9、10和27能在糖皮質(zhì)激素受體上的結(jié)合部位與放射性地塞米松競(jìng)爭(zhēng)。
在細(xì)胞中引入甾族化合物的試驗(yàn)在75cm2燒瓶中在有10％FBS(CHO)的Hamm F 12培養(yǎng)基(LifeTechnologies)或有10％FBS(COS-1)的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)至匯合。將1μM的總計(jì)2μCi活性的放射性化合物10加至所述細(xì)胞之上，在有5％CO2的氣氛中于37℃下孵育90分鐘。收集細(xì)胞上清液，使細(xì)胞溶解，然后讀取細(xì)胞溶解產(chǎn)物以及細(xì)胞上清液中的放射性。化合物10能以比上清液中更大的濃度聚積在細(xì)胞中。
抑制細(xì)胞凋亡(apoptose)誘導(dǎo)所致的小鼠T-細(xì)胞雜交瘤13增生的試驗(yàn)在96孔的平板中對(duì)在有10％PBS的RPMI培養(yǎng)基(Imunoloskizavod)中的測(cè)試的甾族化合物稀釋液的三份樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。向所述化合物的溶液中加入每孔20 000個(gè)細(xì)胞，并在有5％CO2的氣氛中于37℃下孵育過夜，然后加入1μCi的[3H]胸苷(Pharmacia)，再孵育3小時(shí)。通過在GF/C過濾器(Packard)上吸取收獲所述細(xì)胞。在每個(gè)孔上加入30μl Microscynt O閃爍液(Packard)，在β-閃爍計(jì)數(shù)器(Packard)上測(cè)量摻入的放射性。通過拮抗米非司酮(mifepristone)(Sigma)對(duì)增生的抑制作用證明糖皮質(zhì)激素對(duì)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用的特異性。
化合物8、9、10和27顯示出對(duì)細(xì)胞雜交瘤13增生的抑制作用。
抑制白細(xì)胞間介素-2生成的試驗(yàn)在96孔的平板上，每孔加入15ng 2C11抗體(Pharmingen)，在4℃下使之吸附在PBS緩沖液(pH＝7.4)中過夜。除去PBS，將所述平板用RPMI培養(yǎng)基洗滌，然后每孔加入50 000個(gè)細(xì)胞，在有和沒有測(cè)試化合物稀釋液的情況下在所述培養(yǎng)基中孵育。通過專用于小鼠IL-2的ELISA(R & D Systems)測(cè)量上清液中IL-2的濃度。
化合物9、10和27顯示出對(duì)因CD3受體刺激誘導(dǎo)白細(xì)胞間介素-2生成的抑制作用。
表2
ND-未測(cè)定巴豆油誘導(dǎo)的耳水腫模型將體重為200-250g的雄性Sprague Dawley大鼠任意分成幾組，做標(biāo)記，用數(shù)字式卡尺測(cè)量初始耳厚。
對(duì)照組每耳施用50μl溶劑(丙酮，Kemika)。也以相同的方式施用溶于丙酮中的1mg/耳劑量的測(cè)試化合物或標(biāo)樣(1mg/耳的地塞米松，Krka)。30分鐘后，用20％巴豆油(Sigma)誘導(dǎo)耳水腫。施用巴豆油后5小時(shí)達(dá)到最大炎癥強(qiáng)度。通過對(duì)比接受治療動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物的耳部確定耳水腫抑制率。此模型中，對(duì)化合物10進(jìn)行測(cè)試，其顯示出與測(cè)試標(biāo)樣類似的活性。
小鼠肺嗜酸粒細(xì)胞增多的模型將體重為20-25g的雄性Balb/C小鼠任意分成幾組。在第O天和第14天通過i.p.注射卵白蛋白(OVA，Sigma)使之增敏。在第20天，使小鼠經(jīng)受i.n.施用OVA(陽性對(duì)照或測(cè)試組)或PBS(陰性對(duì)照)的誘發(fā)試驗(yàn)。i.n.施用OVA后48小時(shí)，使動(dòng)物麻醉，用1ml PBS洗肺。在Cytospin 3細(xì)胞離心機(jī)(Shandon)上分離細(xì)胞。使細(xì)胞在Diff-Quick(Dade)中染色，通過至少100個(gè)細(xì)胞的微分計(jì)數(shù)法確定嗜酸粒細(xì)胞的百分率。
在陽性和陰性對(duì)照中用氟替松和倍氯米松作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
在誘發(fā)試驗(yàn)前2天直至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)以不同的劑量每天i.n.或i.p.施用所述化合物。
相對(duì)于陽性對(duì)照而言，化合物8、9和10在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著地(t-試驗(yàn)，p＜0.05)減少肺洗液中嗜酸粒細(xì)胞的數(shù)量。
化合物對(duì)胸腺重量的影響將體重為200g的雄性Sprague Dawley大鼠任意分成六組。給麻醉的動(dòng)物s.c.背部植入已滅菌和稱重的濾紙片。對(duì)照組中所述濾紙片用丙酮浸漬，而測(cè)試組中用標(biāo)樣(潑尼松龍，Sigma)或化合物10浸漬。7天后，使動(dòng)物睡覺，分離其胸腺并稱重。通過對(duì)比測(cè)試和對(duì)照組的胸腺重量評(píng)價(jià)全身效應(yīng)。
相對(duì)于對(duì)照而言，所述標(biāo)樣在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著地使胸腺重量減輕，而化合物10不影響胸腺重量。
制備方法與實(shí)施例通過以下實(shí)施例舉例說明但決不限制本發(fā)明。
實(shí)施例1中間體M11，其中R4代表克拉定糖基(9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(homoerythromycin A))
向9-脫氧-9a-氮雜-9a-(β-氰乙基)-9a-高紅霉素A(3g；3.8mmol)的乙醇(100ml)溶液中加入500mg PtO2。在高壓釜中在2天的時(shí)間內(nèi)于40bar的壓力下進(jìn)行反應(yīng)。然后將反應(yīng)混合物過濾，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上使乙醇蒸發(fā)。殘留物在硅膠柱上純化(洗脫劑CH3OH∶CH2Cl2∶NH4OH＝50∶30∶2)。得到700mg純產(chǎn)品。MS(ES+)∶793(MH+)中間體M11，其中R4代表羥基按實(shí)施例1中所述方法由3-脫克拉定糖基-9-脫氧-9a-氮雜-9a-(β-氰乙基)-9a-高紅霉素A(3.5g；5.55mmol)制備中間體M11。得到985mg產(chǎn)品。MS(ES+)∶635(MH+)實(shí)施例2中間體M7，其中R4代表克拉定糖基向5-溴戊酸(1.282g；7.07mmol)的無水CH2Cl2(10ml)溶液中加入1ml(7.23mmol)三乙胺、868mg(7.10mmol)4-二甲氨基吡啶和0.940ml(7.63mmol)新戊酰氯。將該溶液在室溫下氮?dú)饬髦袛嚢?小時(shí)，然后加入阿齊霉素(2g；2.67mmol)的無水CH2Cl2(10ml)溶液。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3天。然后向反應(yīng)混合物中加入60ml飽和NaHCO3溶液，使層分離。水層用40ml CH2Cl2萃取兩遍?；旌系挠袡C(jī)萃取物用飽和NaCl溶液洗滌，經(jīng)K2CO3干燥，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸發(fā)。所得油狀產(chǎn)品在硅膠柱上純化(洗脫劑CH2Cl2∶CH3OH∶NH4OH＝90∶9∶1.5)。得到511mg純產(chǎn)品。MS(ES+)912(MH+)按實(shí)施例2中所述方法制備中間體M7和M9。
中間體M7，其中R4代表羥基由3-脫克拉定糖基(decladynosyl)阿齊霉素(1g；1.71mmol)和5-溴戊酸(929mg；5.13mmol)制備中間體M7。得到400mg產(chǎn)品。
MS(ES+)754(MH+)中間體M9由2’-乙酰基-3-脫克拉定糖基阿齊霉素(1.1g；1.70mmol)和5-溴戊酸(921mg；5.09mmol)制備中間體M9。得到329mg產(chǎn)品。
MS(ES+)795(MH+)
實(shí)施例3化合物1向在氬氣下冷卻至0℃的9α-氯-6α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(100mg；0.29mmol)的無水CH2Cl2(5ml)懸浮液中加入0.380ml(2.73mmol)三乙胺、80mg(0.59mmol)1-羥基苯并三唑、230mg(0.29mmol)9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A和235mg(1.23mmol)1-(3-二甲氨丙基)3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下氬氣流中攪拌24小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸至較小體積，在硅膠柱上純化(洗脫劑CHCl3∶CH3OH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到224mg白色晶體(表1)。
按實(shí)施例3中所述方法由9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A和相應(yīng)的甾族酸制備化合物2-12，示于表1中。
化合物2通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(230mg；0.29mmol)與11β，17α-二羥基雄甾-1，4-二烯-3-酮-17β-甲酸(100mg；0.29mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(285mg)。
化合物3通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(197mg；0.25mmol)與11β-羥基-17α-甲氧基雄甾-4-烯-3-酮-17β-甲酸(90mg；0.25mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(115mg)。
化合物4通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(174mg；0.22mmol)與9α-氟-11β-羥基16α-甲基-雄甾-1，4-二烯-3-酮-17β-甲酸(80mg；0.22mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(224mg)。
化合物5通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(230mg；0.29mmol)與11β-羥基雄甾-4-烯-3-酮-17β-甲酸(96mg；0.29mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(238mg)。
化合物6通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(230mg；0.29mmol)與9α-氟-11β，17α-二羥基雄甾-1，4-二烯-3-酮-17β-甲酸(106mg；0.29mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(225mg)。
化合物7通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(230mg；0.29mmol)與6α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-雄甾-1，4-二烯-3-酮-17β-甲酸(110mg；0.29mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(107mg)。
化合物8通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(230mg；0.29mmol)與11β，17α-二羥基雄甾-4-烯-3-酮-17β-甲酸(100mg；0.29mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(75mg)。
化合物9通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(230mg；0.29mmol)與6α，9α-二氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基雄甾-1，4-二烯-3-酮-17β-甲酸(115mg；0.29mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(258mg)。
化合物10通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(230mg；0.29mmol)與9α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基雄甾-1，4-二烯-3-酮-17β-甲酸(110mg；0.29mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(224mg)。
化合物11通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(197mg；0.24mmol)與9α-氯-11β，17α-二羥基-16α-甲基雄甾-1，4-二烯-3-酮-17β-甲酸(96mg；0.24mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(170mg)。
化合物12通過9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(230mg；0.29mmol)與17α-羥基雄甾-4-烯-3，11-二酮-17β-甲酸(100mg；0.29mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(247mg)。
實(shí)施例4化合物13將6α，9α-二氟-11β，17α-三羥基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸-16，17-丙酮化物(104mg；0.24mmol)、二異丙基乙胺(45ml；0.26mmol)、1-羥基苯并三唑(65mg；0.48mmol)、9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(190mg；0.24mmol)和1-(3-二甲氨丙基)3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽(184mg；0.96mmol)在無水DMF(10ml)中的混合物在攪拌下于100℃在氬氣氛中加熱回流。然后使反應(yīng)混合物冷卻，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)。殘留物在硅膠柱上純化(洗脫劑CHCl3∶CH3OH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到31mg純產(chǎn)品(表1)。
化合物14按實(shí)施例4中所述方法由6α，9α-二氟-11β，16α，17α-三羥基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸-16，17-丙酮化物(104mg；0.24mmol)和3-脫克拉定糖基-9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(150mg；0.24mmol)制備化合物14。得到60mg產(chǎn)品(表1)。
實(shí)施例5化合物15向在氬氣流中冷卻至0℃的9α-氯-6α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(110mg；0.27mmol)的無水CH2Cl2(5ml)懸浮液中加入0.348ml(2.5mmol)三乙胺、73mg(0.54mmol)1-羥基苯并三唑、169mg(0.27mmol)3-脫克拉定糖基-9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A和215mg(1.12mmol)1-(3-二甲氨丙基)3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸至較小體積，在硅膠柱上純化(洗脫劑CHCl3∶CH3OH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到235mg白色晶體(表1)。
按實(shí)施例5中所述方法制備化合物16-19，示于表1中。
化合物16通過6α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(90mg；0.24mmol)與3-脫克拉定糖基-9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(150mg；0.24mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(138mg)。
化合物17通過6α，9α-二氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(94mg；0.24mmol)與3-脫克拉定糖基-9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(150mg；0.24mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(163mg)。
化合物18通過11β，17α-二羥基雄甾-4-烯-3-酮-17β-甲酸(84mg；0.24mmol)與3-脫克拉定糖基-9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(150mg；0.24mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(112mg)。
化合物19通過9α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(110mg；0.29mmol)與3-脫克拉定糖基-9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A(185mg；0.29mmol)反應(yīng)，得到白色晶體(155mg)。
實(shí)施例6化合物20向氬氣下的(20R，S)-11β，17，20-三羥基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-21-甲酸(200mg；0.53mmol)的無水CH2Cl2(5ml)懸浮液中加入0.760ml三乙胺、160mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、460mg(0.58mmol)9-脫氧-9a-氮雜-9a-(γ-氨丙基)-9a-高紅霉素A和470mg(2.45mmol)1-(3-二甲氨丙基)3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸至較小體積，在硅膠柱上純化(洗脫劑CHCl3∶CH3OH∶NH4OH＝6∶1∶0.1)。得到405mg產(chǎn)品(表1)。
實(shí)施例7化合物21向9α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(135mg；0.35mmol)的無水DMF(3ml)溶液中加入碳酸鉀(49mg；0.35mmol)。將該反應(yīng)混合物在氬氣流中于0℃下攪拌，然后加入中間體M9(311mg；0.39mmol)的無水DMF(4ml)溶液。在室溫下攪拌5天后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上使DMF蒸發(fā)，殘留物在硅膠柱上純化(洗脫劑CHCl3∶CH3OH∶NH4OH＝10∶1∶0.1)。得到53mg純產(chǎn)品(表1)。
實(shí)施例8化合物22向6α，9α-二氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(100mg；0.25mmol)的無水DMF(3ml)溶液中加入碳酸鉀(35mg；0.25mmol)。將該反應(yīng)混合物在氬氣流中于0℃下攪拌，然后加入其中R4代表克拉定糖的中間體M7(252mg；0.28mmol)的無水DMF(4ml)溶液。在室溫下攪拌2天后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上使DMF蒸發(fā)，殘留物在硅膠柱上純化(洗脫劑CHCl3∶CH3OH∶NH4OH＝12∶1∶0.1)。得到42mg純產(chǎn)品(表1)。
按實(shí)施例8中所述方法制備化合物23和24，示于表1中。
化合物23通過9α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(99mg；0.26mmol)與285mg(0.31mmol)其中R4代表克拉定糖的中間體M7反應(yīng)，得到白色晶體(42mg)。
化合物24通過9α-氯-6α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(81mg；0.20mmol)與222mg(0.24mmol)其中R4代表克拉定糖的中間體M7反應(yīng)，得到白色晶體(54mg)(表1)。
實(shí)施例9化合物25向9α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(83mg；0.22mmol)的無水DMF(3ml)溶液中加入碳酸鉀(30mg；0.22mmol)。將該反應(yīng)混合物在氬氣流中于0℃下攪拌，然后加入其中R4代表羥基的中間體M7(182mg；0.24mmol)的無水DMF(4ml)溶液。在室溫下攪拌24小時(shí)后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上使DMF蒸發(fā)，殘留物在硅膠柱上純化(洗脫劑CHCl3∶CH3OH∶NH4OH＝10∶1∶0.1)。得到57mg純產(chǎn)品。
按實(shí)施例9中所述方法制備化合物26和27，示于表1中。
化合物26通過6α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(85mg；0.22mmol)與225mg(0.25mmol)其中R4代表羥基的中間體M7反應(yīng)，得到白色晶體(20mg)。
化合物27通過9α-氯-6α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(100mg；0.24mmol)與200mg(0.26mmol)其中R4代表羥基的中間體M7反應(yīng)，得到白色晶體(59mg)。
實(shí)施例10化合物28向9α-氟-11β，17α-二羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-甲酸(80mg；0.21mmol)的無水DMF(3ml)溶液中加入碳酸鉀(30mg；0.21mmol)。將該反應(yīng)混合物在氬氣流中于室溫下攪拌1小時(shí)，然后加入3-0-脫克拉定糖基-6-0-甲基-3-氧代紅霉素-9-0-(2-溴乙基)肟(163mg；0.23mmol)的無水DMF(3ml)溶液。將該反應(yīng)混合物在100℃下加熱4小時(shí)。然后使之冷卻至室溫，加入40ml乙酸乙酯和水(1∶1)。分離有機(jī)層，水洗，經(jīng)無水碳酸鉀干燥。殘留物在硅膠柱上用溶劑體系氯仿∶甲醇∶氨＝10∶1∶0.1純化。得到160mg白色晶體(表1)。
表1




權(quán)利要求
1.結(jié)構(gòu)I所示化合物、其鹽和溶劑化物 特征在于M代表具有在炎癥細(xì)胞中積累性質(zhì)的大環(huán)內(nèi)酯亞單元，A代表抗炎亞單元，可以是甾族或非甾族的，L代表連接M和A的鏈，以及這些化合物在治療炎性疾病和病癥中的改進(jìn)療效。
2.結(jié)構(gòu)I所示化合物、其鹽和溶劑化物 特征在于M代表下式所示大環(huán)內(nèi)酯亞單元 其中R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基 R4和R5也可一起形成羰基，條件是R1則為甲基； 其中R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4可為有1-4個(gè)碳原子的烷基，優(yōu)選甲基； 其中R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基 R4和R5也可一起形成羰基，條件是R1則為甲基； 其中R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基 其中R1為氫或甲基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基 R5可為有1-4個(gè)碳原子的任何烷基，優(yōu)選甲基； 其中R1為氫或乙酰基，R2和R3均為氫或一起形成鍵，或者R2為以下亞結(jié)構(gòu)所示氨基-NR’R”其中R’和R”可獨(dú)立地為氫或有1-6個(gè)碳原子的任何烷基或環(huán)烷基，條件是R3則為氫，R4為羥基或以下結(jié)構(gòu)所示克拉定糖基 R5可為有1-4個(gè)碳原子的任何烷基，優(yōu)選甲基，A為下式所示抗炎亞單元 其中Z代表氧或NH基，R1為氫或羥基或O-?；騉-烷基，R2代表氫或甲基，可定位在α-或β-位，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴，1，2-位可代表雙或單碳-碳鍵； 其中Z代表氧或NH基，R1為氫或羥基或O-酰基或O-烷基，R2代表氫或?；?，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴； 或其立體異構(gòu)形式，其中所述1，2-位代表飽和或不飽和雙鍵，其中Z代表氧或NH基，R1為氫、有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，R2為氫、有1-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，條件是R1和R2不同時(shí)為氫，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴； 或其立體異構(gòu)形式，其中所述1，2-位代表飽和或不飽和雙鍵，其中Z為氧或NH基，R1為氫、有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，R2為氫、有1-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，條件是R1和R2不同時(shí)為氫，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴； 或其立體異構(gòu)形式，其中所述1，2-位代表飽和或不飽和雙鍵，R1為氫、有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，R2為氫、有1-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，條件是R1和R2不同時(shí)為氫，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴，優(yōu)選氟； 其中Z為氧或NH基，R1為氫或有自由氫的羥基或羥基或O-?；騉-烷基，R2為氫或甲基，可定位在α-或β-位，R3為氫或有1-4個(gè)碳原子的酸基，X1為氫或鹵素，X2為氫或鹵素，其中鹵素指氟、氯或溴，優(yōu)選氟，1，2-位可代表雙或單碳-碳鍵，并且L為下式的鏈-CR1R2(CR3R4)nCR5R6-，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6可為氫、C1-C4-烷基、芳基、甲氧基、鹵素、羥基或巰基，其中n為1-10，和一或多個(gè)-CR3R4-基可被還帶有氫或C1-C4烷基或芳基的氧、硫、芳環(huán)或氨基取代，條件是至少一個(gè)亞甲基位于L連接基的端部。
3.權(quán)利要求1和2之任一的化合物和鹽，特征在于結(jié)構(gòu)I的大環(huán)內(nèi)酯亞單元M由通用結(jié)構(gòu)M1表示，其中R1為甲基，R2為二甲氨基，條件是R3則為氫，R4為克拉定糖，R4和R5也可一起形成羰基，結(jié)構(gòu)I的甾族亞單元由結(jié)構(gòu)A1至A4和A6之一表示，其中A1如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為羥基，可有自由氫或者還被有1-4個(gè)碳原子的烷基R’、優(yōu)選甲基烷基化，R2為氫或甲基，X1為氫或氟，X2為氫，其中A2如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為氫，R2為氫，X1為氟，X2為氫，其中A3如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A4如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A6如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是碳-碳雙鍵，R1為羥基，R2為在α-或β-位、優(yōu)選α-位的氫或甲基，R3為氫，X1為氫、氟或氯，X2為氫或氟，其中鏈L如權(quán)利要求2中所定義，其中R1至R4為氫，n為1-10。
4.權(quán)利要求1和2之任一的化合物和鹽，特征在于結(jié)構(gòu)I的大環(huán)內(nèi)酯亞單元M由通用結(jié)構(gòu)M2表示，其中R1為氫，R2為二甲氨基，條件是R3則為氫，R4為甲基，結(jié)構(gòu)I的甾族亞單元由結(jié)構(gòu)A1至A4和A6之一表示，其中A1如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為羥基，可有自由氫或者還被有1-4個(gè)碳原子的烷基R’、優(yōu)選甲基烷基化，R2為氫或甲基，X1為氫或氟，X2為氫，其中A2如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為氫，R2為氫，X1為氟，X2為氫，其中A3如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A4如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A6如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是碳-碳雙鍵，R1為羥基，R2為在α-或β-位、優(yōu)選α-位的氫或甲基，R3為氫，X1為氫、氟或氯，X2為氫或氟，其中鏈L如權(quán)利要求2中所定義，其中R1至R4為氫，n為1-10。
5.權(quán)利要求1和2之任一的化合物和鹽，特征在于結(jié)構(gòu)I的大環(huán)內(nèi)酯亞單元M由通用結(jié)構(gòu)M3表示，其中R1為氫，R2為二甲氨基，條件是R3則為氫，R4和R5可一起形成羰基，結(jié)構(gòu)I的甾族亞單元由結(jié)構(gòu)A1至A4和A6之一表示，其中A1如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為羥基，可有自由氫或者還被有1-4個(gè)碳原子的烷基R’、優(yōu)選甲基烷基化，R2為氫或甲基，X1為氫或氟，X2為氫，其中A2如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為氫，R2為氫，X1為氟，X2為氫，其中A3如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A4如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A6如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是碳-碳雙鍵，R1為羥基，R2為在α-或β-位、優(yōu)選α-位的氫或甲基，R3為氫，X1為氫、氟或氯，X2為氫或氟，其中鏈L如權(quán)利要求2中所定義，其中R1至R4為氫，n為1-10。
6.權(quán)利要求1和2之任一的化合物和鹽，特征在于結(jié)構(gòu)I的大環(huán)內(nèi)酯亞單元M由通用結(jié)構(gòu)M4表示，其中R1為氫，R2為二甲氨基，條件是R3則為氫，R4為克拉定糖或羥基，結(jié)構(gòu)I的甾族亞單元由結(jié)構(gòu)A1至A4和A6之一表示，其中A1如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為羥基，可有自由氫或者還被有1-4個(gè)碳原子的烷基R’、優(yōu)選甲基烷基化，R2為氫或甲基，X1為氫或氟，X2為氫，其中A2如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為氫，R2為氫，X1為氟，X2為氫，其中A3如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A4如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A6如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是碳-碳雙鍵，R1為羥基，R2為在α-或β-位、優(yōu)選α-位的氫或甲基，R3為氫，X1為氫、氟或氯，X2為氫或氟，其中鏈L如權(quán)利要求2中所定義，其中R1至R4為氫，n為2-10。
7.權(quán)利要求1和2之任一的化合物和鹽，特征在于結(jié)構(gòu)I的大環(huán)內(nèi)酯亞單元M由通用結(jié)構(gòu)M5表示，其中R1為氫，R2為二甲氨基，條件是R3則為氫，R4為克拉定糖或羥基，R5為甲基，結(jié)構(gòu)I的甾族亞單元由結(jié)構(gòu)A1至A4和A6之一表示，其中A1如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為羥基，可有自由氫或者還被有1-4個(gè)碳原子的烷基R’、優(yōu)選甲基烷基化，R2為氫或甲基，X1為氫或氟，X2為氫，其中A2如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為氫，R2為氫，X1為氟，X2為氫，其中A3如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A4如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A6如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是碳-碳雙鍵，R1為羥基，R2為在α-或β-位、優(yōu)選α-位的氫或甲基，R3為氫，X1為氫、氟或氯，X2為氫或氟，其中鏈L如權(quán)利要求2中所定義，其中R1至R4為氫，n為2-10。
8.權(quán)利要求1和2之任一的化合物和鹽，特征在于結(jié)構(gòu)I的大環(huán)內(nèi)酯亞單元M由通用結(jié)構(gòu)M6表示，其中R1為氫，R2為二甲氨基，條件是R3則為氫，R4為克拉定糖或羥基，R5為甲基，結(jié)構(gòu)I的甾族亞單元由結(jié)構(gòu)A1至A4和A6之一表示，其中A1如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為羥基，可有自由氫或者還被有1-4個(gè)碳原子的烷基R’、優(yōu)選甲基烷基化，R2為氫或甲基，X1為氫或氟，X2為氫，其中A2如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，R1為氫，R2為氫，X1為氟，X2為氫，其中A3如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A4如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是不飽和的，R1和R2為甲基，X1為氟，X2為氟，其中A6如權(quán)利要求1和2中所定義，其中Z代表氧或NH基，1，2-位是碳-碳雙鍵，R1為羥基，R2為在α-或β-位、優(yōu)選α-位的氫或甲基，R3為氫，X1為氫、氟或氯，X2為氫或氟，其中鏈L如權(quán)利要求2中所定義，其中R1至R4為氫，n為2-10。
9.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物1，特征在于式
10.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物2，特征在于式
11.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物3，特征在于式
12.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物4，特征在于式
13.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物5，特征在于式
14.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物6，特征在于式
15.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物7，特征在于式
16.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物8，特征在于式
17.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物9，特征在于式
18.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物10，特征在于式
19.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物11，特征在于式
20.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物12，特征在于式
21.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物13，特征在于式
22.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物14，特征在于式
23.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物15，特征在于式
24.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物16，特征在于式
25.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物17，特征在于式
26.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物18，特征在于式
27.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物19，特征在于式
28.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物20，特征在于式
29.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物21，特征在于式
30.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物22，特征在于式
31.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物23，特征在于式
32.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物24，特征在于式
33.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物25，特征在于式
34.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物26，特征在于式
35.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物27，特征在于式
36.權(quán)利要求1、2和6之任一的化合物28，特征在于式
37.通用結(jié)構(gòu)I所示化合物的制備方法，其中所有符號(hào)和基團(tuán)都有如權(quán)利要求1和2中所定義的意義，特征在于所述化合物由其中所有基團(tuán)和符號(hào)都有針對(duì)結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所定義的意義的結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所示相應(yīng)甾族部分和結(jié)構(gòu)M11所示大環(huán)內(nèi)酯中間體通過結(jié)構(gòu)L所示相應(yīng)鏈的連接制備，其中為從式A1至A4和A6所示甾族亞單元的羧酸形成酰胺鍵，利用在無水二氯甲烷中在堿如三乙胺存在下在室溫下適合的惰性氣體流下用碳二亞胺和苯并三唑(HOBT)活化。
38.通用結(jié)構(gòu)I所示化合物的制備方法，其中所有符號(hào)和基團(tuán)都有如權(quán)利要求1和2中所定義的意義，特征在于所述化合物由其中所有基團(tuán)和符號(hào)都有針對(duì)結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所定義的意義的結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所示相應(yīng)甾族部分和結(jié)構(gòu)M7所示大環(huán)內(nèi)酯中間體通過結(jié)構(gòu)L所示相應(yīng)鏈的連接制備，其中為從式A1至A4和A6所示甾族亞單元的羧酸形成酯鍵，利用在無水二甲基甲酰胺中在適合的惰性氣體流中與K2CO3反應(yīng)。
39.通用結(jié)構(gòu)I所示化合物的制備方法，其中所有符號(hào)和基團(tuán)都有如權(quán)利要求1和2中所定義的意義，特征在于所述化合物由其中所有基團(tuán)和符號(hào)都有針對(duì)結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所定義的意義的結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所示相應(yīng)甾族部分和結(jié)構(gòu)M9所示大環(huán)內(nèi)酯中間體通過結(jié)構(gòu)L所示相應(yīng)鏈的連接制備，其中為從式A1至A4和A6所示甾族亞單元的羧酸形成酯鍵，利用在無水二甲基甲酰胺中在適合的惰性氣體流中與K2CO3反應(yīng)。
40.通用結(jié)構(gòu)I所示化合物的制備方法，其中所有符號(hào)和基團(tuán)都有如權(quán)利要求1和2中所定義的意義，特征在于所述化合物由其中所有基團(tuán)和符號(hào)都有針對(duì)結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所定義的意義的結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所示相應(yīng)甾族部分和結(jié)構(gòu)M10所示大環(huán)內(nèi)酯中間體通過結(jié)構(gòu)L所示相應(yīng)鏈的連接制備，其中為從式A1至A4和A6所示甾族亞單元的羧酸形成酯鍵，利用在無水二甲基甲酰胺中在適合的惰性氣體流中與K2CO3反應(yīng)。
41.通用結(jié)構(gòu)I所示化合物的制備方法，其中所有符號(hào)和基團(tuán)都有如權(quán)利要求1和2中所定義的意義，特征在于所述化合物由其中所有基團(tuán)和符號(hào)都有針對(duì)結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所定義的意義的結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所示相應(yīng)甾族部分制備，所述合成通過甾族中間體A8與結(jié)構(gòu)M12所示大環(huán)內(nèi)酯中間體在乙腈中于20至60℃的溫度下在適合的惰性氣體流中混合進(jìn)行。
42.通用結(jié)構(gòu)I所示化合物的制備方法，其中所有符號(hào)和基團(tuán)都有如權(quán)利要求1和2中所定義的意義，特征在于所述化合物由其中所有基團(tuán)和符號(hào)都有針對(duì)結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所定義的意義的結(jié)構(gòu)A1至A4和A6所示相應(yīng)甾族部分制備，所述酯化合成用甾族中間體A9和帶有自由反應(yīng)性羥基的大環(huán)內(nèi)酯并使它們與作為活化劑的新戊酰氯在室溫下在堿如三乙胺存在下在適合的惰性氣體流中混合進(jìn)行。
43.權(quán)利要求1至36之任一的化合物在人類或獸用藥物中的用途。
44.權(quán)利要求1至36之任一的化合物在有炎性病癥和疾病的患者的治療中的應(yīng)用。
45.權(quán)利要求1至36之任一的化合物在哮喘、過敏性鼻炎、鼻息肉、腸道疾病如克羅恩氏病、結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、皮炎如濕疹、牛皮癬、過敏性皮炎、神經(jīng)性皮炎、瘙癢癥、結(jié)膜炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的治療中的應(yīng)用。
46.權(quán)利要求1至36之任一的化合物在治療和預(yù)防因細(xì)胞因子和炎癥介導(dǎo)物的過度非調(diào)節(jié)性產(chǎn)生所誘導(dǎo)的炎性病癥和疾病中的應(yīng)用，其中適合的藥物制劑可局部、腸道外或口服給藥。
47.權(quán)利要求1至36之任一的化合物作為活性物質(zhì)在口服、直腸、腸道外、經(jīng)皮和吸入法用于人類和動(dòng)物的藥物制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)I所示新化合物及其用于治療人類和動(dòng)物的炎性疾病的藥物制劑。
文檔編號(hào)A61P37/08GK1491230SQ02804715
公開日2004年4月21日 申請(qǐng)日期2002年1月3日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月9日
發(fā)明者M·莫斯普, M·梅西克, L·托馬斯科維克, M·科麥克, B·赫瓦西克, S·馬科維克, M 莫斯普, 呶骺, 硭箍莆 , 罌, 莆 , 骺 申請(qǐng)人:普利瓦股份公司