專利名稱：欖香烯脂肪乳注射液及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種欖香烯脂肪乳注射液及制備方法。
背景技術(shù)：
欖香烯是從姜科植物郁金(莪術(shù))中提取的抗癌有效成份，以β-欖香烯為主要成份，同時含有少量δ、γ-欖香烯及其萜類化合物。
祖國醫(yī)藥認為莪術(shù)性溫、味苦辛，有行氣破血、消積止痛、抗腫瘤功效。六十年代末，進行抗癌試驗亦見于報導(dǎo)。七十年代初，有人將莪術(shù)揮發(fā)油局部應(yīng)用治療宮頸癌有一定療效。大連醫(yī)科所在七十年代初用溫州產(chǎn)莪術(shù)進行抗癌實驗研究，發(fā)現(xiàn)其揮發(fā)油對各種小鼠體內(nèi)腫瘤有明顯治療效果，已將欖香烯制成注射液及口服液。但該注射液系用吐溫-80為增溶劑，含量高達10％，不符合國家有關(guān)吐溫-80用量規(guī)定。于是大連醫(yī)科所又進行劑型改進，以磷脂為乳化劑制成欖香烯乳注射液(20ml∶100mg)，可用于胸腔及靜脈給藥。
1996年，欖香烯乳注射液獲得國家西藥二類新藥證書，其批準文號為(ws-049(x-041)-96-(2))。經(jīng)上萬例的臨床應(yīng)用，證實本品具有抗腫瘤效果，對治療癌性胸腹水，顱內(nèi)腫瘤、肝癌具有良好效果，并能緩解癌性疼痛和提高機體免疫力作用，為一種非細胞毒廣譜抗腫瘤新藥。但在靜脈給藥時，存在嚴重的靜脈刺激和疼痛，靜脈炎發(fā)生率高達30％左右，使患者無法忍受。借鑒國外對靜脈刺激性大的藥物如麻醉藥丙泊酚、依托米酯等溶解于油相中制成水包油乳劑以降低靜脈炎的發(fā)生率和減輕疼痛程度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述不足之處，設(shè)計欖香烯的新制劑，提高藥效，降低副作用。
本發(fā)明提供了一種欖香烯脂肪乳注射液，該注射液的重量％組成包括欖香烯0.05～0.25％、注射用大豆油10～30％、注射用蛋黃卵磷脂1.0～1.5或注射用大豆磷脂0.8～1.5％、注射用甘油2.0～2.5％、注射用水加至100ml。
本發(fā)明的注射液為水包油乳劑，250ml∶250mg，其用量每次為欖香烯250～750mg。經(jīng)藥理試驗證實其靜脈刺激性和疼痛程度比現(xiàn)有制劑減輕。并且因本制劑采用大豆油作溶媒、卵磷脂作乳化劑，使其在臨床治療時還能提供人體熱能和必需脂肪酸等營養(yǎng)成份，尚具有臨床營養(yǎng)支持功效。
本發(fā)明的欖香烯注射液對動物疼痛及血管刺激試驗結(jié)果如下1、受試物配制方法10％脂肪乳注射液含0.1％欖香烯(I號)、20％脂肪乳注射液含0.1％欖香烯(II號)及20％脂肪乳注射液含6％右旋醣酐及0.1％欖香烯(III號)三個樣品均采用原液。參照品原欖香烯乳注射液以生理鹽水稀釋，欖香烯濃度從0.5％稀釋至0.1％(IV)。
2、試驗內(nèi)容(1)小鼠扭體試驗實驗動物昆明小鼠，每組實驗10～20只，雌雄各半。
劑量及給藥途徑I、II及III號三個欖香烯脂肪乳注射液樣品均采用原液1ml/只小鼠，即1mg/只小鼠。參照品原欖香烯乳注射液(現(xiàn)已改名為欖香烯注射液)采用生理鹽水稀釋后欖香烯濃度1mg/1m IV號樣品，給藥濃度也為1ml/只小鼠，即1mg/只小鼠。各樣品試液均采用腹腔途徑給藥。(備注按常規(guī)腹腔途徑給藥的體積為0.5ml/只小鼠，本次實驗的預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)受試物若給0.5ml/0.5mg/只小鼠未出現(xiàn)“扭體”反應(yīng)。為強化受試物的應(yīng)激條件，將其給藥的體積增至1ml/只小鼠)。
小鼠扭體試驗方法在室溫20℃±2℃條件下，將受試液注入小鼠腹腔內(nèi)，使小鼠因刺激而引起腹部深部的、大面積而持久的疼痛反應(yīng)。統(tǒng)計觀察各組小鼠0～15分鐘及15～30分鐘內(nèi)產(chǎn)生“扭體”(腹部內(nèi)凹、軀干與后腿伸張、臀部高起)的次數(shù)，以各組小鼠引起“扭體”的次數(shù)，進行統(tǒng)計。
小鼠扭體試驗結(jié)果三個被篩選I、II、III號三個欖香烯脂肪乳注射液樣品對小鼠扭體刺激基本不出現(xiàn)反應(yīng)，它們對小鼠扭體刺激十分明顯低于原欖香烯乳注射液IV。詳見表1。
表1 小鼠扭體試驗 (1)n＝5；(2)n＝10

注1、括弧內(nèi)1及2分別表示兩次實驗結(jié)果2、第1次實驗每組小鼠10只，第2次每組20只，均雌雄各半。
(2)小鼠熱板致疼痛試驗實驗動物昆明小鼠，體重20±2克，每組實驗10～20只，雌雄各半。
劑量及給藥途徑I、II及III號三個欖香烯脂肪乳注射液樣品均采用原液0.3ml/只小鼠，即0.3mg/只小鼠。對照品IV號給藥濃度也為0.3ml/只小鼠，即0.3mg/只小鼠。各樣品試驗均采用右后足趾皮下給藥。
小鼠熱板致疼痛試驗方法小鼠后足趾皮下注射0.03ml試液后，置于20℃±1℃的熱板上，觀察小鼠出現(xiàn)疼痛反應(yīng)的時間以及給藥后5分鐘內(nèi)出現(xiàn)疼痛的次數(shù)，所得結(jié)果與原欖香烯乳注射液比較按下式進行計算。
擬定的標準舔足1次計2分提足1次計1分上述動作連續(xù)超過5分鐘累加1次出現(xiàn)刺激時間即開始出現(xiàn)舔足或提足時間(秒)抑制刺激的百分率＝[(陽性組刺激計分-試驗組刺激計分)/陽性組刺激計]分×100％出現(xiàn)刺激時間的延長率＝[(試驗組出現(xiàn)刺激時間-陽性組出現(xiàn)刺激時間)/陽性組出現(xiàn)刺激時間]×100％小鼠熱板法致疼痛試驗結(jié)果I、II、III號三個被篩選的欖香烯注射液樣品對小鼠熱板致疼痛反應(yīng)無論初次出現(xiàn)刺激的時間或疼痛都明顯低于原欖香烯乳注射液對照品IV號，結(jié)果詳見表2、3、4。小鼠熱板試驗表2 n＝10(雌雄各半)

表2 n＝10(雌雄各半)


表3

注1以上數(shù)據(jù)均與原欖香烯乳注射液比較。
(3)家兔耳緣靜脈連續(xù)滴注的刺激試驗實驗動物家兔6號，體重2.5～3.0kg，雄性。
劑量及給藥途徑I號樣品每天以20～25ml/1h耳緣靜脈滴注，每天給藥量10mg/kg，連續(xù)給藥8天，總劑量為80mg/kg。對照品IV號樣品，以相同的劑量方案給藥。陰性對照組為生理鹽水。
家兔耳緣靜脈刺激試驗結(jié)果大體觀察給藥的前3天未見明顯耳緣靜脈刺激反應(yīng)，至第5天各組出現(xiàn)不同程度的刺激。在給藥的過程中發(fā)現(xiàn)原欖香烯乳組的耳緣出現(xiàn)強直刺激狀。改進的制劑所出現(xiàn)的程度很輕。
病理觀察各組耳緣均分6段觀察。欖香烯脂肪乳注射液(靜脈用)雖與原欖香烯乳注射液具有相似的血管刺激癥狀，但刺激程度較輕，而且未見血栓形成；且刺激發(fā)生的范圍也較原欖香烯乳注射液為小。注本實驗是在以上兩種實驗的基礎(chǔ)上進行的，因此僅選用了一個10％欖香烯脂肪乳注射液(靜脈用)做比較。
藥理刺激試驗結(jié)論三個處方欖香烯脂肪乳注射液(靜脈用)對所選用的3種動物致疼痛及致刺激模型進行的試驗，均能反映出新設(shè)計的欖香烯脂肪乳輸液較原欖香烯乳注射液均能明顯地減輕疼痛及血管刺激。
本發(fā)明的欖香烯脂肪乳注射液抗腫瘤藥效學(xué)試驗結(jié)果如下抗腫瘤藥效學(xué)1、體外細胞毒試驗欖香烯脂肪乳注射液體外對人體肝癌細胞株QGY、肺癌細胞株LAX、乳腺癌細胞株Bre-04、腸癌細胞株Col-06及白血病等腫瘤細胞株的增殖抑制作用，其IC50值介于60-120ug/ml之間。
2、體內(nèi)抗腫瘤試驗欖香烯脂肪乳注射液體內(nèi)以80mg/kg、40mg/kg及20 mg/kg高、中、低三個劑量iv×10qd的治療方案對人體肝癌QGY異種移植于裸小鼠皮下接種模型的抑瘤率分別為44.90％、35.71％及31.12％；對人體胃癌MKN-45異種移植于裸小鼠皮下接種模型的抑瘤率分別為41.70％、32.26％及26.42％；對小鼠黑色素瘤K111靜脈接種的人為肺轉(zhuǎn)移模型的抑瘤率分別為56.28％、48.38％及42.91％；對小鼠腦膠質(zhì)瘤G-422顱內(nèi)接種模型的延長生命率分別為68.23％、55.29％及49.41％以及對小鼠腦膠質(zhì)瘤G422皮下接種模型的抑瘤率分別為35.16％、30.59％及23.29％。
3、欖香烯脂肪乳注射液體內(nèi)合并不同化療藥對各種小鼠腫瘤模型的抗腫瘤療效欖香烯脂肪乳注射液采用80mg/kg、40mg/kg及20mg/kg高、中、低三個劑量iv×10qd單獨用藥的治療方案對小鼠肉瘤S180皮下接種模型的抑瘤率分別為37.14％、33.02％及28.25％，合并CTX 15mg/kg，ip×7qd后的抑瘤率提高為55.24％、52.06％及49.84％；合并MMC1mg/kg，ip×7qd后的抑瘤率分別從單獨用藥的38.13％、33.11％、28.09％提高為55.18％、53.18％及51.51％；對小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤G-422顱內(nèi)接種模型合并VM-26mg/kg，ip×7qd后的生命延長率分別從單獨用藥的60.60％、41.41％、32.32％提高為92.93％、83.84％及73.74％；對小鼠Lewis肺癌皮下接種模型合并DDP1mg/kg，ip×7qd后分別從單獨用藥的32.06％、28.63％、25.19％提高為54.96％、52.67％及51.15％；對小鼠黑色素瘤K111靜脈接種的人為肺轉(zhuǎn)移模型合并DDP1mg/kg，ip×7qd后的肺轉(zhuǎn)移抑制率從單獨用藥的54.20％、44.14％、38.89％提高為58.36％、55.56％及53.86％。欖香烯脂肪乳注射液體內(nèi)合并不同化療藥對各種小鼠腫瘤模型的抗腫瘤療效均有不同程度的提高，其中以小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤G-422顱內(nèi)接種模型合并VM-26的效果最為明顯。
4、欖香烯脂肪乳注射液體內(nèi)合并放療對小鼠肝癌模型的抑瘤率欖香烯脂肪乳注射液采用80mg/kg、40mg/kg及20mg/kg高、中、低三個劑量iv×10qd單獨用藥的治療方案對小鼠肝癌H22皮下接種模型的抑瘤率分別為37.97％、33.62％及26.96％，合并放療500拉德后的抑瘤率提高為61.16％、59.71％及60.00％；5、免疫功能試驗欖香烯脂肪乳注射液體內(nèi)以80mg/kg、40mg/kg及20mg/kg高、中、低三個劑量iv×10qd給藥對荷Lewis肺癌小鼠NK、淋巴細胞增殖活性，以及對正常小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能均有較明顯的促進和提高。
6、減毒試驗欖香烯脂肪乳注射液對CTX所致C57BL/6小鼠的白細胞影響與陽性對照云芝糖肽組相似，影響不明顯，但也不增加化療藥的骨髓抑制。
小鼠最大耐受量試驗對昆明小鼠靜脈給藥的最大耐受量為40mg/Kg，為臨床每天用藥劑量(400～700mg/50Kg/次)的3～5倍。
靜脈局部刺激試驗實驗結(jié)果表明欖香烯脂肪乳注射液應(yīng)用于靜脈注射時，對家兔耳緣靜脈血管刺激試驗，以原液1mg/ml/Kg濃度的劑量，每天一次，連續(xù)三天后，實驗顯示欖香烯乳注射液對家兔耳靜脈血管無明顯的與藥物有關(guān)的刺激反應(yīng)。
過敏試驗實驗結(jié)果表明欖香烯乳注射液對豚鼠過敏試驗中，未見明顯過敏反應(yīng)。
溶血試驗實驗結(jié)果表明欖香烯乳注射液對家兔紅血球溶血試驗呈陰性反應(yīng)。
本發(fā)明的另一目的是提供了上述欖香烯脂肪乳注射液的制備方法，該方法是在惰性氣體保護下，將注射用蛋黃磷脂(或注射用大豆磷脂)以及欖香烯高速攪拌至均勻制成油相。另將注射用甘油加入盛有適量注射用水容器內(nèi)，混勻后過濾至澄明，加熱至40～70℃制成水相，在高速攪拌下將油相與水相混合并用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值8.0～10.0，加注射用水至全量將初乳經(jīng)二步高壓勻質(zhì)機反復(fù)乳化至乳粒檢查合格(粒子＜1μ以下占97％以上，再經(jīng)微孔濾膜過濾灌裝于250～500ml玻瓶中，加通氮、膠塞、軋蓋于回轉(zhuǎn)式蒸汽滅菌器中115℃30分滅菌。檢查合格后即成欖香烯脂肪乳注射液。
本發(fā)明的制劑質(zhì)量如下1、性狀本品為白色的乳狀液體。
2、鑒別取本品3ml，置試管中加乙醇1ml，搖勻后沿管壁緩慢加1％香草醛硫酸液0.5ml，在兩液層交界處顯紫紅色環(huán)，搖勻后顯紫堇色。
在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的保留時間應(yīng)與對照品峰的保留時間一致。
3、檢查項目PH值、有關(guān)物質(zhì)、游離脂肪酸、乳粒大小、熱原、無菌及有關(guān)注射劑項下的各項規(guī)定。
4、含量測定欖香烯 采用氣相色譜法測定5、有關(guān)物質(zhì)檢查主要檢查游離脂肪酸(采用化學(xué)法測定)及有關(guān)雜質(zhì)(采用氣相色譜法測定)。
6、穩(wěn)定性試驗欖香烯乳注射液經(jīng)影響因素試驗(光照、40℃、60℃、80℃加速10天)；40℃恒溫加速三個月后，其含量無明顯變化，而游離脂肪酸值及PH隨著時間及溫度有所變化，即PH稍有降低，游離脂肪酸值有所增加，但均能符合所訂質(zhì)量標準。其它如外觀、乳粒大小等均無明顯變化，初步證明本品在室溫貯放可穩(wěn)定二年左右。
本發(fā)明的制劑產(chǎn)品有如下生物活性1、抑制腫瘤細胞生長體內(nèi)、體外研究表明，本品對多種腫瘤細胞有作用。
2.免疫保護作用本品能增強T淋巴細胞亞群的功能。
3.升白作用本品不引起骨髓抑制，用藥期間白細胞數(shù)無明顯下降，對放療和其他化療藥引起的白細胞減少有一定保護作用。
4.放.化療協(xié)同作用本品與其他化療藥物聯(lián)合應(yīng)用(如順鉑、足葉乙甙、長春新堿、阿霉素等)有一定的協(xié)同作用。
5.營養(yǎng)作用本品為脂類制劑，能為機體提供高能量和必需脂肪酸營養(yǎng)。
6.能通過血腦屏障血腦屏障的存在是影響顱內(nèi)腫瘤化療的一個重要因素，本品的藥代動力學(xué)實驗表明經(jīng)3H標記的欖香烯可通過血腦屏障進入腦內(nèi)，其分布與含量除肺部較高外，腦組織與其他組織相似。實驗?zāi)[瘤學(xué)證明以腦瘤原位接種的小鼠有較高的延長生命率。
作用機理1.直接抑制腫瘤細胞生長，對正常細胞(如外周血白細胞等)影響較小。
2.通過提高機體免疫功能起到抑制癌腫的作用。
3.作用于細胞周期S期與G2及M期的調(diào)控點，阻滯S期細胞進入G2+M期，降低腫瘤，細胞分裂能力，抑制其增殖。
4.通過干擾腫瘤細胞生長代謝，誘發(fā)腫瘤細胞快速發(fā)生細胞凋亡。毒理作用急毒和長毒實驗證明本品毒副作用低微。靜脈注射的LD50為270.07±18.93mg/kg；對小鼠無致畸突變作用。用狗和大鼠靜脈給藥連續(xù)90天進行長期毒性實驗，結(jié)果各種動物的血象及肝、腎功能等生化指標均無明顯變化。
適應(yīng)癥主要適用于肺癌、腦癌、肝癌、胃癌等。
用法與用量靜脈注射每日1次，400-600mg/次，靜脈緩慢滴注15天為一療程。選取較粗靜脈血管，兩臂交替使用，最好使用套管針。如能采用鎖骨下靜脈注射最佳。
具體實施例方式實施例一在氮氣保護下，稱取注射用大豆油120g，加熱至70℃，加入注射用蛋黃卵磷脂13g和欖香烯0.8g，高速攪拌至均勻，制成油相。另將注射用甘油23g，加入適量注射用水混勻后加熱至60℃過濾后在高速攪拌下與油相混合制成初乳，然后用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值9.5，加注射用水至1000ml將初乳經(jīng)二步高壓勻質(zhì)機反復(fù)乳化至乳粒檢查合格(粒子＜1μ以下占97％以上)，再經(jīng)微孔濾膜過濾，灌裝于250～500ml玻瓶中，通氮、加塞、軋蓋于回轉(zhuǎn)式蒸汽滅菌器中115℃30分滅菌。檢查合格后即成欖香烯脂肪乳注射液。
實施例二在氮氣保護下，稱取注射用大豆油200g，加熱至60℃，加入欖香烯1.5g，高速攪拌至均勻，制成油相。另將注射用甘油22g，加入適量注射用水混勻后在高速攪拌下再加入注射用大豆磷脂8g混勻后加熱至70℃，在高速攪拌下與油相混合制成初乳，并用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值8.5，加注射用水至全量1000ml將初乳經(jīng)二步高壓勻質(zhì)機反復(fù)乳化至乳粒檢查合格(粒子＜1μ以下占97％以上)，再經(jīng)微孔濾膜過濾灌裝于250～500ml玻瓶中，通氮、加塞、軋蓋于回轉(zhuǎn)式蒸汽滅菌器中115℃30分滅菌。檢查合格后即成欖香烯脂肪乳注射液。
實施例三在氮氣保護下，稱取注射用大豆油150g，加熱至80℃，加入注射用蛋黃卵磷脂14g和欖香烯1.2g，高速攪拌至均勻，制成油相。另將注射用甘油24g，加入適量注射用水混勻后加熱至50℃過濾后在高速攪拌下與油相混合制成初乳，然后用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值8.5，加注射用水至1000ml將初乳經(jīng)二步高壓勻質(zhì)機反復(fù)乳化至乳粒檢查合格(粒子＜1μ以下，再經(jīng)微孔濾膜過濾灌裝于250～500ml玻瓶中，通氮、加塞、軋蓋于回轉(zhuǎn)式蒸汽滅菌器中115℃30分滅菌。檢查合格后即成欖香烯脂肪乳注射液。
權(quán)利要求
1.一種欖香烯脂肪乳注射液，其特征在于該注射液的重量％組成包括欖香烯0.05～0.25％、注射用大豆油10～30％、注射用蛋黃卵磷脂1.0～1.5或注射用大豆磷脂0.8～1.5％、注射用甘油2.0～2.5％、注射用水加至100ml。
2.一種如權(quán)利要求1所述的一種欖香烯脂肪乳注射液的制備方法，其特征在于該方法是在惰性氣體保護下，將注射用蛋黃磷脂，或注射用大豆磷脂，以及欖香烯高速攪拌至均勻制成油相，另將注射用甘油加入盛有適量注射用水容器內(nèi)，混勻后過濾至澄明，加熱至40～70℃制成水相，在高速攪拌下將油相與水相混合制成初乳并用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值8.0～10.0，加注射用水至全量將初乳經(jīng)二步高壓勻質(zhì)機反復(fù)乳化至乳粒檢查合格，粒子＜1μ以下占97％以上，再經(jīng)微孔濾膜過濾，灌裝于250～500ml玻瓶中，通氮、加膠塞、軋蓋于回轉(zhuǎn)式蒸汽滅菌器中115℃30分滅菌，檢查合格后即成欖香烯脂肪乳注射液。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了一種欖香烯脂肪乳注射液。該制劑包括含量％的欖香烯0.05～0.25％、注射用大豆油10～30％、注射用蛋黃卵磷脂1.0～1.5％或注射用大豆磷脂0.8～1.5％、注射用甘油2.0～2.5％、注射用水加至100ml。本發(fā)明制劑對多種腫瘤細胞有殺傷作用，并能為機體提供高能量營養(yǎng)。使用時對靜脈的刺激性物疼痛程度小。本發(fā)明提供了制備方法。
文檔編號A61K31/015GK1507857SQ0215507
公開日2004年6月30日 申請日期2002年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月18日
發(fā)明者謝保源, 房慧英, 陸敏, 陳允發(fā), 嚴惠芳, 陸宏琪 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院, 大連德澤制藥有限公司