專利名稱：一種用于治療和預(yù)防乳腺增生的含積雪草提取物的藥劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種用于治療和預(yù)防乳腺增生的含積雪草提取物的藥劑。
背景技術(shù)：
積雪草Centella asiatiea(Z、)Urb.為傘形科植物的全草，別名落得打、崩大碗、馬碲等，為多年生匍匐草本，廣泛分布于長江流域以南各地。性甘、辛、涼，具有清熱利濕，解毒消腫之功效。我國漢代即載入本草，《神農(nóng)本草經(jīng)》謂主治大熱惡瘡癰疽，皮膚赤，身熱?！侗静菥V目》指出尚可搗敷熱腫丹毒，治療瘰癆鼠瘺。國外，馬達加斯加的民間，長期以來就用積雪草治療經(jīng)久不愈的皮膚潰瘍。現(xiàn)代研究表明，積雪草主含三萜皂甙，如積雪草甙(asiaticoside)、羥基積雪草甙(madecassoside)及多種游離三萜酸，如積雪酸和羥基積雪草酸。積雪草甙、羥基積雪草甙為積雪草主要活性成分。以這些成分為主的積雪草提取物制成的片劑和霜劑已在國內(nèi)生產(chǎn)，用于促進傷口愈合和疤痕疙瘩的治療等。近年來報道積雪草提取物有抗?jié)儭⒃鰪娪洃?、?zhèn)靜止痛、抗生育、抗菌、抗病毒等作用，臨床報道用于治療靜脈功能不全、微血管病、肌膚粘連、硬皮病、瘡疽增生和疙瘩等，但未見用于治療和預(yù)防乳腺增生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于進一步開發(fā)積雪草提取物的功能，設(shè)計其在制備治療和預(yù)防乳腺增生藥劑方面的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了一種用于治療和預(yù)防乳腺增生的含積雪草提取物的藥劑，該藥劑是由積雪草提取物為活性成份與藥用輔料組成的。
本發(fā)明的藥劑中的活性成份為積雪草提取物，該提取物主要含有積雪草甙，羥基積雪草甙和積雪草酸等成份。
本發(fā)明的含積雪草提取物的藥劑(積雪草總甙)在用于治療和預(yù)防乳腺增生方面的主要藥效學(xué)試驗結(jié)果如下積雪草總甙的主要藥效學(xué)試驗摘要在應(yīng)用苯甲酸雌二醇、孕酮制備實驗性大鼠乳腺增生癥后，以及造模的同時灌服積雪草總甙，觀察積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生的治療和預(yù)防作用，兩試驗均顯示積雪草總甙顯著降低雌二醇(E2)、孕酮(P)所致的大鼠乳腺增生癥的發(fā)生率，抑制乳腺增生程度，降低血清E2含量，具有治療和預(yù)防乳腺增生的作用。
1.積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生癥的治療試驗1.1.目的應(yīng)用雌二醇和孕酮制備大鼠乳腺增生癥模型，觀察積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生的治療作用，為臨床試驗提供可靠依據(jù)。
1.2.試驗材料1.2.1.藥物受試藥積雪草總甙(積雪草總甙)，淡黃色粉末，溶于水，由上海醫(yī)工院藥物制劑部提供。批號0801-2。蒸餾水溶解稀釋至所需濃度，0.4ml/100g灌胃給藥。
陽性對照藥乳癖消，劑型膠囊，遼寧省桓仁遼東制藥廠產(chǎn)品。
苯甲酸雌二醇滅菌油溶液，規(guī)格2mg/ml，上海第九制藥廠產(chǎn)品，批號20000801。
黃體酮(孕酮)滅菌油溶液，規(guī)格10mg/ml，上海第九制藥廠產(chǎn)品，批號000404。
E2、P放免測試盒天津德普生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司產(chǎn)品。
其它試劑均為市售商品。
1.2.2.試驗動物SD大鼠，成年雌性未孕，體重226±11g。由江蘇省實驗動物中心提供，蘇動質(zhì)97001。
1.3.試驗方法與結(jié)果1.3.1.方法SD雌性大鼠，成年未孕，體重226±11g，58只，隨機分成7組(1)空白對照組；(2)模型對照組；(3)陽性對照組(0.6g/kg乳癖消)；(4)高劑量組(8.84mg/kg)；(5).高中劑量組(5.20mg/kg)；(6)中低劑量組(3.06mg/kg)；(7)低劑量組(1.80mg/kg)。除空白對照組外各組均應(yīng)用雌激素和孕酮制備大鼠乳腺增生模型每日肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg×40天，繼而改用4mg/kg黃體酮肌肉注射10天，空白對照組同時肌注等量生理鹽水。造模至第50天結(jié)束，各組灌服0.4ml/100g的不同受試藥，空白對照組、模型對照組灌服0.4ml/100g生理鹽水，每日一次，連續(xù)40天后，在灌服受試藥后1小時，40mg/kg戊巴比妥鈉腹腔麻醉，眼眶取血，分離取血清測血清E2、P濃度(由江蘇省人民醫(yī)院臨床檢測中心放免室檢測)；剪取胸部第二對乳房，游標(biāo)卡尺精確測量乳房直徑、乳房高度、乳頭直徑；再將左側(cè)第二對乳房浸入10％福爾馬林液中固定，石臘包埋切片，HE染色，鏡下觀察乳腺組織病理變化，根據(jù)乳腺組織的不同增生類型，分為腺泡型增生、導(dǎo)管型增生、纖維型增生、混合型增生(含兩種及以上增生類型的統(tǒng)歸于此)，計算鏡下乳腺增生率；根據(jù)鏡下乳腺組織增生程度評分正常(-)-1分，輕度增生(+)-2分，中度增生(++)-3分，重度增生(+++)-4分，計算平均增生程度。試驗結(jié)束整理數(shù)據(jù)并作統(tǒng)計學(xué)處理(應(yīng)用Killskal-Walls Test評定乳腺組織增生程度，應(yīng)用四表格確切概率法統(tǒng)計處理乳腺增生率，其它數(shù)據(jù)應(yīng)用方差分析法)。
1.3.3.結(jié)果見表表1大體測量各受試組乳頭直徑、乳房直徑和高度的結(jié)果顯示，積雪草總甙高、高中、中低劑量組和乳癖消組乳頭直徑、乳房高度均與空白對照組相近或更低(P＞0.05，乳癖消組、高劑量積雪草總甙組乳房直徑與空白對照組比較P＜0.05或0.001)，只有低劑量積雪草總甙組乳房直徑顯著高于空白對照組(P＜0.00)，呈一定的劑量相關(guān)性；與模型對照組比較，各受試藥組乳頭直徑、乳房直徑和高度均顯著降低(除低劑量積雪草總甙組乳頭直徑P＞0.05外，其余P值均＜0.01或0.001)。
表1積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生癥的治療作用(大體測量，X)乳房組別動物數(shù)乳頭直徑直徑(mm)空白對照組9 1.17 2.93模型對照組8 1.42**3.42***乳癖消組 8 1.25#2.64*###高劑量積雪草總甙組9 1.14###2.63***###高中劑量積雪草總甙組 8 1.23#2.85###中低劑量積雪草總甙組 8 1.24#2.84###低劑量積雪草總甙組8 1.28 3.16**##△△△與空白對照組比*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與模型對照組比#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001；與乳癖消組比△△P＜0.01，△△△p＜O.01。
表2鏡下對乳腺組織增生的觀察顯示，積雪草總甙各劑量組具有與陽性對照藥乳癖消作用相似或更強的降低E2、P所致的乳腺增生癥的發(fā)生率，抑制乳腺組織增生的作用，并且呈明顯的劑量相關(guān)性。本試驗中，空白對照組乳腺組織增生率達33.3％、平均乳腺增生程度為4.78±1.20分/個，高于高劑量積雪草總甙組，可能與長達三個月的試驗，大鼠自身的成長或取樣時正值此大鼠性周期中乳腺組織增生高峰有關(guān)。大體測量結(jié)果中空白對照組的乳房直徑顯著高于乳癖消組、高劑量積雪草總甙組，以及某些大鼠血清E2、P濃度高出平均值10倍左右可能都與此相關(guān)。
表2積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生癥的治療作用(鏡下觀察，X)乳房數(shù) 非乳腺增 乳腺增生組別(個)生(個) 率(％)空白對照組 9633.3模型對照組 80100.0**乳癖消組8625.0##
高劑量積雪草總9811.1###甙組高中劑量積雪草8537.5#總甙組中低劑量積雪草8362.5總甙組低劑量積雪草總8362.5甙組與空白對照組比**p＜0.01；與模型對照組比#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001表3血清E2、P、E2/P值顯示，積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生癥中血清E2，增高的抑制作用，呈明顯的正相關(guān)性，高劑量積雪草總甙血清E2濃度顯著低于空白對照組(P＜0.05)，但血清P濃度也顯著下降(與空白比P＜0.001)，E2/P比值顯著升高(與空白對照比P＜0.05)；模型對照組血清E2值已恢復(fù)至正常，這可能與大鼠自身強大的調(diào)控自愈能力有關(guān)，但血清P濃度降低更明顯，E2/P比值明顯高于正常。乳癖消組血清E2、P、E2/P值與空白對照組相似，無顯著性變化。
表3積雪草總甙治療實驗性大鼠乳腺增生癥試驗中對血清E2、P、E2/P值的影響(X)組別 動物數(shù) E2(pmol/L) P(nmol/L) E2/P空白對照組9137.3 50.83.43模型對照組8104.4 25.718.16乳癖消組 8105.7 46.66.46高劑量積雪草總977.6**8.4***37.88*甙組高中劑量積雪草8123.5 29.216.66總甙組中低劑量積雪草8144.2 34.725.55總甙組與空白對照組比*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001通常認為乳腺增生與體內(nèi)雌激素水平過高，孕酮水平過低，或兩者比例失調(diào)，E2/P比值增高密切相關(guān)。積雪草總甙顯著抑制E2、P所致的大鼠乳腺增生癥的發(fā)生率，抑制乳腺組織增生，降低血清E2濃度。但未見其對血清P濃度，E2/P比值增高的調(diào)節(jié)改善作用，其作用機制有待進一步研究。
1.4.結(jié)論積雪草總甙顯著抑制實驗性大鼠乳腺增生癥的乳頭、乳房增大，降低乳腺增生癥的發(fā)生率和乳腺組織的增生程度，降低血清E2含量，具有治療乳腺增生癥的作用。
2.積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生癥的預(yù)防試驗2.1.目的應(yīng)用苯甲酸E，和P制備大鼠乳腺增生癥的同時灌服積雪草總甙，觀察積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生的作用，為臨床試驗提供可靠依據(jù)。
2.2.試驗材料2.2.1.藥物同1.2.1。
2.2.2.試驗動物SD大鼠，成年雌性未孕，體重24l±15g。由江蘇省實驗動物中心提供，蘇動質(zhì)97001。
2.3.試驗方法與結(jié)果2.3.1.劑量設(shè)置與分組，同“積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生癥的治療試驗”。
2.3.2.方法SD雌性大鼠，成年未孕，體重241±15g，60只，隨機分成7組(1)空白對照組；(2)模型對照組；(3)陽性對照組(0.6g/kg乳癖消)；(4)高劑量組(8.84mg/kg積雪草總甙)；(5)高中劑量組(5.20mg/kg積雪草總甙)；(6)中低劑量組(3.06mg/kg積雪草總甙)；(7)低劑量組(1.80mg/kg積雪草總甙)。除空白對照組外各組應(yīng)用苯甲酸E2和P復(fù)制大鼠乳腺增生癥模型每日肌肉注射0.5mg/kg苯甲酸E2，40天，繼而改用4mg/kg黃體酮肌肉注射10天?？瞻讓φ战M同時肌注等量生理鹽水。在造模的同時，空白對照組、模型對照組灌服生理鹽水0.4ml/100g，其余5組灌服0.4ml/100g不同受試藥。試驗至第51天，停肌肉注射性激素，灌服受試藥后1小時，40mg/kg戊巴比妥鈉腹腔麻醉，眼眶取血，分離血清測血清E2、P濃度(由江蘇省人民醫(yī)院臨床檢測中心放免室檢測)；剪取胸部第二對乳房，游標(biāo)卡尺精確測量乳房直徑、乳房高度、乳頭直徑；再將左側(cè)第二對乳房浸入10％福爾馬林液中固定，石臘包埋切片，HE染色，鏡下觀察乳腺組織的病理變化，按組織的不同增生類型分為腺泡型增生、導(dǎo)管型增生、纖維型增生、混合型增生(含兩種及以上增生類型的統(tǒng)歸于此)，計算鏡下乳腺增生率；根據(jù)乳腺增生程度評分正常(-)-1分，輕度增生(+)-2分，中度增生(++)-3分，重度增生(+++)-4分，評判增生程度。試驗結(jié)束整理數(shù)據(jù)并作統(tǒng)計學(xué)處理(應(yīng)用Kruskal-Walls Test評定乳腺組織增生程度，應(yīng)用四表格確切概率法統(tǒng)計處理乳腺增生率，其它數(shù)據(jù)應(yīng)用方差分析法)。
2.3.3.結(jié)果，結(jié)果見表。
表4大體測量各受試組乳頭直徑、乳房直徑和高度的結(jié)果顯示，模型對照組乳頭直徑、乳房直徑和高度均顯著高于空白對照組(P＜0.01、P＜0.001)。積雪草總甙各劑量組乳頭直徑、乳房直徑和高度較模型對照組顯著降低(與模型對照組比P＜0.01、P＜0.001或P＜0.05)；與空白對照組乳房直徑和高度相近(P＞0.05)，高劑量組甚至低于空白對照組，呈一定的劑量相關(guān)性。0.6g/kg乳癖消具有同樣抑制乳房、乳頭增生的作用，但明顯弱于積雪草總甙組。
表4積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺增生的預(yù)防作用(大體測量，X)乳房乳頭直徑組別動物數(shù) 直徑 高度(mm)(mm) (mm)空白對照組10 1.13 2.94 1.20模型對照組81.77***3.51**2.02***乳癖消組 81.58***2.82##1.60***##
高劑量積雪草總甙組91.50***#2.42***###△△1.10###△△高中劑量積雪草總甙71.47***#2.69 1.22###△△組中低劑量積雪草總甙91.44***##2.83##1.19###△△組低劑量積雪草總甙組91.35**###2.72###△1.29###與空白對照比***p＜0.001；與模型對照比##p＜0.01，###p＜0.001；與乳癖消組比△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△p＜0.001表5鏡下對乳腺組織增生的觀察顯示，積雪草總甙各劑量組具有與陽性對照藥乳癖消相似的降低E2、P所致的乳腺增生率(與模型對照組比高、中低、低劑量組P＜0.05)和乳腺組織增生程度的作用(與模型對照組比高、高中、中低劑量組P＜0.05或P＜0.01)。積雪草總甙各劑量組和乳癖消組與空白對照組比較無顯著性差異?？瞻讓φ战M中有2只大鼠乳腺組織亦呈增生性變化，可能與其性周期變化有關(guān)，血清E2、P測定數(shù)據(jù)中也有個別大鼠血清E2、P值高出平均值10倍左右，可能也與其相關(guān)。
表5積雪草總甙對實驗性大鼠乳腺組織增生的預(yù)防作用(鏡下觀察，X)乳房數(shù)乳腺增生病變類型非乳腺 乳腺增生 乳腺組織增生組別(個) 腺泡型 導(dǎo)管型 混合型 增生率(％) 程度(分/個)空白對照組 10 0 02 8 20.0 4.50模型對照組 82 06 0 100.0**6.63**乳癖消組80 04 4 50.0 6.13高劑量積雪草總 91 03 5 44.4#5.00#甙組高中劑量積雪草 70 04 3 57.1 5.29#總甙組中低劑量積雪草 91 03 5 44.4#5.00#總甙組低劑量積雪草總 90 04 5 44.4#5.44甙組與空白對照組比*p＜0.05，**p＜0.01；與模型對照組比#p＜0.05表6血清E2、P、E2/P比值結(jié)果顯示，積雪草總甙明顯抑制實驗性大鼠乳腺增生癥中E2的增高，呈明顯的劑量相關(guān)性，高劑量積雪草總甙血清E2濃度顯著低于模型對照組(P＜0.05)，血清P濃度同時下降，因此E2/P比值與模型對照組同樣表現(xiàn)為增高，但從本次試驗結(jié)果中可看出，E2/P比值隨積雪草總甙劑量的增加而呈下降趨勢。
表6積雪草總甙預(yù)防實驗性大鼠乳腺增生癥試驗中對血清E2、P，E2/P值的影響(X)組別 動物數(shù) E2(pmol/L) P(nmol/L) E2/P空白對照組 10 142.5 44.1 4.19模型對照組 8 617.0**46.7 13.42***乳癖消組 8 394.9**28.1 17.99***高劑量積雪草總甙組 9 268.7**#31.7 14.45**高中劑量積雪草總甙組 7 388.8***30.0 15.39**中低劑量積雪草總甙組 9 507.7***24.4 29.56**低劑量積雪草總甙組 9 552.1***36.1 21.20**與空白對照組比*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001；與模型對照組比#p＜0.05以上結(jié)果顯示，在應(yīng)用E2、P復(fù)制大鼠乳腺增生癥的同時灌服積雪草總甙，可顯著減輕或完全抑制E2、P所致的大鼠乳頭、乳房增大；降低乳腺增生癥的發(fā)生率和乳腺組織增生程度；抑制血清E2濃度的升高，但對血清P、E2/P比值有一定的調(diào)節(jié)改善趨勢，其作用機制有待進一步研究。
2.4.結(jié)論應(yīng)用E2、P復(fù)制大鼠乳腺增生癥的同時灌服積雪草總甙，顯著抑制E2、P所致大鼠的乳頭、乳房增大，降低乳腺增生癥發(fā)生率和乳腺組織增生程度，降低血清E2濃度。具有預(yù)防乳腺增生的作用。
上述結(jié)果表明本發(fā)明的含積雪草提取物的藥劑具有治療和預(yù)防乳腺增生的作用。按常規(guī)方法制備各種制劑，包括普通片、咀嚼片、泡騰片、硬膠囊、滴丸、栓劑、顆粒劑、口服液和緩釋片等。
具體實施例方式
實施例1 普通片處方積雪草總甙 2-100mg淀粉 50mg乳糖 20mg硬脂酸鎂 2％制備方法常規(guī)法。
實施例2 咀嚼片處方積雪草總甙 2-100mg淀粉 350mg可可粉 350mg糖粉 350mg10％明膠溶液 Q.S.
硬脂酸鎂 12mg制備方法取總甙、淀粉可可粉、糖粉混勻，用10％明膠溶液濕潤制成軟材，制粒，壓片。
實施例3 泡騰片處方積雪草總甙 2-100mg酒石酸 450mg硫酸氫鈉 650mg糖粉 1600mg阿司巴甜 10mg
氯化鈉 Q.S.
色素 Q.S.
水性潤滑劑 Q.S.
制備方法取總甙，酒石酸分別過80目篩混合，以95％醇和適量色素混勻制成軟材，過12目篩制粒，于50℃干燥，備用，另取硫酸氫鈉，糖粉，阿司巴甜水溶液適量制成軟材，過12目篩制濕粒.于50℃干燥，與上述干?；旌?，整粒，加潤滑劑，混勻，壓片，片重約3g。
實施例4 硬膠囊處方積雪草總甙 2-100mg乳糖 50-150mg微粉硅膠 Q.S.
制備方法將藥物與輔料混勻，填充大小適宜的膠囊中即得。
實施例5 滴丸處方積雪草總甙 1份聚乙二醇-6000 1-10份制備方法聚乙二醇6000至油浴上加熱熔化，加1份積雪草總甙使溶解，滴至液體石蠟中冷卻，即成丸。
實施例6 栓劑處方積雪草總甙 2-100mg混合硬脂酸甘油脂至1.7g制備方法常規(guī)法實施例7 顆粒劑處方積雪草總甙 2-100mg甘露醇 500mg乳糖500mg制備方法混勻后，干法制顆粒。
實施例8 口服液處方積雪草總甙 2-100mg甜葉菊甙Q.S.
蒸餾水 至5-10ml實施例9 緩釋片處方積雪草總甙 6-300mg羥丙基甲基纖維素150-200mg硬脂酸鎂適量制備方法取積雪草總甙、羥丙基甲基纖維素混勻，制粒，整粒，壓片。
權(quán)利要求
1.一種用于治療和預(yù)防乳腺增生的含積雪草提取物的藥劑，其特征在于該藥劑包括積雪草提取物為活性成份與藥用輔料組成的。
2.一種含積雪草提取物用于治療和預(yù)防乳腺增生的藥物制劑的制備，將積雪草提取物和藥用輔料按配比稱取物料，以常規(guī)方法制成普通片、咀嚼片、泡騰片、硬膠囊、滴丸、栓劑、顆粒劑、口服液和緩釋片。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種用于治療和預(yù)防乳腺增生的含積雪草提取物的中藥制劑。本發(fā)明的制劑經(jīng)藥效學(xué)研究證實具有治療和預(yù)防乳腺增生作用。
文檔編號A61P15/08GK1507897SQ0215505
公開日2004年6月30日 申請日期2002年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月20日
發(fā)明者陸偉根, 王樸 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院