專利名稱：一種治療心腦血管疾病的中藥有效部位復(fù)方制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療心腦血管疾病的中藥有效部位的組合物及其制備方法，具體說是由中藥丹參中的總丹酚酸和三七中的三七總苷組成的藥物組合物及其制備方法。
三七是一味傳統(tǒng)的散瘀止血、消腫定痛的中藥。大量的研究表明，三七的有效成分為三七總苷。用傳統(tǒng)的提取方法提取的三七總苷含量不高，雜質(zhì)較多，病人用藥后的不良反應(yīng)較多，特別是注射用藥時(shí)，該問題就顯得尤為重要。
中醫(yī)認(rèn)為氣滯血瘀是心腦血管病發(fā)病的一個(gè)主要原因，以丹參、三七組成的中藥復(fù)方用于氣滯血瘀心腦血管病，療效顯著。但傳統(tǒng)的中藥復(fù)方存在著成分不清、機(jī)理不明、質(zhì)量難控、療效不穩(wěn)的缺點(diǎn)。
本發(fā)明提出的中藥有效部位復(fù)方制劑，是由從丹參中提取的總丹參酚酸和從三七中提取的三七總苷為原料組配而成。
本中藥有效部位復(fù)方制劑，其比較合適的配比(按重量)為總丹參酚酸(含丹酚酸B鎂鹽50％以上) 1份三七總苷(含人參皂苷Rg1、Rb1、R1占50％以上)0.1-15份，上述中藥組合物所治的心腦血管疾病包括腦梗塞、腦缺血、冠心病、心絞痛、心肌缺血、心肌梗死、心衰、心律大常等。
本發(fā)明還提出了上述有效部位組合物的制備方法。
對(duì)丹參，以丙酮進(jìn)行滲漉法提取，再經(jīng)大孔樹脂純化，得到含50％以上丹酚酸B鎂鹽的總丹參酚酸。
對(duì)三七，以乙醇進(jìn)行滲漉法提取，再經(jīng)大孔樹脂純化，得到含50％以上三七總苷提取物。
將上述2種組份按配比再配上相應(yīng)的各種輔劑，即可制得各種復(fù)方制劑。
所述制劑可以是注射劑、輸液、粉針劑、片劑、膠囊劑、緩釋片、滴丸、沖劑、微粒劑。
所述輔劑為各種制劑的常規(guī)輔料。
本發(fā)明中，總丹參酚酸及黃芪總苷的提取純化的具體步驟如下1.丹酚酸提取純化丹參酚酸性質(zhì)不穩(wěn)定，遇酸、堿、熱等劇烈條件會(huì)發(fā)生降解，故采用條件溫和、效率高的滲漉法。以丹酚酸B鎂鹽的得率及其純度為指標(biāo)，對(duì)影響丹參酚酸得率的主要因素所用丙酮濃度、量、滲漉前浸泡時(shí)間按三因素三水平進(jìn)行L9(33)正交試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，丙酮濃度在50～70％之間較好，溶劑使用量為丹參重量10倍以上，浸泡時(shí)間影響不大，一般在20分鐘以上。
將丙酮滲漉提取液，濃縮到原體積的1/10左右后，至無丙酮味，加少量水稀釋后，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過大孔樹脂柱，先以去離子蒸餾水洗脫，再以10倍以上柱體積的20-40％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，即得丹酚酸成分。再以高濃度乙醇液洗去脂溶性雜質(zhì)，再進(jìn)行下一輪純化。
丹酚酸成分對(duì)熱不穩(wěn)定，故采用冰凍干燥法進(jìn)行濃縮干燥。于低溫(＜50℃)減壓濃縮除去乙醇，繼續(xù)濃縮至原體積的1/10左右，以0.45μm微孔濾膜過濾，濃縮液按照常規(guī)凍干工藝-50℃預(yù)凍3-4小時(shí)，-10℃凍干，升溫至20℃保溫2-3小時(shí)，最終得黃色疏松結(jié)晶性粉末。其中，含丹酚酸B鎂鹽這50％以上。
2.三七總苷提取純化三七總苷可溶于水和乙醇，考慮到三七中含有大量淀粉，不宜采用水和低濃度的乙醇，以免糊化。故選擇55％～95％乙醇作為提取溶劑，采取以下三種提取方法滲漉法、浸漬法、水煎醇沉法，在此基礎(chǔ)上選定乙醇濃度、提取方法和乙醇用量作為考察的3個(gè)因素，進(jìn)行三因素三水平L9(33)試驗(yàn)。結(jié)果表明影響最大的是提取方法，其次是乙醇濃度，而乙醇用量則影響很小，滲漉法的效果最好。
滲漉提取液，濃縮到原體積的1/10左右后，加少量水稀釋，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過大孔樹脂柱，先以去離子蒸餾水洗脫，再以10倍以上柱體積20-40％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮即得。其中，人參皂苷Rg1、Rb1、R1占50％以上。
總丹參酚酸和三七總苷組合物的藥效學(xué)試驗(yàn)為了考察不同配比的總丹參酚酸和三七總苷的藥效，找到最佳療效的組方，設(shè)計(jì)不同試驗(yàn)，觀察總丹參酚酸和三七總苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎造成心肌梗塞模型的治療作用。實(shí)驗(yàn)選擇的配比為(總丹參酚酸/三七總苷)10/0、1/1、1/3、1/7、1/10、1/15、0/10，其給藥劑量總的均為1mg/kg；另加陰性對(duì)照生理鹽水組、陽性對(duì)照恬爾心組，共9組。
試驗(yàn)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)告的方法進(jìn)行。分別在給藥后30min、60min、90min、120min、180min記錄心外膜電圖的變化。心外膜電圖觀察指標(biāo)以ST段升高2mV以上的導(dǎo)聯(lián)數(shù)(NST)和ST段升高值的總和(∑ST)為指標(biāo)觀察給藥前后的變化，并計(jì)算心肌缺血程度(∑ST)和范圍(NST)。以用藥后不同時(shí)間實(shí)測(cè)值與用藥前進(jìn)行比較，以用藥后不同時(shí)間變化百分率(用藥前為100％)進(jìn)行組間比較。
每組動(dòng)物數(shù)為5條，給總丹參酚酸/三七總苷1.0mg/kg(臨用前用生理鹽水新鮮配制)，陽性對(duì)照藥劑量為0.5mg/kg，陰性對(duì)照組給1.0mg/kg的生理鹽水，三者均靜脈注射單次給藥。觀察犬心外膜電圖，觀察時(shí)間為給藥后0～3小時(shí)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下(1)總丹參酚酸和三七總苷對(duì)心肌缺血程度(心外膜電圖∑ST)的影響冠脈結(jié)扎后，心外電圖ST段總和(∑ST)明顯升高。生理鹽水組120min時(shí)∑ST升高達(dá)26.5±12.1％；總丹參酚酸和三七總苷靜脈給藥后均能減輕心肌缺血程度，其中1/1、1/3、1/7和1/10組及陽性對(duì)照組∑ST顯著下降(P＜0.01)，并有一定的劑量關(guān)系。作用從給藥30min持續(xù)至180min，各時(shí)間點(diǎn)與生理鹽水組比較均有顯著差異(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，總丹參酚酸和三七總苷靜脈給藥對(duì)犬冠脈結(jié)扎引起的急性心肌缺血程度有顯著的治療作用，且該作用與藥物配比有關(guān)。
給藥前后變化的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)用各組不同時(shí)間點(diǎn)變化值與生理鹽水組同一時(shí)間點(diǎn)變化值作組間方差分析檢驗(yàn)。
(2)總丹參酚酸和三七總苷對(duì)心肌缺血范圍(心外膜電圖N-ST)的影響總丹參酚酸和三七總苷能縮小心肌缺血范圍，降低N-ST值，作用可持續(xù)180min。其中1/1、1/3、1/7組及陽性對(duì)照組與生理鹽水組同時(shí)間點(diǎn)比較，有顯著差異(P＜0.05)或極顯著差異(P＜0.01)，1/10組僅在60min時(shí)差異顯著(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，總丹參酚酸和三七總苷靜脈注射能顯著降低心肌缺血范圍，且該作用與藥物配比有關(guān)。
(3)總丹參酚酸和三七總苷對(duì)心肌梗塞范圍的定量組織學(xué)檢測(cè)的影響用定量組織學(xué)檢測(cè)心肌梗塞范圍即用N-BT染色顯示總丹參酚酸和三七總苷對(duì)心肌梗塞范圍的影響與心外膜電圖測(cè)定的結(jié)果一致?？偟⒎铀岷腿呖傑侦o脈注射均能減少心肌梗塞范圍。其中1/1、1/3、1/7組及陽性對(duì)照組與生理鹽水組比較，有顯著差異(P＜0.05)或極顯著差異(P＜0.01)，1/10組僅對(duì)“梗塞區(qū)/全心”差異顯著(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，總丹參酚酸和三七總苷靜脈給藥對(duì)犬冠脈結(jié)扎引起的心肌梗塞范圍有顯著的改善作用，且該作用與藥物配比有關(guān)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，總丹參酚酸和三七總苷靜脈注射能顯著降低冠脈結(jié)扎犬的心肌缺血的程度，縮小心肌缺血范圍，定量組織學(xué)檢測(cè)與心外膜電圖測(cè)定的結(jié)果一致，與生理鹽水對(duì)照組比較，梗塞區(qū)顯著縮小，證明總丹參酚酸和三七總苷靜脈注射對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎引起的心肌梗塞有明顯的治療作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還證明，總丹參酚酸和三七總苷的配比對(duì)藥效有影響，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，總丹參酚酸和三七總苷的最佳配比應(yīng)為1/3～1/7。
將10kg三七粉碎成粗粉(20～40目)，按中國藥典收載的滲漉法，用10倍量75％的乙醇浸漬24h后，以每公斤每分鐘2ml速度緩慢滲漉，收集滲漉液；減壓濃縮滲漉液至原體積的1/10，加適量水稀釋，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過AB-8大孔樹脂柱，先用5倍體積的去離子蒸餾水洗脫，再用12倍柱體積的20％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮即得。其中含人參皂苷Rg1、Rb1、R1 50％以上。
取丹參酚酸提取物2g，三七總苷6g混合后用適量注射用水溶解，加甘露醇8g，按照常規(guī)凍干工藝凍干，即得注射用凍干粉。
將10kg三七粉碎成粗粉(20～40目)，按中國藥典收載的滲漉法，用12倍量75％的乙醇浸漬12h后，以每公斤每分鐘3ml速度緩慢滲漉，收集滲漉液；減壓濃縮滲漉液至原體積的1/10，加適量水稀釋，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過D101大孔樹脂柱，先用4倍體積的去離子蒸餾水洗脫，再用10倍柱體積的40％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮即得。其中含人參皂苷Rg1、Rb1、R1 50％以上。
取丹參酚酸提取物2g，加注射用水溶解；取三七總苷14g，加注射用水溶解。合并兩部分溶液，按常規(guī)方法配制成1000ml藥液，過濾，精濾，灌封，滅菌，檢驗(yàn)，得20ml/支注射劑共50支。
表1 犬冠脈結(jié)扎對(duì)心外膜電圖ST段總和(∑ST)的影響(mV，x±SD，n＝5只/組)組別 劑量指標(biāo) 0min 30min 60min90min 120min180min生理鹽水 1ml/kg x±SD332.8±120.5366.0±133.2 411.9±178.5 412.0±185.0 422.8±172.3 398.4±140.1變化％ 10.6±6.0 22.2±12.4 21.8±15.0 26.5±12.1 23.0±20.6恬爾心0.5mg/kg x±SD278.9±124.6180.0±134.0 177.4±140.7 176.6±155.0 177.5±135.9 204.3±146.8變化％ -42.4±21.3***-43.8±21.1***-45.0±24.0***-42.7±18.5***-33.0±24.0***10/01mg/kg x±SD317.6±103.0289.9±107.4 246.7±110.2 294.0±83.1 261.2±77.9 243.6±92.1變化％ 2.9±2.2 8.0±5.6 16.8±10.0 9.2±6.7 11.1±7.51/1 1mg/kg x±SD173.7±59.8 119.0±61.8 129.3±66.2 131.7±65.6 121.1±65.1 121.9±34.9變化％ -33.4±11.1***-27.5±13.6***-26.1±12.3***-32.7±12.2***-27.8±13.5***1/3 1mg/kg x±SD349.8±162.1256.0±125.1 249.8±124.4 261.5±130.6 249.5±117.7 228.9±104.6變化％ -25.3±16.4***-28.2±11.5***-26.1±6.6***-28.4±5.3***-31.6±16.6***1/7 1mg/kg x±SD271.5±65.7 174.2±78.4 188.4±102.4 190.4±113.4 196.1±90.4 203.6±118.0變化％ -38.0±18.2***-33.7±26.9***-34.3±30.1***-30.7±21.9***-29.7±28.9***1/101mg/kg x±SD264.2±126.8161.8±114.0 148.0±104.7 140.7±113.4 160.7±113.3 150.7±117.9變化％ -40.9±18.1***-43.5±21.7***-46.4±25.4***-40.9±20.2***-44.6±21.7***1/151mg/kg x±SD308.5±155.0267.9±88.3 279.1±120.0 285.2±82.9 310.4±103.5 224.7±66.1變化％ 7.9±3.9 14.6±6.711.0±7.28.9±5.7 3.1±2.50/101mg/kg x±SD348.1±123.8286.0±94.7 277.9±108.6 265.2±105.4 243.9±75.9 301.6±133.3變化％ 12.6±7.0 8.6±7.5 10.3±6.216.9±8.517.3±10.5**P＜0.05，***P＜0.01與生理鹽水組比較表2 犬冠脈結(jié)扎對(duì)心肌梗塞范圍(N-ST)的影響(點(diǎn)，x±SD，n＝5只/組)組別 劑量 指標(biāo) 0min 30min 60min 90min120min 180min生理鹽水 1ml/kg x±SD28.4±1.3 28.6±2.128.6±1.7 28.4±1.1 28.4±1.5 27.8±1.5變化％ 0.6±3.0 0.7±2.9 0.2±7.4 0.2±8.1-1.8±10.0恬爾心0.5mg/kg x±SD26.6±2.1 18.8±5.018.0±3.7 17.6±4.9 17.4±3.8 17.2±5.4變化％ -29.9±13.8***-32.3±13.2***-34.0±17.3***-34.8±12.5***-35.4±19.4***10/01mg/kg x±SD26.6±3.7 22.4±3.223.2±3.1 23.6±2.3 22.4±2.6 23.2±2.2變化％ -15.0±12.7 -12.2±10.7 -10.2±12.4 -14.5±14.9 -11.9±9.71/1 1mg/kg x±SD26.4±1.1 18.8±4.120.0±4.1 22.2±3.8 19.0±4.0 19.8±2.2變化％ -29.1±13.0***-24.6±12.4**-16.2±12.0***-28.4±11.9**-25.0±7.5**1/3 1mg/kg x±SD27.0±2.2 22.0±3.720.8±6.1 21.8±5.4 19.6±3.2 18.8±3.3變化％ -18.6±11.7**-23.5±19.8**-19.7±16.8***-27.7±8.0***-30.7±7.7***1/7 1mg/kg x±SD27.8±1.8 20.8±1.620.6±3.4 20.8±4.8 20.6±3.2 19.6±3.0變化％ -24.9±7.9***-25.6±13.6***-24.9±17.6***-26.0±9.2***-29.5±9.6***1/101mg/kg x±SD28.7±2.8 23.9±5.624.7±4.4 22.2±3.8 24.6±4.0 23.6±3.9變化％ -14.0±17.7 -11.2±3.9**-8.2±13.0-9.5±13.9 -16.9±15.01/151mg/kg x±SD26.4±2.1 23.9±5.624.7±4.4 22.2±3.8 24.6±4.0 23.6±3.9變化％ -9.2±13.0 -16.0±15.7 -11.3±14.1 -17.2±17.0 -6.4±13.50/101mg/kg x±SD28.8±1.7 26.3±4.125.9±6.8 27.2±4.3 25.7±3.5 26.2±3.5變化％ 1.6±1.0 4.4±1.9 -2.2±1.3 -0.8±3.8 2.8±3.1**P＜0.05，***P＜0.01與生理鹽水組比表3犬冠脈結(jié)扎對(duì)N-BT染色測(cè)定心肌梗塞范圍的影響( x±SD，n＝5只/組)組別 劑量梗塞區(qū)/全心(％)梗塞區(qū)/左心室(％)生理鹽水 1ml/kg13.7±2.1 22.8±3.5恬爾心0.5mg/kg 6.7±1.5***10.9±2.0***10/01mg/kg10.2±4.6 16.3±8.11/1 1mg/kg9.4±3.0**14.5±5.2***1/3 1mg/kg7.8±2.3***12.6±3.8***1/7 1mg/kg7.0±2.4***10.5±3.8***1/101mg/kg11.4±2.5**17.0±5.31/151mg/kg11.2±4.3 17.9±7.20/101mg/kg12.0±4.3 18.8±7.6**P＜0.05，***P＜0.01與生理鹽水組比較
權(quán)利要求
1.一種治療心腦血管疾病的中藥有效部位復(fù)方制劑，其特征在于由從丹參中提取的總丹參酚酸和從三七中提取的三七總苷為原料組配而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥有效部位復(fù)方制劑，其特征在于原料組份的重量配比為含丹酚酸B鎂鹽50％以上的總丹參酚酸1份，含人參皂苷Rg1、Rb1、R1 50％以上的三七總苷 0.1-15份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥有效部位復(fù)方制劑，其特征在于原料組份的重量配比為總丹參酚酸三七總苷為1∶3-1∶7。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的中藥有效部位復(fù)方制劑，其特征在于加入相應(yīng)輔料，成為注射劑、輸液、粉針劑、片劑、膠囊劑、緩釋片、滴丸、沖劑、微粒劑。
5.一種如權(quán)利要求1-3所述的治療心腦血管疾病的中藥有效部位復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于，對(duì)丹參，以丙酮進(jìn)行滲漉法提取，再經(jīng)大孔樹脂純化，得到含50％以上丹酚酸B鎂鹽的總丹參酚酸；對(duì)三七，以乙醇進(jìn)行滲漉法提取，再經(jīng)大孔樹脂純化，得到含50％以上三七總苷提取物；將取兩種有效部位，按配比混合，即制得各種制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于提取丹參酚酸時(shí)，丙酮濃度在50～70％之間，溶劑使用量為丹參重量10倍以上，浸泡時(shí)間在20分鐘以上；將丙酮滲漉提取液，濃縮到原體積的1/10左右后，至無丙酮味，加少量水稀釋后，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過大孔樹脂柱，先以去離子蒸餾水洗脫，再以10倍以上柱體積的20-40％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，即得丹酚酸成分；再以高濃度乙醇液洗去脂溶性雜質(zhì)，再進(jìn)行下一輪純化，采用冰凍干燥法進(jìn)行濃縮干燥，最終得黃色疏松結(jié)晶性粉末。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于提取三七總苷時(shí)，選擇55％～95％乙醇作為提取溶劑；滲漉提取液，濃縮到原體積的1/10左右后，加少量水稀釋，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過大孔樹脂柱，先以去離子蒸餾水洗脫，再以10倍以上柱體積20-40％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮即得。
全文摘要
本發(fā)明為一種治療心腦血管疾病的中藥有效部位復(fù)方制劑及其制備方法。該復(fù)方制劑由從丹參中提取的總丹參酚酸和從三七中提取的三七總苷按一定的配比組合制成。本發(fā)明的復(fù)方藥物既提高了傳統(tǒng)中藥的藥理作用和臨床療效，同時(shí)降低了雜質(zhì)含量，可制成各種制劑，用于治療腦梗塞、腦缺血、冠心病、心絞痛、心肌缺血、心肌梗死、心衰、心律失常等，實(shí)現(xiàn)了現(xiàn)代中藥復(fù)方安全、有效、穩(wěn)定、可控、方便的目的。
文檔編號(hào)A61K31/7028GK1425379SQ0215500
公開日2003年6月25日 申請(qǐng)日期2002年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月19日
發(fā)明者張衛(wèi)東, 蘇娟, 張川 申請(qǐng)人:上海博泰醫(yī)藥科技有限公司