專利名稱：一種兩頭尖提取物的制備工藝及其提取物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥有效部位的提取方法，更具體地說，本發(fā)明涉及一種從中藥兩頭尖中提取有效部位的方法。本發(fā)明還涉及由該方法所得到的兩頭尖提取物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
兩頭尖為毛茛科銀蓮花屬植物多被銀蓮花(Anemone raddeana Regel)的干燥根莖，亦名竹節(jié)香附、草烏喙，《中華人民共和國藥典》(2000年版一部)正文第133頁記載兩頭尖具有“祛風(fēng)濕，消臃腫”的作用，用于治療“風(fēng)寒濕痹，四肢拘攣，骨節(jié)疼痛，臃腫潰爛”等。
現(xiàn)代藥學(xué)研究表明，兩頭尖還具有抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗驚厥等作用?！稌r珍國醫(yī)國藥》(1999年)第10卷第1期劉永宏、劉大有等《銀蓮花屬植物藥用新進展》一文報道銀蓮花屬植物具有抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗驚厥等作用，尤其是抗癌活性顯著，其總皂甙，尤其是皂甙D即銀蓮花素A(Raddeanin A)能抑制癌的生成。《中國藥理學(xué)報》(1985年9月)第6卷第3期劉力生、吳鳳鍔等《多被銀蓮花素A對癌細胞DNA、RNA，蛋白質(zhì)和血漿cAMP含量的影響》一文報道有效量的銀蓮花素A在體外能顯著抑制小鼠S180和腹水型肝癌細胞DNA，RNA和蛋白質(zhì)的合成，從而對抑制癌細胞有利?！短m州大學(xué)學(xué)報》(自然科學(xué)版)21(生物學(xué)輯刊)1985年12月王肖萱、劉秦等《銀蓮花素A和阿爾泰藜蘆總堿誘變作用的研究》一文也通過SCD技術(shù)(娣妹染色單體分化染色法)測定了兩種植物天然產(chǎn)物銀蓮花素A、阿爾泰藜蘆總堿誘發(fā)人體淋巴細胞SCE的作用，以及劑量與效應(yīng)之間的關(guān)系并比較二者誘發(fā)SCE能力的大小，從而表明銀蓮花素A可能不是誘變劑而可能是較理想的抗癌藥?！痘瘜W(xué)學(xué)報》(1984年)第42卷第3期吳鳳鍔《中藥竹節(jié)香附化學(xué)成分的研究》一文報道銀蓮花素A是兩頭尖中具有抗癌作用的主要活性成分。
中國專利公開號CN 1312253A，
公開日2001年9月12日，發(fā)明創(chuàng)造的名稱為兩頭尖提取物的制備工藝和用途，該申請案公開了一種兩頭尖提取物的制備工藝和用途，從兩頭尖及其莖、葉、花、果中提取具有藥用價值的總皂甙及單體皂甙D，并制成藥物，用于治療惡性腫瘤疾病。其總皂甙的制備工藝主要包括以下步驟用50-70％乙醇提取，或用水煎醇沉法提取，然后經(jīng)大孔吸附樹脂處理，獲得兩頭尖總皂甙。其不足之處是提取得到的總皂甙中銀蓮花素A的含量較低，且銀蓮花素A的收率也較低。
中國專利公開號CN 1342655A，
公開日2002年4月3日，發(fā)明創(chuàng)造的名稱為竹節(jié)香附中皂甙的轉(zhuǎn)化以及總皂甙和銀蓮花素A的提取工藝，該申請案公開了一種采用堿水解使竹節(jié)香附總皂甙中含糖三個以上的皂甙轉(zhuǎn)化為銀蓮花素A、以及總皂甙和銀蓮花素A的提取工藝。其總皂甙的制備工藝主要包括以下步驟用堿水溶液煮沸1-8小時或用堿水溶液拌勻后用高溫蒸氣蒸1-5小時，使竹節(jié)香附總皂甙中含糖三個以上的皂甙轉(zhuǎn)化為銀蓮花素A，再用酸中和，用50-100％醇或乙酸乙酯回流提取，過濾蒸干，得總皂甙。其不足之處是在發(fā)明所述的條件下，竹節(jié)香附總皂甙中含糖三個以上的皂甙水解轉(zhuǎn)化為銀蓮花素A的同時，銀蓮花素A也同時部分水解，因而，提取得到的總皂甙中，銀蓮花素A的含量及收率均不高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，針對現(xiàn)有技術(shù)中兩頭尖提取物中抗癌活性較強的成分銀蓮花素A的含量及其收率均較低的缺點，提供一種銀蓮花素A的收率及純度均較高的兩頭尖提取物的制備工藝及其提取物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明中兩頭尖提取物的制備工藝，包括如下工藝步驟(1)取兩頭尖或粉碎后的兩頭尖，加堿液，進行提取，得提取液。其中，在加堿液后可先浸泡再提取，最好是浸泡6-48小時后再提?。惶崛》椒梢允侨我獬Ｒ?guī)的中藥提取方法，優(yōu)選滲漉法、煎煮法或回流提取法，最好是滲漉法；加堿液的量優(yōu)選4-40倍；堿液可以是堿性水溶液或堿性醇溶液，優(yōu)選堿性水溶液；堿液的PH值優(yōu)選9-13。
(2)用酸中和提取液至PH值為4-8，最好為6-7.5；將中和后的提取液濃縮至相對密度為0.95-1.30，加入乙醇至濃度為50-95％，靜置一定時間，最好是6小時以上；取上層清液并回收乙醇，得一混懸物。
(3)將該混懸物離心或過濾，得沉淀。
(4)將該沉淀溶于60-100％乙醇，加水調(diào)節(jié)乙醇濃度為5-50％，優(yōu)選20-40％，離心或過濾，取沉淀，即得到兩頭尖提取物。
如有必要，所得上述提取物可重復(fù)步驟(4)的操作，以進一步分離純化，得到銀蓮花素A含量更高的提取物。
本發(fā)明中由以上制備工藝得到的兩頭尖提取物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，其解決方案是，將含有治療有效量的根據(jù)以上所述的制備工藝所得到的兩頭尖提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成任何劑型的藥物，優(yōu)選片劑、顆粒劑、膠囊劑或注射用針劑等。其中根據(jù)以上所述的制備工藝所得到的兩頭尖提取物的治療有效量為0.1-5毫克/日公斤，相當(dāng)于生藥材60-300毫克/日公斤。
本發(fā)明的一個重要特點是，由以上所述制備工藝所得到的兩頭尖提取物中抗癌活性較強的成分銀蓮花素A的純度及收率均較高，純度可達到50％以上，收率以1公斤藥材計，得到銀蓮花素A可達10克以上；且本工藝操作簡單，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的另一個重要特點是，由含有治療有效量的以上所述兩頭尖提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成的藥物，具有抗癌作用較強、日用劑量小、服用方便等優(yōu)點。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的描述。
取兩頭尖或粉碎后的兩頭尖，加堿液進行提取，得提取液；用酸中和提取液至PH值為4-8，將中和后的提取液濃縮至相對密度為0.95-1.30，加入乙醇至濃度為50-95％，靜置，取上層清液并回收乙醇，得一混懸物；將該混懸物離心或過濾，得沉淀；將該沉淀溶于60-100％乙醇，加水調(diào)節(jié)乙醇濃度為5-50％，離心或過濾，取沉淀，得到兩頭尖提取物。
上述兩頭尖提取物，必要時還可以進一步分離純化，除去雜質(zhì)，以得到銀蓮花素A含量更高的產(chǎn)物。
下面是制備兩頭尖提取物的對比例和實施例。通過對比例和實施例可了解到不同工藝條件對銀蓮花素A純度及收率的影響，其中收率以從每公斤藥材中得到銀蓮花素A的多少(克/公斤藥材)計。
對比例1取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入10公斤1％的NaOH水溶液，微沸2小時，再用50％的硫酸乙醇溶液進行中和，調(diào)節(jié)PH值至8，中和后的樣品濃縮至半干，用適量95％乙醇回流溶出后再蒸干，殘渣再用95％乙醇溶解，過濾后蒸干，之后用95％乙醇再次溶解，濾出液回收溶劑，真空干燥，得總皂甙52克，其中銀蓮花素A含量為7.2％，銀蓮花素A收率為3.74克/公斤藥材。
對比例2取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入12公斤的70％乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時，過濾提取液合并，減壓回收至無醇味，干燥后加入70％的乙醇溶液溶解，上D101大孔吸附樹脂柱，用水洗至無色后，用70％的乙醇溶液洗脫至無皂甙反應(yīng)為止，將洗脫液用1％活性炭脫色30分鐘，趁熱過濾，回收乙醇至無醇味，干燥，得黃褐色粉末33.9克，其中銀蓮花素A含量為18.75％，銀蓮花素A收率為6.36克/公斤藥材。
對比例3取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入15公斤水，煎煮3次，每次2小時，過濾，合并煎液，濃縮至相對密度為1.20，加乙醇，使乙醇含量達70％，靜置24小時，過濾，回收乙醇至2050ml，加乙醇使醇含量達90％，靜置24小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，干燥后加入70％的乙醇溶液溶解，上D101大孔吸附樹脂柱，用水洗至無色后，用70％的乙醇溶液洗脫至無皂甙反應(yīng)為止，將洗脫液用1％活性炭脫色30分鐘，趁熱過濾，回收乙醇至無醇味，干燥，得黃褐色粉末23.7克，其中銀蓮花素A含量為13.23％，銀蓮花素A收率為3.14克/公斤藥材。
對比例4取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入70％的乙醇溶液，滲漉至無皂甙反應(yīng)，將滲漉液回收乙醇至無醇味，干燥后加入70％的乙醇溶液溶解，上D101大孔吸附樹脂柱，用水洗至無色后，用70％的乙醇溶液洗脫至無皂甙反應(yīng)為止，將洗脫液用1％活性炭脫色30分鐘，趁熱過濾，回收乙醇至無醇味，干燥，得黃褐色粉末29.2克，其中銀蓮花素A含量為20.15％，銀蓮花素A收率為5.88克/公斤藥材。
實施例1取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入2公斤PH值為13.6的NaOH溶液，浸泡4小時，開始滲漉，滲漉速度為2ml/min，滲漉時間為25小時。合并滲漉液，用2M的鹽酸調(diào)PH值至6.5，減壓濃縮至相對密度0.95，加入乙醇至醇濃度為80％，放置2小時，吸取上清液，減壓回收乙醇至無醇味，此時有沉淀析出，濾過，將沉淀溶于90％乙醇中，加水至醇濃度5％，靜置片刻，離心，得淡黃色沉淀，干燥后重16克，其中銀蓮花素A含量為65.04％，銀蓮花素A收率為10.41克/公斤藥材。
實施例2取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入4公斤PH值為13的KOH溶液，浸泡24小時，開始滲漉，滲漉速度為5ml/min，滲漉時間為40小時。合并滲漉液，用1M的硫酸調(diào)PH值至7.0，減壓濃縮至相對密度1.30，加入乙醇至醇濃度為70％，放置16小時，吸取上清液，減壓回收乙醇至無醇味，此時有沉淀析出，離心，將沉淀溶于60％乙醇中，加水至醇濃度30％，靜置片刻，離心，得淡黃色沉淀，干燥后重22克，其中銀蓮花素A含量為68.08％，銀蓮花素A收率為14.97克/公斤藥材。
實施例3取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，用PH值為12.69的NaOH溶液進行滲漉，滲漉速度為2ml/min，滲漉時間為70小時。合并滲漉液，用1M的硫酸調(diào)PH值至5.0，減壓濃縮至相對密度1.02，加入乙醇至醇濃度為85％，放置8小時，吸取上清液，減壓回收乙醇至無醇味，此時有沉淀析出，離心，將沉淀溶于70％乙醇中，加水至醇濃度40％，靜置片刻，離心，得淡黃色沉淀，干燥后重19克，其中銀蓮花素A含量為71.12％，銀蓮花素A收率為13.51克/公斤藥材。
實施例4取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入4公斤PH值為11的Ca(OH)2溶液，浸泡8小時，開始滲漉，滲漉速度為20ml/min，滲漉時間為15小時。合并滲漉液，用1M的硫酸調(diào)PH值至4.5，減壓濃縮至相對密度1.15，加入乙醇至醇濃度為75％，放置24小時，吸取上清液，減壓回收乙醇至無醇味，此時有沉淀析出，離心，將沉淀溶于60％乙醇中，加水至醇濃度10％，靜置片刻，離心，得淡黃色沉淀，干燥后重19克，其中銀蓮花素A含量為72.35％，銀蓮花素A收率為13.75克/公斤藥材。
實施例5取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入4公斤PH值為10的氨水溶液，浸泡3小時，開始滲漉，滲漉速度為2ml/min，滲漉時間為90小時。合并滲漉液，用2M的鹽酸調(diào)PH值至6.0，減壓濃縮至相對密度1.20，加入乙醇至醇濃度為80％，放置16小時，吸取上清液，減壓回收乙醇至無醇味，此時有沉淀析出，離心，將沉淀溶于80％乙醇中，加水至醇濃度20％，靜置片刻，離心，得淡黃色沉淀，干燥后重25克，其中銀蓮花素A含量為70.23％，銀蓮花素A收率為17.56克/公斤藥材。
實施例6取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入6公斤PH值為9的NaOH溶液，浸泡48小時，開始滲漉，滲漉速度為5ml/min，滲漉時間為50小時。合并滲漉液，用1M的硫酸調(diào)PH值至7.0，減壓濃縮至相對密度1.06，加入乙醇至醇濃度為85％，放置4小時，吸取上清液，減壓回收乙醇至無醇味，此時有沉淀析出，離心，將沉淀溶于95％乙醇中，加水至醇濃度50％，靜置片刻，離心，得淡黃色沉淀，干燥后重18克，其中銀蓮花素A含量為66.21％，銀蓮花素A收率為11.92克/公斤藥材。
實施例7取兩頭尖1公斤，粉碎成20目粗粉，加入6公斤PH值為8.6的NaOH溶液，浸泡48小時，開始滲漉，滲漉速度為2ml/min，滲漉時間為120小時。合并滲漉液，用1M的硫酸調(diào)PH值至6.0，減壓濃縮至相對密度1.25，加入乙醇至醇濃度為80％，放置24小時，吸取上清液，減壓回收乙醇至無醇味，此時有沉淀析出，離心，將沉淀溶于85％乙醇中，加水至醇濃度40％，靜置片刻，離心，得淡黃色沉淀，干燥后重18克，其中銀蓮花素A含量為70.20％，銀蓮花素A收率為12.64克/公斤藥材。
將含有治療有效量的根據(jù)以上所述制備工藝所得到的兩頭尖提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成任何一種劑型的藥物。
下面是兩頭尖提取物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用的實施例。
實施例1制成片劑將兩頭尖提取物210g與淀粉80g混合均勻，用10％的淀粉漿制粒，于65℃的烘箱中烘干，加入3g硬脂酸鎂，混合均勻，壓片，制成1000片，每片含0.3g。
實施例2制成顆粒劑將兩頭尖提取物2000g與淀粉200g、糊精800g，混合均勻，用80％乙醇適量制粒，于80℃干燥，分裝成1000袋，每粒3g。
實施例3制成膠囊劑將兩頭尖提取物200g與玉米淀粉97g混合攪拌均勻，加入適量95％乙醇濕潤制粒，干燥，加入3g硬脂酸鎂，混合均勻，裝入膠囊中，制成膠囊1000粒，每粒含內(nèi)容物0.3g。
實施例4制成注射用針劑將兩頭尖提取物0.6g溶于PH值為12的NaOH溶液600ml中，用0.05mol/l的鹽調(diào)PH值為7.5，用微孔濾膜抽濾，加注射用水至1000ml，在無菌條件下灌封入規(guī)格為2ml的安瓿。
權(quán)利要求
1.一種兩頭尖提取物的制備工藝，包括如下工藝步驟(1)取兩頭尖或粉碎后的兩頭尖，加堿液進行提取，得提取液；(2)用酸中和提取液至PH值為4-8，將中和后的提取液濃縮至相對密度為0.95-1.30，加入乙醇至濃度為50-95％，靜置，取上層清液并回收乙醇，得一混懸物；(3)將該混懸物離心或過濾，得沉淀；(4)將該沉淀溶于60-100％乙醇，加水調(diào)節(jié)乙醇濃度為5-50％，離心或過濾，取沉淀，得到兩頭尖提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(1)中加堿液后先浸泡再提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(1)中加堿液后先浸泡6-48小時再提取。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(1)中提取方法為滲漉法、煎煮法或回流提取法。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(1)中提取方法為滲漉法。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(1)中堿液為堿性水溶液或堿性醇溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(1)中堿液為堿性水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(1)中加堿液的量為4-40倍。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(1)中堿液PH值為9-13。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(2)中用酸中和提取液至PH值為6-7.5。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(2)中靜置時間為6小時以上。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝，其中步驟(4)中加水調(diào)節(jié)乙醇濃度為20-40％。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝得到的兩頭尖提取物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，將含有治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備工藝所得到的兩頭尖提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成任何一種劑型的藥物。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的兩頭尖提取物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，其中所說的劑型是片劑、顆粒劑、膠囊劑或注射用針劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種兩頭尖提取物的制備工藝，它是以兩頭尖藥材為原料，經(jīng)堿提、酸中和、濃縮、醇沉等處理后，再進一步純化精制而得。所得兩頭尖提取物中抗癌活性較強的成分銀蓮花素A的純度及收率均較高，純度可達到50％以上，收率以1公斤藥材計，得到銀蓮花素A可達10克以上；且本工藝操作簡單，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明還公開了由該制備工藝得到的提取物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，將含有治療有效量的以上所述兩頭尖提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成一定劑型的藥物，具有抗癌作用較強、日用量小、服用方便等優(yōu)點。
文檔編號A61K31/704GK1446818SQ0212811
公開日2003年10月8日 申請日期2002年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月27日
發(fā)明者李文軍, 羅前東, 孫倩, 李錦秀 申請人:成都和康藥業(yè)有限責(zé)任公司