專利名稱：藥物或化妝品組合物及抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的pkc抑制劑和mmp抑制劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物或化妝品組合物，并且還涉及至少一種用于抑制免疫和/或炎性和/或刺激性反應(yīng)涉及的細(xì)胞(例如，真皮樹突細(xì)胞(dermal dendrocytes)，單核細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，并且更具體地是朗格漢斯細(xì)胞)遷移的活性化合物的應(yīng)用。
皮膚的一種主要功能是保護(hù)身體抵抗外界環(huán)境的攻擊。這種保護(hù)大部分通過皮膚中存在的細(xì)胞的協(xié)作提供，這些是在存在有害試劑的情況下能夠產(chǎn)生抗這種有害試劑的炎性和/或免疫反應(yīng)的細(xì)胞。它們是樹突細(xì)胞、表皮朗格漢斯細(xì)胞(LCs)和真皮樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、肥大細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。
LCs是源自脊髓的樹狀細(xì)胞，它位于非淋巴組織，例如皮膚和粘膜(口腔、肺、膀胱、直腸、陰道)。皮膚中，LCs插入棘細(xì)胞位置內(nèi)的表皮角質(zhì)化細(xì)胞之間。至于超微結(jié)構(gòu)，它們的特征在于出現(xiàn)膜源的特異性細(xì)胞器，伯貝克(Birbeck)顆粒。在免疫組織化學(xué)術(shù)語中，LCs具體表示CDla分子和II類主要組織相容性復(fù)合分子。
作為抗原呈遞細(xì)胞，LCs在免疫中起決定作用。準(zhǔn)確地說，對小鼠進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)證實(shí)LCs捕獲位于表皮的抗原并且朝穿流皮膚的淋巴組織遷移，這里它們向T細(xì)胞呈遞抗原。皮膚免疫應(yīng)答的開始取決于LCs離開表皮以遷移至鄰近的淋巴結(jié)的能力。大量因素能影響這種遷移粘附分子的表達(dá)，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，半抗原，細(xì)胞因子，等等。然而，還未完全闡明涉及LC遷移的機(jī)理。具體來說，在到達(dá)淋巴結(jié)之前，LCs必須不僅越過真皮表皮連接(DEJ)，而且本身建立通過皮膚細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)通道。DEJ主要由層粘連蛋白5、IV和VII型膠原、巢蛋白和基膜蛋白聚糖組成。環(huán)繞皮膚成纖維細(xì)胞的ECM主要包含I和III型膠原。
作為捕獲表面抗原之后LC遷移的結(jié)果，還能觀察到皮膚病學(xué)的病理學(xué)條件。
在特應(yīng)性濕疹中，LCs能夠在表面附著IgEs并且誘導(dǎo)病理學(xué)免疫應(yīng)答。
在接觸性濕疹中，LCs起重要作用，這是由于它們在將抗原呈遞至T淋巴細(xì)胞之前捕獲和處理抗原。這種T淋巴細(xì)胞將其保持在記憶中，在第二次接觸時會觸發(fā)免疫反應(yīng)。
根據(jù)上述，因此非常希望能夠修改LCs的遷移能力以試圖修改免疫和/或炎性反應(yīng)的誘導(dǎo)。
現(xiàn)已完全令人吃驚和意外地發(fā)現(xiàn)，某些化合物使得驚人地抑制由變應(yīng)原劑的存在誘導(dǎo)的朗格漢斯細(xì)胞遷移是可能的。
因此本發(fā)明涉及一種藥物或化妝品組合物，其特征在于它包括至少一種用于抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物，所述的活性化合物選自蛋白激酶C(PKC)抑制劑、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制化合物，和它們的組合，以及至少一種藥學(xué)上或化妝品上可接受的賦形劑。
按照本發(fā)明，術(shù)語“蛋白激酶C”或“PKCs”意欲指催化細(xì)胞底物上磷酸化反應(yīng)的酶。
當(dāng)它們被激活時，PKCs磷酸化蛋白底物上根據(jù)細(xì)胞類型變化的特異性絲氨酸或蘇氨酸殘基。在許多細(xì)胞中，PKC活化增加了特異性基因的轉(zhuǎn)錄。
蛋白激酶C(PKCs)是由一族基因(11個不同的異構(gòu)體)編碼的蛋白。具體已知，這些蛋白涉及由生長因子和細(xì)胞因子，并且還由一定數(shù)量的其它生物學(xué)分子介導(dǎo)的細(xì)胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。蛋白激酶β2(PKC-β2)顯示出由表皮LCs特異性表達(dá)。
因此任何對本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的抑制PKCs磷酸化作用活性的化合物都能夠用作本發(fā)明的PKC-抑制化合物。例如，可提及在申請WO99/43805(Incyte Pharma Inc.)中描述的多肽。
具體來說，這種活性化合物是選自非特異性PKC抑制劑、特異于異構(gòu)體PKC-β2的抑制劑，和它們的組合的PKC-抑制化合物。
更具體地，這種活性化合物是一種PKC-抑制化合物，它選自苯酚和多元酚化合物，原花青素(兒茶素、表兒茶素，等)，α-香樹精，羽扇醇，亞油酸羽扇醇酯，甾醇，甾烷醇，三萜烯醇和其氫化同系物，抗生素如十字孢堿或Ro-318425(或Calbiochem公司銷售的2-(8)-(氨甲基)-6，7，8，9-四氫吡啶酚(1，2-a)-吲哚-3-基)-3-(1-甲基吲哚-3-基馬來酰亞胺，HCl)，通過和生理學(xué)PKC活化劑競爭起作用的化合物，如二?；视突蚍鸩ù减?，(溶血)鞘脂質(zhì)型的皮膚脂質(zhì)，溶血磷脂如神經(jīng)酰胺和擬神經(jīng)酰胺，或者鞘氨醇和植物鞘氨醇，以及這些化合物的天然或合成起源的衍生物、前體、類似物和同系物。
按照本發(fā)明，術(shù)語“苯酚和多元酚化合物”意欲指簡單的酚，苯醌、酚酸、苯乙酮、苯乙酸、羥基肉桂酸、香豆素和異香豆素、色酮、萘醌、呫噸酮、蒽醌、類黃酮、木酚素和新木酚素、木質(zhì)素、查耳酮、二氫查耳酮、噢哢、黃酮、黃酮醇、黃烷酮醇、黃烷酮、黃烷醇、黃烷雙醇或隱色花色素、花色素、異類黃酮、雙類黃酮、原花色素和稠合的單寧。
按照本發(fā)明，術(shù)語“甾醇”更具體地意欲指甾醇，即在3位具有羥基基團(tuán)的全氫化-1，2-環(huán)戊并菲化合物，和如下面通式(I)的甾醇的類似物。
因此，優(yōu)選地，按照本發(fā)明可使用的甾醇對應(yīng)于通式 其中位置5的虛線表示的不飽和對應(yīng)于甾醇情況下的不飽和，R表示直鏈或支鏈的包含1至25個碳原子的不飽和或飽和的烴基鏈。具體來說，R選自C1-C12烷基、C1-C8烷氧基、C2-C8烯基、C3-C8環(huán)烷基、鹵代C2-C8烯基，和鹵代C2-C8炔基。術(shù)語“鹵代”表示一個或多個鹵素取代基，即一個或多個氯、氟、溴或碘原子。
在按照本發(fā)明能被有益地使用的甾醇之中，可具體提及β-谷甾醇、α-谷甾醇、γ-谷甾醇、豆甾醇或選擇性地，菜油甾醇，和它們的混合物。例如，β-谷甾醇可以Kaukas公司銷售的商品“Ultra”(主要包括β-谷甾醇)產(chǎn)品的形式使用。在使用甾醇混合物的情況中，例如可提及漢高公司銷售的商品“Generol”，其主要包括β-谷甾醇(約50重量％)、豆甾醇和菜油甾醇，否則是Kaukas公司的產(chǎn)品“Primal”。
在按照本發(fā)明能被有益地使用的三萜烯醇中，可具體提及β-香樹精、吉柯二醇、蒲公英甾醇、環(huán)阿屯醇、24-亞甲基-環(huán)阿屯醇、羽扇醇、羊毛甾醇及它們的混合物。
按照本發(fā)明，術(shù)語三萜烯醇的“氫化同系物”意欲指其中可能存在的不飽和鍵已經(jīng)根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法進(jìn)行氫化(即，轉(zhuǎn)化成飽和鍵)的相應(yīng)的三萜烯醇化合物。
甚至更具體地，活性化合物是對應(yīng)于該通式的PKC-抑制化合物 其中R1表示氫原子或者含有1至40個碳原子，具體是8至36個，且更具體是16至20個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，該鏈可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基；R2表示氫原子或如化學(xué)式Z-CO-的基團(tuán)，這里Z表示(u)含有1至40個碳原子，具體是16至36個，更具體是20至34個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基；或(v)R6-CO-O-A-基團(tuán)，這里R6表示含有1至40個碳原子，具體是8至38個，更具體是18至34個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基，并且這里A表示含有1至40個碳原子，具體是16至38個，更具體是24至36個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基；X表示氫原子、單糖殘基或低聚糖殘基，尤其是半乳糖殘基、硫代半乳糖基團(tuán)、磷酰膽堿或如化學(xué)式(GalNAc)(Sia)Gal-Glc-的基團(tuán)；且Y表示氫原子或如化學(xué)式R3-W-CHOH-的基團(tuán)，這里R3表示含有1至40個碳原子，具體是8至36個，更具體是14至18個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵；并且這里W表示(i)如化學(xué)式-CH＝CH-的基團(tuán)；(ii)如化學(xué)式-CH2-CH(OR4)-的基團(tuán)，這里R4表示氫原子或R5-CO-基團(tuán)，其中R5表示含有1至40個碳原子，具體是8至36個，更具體是14至18個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基；或者(iii)基團(tuán)-CH2-CH2。
甚至更具體地，這種活性化合物是PKC-抑制化合物，它選自鞘脂質(zhì)和溶血磷脂，如下表引用的那些表1鞘脂質(zhì)和溶血鞘脂質(zhì)結(jié)構(gòu)鞘脂質(zhì)溶血鞘脂質(zhì)結(jié)構(gòu) XH- 神經(jīng)酰胺 鞘氨醇X半乳糖-半乳糖腦苷脂 鞘氨醇半乳糖苷(半乳糖基鞘氨醇)X硫代半乳糖-硫脂 溶血硫苷脂(硫代半乳糖基鞘氨醇)X GM2溶血GM2X磷酰膽堿- 鞘磷脂 溶血鞘磷脂作為PKC-抑制劑化合物，更具體地，還可提及鞘脂質(zhì)或溶血磷脂類型的皮膚脂質(zhì)。
作為鞘脂質(zhì)，可提及最基本的那些，如鞘氨醇(D-赤-1，3-二羥基-2-氨基-4-反式-十八烯)和其異構(gòu)體，或植物鞘氨醇(D-核糖-1，3，4-三羥基-2-氨基十八烷)和其異構(gòu)體；以及，溶血鞘脂質(zhì)(包括溶血硫苷脂和鞘氨醇半乳糖苷)、硫代半乳糖基鞘氨醇、二氫鞘氨醇(2-氨基-1，3-十八烷二醇)和鞘磷脂。
作為磷脂，可提及磷脂?；被己土字；嘣甲逯械哪切?。磷脂?；被冀M具體包括磷脂酰乙醇胺(或磷脂酰膽胺)、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸和N-乙?；字Ｒ掖及?。至于磷脂?；嘣冀M，它包括磷脂酰肌醇(phosphatidylcholinositol)、二磷酸肌醇磷脂、溶血二磷酸肌醇磷脂、磷脂酰甘油和心磷脂(cardiolipid)。
作為PKC-抑制化合物，更具體地還可提及神經(jīng)酰胺，特別是表皮的角化細(xì)胞間粘固劑的神經(jīng)酰胺以及神經(jīng)酰胺前體，主要是鞘氨醇和植物鞘氨醇。
通常地，該神經(jīng)酰胺可以化學(xué)合成(具體參考擬神經(jīng)酰胺)，可以是動物來源(相對高濃度的鞘脂質(zhì)位于哺乳動物大腦和脊柱)，可以是植物來源(主要是腦苷脂和其它糖基化鞘脂質(zhì))，否則可源自酵母(和位于人皮膚的天然神經(jīng)酰胺相同的立體化學(xué)構(gòu)造)。
表皮角化細(xì)胞間粘固劑的神經(jīng)酰胺可采用常規(guī)方法(薄層色譜法)分離成六個部分，對應(yīng)于脂肪酸的性質(zhì)和所包含基底的性質(zhì)不同的化合物(鞘氨醇，它是不飽和的，或者植物鞘氨醇，它是飽和的)。根據(jù)Werts和Downing分類，下表2舉例說明了位于這些部分中的各自的結(jié)構(gòu)。第6部分本身通過更精細(xì)的方法可細(xì)分成兩個實(shí)體神經(jīng)酰胺6a和6b。
表2表皮神經(jīng)酰胺的六個主要部分 因此，神經(jīng)酰胺1，極性最小的，包括在神經(jīng)酰胺6a中發(fā)現(xiàn)的完全特殊的結(jié)構(gòu)酰胺化該基底的長鏈ω-羥基酸，并且在其ω末端經(jīng)酯鍵與另一脂肪酸(O-?；窠?jīng)酰胺)連接。在部分1的情況中，連接鞘氨醇的脂肪酸實(shí)質(zhì)是C24、C26、C30、C32或C34，它們可以是飽和的(如圖5表示的C30)，單烯鍵的(主要為C30、C32和C34)或雙烯鍵的(C32并且特別是C34)。至于連接先前那個的ω末端的脂肪酸，它是，主要支配地適于神經(jīng)酰胺1的亞油酸；表皮的混合屏障功能的基本作用是公知的。
部分2，它具有更常規(guī)的結(jié)構(gòu)(經(jīng)酰胺鍵連接脂肪酸的鞘氨醇或二氫鞘氨醇，主要是C20至C28)，是最豐富的。
部分3是相當(dāng)相似的，差別與基底的性質(zhì)有關(guān)，這種情況中，它實(shí)質(zhì)由飽和的植物鞘氨醇表示。
部分4和5實(shí)質(zhì)由與鞘氨醇連接的α-羥基酸的存在表征。
部分6b接近部分4和5，它包括α-羥基酸，但與飽和的植物鞘氨醇連接。
部分6a，如同神經(jīng)酰胺1，包括僅僅在表皮神經(jīng)酰胺中發(fā)現(xiàn)的特征性部分，即位于與鞘氨醇連接的脂肪酸的ω位置的羥基與這次不是亞油酸而是α-羥基酸的末端脂肪酸的羧基之間的酯鍵。
植物神經(jīng)酰胺(基于植物鞘氨醇的神經(jīng)酰胺)，合成的膽固醇神經(jīng)酰胺，和乳-或葡糖腦苷脂也應(yīng)被提及。
最后，在按照本發(fā)明能夠使用的PKC-抑制化合物中，鞘氨醇天然存在于皮膚中，并且，作為鞘脂質(zhì)(神經(jīng)酰胺和神經(jīng)鞘糖酯)的前體，在角質(zhì)層的屏障功能中起著尤其重要的作用。它可以源于生物來源，如牛腦的提取物，或者經(jīng)合成途徑，采用絲氨酸，例如，如在NewmanJ.Am.CHEM.，95(12)4098(1973)中的論文所述的那樣。更具體地可提及鞘氨醇的異構(gòu)體形式D-赤、L-蘇、L-赤和D-蘇。D-赤型是自然界中存在的最普遍的形式。
按照本發(fā)明，作為抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物，可以使用的PKC-抑制化合物包括上述PKC抑制化合物的異構(gòu)體、衍生物(鹽、絡(luò)合物，等等)、類似物、同系物、前體和代謝物。
按照本發(fā)明，表述“基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制化合物”意欲指本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的具有通過MMP抑制細(xì)胞外基質(zhì)降解活性能力的任何化合物。
MMPs組成一族鋅依賴性酶(目前已經(jīng)鑒別和表征了超過大約20種)，它們具有非常保守的結(jié)構(gòu)并具有降解細(xì)胞外基質(zhì)組分的能力。根據(jù)它們的底物的性質(zhì)，它們分為膠原酶、明膠酶和基質(zhì)分解素。它們可由皮膚內(nèi)各種細(xì)胞類型合成(成纖維細(xì)胞、角質(zhì)化細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞，等等)。因此MMP組包括四小類(1)膠原酶，(2)明膠酶，(3)基質(zhì)分解素和(4)膜型MMPs(MT-MMPs)。MMP的活性可由天然存在的蛋白酶抑制劑調(diào)節(jié)，例如金屬蛋白酶的組織抑制劑(TIMPs；尤其TIMP-1和TIMP-2)。
在生理學(xué)情形(結(jié)瘢、血管生成、胚胎發(fā)育，等)和病理學(xué)情形(慢性潰瘍、光誘導(dǎo)的皮膚老化、腫瘤細(xì)胞侵入等)中，現(xiàn)在清楚地確立了MMP在細(xì)胞外基質(zhì)的解蛋白改型中的主要作用。
具體來說，用于抑制朗格漢斯細(xì)胞的活性化合物是抑制至少一種選自MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-13和MMP-18的MMP的化合物。
按照本發(fā)明，表述“MMP-抑制化合物”，作為抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物，具體用來指金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMPs)，α-2-巨球蛋白、纖溶酶原活化劑抑制劑、鋅螯合劑、薯司他丁-1(bryostatin-1)、抗生素(強(qiáng)力霉素、二甲胺四環(huán)素等)，具有類似于MMP底物結(jié)構(gòu)的合成或天然的肽(巴馬司他(batimastat)、馬立馬司他(marimastat)等)，類維生素A(特別是非芳香族類維生素A，如視黃醛、維甲酸或9-順-視黃酸、維生素A，單芳香族類維生素A，如阿維A酯、全-反-阿維A或莫維A胺(motrerinide)，和多芳香類維生素A，如阿達(dá)帕林(adapalene)、他佐羅汀(tazarotene)、tamibarotene或芳維甲酸甲基砜)，抗氧化劑(純態(tài)氧清除劑，等)，抗癌劑(或“抗轉(zhuǎn)移劑”)，麥芽水解物，如Coletica公司銷售的Colalift，海藻提取物，如Secma公司銷售的Kelpadelie，鯊魚軟骨提取物，如Atrium公司銷售的MDI復(fù)合物，米肽，例如，Pentapharm公司銷售的Colhibin，和羽扇豆的肽提取物。
更具體地，按照本發(fā)明的MMP-抑制化合物選自羽扇豆的肽提取物，即“羽扇豆肽”，例如1999年4月19日Laboratoires Pharmascience提交的專利申請F(tuán)R-9904875中描述的那些?？删唧w提及在申請F(tuán)R9904875中描述的名為提取物B(LU105)的肽提取物。
最后，已經(jīng)完全令人驚奇地和意想不到地注意到，當(dāng)用于抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物是至少一種PKC-抑制化合物如上述的那些，和至少一種MMP-抑制化合物如上述的那些的組合時，得到特別有益的結(jié)果。
因此如以下實(shí)施例說明的，能夠注意到這樣一種特定的組合有利地使得加強(qiáng)各自活性，或者甚至提供協(xié)同作用成為可能，以便因此獲得朗格漢斯細(xì)胞遷移的驚人抑制作用，它可與反應(yīng)的、敏感的和/或變應(yīng)性的皮膚免疫應(yīng)答的完全消退，即，正常皮膚反應(yīng)性的獲得相比。
具體來說，相對于藥物或化妝品組合物的總重量，用于抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物的濃度在大約0.001和大約10重量％之間，更具體地在大約0.01和3重量％之間。
優(yōu)選地，按照本發(fā)明的組合物特征在于PKC-抑制活性化合物是鞘氨醇和/或其異構(gòu)體，并且所述的MMP-抑制化合物是羽扇豆的肽提取物，更優(yōu)選地是提取物B(LU105)。
按照本發(fā)明的組合物還可包括至少一種藥學(xué)上，尤其皮膚病學(xué)上，或者化妝品上可接受的賦形劑。為了局部、經(jīng)口、腸內(nèi)或非腸道給藥起見，可以使用任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的適合于藥學(xué)形式的賦形劑。
具體來說，賦形劑可適于獲得呈油或水溶液、油包水乳劑或水包油乳劑、微乳劑、油或水凝膠、無水凝膠、乳膏、洗劑、噴霧劑、面膜、乳、載體分散體、微膠囊或微粒，否則呈明膠膠囊或者軟明膠或植物膠囊(plant capsule)形式的組合物。
優(yōu)選地，使用適于外部局部給藥的賦形劑。
最后，按照本發(fā)明的組合物還包括至少一種藥學(xué)上或化妝品上可接受的本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的佐劑，例如增稠劑、防腐劑、香味劑、染料、化學(xué)或礦物掩蔽劑、增濕劑、溫泉水，等等。
本發(fā)明的主題也是選自蛋白激酶C(PKC)-抑制化合物，尤其上述的那些，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-抑制化合物，尤其上述的那些，和它們的組合的活性化合物在制備用于抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的組合物中的應(yīng)用。
相對于藥物或化妝品組合物的總重量，按照本發(fā)明使用的活性組合物的濃度在大約0.001和大約10重量％之間，更具體地在0.01和3重量％之間。
這樣制備的組合物還包括至少一種藥學(xué)上，尤其皮膚病學(xué)上，或化妝品上可接受的賦形劑，以及至少一種如上所述的助劑。
具體來說，通過按照本發(fā)明的應(yīng)用制備的組合物意欲用于皮膚和粘膜(口腔、肺、膀胱、直腸、陰道)的變態(tài)反應(yīng)的治療和預(yù)防，這是由于它能夠減少特別是由于LC遷移誘導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)。
更具體地，通過按照本發(fā)明的應(yīng)用制備的組合物意欲用于特應(yīng)性濕疹的治療和預(yù)防，這是由于它能夠減少特別是由于在表面附著IgEs的LCs遷移誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。
通過按照本發(fā)明的應(yīng)用制備的組合物還意欲用于接觸性濕疹的治療和預(yù)防，這是由于它能夠減少特別是由于抗原捕獲、處理和這種抗原通過LCs呈遞至T淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。
通過按照本發(fā)明的應(yīng)用制備的組合物還意欲用于敏感/反應(yīng)的皮膚的治療和預(yù)防。
通過按照本發(fā)明的應(yīng)用制備的組合物還意欲用于炎性皮膚病和/或刺激性皮炎的治療和預(yù)防。
因此應(yīng)該注意，上述的組合物可有利地用作含有本質(zhì)是變應(yīng)性的主要活性化合物的藥物或化妝品產(chǎn)品或選擇性地香味劑中的額外組分，尤其適于外部局部應(yīng)用。這種變態(tài)反應(yīng)因此將有益地相應(yīng)減少，或者本質(zhì)是變應(yīng)性的主要活性化合物的劑量可因此甚至有益地增加。
通過按照本發(fā)明的應(yīng)用制備的組合物還意欲用于自身免疫性疾病或炎性疾病，例如牛皮癬的治療和預(yù)防。
通過按照本發(fā)明的應(yīng)用制備的組合物還意欲用于光免疫抑制的預(yù)防。
最后，通過按照本發(fā)明的應(yīng)用制備的組合物還意欲用于移植排斥的預(yù)防。
下列實(shí)施例用于說明本發(fā)明，決不解釋為能夠限制其范圍。

圖1是說明如實(shí)施例1所述測量的LCs遷移指數(shù)的直方圖1對照細(xì)胞；2用半抗原DNSB致敏的細(xì)胞；3DNSB+LU105(5μg/ml)；4DNSB+D-鞘氨醇(2.5μM)；5DNSB+D-鞘氨醇(2.5μM)+LU105(5μg/ml)。
實(shí)施例1PKC抑制劑和MMP抑制劑的組合對LC遷移抑制的活性的研究1)材料和方法1.1制備富含LCs的懸浮液通過對源自整形手術(shù)的正常人皮膚的片段進(jìn)行酶處理(0.05％胰蛋白酶，+4℃，18h)獲得表皮細(xì)胞的懸浮液。得到的懸浮液包含平均為2至4％的LCs。平均含70％LCs的懸浮液的制備基于密度梯度離心原理(LymphoprepTM)和角質(zhì)化細(xì)胞的去除。
1.2制備基質(zhì)選擇用于整個研究用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是RPMI 1640(Gibco BRL，法國)。
在乙醇中稀釋D-鞘氨醇，以便獲得5×10-3M母液。使用濃度為2.5μM的D-鞘氨醇，在含有1％牛血清白蛋白(RPMI-BSA)的RPMT中進(jìn)行稀釋。
將羽扇豆的肽提取物用作MMP抑制劑。它是來自LaboratoiresPharmascience的肽提取物L(fēng)U105。LU105在RPMI-1640中稀釋以便獲得250mg/ml的母液。
LU105以5μg/ml的最終濃度使用，在RPMI-1640中進(jìn)行稀釋。在向培養(yǎng)基加入半抗原DNSB作為敏化劑之前，將細(xì)胞在LU105存在下在37℃預(yù)培養(yǎng)60分鐘。
1.3 LCs的敏化作為敏化劑，使用DNSB(Sigma Aldrich)，溶解形式的DNCB(二硝基氯苯)，溶于RPMI-BSA并且在50μM的濃度下使用。
1.4 LCs的遷移使用兩隔室的培養(yǎng)室系統(tǒng)(Falcon，Becton Dickinson，法國)。上隔室和下隔室通過8μm孔的膜分開，在其上沉淀50μg/cm2的Matrigel。接著將該膜覆蓋以蛋白質(zhì)，形成相當(dāng)于基膜的薄膜(層粘連蛋白、膠原IV、巢蛋白、內(nèi)功素、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)。將RPMI-BSA培養(yǎng)基吸收的細(xì)胞單獨(dú)或在有各種產(chǎn)品的情況下置于上隔室。將正常人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物上清液加入下隔室。在37℃培養(yǎng)18小時之后，已經(jīng)越過Matrigel且在下隔室中的活細(xì)胞的數(shù)量在顯微鏡下計(jì)數(shù)(LCs通過它們的樹枝狀外形是易于識別的)。每個試驗(yàn)一式三份地進(jìn)行。
2)結(jié)果2.1下表3給出了結(jié)果，它由圖1的直方圖說明。
表3LC遷移指數(shù)
表3和圖1直方圖的圖例1對照細(xì)胞2用半抗原DNSB致敏的細(xì)胞3DNSB+LU105(5μg/ml)4DNSB+D-鞘氨醇(2.5μM)5DNSB+LU105(5μg/ml)+D-鞘氨醇(2.5μM)2.2 LCs的遷移結(jié)果表示為在DNSB±D-鞘氨醇或LU105或D-鞘氨醇+LU105組合的存在下已經(jīng)遷移的細(xì)胞數(shù)量和正常條件下已經(jīng)遷移的細(xì)胞(未致敏、未處理的對照細(xì)胞)的數(shù)量之間的比例。由表皮新鮮分離的LCs不具有高遷移能力。在表述這些結(jié)果中，對照(未處理和未致敏)LCs的遷移能力任意地確定在1。
與正常未刺激細(xì)胞(對照細(xì)胞)相比，細(xì)胞以半抗原DNSB處理顯著刺激了LC遷移(增加61％)。
2.5μM濃度的D-鞘氨醇(表3)顯著抑制DNSB誘導(dǎo)的LC遷移。
在細(xì)胞未接觸到半抗原DNSB而是只接觸LU105(三個濃度)的實(shí)驗(yàn)中，與對照(未致敏和未處理)細(xì)胞相比，未觀察到遷移指數(shù)改變。這表明，沒有LCs刺激的情況下，LU105對遷移無影響。LU105(5μg/ml)顯著抑制DNSB誘導(dǎo)的LC遷移。
D-鞘氨醇+LU105組合使完全抑制DNSB對LCs的作用是可能的，在DNSB+D-鞘氨醇+LU105的存在下，已經(jīng)遷移的LCs的數(shù)量接近于對照(未致敏和未處理)細(xì)胞的數(shù)量。這種組合因此對試驗(yàn)的這兩個產(chǎn)品的內(nèi)在的性能有加強(qiáng)的作用。
3)結(jié)論在此研究中，使用位于兩隔室的培養(yǎng)室系統(tǒng)(允許細(xì)胞遷移)的新鮮分離的LCs，我們已經(jīng)證明，D-鞘氨醇(PKC抑制劑)加強(qiáng)LU105(MMP抑制劑)對半抗原DNSB敏化的LCs遷移的抑制作用，反之亦然。準(zhǔn)確地說，分別使用的這兩種分子顯著抑制LC遷移。當(dāng)它們結(jié)合時，敏化LCs具有類擬于未活化的LCs的遷移能力。換言之，按照本實(shí)施例，PKC抑制劑和MMP抑制劑的組合使完全消滅反應(yīng)/敏感和變應(yīng)性的皮膚的免疫應(yīng)答成為可能，從而復(fù)原至正常皮膚的狀態(tài)。
權(quán)利要求
1.一種藥物或化妝品組合物，其特征在于它包括至少一種選自PKC抑制劑的用于抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物，和至少一種選自基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制劑的用于抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物，以及至少一種藥學(xué)上或化妝品上可接受的賦形劑。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于PKC-抑制活性化合物選自非特異性PKC抑制劑，特異于異構(gòu)體PKC-β2的抑制劑，和它們的組合。
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于PKC-抑制活性化合物選自(溶血)鞘脂質(zhì)類型的皮膚脂質(zhì)，如鞘氨醇(D-赤-1，3-二羥基-2-氨基-4-反式-十八烯)和其異構(gòu)體，植物鞘氨醇(D-核糖-1，3，4-三羥基-2-氨基十八烷)和其異構(gòu)體，溶血鞘脂質(zhì)(在它們中，溶血硫苷脂和鞘氨醇半乳糖苷)，硫代半乳糖基鞘氨醇，二氫鞘氨醇(2-氨基-1，3-十八烷二醇)和鞘磷脂，溶血磷脂，和這些化合物的天然或合成來源的衍生物、前體、類似物、同系物，例如磷脂酰氨基醇，包括磷脂酰乙醇胺(或磷脂酰膽胺)、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸和N-乙?；字Ｒ掖及罚约傲字；嘣?，包括磷脂酰肌醇、二磷酸肌醇磷脂、溶血二磷酸肌醇磷脂、磷脂酰甘油和心磷脂。
4.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于PKC-抑制活性化合物對應(yīng)于通式 其中R1表示氫原子或者含有1至40個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，該鏈可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基；R2表示氫原子或如化學(xué)式Z-CO-的基團(tuán)，這里Z表示(u)含有1至40個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基；或(v)R6-CO-O-A-基團(tuán)，這里R6表示含有1至40個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基，并且這里A表示含有1至40個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基；X表示氫原子、單糖殘基或低聚糖殘基、半乳糖殘基、硫代半乳糖基團(tuán)、磷酰膽堿或如化學(xué)式(GalNAc)(Sia)Gal-Glc-的基團(tuán)；且Y表示氫原子或如化學(xué)式R3-W-CHOH-的基團(tuán)，這里R3表示含有1至40個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵；并且這里W表示(i)如化學(xué)式-CH＝CH-的基團(tuán)；(ii)如化學(xué)式-CH2-CH(OR4)-的基團(tuán)，這里R4表示氫原子或R5-CO-基團(tuán)，其中R5表示含有1至40個碳原子的直鏈或支鏈烴基鏈，它可包括一個或多個雙鍵且可包括一個或多個羥基取代基；或者(iii)基團(tuán)-CH2-CH2。
5.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述的MMP選自MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-13和MMP-18。
6.如權(quán)利要求1或5所述的組合物，其特征在于MMP-抑制活性化合物選自羽扇豆的肽提取物。
7.如前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于PKC-抑制活性化合物是鞘氨醇且MMP-抑制活性化合物是羽扇豆的肽提取物。
8.如前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于相對于藥物或化妝品組合物的總重量，用于抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物的濃度在大約0.001和大約10重量％之間。
9.包括至少一種蛋白激酶C(PKC)-抑制化合物和至少一種基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制化合物的活性化合物的組合在制備用于抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的組合物中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述PKC-抑制活性化合物如權(quán)利要求2至4的任意一項(xiàng)進(jìn)行定義，所述MMP-抑制活性化合物如權(quán)利要求5和6的任意一項(xiàng)進(jìn)行定義。
11.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于PKC-抑制活性化合物是鞘氨醇且MMP-抑制活性化合物是羽扇豆的肽提取物。
12.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的組合物用于皮膚和粘膜的變態(tài)反應(yīng)的治療和預(yù)防。
13.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的組合物用于特應(yīng)性濕疹的治療和預(yù)防。
14.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的組合物用于接觸性濕疹的治療和預(yù)防。
15.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的組合物用于敏感/反應(yīng)的皮膚的治療和預(yù)防。
16.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的組合物用于炎性皮膚病的治療和預(yù)防。
17.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的組合物用于刺激性皮炎的治療和預(yù)防。
18.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的組合物用于移植排斥的預(yù)防。
19.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的組合物用于降低化妝品或藥物制劑或香味劑的變應(yīng)性本質(zhì)。
20.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述的組合物用于自身免疫性疾病或炎性疾病，例如牛皮癬的治療和預(yù)防，或者光免疫抑制的預(yù)防。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥物或化妝品組合物，其特征在于它包括至少一種用于抑制朗格漢斯細(xì)胞遷移的活性化合物，所述的活性化合物選自蛋白激酶C(PKC)抑制化合物、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制化合物，和它們的組合，以及至少一種藥學(xué)上或化妝品上可接受的載體。所述的組合物能夠顯著地抑制由變應(yīng)原劑的存在誘導(dǎo)的朗格漢斯細(xì)胞遷移。
文檔編號A61K8/00GK1486179SQ0182180
公開日2004年3月31日 申請日期2001年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月14日
發(fā)明者P·姆西卡, P 姆西卡, N·皮卡爾, ǘ, A·皮奇里利, 胬錮 申請人:實(shí)驗(yàn)室發(fā)展科學(xué)公司