專利名稱：治療球蟲病的組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的組合物、藥用組合物、以及組合物在制造球蟲病治療藥物中的用途。
球蟲病是家禽(例如小雞)腸內層(lining)疾病，由原生動物艾美球蟲屬(Eimeria)球蟲寄生蟲引起，例如禽艾美蟲(Eimeria tenella)、尼氏艾美蟲(Eimeria necatrix)、堆形艾美蟲(Eimeria acervulina)、波氏艾美蟲(Eimeria brunetti)、巨型艾美蟲(Eimeria maxima)、和緩艾美蟲(Eimeria.mitis)、Eimeria mivati、塞前艾美蟲(Eimeria praecox)和哈氏艾美蟲(Eimeria hagani)。屬于該屬的種引發(fā)小雞臨床疾病，對任何一個種的免疫性不能保護禽類防止其它種的感染。球蟲病在3-6周齡的小雞中最為常見。艾美蟲科家族的原生動物引發(fā)球蟲病。感染腸內不同部位。感染過程快速(4-7天)，其特征為寄生蟲在宿主細胞內復制，腸粘膜廣泛受損。只有在易感性禽類攝食比較大量的產(chǎn)孢子卵囊以后，才臨床發(fā)病。臨床感染以及痊愈的禽類均在糞便中排泄卵囊，污染飼料、灰塵、水、草窩和土壤。
抗球蟲藥物市場有售，用于預防和治療特別是小雞和火雞的球蟲病。為防止急性疾病，通常在飼料中給予家禽抗球蟲藥。對治療而言，水劑一般優(yōu)于飼料給藥。有時使用抗生素提高恢復率并防止二次感染。
以下所述為先前已知的抗球蟲藥物安普羅銨(Amprolium)、二氯二甲吡啶酚(Clopidol)、葉酸拮抗劑、氫溴酸溴氯哌喹酮(halofuginonehydrobromide)、離子載體(莫能菌素(monensin)、鹽霉素(salinomycin)、拉沙里菌素(lasalocid)、萘良菌素(narasin)、馬杜霉素(maduramicin))、硝卡巴嗪(Nicarbazin)、硝基苯甲酰胺(例如二硝甲苯酰胺(dinitolmide))、喹諾酮(例如丁喹酯(buquinolat)、癸氧喹酯(decoquinate)、芐氧喹甲酯(nequinate))以及雙氯芐氨胍(Robenidine)。由于對大多數(shù)抗球蟲藥物的普遍抗性，不斷需要副作用較小的新的組合物。
本發(fā)明一方面提供了新的組合物，其包含選自葉酸、氨基糖苷和抗?jié)儎┲兄辽賰煞N成分的混合物。
本發(fā)明另一方面提供了藥用組合物，其包含選自葉酸、氨基糖苷和抗?jié)儎┲兄辽賰煞N成分的混合物，所述成分以治療有效量存在，任選與治療可接受的載體混合。
本發(fā)明另一方面提供了組合物在制造球蟲病治療藥物中的用途，該組合物包含選自葉酸、氨基糖苷和抗?jié)儎┲兄辽賰煞N成分的混合物。
本發(fā)明的組合物包含三種主要成分，即(A)葉酸，(B)氨基糖苷以及(C)抗?jié)儎?。但是不要求所有三種成分同時存在于組合物中。因此，該組合物可能包含任選自上述三種成分之中兩種成分的混合物。
根據(jù)優(yōu)選實施方案，該組合物包含絡合劑，例如EDTA(乙二胺四乙酸)。
本發(fā)明一個有趣并驚人的特征是，根據(jù)發(fā)表的文獻，單個成分治療球蟲病無效。然而下述試驗將會發(fā)現(xiàn)，包含至少兩種上述成分的組合物有效。
以下詳述每個主要成分。
葉酸葉酸具有結構式 葉酸是基本上所有食物和飼料的重要成分。啤酒和飼料酵母尤其富含葉酸。此外，植物的所有綠色部分、提取的豆粉、馬鈴薯、麩皮和肝含有比較大量的葉酸。葉酸特別參與氨基酸和核酸的合成。葉酸與維生素B12一道，為形成紅、白血細胞所必需。
葉酸被用作動物飼料添加劑。動物由于胃腸道的微生物而具有大量的葉酸合成。特別是家禽和小動物中，按這種方式獲得的最初葉酸數(shù)量不足，必需在飼料中補充。對于小雞、小母雞、肉仔雞(broiler)、母雞和火雞，飼料補充的一般推薦劑量為每公斤飼料(88％干物質)大約0.6-1.5mg。關于使用葉酸作為飼料添加劑，可參考BASF FineChemicals.Know-how and quality for animal nutrition，＂On feedadditivesTechnical Information＂.Edition 97/98，p.33，46-51。應當指出，葉酸對家禽沒有抗?jié)冏饔谩?br> 氨基糖苷氨基糖苷主要用于治療好氧的革蘭氏陰性生物所致感染。其對厭氧生物沒有活性。氨基糖苷分為三類窄譜氨基糖苷、廣譜氨基糖苷和混雜的(miscellaneous)氨基糖苷。下文敘述了氨基糖苷的實例。
鏈霉素是最早引入的氨基糖苷。它對分枝桿菌屬(mycobacteria)、鉤端螺旋體屬(Leptospira)、土拉熱弗朗西斯菌(Francisella tularensis)和鼠疫耶爾森氏菌(Yersinia pestis)有活性。雙氫鏈霉素化學上與鏈霉素非常相似。
在鏈霉素幾年之后，新霉素得以應用。新霉素對許多革蘭氏陰性生物及金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有效。毒性較高的危險限制了新霉素使用。
引入毒性較小的卡那霉素代替較老的氨基糖苷，不久又有慶大霉素(gentamicin)以及其后的丁胺卡那霉素(amikacin)。
丁胺卡那霉素來自卡那霉素，具有氨基糖苷的廣譜活性。它可以耐受某些氨基糖苷滅活酶，故認為對其它氨基糖苷不敏感的菌株有效。
阿泊拉霉素(Apramycin)是化學結構與氨基糖苷非常相似的氨基環(huán)醇抗生素，但其差別足以使其不受許多氨基糖苷滅活酶的影響。阿泊拉霉素對金黃色葡萄球菌、許多革蘭氏陰性生物以及某些支原體菌株有活性。據(jù)報道，阿泊拉霉素體外對耐受鏈霉素和新霉素的沙門氏菌(Salmonella)種尤其有效。
在上述氨基糖苷中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)雙氫鏈霉素是本發(fā)明組合物中的高度優(yōu)選成分。如上所述，氨基糖苷用于治療好氧生物所致感染，同樣對寄生蟲沒有活性。然而根據(jù)本發(fā)明，如果氨基糖苷與至少一種其余成分(即成分A和成分C，下文詳述后者)混合存在，則顯示抗球蟲病的治療效果。
抗?jié)儎┛節(jié)儎┛煞譃閮山M，即質子泵抑制劑和組胺H2拮抗劑?；瘜W上，質子泵抑制劑(PPI)由置換的苯并咪唑部分通過必要的亞磺酰甲基基團與置換的吡啶環(huán)連接所組成。奧美拉唑(Omeprazol)是該組的重要一員，是Astra，Sweden開發(fā)的制劑洛賽克(Losec)的活性成分。組胺H2拮抗劑是組胺的結構類似物，競爭性以及可克服性阻斷位于壁細胞基底外膜的H2受體。在后一組成員中，可能提及西咪替丁(甲氰咪胍，Cimetidine)、尼扎替丁(Nitzatidine)、法莫替丁(Famotidine)和雷尼替丁(Ranitidine)。常規(guī)抗?jié)儎┘捌浏熜貏e參考Ullmann′sEncyclopedia of Industrial Chemistry，Sixth Edition，2000 ElectronicRelease，ANTIULCER DRUGS。
本發(fā)明組合物相當普遍適用于保護家禽，即治療有用的飼養(yǎng)家禽，例如小雞、火雞、鴨或鵝，或者也治療其它禽類，例如野雞等。
本發(fā)明組合物以治療制劑形式使用，以治療受球蟲侵襲的動物，特別是禽類。所謂＂治療＂也包括預防。治療制劑通?？赡馨委熆山邮艿妮d體。因此，這種制劑可應用于肉用仔雞場或家禽飼養(yǎng)院的小母雞，因為糞便中不斷分泌永久形式的球蟲(卵囊)，那里家禽群體的感染負擔重。按照標準方式使用本發(fā)明的組合物以及抗擊球蟲病的方法。對于腸道中的球蟲，主要適于口服給藥。在此情況下，本發(fā)明組合物可與飼料或飲用水混合。
飼料或飲用水中組合物的濃度可以在一定的范圍內廣泛變化。根據(jù)飼料或飲用水，組合物濃度一般為5-5000ppm(以重量計)。優(yōu)選50-2000PPm。最優(yōu)選50-300ppm。選擇最終組合物中每個成分的濃度在獸醫(yī)的能力范圍之內。此處該濃度經(jīng)常被指作＂治療有效量＂，定義為足以成功抗擊球蟲病而保持副作用最小的劑量。將在以下實施例中給出各成分的不同濃度。
組合物的濃度以自由飼料或飲用水制劑為基礎，即在正常的生產(chǎn)催肥或飼養(yǎng)期間自由喂養(yǎng)或飲用水。養(yǎng)禽業(yè)常用的所有飼料配方均適于用作本發(fā)明組合物的載體。下文指定的家禽飼料配方是正常生產(chǎn)配方的實例。另外，也可能使用其它基于某類糧谷的飼料，其中包含維生素濃縮物、礦物質濃縮物或其它活性物質以及任何濃度的飼料添加劑。常用的干粉狀或粒狀飼料以及液體飼料懸浮液(包括例如酒糟和牛奶副產(chǎn)品飼料)均可用在本發(fā)明組合物的情況下。
為了制備家禽飼料，一般首先制備濃縮的預混合料，其中包含高濃度的至少兩種成分的該組合物，例如按重量的0.2-75％。為此目的，將各成分分散或混入惰性載體物質中，例如蛭石、硅藻土、硅鎂土(attapulgite)、碳酸鈣等，連同生理上無害的載體，例如丙二醇、聚乙二醇、惰性油劑(例如植物油)、高度精制的礦物油、乙醇、水、或含水酒精。有機載體物質，例如麩皮、碎玉米、大豆粉、苜蓿粉、谷殼或磨碎的玉米穗以及來自植物產(chǎn)物的其它任何有機載體物質，同樣適于此目的。
如上所述，本發(fā)明組合物另外也可能與飲用水一起給予家禽。通過在飲用水中加入一定量的溶于水或能懸浮于水中形式的組合物，將其包含于飲用水中。一般選擇該組合物的水溶性形式，制備這種制劑。也可使用水不溶性的形式，例如懸浮液。在此情況下，使用生理上無害的輔助劑，使本發(fā)明的組合物長期懸浮于水中。適于此目的的輔助劑為膨脹劑，例如藻酸鹽、明膠、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮。表面活性劑性化合物，例如萘磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽或聚氧乙烯山梨聚糖酯，可用來使組合物成為懸浮液。通常按某一混合比制備本發(fā)明組合物與懸浮劑的濃縮懸浮液或干燥制劑，然后用飲用水稀釋到要求的應用濃度，或按合適濃度與正常應用的飼料混合成預混合物。然后將加藥的飲用水或飼料飼喂家禽，起初自由(ad lib)進食或者飼喂一段時間。
盡管上文已經(jīng)就治療家禽球蟲感染描述了本發(fā)明，但是治療其它家養(yǎng)有益動物，例如其它禽類、兔、豬和反芻動物，也屬于本發(fā)明范疇之內。
因此，本發(fā)明另一目的也在于治療動物球蟲病的方法，其包含給予該動物治療有效量的組合物，該組合物包含選自葉酸、氨基糖苷和抗?jié)儎┲兄辽賰煞N成分的混合物，該組合物任選包含治療可接受的載體。
使用先前已知的抗球蟲藥物和本發(fā)明的組合物的混合物抗擊球蟲病，屬于本發(fā)明的范疇。
由以下實施例解釋本發(fā)明。
下表A概括了本發(fā)明組合物的例子。在常規(guī)混合器中，按表中定義的量混合各成分，形成組合物。
表A
*)dhsm＝雙氫鏈霉素動物飼料組合物的例子以下例子涉及可用于給予本發(fā)明組合物的動物飼料組合物。
I.肉用仔雞催肥飼料組分％(以重量計)魚粉(60-65％ 6.0飼料酵母 2.0牛肉汁(beef dripping) 4.7粗制大豆粉(44％) 24.0苜蓿青粉(green meal) 1.0玉米 44.89小麥 6.35粗制小麥粉8.5磷酸鹽飼用石灰1.4碳酸鹽飼用石灰0.96
微量元素預混合物*0.04飼用鹽 0.09甲硫氨酸DL 0.07100.00(a)每公斤飼料加入下列維生素A I.U. 12,000D3I.U. 1,500E mg 18B1mg 1.5B2mg 6泛酸mg 9煙酸維生素 mg 24B6mg 4.5B12μg24K3mg 3氯化膽堿mg 1,300*(b)1.0kg飼料包含Mn mg106Zn mg71Fe mg44Cu mg3.56Img0.4Co mg0.16II.小雞(0-8周)的飼養(yǎng)飼料組分％(以重量計)魚粉(60-65％5.0苜蓿青粉6.0
粗制大豆粉(44％) 13.0飼料酵母 2.8牛肉汁2.0大麥 6.0燕麥 6.0玉米 37.0小麥 13.0麩皮 7.3碳酸鹽飼用石灰1.29.RTM.Hostaphos0.57微量元素預混合物*0.04100.00*參見例I(b)；此外，如例I(a)所述，加入維生素III.小雞(9-20周)的飼養(yǎng)飼料組分％(以重量計)苜蓿青粉 6.0粗制大豆粉(44％) 10.24飼料酵母 1.8牛肉汁2.0大麥 8.0燕麥 6.0玉米 40.0小麥 15.0麩皮 8.3碳酸鹽飼用石灰1.53.RTM.Hostaphos1.02微量元素預混合物*0.04甲硫氨酸DL0.07
100.00*參見例I(b)；另外加入維生素，參見例I(a)，IV.小雞(從第21周起)的飼養(yǎng)飼料組分％(以重量計)魚粉(60-65％ 1.5粗制大豆粉(44％) 19.31牛肉汁 1.0燕麥 6.7玉米 40.0小麥 18.0粗制小麥粉 3.0甲硫氨酸DL 0.07飼用辣椒粉 0.3碳酸鹽飼用石灰 8.16.RTM.Hostaphos 1.91微量元素預混合物*0.05100.00如例I(a)所述，另外加入維生素。
生物學實施例Al抗球孢子菌的(anticoccidiocidal)活性材料和方法小雞測試中使用總共92只一日齡的Habbared X品種小雞。將其分成4組(每組23只雞)，其中一組作為對照組。
藥物組每種待測試組合物混合入每組足量飼料中，用于從測試的第0天開始每日喂食。新鮮水隨意(ad-libetum)供應。
測試組為第1組 飼料包含200ppm的葉酸和雙氫鏈霉素的組合(比例1∶1)，第2組 飼料包含200ppm的法莫替丁和雙氫鏈霉素的組合(比例1∶1)，第3組 飼料包含標準抗球蟲劑(二氯二甲吡啶酚，125ppm)，第4組 感染未處理組。
結果如表1所示。
表1
d.p.i.＝實驗性感染后天數(shù)。
A2抗球孢子菌活性材料和方法小雞測試中使用總共88只一日齡的Habbared X品種小雞。將其分成4組(每組22只雞)，其中一組作為對照組。
藥物組每種待測試組合物混合入每組足量的飼料中，用于從測試的第0天開始每日喂食。新鮮水隨意供應。
測試組為第1組 飼料包含200ppm的葉酸、法莫替丁、雙氫鏈霉素的組合(1∶1∶1)，第2組 飼料包含200ppm的葉酸、法莫替丁、雙氫鏈霉素的組合(1∶1∶1)+EDTA(50ppm)，第3組 二氯二甲吡啶酚，125ppm第4組 感染未處理組。
結果如下表2所示。
表2
d.p.i.＝實驗性感染后天數(shù)。
A3抗球孢子菌活性材料和方法小雞測試中使用總共100只一日齡的Habbared X品種小雞。它們前3天為一組，用未加藥飼料喂養(yǎng)。然后分成5組(每組20只)，放在5個分開的圍欄中(1×1米)。
藥物組從小雞生命的第8天開始，將待測組合物與各組飼料混合，每日喂食。新鮮水隨意供應。
測試組為第1組 飼料包含200ppm雙氫鏈霉素，第2組 飼料包含100ppm法莫替丁，第3組 飼料包含100ppm葉酸，第4組 飼料包含標準抗球蟲劑(可實得(Coxistac)，60ppm)，第5組 感染未處理組。
小雞維持加藥飼料共2天。第3天，每只雞實驗性口服感染成熟的產(chǎn)孢子卵囊混合物，其中包含5種菌株，即堆形艾美蟲、巨型艾美蟲、尼氏艾美蟲、禽艾美蟲和波氏艾美蟲。
從實驗性感染后第4天開始，每天收集新鮮的排泄物液滴，直到感染后第13天為止。使用根據(jù)Soulsby(1984)的Mc-Master方法，計算各組每克排泄物中的卵囊平均數(shù)。
結果如下表3所示。
表3
d.p.i.＝實驗性感染后天數(shù)。
權利要求
1.新的組合物，其包含選自葉酸、氨基糖苷和抗?jié)儎┲兄辽賰煞N成分的混合物。
2.藥用組合物，其包含選自葉酸、氨基糖苷和抗?jié)儎┲兄辽賰煞N成分的混合物，所述成分以治療有效量存在，任選與治療可接受載體混合。
3.權利要求2的組合物，其中所述混合物為兩種成分的混合物。
4.權利要求2的組合物，其中所述混合物為三種成分的混合物。
5.組合物在制造球蟲病治療藥物中的用途，該組合物包含選自葉酸、氨基糖苷和抗?jié)儎┲兄辽賰煞N成分的混合物。
6.治療動物球蟲病的方法，包含給予該動物治療有效量的組合物，該組合物包含選自葉酸、氨基糖苷和抗?jié)儎┲兄辽賰煞N成分的混合物，該組合物任選包含治療可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及組合物，其包含選自葉酸、氨基糖苷和抗?jié)儎┲兄辽賰煞N成分的混合物，涉及包含所述混合物的藥用組合物，以及該組合物在制造球蟲病治療藥物中的用途。
文檔編號A61K31/44GK1482920SQ0182133
公開日2004年3月17日 申請日期2001年11月30日 優(yōu)先權日2000年12月4日
發(fā)明者S·阿卜杜勒－拉赫曼, S 阿卜杜勒-拉赫曼 申請人:新藥物研究瑞典股份公司