專利名稱：三肽酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型式(I)化合物，其為使內(nèi)源性神經(jīng)肽如縮膽囊素(CCKs)失活的膜三肽酶抑制劑。本發(fā)明進(jìn)一步涉及制備所述化合物的方法、包含所述化合物的藥用組合物以及所述化合物作為藥物的用途。
縮膽囊素(CCKs)為激素的和神經(jīng)元的肽一族，在腸線和腦中發(fā)揮多效性生物學(xué)作用。CCK作用由CCKA和CCKB受體介導(dǎo)。已知CCK具有以下兩種生理作用控制食物攝入，CCKA激動(dòng)劑增強(qiáng)這種作用(Smith G.P.等，J.Ann.N.Y.Acad.Sci.，713，236-241(1994)；控制焦慮，CCKB拮抗劑降低這種作用(Woodruff G.等，Rev.Pharmac.，31，469-501(1991))。
三肽酶II(TPP II)為CCK失活肽酶。TPP II見(jiàn)于對(duì)縮膽囊素作用產(chǎn)生反應(yīng)的神經(jīng)元以及非神經(jīng)元細(xì)胞。認(rèn)為TPP II是使CCK-8失活的神經(jīng)肽酶(Rose C.等，Nature，380，403-409，(1996))。
TPP II可參與胃腸道中的CCK-8失活。外源性CCK減少食物攝取，產(chǎn)生其它伴隨的飽脹表現(xiàn)。系統(tǒng)性給予CCKA受體激動(dòng)劑可增強(qiáng)食物攝取(Smith G.P.等，J.Ann.N.Y.Acad.Sci.，713，236-241(1994))?？磥?lái)內(nèi)源性CCK控制的食物攝取是神經(jīng)元性的而不是激素性的，而且作用于迷走神經(jīng)傳入纖維的外周CCKA受體(Smith G.P.等，Am.J.Physiol.，249，R638-R641(1985))。
TPP II抑制劑是研究CCK神經(jīng)元作用的有效手段，可能是治療例如過(guò)食、肥胖、胃腸道動(dòng)力性疾病和精神病綜合征等疾病的有效藥物。
1996年11月14日公布的WO-96/35805公開了使內(nèi)源性神經(jīng)肽失活的膜三肽酶抑制劑，其可用于治療胃腸道疾病和精神疾病。1999年7月8日公開的WO-99/33801公開了使CCK失活的三肽酶(TPP II)抑制化合物，其可用于治療攝食障礙、肥胖、精神病綜合征和相關(guān)精神病。
本發(fā)明化合物與引用的本領(lǐng)域已知的化合物在結(jié)構(gòu)上的區(qū)別在于R2取代基的性質(zhì)。
本發(fā)明涉及下式(I)化合物、其立體化學(xué)異構(gòu)體形式或其藥學(xué)上可接受的加成鹽 其中n為整數(shù)0或1；X為O；S或-(CR4R5)m-，其中m為整數(shù)1或2；R4和R5各自獨(dú)立為氫或C1-4烷基；R1為任選被羥基取代的C1-6烷基羰基；C1-6烷氧基羰基；氨基C1-6烷基羰基，其中C1-6烷基任選被C3-6環(huán)烷基取代；一和二(C1-4烷基)氨基C1-6烷基羰基；芳基取代的氨基羰基；C1-6烷基羰氧基C1-6烷基羰基；C1-6烷氧基羰基氨基C1-6烷基羰基，其中氨基任選被C1-4烷基取代；通過(guò)羰基連接的氨基酸殘基；氨基取代的C1-6烷基；或芳基羰基；R2為選自以下的5元雜環(huán)， 其中m’為整數(shù)1-2；R6為氫或C1-4烷基；
R7各自獨(dú)立為氫；鹵代；氨基；羥基；三氟甲基；C1-6烷基；被羥基、羥基羰基、C1-4烷氧基羰基、氨基羰基、單或二(C1-4烷基)氨基羰基、氨基或者一或二(C1-4烷基)氨基取代的C1-4烷基；苯基；氨基羰基；羥基羰基；C1-4烷氧基羰基；C1-4烷基羰基；或C1-4烷氧基羰基C1-4烷基氨基羰基；或者R2為苯并咪唑或者被一個(gè)或兩個(gè)各自獨(dú)立選自以下的取代基取代的苯并咪唑鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、羥基、羥基羰基或C1-4烷氧基羰基；R3為任選被鹵代或苯基甲基取代的二價(jià)基團(tuán)-CH2CH2-；或者R3為下式的二價(jià)基團(tuán) 其中上述(b-1)、(b-2)或(b-3)可任選被1、2或3個(gè)各自獨(dú)立選自以下的取代基取代鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基、氨基、氰基、三氟甲基、苯基或被1個(gè)或2個(gè)獨(dú)立選自以下的取代基取代的苯基鹵素、羥基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基、氰基和三氟甲基；芳基為苯基或者被氨基、硝基或羥基羰基取代的苯基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“氨基酸殘基”為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、苯基丙氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天門冬酰胺、谷酰胺、天門冬氨酸、天門冬氨酸酯、谷氨酸、谷氨酸酯、賴氨酸、精氨酸以及組氨酸的氨基酸基團(tuán)，它們通過(guò)其羰基連接到分子其余部分的氮原子上并且通?？梢员硎緸椤癛-CH(NH2)-CO-”。
前述定義使用的鹵素為氟、氯、溴和碘的總稱；C1-4烷基定義為1-4個(gè)碳原子的直鏈和支鏈飽和烴基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、1-甲基乙基、2-甲基丙基等；C1-6烷基是指包括C1-4烷基及其5個(gè)或6個(gè)碳原子的高級(jí)同系物，例如2-甲基丁基、戊基、己基等；C3-6環(huán)烷基通常為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基以及環(huán)己基；C3-6鏈烯基定義為3-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈不飽和烴基，例如丙烯基、丁烯基、戊烯基或己烯基；C1-2亞烷基定義為亞甲基或1，2-亞乙基；C1-5亞烷基定義為1-5個(gè)碳原子的二價(jià)直鏈或支鏈烴基，例如亞甲基、1，2-亞乙基、1，3-亞丙基、1，4-亞丁基、1，5-亞戊基以及它們的支鏈異構(gòu)體；C1-6亞烷基包括C1-5亞烷基以及它們的具有6個(gè)碳原子的高級(jí)同系物，例如1，6-亞己基等。術(shù)語(yǔ)“CO”是指羰基基團(tuán)。
上文使用的術(shù)語(yǔ)“立體化學(xué)異構(gòu)體形式”定義為式(I)化合物具有的所有可能異構(gòu)體形式。除非有其它說(shuō)明，否則化合物的化學(xué)名稱表示所有可能的立體化學(xué)異構(gòu)體形式的混合物，所述混合物包含所述基本分子結(jié)構(gòu)的所有非對(duì)映異構(gòu)體以及對(duì)映異構(gòu)體。更具體地講，立體異構(gòu)中心可以有R-或S-構(gòu)型；二價(jià)環(huán)狀(部分)飽和基團(tuán)上的取代基可以具有順式或反式構(gòu)型。包含雙鍵的化合物在所述雙鍵處可具有E式或Z-式立體化學(xué)構(gòu)型。很明顯，式(I)化合物的立體化學(xué)異構(gòu)體形式包含在本發(fā)明范圍內(nèi)。
上述藥學(xué)上可接受的加成鹽包括藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，并且是指包含式(I)化合物能夠形成的具有治療活性的非毒性酸加成鹽形式。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可以通過(guò)用所述適當(dāng)?shù)乃崽幚韷A形式方便地獲得。適當(dāng)?shù)乃岚ɡ鐭o(wú)機(jī)酸，例如氫鹵酸如鹽酸或氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或者有機(jī)酸例如乙酸、丙酸、羥乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸即乙二酸、丙二酸、琥珀酸即丁二酸、馬來(lái)酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、環(huán)己氨磺酸、水楊酸、對(duì)氨基水楊酸、撲酸等。
當(dāng)本發(fā)明化合物含有酸性部分時(shí)，合適的藥學(xué)上可接受的堿加成鹽可能為堿金屬鹽，例如鈉鹽或鉀鹽；堿土金屬鹽，例如鈣鹽或鎂鹽；以及與合適有機(jī)配體形成的堿加成鹽，例如伯、仲、叔或季銨鹽，例如嗎啉基、叔丁基氨基等。
相反，所述鹽形式可以用適當(dāng)?shù)膲A處理轉(zhuǎn)化成游離堿形式。
上文用到的術(shù)語(yǔ)加成鹽也包括式(I)化合物及其鹽能夠形成的溶劑化物。所述溶劑化物為例如水合物、醇化物等。
目的化合物為符合以下一個(gè)或多個(gè)限定的式(I)化合物a)n為0；b)R3為任選被鹵素或甲氧基取代的式(b-1)基團(tuán)；c)X為-CH2-或-CH2CH2-；d)R2表示其中R6為氫的式(a-2)基團(tuán)；e)R2為式(a-2)、(a-4)、(a-6)或(a-7)的基團(tuán)；f)R2為任選被甲基、羥基、鹵素、三氟甲基、甲氧基羰基或羥基羰基取代的苯并咪唑；g)R1為C1-6烷基羰基、氨基C1-6烷基羰基或氨基酸。
特別化合物為這樣的式(I)化合物其中n為0，R3為任選被鹵素或甲氧基取代的式(b-1)基團(tuán)。
優(yōu)選化合物為這樣的式(I)化合物其中n為0，R3為任選被鹵素或甲氧基取代的式(b-1)基團(tuán)，X為-CH2-。
其它優(yōu)選化合物為這樣的式(I)化合物其中n為0，R3為任選被鹵素或甲氧基取代的式(b-1)基團(tuán)，X為-CH2CH2-。
更優(yōu)選的其它化合物為這樣的式(I)化合物其中R1為C1-6烷基羰基、氨基C1-6烷基羰基或氨基酸。
如式(I)化合物定義的式(I-a)化合物，其中R1a表示除了氨基取代的C1-4烷基以外的所有R1取代基，它可以通過(guò)在4-甲基嗎啉存在下，于反應(yīng)惰性溶劑如氯仿的二氯甲烷溶液中，使式(II)中間體與式(III)中間體反應(yīng)制備。攪拌可以提高反應(yīng)速率。反應(yīng)可以方便地在室溫到反應(yīng)混合物的回流溫度之間的溫度范圍進(jìn)行，如果需要，反應(yīng)可以在增壓反應(yīng)釜中進(jìn)行。所述反應(yīng)后任選進(jìn)行酸解步驟以除去酸的不穩(wěn)定保護(hù)基團(tuán)，例如叔丁氧基羰基。 或者，式(I-a)化合物也可以在適當(dāng)活化劑例如氯甲酸異丁酯存在下于反應(yīng)惰性溶劑例如二氯甲烷中，并在適當(dāng)?shù)膲A例如三乙胺存在下使式(II)中間體和式(IV)中間體反應(yīng)制備。所述反應(yīng)后任選進(jìn)行酸解步驟以除去酸的不穩(wěn)定保護(hù)基團(tuán)，例如叔丁氧基羰基。 如式(I)化合物定義的式(I-b)化合物，其中R1為氨基取代的C1-6烷基，它可以通過(guò)使用其中R1為氨基C1-5烷基羰基的相應(yīng)初始化合物(I-b’)進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪€原反應(yīng)方便地制備。適當(dāng)?shù)倪€原反應(yīng)可以為例如用硼烷-四氫呋喃絡(luò)合物所進(jìn)行的處理。 如式(I)化合物定義的式(I-c)化合物，其中R2為基團(tuán)(a-2)，其中R6為氫并且R7在咪唑部分的3位上，它可以通過(guò)在乙酸鉀存在下于合適溶劑例如甲醇中，使式(V)中間體與式(VI)中間體反應(yīng)制備。 式(I)化合物可以進(jìn)一步根據(jù)已知技術(shù)的基團(tuán)轉(zhuǎn)化反應(yīng)將式(I)化合物互相轉(zhuǎn)化制備。
初始原料以及部分中間體(例如式(III)、(IV)以及(VI)的中間體)為已知化合物，它們可由市售獲得或者可以根據(jù)本領(lǐng)域普遍已知的常規(guī)反應(yīng)方法制備。
式(I)化合物以及部分中間體的結(jié)構(gòu)中可能具有一個(gè)或多個(gè)立體異構(gòu)中心，存在R或S構(gòu)型，例如攜帶R2取代基的碳原子。
根據(jù)CAS命名規(guī)則，當(dāng)一個(gè)分子中存在已知絕對(duì)構(gòu)型的兩個(gè)立體異構(gòu)中心時(shí)，最小編號(hào)的手性中心即參考中心由描述符R或S表示(根據(jù)順序規(guī)則)。第二個(gè)立體異構(gòu)中心的構(gòu)型用相對(duì)描述符[R*，R*]或[R*，S*]表示，其中R*總是規(guī)定為參考中心，[R*，R*]表示兩中心具有相同手性，而[R*，S*]表示兩中心手性不同。例如，如果分子中最小編號(hào)的手性中心具有S構(gòu)型，而第二個(gè)中心為R構(gòu)型，則立體描述符規(guī)定為S-[R*，S*]。
上述方法制備的式(I)化合物可能合成對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物形式，可以用已知技術(shù)的拆分方法將它們彼此分離。式(I)的外消旋化合物可以通過(guò)與適當(dāng)?shù)氖中运岱磻?yīng)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的非對(duì)映體鹽的形式。隨后例如通過(guò)選擇性或分級(jí)結(jié)晶分離所述非對(duì)映體鹽的形式，并用堿將對(duì)映異構(gòu)體從其中釋放。供選擇的分離式(I)化合物對(duì)映體形式的方法涉及使用手性固定相的液相色譜法。如果存在立體定向反應(yīng)，所述純的立體化學(xué)異構(gòu)體形式也可以由適當(dāng)初始原料的相應(yīng)純立體化學(xué)異構(gòu)體形式得到。如果需要特定的立體異構(gòu)體，所述化合物的合成優(yōu)選通過(guò)立體定向方法制備。這些方法最好使用純的對(duì)映異構(gòu)體初始原料。
式(I)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽和立體異構(gòu)體形式為使內(nèi)源性神經(jīng)肽(例如縮膽囊素(CCK))失活的膜三肽酶抑制劑，這在藥理學(xué)實(shí)施例C-1中得到證實(shí)。
由于它們的TPP II抑制性質(zhì)，本發(fā)明化合物可用于治療TPP II活性相關(guān)性疾病或障礙，例如攝食障礙、肥胖、精神病綜合征以及相關(guān)精神病。
由于式(I)化合物的效用，因此斷定本發(fā)明也提供治療患有攝食障礙、肥胖、精神病綜合征以及相關(guān)精神病的包括人在內(nèi)的溫血?jiǎng)游?通常稱為患者)的方法。所以，提供一種治療方法以抑制TPP II活性和/或減輕患者疾病，例如攝食障礙、肥胖、精神病綜合征以及相關(guān)精神病。
因此，式(I)化合物作為藥物的用途是提供CCK失活的三肽酶(TPP II)抑制劑和/或治療攝食障礙(尤其是肥胖)和/或治療精神病綜合征以及相關(guān)精神病，所述治療包括治療有效量的式(I)化合物。還提供式(I)化合物在制備抑制TPP II活性和/或治療攝食障礙、肥胖、精神病綜合征以及相關(guān)精神病的藥物中的用途?？紤]用于預(yù)防性治療以及治療性治療。
相信部分本發(fā)明化合物，尤其是化合物(153)～(181)，還可以具有阿片樣物質(zhì)活性，例如具有δ-阿片樣物質(zhì)(δ)、μ-阿片樣物質(zhì)(μ)和/或κ-阿片樣物質(zhì)(κ)的活性。阿片樣物質(zhì)的活性可以使用藥理學(xué)實(shí)施例C.2和C.3的分析方法測(cè)試。
為了制備本發(fā)明藥用組合物，將有效量的堿或酸加成鹽形式的特定化合物作為活性成分與藥學(xué)上可接受的載體緊密混合，所述載體根據(jù)給藥所需劑型可以采用各種形式。這些藥用組合物最好為優(yōu)選適合口服、直腸或胃腸外給藥的單元?jiǎng)┬汀＠?，制備口服劑型的組合物時(shí)，可以使用任何常用藥用介質(zhì)，例如制備口服液體制劑例如混懸劑、糖漿劑、酏劑以及溶液劑時(shí)，可以使用例如水、二醇、油、醇等；或者制備粉劑、丸劑、膠囊劑以及片劑時(shí)，可以使用固體載體例如淀粉、糖、高嶺土、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等。由于易于服用，片劑和膠囊劑為最有利的口服劑量單位形式，在此情況下顯然使用固體藥用載體。對(duì)于胃腸外用組合物，載體通常包括無(wú)菌水，至少占大部分，但是也可以包含其它成分例如以助于溶解。可以制備為注射用溶液劑，例如其中載體包括鹽溶液、葡萄糖溶液或鹽和葡萄糖的溶液混合物。還可以制備為注射用混懸劑，在此情況可以使用適當(dāng)?shù)囊后w載體、懸浮劑等。在適合經(jīng)皮給藥的組合物中，載體任選包括滲透促進(jìn)劑和/或適當(dāng)?shù)臐?rùn)濕劑，任選結(jié)合較小比例的任何天然的適當(dāng)添加劑，但這些添加劑必須不對(duì)皮膚引起明顯的有害作用。所述添加劑可能有利于皮膚給藥和/或可能有助于制備所需組合物。這些組合物可以以不同的方式給藥，例如透皮貼劑、spot-on、軟膏。式(I)的酸加成鹽由于比相應(yīng)的堿形式具有更高的水中溶解度，因而顯然更適合于水性組合物的制備。
為方便給藥和劑量均勻，以單元?jiǎng)┝啃问脚渲粕鲜鏊幱媒M合物尤其有利。本說(shuō)明書和權(quán)利要求書所用的單元?jiǎng)┝啃问绞侵高m合單劑量的實(shí)質(zhì)上分散的單位，各單位包含計(jì)算產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量的活性成分與需要的藥用載體。所述單元?jiǎng)┝啃问降膶?shí)例有片劑(包括刻刻痕片劑和包衣片劑)、膠囊、丸劑、粉末包裹、糯米紙囊劑、注射溶液劑或混懸劑、一茶匙的量、一大湯匙的量等以及它們的隔離復(fù)合物。
對(duì)于經(jīng)口給藥，藥用組合物可以采用固體劑型的形式，例如片劑(包括僅可吞咽以及可咀嚼形式)、膠囊或凝膠膠囊(gelcap)，通過(guò)常規(guī)方法用藥學(xué)上可接受的賦形劑制備，例如粘合劑(例如預(yù)糊化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙甲基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸鈣)；潤(rùn)滑劑(例如硬酯酸鎂、滑石粉或二氧化硅)；崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或淀粉羥基乙酸鈉)；或者潤(rùn)濕劑(例如十二烷基硫酸鈉)。片劑可以用本領(lǐng)域眾所周知的方法包衣。
口服給藥的液體制劑可以采用的形式有例如溶液劑、糖漿劑或混懸劑，或者它們可以是在臨用前用水或其它合適媒介物進(jìn)行配制的干燥產(chǎn)品。所述液體制劑可以通過(guò)常規(guī)方法制備，任選與藥學(xué)上可接受添加劑例如懸浮劑(例如山梨醇糖漿劑、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素或氫化可食用脂肪)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)；非水溶性溶媒(例如杏仁油、油性酯或乙醇)；以及防腐劑(例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或者山梨酸)。
藥學(xué)上可接受的甜味劑優(yōu)選包括至少一種強(qiáng)增甜劑例如糖精、糖精鈉或糖精鈣、天冬甜素、乙酰氨基磺酸鉀、環(huán)己氨基磺酸鈉、阿力甜、二氫查耳酮甜味劑、莫尼林、卡哈苡苷或sucralose(4，1’，6’-三氯-4，1’，6’-三脫氧半乳糖蔗糖(galactosucrose))，優(yōu)選糖精、糖精鈉或糖精鈣，并任選一種填充甜味劑(bulk sweetener)例如山梨糖醇、甘露糖醇、果糖、蔗糖、麥芽糖、異麥芽糖(isomalt)、葡萄糖、氫化葡萄糖漿、木糖醇、焦糖或蜂蜜。
強(qiáng)甜味劑適宜以低濃度使用。例如，在為糖精鈉情況下，濃度范圍可以為基于最終制劑總體積的0.04％～0.1％(w/v)，并且在低劑量制劑中優(yōu)選約0.06％，而高劑量制劑中優(yōu)選約0.08％。填充甜味劑實(shí)際用量可以更大，用量范圍約10％～35％、優(yōu)選約10％～15％(w/v)。
低劑量制劑中能夠遮蓋苦味成分的藥學(xué)上可接受的調(diào)味劑優(yōu)選水果味調(diào)味劑，例如櫻桃、紅莓、黑醋栗或草莓味。組合兩種調(diào)味劑可能獲得非常好的效果。高劑量制劑中需要更強(qiáng)的調(diào)味劑，例如焦糖巧克力味、清涼薄荷(Mint Cool)味、Fantasy味等藥學(xué)上可接受的強(qiáng)調(diào)味劑。各種調(diào)味劑可出現(xiàn)在最終組合物中濃度范圍為0.05％～1％(w/v)。所述強(qiáng)調(diào)味劑的組合有利于使用。優(yōu)選的調(diào)味劑在制劑的酸性環(huán)境中味道和顏色不會(huì)有任何變化或損失。
本發(fā)明化合物還可以配制成延效型制劑。所述長(zhǎng)效制劑可以通過(guò)埋入法(例如皮下或肌內(nèi))或者肌內(nèi)注射給藥。因此，例如化合物可以與適當(dāng)?shù)木酆喜牧匣蚴杷牧?例如可接受的油中的乳劑)或離子交換樹脂配制，或者配制成難溶性衍生物(例如難溶性鹽)。
本發(fā)明化合物可以配制為通過(guò)注射的胃腸外給藥，適合靜脈、肌內(nèi)或皮下注射，例如通過(guò)快速濃注或連續(xù)靜脈內(nèi)輸入。注射用制劑可以加入防腐劑以單位劑量形式出現(xiàn)，例如裝在安瓿或多劑量容器中。組合物可以采用這樣的制劑，例如在油性或水性溶媒中的混懸劑、溶液劑或乳劑，并可以包含配制用試劑例如等滲劑、混懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘撸钚猿煞挚梢詾榉勰┬问脚c適當(dāng)?shù)娜苊?例如前面使用的無(wú)菌非致熱水)配制。
本發(fā)明化合物還可以配制成直腸用組合物，例如栓劑或保留灌腸劑，例如包含常規(guī)栓劑底物(例如可可油或其它甘油酯)。
對(duì)于鼻內(nèi)給藥也可使用本發(fā)明化合物，例如作為液體噴霧劑、粉末劑或者為滴劑形式。
實(shí)驗(yàn)部分在下文介紹的方法中，使用了以下縮寫“ACN”表示乙腈；“THF”表示四氫呋喃；“DCM”表示二氯甲烷；“MIK”表示甲基異丁酮。
一些化學(xué)制劑使用化學(xué)式，例如二氯甲烷為CH2Cl2、甲醇為CH3OH、氨為NH3、鹽酸為HCl、氫氧化鈉為NaOH、碳酸氫鈉為NaHCO3以及碳酸鈉為Na2CO3。
在那些例子中，第一個(gè)分離出的立體化學(xué)異構(gòu)體形式指定為“A”，第二個(gè)指定為“B”，沒(méi)有進(jìn)一步涉及實(shí)際的立體構(gòu)型。
制備液相色譜法在半制備HPLC設(shè)備上進(jìn)行，設(shè)備使用YMCODS-A柱(30×100mm，5微米，溫度室溫，流速35mL/min，流動(dòng)相a)10/90乙腈/水+0.1％三氟乙酸，b)90/10乙腈/水+0.1％三氟乙酸，梯度在9分鐘內(nèi)A到B的線性梯度，在254nm UV檢測(cè)。A.中間體制備實(shí)施例A.1a)將2，3-二羥基-1H-吲哚-2-甲酰胺(0.030mol)懸浮于氯仿(400ml)?；旌衔锢鋮s至0℃。加入三乙胺(0.045mol)。在2分鐘內(nèi)加入乙酰氯(0.045mol)。30分鐘后，TLC顯示反應(yīng)不完全。在燒瓶仍為冷的時(shí)，加入更多三乙胺(6.26ml)，在15分鐘以后加入更多乙酰氯(3.21ml)。TLC顯示反應(yīng)仍然不完全。將反應(yīng)物不斷地?cái)嚢?，冷卻至0℃，再加入更多三乙胺(6.26ml)。在2分鐘內(nèi)再加入純乙酰氯(3.21ml)。60分鐘后TLC顯示反應(yīng)完成80％，在30分鐘后反應(yīng)沒(méi)有進(jìn)展。加入第三部分乙酰氯和三乙胺。再經(jīng)過(guò)15分鐘后，加入冰冷的水(200ml)。將混合物攪拌10分鐘，過(guò)濾，用水(3×100ml)和氯仿(2×75ml)沖洗。將樣品干燥過(guò)夜獲得4.71g (S)-1-乙?；?2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲酰胺(中間體1，mp.＞260℃)。
b)將中間體(1)(0.02022mol)懸浮于DCM(175ml)?；旌衔锢鋮s至0℃。加入純的三乙胺(0.06066mol)。在20分鐘內(nèi)滴加三氯乙酰氯(0.03033mol)的DCM(20ml)溶液。2小時(shí)后，加入冰水(200ml)，分出各相，有機(jī)相依次用3N HCl、飽和碳酸氫鈉水溶液再萃取。將有機(jī)相干燥，過(guò)濾，然后汽提剩下4.61g褐色固體。將固體用冰冷的乙醚(30ml)研磨，過(guò)濾，用冰冷的乙醚沖洗(兩次)獲得3.12g(83％)(S)-1-乙酰基-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲腈(中間體2，mp.134-135℃)。
c)將中間體(2)(0.0151mol)懸浮于乙醚(200ml)。加入乙醇(0.0214mol)，然后將混合物冷卻至0℃。通入HCl(氣體)45分鐘?；旌衔飶谋∫瞥霾嚢?。20分鐘后，收集壁側(cè)的殘余物。刮擦容器壁，析出白色固體。1小時(shí)后濾出樣品，用乙醚沖洗，快速風(fēng)干，獲得3.99g (S)-1-乙?；?2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲亞胺酸乙酯(carboximidate)一鹽酸鹽(中間體3)。
類似地，1-乙?；?2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲亞胺酸乙酯一鹽酸鹽(中間體6)由1-乙酰基-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲腈開始制備。實(shí)施例A.2a)將5-氯-2，3-二羥基-1H-吲哚-2-羧酸甲酯(0.00761mol)溶于甲醇(25ml)，然后冷卻至0℃。通入NH310分鐘。塞住燒瓶加溫至室溫。將混合物攪拌過(guò)夜。TLC顯示反應(yīng)大部分完成。將樣品濃縮至1/3體積，冷卻，然后過(guò)濾，用冰冷的甲醇(2ml)洗滌所得固體，然后風(fēng)干，獲得0.74g 5-氯-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲酰胺(中間體7，mp.151-152℃)。
b)將三乙胺(0.02080mol)加入到溶于氯仿(700ml)的中間體(7)(0.09632mol)中。將混合物冷卻至5℃。在2分鐘內(nèi)攪拌下加入乙酰氯(0.2480mol)。5分鐘后，形成沉淀。移開冰浴，然后將反應(yīng)容器靜置15分鐘。加入冰水(250ml)，將混合物攪拌10分鐘。將樣品濾出，用水和氯仿沖洗。將固體懸浮于水(200ml)中，然后攪拌10分鐘。加入氯仿(200ml)，將混合物攪拌，然后過(guò)濾，用水和氯仿沖洗，然后風(fēng)干過(guò)夜，獲得19.71g 1-乙?；?5-氯-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲酰胺(中間體8)。
c)將三乙胺(0.41291mol)在0℃加入到懸浮于二氯甲烷(500ml)的中間體(8)(0.08258mol)中。在10分鐘內(nèi)加入三氯乙酰氯(0.20645mol)。當(dāng)反應(yīng)變得緩慢，再加入部分三乙胺(20ml)和更多三氯乙酰氯(7.6ml)，將混合物在低溫?cái)嚢?小時(shí)。除去冰浴，將混合物靜置2小時(shí)。這將獲得更黑顏色的反應(yīng)物，將其再冷卻至0℃。緩慢加入冰冷的水(150ml)，將混合物攪拌5分鐘。分出各層，然后將有機(jī)相洗滌(冰冷的3N HCl、飽和NaHCO3)，干燥，過(guò)濾，并濃縮。殘余物在冰冷乙醚(40ml)中研磨。過(guò)濾，用冰冷乙醚(10ml)洗滌，獲得15.13g1-乙?；?5-氯-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲腈(中間體9，mp.140-142℃)。
d)將HCl(2M溶液)緩慢地加入到中間體(9)中直到發(fā)現(xiàn)有氣體釋放。然后停止加入，加入準(zhǔn)備好的HCl(2N于乙醚中)，HCl懸浮于乙醚(150ml)，然后加入乙醇(0.042mol)?；旌衔锢鋮s至0℃，在1小時(shí)內(nèi)加入HCl(氣體)，沉淀出油狀物。將反應(yīng)物用乙醚稀釋至1L。靜置1小時(shí)后，形成更多的油狀物，沒(méi)有固體形成。傾析除去乙醚。將殘余物稀釋(乙醚，500ml)。開始形成固體，將混合物攪拌2小時(shí)。將固體濾出，用乙醚洗滌。樣品置于真空下獲得6.41gl-乙酰基-5-氯-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲亞胺酸乙酯一鹽酸鹽(中間體10)。實(shí)施例A.3a)將二碳酸二(1，1-二甲基乙基)酯(0.07615mol)的DCM(50ml)溶液在0℃于5分鐘內(nèi)加入到2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲醇(0.07615mol)的DCM(150ml)溶液中。將混合物加溫至室溫，攪拌過(guò)夜。減壓濃縮混合物，經(jīng)過(guò)Kogel Rohr蒸餾，獲得11.98g 2，3-二氫-2-(羥基甲基)-1H-吲哚-1-羧酸1，1-二甲基乙基酯(中間體11)。
b)將純的Dess-Martin試劑(0.011mol)在1分鐘內(nèi)加入到溶解于DCM(35ml)的中間體(11)(0.010mol)中。15分鐘后，除去冰浴，將混合物加溫至室溫。加入更多的Dess-Martin試劑(0.33g)，將混合物再攪拌30分鐘。混合物再冷卻至0℃，緩慢地用部分懸浮/溶解的Na2S2O3(25g)進(jìn)行處理，以盡量使其溶于飽和NaHCO3(100ml)水溶液。10分鐘后，將混合物從冰浴移出，分出水層。加入更多DCM，將混合物過(guò)濾。將有機(jī)物從濾液中分離，將合并的有機(jī)相干燥，過(guò)濾，濃縮，然后通過(guò)快速柱層析(洗提液10％乙酸乙酯∶己烷，樣品溶解于3∶1乙酸乙酯∶己烷(5ml))提純獲得2-甲?；?2，3-二氫-1H-吲哚-1-羧酸1，1-二甲基乙基酯(中間體12，mp.85-87℃)。實(shí)施例A.4將1-乙酰基-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲腈(0.00988mol)和三乙胺(0.0197mol)的吡啶(50ml)溶液在室溫下通過(guò)鼓泡器用硫化氫(氣體)處理2小時(shí)，密閉所得飽和反應(yīng)混合物，靜置16小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾入200ml冰水漿中。形成大量沉淀?；旌衔镌诒≈性倮鋮s，抽吸過(guò)濾收集沉淀，用冷水洗滌，然后風(fēng)干獲得1.62g 1-乙?；?2，3-二氫-1H-吲哚-2-硫代甲酰胺(carbothioamide)(中間體13，mp.194-195℃)。實(shí)施例A.5將1-乙?；?2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲腈(0.0132mol)用水(54ml)處理，所得懸浮液繼續(xù)用Na2CO3(0.00726mol)和NH2OH.HCl(0.0145mol)處理?；旌衔镉靡掖?26ml)處理，加熱至80-90℃。達(dá)到反應(yīng)溫度后，混合物仍然為懸浮液。再加入26ml乙醇，獲得澄清溶液。將反應(yīng)物加熱2.5小時(shí)，攪拌下冷卻至室溫。形成大量沉淀，通過(guò)抽吸過(guò)濾收集，用冷蒸餾水洗滌，然后風(fēng)干獲得2.23g 1-乙酰基-2，3-二氫-N’-羥基-1H-吲哚-2-甲脒(carboximidamide)(中間體14，mp.204-205℃)。實(shí)施例A.6在氮?dú)夥障聦?-乙?；?2-(4-乙基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-1H-吲哚(0.0035mol)和HCl 6N(50ml)合并。馬上加熱反應(yīng)混合物，加熱持續(xù)3.5小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，然后用乙醚(2×75ml)萃取，冷卻至0℃，堿化(用冷的3N NaOH)，然后用氯仿(3×60ml)萃取。干燥合并的有機(jī)層，過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑獲得0.79g 2-(4-乙基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-1H-吲哚(中間體15)。實(shí)施例A.7a)向5-氟-1H-吲哚-2-羧酸乙酯(0.121mol)的甲醇(600ml)懸浮液中加入Mg(0.36mol)?；旌衔镏糜谑覝亍鍤夥盏娜i圓底燒瓶中。嚴(yán)密監(jiān)測(cè)反應(yīng)溫度。大約10分鐘后，混合物開始冒泡，開始較緩慢然后更劇烈。間歇使用冰浴使反應(yīng)溫度維持在15-25℃。30分鐘后，冒泡停止。將混合物在室溫下攪拌3天?；旌衔镌?00ml氯仿和500ml飽和NH4Cl溶液間分配。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，然后濃縮至褐色油狀物。將油狀物溶于乙醚，用3N HCl萃取。水層用乙醚洗滌，用3N NaOH堿化，然后用氯仿萃取。萃取液用硫酸鎂干燥，濃縮獲得13.91g 5-氟-2，3-二氫-1H-吲哚-2-羧酸甲酯(中間體16)。
b)2M NH3的甲醇(0.6mol)溶液在氬氣氛下用冰浴冷卻，向其中加入溶于甲醇(150ml)的中間體(16)(0.0574mol)。將混合物加溫至室溫，在氬氣氛下攪拌6小時(shí)。將反應(yīng)物濃縮至150ml，過(guò)濾。所得固體用少量冷甲醇沖洗，然后干燥獲得2.33g 5-氟-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲酰胺(中間體17，mp.197-199℃)。
c)中間體(17)(0.0094mol)的DCM(30ml)混合物在氬氣氛下用冰浴冷卻，向其加入三乙胺(0.031mol)，接著加入乙酰氯(0.031mol)。所得混合物恢復(fù)至室溫。攪拌6小時(shí)后，混合物在冰浴中冷卻，加入50ml水。將混合物攪拌約20分鐘，過(guò)濾，然后將固體干燥獲得1.58g 1-乙?；?5-氟-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲酰胺(中間體18，mp.232-235℃)。
d)中間體(18)(0.0076mol)的DCM(30ml)懸浮液在氬氣氛下用冰浴冷卻，向其加入三乙胺(0.0228mol)，接著加入三氯乙酰氯(0.0115mol)?；旌衔锛訙刂潦覝?，攪拌2小時(shí)?；旌衔镉盟?N HCl以及飽和NaHCO3洗滌。將有機(jī)層干燥并濃縮。濃縮物在乙醚中研磨，然后用硅膠柱(用含50％乙酸乙酯的己烷洗提)提純。合并所需要的部分，然后濃縮。殘余物在乙醚中研磨，過(guò)濾收集固體并干燥，獲得0.30g1-乙酰基-5-氟-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲腈(中間體19，mp.93-95℃)。
e)中間體(19)(0.004mol)和HCl/乙醚(60mL)的溶液在氬氣氛下用冰浴冷卻。加入乙醇(0.0075mol)。將HCl通入上述溶液50分鐘直到混合物變得均勻?；旌衔锞徛丶訙刂潦覝?，攪拌4小時(shí)。傾析除去乙醚，然后溶于甲醇。真空濃縮甲醇溶液，殘余物直接用于下一步，獲得1-乙?；?5-氟-2，3-二氫-1H-吲哚-2-甲亞胺酸乙酯一鹽酸鹽(中間體20)。實(shí)施例A.8a)合并2，3-二氫-5-甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸甲酯(0.084mol)和2MNH3的甲醇(500ml)溶液，在氬氣氛下于室溫?cái)嚢枵麄€(gè)周末。將溶液濃縮至100ml，在冰浴中冷卻，然后過(guò)濾。所得固體用少量冷甲醇沖洗，然后干燥。殘余物在甲醇/ACN中研磨，過(guò)濾獲得4.56g 2，3-二氫-5-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(中間體21，mp.228-229℃)。
b)依次將三乙胺(0.0106mol)、乙酰氯(0.0106mol)加入在氬氣氛下冰浴中冷卻的中間體(21)(0.0032mol)的DCM(40ml)溶液。將混合物緩慢地加溫至室溫，攪拌過(guò)夜?；旌衔镌诒≈欣鋮s，加入冰冷水(30ml)。攪拌10分鐘后，過(guò)濾混合物，然后將固體干燥過(guò)夜。將殘余物懸浮于50ml水。攪拌懸浮液30分鐘，過(guò)濾，然后干燥過(guò)夜，獲得0.40g 1-乙?；?2，3-二氫-5-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(中間體22，mp.196-197℃)。
c)中間體(22)(0.022mol)的DCM(150ml)懸浮液在氬氣氛下冰浴中冷卻，向其依次加入三乙胺(0.066mol)、三氯乙酰氯(0.033mol)。將混合物緩慢地加溫至室溫過(guò)夜。混合物用水、2N HCl以及飽和NaHCO3洗滌。將有機(jī)相干燥，濃縮，然后在乙醚中研磨，收集固體，獲得1-乙?；?2，3-二氫-5-甲氧基-1H-吲哚-2-甲腈(中間體23，mp.108-110℃)。
d)中間體(23)(0.0154mol)和乙醇(0.0231mol)的1M HCl/乙醚(200ml)溶液在冰浴中冷卻，通入HCl(氣體)60分鐘。冰浴持續(xù)45分鐘，然后在室溫真空濃縮混合物至200ml油狀沉淀，將殘余物研磨獲得褐色固體，傾析除去乙醚后變成油狀物。殘余物用乙醚洗滌兩次，溶于甲醇，進(jìn)一步的合成中直接使用無(wú)需再提純，獲得1-乙酰基-2，3-二氫-5-甲氧基-1H-吲哚-2-甲亞胺酸乙酯一鹽酸鹽(中間體24)。實(shí)施例A.9將溶于DCM(25ml)的(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(0.010mol)置于-10℃的冷卻浴中。加入吡啶(0.010mol)，接著加入2，4，6-三氟-1，3，5-三嗪(0.0345mol)。在氮?dú)夥障聰嚢杌旌衔铩?小時(shí)后，加入冰冷水(75ml)。再加入DCM(45ml)，振搖混合物。分離出有機(jī)相，再次用冰冷水洗滌(100ml)，然后干燥有機(jī)相，過(guò)濾，濃縮獲得2.29g(S)-[1-(氟羰基)丙基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(中間體25)。實(shí)施例A.10將化合物(8)(0.00170mol)溶于6N HCl(20ml)，立即在氮?dú)夥障掠?00℃用油浴加熱200分鐘。停止加熱，將樣品冷卻至0℃。緩慢加入3N NaOH(35ml)。用飽和NaHCO3完成堿化。樣品用氯仿萃取。干燥合并的有機(jī)相，過(guò)濾，所得溶液在進(jìn)一步合成中直接使用無(wú)需再提純，獲得(S)-2，3-二氫-2-(4-丙基-1H-咪唑-2-基)-1H-吲哚(中間體5)。實(shí)施例A.11向中間體(13)(0.00844mol)的乙醇(180ml)混合物中一次性加入1-溴-2-丁酮(0.0085mol)進(jìn)行處理，加熱回流16小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用乙醚和冷1M NaOH(水溶液)萃取。有機(jī)部分用硫酸鎂干燥，真空濃縮獲得黑色固體，將其用硅膠快速柱層析(洗提液100％DCM～97∶3 DCM/乙醚)處理獲得0.91g 2-(4-乙基-2-噻唑基)-2，3-二氫-1H-吲哚(中間體4)。實(shí)施例A.123-(2-氧代-2-苯基-乙基氨基甲?；?-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-羧酸叔丁酯 將3，4-二氫-1H-異喹啉-2，3-二羧酸-2-叔丁酯(2.77g，10mmol)、2-氨基-1苯基-乙酮(1.71g，10mmol)以及HOBT(1-羥基苯并三唑)(2.70g，20mmol)溶于二氯甲烷(100ml)。溶液冷卻至0℃，然后加入(4-二甲基氨基-丁基)-乙基-碳二亞胺(2.29g，12mmol)，接著加入NMM(N-甲基-嗎啉)(1.31g，13mmol)。然后將反應(yīng)混合物加溫至室溫。72小時(shí)后，反應(yīng)混合物用水萃取，再將有機(jī)相連續(xù)用飽和NaHCO3、2N檸檬酸以及NaHCO3萃取，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾后濃縮獲得黃色泡沫狀標(biāo)題產(chǎn)物。液相色譜法(LC)顯示化合物純度86％(214nm)，化合物直接使用無(wú)需再提純。實(shí)施例A.12a3-(2-氧代-2-苯基-乙基氨基甲?；?-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-羧酸苯甲酯(按照實(shí)施例A.12的3-(2-氧代-2-苯基-乙基氨基甲?；?-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-羧酸叔丁酯的類似方法制備)用POCl3脫水獲得以下中間體化合物 通過(guò)用碘代三甲基硅烷處理，CBZ基團(tuán)容易從所得噁唑除去。所得降胺(nor-amine)噁唑中間體可按照對(duì)其類似物咪唑中間體所述的方法連接到化合物170上。實(shí)施例A.133-(4-苯基-1H-咪唑-2-基)-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-羧酸叔丁酯 將以上實(shí)施例A.12制備的產(chǎn)物(3.55g，9mmol)、NH4OAc(乙酸銨)(20.8g，270mmol)和AcOH(乙酸)(30ml)在室溫下合并，反應(yīng)混合物用蒸汽浴加熱約3小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，再傾入冰漿混合物(400g)。向該混合物中加入濃氫氧化銨(50mL)和乙醚。分出各層，水相另用一些乙醚洗滌。合并有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，然后減壓濃縮獲得褐色泡沫狀物。將樣品用制備HPLC提純獲得純凈的白色粉末標(biāo)題化合物。LC在214nm顯示樣品純度為96％。
實(shí)測(cè)MW(MH+)376實(shí)施例A.143-(4-苯基-1H-咪唑-2-基)-1，2，3，4-四氫-異喹啉 將三氟乙酸(TFA)(4mL)在試管中冷卻至約0℃。然后在該冷卻溶劑中加入以上實(shí)施例A.13制備的產(chǎn)物(0.75g，2mmol)。反應(yīng)混合物在約45分鐘內(nèi)加溫至室溫。過(guò)量的TFA在氮?dú)饬飨鲁?。殘余物在二氯甲?15ml)和飽和NaHCO3間分配。然后將水相用另一部分二氯甲烷再萃取，合并有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾獲得標(biāo)題化合物的二氯甲烷溶液。濾液直接用于下一步驟(實(shí)施例A.15)無(wú)需再提純或分離。
實(shí)測(cè)MW(MH+)276實(shí)施例A.15[1-(4-叔丁氧基-芐基)-2-氧代-2-[3-(4-苯基-1H-咪唑-2-基)-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基]-乙基]-氨基甲酸叔丁酯 將2-叔丁氧基羰基氨基-3-(4-叔丁氧基-苯基)-丙酸(0.74g，2.2mmol)溶于二氯甲烷(40mL)，反應(yīng)混合物冷卻至約0℃。然后在該溶液中加入NMM(0.21g，2.1mmol)，接著加入氯甲酸異丁酯(0.27g，2mmol，0.26mL)，將溶液靜置約1.25小時(shí)。然后在反應(yīng)混合物中加入實(shí)施例A.14制備的產(chǎn)物(0.55g，2mmol)，攪拌反應(yīng)混合物約16小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物用水、飽和NaHCO3、2N檸檬酸、飽和NaHCO3萃取，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾再濃縮獲得泡沫狀標(biāo)題產(chǎn)物。實(shí)測(cè)MW(MH+)595。
通過(guò)使這個(gè)中間體化合物與1當(dāng)量Br2在0℃于氯仿中反應(yīng)，所述中間體化合物的咪唑部分的5位上可以引入一個(gè)溴。
通過(guò)使這個(gè)中間體化合物與N-氯-丁二酰亞胺反應(yīng)，所述中間體化合物的咪唑部分的5位上可以引入一個(gè)氯。實(shí)施例A.163-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-羧酸叔丁酯 將3-甲酰基-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-羧酸叔丁酯(1.83g，7mmol)與AcOH(25mL)合并，立即向其加入1-苯基-丙烷-1，2-二酮(3.11g，21mmol)和NH4OAc(13.49g，175mmol)。然后將反應(yīng)混合物置于蒸汽浴，在氬氣氛下加熱20分鐘。反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻，然后加入到冰漿(44g)中。加入濃NH4OH(50mL)堿化所得混合物，然后用乙醚(150ml/次)萃取兩次。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)相，過(guò)濾后濃縮獲得粗產(chǎn)物。產(chǎn)物用制備HPLC提純獲得白色固體標(biāo)題化合物。實(shí)測(cè)MW(MH+)390實(shí)施例A.173-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-3，4-二氫-1H-異喹啉 向冷卻至約0℃的TFA(5ml)溶液中加入實(shí)施例A.16制備的化合物(1.10g，2.82mmol)，將反應(yīng)混合物攪拌約30分鐘。然后將反應(yīng)混合物從冰浴中移出，加溫至室溫。過(guò)量的TFA在氮?dú)饬飨鲁?。殘余物在飽和NaHCO3和二氯甲烷間分配。水相用另一部分二氯甲烷洗滌，合并有機(jī)相。合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，然后過(guò)濾獲得標(biāo)題產(chǎn)物的二氯甲烷溶液，它直接使用無(wú)需再提純或分離。實(shí)施例A.18[1-(4-叔丁氧基-芐基)-2-[3-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基]-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯 將2-叔丁氧基羰基氨基-3-(4-叔丁氧基-苯基)-丙酸(0.74g，2.2mmol)溶于二氯甲烷(60mL)，冷卻至約0℃。然后在反應(yīng)混合物中加入NMM(0.30g，2.97mmol)，接著加入氯甲酸異丁酯(0.39g，2.82mmol，0.37mL)。將溶液在0℃靜置約90分鐘。然后在反應(yīng)混合物中加入實(shí)施例A.17制備的產(chǎn)物(2.82mmol)的二氯甲烷溶液。然后將反應(yīng)混合物加溫至室溫。16小時(shí)后，反應(yīng)混合物依次用水、飽和NaHCO3、2N檸檬酸、飽和NaHCO3萃取，然后用硫酸鎂干燥，過(guò)濾后濃縮獲得粗產(chǎn)物。該產(chǎn)物用制備HPLC提純獲得帶白色的泡沫狀標(biāo)題產(chǎn)物。
實(shí)測(cè)MM(MH+)609B.制備最終化合物實(shí)施例B.1將4-甲基嗎啉(0.003mol)加入到溶于氯仿(80ml)的中間體(5)(0.003mol)。冷卻至0℃后，加入純的油狀中間體(25)(0.003mol)。27分鐘后，反應(yīng)混合物用水、飽和NaHCO3以及鹽水洗滌，干燥，過(guò)濾，然后濃縮獲得[2S-[1(R*)，2R*]]-[1-[[2，3-二氫-2-(4-丙基-1H-咪唑-2-基)-1H-吲哚-1-基]-羰基]丙基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(化合物14)。實(shí)施例B.2向中間體(3)(0.047mol)的甲醇(200ml)溶液中加入乙酸鉀(0.199mol)?；旌衔镌跉鍤夥障录訜峄亓?。在45分鐘內(nèi)向此混合物中緩慢加入1-氨基-2-戊酮鹽酸鹽(0.094mol)的甲醇(95ml)溶液。加入完畢后，混合物在回流下攪拌過(guò)夜，然后濃縮。將濃縮物溶于DCM，用飽和NaHCO3洗滌。水層用DCM萃取。將合并的有機(jī)萃取液干燥，然后濃縮獲得固體殘余物。殘余物用乙醚和ACN研磨提純，然后任選進(jìn)一步用柱色譜法提純，獲得5.83g (S)-1-乙?；?2，3-二氫-2-(4-丙基-1H-咪唑-2-基)-1H-吲哚(化合物8，mp.174-175℃)。實(shí)施例B.3將中間體(12)(0.00101mmol)、2，3-己二酮(0.004mol)以及乙酸銨(0.025mol)合并于乙酸(4ml)中，并立即置于蒸汽浴中15分鐘。在室溫下2小時(shí)后，將反應(yīng)物傾入冰水(100ml)中，用3N NaOH堿化，然后用乙醚(兩次)萃取。合并有機(jī)相，干燥，過(guò)濾，然后濃縮。將殘余物溶解于乙醚，濃縮，然后用制備LC提純獲得0.440g 2，3-二氫-2-(5-甲基-4-丙基-1H-咪唑-2-基)-1H-吲哚-1-羧酸1，1-二甲基乙酯(化合物99)。
類似地，通過(guò)使中間體(12)與1，1，1-三氟-3，3-二溴丙酮相應(yīng)的醛反應(yīng)制備化合物(80)。實(shí)施例B.4將N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-甲基-1-丙氨酸(0.00181mol)溶于DCM，冷卻至0℃。加入三乙胺(0.00181mol)，然后加入氯甲酸異丁酯(0.00181mol)，然后將混合物在0℃攪拌70分鐘。加入中間體(5)(0.00181mol)的DCM(6ml)溶液。混合物加溫至室溫，攪拌過(guò)夜。將混合物萃取(水、飽和NaHCO3)，干燥，過(guò)濾，然后濃縮。殘余物通過(guò)HPLC提純。收集純凈部分，蒸發(fā)溶劑獲得0.380g [2S-1(R*)，2R*]]-[2-[2，3-二氫-2-(4-丙基-1H-咪唑-2-基)-1H-吲哚-1-基]-1-甲基-2-氧代乙基]甲基-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(化合物63，mp.77-80℃)。實(shí)施例B.5合并在冰浴中預(yù)冷的化合物14(0.0073mol)和三氟乙酸(5ml)，然后在氮?dú)夥障戮徛貜?fù)至室溫。1小時(shí)后，濃縮混合物。將濃縮物溶于水，用乙醚萃取。水層用飽和NaHCO3堿化，用氯仿萃取兩次。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鎂干燥，然后濃縮。殘余物溶于乙醚，用3ml1M HCl的乙醚溶液處理。濾出沉淀，真空干燥。殘余物在飽和NaHCO3和氯仿間分配。有機(jī)層用硫酸鎂干燥然后濃縮。濃縮物在Biotage柱提純，洗提時(shí)用5％MeOH的氯仿溶液。殘余物溶于乙醚，用±2ml 1MHCl的乙醚處理。在氮?dú)夥障逻^(guò)濾收集固體，真空干燥過(guò)夜獲得0.364g[2S-1(R*)，2R*]]-α-乙基-2，3-二氫-β-氧代-2-(4-丙基-1H-咪唑-2-基)-1H-吲哚-1-乙胺二鹽酸鹽二水合物(化合物15，mp.132-140℃)。實(shí)施例B.6將中間體(13)(0.0102mol)的正丁醇(200ml)懸浮液用丁酰肼(hydazide)(0.0254mol)處理，攪拌10分鐘，然后加熱至回流10天。將反應(yīng)物冷卻，真空濃縮，在DCM和蒸餾水間分配。濃縮的有機(jī)相用反相制備柱色譜法處理獲得1-乙酰基-2，3-二氫-2-(5-丙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)-1H-吲哚(化合物91)。實(shí)施例B.7a)化合物91(0.42g)的乙醇(25ml)溶液用NaOH水溶液(3M，25mL)處理，將反應(yīng)混合物回流24小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用冷蒸餾水處理。分離出各層，含水部分用乙酸乙酯萃取5次，將合并的有機(jī)部分干燥，濃縮，然后用制備柱色譜法提純獲得2，3-二氫-2-(5-丙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)-1H-吲哚。
b)2，3-二氫-2-(5-丙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)-1H-吲哚(0.00017mol)的DCM(5ml)溶液依次用N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.00072mol)、(2-氟-2-氧代乙基)-9H-芴-9-基-氨基甲酸甲酯(0.00070mol)處理。反應(yīng)物在室溫下攪拌15小時(shí)。反應(yīng)物用DCM稀釋，用飽和NaHCO3處理兩次，用硫酸鈉干燥，然后濃縮。殘余物用反相制備柱色譜法處理獲得0.02 g所需單加成化合物以及0.02g雙加成化合物，雙加成化合物可以用制備色譜法(洗提液0.1％三氟乙酸的水/乙腈溶液)處理完全轉(zhuǎn)化成所需單加成化合物。將它們合并獲得0.03g[2-[2，3-二氫-2-(5-丙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)-1H-吲哚-1-基]-2-氧代乙基]-氨基甲酸H-芴-9-基甲酯。
c)[2-[2，3-二氫-2-(5-丙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)-1H-吲哚-1-基]-2-氧代乙基]-氨基甲酸H-芴-9-基甲基酯(0.00006mol)的DCM(10ml)溶液用哌啶(0.010mol)處理，在室溫下攪拌1小時(shí)。將完全反應(yīng)的反應(yīng)物真空濃縮，用反相制備柱色譜法處理獲得0.02g 2，3-二氫-β-氧代-2-(5-丙基-1H-1，2，4-三唑-3-基)-1H-吲哚-1-乙胺三氟乙酸鹽(1∶1)(化合物92)。實(shí)施例B.8將中間體(14)(0.00898mol)和丁酰氯(0.0094mol)在吡啶(140ml)中的混合物在室溫下攪拌40小時(shí)，然后加熱回流。21小時(shí)后，將反應(yīng)物冷卻，然后真空濃縮。殘余物用DCM和飽和NaHCO3水溶液萃取，有機(jī)部分用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后濃縮。殘余物用硅膠快速柱層析(洗提液100％CH2Cl2～95/5 CH2Cl2/乙醚)處理獲得1-乙?；?2，3-二氫-2-(5-丙基-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲哚(化合物89，mp.93-94℃)。實(shí)施例B.9a)化合物89(0.0035mol)的乙醇(60ml)溶液用3M NaOH(60ml)處理，將反應(yīng)物混合物加熱至55-60℃ 5.5小時(shí)。反應(yīng)物在冰浴中快速冷卻，用DCM稀釋，然后用冷蒸餾水處理。分離出各層，含水部分用DCM萃取三次。合并有機(jī)部分，用1M NaOH洗滌一次，用硫酸鈉干燥，然后真空濃縮。殘余物用制備柱色譜法提純獲得0.45g 2，3-二氫-2-(5-丙基-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲哚。
b)將2，3-二氫-2-(5-丙基-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲哚(0.0011mol)的DCM(10ml)溶液依次用N-甲基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.40ml)、(2-氟-2-氧代乙基)-9H-芴-9-基氨基甲酸甲酯(0.67g)處理。反應(yīng)物在室溫下攪拌40小時(shí)，依次用另一部分N-甲基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺、(2-氟-2-氧代乙基)-9H-芴-9-基氨基甲酸甲酯處理，在室溫下攪拌2天。反應(yīng)物用DCM稀釋，用飽和NaHCO3處理兩次，用硫酸鈉干燥，然后濃縮。殘余物用反相制備柱色譜法處理獲得0.35g[2-[2，3-二氫-2-(5-丙基-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲哚-1-基]-2-氧代乙基]-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯。
c)將[2-[2，3-二氫-2-(5-丙基-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲哚-1-基]-2-氧代乙基]-氨基甲酸9H-芴-9-基甲基酯(0.35g)溶于DCM(40ml)，用哌啶(0.50ml)處理，在室溫下攪拌18小時(shí)。將完成反應(yīng)的反應(yīng)物真空濃縮，用反相制備柱色譜法處理獲得0.13g 2，3-二氫-β-氧代-2-(5-丙基-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲哚-1-乙胺三氟乙酸鹽(1∶1)(化合物90，mp.160-162℃)。實(shí)施例B.10將2，3-二氫-2-(4-丙基-1H-咪唑-2-基)-1H-吲哚(0.0024mol)和1，3-異苯并呋喃二酮(0.0026mol)在25ml梨形燒瓶中，氬氣氛下加熱至100℃2小時(shí)。將混合物溶于甲醇，加熱回流15小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，然后溶于DCM，用水和3N NaOH洗滌。堿性含水萃取液用6N HCl酸化，用DCM萃取。有機(jī)萃取液用硫酸鎂干燥，然后濃縮。濃縮物用乙醚研磨后收集。將其進(jìn)一步與酸性水溶液一起通過(guò)制備液相色譜法提純，獲得0.23g 2-[[2-(4-乙基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-1H-吲哚-1-基]羰基]-苯甲酸三氟乙酸鹽(1∶1)(化合物85，mp.98-103℃)。實(shí)施例B.11將1-異氰酸基-2-硝基苯(0.002mol)加入到中間體(15)(0.016mol)的THF(10ml)溶液?；旌衔镌谑覝叵職鍤夥罩袛嚢?小時(shí)?；旌衔镉眉和橄♂專^(guò)濾，然后干燥獲得0.34g 2-(4-乙基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-N-(2-硝基苯基)-1H-吲哚-1-甲酰胺(化合物77，mp.208-209℃)。實(shí)施例B.12將化合物77(0.0006mol)、阮內(nèi)鎳(0.02g；50％的水漿)以及甲醇(20ml)的混合物中加入肼.水(0.003mol)中。所得混合物加熱回流2小時(shí)。冷卻至室溫后，混合物小心地通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后濃縮濾液。殘余物用乙醚研磨，過(guò)濾。殘余物用制備液相色譜法提純獲得0.24gN-(2-氨基苯基)-2-(4-乙基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-1H-吲哚-1-甲酰胺三氟乙酸鹽(1∶2)(化合物79，mp.106-108℃)。實(shí)施例B.13化合物16(0.00697mol)的THF(70ml)混合物一次性用氫化鈉(0.007mol)處理，在室溫下攪拌16小時(shí)。一次性加入碘代甲烷(0.0071mol)。在室溫下攪拌24小時(shí)后，在氬氣氛下再一次性加入氫化鈉(0.007mol)。冒泡停止后將燒瓶重新塞上，攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)完成后的反應(yīng)物在冰浴中冷卻，傾入到DCM中，用冷水處理。分離出各層，水相用DCM萃取三次。合并的有機(jī)部分用飽和NaHCO3洗滌，用硫酸鈉干燥，然后濃縮。殘余物用快速硅膠柱色譜法(DCM-乙醚-9∶1乙醚/THF)處理。合并適當(dāng)?shù)牟糠?。將殘余物溶于乙醚后置于冰箱中。產(chǎn)生結(jié)晶獲得0.55g(29.3％)1-乙?；?2-(4-乙基-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-1H-吲哚(化合物132，mp.105-106℃)。合并第二組流分。將殘余物溶于乙醚后置于冰箱中。觀測(cè)到產(chǎn)生結(jié)晶，獲得0.38g1-乙?；?2-(4-乙基-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-1H-吲哚(化合物133，mp.135-137℃)。實(shí)施例B.14將化合物80(0.001mol)懸浮于1N NaOH(12ml)。劇烈攪拌混合物，在氮?dú)夥障录訜嶂?8℃1小時(shí)。在室溫下攪拌3小時(shí)后，將混合物冷卻至0℃，緩慢地用1M HCl中和沉淀出一些固體。濾出固體用冰冷水沖洗。將水相萃取兩次，干燥，過(guò)濾，濃縮后干燥獲得0.140g 2-(4-羧基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-1H-吲哚-1-羧酸1，1-二甲基乙基酯(化合物117)。實(shí)施例B.15將1-羥基苯并三唑水合物(0.00036mol)、甘氨酸甲酯鹽酸鹽(0.00047mol)、4-甲基嗎啉(0.00055mol)以及N’-(乙基亞胺?；?carbonimidoyl))-N，N-二甲基-1，3-丙二胺一鹽酸鹽(0.00047mol)在0℃加入溶于DCM(30ml)的化合物117(0.00036mol)中?；旌衔镌诘?dú)夥障录訙刂潦覝?，然后攪拌過(guò)夜?；旌衔镉盟柡蚇aHCO3、2N檸檬酸萃取，然后用飽和NaHCO3萃取，干燥，過(guò)濾，然后濃縮獲得0.100g(69％)2，3-二氫-2-[4-[[(2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基]羰基]-1H-咪唑-2-基]-1H-吲哚-1-羧酸1，1-二甲基乙基酯(化合物118)。實(shí)施例B.16將化合物61(0.00028mol)用3N NaOH(3ml)處理，然后在室溫下攪拌20分鐘。溶液用3ml 3N HCl處理，用氯仿萃取。產(chǎn)物保留在水層。水層用制備液相色譜法提純獲得0.12g 2-[1-(氨基乙?；?-2，3-二氫-1H-吲哚-2-基]-1H-苯并咪唑-5-羧酸一水合物三氟乙酸鹽(1∶2)(化合物62，mp.208-211℃)。實(shí)施例B.17將化合物102(0.00238mol)溶于40ml甲醇，并與1N KOH(50mL)合并。反應(yīng)物在氬氣氛下加溫至40℃過(guò)夜。升溫至55-60℃再加熱過(guò)夜。然后將反應(yīng)物冷卻至室溫，過(guò)濾，在0℃用1N HCl緩慢地中和。樣品用DCM萃取5次，合并，用硫酸鈉干燥。將有機(jī)溶液過(guò)濾，直接用于進(jìn)一步的合成無(wú)需再提純，獲得2-(4-羧基-5-丙基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-1H-吲哚-1-羧酸1，1-二甲基乙基酯(化合物105)。實(shí)施例B.18將1-羥基苯并三唑水合物(0.00318mol)在室溫下加入到化合物105(0.00159mol)的DCM(160ml)溶液中。在室溫加入純N，N’-甲烷-四基-雙環(huán)己胺(0.00206mol)。60分鐘后，通入NH3氣5分鐘，析出固體。將混合物靜置整個(gè)周末。過(guò)濾混合物，濾液用飽和NaHCO3萃取。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，然后濃縮。殘余物用液相色譜法提純獲得0.21g 2-[4-(氨基羰基)-5-丙基-1H-咪唑-2-基]-2，3-二氫-1H-吲哚-1-羧酸1，1-二甲基乙基酯(化合物106)。實(shí)施例B.19將1-羥基苯并三唑水合物(0.00158mol)加入到化合物105(0.00079mol)的DCM(80ml)溶液中。加入甘氨酸甲酯鹽酸鹽(0.00103mol)、N’-(乙基亞胺?；?-N，N-二甲基-1，3-丙二胺一鹽酸鹽(0.00103mol)以及4-甲基嗎啉(0.00103mol)。加入THF(25mm)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌3天?；旌衔镉盟腿?。有機(jī)相用飽和NaHCO3、2N檸檬酸、飽和NaHCO3洗滌，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，然后濃縮獲得0.20g 2，3-二氫-2-[4-[[(2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基]羰基]-5-丙基-1H-咪唑-2-基]-1H-吲哚-1-羧酸1，1-二甲基乙基酯(化合物109)。實(shí)施例B.20將化合物81(0.0005mol)在氬氣氛下懸浮于1N NaOH(6ml)。將混合物立即加熱至80℃ 60分鐘。在室溫下依次加入氯仿(6ml)、(2-氟-2-氧代乙基)-1，1-二甲基乙基氨基甲酸酯(0.001mol)。將混合物攪拌過(guò)夜。分離出各層。冷卻水相，酸化，然后用氯仿萃取兩次。將后者的有機(jī)相合并，干燥，過(guò)濾，然后濃縮。樣品用制備HPLC提純獲得0.040g 2-[1-[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-氨基]乙酰基]-2，3-二氫-1H-吲哚-2-基]-1H-咪唑-4-羧酸(化合物138)。實(shí)施例B.21向溶于乙醇(5ml)的化合物145(0.00097mol)中加入幾滴21％NaOEt的乙醇溶液。混合物在室溫下氬氣氛中攪拌。30分鐘后再加入2滴21％NaOEt的乙醇溶液。16小時(shí)后再加入2滴21％NaOEt的乙醇溶液。30分鐘后，濃縮混合物，使其在水和DCM間分配。水層用另外的DCM洗滌。合并的有機(jī)相用水洗滌，干燥，然后濃縮獲得0.193g(66％)[2S-[1(R*)，2R*]]-2，3-二氫-α-甲基-β-氧代-2-(4-丙基-1H-咪唑-2-基)-1H-吲哚-1-乙醇(化合物146)。由化合物147開始類似地制備化合物148。實(shí)施例B.22向化合物58(0.0019mol)的乙腈(15ml)懸浮液中加入乙酸酐(0.074mol)。在室溫下氬氣氛中攪拌4小時(shí)。再加入1.0ml乙酸酐，將反應(yīng)物攪拌過(guò)夜。再攪拌6小時(shí)后，反應(yīng)完成。濃縮混合物，殘余物在飽和NaHCO3和氯仿間分配。干燥有機(jī)層，然后濃縮。殘余物用柱色譜法提純。合并所需部分，用乙醚研磨后收集。獲得0.37g1-[[1-[(4-氯苯基)乙酰基]-4-(3-甲氧基苯基)-4-哌啶基]甲基]-1，3-二氫-2H-苯并咪唑-2-酮(化合物149)。實(shí)施例B.23化合物149(0.0012mol)和THF(200ml)的溶液放入光化學(xué)反應(yīng)器，用UV光照射14小時(shí)。然后將混合物在室溫下氮?dú)夥罩徐o置2天。濃縮混合物。濃縮物用Biotage柱提純，洗提時(shí)用1∶9THF∶DCM，獲得0.077g1-[2-(1-乙?；?2，3-二氫-1H-吲哚-2-基)-5-丙基-1H-咪唑-4-基]-乙酮(化合物150)。實(shí)施例B.24將溶于10ml THF的化合物13(0.00106mol)在室溫下用為THF溶液的BH3.THF(19ml)處理。然后將溶液放入油浴，加熱至60℃過(guò)夜。冷卻至0℃后，將溶液小心地用15ml 3N HCl處理。然后將反應(yīng)物加溫至室溫，攪拌4小時(shí)。將混合物再冷卻至0℃，用12ml 3NNaOH堿化，再用固體Na2CO3完成堿化。分離出各層，水層再用氯仿洗滌。合并有機(jī)相，分出少量的水溶液，有機(jī)相用硫酸鈉干燥。過(guò)濾混合物，減壓濃縮濾液。殘余物經(jīng)過(guò)制備液相色譜法處理獲得0.33g[2S-[1(R*)，2R*]]-2-(4-乙基-1H-咪唑-2-基)-2，3-二氫-α-甲基-1H-吲哚-1-乙胺三氟乙酸鹽(1∶1)(化合物127)。實(shí)施例B.253-氨基-4-(4-羥基-苯基)-1-[3-(4-苯基-1H-咪唑-2-基)-3，4-二氫-1-H-異喹啉-2-基]-丁-1-酮(化合物155) 將TFA(4ml)冷卻至約0℃，然后加入實(shí)施例A.15制備的產(chǎn)物(1.10g，1.85mmol)。反應(yīng)混合物靜置約0.5小時(shí)。然后在氮?dú)饬飨鲁ミ^(guò)量的TFA獲得褐色油狀物。油狀物通過(guò)制備HPLC提純獲得白色固體標(biāo)題化合物。
實(shí)測(cè)MW(MH+)439實(shí)施例B.262-氨基-3-(4-羥基-芐基)-1-[3-(5-甲基-4-苯基-咪唑-2-基)-3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基]-丙-1-酮(化合物153) 向冷卻至約0℃的TFA(4mL)溶液中加入實(shí)施例A.18制備的化合物(0.24g，0.4mmol)，將反應(yīng)混合物攪拌約20分鐘。然后將反應(yīng)混合物從冰浴中移出，加溫至室溫。在氮?dú)饬飨鲁ミ^(guò)量的TFA荻得粗產(chǎn)物。產(chǎn)物用制備HPLC提純獲得白色固體標(biāo)題化合物。
實(shí)測(cè)MW(MH+)453表F-1列出了根據(jù)上述實(shí)施例之一制備的化合物。表中用到的縮寫.C2HF3O2表示三氟乙酸鹽，.2C2H3O4表示乙二酸鹽，.C10H8O3S表示2-萘磺酸鹽。所述表F-1列出了化合物的結(jié)構(gòu)、制備出這些化合物的實(shí)施例編號(hào)、鹽形式、立體化學(xué)標(biāo)記以及熔點(diǎn)(如果檢測(cè)了的話)。
表F-1 C.藥理學(xué)實(shí)施例C.1.對(duì)三肽酶II(TPP II)的抑制作用采用C.Rose等介紹的方法(Nature，380，403-409(1996))檢測(cè)對(duì)TPP II的抑制作用。
利用15μM AAF-AMC作為底物在含有1mM DTT和1mMEGTA的50mM磷酸鉀緩沖液pH7.5中檢測(cè)TPP II活性。以1％的DMSO終濃度加入化合物。檢測(cè)405nm的熒光。式(I)化合物的效力表示為IC50值，即達(dá)到50％抑制所需的濃度。
化合物6、10、13、15、19、22、24、28、30、44、47、48、54、55、57、61、62、66、68、70、73、76、82、84、88、90、92、95、101、104、108、111、114、116、120、122、124、126、129、131、135、142和144的IC50值等于或小于1.10-5M。C.2大鼠腦δ阿片樣物質(zhì)受體結(jié)合測(cè)定頸脫臼處死雄性Wistar大鼠(150-250g，VAF，Charles River，Kingston，NY)，取出腦立即放入冰冷的Tris鹽酸緩沖液中(50mM，pH7.4)。從丘背側(cè)開始經(jīng)中腦橋連接通過(guò)腹側(cè)進(jìn)行冠狀橫切使前腦與其余部分分開。解剖分離后，用Teflon玻璃勻漿器將前腦在Tris緩沖液中勻漿。將勻漿稀釋至濃度為1g前腦組織/100mL Tris緩沖液，以39,000XG離心10分鐘。離心的沉淀物用相同體積Tris緩沖液重懸浮，并用Polytron勻漿器勻漿若干次。將制得的微細(xì)顆粒制備物用于δ阿片樣物質(zhì)結(jié)合測(cè)定。用δ選擇性肽配體[3H]DPDPE于25℃溫育后，用Brandel細(xì)胞收集器通過(guò)Whatman GF/B濾片過(guò)濾試管內(nèi)容物。試管和濾膜用4mL 10mM HEPES(pH7.4)沖洗3次，使用Formula 989閃爍液(New England Nuclear，Boston，MA)以閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定濾膜圓片結(jié)合的放射性。
利用數(shù)據(jù)計(jì)算相對(duì)于對(duì)照結(jié)合的％抑制率(只計(jì)算單一濃度受試化合物時(shí))或Ki值(測(cè)試一系列濃度時(shí))。
如下計(jì)算％抑制率(1-[(受試化合物dpm-非特異性dpm)/(總dpm-非特異性dpm)])×100％使用LIGAND(Munson，P.J.和Rodbard，D.，Anal.Biochem.107220-239，1980)數(shù)據(jù)分析程序計(jì)算Ki值。C.3大鼠腦μ阿片樣物質(zhì)受體結(jié)合測(cè)定頸脫臼處死雄性Wistar大鼠(150-250g，VAF，Charles River，Kingston，NY)，取出腦立即放入冰冷的Tris鹽酸緩沖液中(50mM，pH7.4)。從丘背側(cè)開始經(jīng)中腦橋連接通過(guò)腹側(cè)進(jìn)行冠狀橫切使前腦與其余部分分開。解剖分離后，用Teflon玻璃勻漿器將前腦在Tris緩沖液中勻漿。將勻漿稀釋至濃度為1g前腦組織/100mL Tris緩沖液，以39,000XG離心10分鐘。離心的沉淀物用相同體積Tris緩沖液重懸浮，并用Polytron勻漿器勻漿若干次。將制得的微細(xì)顆粒制備物用于μ阿片樣物質(zhì)結(jié)合測(cè)定。用μ選擇性肽配體[3H]DAMGO于25℃溫育后，用Brandel細(xì)胞收集器通過(guò)Whatman GF/B濾片過(guò)濾試管內(nèi)容物。試管和濾膜用4mL 10mM HEPES(pH7.4)沖洗3次，使用Formula 989閃爍液(New England Nuclear，Boston，MA)以閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定濾膜圓片結(jié)合的放射性。
利用數(shù)據(jù)計(jì)算相對(duì)于對(duì)照結(jié)合的％抑制率(只計(jì)算單一濃度受試化合物時(shí))或Ki值(測(cè)試一系列濃度時(shí))。
如下計(jì)算％抑制率(1-[(受試化合物dpm-非特異性dpm)/(總dpm-非特異性dpm)])×100％使用LIGAND(Munson，P.J.和Rodbard，D.，Anal.Biochem.107220-239，1980)數(shù)據(jù)分析程序計(jì)算Ki值。
權(quán)利要求
1.一種式(I)化合物、其立體異構(gòu)體形式或其藥學(xué)上可接受的加成鹽 其中n為整數(shù)0或1；X為O；S或-(CR4R5)m-，其中m為整數(shù)1或2；R4和R5各自獨(dú)立為氫或C1-4烷基；R1為任選被羥基取代的C1-6烷基羰基；C1-6烷氧基羰基；氨基C1-6烷基羰基，其中C1-6烷基任選被C3-6環(huán)烷基取代；一和二(C1-4烷基)氨基C1-6烷基羰基；芳基取代的氨基羰基；C1-6烷基羰氧基C1-6烷基羰基；C1-6烷氧基羰基氨基C1-6烷基羰基，其中氨基任選被C1-4烷基取代；通過(guò)羰基連接的氨基酸殘基；氨基取代的C1-6烷基；或芳基羰基；R2為選自以下的5元雜環(huán)， 其中m’為整數(shù)1-2；R6為氫或C1-4烷基；R7各自獨(dú)立為氫；鹵素；氨基；羥基；三氟甲基；C1-6烷基；被羥基、羥基羰基、C1-4烷氧基羰基、氨基羰基、一或二(C1-4烷基)氨基羰基、氨基或者一或二(C1-4烷基)氨基取代的C1-4烷基；苯基；氨基羰基；羥基羰基；C1-4烷氧基羰基；C1-4烷基羰基；或C1-4烷氧基羰基C1-4烷基氨基羰基；或者R2為苯并咪唑或者被一個(gè)或兩個(gè)各自獨(dú)立選自以下的取代基取代的苯并咪唑鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、羥基、羥基羰基或C1-4烷氧基羰基；R3為任選被鹵素或苯基甲基取代的二價(jià)基團(tuán)-CH2CH2-；或者R3為下式的二價(jià)基團(tuán) 其中上述(b-1)、(b-2)或(b-3)可任選被1、2或3個(gè)各自獨(dú)立選自以下的取代基取代鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基、氨基、氰基、三氟甲基、苯基或被1個(gè)或2個(gè)獨(dú)立選自以下的取代基取代的苯基鹵素、羥基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基、氰基和三氟甲基；芳基為苯基或者被氨基、硝基或羥基羰基取代的苯基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中n為0，R3為任選被鹵素或甲氧基取代的式(b-1)的基團(tuán)。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中n為0，R3為任選被鹵素或甲氧基取代的式(b-1)的基團(tuán)，并且X為-CH2-或-CH2CH2-。
4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中(a-2)、(a-4)、(a-6)或(a-7)。
5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中R1為C1-6烷基羰基、氨基C1-6烷基羰基或氨基酸。
6.一種藥用組合物，該組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物。
7.一種制備權(quán)利要求6的藥用組合物的方法，其中將治療有效量的權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物與藥學(xué)上可接受的載體緊密混合。
8.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物，該化合物作為藥物使用。
9.一種制備式(I)化合物的方法，其中a)使式(II)中間體與式(III)中間體在反應(yīng)惰性溶劑中并任選存在適當(dāng)堿存在下反應(yīng)，由此獲得如式(I)化合物定義的式(I-a)化合物，其中R1a為除氨基取代的C1-4烷基之外的所有R1取代基；或者 b)使式(II)中間體和式(IV)中間體反應(yīng)，由此獲得式(I-a)化合物； 其中上述反應(yīng)流程的基團(tuán)R1、R2、R3以及整數(shù)n同權(quán)利要求1定義；c)或者，將式(I)化合物根據(jù)已知的轉(zhuǎn)化反應(yīng)互相轉(zhuǎn)化；或者如果需要，將式(I)化合物轉(zhuǎn)化成酸加成鹽，或相反地，將式(I)化合物的酸加成鹽用堿轉(zhuǎn)化為游離堿形式；并且如果需要，制備其立體化學(xué)異構(gòu)體形式。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的新化合物，它為使內(nèi)源性神經(jīng)肽(例如縮膽囊素(CCKs))失活的膜三肽酶抑制劑。本發(fā)明進(jìn)一步涉及制備所述化合物的方法、包含所述化合物的藥用組合物以及所述化合物作為藥物的用途。式(I)中n為整數(shù)0或1；X為O；S或－(CR
文檔編號(hào)A61K31/4196GK1471394SQ01818101
公開日2004年1月28日 申請(qǐng)日期2001年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月30日
發(fā)明者H·J·布雷斯林, H·L·J·德溫特, M·J·庫(kù)克拉, H J 布雷斯林, J 德溫特, 庫(kù)克拉 申請(qǐng)人:詹森藥業(yè)有限公司