專利名稱：Ap/amp的改良前藥形式的制作方法
背景技術(shù)：
核苷酸經(jīng)核苷酸還原酶(RR)還原轉(zhuǎn)化為脫氧核苷酸，是DNA生物合成途徑中的關(guān)鍵控速步驟(Cory，J.g.“核苷酸二磷酸還原酶活性的抑制劑”，International Encyclopedia of Pharmacology和Therapeutics，Cory，J.G.；Cory，A.H.編輯；Pergamon出版社；紐約，(1989)；128章節(jié)，1-16頁)。由于脫氧核苷酸在哺乳動物細胞中的水平非常低，腫瘤生長速度與核苷酸還原酶比活性之間表現(xiàn)出良好的相關(guān)性(Elford，等，J.Biol.Chem.(1970)，245，5228)。哺乳動物的核苷酸還原酶由兩種不同的蛋白質(zhì)組成，即與核苷酸底物結(jié)合的R1，和含有非血紅素鐵和游離酪氨酰基的R2(Reichard P.Ehrenberg，A.Science，(1983)，221，514)。R1和R2對酶活性均有影響。
目前，存在兩大類RR抑制劑。第一類包括核苷類似物，其作用機制涉及與酶的R亞單位結(jié)合；其中的一些抑制劑正在進入臨床開發(fā)中。在這些抑制劑中，2′，2′-二氟-2′-脫氧胞苷(吉西他濱(Gemcitabine)，商品名Gemzar，Eli lilly公司)最近經(jīng)美國食品與藥物管理局批準用于治療胰腺癌(Baker，等，J.Med.Chem.(1991)，34，1879)，和2′-氟化亞甲基-2′-脫氧胞苷正處于有關(guān)治療各種腫瘤的臨床試驗評價中(McCarthy，J.R.和Sunkara，P.S.核苷酸還原酶抑制劑的設(shè)計、合成和抗癌活性，Weiner，D.B.；Williams，W.V.編輯；CRC出版社，Boca Raton，(1994)，68 1364)。第二類RR抑制劑包括N-羥基脲(Reichard和Ehrenberg，Science，(1983)，221，514和Wright等，Cell Biol.(1990)，68，1364)以及HCTs[N-雜環(huán)醛縮氨硫脲]，它通過破壞R2亞單位的自由基而起作用。業(yè)已證明HCTs是核苷酸還原酶的最有效抑制劑酶，在體外比N-羥基脲強80-5000倍(參見Liu等，J.Med.Chem.(1992)，35，3672和J. Med.Chem.Science，(1995)38，4234)。
目前公認的是，HCTs可通過其與R2亞單位上鐵的高度親合性，而發(fā)揮其酶抑制作用，因為鐵是核苷酸還原酶活性位點上的必需元素。多年前，對該系統(tǒng)中的先導(dǎo)化合物5-HP進行了I期臨床評價(DeConti，等，CancerRes.(1972)，32，1455和Moore，等，Cancer Res.(1971)，31，235)，結(jié)果表明該化合物在動物模型中良好的活性，但是在患有實體瘤的病人中卻沒有活性，這大概是與其在人體內(nèi)的快速代謝有關(guān)。通過引入空間位阻和用氨基部分取代羥基，對5-HP進行了修飾，可得到一系列含有3-氨基-的化合物(例如，1A(3-AP)和1B(3-AMP)(參見下面))。在這些抑制劑中，3-AP表現(xiàn)出優(yōu)秀的抗癌活性(Liu等，J.Med.Chem.(1992)，35，3672)和顯著降低的清除率(clearance rate)。它目前處于1期臨床試驗中。當藥物達到藥動學(xué)終點而沒顯示出任何藥物相關(guān)的毒性時，即可停止單一劑量臨床試驗。有關(guān)長期(extended)給藥方案(每日5次，96小時連續(xù)的輸注)的附加1期研究正在進行中。 盡管3-AP顯示出了體內(nèi)活性，但是該化合物的治療潛力可能因其較差的水溶性而受到限制。因此，為了改善其水溶性和治療指數(shù)，開發(fā)出了兩種含磷酸鹽的水溶性前藥2(對位3-AP前藥)和3(鄰位3-AP前藥)。含磷酸鹽的前藥是用來使化合物在中性pH下具有優(yōu)良的水溶性，并提高其生物利用度。
對3-AP前藥進行的初步體外評價表明，它們可迅速地被堿性磷酸酶酶轉(zhuǎn)化成3-AP。但是，在Beagle犬的體內(nèi)PK研究表明，從含鄰位磷酸鹽3中釋放出來的3-AP的半衰期為14.2小時，而對位前藥2的半衰期僅為1.5小時。同時，還在荷M-109實體瘤的小鼠體內(nèi)，對前藥2和3進行了評價(與3-AP和環(huán)磷酰胺比較)。這些實驗的結(jié)果表明，與母體3-AP相比，鄰位前藥3降低毒性的效力更高，并且其活性與環(huán)磷酰胺(cytoxan)相當。為了進一步改進3-AP前藥的生物學(xué)和藥物特性，并使其治療應(yīng)用最佳化，設(shè)計了一系列含鄰位磷酸鹽的前藥。 2對位3-AP前藥 3鄰位3-AP前藥發(fā)明目的在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明的一個目的是用于治療瘤形成(neoplasia)(包括癌癥)患者的化合物、藥物組合物和方法。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的一個目的是提供采用特定組合物治療瘤形成的方法，所述組合物在活性、藥動學(xué)、生物利用度和降低毒性方面表現(xiàn)出具有良好且增強的特性。
本發(fā)明另一目的提供用于治療癌癥的組合物和方法，所述癌癥對傳統(tǒng)化療劑治療有抗性。
通過下面的本發(fā)明說明書，可容易地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的一個或多個這些目的以及其它目的。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及具有以下結(jié)構(gòu)化合物 其中R是H或CH3；R2是游離酸或鹽形式的磷酸根；R3是H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3、CF3或C1-C3烷基；R4為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3、CF3、NO2、CN、SO2CF3、COOCH3、SF5、SO2CH3、COCH3、NH2、N(CH3)2、SCH3、OH；和R5和R6相互獨立地為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3、CF3、NO2、CN、SO2CF3、COOCH3、SF5、SO2CH3、COCH3、NH2、N(CH3)2、SCH3或OH，其條件是當R3、R4、R5或R6中任意2個不是H時，R3、R4、R5或R6中的另2個是H。
在尤其優(yōu)選的本發(fā)明化合物中，當R3、R5、R6是H時，R4是Cl、F或Br(優(yōu)選為Cl)。在其它優(yōu)選的本發(fā)明化合物中，當R3、R4、R6是H時，R5是F、Cl、OCH3或OCF3(優(yōu)選為F)。在本發(fā)明優(yōu)選的其它化合物中，當R3、R4、R5或R6中的2個選自F、Cl、Br、或I(優(yōu)選兩取代基相同，更優(yōu)選兩取代基是Cl)時，R3、R4、R5或R6中的另2個是H。在其它優(yōu)選的本發(fā)明化合物中，當R4和R5或R5和R6均為F或Cl(優(yōu)選均為Cl)時，另一R3和R6或R3和R4均是H。在此所述的本發(fā)明化合物和尤其優(yōu)選的組合物，是能非常有效治療瘤形成包括癌癥的化合物，與對位或鄰位3-AP前藥2和3相比，具有至少一種或更多顯著增強的抗瘤形成活性、顯著提高的最大耐受劑量(MTD)和降低的毒性，以及延長的半衰期和有利的藥動學(xué)。這些結(jié)果是出乎意料的。這樣，可施用更高劑量的本發(fā)明優(yōu)選化合物，從而獲得更大的抗瘤形成(包括癌)效力，并表現(xiàn)出延長的血流半衰期和降低的毒性。
本發(fā)明化合物可用于具有生物學(xué)/藥理學(xué)活性的藥物組合物中，所述組合物可用于治療例如瘤形成(癌癥)以及許多其它病癥和/或疾病狀態(tài)，所述化合物還可用作合成生物活性化合物的中間體，以及用作確定本發(fā)明化合物以及其它生物學(xué)活性物質(zhì)生物活性的標準品。在某些應(yīng)用中，本發(fā)明化合物可用來治療微生物感染、尤其包括病毒感染。這些組合物包含有效量的任何一種或更多上述公開化合物，任選與可藥用添加劑、載體或賦形劑結(jié)合。
本發(fā)明的另一方面涉及治療瘤形成(包括癌癥)，其中包括將有效量的上述化合物給予需要這種治療的病人，所述化合物任選與可藥用添加劑、載體或賦形劑結(jié)合。本發(fā)明還涉及用于抑制瘤形成(包括惡性腫瘤或癌癥)生長的方法，包括將抑制或治療有效量或濃度的至少一種上述化合物與瘤形成接觸。這些方法治療性用于治療瘤形成(包括癌癥)，也可用于比較試驗，例如用于確定有關(guān)類似物活性的分析，以及用于確定患者癌癥對一種或更多本發(fā)明敏感性的分析試驗。所述化合物的主要應(yīng)用是治療瘤形成，包括癌，尤其包括肺癌、乳腺癌和前列腺癌等。
附圖簡述附

圖1代表本發(fā)明某些化學(xué)物。
附圖2-3代表本發(fā)明化合物的化學(xué)合成路線。
附圖4-15是本發(fā)明優(yōu)選實施方案化合物的效力、藥動學(xué)、生物利用度、聯(lián)合化學(xué)療法和毒性的試驗結(jié)果。
發(fā)明詳述在本發(fā)明上下文中使用了以下術(shù)語。
在本說明書中，術(shù)語“患者”是指采用本發(fā)明組合物進行治療(包括預(yù)防性治療)的動物(包括哺乳動物和優(yōu)選為人)。在治療某種動物(例如人)患者特異性的感染、病癥或疾病狀態(tài)時，所述“患者”是指這種特定動物。
在本說明書中，術(shù)語“有效量”是指足以使所治療疾病或病癥產(chǎn)生有利變化的本發(fā)明化合物濃度或用量。根據(jù)所治療或病癥的不同，所述變化包括癌癥或腫瘤生長或尺寸的緩解、下降，有利的生理結(jié)果，以及微生物的生長或分解(elaboration)的減少等。
在本說明書中，術(shù)語“烷基”是指包含1-3個碳單位的烷基。本發(fā)明中的烷基包括線性或支鏈基團，例如甲基、乙基、丙基和異丙基。
術(shù)語“鹽類”是指涉及本發(fā)明化合物應(yīng)用的任何鹽。在所述化合物用于藥物適應(yīng)癥(包括治療瘤形成，包括癌癥)的情況下，術(shù)語“鹽類”表示可用作藥物的化合物的可藥用鹽。
術(shù)語“瘤形成”是指導(dǎo)致贅生物形成和生長的病理過程，即由細胞增殖產(chǎn)生的異常組織生長，該組織的生長比正常組織快，并在引起新生體的刺激源停止后仍能繼續(xù)生長。瘤形成表現(xiàn)為部分或完全缺乏結(jié)構(gòu)組織以及與正常組織的機能協(xié)調(diào)性，通常會形成明顯組織腫塊，它可能是良性的(良性腫瘤)或惡性的(癌)。術(shù)語“癌癥”是用來描述任何各種類型惡性腫瘤的通稱，其中的大多數(shù)會侵襲周圍組織，能轉(zhuǎn)移至若干部位，并可能在設(shè)法切除后復(fù)發(fā)，如果得不到充分治療，可導(dǎo)致患者死亡。在此所用的術(shù)語癌癥包括在“瘤形成”內(nèi)。
本發(fā)明優(yōu)選的治療方面涉及用于動物或人患者的瘤形成(包括良性的和惡性腫瘤和癌)的方法，在優(yōu)選實施方案中，所述癌具有發(fā)展的耐藥性，例如多藥耐藥乳腺癌，該方法包括施用治療有效量或濃度的一種或更多化合物，以抑制所治療動物或人患者的瘤形成的生長或傳播，或者使瘤形成事實上萎縮。
例如，可采用本發(fā)明組合物治療的癌包括胃、結(jié)腸、直腸、肝臟、胰腺、肺、乳房、子宮頸、子宮體、卵巢、前列腺、睪丸、膀胱、腎、腦/中樞神經(jīng)系統(tǒng)、頭和頸部、咽喉、何杰金氏病(Hodgkins disease)、非何杰金氏白血病、多發(fā)性骨髓瘤白血病、皮膚黑素瘤、急性淋巴細胞性白血病、急性粒細胞白血病、尤因氏肉瘤、小細胞肺癌、絨毛膜癌、橫紋肌肉瘤、腎胚細胞瘤、成神經(jīng)細胞瘤、毛細胞白血病、口/咽、食管、喉、黑素瘤、腎和淋巴瘤等。本發(fā)明化合物尤其可用于治療肺癌、乳腺癌和前列腺癌。
在本發(fā)明方法中，在某些優(yōu)選實施方案中，發(fā)現(xiàn)與至少另外一種抗腫瘤藥物聯(lián)用，對于瘤形成(包括癌)的治療是有利的。在本發(fā)明的這些方面中，可將有效量的一種或更多本發(fā)明化合物與有效量的至少另外一種抗腫瘤藥物/抗癌劑聯(lián)用，所述另外的抗腫瘤藥物/抗癌劑例如環(huán)磷酰胺(cylophosphamide)，絲裂霉素C和依托泊苷等，包括topoI和topoII抑制劑，例如阿霉素、拓撲替康和依立替康(irinotecan)，其他藥物例如吉西他濱(gemcitabine)，喜樹堿(campothecin)和以喜樹堿為基礎(chǔ)的藥物，和順鉑等，烷基化劑包括苯丁酸氮芥(chlorambucil)和苯丙氨酸氮芥(melphalan)。出人意料地發(fā)現(xiàn)，通過減少或防止DNA修復(fù)的機制而起作用的本發(fā)明化合物(即R3、R4、R5和R6為H的化合物)，可與損害DNA的化合物協(xié)同作用。這樣，本發(fā)明化合物可有利地與通過損害DNA而起作用的任一化合物聯(lián)用，其中后者尤其包括烷基化劑和鉑化(platinating)劑。所謂“聯(lián)用”是指施用本發(fā)明化合物后，不管聯(lián)用的化合物是否同時施用，均可在患者血流中同時發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物以及聯(lián)用的化合物。在許多情況下，本發(fā)明化合物與傳統(tǒng)抗癌劑的聯(lián)用可產(chǎn)生協(xié)同作用(即大于加合作用)該結(jié)果是出人意料的。
以本發(fā)明新穎化合物為基礎(chǔ)的藥物組合物可用于治療病癥或疾病例如瘤形成(包括癌)，其中包括任選與藥用添加劑、載體或賦形劑結(jié)合的治療有效量的上述化合物。
藥物劑型中的很多化合物可用作預(yù)防某種疾病或病癥的預(yù)防劑。
可以其藥用鹽類的形式提供本發(fā)明化合物或其衍生物。在此所用的術(shù)語“藥用鹽類或絡(luò)合物”是指適當?shù)柠}類或本發(fā)明活性化合物的絡(luò)合物(complex)，它們保持了母體化合物的所需生物活性，并對正常細胞表現(xiàn)出有限的毒理學(xué)作用。這種鹽類的非限定性示例包括磷酸鈉鹽和鉀鹽等。對所述活性化合物的修飾可改變化學(xué)物質(zhì)的溶解性、生物利用度和新陳代謝速度，這樣可實現(xiàn)對化學(xué)物質(zhì)傳遞的控制。另外，修飾可以影響所述化合物的抗癌活性(有時候會強于母體化合物)。本領(lǐng)域技術(shù)人員采用常規(guī)方法，可容易地制備并測試評價所述衍生物的抗癌活性。
可將本發(fā)明化合物摻入適于所有途徑施用的制劑中，這例如包括經(jīng)口和非腸道，包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、頰內(nèi)、經(jīng)皮和栓劑形式。其中優(yōu)選非腸道給藥，尤其優(yōu)選靜脈內(nèi)或肌內(nèi)施用。
以這些新穎化合物為基礎(chǔ)的藥物組合物包括用于治療瘤形成、癌及其他疾病和病癥的治療有效量的上述化合物，任選與藥用添加劑、載體和/或賦形劑結(jié)合。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，根據(jù)欲治療的感染或病癥、采用的治療方案、所用藥物的藥動學(xué)以及所治療的患者(動物或人)，可對一種或更多本發(fā)明化合物的治療有效量加以調(diào)整。
在本發(fā)明的制藥方面，優(yōu)選以本發(fā)明化合物與藥用載體混合的形式配制。通常，優(yōu)選經(jīng)非腸道施用所述藥物組合物，尤其優(yōu)選以靜脈內(nèi)肌內(nèi)劑型施用，但是許多制劑也可經(jīng)其它非腸道途徑施用，例如經(jīng)皮、頰、皮下、栓劑或其它途徑包括經(jīng)口施用。優(yōu)選以無菌鹽水施用靜脈內(nèi)和肌內(nèi)制劑。當然，在本發(fā)明的教導(dǎo)下，在不降低本發(fā)明組合物穩(wěn)定性和不損害其治療活性的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可對制劑加以改進，以提供用于特定給藥途徑的多種制劑。具體地說，例如采用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的較小修飾(例如成鹽等)，即可容易地實現(xiàn)對本發(fā)明化合物的修飾，從而可改善它們在水或其它載體中的溶解度。為了對本發(fā)明化合物的藥動學(xué)加以控制，使之對患者產(chǎn)生最大有利的效力，本領(lǐng)域技術(shù)人員可改進特定化合物的給藥途徑和給藥方案。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可利用本發(fā)明前藥形式化合物有利的藥動學(xué)參數(shù)，從而將本發(fā)明化合物有利傳遞至宿主生物體或患者體內(nèi)的目標位點，使化合物的預(yù)期效果最大化。
本發(fā)明治療活性制劑中的化合物用量是可用于治療感染或病癥的有效量。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明化合物、尤其是當R4是Cl或R5是F、Cl、OCH3或OCF3和苯環(huán)(不是磷酸鹽和氨基甲酸乙酯部分)上的剩余取代基是H時，所述化合物優(yōu)選用于治療瘤形成和尤其癌癥(在某些情況下包括耐藥性癌癥)。通常，劑型中本發(fā)明優(yōu)選化合物的治療有效量約0.025mg/kg-2.5mg/kg，優(yōu)選約2.5-5mg/kg-100mg/kg患者體重，更優(yōu)選約20-50mg/kg，更優(yōu)選約25mg/kg，這些劑量范圍可能用于本發(fā)明，但應(yīng)根據(jù)所用的具體化合物、所治療的病癥或感染和給藥途徑來調(diào)節(jié)治療有效量。至于上述的本發(fā)明優(yōu)選組合物，即R4是Cl或R5是F、Cl、OCH3或OCF3和苯(不是磷酸鹽和氨基甲酸乙酯部分)上的剩余取代基是H時的化合物，由于其增強的抗癌活性，同時對非癌性寄主細胞的總毒性降低以及較高的生物利用度，可采用高于triapine 1A 3-10倍的水平施用這些化合物，而且具有明顯較低的毒性。在這些劑量水平時，從前藥形式中處釋放出來的triapine的AUC(曲線下面積)約是以非前藥形式使用的triapine的5-25倍。因此，本發(fā)明化合物表現(xiàn)出意料不到的結(jié)果，并且是用于治療瘤形成尤其癌癥的杰出藥物。通常，上述列舉的劑量范圍可產(chǎn)生有效的活性物質(zhì)血液水平，即在患者血液中的濃度約低于0.04-400μg/cc或更高。與先有技術(shù)TriapineTM相比(克分子水平)，本發(fā)明化合物具有更有利的生物利用度特性，以及降低的毒性和更大的活性，本發(fā)明化合物可用作治療瘤形成(包括癌癥)的出人意料的有利化合物。
可連續(xù)施用(靜脈滴注)本發(fā)明活性物質(zhì)，這包括經(jīng)推注(bolusadministration)，靜脈內(nèi)或肌內(nèi)，次數(shù)少于每天施用一次至幾次，還包括經(jīng)局部、非腸道、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、經(jīng)皮(包括穿透促進劑)、經(jīng)頰和栓劑施用，以及在某些情況下經(jīng)其它給藥途徑包括口服施用。
為了制備本發(fā)明藥物組合物，優(yōu)選采用常規(guī)制藥混合技術(shù)，將治療有效量的一種或更多本發(fā)明化合物與可藥用載體緊密混合，制得制劑?？筛鶕?jù)預(yù)期的施用(例如靜脈內(nèi)或肌內(nèi))制劑形式而選擇各種載體。在制備適當劑型形式的藥物組合物時，可采用任何常規(guī)的制藥介質(zhì)。對于非腸道制劑，所述載體通常包括無菌水或水性氯化鈉溶液，也可包括有助于分散的其它成分。當然，盡管采用了無菌水和無菌操作，組合物和載體仍須滅菌。還可采用液體載體、助懸劑等，配制注射用混懸劑。
本發(fā)明化合物可用于治療動物患者和尤其是哺乳動物包括人。這樣，可施用有效量一種或更多本發(fā)明化合物或其衍生物或可藥用鹽，來治療患有腫瘤和尤其癌癥或在此公開的其它疾病的人、馬(equines)、犬、牛及其他動物，和尤其哺乳動物，其中本發(fā)明化合物任選與可藥用或稀釋劑混合，可單獨使用本發(fā)明化合物或者根據(jù)所治療的疾病而與其它已知藥物聯(lián)用。這些治療也可與其它常規(guī)癌癥療法例如放射治療或外科手術(shù)結(jié)合。
可藥用載體或稀釋劑中的活性物質(zhì)，其用量應(yīng)足以向患者傳遞預(yù)期適應(yīng)癥所需的治療有效量藥物，同時不對所治療患者產(chǎn)生嚴重毒性作用。
可以任何適當?shù)膯挝粍┬头奖愕厥┯没衔铮ǖ幌抻诿繂挝涣亢?-3000mg、優(yōu)選5-500mg活性成分的劑型。
藥物組合物中活性物質(zhì)的濃度將取決于所述藥物的吸收、分布、滅活和排泄率，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的那些因素。應(yīng)當注意的是，劑量應(yīng)隨著所述病癥的減輕而變化?？梢岳斫獾氖牵魏翁囟ǖ氖茉囌?，應(yīng)根據(jù)個體需要以及負責給藥指導(dǎo)施用組合物的專業(yè)人員的判斷，隨時調(diào)整具體的給藥方案，而且在此所述的濃度范圍僅是示例性，對權(quán)利要求組合物的范圍或應(yīng)用沒有限制?？闪⒓词┯没钚猿煞?，或分成多個較小劑量在不同間隔內(nèi)施用。
本發(fā)明活性物質(zhì)也可與不損害本發(fā)明活性物質(zhì)所需作用的其他活性物質(zhì)組合，或者與增強所需作用的活性物(例如其它抗癌劑)組合，在某些情況下，根據(jù)所需的療法或目標，可與抗生素、抗真菌劑、抗炎劑或抗病毒化合物等組合。
可采用包括以下組分供非腸道、真皮內(nèi)、皮下、或局部施用的溶液劑或混懸劑無菌稀釋劑例如注射用水、鹽溶液、不揮發(fā)性油(fixed oils)、聚乙二醇、甘油、丙二醇、或其它合成溶劑；抗菌劑例如苯甲醇或尼泊金甲酯；抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑例如乙二胺四乙酸(EDTA)；緩沖劑例如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽和等張調(diào)節(jié)劑例如氯化鈉或右旋糖。非腸道給藥制劑可裝入安瓿、一次性注射器或玻璃或塑料多劑量小瓶中。如果供靜脈內(nèi)施用，優(yōu)選的載體包括例如生理鹽水或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。
在一個實施方案中，可采用防止化合物從體內(nèi)快速消除的載體配制活性物質(zhì)，例如制成控釋制劑包括植入劑和微囊化的給藥系統(tǒng)?？刹捎蒙锝到獾纳锵嗳菥酆衔?，例如乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚酐、聚羥基乙酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，制備這類制劑的方法是顯而易見的。
也可采用脂質(zhì)體混懸液作為藥用載體?？砂凑毡绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法配制這些制劑。例如，可將適當?shù)闹|(zhì)溶于無機溶劑中，然后蒸發(fā)溶劑，在容器表面上留下干燥脂質(zhì)膜，從而制得脂質(zhì)體制劑。然后將活性物質(zhì)的水溶液引入容器中。然后用手旋動容器，使類脂材料從容器壁上剝落下來，并分散成類脂聚集物，從而形成脂質(zhì)體混懸液。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其它制備方法也可用于本發(fā)明的這些方面中。
可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已使用和公認的各種生物學(xué)分析方法評價化合物的抗癌活性。任一種這些方法均可用于評價在此公開化合物的活性。
一種用于評價活性的常規(guī)方法是采用癌細胞系的試驗小組。這些試驗可體外評價特定化合物在癌細胞系中的抗癌活性，并為體內(nèi)應(yīng)用所述待試化合物提供參考數(shù)據(jù)。其它分析包括體內(nèi)評價化合物對人或適當動物模型的作用，例如使用植入或移植到小鼠或其它適當動物模型中的小鼠腫瘤細胞。
化學(xué)合成對3-AP前藥進行的初步體外評價表明，它們可迅速經(jīng)堿性磷酸酶酶轉(zhuǎn)化成3-AP。與之相反的是，在Beagle犬的體內(nèi)PK研究表明，從含鄰位磷酸鹽前藥中釋放出來的3-AP的半衰期僅為14.2小時，而對位前藥的半衰期僅為1.5小時。同時，在荷M-109實體瘤的小鼠體內(nèi)，對前藥2和3進行了評價(與抗3-AP和環(huán)磷酰胺比較)。這些實驗的結(jié)果表明，與母體3-AP(1A)相比，鄰位前藥3降低毒性的效力更高，并且其活性與環(huán)磷酰胺相當。為了進一步改善3-AP前藥的生物學(xué)和藥物特性，并使其治療應(yīng)用最佳化，采用以下原理，設(shè)計了一系列以鄰位磷酸鹽為基礎(chǔ)的前藥。
用于設(shè)計新的前藥的原理是3-AP磷酸鹽連接的前藥經(jīng)脫磷酸作用釋放3-AP而得到4，和隨后經(jīng)芐基碎裂(fragmentation)，得到可用作生物學(xué)烷基化劑的醌的甲基化物(quinone methide)5。 期望不受理論所限，據(jù)推測該前藥活化過程中的控速步驟可能是P-O鍵斷裂步驟(堿性磷酸酶催化)。隨后的碎裂步驟通常較快。這可能是由于3-AP前藥具有較長的循環(huán)半衰期，使其起到3-AP貯庫的作用，或者是因為前藥的分布不同于母體藥物，可能使其具有所需的性能。達到該目的方法是使脫磷酸作用步驟減慢，通過在α位向磷酸基引入龐大的取代基，使含3-AP磷酸鹽前藥的生物活化中的這一限速步驟減慢。這些烷基通過接近P-O鍵裂位點而產(chǎn)生了空間位阻作用，從而使酶促脫磷酸作用減速。另一方法在苯基環(huán)中引入能影響P-O鍵裂速度的釋電子或吸電子基團。同樣地，在其它位置上用釋電子和吸電子基團進行取代，可影響隨后的碎裂步驟。
基于這些考慮，可方便地大量合成了許多磷酸鹽的前藥(附圖1)，并進行了評價。這些前藥的二鈉鹽在水中極易溶解。
5-氯代前藥化合物6的合成如附圖2所示。這樣，例如采用2-氯代3-煙酸甲酯18或衍生物，經(jīng)兩步制得酸20，所述兩個步驟包括Heck反應(yīng)(參見Jeffery，Tetrahedron(1996)，52，10113和Dieck和Heck，J.Org.Chem.(1975)，40，1083)和NaOH促進的酯水解。通過雙-TMSE亞磷酸鹽與2-羥基芐醇之間的氧化偶合(McCombie等，J.Chem.Soc.(1945)，381)，制得氯代鄰位磷酸鹽接頭(linker)21。大規(guī)模制備接頭21遇到問題是其在純化期間會分解，這使產(chǎn)率降低。用Et3N為緩沖劑以中和硅膠的酸性，調(diào)節(jié)所述條件，從而可大量獲得接頭(88％)。在Curtius重排條件下(Shipps等，J.Bioorg.Med.Chvem.(1996)，4，655)，加熱含有酸20、接頭21、三乙胺和二苯基磷酰疊氮化物的反應(yīng)混合物，提供所需的氨基甲酸鹽22(58％)，它接著轉(zhuǎn)化為醛23(72％)和相應(yīng)的縮氨基硫脲(thio-semicarbazone)24(產(chǎn)率63％)。用TFA除去24中的2-三甲基甲硅烷基乙基(TMSE)基團(Chao等，J.Org.Chem.(1994)，59，6687)，提供3-AP前藥游離酸6，接著用飽和碳酸氫鈉溶液處理并用反相柱純化，轉(zhuǎn)化成二鈉鹽25。
采用適當?shù)暮姿猁}的取代的芐基接頭例如21，通過基本上相同的路徑合成另一個取代的鄰位前藥。將這些接頭與25偶合，然后經(jīng)官能團處理，得到前藥(附圖3)。該合成證明本發(fā)明前藥可很容易轉(zhuǎn)化成其相應(yīng)磷酸鹽。這些磷酸鹽化合物具有優(yōu)良的水溶性(明顯高于其非前藥形式)。母體3-AP在水溶液中的溶解度小于0.1mg/ml，而前藥的溶解度為16-35mg/ml。
經(jīng)上述一般性描述后，下面的實施例旨在示例說明優(yōu)選的及其他實施方案和比較。這些實施例不應(yīng)將認為是對前述以及后附權(quán)利要求定義的本發(fā)明范圍的限制。采用類似的方法學(xué)和/或本領(lǐng)域易得到的已知合成方法，可很方便地合成未在本申請實施例部分中明確示例的其它化合物。通過直接采用這里所述的合成方法，或者采用本領(lǐng)域已知技術(shù)對該合成方法進行改進/修飾，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可很方便地合成所述的所有化合物。
實施例所有試劑均以商業(yè)級產(chǎn)品購入，沒有進一步純化，如有必要，可在使用前干燥和/或蒸餾處理溶劑。所有NMR光譜(1H、13C和31p)均采用BruckerAC300光譜儀測定?；瘜W(xué)位移(相對于四甲基硅烷)以百萬分之一(ppm)計。偶合常數(shù)以赫茲(Hz)記錄?？焖僦V法(FCC)采用Merck硅膠60(230-400目)，所有三甲基甲硅烷基乙基(TMSE)保護的化合物均用三乙胺預(yù)處理。反相柱色譜(RPCC)用CAT凝膠(Waters公司，制備柱C18 125，55-105μm)填充，用milli-Q級去離子水洗脫。
實施例1-3制備的煙酸(20)的通用方法實施例1制備2-氯代煙酸甲酯(18)向在1，4-二噁烷(500ml)中的2-氯代煙酸酸(Aldrich，100.0g，0.63mol)混合物中加入亞硫酰氯(70ml，0.96mol)。將懸浮液于回流下加熱22小時，用氣體分離器吸收氯化氫氣體。蒸發(fā)溶劑后，將殘留物溶于甲醇(300ml)中。于0℃，向溶液中滴加三乙胺(TEA，120ml，1.26mol)，用時2小時。蒸發(fā)溶劑，將殘留物懸浮于乙酸乙酯中。過濾除去沉淀。濃縮濾液，得到油狀的酯18(92.3g，86％)
Rf(1∶5v/v乙酸乙酯-己烷)0.38。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.53(dd，4.8Hz，1H)，8.19(dd，7.6Hz，1H)，7.37(dd，7.7Hz，1H)和3.97(s，3H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ164.5，151.6，149.6，140.0，126.4，121.9和52.5.
實施例2制備2-苯乙烯基煙酸甲酯(19)向在DMF(450ml)中的酯18(48.8g，0.28mol)的溶液中加入苯乙烯(165ml，1.42mol)、醋酸鈀(6.5g，30mmol)、乙酸鈉(47g，0.57mol)和三苯膦(30g，0.11mol)。混合物與回流下加熱22小時。經(jīng)Celite墊過濾除去鈀催化劑。減壓濃縮濾液，殘留物溶于最低量的乙酸乙酯中。向上述溶液中加入己烷。過濾除去沉淀后，濃縮濾液。所得粗產(chǎn)物經(jīng)FCC(1∶1v/v乙酸乙酯-己烷)純化，得到淺黃色油狀的酯19(55.0g，81％)Rf(1∶5v/v乙酸乙酯-己烷)0.41。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.70(dd，1H)，8.10(dd，1H)，8.16(d，1H)，7.94(d，1H)，7.64(d，2H)，7.4-7.3(m，3H)，7.18(dd，1H)和3.94(s，3H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ166.7，155.3，152.0，138.6，136.7，135.9，128.6，128.5，127.5，24.8，123.8，121.3和52.4.
實施例3制備2-苯乙烯基煙酸(20)于環(huán)境溫度下，用3N的NaOH溶液(110ml，0.25mol)處理在THF(100ml)中的酯19(55.0g，0.23mol)溶液21小時。除去溶劑后，殘留物用水和乙醚吸收。分離相，水相用醚(2×)洗滌。所得水相用2N的HCl溶液中和，然后過濾收集沉淀，得到奶油色固體形式的酸20(50.2g，97％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.72(dd，1H)8.19(dd 1H)，8.10(d，1H)，7.86(d，1H)，7.62(d，2H)和7.4-7.3(m，4H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ167.9，153.7，151.8，138.6，136.4，134.5，128.9，128.7，127.2，125.3和122.1.
實施例4-5制備磷酸鹽接頭(21，26a-k)的通用方法實施例4制備二(2-三甲基甲硅烷基乙基)亞磷酸鹽(TMSE-亞磷酸鹽)于-78℃，向在含有吡啶(11.4ml，0.14mol)的乙醚(200ml)中的2-三甲基甲硅烷)乙醇(Aldrich，25.0g，0.21mol)的溶液中，一次加入三氯化磷(6.2ml，70mmol)。反應(yīng)混合物于攪拌下保持5分鐘，然后用乙醚(500ml)稀釋。加溫至環(huán)境溫度后，混合物連續(xù)攪拌18小時，過濾除去沉淀，然后濾液用氨氣吹泡10分鐘。經(jīng)Celite墊過濾除去沉淀，濃縮濾液，得到無色的油狀TMSE-亞磷酸鹽(20.7g，99％)1H NMR(300MHz，CDC13)δ6.76(d，1H)，4.13(m，4H)，1.07(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ64.0(d)，19.6(d)和-1.6(d)。
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ18.5。
實施例5制備2-(TMSE-膦酰氧基)苯甲醇(21，26a-k)通用方法向在乙腈(40ml)中相應(yīng)的2-羥基芐醇(10mmol)溶液中，加入N，N′-二異丙基乙胺(DIEA，11mmol)、4-二甲基氨基吡啶(DMAP，1mmol)和四氯化碳(50mmol)。于-30℃攪拌下，立即向該溶液中加入二(2-三甲基甲硅烷基乙基)亞磷酸鹽(冰箱貯藏，11mmol)。加溫至環(huán)境溫度后，反應(yīng)混合物攪拌3小時。減壓蒸發(fā)溶劑，殘留產(chǎn)物用FCC(1∶1v/v乙酸乙酯-己烷)純化，得到相應(yīng)TMSE-保護的磷酸鹽接頭(21，26a-k)。
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基芐醇(苯基5位上是H，21a)按照上述方法，經(jīng)2-羥基芐醇(15.0g，0.12mmol)得到油狀的鄰位磷酸鹽接頭2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基芐醇(39.78g，81％)1H NMR(300兆赫，CDCl3)δ7.43(d，J＝8.5Hz，1h)，7.27-7.16(m，3h)，4.63(s，2h)，4.29-4.19(m，4h)，4.12(m，4h)，1.14-1.08(m，4h)，和0.00(s，18h)；13C NMR(75兆赫，CDCl3)148.4(d，J＝8.84hz)，133.0(d，J＝4.59Hz)，130.9，129.1，25.8，121.0(d，J＝4.47Hz)，67.5(d，J＝6.93)，60.1，9.5(d，J＝5.76Hz)和-1.563。
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ6.4.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-氯代芐基醇(21)按照上述方法，經(jīng)5-氯代-2-羥芐基醇醇(5.0g，32mmol)，得到油狀21(12.2g，88％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.33(d，1H)，7.11(m，1H)，7.02(m，1H)，4.49(s，2H)，4.12(m，4H)，1.00(m，4H和-0.07(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ146.5(d)，134.7(d)，130.8，130.2，128.6，122.0(d)，67.7(d)，59.4，19.5(d)和-1.6。
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ6.1.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-氟代芐基醇(26a)按照上述方法，經(jīng)5-氟代-2-羥芐基醇(17.0g，119mmol)得到油狀26a(31.7g，62％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.2-7.1(m，1H)，7.0-6.9(m，1H)，4.63(s，1H)，4.3-4.1(m，4H)，1.2-1.1(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ159.8(d)，143.7(dd)，135.2(dd)，121.8(dd)，116.4(d)，115.0(d)，67.6(d)，59.4，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ6.4.
19F NMR(282MHz，CDCl3)δ-59.8.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-硝基芐醇(26b)按照上述方法，經(jīng)2-羥基-5-硝基芐醇(4.5g，27mmol)得到油狀26b(6.4g，53％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.14(m，1H)，7.81(m，1H)，7.14(m，1H)，4.48(s，2H)，4.06(m，4H)，0.90(m，4H)和-0.20(m，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ152.0(d)，144.6，134.7(d)，123.7，123.4，119.8，67.9(d)，58.4，19.3(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ4.4.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-甲氧芐醇(26c)
按照上述方法，經(jīng)2-羥基-5-甲氧芐醇(11.0g，25mmol)得到油狀的26c(7.7g，70％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.06(dd，1H)，6.94(d，1H)，6.74(dd，1H)，4.57(s，2H)，4.34.1(m，4H)，3.74(s，3H)，1.1-1.0(m，4H)和0.0(m，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ157.1，141.7(d)，134.0(d)，121.9(d)，125.3，114.5，67.5(d)，60.2，55.6，19.6(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ6.9.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-三氟甲氧芐醇(26d)按照上述步驟，經(jīng)2-羥基-5-三氟甲氧芐醇(1.9g，9.1mmol)得到油狀26d(3.3g，62％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.20(d，1H)，7.19(dd，1H)，7.09(dd，1H)，4.61(s，2H)，4.24(m，4H)，1.08(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ146.4(dd)，135.0(d)，123.0，122.1，121.4，67.8(d)，59.6，19.6(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ6.2.
19F NMR(282MHz，CDCl3)δ-58.7.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-三氟甲基芐醇(26e)按照上述方法，經(jīng)2-羥基-5-三氟甲基芐醇(4.1g，22mmol)得到26e(7.9g，77％)油狀1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(br s，1H)，7.51(dd，1H)，7.29(d，1H)，4.66(s，2H)，4.23(m，4H)，1.09(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ150.6(d)，133.8(d)，127.7(d)，126.1，121.3(d)，68.0(d)，59.6，19.6(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.8.
19F NMR(282MHz，CDCl3)δ-62.9.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-3，5-二氯芐醇(26f)按照上述方法，經(jīng)3，5-二氯-2-羥芐基醇(4.6g，24mmol)得到油狀的26f(7.2g，63％)
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.34(d，1H)，7.32(dd，1H)，4.56(s，2H)，4.25(m，4H)，1.08(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ149.9，143.3(d)，136.9(d)，131.2(d)，129.9，1295，127.6(d)，68.3(d)，59.8，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.7.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4，5-二氯芐醇(26g)按照上述方法，經(jīng)4，5-二氯-2-羥芐基醇(3.6g，18mmol)，得到油狀26g(5.2g，59％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.53(s，1H)，7.28(s，1H)，4.55(s，2H)，4.21(m，4H)，1.08(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ146.6(d)，133.5(d)，131.9(d)，131.6，129.5(d)，123.0(d)，68.1(d)，59.1，19.6(d)和-1.5.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ6.0.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5，6-二氯芐基醇(26h)按照上述方法，經(jīng)5，6-二氯-2-羥芐基醇(4.8g，25mmol)得到油狀26h(8.6g，73％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35(d，1H)，7.04(dd，1H)，4.76(s，2H)，4.22(m，4H)，1.08(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ147.6(d)，134.7，133.5(d)，130.6(d)，129.9，120.8(d)，68.1(d)，57.3，19.6(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ6.4.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-3-甲芐基醇(26i)按照上述方法，經(jīng)2-羥基-3-甲芐基醇(2.0g，14mmol)得到油狀26i(1.7g，88％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.16(m，1H)，7.0-6.9(m，2H)，4.48(s，2H)，4.13(m，4H)，2.22(s，3H)，0.97(m，4H)和-0.09(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ146.9(d)，133.5(d)，131.0，130.4(d)，129.4，125.6(d)，67.6(d)，60.1，19.5(d)，16.8和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ6.9.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4-氯代芐基醇(26j)按照上述方法，經(jīng)4-氯代-2-羥芐基醇(4.2g，26mmol)，得到油狀26j(9.6g，84％)Rf(4∶1v/v乙酸乙酯-己烷)0.67.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.27(d，1H)，7.2-7.1(m，2H)，4.55(s，2H)，4.21(m，4H)，1.07(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.5(d)，133.9，131.7(d)，131.5，126.0，121.4(d)，67.9(d)，59.4，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.8.
2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4-甲氧芐醇(26k)按照上述方法，經(jīng)2-羥基-4-甲氧芐基醇(2.7g，17mmol)，得到油狀26k(2.5g，33％)Rf(4∶1v/v乙酸乙酯-己烷)0.70.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29(d，1H)，6.8-6.7(m，2H)，4.53(s，2H)，4.22(m，4H)，3.75(s，3H)，1.09(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ160.1(d)，149.1(d)，131.9，125.3(d)，111.2，107.3(d)，67.6(d)，59.7，55.5，19.6(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ6.4.
實施例6-10 3-AP前藥(25，30a-k)的通用制備方法實施例6制備(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(TMSE-膦酰氧基)芐酯(22，27a-k)(Curtius重排法)通用方法向在含有三乙胺(TEA，32mmol)的苯(100ml)中的2-苯乙烯基煙酸(20，20mmol)溶液中，加入二苯基磷酰基疊氮(32mmol)。該溶液加熱回流10分鐘，然后加入按上述方法制備的相應(yīng)TMSE保護的磷酸鹽接頭(21或26a-k，20mmol)。反應(yīng)混合物于回流下保持3小時。然后，減壓蒸發(fā)掉溶劑。殘留產(chǎn)物經(jīng)FCC(1∶4v/v乙酸乙酯-己烷)純化，得到相應(yīng)的氨基甲酸酯(22或27a-k)。
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-芐酯(22a)按照上述步驟，由2-二(2-三甲基硅烷基乙基)膦酰氧基芐醇(21a)(29.72g，0.073mol)獲得粗品氨基甲酸鹽，無需純化即可供另一反應(yīng)使用。
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-氯代芐酯(22)按照上述步驟，經(jīng)21(9.4g，21mmol)，得到油狀22(10.6g，58％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.23(d，1H)，7.92(br s，1H)，7.56(d，1H)，7.4-7.0(m，11H)，5.11(s，2H)，4.10(m，4H)，0.94(m，4H)和-0.14(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.7，151.9，147.3(d)，146.8，145.2，136.5，134.8，131.4，130.2，129.5，129.3，129.2，128.5，128.3，127.2，122.3，121.3，121.2，67.4(d)，61.6，19.4(d)和-1.7.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.1.
C31H42ClN2O6PSi2質(zhì)量計算值661.277；實測值661.2(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-氟芐基酯(27a)按照上述步驟，由26a(31.0g，73mmol)獲得粗品氨基甲酸鹽27a，無需純化可直接供另一反應(yīng)使用。
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-硝基芐基酯(27b)按照上述方法，經(jīng)26b(4.3g，9.6mmol)，得到油狀27b(2.3g，35％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.3-7.0(m，14H)，5.21(s，2H)，4.16(m，4H)，0.99(m，4H)和-0.12(m，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.5，153.2(d)，149.9，145.6，144.3，136.4，135.1，131.1，129.3，129.0(d)，128.5，128.4，127.2，124.9，124.8，122.4，120.9，120.3，68.0(d)，62.1，19.5(d)，17.1和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ4.5.
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-甲氧基芐酯(27c)按照上述方法，經(jīng)26c(6.0g，26mmol)獲得粗品氨基甲酸鹽27c，無需純化可直接供另一反應(yīng)使用。
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-氨基甲酸(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-三氟甲氧基芐酯(27d)按照上述方法，經(jīng)26d(1.9g，8.5mmol)，得到油狀27d(3.4g，83％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.39(dd，1H)，8.13(br s，1H)，7.74(d，1H)，7.60(m，2H)，7.41(dd，1H)，7.4-7.1(m，7H)，5.30(s，2H)，4.27(m，4H)，1，10(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.4，147.3(d)，145.7，145.4，136.6，135.4，131.2，129.8，129.7，129.2(d)，128.6，128.5，127.4，127.0，125.2，122.7，122.5，122.2，121.5，120.8，120.0(d)，118.6，67.6(d)，62.0，19.6(d)和-1.6。
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.3.
19F NMR(282MHz，CDCl3)δ-58.7.
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-三氟甲基芐酯(27e)按照上述方法，經(jīng)26e(5.1g，11mmol)，得到油狀27e(5.3g，71％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.40(dd，1H)，8.14(br s，1H)，7.74(d，2H)，7.6-7.5(m，4H)，7.4-7.1(m，8H)，5.29(s，2H)，4.29(m，4H)，1.11(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.4，145.4(m)，136.5，135.4，131.1，129.7，128.6，128.5，128.2，128.1，127.4，127.1(d)，122.5，120.8，120.5，120.0(d)，67.7(d)，61.9，19.6(d)和1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.0.
19F NMR(282MHz，CDCl3)δ-62.7.
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-3，5-二氯代芐酯(27f)按照上述方法，經(jīng)26f(6.3g，13mmol)，得到油狀27f(7.1g，76％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.39(dd，1H)，8.11(br s，1H)，7.74(d，1H)，7.59(br d，2H)，7.4-7.2(m，8H)，7.18(dd，2H)，5.35(s，2H)，4.29(m，4H)，1.11(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.3，145.4(d)，136.5，135.4，131.9(d)，131.1，131.0，130.2，129.8，129.7，128.7，128.6，128.3，128.0(d)，127.4，122.5，120.8，67.9(d)，62.2，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.0.
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4，5-二氯代芐酯(27g)按照上述方法，經(jīng)26g(11.3g，50mmol)，得到油狀27g(17.4g，75％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.38(dd，1H)，8.12(br s，1H)，7.74(d，1H)，7.60(dd，2H)，7.53(s，1H)，7.51(d，1H)，7.4-7.2(m，6H)，7.17(dd，2H)，5.23(s，2H)，4.27(m，4H)，1.10(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.4，147.7(d)，145.4，136.6，135.4，133.1，131.3，131.2，128.9，128.6，128.5，127.7(d)，127.4，122.5，120.8，67.8(d)，61.5，19.6(d)和-1.6.
31p NMR(121MHz，CDCl3)δ5.2.
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5，6-二氯代芐酯(27h)按照上述方法，經(jīng)26h(6.2g，28mmol)，得到油狀27h(9.6g，75％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.38(dd，1H)，8.20(br s，1H)，7.73(d，1H)，7.60(br d，2H)，7.48(d，1H)，7.4-7.2(m，7H)，7.18(dd，2H)，5.48(s，2H)，4.28(m，4H)，1.10(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.4，149.2(d)，145.2，136.5，135.4，134.7，131.3，131.0，129.8，129.4，128.6，128.5，127.4，127.3(d)，122.5，120.7，119.6(d)，67.7(d)，59.9，19.6(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.0.
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-3-甲基芐酯(27i)按照上述方法，經(jīng)26i(1.4g，6.2mmol)，得到橙油狀27i(1.5g，53％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.23(dd，1H)，7.97(br s，1H)，7.66(m，1H)，7.58(d，1H)，7.46.9(m，10H)，5.27(s，2H)，4.11(m，4H)，2.27(s，3H)，0.94(m，4H)和-0.11(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.9，147.6(d)，146.4，145.1，136.6，134.7，131.7，131.6，131.0，130.8(d)，128.5，128.4(d)，128.3，127.6，127.3，125.3，122.3，121.2，67.1(d)，62.9，19.5(d)，17.1和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.6.
C32H45N2O6PSi2質(zhì)量計算值640.859；實測值640.2(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4-氯代芐酯(27j)按照上述方法，經(jīng)26j(9.3g，21mmol)，得到油狀27j(12.6g，87％)Rf(1∶1 v/v乙酸乙酯-己烷)0.82.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.28(dd，1H)，8.15(br s，1H)，7.72(d，1H)，7.60(d，2H)，7.47.3(m，7H)，7.2-7.1(m，2H)，5.26(s，2H)，4.28(m，4H)，1.11(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.6，149.7(d)，145.2，136.6，135.3，135.1，131.4，131.3，128.6，128.5，127.4，125.9(d)，125.4，122.4，120.9(d)，120.8，67.6(d)，62.1，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.1.
(2-苯乙烯基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4-甲氧基芐酯(27k)按照上述方法，經(jīng)26k(2.8g，6.5mmol)，得到油狀27k(3.7g，86％)Rf(1∶1v/v乙酸乙酯-己烷)0.50.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.36(dd，1H)，8.18(br s，1H)，7.72(d，1H)，7.4-7.3(m，6H)，7.62(d，2H)，7.2-7.1(m，1H)，6.97(m，1H)，6.71(dd，1H)，5.24(s，2H)，4.29(m，4H)，3.80(s，3H)，1.11(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ160.5，153.9，150.0(d)，145.0，136.7，135.1，131.9，131.6，130.0，128.6，128.4，127.4，122.4，120.9，119.2(d)，110.4，67.3(d)，62.4，55.5，19.6(d)和1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.2.
實施例7制備(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-(TMSE-膦酰氧基)芐酯(23，28a-k)(臭氧分解法)通用方法將相應(yīng)的2-苯乙烯基吡啶(22或27a-k，10mmol)溶于二氯甲烷(50ml)和乙醇(40ml)中。于-50℃，用臭氧處理該淺黃色溶液，直到溶液變?yōu)闇\藍色。溶液通過氮氣吹泡30分鐘，以排出過量臭氧。然后向該溶液中加入甲硫醚(dimethyl sulfide)(5ml)，所得化合物于室溫下攪拌2小時。減壓蒸發(fā)溶劑，用FCC(1∶9v/v乙酸乙酯-己烷)純化殘留的產(chǎn)物，得到相應(yīng)的吡啶-2-醛縮(carboxaldehyde)(23或28a-k)。
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-(三甲基甲硅烷基乙基-膦酰氧基)芐酯(23a)按照上述方法，經(jīng)上述制備的粗品22a，得到油狀23a(29.81g，73％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.49(s，1H)，10.06(s，1H)，8.84(d，J＝8.36Hz，1H)，8.43(d，J＝5.36Hz，1H)，7.49-7.16(m，5H)，5.34(s，2H)，4.32-4.24(m，4H)，1.11(dd，J＝8.59Hz，6.57Hz，4H)和0.0(18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.0，153.2，149.1(d，J＝6.45Hz)，143.7，138.5，136.7，130.1，129.8，128.6(d，J＝6.68Hz)，126.3，124.9，120.0，67.2(d，J＝5.39Hz，2C)，62.5，19.5(d，J＝6.58Hz，2C)，-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.2.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-氯代芐酯(23)
按照上述方法，經(jīng)22(2.4g，3.7mmol)，得到油狀23(1.6g，72％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.38(br s，1H)，9.90(s，1H)，8.67(d，1H)，8.28(dd，1H)，7.47.3(m，2H)，7.23(dd，1H)，7.13(dd，1H)，5.14(s，2H)，4.12(m，4H)，0.97(m，4H)和-0.14(m，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.0，152.9，147.3(d)，143.7，138.3，136.7，130.1，129.6，129.5，128.6，128.5，126.2，121.3，67.4(d)，61.6，19.4(d)和-1.7.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.1.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-氟代芐酯(28a)按照上述方法，經(jīng)粗品27a(31.0g，73mmol)，得到油狀28a(26.9g，64％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.58(s，1H)，10.10(s，1H)，8.86(d，1H)，8.48(dd，1H)，7.52(m，1H)，7.4-7.3(m，1H)，7.21(dd，1H)，7.1-6.9(m，1H)，5.30(s，2H)，4.4-4.2(m，4H)，1.21.0(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.1，159.3(d)，152.9，144.5(dd)，143.7，143.5，138.4，136.8，121.4(dd)，116.2(d)，115.9(d)，67.3(d)，61.8，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.5.
19F NMR(282MHz，CDCl3)δ-59.3.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-硝基芐基酯(28b)按照上述方法，經(jīng)27b(4.2g，9.4mmol)，得到油狀28b(2.8g，50％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.42(br s，1H)，9.89(s，1H)，8.64(d，1H)，8.28(dd，1H)，8.21(d，1H)，8.05(dd，1H)，7*47(d，1H)，7.33(dd，1H)，5.21(s，2H)，4.17(m，4H)，0.98(m，4H)和-0.13(m，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.0，153.5(d)，152.7，144.3，143.9，138.1，136.8，128.6，128.3(d)，126.2，125.4，125.2，120.3，67.9(d)，61.4，19.5(d)和-1.7.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ4.5.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-甲氧基芐酯(28e)
按照上述方法，經(jīng)粗品27c(7.5g，17mmol)，得到油狀28e(9.8g，73％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.37(s，1H)，9.93(s，1H)，8.71(d，1H)，8.30(d，1H)，7.34(dd，1H)，7.19(d，1H)，6.85(d，1H)，6.70(d，1H)，5.18(s，2H)，4.2-4.0(m，4H)，3.66(s，3H)，1.1-0.9(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ196.9，156.4，153.1，143.6，142.4(d)，138.5，136.7，128.6，127.7(d)，126.2，120.9，115.1，114.3，67.1(d)，62.3，55.5，19.4(d)和-1.7.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.8.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-三氟甲氧基芐酯(28d)按照上述方法，經(jīng)27d(4.7g，6.6mmol)，得到油狀28d(3.2g，75％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.54(br s，1H)，10.06(s，1H)，8.82(d，1H)，8.44(dd，1H)，7.48(dd，1H)，7.44(dd，1H)，7.32(d，1H)，7.25(s，1H)，7.2-7.1(m，1H)，5.30(s，2H)，4.26(m，4H)，1.10(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.2，153.0，147.1(d)，145.7，143.9，138.4，136.9，129.8，128.8，128.7，126.4，122.6，122.2，121.3，120.0，119.9，67.6(d)，61.8，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.3.
19F NMR(282MHz，CDCl3)δ-58.8.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-三氟甲基芐酯(28e)按照上述方法，經(jīng)27e(12.2g，18mmol)，得到油狀28e(6.9g，63％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.54(br s，1H)，10.06(d，1H)，8.82(br d，1H)，8.44(dd，1H)，7.72(br s，1H)，7.6-7.5(m，2H)，7.48(dd，1H)，7.3-7.1(m，2H)，5.33(s，2H)，4.27(m，4H)，1.10(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.1，153.0，151.5(d)，143.9，138.4，136.9，129.8，129.7，128.7，127.7，127.6，127.3(d)，127.1，127.0，126.4，126.3，125.2，120.3(d)，120.0(d)，67.7(d)，61.8，19.6(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ4.9.
19F NMR(282MHz，CDCl3)δ-62.7.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-3，5-二氯代芐酯(28f)按照上述方法，經(jīng)27f(8.0g，12mmol)，得到油狀28f(5.1g，71％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.54(br s，1H)，10.05(s，1H)，8.79(d，1H)，8.42(dd，1H)，7.46(dd，1H)，7.35(dd，2H)，7.24(s，1H)，5.38(s，2H)，4.27(m，4H)，1.12(m，4H)和0.0(m，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.2，152.8，149.9，143.9，143.6(d)，138.4，136.8，131.8(d)，131.0(d)，130.1，128.7，128.0(d)，127.8(d)，126.3，120.0(d)，67.8(d)，62.0，19.6(d)和1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.1.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4，5-二氯代芐酯(28g)按照上述方法，經(jīng)27g(17.4g，25mmol)，得到油狀28g(13.4g，86％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.51(br s，1H)，10.05(s，1H)，8.79(d，1H)，8.42(dd，1H)，7.53(dd，1H)，7.5-7.4(m，1H)，7.24(s，1H)，6.96(dd，1H)，5.23(s，2H)，4.28(m，4H)，1.10(m，4H)和0.0(m，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.2，152.9，147.4(d)，144.0，138.3，136.9，133.1，131.0，128.8(d)，128.7，127.2(d)，126.3，122.2，122.0，67.8(d)，61.3，19.6(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.1.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5，6-二氯代芐酯(28h)按照上述方法，經(jīng)27h(9.5g，14mmol)，得到油狀28h(6.5g，77％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.44(br s，1H)，10.05(s，1H)，8.86(d，1H)，8.44(dd，1H)，7.50(d，1H)，7.47(d，1H)，7.41(d，1H)，7.38(m，1H)，5.46(s，2H)，4.25(m，4H)，1.10(m，4H)和0.0(m，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.0，153.0，149.9，149.2(d)，143.8，138.5，136.8，135.0，131.2，129.8，129.6，128.7，126.6(d)，126.3，119.5(d)，67.7(d)，59.9，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ4.9.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-3-甲基芐酯(28i)按照上述步驟，經(jīng)27i(1.5g，2.2mmol)，得到28i(1.1g，86％)油狀1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.35(br s，1H)，9.92(s，1H)，8.71(d，1H)，8.28(dd，1H)，7.32(dd，1H)，7.16(d，1H)，7.05(d，1H)，6.96(dd，1H)，5.3.1(s，2H)，4.12(m，4H)，2.28(s，3H)，0.97(m，4H)和-0.12(m，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ196.9，153.2，147.2(d)，143.6，138.6，136.6，131.6，130.9(d)，128.6，128.0(d)，127.4，126.2，125.3，67.1(d)，62.9，19.4(d)，17.0和-1.7.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.8.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4-氯代芐酯(28j)按照上述方法，經(jīng)27j(12.2g，19mmol)，得到油狀28j(8.9g，80％)Rf(1∶1v/v乙酸乙酯-己烷)0.66.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.49(br s，1H)，10.04(s，1H)，8.80(d，1H)，8.42(dd，1H)，7.5-7.4(m，3H)，7.16(dd，1H)，5.26(s，2H)，4.27(m，4H)，1.11(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.1，153.1，149.3(d)，143.8，138.5，136.8，135.0，131.0，128.7，126.3，125.3(d)，125.2，120.5(d)，67.5(d)，61.9，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.0.
(2-甲酰吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4-甲氧基芐酯(28k)按照上述方法，經(jīng)27k(5.1g，8.0mmol)，得到油狀28k(2.7g，58％)Rf(1∶1v/v乙酸乙酯-己烷)0.44.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.50(br s，1H)，10.05(s，1H)，8.84(d，1H)，8.42(dd，1H)，7.46(dd，1H)，7.36(dd，1H)，7.01(s，1H)，6.71(dd，1H)，5.24(s，2H)，4.27(m，4H)，3.80(s，3H)，1.10(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ197.0，160.9，153.4，150.2(d)，143.6，138.7，136.7，131.7，128.7，126.3，118.5(d)，110.6，106.1(d)，67.3(d)，62.4，55.5，19.5(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，CDCl3)δ5.0.
實施例8制備吡啶-2-醛縮氨基硫脲(pyridine-2-carboxaldehyde thiosemicarbazone)(24，29a-k)通用方法將相應(yīng)的吡啶-2-甲醛(23、23a或28a-k，10mmol)溶于乙醇-水(2∶1v/v，150ml)中。向溶液中加入氨基硫脲(11mmol)。溶液于環(huán)境溫度下攪拌30分鐘。加入水(50ml)后，反應(yīng)混合物強烈攪拌2小時。過濾收集黃色沉淀，用乙醇-水(1∶4v/v)洗滌，并真空干燥，得到相應(yīng)的吡啶-2-醛縮氨基硫脲(24，24a，29a-k)。
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基硅甲烷基乙基)膦酰氧基-5-氯代芐基酯(24)(2-Thiosemicarbazono methylpyridin-3-yl)carbamic acid 2-bis(2-trimethylsilyl ethyl)phosphonooxy-5-chloro benzylester)按照上述方法，經(jīng)23(6.9g，12mmol)，得到黃色固體24(4.9g，63％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.77(br s，1H)，10.03(br s，1H)，8.40(dd，1H)，8.28(br s，1H)，8.26(s，1H)，7.94(br s，1H)，7.5-7.4(m，4H)，5.20(s，2H)，4.06(m，4H)，0.98(m，4H)和-0.03(m，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ178.5，153.4，148.0(d)，144.2，142.9，141.0，133.9，129.5(d)，128.9，128.4，128.0，124.4，121.6，65.1(d)，61.2，18.9(d)和-1.5.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ9.8.
對于C25H39ClN5O6PSSi2質(zhì)量計算值660.267；實測值660.
2(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基芐酯(24a)
按照上述方法，經(jīng)23a(29.74g，0.54mol)，得到黃色固體24a(33.67g，90％))1H NMR(DMSO-d6，300MHz)d11.76(s，1H)，10.04(s，1H)，8.38(d，J＝4.32Hz，1H)，8.29(s，2H)，7.86-7.26(m，5H)，5.27(s，2H)，4.264.18(m，4H)，1.05(dd，J＝9.08Hz，7.64Hz，4H)，0.0(s，18H)；13C NMR(DMSO-d6，75MHz)d178.9，153.3，148.0(d，J＝6.42Hz)，144.6，144.3，140.6，133.9，129.5，127.2(d，J＝5.54Hz)，125.2，124.1，119.8(d，J＝4.32Hz)，119.6，66.7(d，J＝7.8Hz，2C)，61.3，18.9(d，J＝6.5Hz，2C)，-1.6；31P NMR(DMSO-d6，121MHz)d9.7。
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基硅烷基乙基)膦酰氧基-5-氟代芐基酯(29a)按照上述方法，經(jīng)28a(14.3g，25mmol)，得到黃色固體29a(12.9g，80％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.85(s，1H)，10.13(s，1H)，8.45(d，1H)，8.26(s，1H)，7.5-7.1(m，5H)，5.21(s，2H)，4.2-4.0(m，4H)，1.0-0.9(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ178.6，159.8，156.0，153.4，145.1(d)，143.5，141.5，140.4，134.2，129.5，124.5，121.4(d)，115.5，64.4(d)，61.3，18.9(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ10.5.
19F NMR(282MHz，DMSO-d6)δ-62.5.
C25H39FNSO6PSSi2質(zhì)量計算值643.813實測值644.2(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-硝基芐基酯(29b)按照上述方法，經(jīng)28b(1.6g，2.7mmol)，得到黃色固體29b(1.3g，77％)1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.86(br s，1H)，10.14(br s，1H)，8.4-8.2(m，4H)，7.87(br s，2H)，7.64(m，1H)，7.52(m，1H)，5.26(s，2H)，4.05(m，4H)，0.97(m，4H)和-0.03(m，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ178.6，155.3(d)，153.4，143.7，142.7，140.7，134.1，128.1(d)，125.2，124.6，124.5，120.1，64.8(d)，61.2，18.9(d)和-1.5.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ9.2.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-甲氧芐基酯(29c)按照上述方法，經(jīng)28c(5.0g，8.8mmol)，得到黃色固體29c(4.4g，77％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.85(s，1H)，10.08(s，1H)，8.41(d，1H)，8.35(d，1H)，8.30(s，1H)，8.03(s，2H)，7.51(dd，1H)，7.26(d，1H)，7.01(d，1H)，6.90(dd，1H)，5.26(s，2H)，4.2-4.0(m，4H)，3.75(s，3H)，1.1-0.11(m，4H)和0.0(s，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ178.7，155.7，153.6，143.9，142.6(d)，134.2，129.4，128.4(d)，124.5，121.1，114.1，113.9，64.9(d)，61.9，55.6，19.1(d)和-1.4.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ10.3.
C26H42NSO7PSSi2質(zhì)量計算值655.848；實測值656.2(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-三氟甲氧芐酯(29d)按照上述方法，經(jīng)28d(2.5g，3.9mmol)，得到黃色固體29d(1.9g，68％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.81(s，1H)，10.04(br s，1H)，8.42(d，1H)，8.26(s，1H)，7.95(br s，1H)，7.5-7.2(m，4H)，5.24(s，2H)，4.07(m，4H)，0.96(m，4H)和-0.04(m，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ178.4，153.4，147.8(d)，144.1，144.0，133.9，129.4(d)，124.4，121.9，121.7，121.6，121.4，118.3，65.1(d)，61.2，18.9(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ9.8.
19F NMR(282MHz，DMSO-d6)δ-53.0.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5-三氟甲基芐酯(29e)按照上述方法，經(jīng)28e(5.3g，8.5mmol)，得到黃色固體29e(3.6g，61％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.81(s，1H)，10.03(br s，1H)，8.42(d，1H)，8.4-8.3(m，2H)，8.26(s，1H)，7.89(br s，1H)，7.79(s，1H)，7.75(d，2H)，7.56(d，2H)，7.49(dd，1H)，5.27(s，2H)，4.06(m，4H)，0.97(m，4H)和-0.04(m，18H)。
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ9.5.
19F NMR(282MHz，DMSO-d6)δ-56.2.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-3，5-二氯芐酯(29f)按照上述方法，經(jīng)28f(4.8g，7.7mmol)，得到黃色固體29f(4.6g，85％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.75(s，1H)，10.04(s，1H)，8.39(d，1H)，8.30(d，1H)，8.26(s，1H)，7.91(br s，1H)，7.69(dd，1H)，7.50(d，1H)，7.43(dd，1H)，5.29(s，2H)，4.24(m，4H)，1.03(m，4H)和-0.01(m，18H)。
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ10.3.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4，5-二氯芐酯(29g)按照上述方法，經(jīng)28g(2.0g，3.2mmol)，得到黃色固體29g(1.5g，70％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.85(s，1H)，10.08(s，1H)，8.42(d，1H)，8.31(d，1H)，8.26(s，1H)，7.89(m，1H)，7.70(s，1H)，7.59(s，1H)，7.5-7.2(m，2H)，5.18(s，2H)，4.02(m，4H)，0.95(m，4H)和0.0(m，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ178.6，153.3，148.8，143.8，142.4，140.6，134.0，130.8，130.2(d)，129.5，128.3(d)，125.8(d)，124.4，121.5，119.9，64.9(d)，60.8，18.9(d)和-1.5.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ9.7.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-5，6-二氯芐酯(29h)按照上述方法，經(jīng)28h(5.9g，9.5mmol)，得到黃色固體29h(3.6g，55％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.82(s，1H)，9.97(br s，1H)，8.50(m，1H)，8.41(d，1H)，8.27(d，1H)，8.23(s，1H)，7.72(m，1H)，7.67(d，1H)，7.48(m，1H)，7.41(d，1H)，7.3-7.1(m，1H)，5.32(s，2H)，4.03(m，4H)，0.96(m，4H)和-0.06(m，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ178.3，153.3，150.6(d)，143.8，140.8，134.0，133.8，133.3，131.2，130.3，129.4，126.7(d)，124.4，120.1，119.9(d)，64.8(d)，59.4，18.9(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ9.6.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-3-甲芐基酯(29i)按照上述方法，經(jīng)28i(1.1g，1.9mmol)，得到黃色固體29i(0.7g，57％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.76(br s，1H)，9.99(br s，1H)，8.42(br s，1H)，8.37(m，1H)，8.27(br s，1H)，8.24(m，1H)，8.03(br s，1H)，7.45(dd，1H)，7.25(d，1H)，7.19(d，1H)，7.11(dd，1H)，5.30(s，2H)，4.08(m，4H)，2.29(s，3H)，1.01(m，4H)和-0.03(m，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ178.7，153.8，147.5(d)，144.4，143.2，141.2，134.3，131.1，130.7(d)，128.9(d)，126.4，124.9，124.6，65.4(d)，62.4，19.2(d)，16.9和-1.4.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ10.4.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4-氯代芐基酯(29j)按照上述方法，經(jīng)28j(10.5g，18.5mmol)，得到黃色固體29j(11.8g，97％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.74(s，1H)，10.05(br s，1H)，8.4-8.3(m，3H)，7.85(br s，1H)，7.56(d，1H)，7.5-7.4(m，3H)，5.21(s，2H)，4.22(m，4H)，1.04(m，4H)和-0.01(s，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ153.2，148.5，148.4，144.8，144.5，133.8，133.0，130.8，126.5，126.4，125.4，124.1，119.7，67.2(d)，60.8，18.9(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ9.5.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-二(2-三甲基甲硅烷基乙基)膦酰氧基-4-甲氧芐基(29k)按照上述方法，經(jīng)28k(2.6g，4.5mmol)，得到黃色固體29k(2.7g，91％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.74(d，1H)，9.98(br s，1H)，8.4-8.3(m，3H)，7.82(br s，1H)，7.44(m，1H)，6.87(m，3H)，5.16(s，2H)，4.19(m，4H)，3.77(s，3H)，1.03(m，4H)和0.01(s，18H)。
13C NMR(75MHz，DMSO-d6)178.4，160.0，153.2，150.2，148.4，144.8，144.5，133.8，133.0，130.8，124.1，119.0，110.4，106.0，66.8(d)，61.4，55.3，18.9(d)和-1.6.
31P NMR(121MHz，DMSO-d6)δ9.6.
實施例9制備游離的膦酸(6-17)通用方法于0℃，向在二氯甲烷(300-500ml)的相應(yīng)TMSE-保護的磷酸鹽(24、24a或29a-k，10mmol)溶液中加入三氟乙酸(TFA，20-50ml)。反應(yīng)混合物在冰浴中強烈攪拌2小時。過濾收集沉淀，用冷的二氯甲烷洗滌，然后真空干燥。通常蒸發(fā)掉溶劑，然后將所得殘余混合物真空干燥。所得的相應(yīng)游離膦酸(6-17和6a未示出)為黃色固體或玻璃狀固體。
實施例10制備膦酸的二鈉鹽(25，30a-k)通用方法用飽和的碳酸氫鈉(NaHCO3)水性溶液(50-100ml)，中和相應(yīng)的游離膦酸(6-17，10mmol)。懸浮液于環(huán)境溫度下攪拌2小時，然后加入最低量的水，使其均質(zhì)。水溶液用反相柱色譜法(采用去離子水洗脫)純化。用31P NMR監(jiān)測流分，合并流分。經(jīng)低壓升華干燥后，獲得相應(yīng)的二鈉鹽(25或30a-k)，為一淺黃色粉末。
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-5-氯代芐酯(25)按照上述方法，經(jīng)24(1.1g，1.7mmol)，得到淺黃色粉末25(0.4g，49％)1H NMR(300MHz，D2O)δ7.94(br s，2H)，7.72(s，1H)，7.2-7.0(m，3H)和4.98(s，2H)。
13C NMR(75MHz，D2O)δ179.6，157.0，153.2，147.2(d)，145.2，136.8，131.4，130.5，128.8，127.8，123.6和65.4.
31P NMR(121MHz，D2O)δ14.3.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-5-氟代芐酯(30a)按照上述方法，由29a(10.5g，16mmol)得到7(6.2g，86％)，經(jīng)NaHCO3處理得到淺黃色粉末30a(4.0g，59％)1H NMR(300MHz，D2O)δ8.2(br s，1H)，7.8(br m，1H)，7.57(br s，1H)，7.15(m，1H)，6.93(m，1H)，6.81(m，1H)，6.78(m，1H)和4.93(s，2H)。
13C NMR(75MHz，D2O)δ179.4，161.5，158.4，156.5，150.3，147.3，146.5，136.7，130.8，130.4，127.7，123.5，117.5，117.2和65.2.
31P NMR(121MHz，D2O)δ14.5.
19F NMR(282MHz，D2O)δ-57.4.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-5)-硝基芐酯(30b)按照上述方法，經(jīng)29b(2.1g，3.0mmol)，得到暗黃色粉末30b(1.0g，73％)1H NMR(300MHz，D2O)δ8.0-7.8(m，4H)，7.40(m，1H)，7.17(m，1H)和5.06(s，2H)。
31P NMR(121MHz，D2O)δ13.8.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-5-(甲氧基芐酯(30c)按照上述方法，經(jīng)29c(4.3g，16mmol)，得到9(2.9g，98％)，經(jīng)NHCO3處理得到30c(1.6g，43％)淺黃色粉末1H NMR(300MHz，D2O)δ7.96(br s，1H)，7.70(br s，1H)，7.21(br s，1H)，7.08(br s，1H)，6.73(s，2H)，5.05(s，2H)和3.65(s，3H)。
13C NMR(75MHz，D2O)δ174.5，151.8，151.1，143.4，142.1，141.7，135.9，131.6，126.4，124.9，122.6，118.4，111.7，60.8和53.2.
31P NMR(121MHz，D2O)δ14.6.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-5-三氟甲氧基芐酯(30d)按照上述方法，經(jīng)29d(1.9g，2.6mmol)，得到淺黃色粉末30d(0.5g，31％)1H NMR(300MHz，D2O)δ7.93(br s，1H)，7.86(br d，1H)，7.71(s，1H)，7.25(d，1H)，7.02(m，4H)和5.01(s，2H)。
13C NMR(75MHz，D2O)δ179.5，173.5，157.1，153.3，147.1，146.8，145.5，141.2(m)，136.5，132.4(m)，130.2(d)，127.7(d)，124.5，124.0，123.1，122.6，121.0-65.4.
31P NMR(121MHz，D2O)δ14.3.
19F NMR(282MHz，D2O)δ-56.3.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-5-三氟甲基芐酯(30e)按照上述方法，經(jīng)29e(3.6g，5.2mmol)，得到淺黃色粉末30e(1.3g，45％)1H NMR(300MHz，D2O)δ7.98(br s，1H)，7.89(d，1H)，7.77(s，1H)，7.4-7.3(m，3H)，7.08(m，1H)和5.04(s，2H)。
31p NMR(121MHz，D2O)δ14.0.
19F NMR(282MHz，D2O)δ-59.4.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-3，5-二氯代芐酯(30f)按照上述方法，經(jīng)29f(4.5g，6.5mmol)，得到淺黃色粉末30f(0.8g，24％)1H NMR(300MHz，D2O)δ8.31(br s，1H)，7.88(br d，2H)，7.6-7.5(m，2H)，7.2-6.8(m，5H)和5.07(s，2H)。
13C NMR(75MHz，D2O)δ179.6，156.6(d)，149.4(d)，147.4，146.8(d)，136.6，134.2，131.5，131.1，130.7(d)，130.1，128.5，127.7(d)和65.6.
31P NMR(121MHz，D2O)δ14.4.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-4，5-二氯代芐酯(30g)按照上述方法，經(jīng)29g(2.5g，3.0mmol)，得到淺黃色粉末30g(0.4g，23％)1H NMR(300MHz，D2O)δ8.07(s，1H)，7.99(m，1H)，7.85(s，1H)，7.39(s，1H)，7.19(m，2H)和4.99(s，2H)。
31p NMR(121MHz，D2O)δ14.3.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-5，6-二氯代芐酯(30h)按照上述方法，經(jīng)29h(4.6g，6.6mmol)，得到淺黃色粉末30h(2.3g，64％)1H NMR(300MHz，D2O)δ8.01(s，1H)，7.91(br s，1H)，7.73(s，1H)，7.23(dd，2H)，7.12(m，1H)和5.18(s，2H)。
31P NMR(121MHz，D2O)δ14.2.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-3-甲基芐酯(30i)按照上述方法，經(jīng)29i(1.2g，1.8mmol)，得到黃色粉末30i(0.5g，57％)1H NMR(300MHz，D2O)δ8.11(br s，2H)，7.91(m，2H)，7.71(m，1H)，7.00(m，2H)，6.84(m，1H)，5.22(s，2H)和2.14(s，3H)。
13C NMR(75MHz，D2O)δ146.1，134.6，133.6，131.1，128.8，127.9，125.7，66.6和19.1.
31P NMR(121MHz，D2O)δ14.2.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-4-氯代芐酯(30j)按照上述步驟，經(jīng)29j(4.2g，6.6mmol)，得到淺黃色粉末30j(1.6g，48％)1H NMR(300MHz，D2O)δ7.98(s，1H)，7.90(m，1H)，7.74(s，1H)，7.31(s，1H)，7.09(m，3H)，6.85(m，1H)和5.00(s，2H)。
13C NMR(75MHz，D2O)δ180.0，157.7，155.9，147.6，147.4，142.3，137.1，136.8，133.2，132.9，128.3，127.9，124.9和65.9.
31P NMR(121MHz，D2O)δ14.3.
(2-醛縮氨基硫脲甲基吡啶-3-基)氨基甲酸2-(膦酰氧基二鈉)-4-甲氧基芐酯(30k)按照上述步驟，經(jīng)29k(2.9g，4.4mmol)，得到淡黃色粉末30k(1.2g，54％)1H NMR(300MHz，D2O)δ8.06(s，1H)，7.94(s，1H)，7.64(s，1H)，7.13(m，1H)，7.0-6.8(m，3H)，6.43(m，1H)，4.06(s，2H)和3.58(s，3H)。
13C NMR(75MHz，D2O)δ161.5，161.3，155.1，133.1，127.3，127.0，111.4，108.3和57.9.
31P NMR(121MHz，D2O)δ14.3.
生物檢驗/數(shù)據(jù)前藥經(jīng)堿性磷酸酶催化生物轉(zhuǎn)化為3-AP采用4.65×10-5單位的磷酸酶酶溶液(VII-SA型，來自Bovine IntestinalMucose，Sigma公司)，研究了二甲基對位前藥和磷酸鹽前藥亞型的生物活化。在與磷酸酶保溫的過程中，所有前藥均轉(zhuǎn)化為母體藥物3-AP。在此實驗條件之下，對鄰位磷酸鹽前藥進行的生物活化并未提高其半衰期(T/2)(與未取代的鄰位前藥相比)(下表1)。將前藥置于人血清中37℃保溫，進行其人血清穩(wěn)定性研究。該研究表明，4-氯代磷酸鹽前藥16是一種緩慢釋放的前藥，其半衰期是鄰位前藥的1.5倍。
表13-AP磷酸鹽前藥的酶促生物轉(zhuǎn)化和血清穩(wěn)定性
對含鄰位磷酸鹽3-AP前藥的體內(nèi)PK研究向Beagle靜脈內(nèi)犬施用單一劑量為7.2-8.5mg/kg的3-AP磷酸鹽前藥(相當于3mg/kg的3-AP)，以表征3-AP前藥的藥動學(xué)特征。每一前藥每周施用一次。每一劑量后，在施用下一劑量之前，要維持至少6天的洗凈期(washout period)。用HPLC測定3-AP(Triapine)和前藥在血清中的濃度，由此計算各種的PK參數(shù)。將這些PK參數(shù)與來自另一獨立研究的3-AP(等克分子劑量)參數(shù)比較。采用隔室和非隔室模型，分析隨時間變化的平均血藥濃度數(shù)據(jù)。計算3-AP和前藥的AUC、總體清除率(Cl)、穩(wěn)態(tài)分布容積(Vdss)、終期半衰期(T1/2)Cmax和Tmax。
等克分子劑量前藥的藥動學(xué)參數(shù)如下表2所示。當體外與堿性磷酸酶保溫時，鄰位磷酸鹽前藥表現(xiàn)為過早地快速生物轉(zhuǎn)化成3-AP。然而，這種轉(zhuǎn)化在體內(nèi)卻相當遲緩，這表明堿性磷酸酶體內(nèi)對藥物的作用(off-rate)被延遲。始終未檢驗到中間體酚(即預(yù)期的分裂產(chǎn)物)。與3-AP在犬中的半衰期(約1.5小時)相比，部分鄰位前藥的血清半衰期相對延長，這相當于TriapineTM(3-AP)在人體內(nèi)的半衰期。4-氯代(16)、5-甲氧基(9)和5-氟代(7)類似物的AUCs和半衰期也預(yù)示這一點。
表2含鄰位磷酸鹽3-AP前藥在犬體內(nèi)的PK值
經(jīng)i.V.施用等克分子劑量前藥后3-AP的藥動學(xué)參數(shù)如下表3所示。研究結(jié)果證實，前藥鄰位(3)、5-氟代(7)和4-氯代(16)延長了母體3-AP的釋放，這使3-AP在血清的持續(xù)濃度相當于研究中的另一前藥。這些化合物在水溶液中表現(xiàn)出提高的穩(wěn)定性。
表33-AP在犬體內(nèi)的PK值
最初，對均為7.5-7.7mg/kg(相當于3mg/kg的Triapine)的單一劑量的兩種前藥進行研究。在該結(jié)果的基礎(chǔ)上，又對5-氟代-前藥(20、40和80mg/kg)和4-氯代前藥(20和30mg/kg)進行了提高劑量的藥動學(xué)和毒物動力學(xué)研究。
Triapine和前藥的PK參數(shù)見表4和5，并與施用3mg/kg Triapine(相當于約7.5mg/kg前藥)的獨立研究結(jié)果進行比較。與用Triapine處理的犬相比，接受4-氯代和5-氟代前藥(等克分子劑量)的犬表現(xiàn)出提高的Triapine接觸時間(以AUC表示)。逐步提高劑量的研究表明，Triapine的血藥濃度峰值和AUCs與前藥劑量線性相關(guān)。
表4.Triapine磷酸鹽前藥在犬體內(nèi)的比較藥動學(xué)
表5.Triapine磷酸鹽前藥在犬體內(nèi)的比較藥動學(xué)
另一方面，前藥的血清濃度峰值和AUCs不與劑量呈線性相關(guān)，并且在所研究的劑量似乎呈飽和狀態(tài)。前藥的血藥濃度-時間曲線見附圖4和5。這些數(shù)據(jù)表明，在大于或等于20mg/kg的IV劑量水平時，兩種前藥均表現(xiàn)出向母體Triapine的生物轉(zhuǎn)化延長，1μM(0.2μg/ml)以上的水平可維持24小時。持續(xù)的血清Triapine水平可能是由于較高的前藥血清水平及其較低的總體清除率。4-氯代前藥的Triapine的藥動學(xué)如附圖6所示。在24小時時可觀察到較高的Triapine血液水平(＞1μM)，犬對該劑量水平的耐受性較好。
臨床觀察接受4-氯代-前藥的犬，未出現(xiàn)早期死亡。記錄犬的與處理相關(guān)的臨床觀察。在第2和3天(第1天＝給藥當天)，用20mg/kg處理的雄性犬出現(xiàn)稀糞。在給藥后1天，一只用40mg/kg處理雌性犬表現(xiàn)出嘔吐、腹瀉、大便中有黃色粘液、活動降低和發(fā)紺(口呈灰色)。第2天未觀察到上述現(xiàn)象。在第2天，唯一的不利臨床征象是沒有大便。用30mg/kg處理的雄性犬的臨床征象與用40mg/kg處理的雌性犬相似。因此，確定4-氯代-前藥的MTD在30-40mg/kg之間。
接受5-氟代-前藥的犬，未出現(xiàn)早期死亡。用20(雌性)和40mg/kg(雄性)處理的犬未觀察到不利征象。記錄80mg/kg處理的雌性的治療相關(guān)的臨床觀察。該雌性犬在輸注期間和輸注后出現(xiàn)嘔吐。另外，可觀察到所述犬出現(xiàn)失色(皮膚蒼白)、腹瀉和在大便中有黃色粘液。所有上述觀察均發(fā)生于第1天，第2天即恢復(fù)?；谶@些結(jié)果，確定5-氯代-前藥的MTD為80mg/kg。
值得注意的是，在MTDs水平(4-氯代前藥為30mg/kg，和5-氟代前藥為80mg/kg)時，兩種前藥均達到了Triapine的血藥水平峰值(約32μg/ml)，這表明在犬中觀察到的毒性是由于Triapine所致，而非前藥本身所致。
體內(nèi)抗腫瘤效力采用M109鼠肺癌模型，在Balb/c小鼠中對十二(12)3-AP前藥的效力和毒性進行了評價。實驗方法如下8周齡雌性Balb/c小鼠(約20g)，于0天在右側(cè)肋皮下注射5×105/鼠M109鼠肺癌細胞。然后將小鼠隨機分組，每組包括8-10只小鼠。按照表6所示的時間表，于第3或5天開始處理。3-AP與TriapineTM制劑一起使用，其中所有3-AP前藥溶解或混懸于無菌去離子水中。小鼠的體重和腫瘤體積每周測量兩次，直到對照組中的腫瘤壞死或者對照組中的至少一個動物死亡為止。
所得結(jié)果見下表6。根據(jù)這些藥物的穩(wěn)定性藥動學(xué)和活性，很明顯的是5-氟代和4-氯代類似物(分別為7和16)表現(xiàn)出作為抗癌劑的最大活性。另外，5-三氟甲氧基衍生物(10)、4，5-二氯代衍生物(13)和5，6-二氯代衍生物(14)也表現(xiàn)出出人意料優(yōu)良的活性。
表6在M109肺癌模型的活性
CTX＝環(huán)磷酰胺通常，可以高于3-AP的MTDs 8倍(克分子水平)的劑量施用3-AP的前藥。這些藥物也可按每1-5天/周(QD1-5)的方案持續(xù)施用一段時間，期間小鼠未出現(xiàn)過高死亡率。與MTD水平的3-AP母體相比，用化合物3、6、7、9、10-16處理M109肺癌取得了較好的效力。隨后按照附圖7c所示的時間表，用前藥7和16對M109肺癌進行了研究，結(jié)果表明它們可明顯有效地抗M109肺癌。在小鼠中，也就這些藥物(前藥7和16)對其它癌細胞系例如HTB人肺癌、B16-F10黑素瘤、DLD-1結(jié)腸癌的作用進行了試驗，結(jié)果表明它們的效力顯著高于環(huán)磷酰胺(參見圖7D、E和F)。
對5-氯代(6)、5-氟代(7)和4-氯代(16)和類似物進行了進一步研究(例如最適劑量和劑量方案、不同的給藥途徑以及與化學(xué)療法的聯(lián)用)。這些實驗的結(jié)果見附圖(附圖4-10)。可很方便地由附圖得出結(jié)果，這些結(jié)果表明本發(fā)明前藥可較好地與DNA損傷劑環(huán)磷酰胺和絲裂霉素C聯(lián)用(附圖8A-D和9A-C)。同樣地，本發(fā)明化合物也可與依托泊苷(圖9D)和順氯氨鉑聯(lián)用而更有效地對抗人結(jié)腸癌和人Lovo結(jié)腸癌(附圖10A和B)。
3-AP前藥對Balb/c小鼠中M109肺癌的效力材料M109肺癌細胞；BALB/c小鼠(雌性，9周齡，18-20g)；環(huán)磷酰胺(Sigma)；3-AP前藥(鄰位3-AP前藥(3)，5-甲氧基3-AP前藥(9)，5-氯代3-AP前藥(6)，4-氯3-AP前藥(16)和5-氟3-AP前藥(7)。
110Balb/c鼠隨機地分成12組組別小鼠1.載體，0.2ml，Qd(5-9天；12-16；19-23)102.200mpk環(huán)磷酰胺，I.P.，l/w 103.48mpk鄰位3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天；12-16；19-23)104.60mpk鄰位3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天；12-16；19-23)105.48mpk 5-甲氧基3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天；12-16；19-23) 106.55mpk 5-甲氧基3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天；12-16；19-23) 107.48mpk 5-氯3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天)；12-16；19-23) 108.60mpk 5-氯3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天)；12-16；19-23) 109.48mpk 4-氯3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天)；12-16；19-23) 1010.60mpk 4-氯3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天)；12-16；19-23) 1011.48mpk 5-氟3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天)；12-16；19-23) 712.48mpk 4-氟3-AP前藥，I.P.，Qd(5-9天)；12-16；19-23) 8(注W/周；I.P./腹膜內(nèi)注射；Qd/每天)配制3-AP前藥在注射以前，將前藥溶于去離子無菌水中，配制每種3-AP前藥的貯備液(10.0mg/ml)。用水進一步稀釋3-AP前藥貯備液，配制以下每種前藥。試管貯備液水 前藥濃度 體積1. 1.8ml 1.2ml 6.0mg/ml 3ml2. 1.65ml 1.35ml 5.5mg/ml(甲氧基3-AP) 3ml3. 1.44ml 1.56ml 4.8mg/ml 3ml
經(jīng)胰蛋白酶處理收集對數(shù)生長期的M109細胞，用PBS洗滌，重建成2.5×106細胞/ml PBS。于0天，經(jīng)于右側(cè)肋皮下經(jīng)植入M109懸浮液(0.2ml，5×105細胞/鼠)。小鼠按上述隨機再分組。按照上述時間表，于第5天開始藥物處理。小鼠置于干凈的恒溫實驗室中。飼養(yǎng)鋪墊至少每周換兩次。為小鼠提供充足的生物和飲用水。飲用水用前熱壓處理。由于對小鼠的嚴重毒性反應(yīng)或死亡，在實驗結(jié)束前停止用鄰位磷酸鹽3-AP前藥(3)和5-甲氧基3-AP前藥(9)處理。在實驗結(jié)束之前每周兩次測定體重和腫瘤。每日觀察小鼠的死亡率和外表。
附圖7A、7B和7C表示5-氟3-AP前藥(7)和4-氯3-AP前藥(16)相對于200mpk環(huán)磷酰胺的效力(與對照比較)。3-AP前藥表現(xiàn)出相當于環(huán)磷酰胺的優(yōu)良的縮小腫瘤的效力，而沒有出現(xiàn)死亡。
3-AP前藥/環(huán)磷酰胺聯(lián)合化學(xué)療法對Balb/c小鼠M109肺癌的效力材料M109肺癌細胞；BALB/c小鼠(雌性，9周齡，19-21g)；環(huán)磷酰胺(Sigma公司)；絲裂霉素C；4-氯3-AP前藥(16)和5-氟3-AP前藥(7)。
120Balb/c小鼠隨機地分成15組，每組包括8只小鼠。組別小鼠1.載體0.2ml，Qd(3-7天；10-14) 82.200mpk環(huán)磷酰胺，I.P.，1/W×3(于第3天開始)83.3mpk絲裂霉素C，I.V.，Qd(3和17天) 84.45mpk 5-氯3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+100mpk環(huán)磷 8酰胺，I.P.，1/W(于第4天開始)5.45mpk 5-氯3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+150mpk環(huán)磷 8酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)6.45mpk 5-氯3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+200mpk環(huán)磷 8酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)7.60mpk 5-氯3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+100mpk環(huán)磷 8酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)8.60mpk 5-氯3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+150mpk環(huán)磷 8酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)9.60mpk 5-氯3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+200mpk環(huán)磷8酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)10.45mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./每日(3-7天；10-14)+100mpk環(huán) 8磷酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)11.45mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+150mpk環(huán) 8磷酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)12.45mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+200mpk環(huán) 8磷酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)13.60mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+100mpk環(huán) 8磷酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)14.60mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+150mpk環(huán) 8磷酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)15.60mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+200mpk環(huán) 8磷酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)(注I.V./靜脈注射)配制3-AP前藥貯備液在注射前，將前藥溶于去離子無菌水中，配制每種3-AP前藥貯備液(10.0mg/ml)。3-AP前藥貯備液用水稀釋，配制以下每種前藥。試管貯備液 水 前藥濃度體積1. 1.8ml 1.2ml6.0mg/ml3ml2. 1.35ml 1.65ml 4.5mg/ml3ml經(jīng)胰蛋白酶處理收集對數(shù)生長期的M109細胞，用PBS洗滌，重建成2.5×106細胞/ml PBS。于0天，經(jīng)于右側(cè)肋皮下經(jīng)植入M109懸浮液(0.2ml，5×105細胞/鼠)。小鼠按上述隨機再分組。按照上述時間表，于第3天開始藥物處理。小鼠置于干凈的恒溫實驗室中。飼養(yǎng)鋪墊至少每周換兩次。為小鼠提供充足的食物和飲用水。飲用水用前熱壓處理。在實驗結(jié)束之前，每周兩次測定體重和腫瘤。每日觀察小鼠的死亡率和外表。圖7C是環(huán)磷酰胺與前藥(3)的另一比較試驗。
附圖7D-F表明在指定條件下，5-氟3-AP前藥(7)和4-氯代前藥(16)在對抗小鼠HTB177人肺癌B16-F10黑素瘤和DLD-1結(jié)腸癌中表現(xiàn)出的活性。
圖8A-D表明5-氯3-AP前藥(6)和5氟3-AP前藥(7)聯(lián)用化學(xué)療法化學(xué)療法(聯(lián)用環(huán)磷酰胺)在對抗M109肺癌中表現(xiàn)出的相對于200mpk環(huán)磷酰胺的效力(與對照比較)。與單獨使用環(huán)磷酰胺相比，3-AP前藥聯(lián)用環(huán)磷酰胺表現(xiàn)出優(yōu)良的協(xié)同縮小腫瘤的效力。值得注意的是，在該實驗期間沒有動物死亡。
以5-氟3-AP前藥/環(huán)磷酰胺或絲裂霉素為基礎(chǔ)的聯(lián)用化學(xué)療法對Balb/C小鼠M109肺癌的效力材料M109肺癌細胞；BALB/c小鼠(雌性，9周齡，19-21g)；環(huán)磷酰胺(Sigma公司)；絲裂霉素C和5-氟代鄰位-3-AP前藥(7)。
121Balb/c小鼠隨機地分成12組，每組包括10只小鼠。組別小鼠1.載體0.2ml，Qd(3-7天；10-14) 112.200mpk環(huán)磷酰胺，I.P.，1/W×3(于第3天開始)103.3mpk絲裂霉素C，I.V.，QD(3和13天) 104.45mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+150mpk環(huán)磷 10酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)5.45mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+200mpk環(huán)磷 10酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)6.60mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+150mpk環(huán)磷 10酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)7.60mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+200mpk環(huán)磷 10酰胺，I.P.，1/W(開始于第4天)8.45mpk 5-氟3-AP前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+2mpk絲裂霉 10素C，I.V.，QD(天3和13)9.60mpk 5-氟3-Ap前藥，I.P./Qd(3-7天；10-14)+2mpk絲裂霉 10素C，I.V.，QD(天3和13)10.120mpk 5-氟3-AP，S.C.Qd(3-7天)*1011.150mpk 5-氟3-AP，S.C.Qd(3-7天；10-14)**1012.200mpk 5-氟3-AP，S.C.Qd(3-6天)***10(注*由于小鼠的死亡，僅給予一個劑量方案；**給予兩個劑量方案后，由于體重降低而停止處理；***4天后因為小鼠死亡而停止處理；S.C./皮下注射)配制3-AP前藥注射前，將前藥溶于去離子無菌水中，配制5-氟3-AP前藥(7)貯備液(20.0mg/ml)。用水進一步稀釋3-AP前藥貯備液，配制以下每種前藥。試管 貯備液 水 前藥濃度體積1. 3.0ml 0ml 20.0mg/ml 3ml2. 2.25ml 0.75ml 15.0mg/ml 3ml3. 1.8ml 1.2ml12.0mg/ml 3ml4. 1.5ml 1.5ml10.0mg/ml 3ml2. 0.9ml 2.1ml6.0mg/ml3ml2. 0.68ml 2.32ml 4.5mg/ml3ml將液氮中貯藏的M109肺和癌細胞(1×106細胞/ml×1ml)于37℃快速融化解凍，并置于25ml DMEM培養(yǎng)基(含有10％FCS，37℃，在5％CO2中)。傳2代后，細胞用PBS(pH7.2)洗滌兩次，胰蛋白酶化并再培養(yǎng)于含有50ml培養(yǎng)基的燒瓶中。最后，經(jīng)胰蛋白酶處理收集對數(shù)生長期的M109細胞(約90-95％飽和)，用PBS洗滌，重建成5×106細胞/ml PBS，供腫瘤植入用。于0天，經(jīng)于右側(cè)肋皮下經(jīng)植入M109懸浮液(0.2ml，5×105細胞/鼠)。小鼠按上述隨機再分組。按照上述時間表，于第3天開始藥物處理。小鼠置于干凈的恒溫實驗室中。飼養(yǎng)鋪墊至少每周換兩次。為小鼠提供充足的食物和飲用水。飲用水用前熱壓處理。在實驗結(jié)束之前，每周兩次測定體重和腫瘤。每日觀察小鼠的死亡和外表。
附圖9A-C表示5-氟3-AP前藥(7)和5-氯3-AP前藥(6)聯(lián)用化學(xué)療法(絲裂霉素C)的相對于200mpk環(huán)磷酰胺的效力，以及與對照的比較。與單獨使用環(huán)磷酰胺或絲裂霉素C相比，3-AP前藥與環(huán)磷酰胺和絲裂霉素的聯(lián)用表現(xiàn)出了有利的協(xié)同縮小腫瘤效力。附圖D表示，5-氯3-AP前藥(6)聯(lián)用依托泊苷與單獨使用依托泊苷或?qū)φ盏男ЯΡ容^實驗結(jié)果。該實驗表明藥物聯(lián)用均表現(xiàn)出協(xié)同抗M109肺癌的活性。
附圖10A和10B表示4-氯3-AP(16)與順鉑聯(lián)用抗DLD-1人結(jié)腸癌(圖10A)和人LoVo結(jié)腸癌(圖10B)的效力。這兩個實驗中的聯(lián)合治療表明聯(lián)合治療具有協(xié)同抗試驗?zāi)[瘤的活性。
5-氟3-AP前藥對C57BL/6J小鼠的LD50材料C57BL/6J小鼠(雌性，8周齡)；5-氟3-AP前藥(7)。
55C57BL/6J小鼠隨機分成11組，每組包括5只小鼠組別小鼠1.載體0.2ml滅菌去離子水，I.P.QD52.100mpk 5-氟3-AP前藥，I.P.Qd 53.125mpk 5-氟3-AP前藥，I.P.Qd 54.150mpk 5-氟3-AP前藥，I.P.Qd 55.175mpk 5-氟3-AP前藥，I.P.Qd 56.200mpk 5-氟3-AP前藥，I.P.Qd 57.175mpk 5-氟3-AP前藥，S.C.Qd 58.200mpk 5-氟3-AP前藥，S.C.Qd 59.225mpk 5-氟3-AP前藥，S.C.Qd 510.250mpk 5-氟3-AP前藥，S.C.Qd 511.300mpk 5-氟3-AP前藥，S.C.Qd 5配制3-AP前藥將5-氟3-AP前藥(7)溶于無菌無離子水中，配制貯備液(30mg/ml)。3-AP前藥貯備液進一步用水稀釋，配制以下每種前藥。試管 貯備液 水 前藥濃度體積1. 3.0ml 0ml 30.0mg/ml3ml2. 2.5ml 0.5ml25.0mg/ml3ml3. 2.25ml 0.75 22.5mg/ml3ml4. 2ml1ml 20mg/ml 3ml5. 1.75ml 1.25ml 17.5mg/ml3ml6. 1.5ml 1.5ml15mg/ml 3ml7. 1.25ml 1.75ml 12.5mg/ml3ml8. 1ml2ml 10mg/ml 3ml
按照上述時間表，于0天開始處理。每日記錄動物的死亡情況。每周兩次測定體重，每日觀察小鼠的外表和行為。圖11表示測定5-氟AP前藥的LD50(約為160mpk)。
藥動學(xué)研究測定了3-AP(1A)鄰位磷酸鹽前藥(2)、和5-F鄰位磷酸鹽前藥(7，30a，圖3)在Beagle犬(Canis familiaris)中的藥動學(xué)。
犬接受的劑量為20mg/kg、30mg/kg和40mg/kg的3-AP和鄰位磷酸鹽前藥，和20mg/kg、40mg/kg和80mg/kg的5-氟代鄰位磷酸鹽前藥。根據(jù)每種前藥的最大耐受劑量分別確定每一化合物的給藥方案，其中5-氟鄰位磷酸鹽前藥要高于3-AP或鄰位磷酸鹽前藥(3)。(值得注意的是，即使80mg/kg劑量的5-氟代鄰位磷酸鹽也沒有對動物產(chǎn)生毒性，而30-40mg/kg水平的3-AP和鄰位磷酸鹽前藥(3)即產(chǎn)生了毒性。)按照附圖12-15所示的間隔，測定動物體內(nèi)的藥物水平。這些附圖表明，鄰位磷酸鹽前藥對3-AP的生物利用度有明顯的影響，并且5-氟磷酸鹽前藥可使3-AP持續(xù)保持明顯更大的生物利用度和高濃度。3-AP和鄰位磷酸鹽前藥(3)的藥動學(xué)數(shù)據(jù)見圖12。
至于5-氟磷酸鹽前藥(7)，附圖13-15所示數(shù)據(jù)表明5-氟磷酸鹽衍生物可提供前藥化合物本身更大的生物利用度，以及更大的3-AP(前藥降解所得)生物利用度。另外。5-氟代磷酸鹽前藥的高水平3-AP持續(xù)時間(參見13)要長于3-AP或鄰位磷酸鹽前藥。
上述研究表明，高水平5-氟磷酸鹽前藥(7)的耐受性要優(yōu)于3-AP或鄰位磷酸鹽前藥(3)，而且與鄰位磷酸鹽前藥形式或3-AP藥物本身相比，可傳遞最初較高血藥濃度的3-AP并維持更長時間。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，前述說明和實施例對于本發(fā)明的實施而言僅僅是示例性的，對本發(fā)明范疇并無任何限定?？舍槍υ诖嗽斒龅谋景l(fā)明進行并不偏離以下權(quán)利要求定義的本發(fā)明范疇的改進和變化。
權(quán)利要求
1.具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 其中R是H或CH3；R2是游離酸或鹽形式的磷酸鹽；R3是H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3、CF3或C1-C3烷基；R4為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3或CF3；和R5和R6相互獨立地為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3或CF3，其條件是R3、R4、R5或R6中的至少1個不是H，并且當R3、R4、R5或R6中任意2個不是H時，R3、R4、R5或R6中的另2個是H。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中當每個R3、R5和R6是H時，R4是Cl、F或Br。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R4是Cl。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中當每個R3、R4和R6是H時，R5是F、Cl、OCH3或OCF3。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中R5是F或Cl。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中R5是F。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中R5是Cl。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R3、R4、R5或者R6中的兩個不是H，而選自F、Cl、Br或I。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中每個R3、R4，R5或R6是F或Cl。
10.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R4和R5是F或Cl。
11.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R5和R6是F或Cl。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R4和R5是Cl。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R5和R6是Cl。
14.包括有效量的用于治療瘤形成化合物的藥物組合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu) 其中R是H或CH3；R2是游離酸或鹽形式的磷酸鹽；R3是H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3、CF3或C1-C3烷基；R4為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3或CF3；和R5和R6相互獨立地為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3或CF3，其條件是R3、R4、R5或R6中的至少1個不是H，并且當R3、R4、R5或R6中任意2個不是H時，R3、R4、R5或R6中的另2個是H，所述化合物任選與可藥用添加劑、載體或賦形劑組合。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中當每個R3、R5和R6是H時，R4是Cl、F或Br。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的組合物，其中R4是Cl。
17.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中當每個R3、R4和R6是H時，R5是F、Cl、OCH3或OCF3。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中R5是F或Cl。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，其中R5是F。
20.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，其中R5是Cl。
21.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中R3、R4、R5或R6中的兩個不是H，而選自F、Cl、Br或I。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的組合物，其中R3、R4、R5或R6中的兩個是F或Cl。
23.根據(jù)權(quán)利要求21的組合物，其中R4和R5是F或Cl。
24.根據(jù)權(quán)利要求21的組合物，其中R5和R6是F或Cl。
25.根據(jù)權(quán)利要求23的組合物，其中R4和R5是Cl。
26.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中R5和R6是Cl。
27.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，所述瘤形成是癌。
28.治療瘤形成的方法，包括將有效量的下式結(jié)構(gòu)化合物給予需要這種治療的患者 其中R是H或CH3；R2是游離酸或鹽形式的磷酸鹽；R3是H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3、CF3或C1-C3烷基；R4為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3或CF3；和R5和R6相互獨立地為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3或CF3，其條件是R3、R4、R5或R6中的至少1個不是H，且當R3、R4、R5或R6中任意2個不是H時，R3、R4、R5或R6中的另2個是H，所述化合物任選與可藥用添加劑、載體或賦形劑組合。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中當每個R3、R5和R6是H時，R4是Cl、F或Br。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中R4是Cl。
31.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中當每個R3、R4和R6是H時，R5是F、Cl、OCH3或OCF3。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中R5是F或Cl。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中R5是F。
34.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中R5是Cl。
35.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中R3、R4、R5或R6中的兩個不是H，而選自F、Cl、Br或I。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的方法，其中R3、R4、R5或R6中的兩個是F或Cl。
37.根據(jù)權(quán)利要求35的方法，其中R4和R5是F或Cl。
38.根據(jù)權(quán)利要求35的方法，其中R5和R6是F或Cl。
39.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中R4和R5是Cl。
40.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中R5和R6是Cl。
41.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中所述瘤形成是癌。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的方法，其中所述的癌為胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、肝臟癌、胰腺癌、肺癌、乳房癌、子宮頸癌、子宮體癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、膀胱癌、腎癌、腦/中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、頭和頸部癌、咽喉癌、何杰金氏病、非何杰金氏白血病、多發(fā)性骨髓瘤白血病、皮膚黑素瘤、急性淋巴細胞性白血病、急性粒細胞白血病、尤因氏肉瘤、小細胞肺癌、絨毛膜癌、橫紋肌肉瘤、腎胚細胞瘤、成神經(jīng)細胞瘤、毛細胞白血病、口/咽癌、食管癌、喉癌、黑素瘤、腎和淋巴瘤等。
43.根據(jù)權(quán)利要求41的方法，其中所述的癌為肺癌、乳腺癌或前列腺癌。
44.治療瘤形成的方法，包括將有效量的下式結(jié)構(gòu)化合物和DNA損傷性抗癌藥聯(lián)合給予需要這種治療的患者 其中R是H或CH3；R2是游離酸或鹽形式的磷酸鹽；R3是H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3、CF3或C1-C3烷基；R4為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3或CF3；和R5和R6相互獨立地為H、F、Cl、Br、I、OCH3、OCF3或CF3，其條件是R3、R4、R5或R6中的至少1個不是H，且當R3、R4、R5或R6中任意2個不是H時，R3、R4、R5或R6中的另2個是H，所述化合物任選與可藥用添加劑、載體或賦形劑組合。
45.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中當每個R3、R5和R6是H時，R4是Cl、F或Br。
46.根據(jù)權(quán)利要求45的方法，其中R4是Cl。
47.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中當每個R3、R4和R6是H時，R5是F、Cl、OCH3或OCF3。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中R5是F或Cl。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中R5是F。
50.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中R5是Cl。
51.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中R3、R4、R5或R6中的兩個不是H，而選自F、Cl、Br或I。
52.根據(jù)權(quán)利要求51的方法，其中R3、R4、R5或R6中的兩個是F或Cl。
53.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中R4和R5是F或Cl。
54.根據(jù)權(quán)利要求52的方法，其中R5和R6是F或Cl。
55.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中所述瘤形成是癌。
56.根據(jù)權(quán)利要求55的方法，所述癌是胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、肝臟癌、胰腺癌、肺癌、乳房癌、子宮頸癌、子宮體癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、膀胱癌、腎癌、腦/中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、頭和頸部癌、咽喉癌、何杰金氏病、非何杰金氏白血病、多發(fā)性骨髓瘤白血病、皮膚黑素瘤、急性淋巴細胞性白血病、急性粒細胞白血病、尤因氏肉瘤、小細胞肺癌、絨毛膜癌、橫紋肌肉瘤、腎胚細胞瘤、成神經(jīng)細胞瘤、毛細胞白血病、口/咽癌、食管癌、喉癌、黑素瘤、腎和淋巴瘤等。
57.根據(jù)權(quán)利要求56的方法，所述抗癌藥選自環(huán)磷酰胺，絲裂霉素C，依托泊苷，阿霉素，拓撲替康，依立替康，吉西他濱，喜樹堿，順鉑，苯丁酸氮芥，美法侖及它們的混合物。
58.根據(jù)權(quán)利要求56的方法，其中R3、R4和R6是H，R5是F或Cl，和所述抗癌藥環(huán)磷酰胺或絲裂霉素C。
59.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，所述癌是肺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、黑素瘤或乳腺癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)結(jié)構(gòu)的化合物，其中R是H或CH
文檔編號A61K33/24GK1468102SQ01816923
公開日2004年1月14日 申請日期2001年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月13日
發(fā)明者特倫斯·W·多伊爾, 斯里尼瓦薩·卡拉, 李祖進, 林旭, 毛約翰, 喬琦, 徐揚, 特倫斯 W 多伊爾, 瓦薩 卡拉 申請人:維奧恩藥品公司