專利名稱：泌尿生殖器或肛門直腸的透粘膜疫苗遞送系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療人和動(dòng)物疾病的方法，特別是一種預(yù)防人或動(dòng)物病毒或微生物感染的方法。更具體地說，本發(fā)明涉及一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防或治療人或動(dòng)物的病毒或微生物感染，其中所述栓劑可用于透粘膜免疫，是由來源于完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分或衍生物的疫苗或疫苗佐劑組成的，其可以是天然的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的，由能夠在人或動(dòng)物中產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的核苷酸序列，蛋白或其它抗原決定簇組成。更具體地說，本發(fā)明涉及一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防或治療人或動(dòng)物的病毒或微生物感染，其中所述栓劑包括可用于透粘膜免疫的，來源于完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分的疫苗或疫苗佐劑，其可以是天然的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的，由能夠在人或動(dòng)物中產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的核苷酸序列，蛋白或其它抗原決定簇組成，且其中所述栓劑還包括一種適宜的基質(zhì)，該基質(zhì)可在體溫時(shí)液化或與水混溶，以便將疫苗成分和/或疫苗佐劑成分遞送到泌尿生殖器或肛門直腸的粘膜上，從而引起或提高所期望的免疫應(yīng)答。
背景技術(shù)：
由泌尿生殖器或肛門直腸上皮或粘膜的暴露或經(jīng)泌尿生殖器或肛門直腸上皮或粘膜傳播的病毒和微生物病原體是醫(yī)學(xué)中的一個(gè)主要問題。泌尿生殖器和肛門直腸結(jié)構(gòu)及遠(yuǎn)處的全身組織均可受到影響。這種感染性疾病可能是由于性接觸或其它接觸過程中的粘膜暴露而引起的，或是由于泌尿生殖器或肛門直腸菌群的機(jī)會(huì)生長而引起的。
復(fù)發(fā)，再感染和慢性加重傾向是許多泌尿生殖器或肛門直腸感染的特征。病毒或微生物與粘膜上皮的粘附通常是這些組織定居或感染的重要前提。體外研究已經(jīng)證實(shí)，粘附現(xiàn)象通常是由細(xì)菌的菌毛或所感染病毒或微生物的其它外膜組分而導(dǎo)致的。這種粘附可通過相對(duì)于侵入生物抗原組分的抗體發(fā)展和/或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的提高來預(yù)防，所述侵入生物包括病毒，細(xì)菌，原生動(dòng)物，真菌等。
細(xì)菌和病毒是泌尿生殖器或肛門直腸感染最常見的病原體。泌尿生殖器/肛門直腸也可被其它微生物，如原生動(dòng)物，真菌等感染。復(fù)發(fā)和長期性是許多泌尿生殖器/肛門直腸感染的特征。復(fù)發(fā)可能是由故態(tài)復(fù)萌或再感染導(dǎo)致的。
盡管對(duì)感染性疾病的治療已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，但泌尿生殖器/肛門直腸感染的發(fā)病率和死亡率仍然沒有什么改變。其原因有多種，且取決于宿主的敏感性，性暴露的增加和病毒或微生物的因素。
先前感染生物體的感染復(fù)發(fā)是由治療不當(dāng)導(dǎo)致的，如不正確的藥物選擇，抗性菌株的出現(xiàn)，不充分的治療持續(xù)時(shí)間，不充分的化學(xué)治療劑濃度，細(xì)菌L-形式的存在，和尿結(jié)石或陰道或肛門直腸粘膜的上皮和周圍組織中，病毒或微生物的持續(xù)存留或存活。復(fù)發(fā)的泌尿生殖器/肛門直腸感染可被引起在先感染，且通常對(duì)與陰道，尿道或直腸上皮細(xì)胞的粘附具有較大容量的不同生物菌株再感染。再感染的細(xì)菌可能來源于腸內(nèi)菌群。通常，病毒和衣原體可在上皮細(xì)胞中休眠，或通過還不十分清楚的機(jī)理回復(fù)到活性狀態(tài)。
泌尿生殖器或肛門直腸菌群的組成可被化學(xué)治療劑改變，所述化學(xué)治療劑可用于治療和預(yù)防泌尿生殖器或腸的感染。所述菌群常常會(huì)發(fā)展成抗生素抗性，并引起再感染或初次機(jī)會(huì)感染。這種感染可能是殺滅正常，無害菌群，如乳酸桿菌的結(jié)果，其使得其它病原微生物對(duì)抗生素產(chǎn)生抗性，并進(jìn)而繁殖。
研究揭示，尿中低水平的分泌型IgA(sIgA)表示泌尿道的局部免疫應(yīng)答有缺陷，進(jìn)而促進(jìn)泌尿生殖道的感染。sIgA的一個(gè)重要特性是防止細(xì)菌菌毛或病毒或其它微生物外膜成分與在陰道/肛門直腸粘膜或泌尿道的上皮上發(fā)現(xiàn)的特異性受體相互作用。菌毛-介導(dǎo)的粘附是一種重要的細(xì)菌毒性因子。在病毒和無菌毛微生物的情況下，在繁殖直至感染之前，其它外膜成分也涉及宿主-粘附現(xiàn)象。減少病原體與上皮的粘附或防止病原體的共同粘附對(duì)于抵御感染非常重要。
通常，宿主生物可相對(duì)侵入細(xì)菌形成特異性的局部抗體，并分泌sIgA這樣的抗體。在持續(xù)或頻繁復(fù)發(fā)泌尿道感染的患者中，這種局部免疫感染防御的天然機(jī)制顯然被打亂了。因此，提高免疫防御是一種消除泌尿道感染復(fù)發(fā)原因的合理方法。
人們希望能有一種接種方法，其可刺激抗體的產(chǎn)生，所述抗體針對(duì)的是存在于多種類型病原體中的抗原譜。用編碼特異性蛋白的核酸接種泌尿生殖器或肛門直腸的上皮，這代表了一種刺激細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的新方法，其中所述特異性蛋白涉及病原體-宿主粘附現(xiàn)象。
先前，已經(jīng)非腸道或口服給予了抗泌尿生殖道感染的疫苗，結(jié)果導(dǎo)致對(duì)泌尿生殖器感染的抗性提高。然而，患者會(huì)遭受某些副作用，如不適，發(fā)熱和肌肉痛?？诜呙缈墒艿轿杆岷拖傅钠茐挠绊?。因而難以獲得為了延長透粘膜接觸而在局部表面的必要停留。關(guān)于使用完整細(xì)胞的溶胞產(chǎn)物，通過陰道途徑粘膜接種的現(xiàn)有技術(shù)教導(dǎo)了對(duì)復(fù)發(fā)感染抗性的提高，但沒有提到通過肛門直腸途徑透粘膜免疫，及對(duì)位于遞送系統(tǒng)靶位點(diǎn)的局部感染產(chǎn)生透粘膜免疫性。還沒有提出對(duì)遞送系統(tǒng)特定治療的局部免疫應(yīng)答。所提出的功效被限制在非-特異性的疫苗物質(zhì)上，即通過還不十分理解的機(jī)理提出了一種可產(chǎn)生復(fù)雜反應(yīng)的復(fù)合物。
為了克服與非腸道和口服給予疫苗相關(guān)的，或使用含部分或完整細(xì)胞提取物的陰道-遞送疫苗時(shí)的缺點(diǎn)，提出了一種抵御感染的陰道內(nèi)或直腸內(nèi)的粘膜疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述疫苗是由能夠相對(duì)于涉及粘附和疾病的致病因子刺激免疫應(yīng)答的純化抗原決定簇組成的。對(duì)泌尿生殖器或肛門直腸感染，陰道內(nèi)或直腸內(nèi)給予一種疫苗是指一種粘膜免疫系統(tǒng)，其中抗原通過粘膜表面吸附，并通過專門的局部淋巴組織處理，之后在局部粘膜表面分泌抗體。在核苷酸疫苗的情況下，粘膜的上皮細(xì)胞向促進(jìn)細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的細(xì)胞表面表達(dá)蛋白。如上所述，在某些婦女的泌尿生殖道中，局部陰道或泌尿道抗體的暫時(shí)或部分缺乏是對(duì)泌尿生殖器感染的敏感性增加的一種重要因素。通過泌尿生殖道內(nèi)的粘膜表面進(jìn)行的免疫比非腸道或口服途徑更好，這是因?yàn)橐呀?jīng)發(fā)現(xiàn)通過陰道內(nèi)的表面進(jìn)行接種可在泌尿生殖道中建立一種分泌型的免疫應(yīng)答。使用核苷酸疫苗，這種接種可刺激特異性細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。
在鑒定涉及感染粘附和增殖的特異性致病因子所取得的進(jìn)展中，在對(duì)粘膜免疫系統(tǒng)和粘膜組織通過核苷酸接種參與細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的說明中，表明了通過透陰道或肛門途徑進(jìn)行的泌尿生殖器/肛門直腸接種比口服或非腸道免疫要好。陰道或直腸免疫的特殊方法可實(shí)際解決疾病發(fā)生前的感染，在病原體和宿主相互作用之前，防止病原體粘附或中和毒素。
例如，在過去，泌尿道感染的疫苗是以液體疫苗的形式陰道給予的。許多問題均與液體泌尿道感染疫苗的陰道內(nèi)給予有關(guān)。所遇到的主要問題是在引入后不久，液體疫苗即從陰道流出。這嚴(yán)重限制了液體抗原與陰道粘膜表面接觸的時(shí)間，降低了疫苗的有效性。抗原需要與陰道粘膜充分接觸，從而誘導(dǎo)分泌型免疫球蛋白的應(yīng)答。接種患者需要在接受疫苗后，長時(shí)間地仰臥平躺，從而防止疫苗立即從陰道流出。然而，仰臥位時(shí)段之后，仍然常常有疫苗漏出陰道，從而限制了疫苗的有效性。此外，接受疫苗后長時(shí)間仰臥平躺的要求對(duì)患者來說是一個(gè)負(fù)擔(dān)。在治療過程中，患者可能接受多次接種，且在每次固定的接種后，患者都必須花費(fèi)相當(dāng)長的時(shí)間。
USSN 08/923,813，名稱為Vaginal Suppository Vaccine For UrogenitalInfections是在9/4/97提出申請(qǐng)的，并被授權(quán)。此申請(qǐng)由受讓人擁有，涉及一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可免疫預(yù)防人的泌尿生殖器感染性疾病。
很明顯，將疫苗遞送到泌尿生殖器的粘膜上，從而有效預(yù)防泌尿生殖器感染性疾病是一種改進(jìn)。此外，希望有一種直腸給予的疫苗，其可有效預(yù)防涉及通過肛門直腸道感染的直腸感染。
本發(fā)明克服了上述局限及其他，并教授了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防泌尿生殖器和肛門直腸道的感染性疾病，如細(xì)菌，原生動(dòng)物，真菌，病毒感染等，這是使用部分的，完整的細(xì)胞或純化蛋白，核酸或脂類成分進(jìn)行的，其可以是泌尿生殖器/肛門直腸病原體的天然，突變，克隆或重組表達(dá)的形式，可刺激產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。
發(fā)明概述按照本發(fā)明，提供了一種陰道內(nèi)或直腸內(nèi)給予的，基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防泌尿生殖器或肛門直腸定位或傳播的感染性疾病。
此外按照本發(fā)明，提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防或治療泌尿生殖器或直腸感染或局部的感染性疾病，如細(xì)菌，原生動(dòng)物，真菌或病毒感染，其中所述疫苗或疫苗佐劑與陰道或肛門直腸的粘膜充分接觸一段時(shí)間，從而提高免疫應(yīng)答。
此外按照本發(fā)明，提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防或治療泌尿生殖器或直腸傳播或局部的感染性疾病，如細(xì)菌，原生動(dòng)物，真菌或病毒感染，其中所述疫苗或疫苗佐劑可很方便地給予，不需要患者在接種后，仰臥平躺一段較長的時(shí)間，且適于有初次和常規(guī)加強(qiáng)劑量需求的患者的給藥。
此外按照本發(fā)明，還提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防泌尿生殖器或直腸傳播或局部的感染性疾病，如人或動(dòng)物的細(xì)菌，原生動(dòng)物，真菌或病毒感染，所述栓劑包括一種含完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分的疫苗或疫苗佐劑，其可以是天然的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的，由能夠在人或動(dòng)物中產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的核酸，蛋白，脂類或其它抗原決定簇組成，其中所述栓劑還包括一種適宜的基質(zhì)，該基質(zhì)可在體溫液化或與水混溶，以便將疫苗成分遞送到泌尿生殖器或肛門直腸的粘膜上；其中所述栓劑適于塞入到陰道或直腸中，從而使該栓劑與粘膜相接觸，促進(jìn)疫苗或疫苗佐劑物質(zhì)在其中傳遞。
本發(fā)明的其中一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防或治療泌尿生殖器和/或直腸傳播或局部的感染性疾病，如病毒或其它病原微生物感染，其中所述疫苗或疫苗佐劑與陰道或直腸粘膜充分接觸一段時(shí)間，從而提高免疫應(yīng)答。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中源于粘膜接種的體液-和/或細(xì)胞-介導(dǎo)的刺激可產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而保持由于疾病發(fā)生或復(fù)發(fā)導(dǎo)致的病毒或微生物的釋放或定居，或抑制病原體-宿主粘著，以此代替在已經(jīng)定居或增殖之后，再抗感染。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述栓劑可很容易地制備，如將疫苗或疫苗佐劑與防腐劑，如硫柳汞(thimersal)混合；在室溫或低于室溫時(shí)，其結(jié)構(gòu)是一種固體，可很容易地基入；在體溫時(shí)，其液化或與水混溶，從而使其成分能夠提高免疫應(yīng)答。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防泌尿生殖器或直腸傳播或局部的感染性疾病，如病毒或其它病原微生物感染，其中所述疫苗可很容易地給予，且患者在接種后，不需要長時(shí)間的仰臥平躺。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述疫苗可由患者很容易地自行給予。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述疫苗的給藥相對(duì)無痛。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是提供了一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述患者可周期性地自行給予加強(qiáng)劑量的接種疫苗。
在閱讀和理解下列的詳細(xì)描述和附加的權(quán)利要求后，本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)對(duì)于本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員來說是也顯而易見的。
優(yōu)選實(shí)施方案詳述本發(fā)明涉及一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可免疫預(yù)防人和動(dòng)物的感染性疾病，還涉及一種治療相同疾病的方法。更具體地說，本發(fā)明涉及一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防或治療泌尿生殖器和肛門直腸定位或傳播的感染性疾病，如源于病毒或其它病原微生物的感染，包括但不限制于細(xì)菌，原生動(dòng)物，真菌等。所述基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)包括一種含病原微生物或病毒抗原成分的疫苗和/或疫苗佐劑，和任選的一種防腐劑和任選的一種緩沖劑；其中所述栓劑適于塞入到人或動(dòng)物身體的管口中，以便使疫苗和/或疫苗佐劑與身體管口的粘膜組織相接觸，從而促進(jìn)栓劑物質(zhì)在其中傳遞。
所述栓劑包括一種含部分或完整細(xì)胞或純化細(xì)胞成分的疫苗和/或疫苗佐劑，其可以是天然的，突變的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的，能夠刺激體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的病原微生物或病毒蛋白脂類或核酸成分。
所述栓劑包括一種疫苗和/或疫苗佐劑，其是通過純化天然的病原體成分，合成或重組表達(dá)天然病原體的遺傳成分或蛋白，或通過純化合成的，突變的或克隆的，來源于病原體的核酸序列來制備。
本發(fā)明的栓劑可包含任何一種適宜的，本領(lǐng)域已知的栓劑基質(zhì)。更具體地說，所述栓劑基質(zhì)在室溫或低于室溫時(shí)為固體或半-固體，但在體溫時(shí)液化或與水混溶。所述栓劑基質(zhì)包括但不限制于聚乙二醇，甘油三酯，脂肪酸，脂肪醇，甘油等。優(yōu)選所述栓劑基質(zhì)是聚乙二醇。所述栓劑基質(zhì)任選地還可包括乳化劑，如聚山梨醇酯，明膠，甲基纖維素，海藻酸，十二烷基硫酸鈉等。
所述栓劑基質(zhì)可以任何適宜的量存在于遞送系統(tǒng)中，以便使疫苗或疫苗佐劑混合成固體或半-固體的形式，保持栓劑結(jié)構(gòu)的完整，或可將其很容易地塞入到身體的管口中。當(dāng)塞入后，所述栓劑基質(zhì)在體溫液化或與水混溶，從而使疫苗和/或疫苗佐劑成分與粘膜充分接觸一段時(shí)間，提高免疫應(yīng)答。栓劑基質(zhì)的重量百分比取決于人和/或動(dòng)物身體管口的大小，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答所需的疫苗和/或疫苗佐劑的劑量，及其物理化學(xué)特性，從而使其在室溫或室溫下保持固態(tài)。所述栓劑包括大約50％-99％，優(yōu)選75％-99％重量的栓劑基質(zhì)。優(yōu)選所述栓劑包括大約75％-98％重量的聚乙二醇。優(yōu)選所述栓劑包括大約2％-25％重量的聚山梨醇酯。所述栓劑基質(zhì)的分子量約為400-5000，優(yōu)選大約950-3700。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述聚乙二醇栓劑基質(zhì)包括大約39％重量的，分子量約為3000的聚乙二醇，和大約59％重量的，分子量約為400的聚乙二醇。適宜的，市場(chǎng)上可買到的聚乙二醇栓劑基質(zhì)是購自Paddock Laboratories，Inc的POLYBASE。
所述栓劑基質(zhì)任選地可包括一種防腐劑和一種緩沖劑。所述防腐劑選自硫柳汞，苯甲酸，苯甲酸衍生物，鹽酸胱胺(benzylkonium)，苯扎氯銨亞硫酸鹽(benzylkonium chloride sulfites)，季銨鹽，氯-丁醇及其組合物，其濃度約為0.01％-0.5％。利用緩沖劑可使栓劑疫苗的pH保持相同。所用的緩沖劑是本領(lǐng)域已知的那些，包括但不限制于檸檬酸鹽，磷酸鹽，hepes(或它們的鹽)及其組合物，其濃度大約為5毫摩爾-0.5摩爾。
所述栓劑基質(zhì)可與陰道或直腸粘膜的表面混溶，其中疫苗和/或疫苗佐劑的懸浮顆粒與這種粘膜表面充分接觸一段時(shí)間，從而誘導(dǎo)體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。所述栓劑基質(zhì)對(duì)于提高免疫應(yīng)答還具有輔助作用，其是通過促進(jìn)疫苗與陰道或肛門直腸粘膜的接觸時(shí)間而達(dá)到的，即所述栓劑基質(zhì)起倉庫的作用而緩慢釋放抗原，并將抗原定位并傳遞到免疫活性細(xì)胞上。所述栓劑基質(zhì)還具有將栓劑澆鑄成所希望形式的性能，且作為結(jié)構(gòu)必需品，可使栓劑在室溫或低于室溫時(shí)，保持所希望的模制形式。
所述栓劑還可在栓劑殼體或模子中變硬，形成所期望的形狀。栓劑通常保存在殼體中直到使用，或從模子中除去，或重新包裝。栓劑的殼體或模子是本領(lǐng)域已知的，適于澆鑄或包裝栓劑的任何一種殼體或模子。一種適宜的，市場(chǎng)上可買到的層壓栓劑殼體是購自PaddockLaboratorise，Inc的聚氯乙烯聚乙烯層壓栓劑殼體。
本發(fā)明基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)是通過本領(lǐng)域已知的普通技術(shù)制備的。典型地，所述基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)是在無菌環(huán)境下制備的。在無菌環(huán)境中，將栓劑基質(zhì)加熱至其熔點(diǎn)的溫度范圍，從而使基質(zhì)液化。所述栓劑基質(zhì)被充分加熱一段時(shí)間，從而使其液化，但不會(huì)降解它。
將疫苗或疫苗佐劑放在含液化栓劑基質(zhì)的容器中，其中所述疫苗或疫苗佐劑包含完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分或衍生物，其可以是天然的，突變的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的，由能夠產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的核酸，蛋白，脂類或抗原決定簇組成。將疫苗和/或疫苗佐劑與液體栓劑基質(zhì)攪拌，直到產(chǎn)生均勻的混懸液。加入防腐劑或輔劑并攪拌，直到再次獲得均勻的混懸液。將含栓劑基質(zhì)和疫苗和/或疫苗佐劑及防腐劑的混懸液放在單獨(dú)的層壓栓劑殼體中。然后在室溫冷卻所述栓劑使其變硬。然后熱-密封所述栓劑，并在冷藏溫度保存。
當(dāng)將本發(fā)明基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)塞入到身體的管口中，并使其液化或與水混溶時(shí)，疫苗與陰道或直腸粘膜充分接觸一段時(shí)間，從而提高免疫應(yīng)答。此外，本發(fā)明基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)可使疫苗，疫苗佐劑和防腐劑的混合物很容易地給藥，不需要患者在接種后長時(shí)間地仰臥平躺，且給藥時(shí)無痛苦，可進(jìn)行常規(guī)的加強(qiáng)劑量接種，并使抗原通過粘膜更好地遞送到免疫活性細(xì)胞上。
在下列實(shí)施例中進(jìn)一步舉例說明了本發(fā)明。該實(shí)施例舉例說明了本發(fā)明基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)的有效性。應(yīng)當(dāng)理解，該實(shí)施例僅僅是本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的舉例說明，其中權(quán)利要求闡明本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例在此實(shí)施例中，HSV-2 gD2及其互補(bǔ)DNA被用作粘膜免疫的代表性疫苗。此蛋白對(duì)單純性皰疹病毒-2(HSV-2)是特異性的，且代表了一種涉及宿主-粘附現(xiàn)象的病毒的主要外膜成分。其他人已經(jīng)證實(shí)此蛋白是預(yù)防HSV-2感染或復(fù)發(fā)的一種侯選疫苗。這是以它的抗原性為基礎(chǔ)的且，在非腸道接種后，它可在免受HSV-2攻擊的動(dòng)物模型中誘導(dǎo)令人滿意的免疫應(yīng)答。HSV-2 gD2的DNA是編碼此蛋白的克隆互補(bǔ)DNA。其作為DNA疫苗的用途是刺激產(chǎn)生細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。所有的蛋白和cDNA均是由Protein Express，Inc.，Cincinnati，Ohio制備的。
在頂部有磁性攪拌器/加熱器的無菌燒瓶中，將PLOYBASE，一種由Paddock Laboratories，Inc.制備并出售的聚乙二醇聚山梨醇酯栓劑基質(zhì)，其量足以制備50二-克的栓劑，加熱至大約60℃約1小時(shí)，從而使栓劑基質(zhì)液化。將各500微克的重組HSV-2 gD2蛋白和/或它的互補(bǔ)DNA無菌放在液化的栓劑基質(zhì)中。將無菌的磁性攪拌棒放在燒瓶中，在60℃溫控水浴中攪拌疫苗和栓劑基質(zhì)約10分鐘，至形成均勻的混懸液。加入防腐劑硫柳汞至最終濃度約為0.1％，攪拌至獲得均勻的混懸液。然后使用無菌移液管將含栓劑基質(zhì)，疫苗和防腐劑的所述混懸液放在單獨(dú)的聚氯乙烯聚乙烯層壓栓劑殼體中。每個(gè)殼體中大約放了2.0ml混懸液。
在大約24℃的溫度下冷卻栓劑基質(zhì)大約30分鐘，使栓劑基質(zhì)變硬。每個(gè)殼體的頂部是熱-密封的，然后在大約4℃的條件下保存該栓劑。當(dāng)使用時(shí)，將栓劑從殼體中除去，并塞入陰道或直腸內(nèi)。
已經(jīng)公開了用于治療或預(yù)防泌尿生殖器和/或肛門直腸傳播或局部的感染性疾病的，基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，且公開了治療或預(yù)防人和動(dòng)物泌尿生殖器和/或肛門直腸感染性疾病的方法的各種實(shí)施方案，應(yīng)當(dāng)理解，其改進(jìn)和改變可被本領(lǐng)域的技術(shù)人員所想到。在閱讀和理解此公開的內(nèi)容后，本發(fā)明的其它特征和方面對(duì)于本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員來說是很容易領(lǐng)會(huì)的。所報(bào)道的結(jié)果和實(shí)施例的這種特征，方面，和變化及改進(jìn)很清楚地包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，本發(fā)明的范圍是由下列權(quán)利要求限定的。
權(quán)利要求
1.一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防或治療人和動(dòng)物經(jīng)泌尿生殖器和肛門直腸傳播的感染性疾病，所述栓劑包括(a)一種選自完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分的疫苗或疫苗佐劑，其可以是天然的，突變的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的及其組合的形式，由能夠在人或動(dòng)物中產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的核酸，蛋白，脂類，其它抗原決定簇或其組合的形式組成；和(b)一種栓劑基質(zhì)，選自聚乙二醇，聚山梨醇酯及其組合物；其中所述栓劑適于塞入到人或動(dòng)物身體的管口中，使得該栓劑與身體管口的組織相接觸，從而促進(jìn)栓劑物質(zhì)在其中傳遞。
2.一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防人泌尿生殖道感染，所述栓劑包括(a)一種選自完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分的疫苗或疫苗佐劑，其可以是天然的，突變的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的及其組合的形式，由能夠在人中產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的核酸，蛋白，脂類，其它抗原決定簇或其組合的形式組成；和(b)一種栓劑基質(zhì)，選自聚乙二醇，聚山梨醇酯及其組合物；其中所述栓劑適于塞入到陰道內(nèi)，使得該栓劑與陰道粘膜相接觸，從而促進(jìn)栓劑物質(zhì)在其中傳遞。
3.一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防人或動(dòng)物經(jīng)肛門直腸傳播的感染性疾病，所述栓劑包括(a)一種選自完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分的疫苗或疫苗佐劑，其可以是天然的，突變的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的及其組合的形式，由能夠在人或動(dòng)物中產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的核酸，蛋白，脂類，其它抗原決定簇或其組合的形式組成；知(b)一種栓劑基質(zhì)，選自聚乙二醇，聚山梨醇酯及其組合物；其中所述栓劑適于塞入到直腸內(nèi)，使得該栓劑與肛門直腸粘膜相接觸，從而促進(jìn)疫苗或疫苗佐劑物質(zhì)在其中傳遞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述疫苗的內(nèi)含物或疫苗佐劑選自完整的細(xì)胞，純化的成分，或從已知的經(jīng)泌尿生殖器或肛門直腸傳播的病原體的遺傳信息產(chǎn)生。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述疫苗或疫苗佐劑內(nèi)含物的總量為10-1000微克。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述栓劑基質(zhì)是由聚乙二醇和聚山梨醇酯組成的。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述聚乙二醇栓劑基質(zhì)是由大約75％-98％重量的聚乙二醇和大約2％-25％重量的聚山梨醇酯組成的。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述聚乙二醇的平均分子量約為950-3700。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述聚乙二醇栓劑基質(zhì)約占栓劑重量的70％-99％。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述栓劑還包括一種選自硫柳汞，苯甲酸，鹽酸胱胺，苯扎氯銨，亞硫酸鹽，季銨鹽，氯丁醇及其組合物的防腐劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其中所述栓劑還包括一種選自明膠，甲基纖維素，海藻酸，十二烷基硫酸鈉及其組合物的乳化劑。
12.一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防人或動(dòng)物經(jīng)泌尿生殖器或肛門直腸傳播的感染，所述栓劑包括(a)一種含已知病原體的純化，突變，合成或基因工程成分的疫苗或疫苗佐劑，其中所述病原體選自泌尿生殖器病原體，肛門直腸病原體及其組合；和(b)一種栓劑基質(zhì)，選自聚乙二醇，聚山梨醇酯及其組合物；其中所述聚乙二醇栓劑基質(zhì)是由大約75％-98％重量的聚乙二醇和大約2％-25％重量的聚山梨醇酯組成的，聚乙二醇的平均分子量約為950-3700，且其中所述聚乙二醇栓劑基質(zhì)約占栓劑重量的70％-99％；其中所述栓劑適于塞入到陰道或直腸內(nèi)，使得該栓劑與粘膜接觸，從而促進(jìn)疫苗或疫苗佐劑物質(zhì)在其中傳遞。
13.一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防人或動(dòng)物泌尿生殖器或肛門直腸的感染，所述栓劑是由下列混合物產(chǎn)生的(a)一種選自完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分的疫苗或疫苗佐劑，其可以是天然的，突變的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的，由能夠在人或動(dòng)物中產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的核酸，蛋白，脂類，其它抗原決定簇或其組合的形式組成；和(b)一種栓劑基質(zhì)，選自聚乙二醇，聚山梨醇酯及其組合物；其中所述聚乙二醇栓劑基質(zhì)是由大約75％-98％重量的聚乙二醇和大約2％-25％重量的聚山梨醇酯組成的，聚乙二醇的平均分子量約為750-3700，且其中所述聚乙二醇栓劑基質(zhì)約占栓劑重量的70％-99％；其中所述栓劑適于塞入到陰道內(nèi)或直腸內(nèi)，使得該栓劑與粘膜相接觸，從而促進(jìn)疫苗或疫苗佐劑物質(zhì)在其中傳遞。
14.一種預(yù)防人或動(dòng)物泌尿生殖器或肛門直腸疾病的方法，所述方法包括下列步驟(a)將基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)塞入到人身體的管口中，其中所述栓劑包括一種由完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分組成的疫苗或疫苗佐劑，其可以是天然的，突變的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的，由能夠在人或動(dòng)物中產(chǎn)生體液-或細(xì)胞-介導(dǎo)的免疫的核酸，蛋白，其它抗原決定簇或其組合的形式組成；(b)使所述栓劑與身體管口處或管口內(nèi)的粘膜組織相接觸，從而促進(jìn)疫苗或疫苗佐劑物質(zhì)在其中傳遞，并誘導(dǎo)人的免疫應(yīng)答。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述蛋白或核酸來源于致病的，經(jīng)泌尿生殖器或肛門直腸傳播的病毒，其它微生物或其組合物的遺傳成分。
16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中蛋白，核酸，脂類，其它抗原決定簇及其組合物的總量約為10-1000微克。
17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述聚乙二醇栓劑基質(zhì)選自聚乙二醇，聚山梨醇酯及其組合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述聚乙二醇栓劑基質(zhì)是由大約75％-98％重量的聚乙二醇和大約2％-25％重量的聚山梨醇酯組成的。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述聚乙二醇的平均分子量約為750-3700。
20.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述栓劑基質(zhì)約占栓劑重量的80％-99％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可免疫預(yù)防人和動(dòng)物經(jīng)泌尿生殖器和肛門直腸傳播的感染性疾病，還涉及一種治療相同疾病的方法。更具體地說，本發(fā)明涉及一種基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)，其可預(yù)防或治療經(jīng)泌尿生殖器或肛門直腸傳播的感染性疾病，如源于病毒或微生物病原體的感染。所述基于栓劑的疫苗遞送系統(tǒng)包括由完整或部分病毒或其它微生物病原體，或它們的純化細(xì)胞成分組成的疫苗和/或疫苗佐劑，其可以是天然的，突變的，合成的，克隆的或重組表達(dá)的，由能夠在人或動(dòng)物中產(chǎn)生體液－或細(xì)胞－介導(dǎo)的免疫的核酸，蛋白，脂類或其它抗原決定簇組成；和一種聚乙二醇基質(zhì)；其中所述栓劑適于塞入到人或動(dòng)物身體的管口中，使得該栓劑與身體管口的組織相接觸，從而促進(jìn)疫苗或疫苗佐劑物質(zhì)在其中傳遞。
文檔編號(hào)A61K9/02GK1427715SQ01808957
公開日2003年7月2日 申請(qǐng)日期2001年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月1日
發(fā)明者J·托馬斯, Z·I·赫爾特倫迪, M·維納, M·霍維爾 申請(qǐng)人:蛋白表達(dá)公司