專利名稱：樟芝保肝制劑的制作方法
樟芝的型態(tài)樟芝(Antrodia Camphorata或Antrodia Cinnamonea)又名牛樟菇、樟菰、樟窟內(nèi)菰，臺灣有稱陰陽對口菇。樟芝子實體屬多年生，具有強烈沖鼻的樟樹香氣，此與一般靈芝類有很大的差異，其外型呈板狀或鐘狀。板狀型態(tài)者，面為橘紅(黃)色，整面全有菌孔，板底層有淺黃白色的木栓質(zhì)，藉此木栓質(zhì)附著在牛樟樹中空心材內(nèi)壁上生長。鐘狀型態(tài)者，子實層(鐘面)亦呈橘(黃)色，充滿菌孔(4-5個菌孔/毫米)，內(nèi)有抱子味極苦，新鮮時為橘紅色，之后會成為橘褐色或褐色，鐘體則呈暗綠褐色的皮殼。以顯微鏡觀察其擔(dān)孢子，其形態(tài)為平滑無色的透明微彎柱形。樟芝的生物特性野生的樟芝是生長在牛樟樹干中空內(nèi)壁上，因為這個特性，造成很多牛樟樹倒伏。文獻(xiàn)記載，樟芝是在牛樟樹上目前唯一發(fā)現(xiàn)的木材腐杉菌，病徵為褐色腐朽，故為褐腐菌。但是樟芝的病原性并不強，因此牛樟樹很少因此死亡。雖然樟芝對牛樟樹而言是病原菌，但因樟芝價格昂貴，超過牛樟樹的經(jīng)濟(jì)價值，因此是不是牛樟樹的病原菌已經(jīng)不重要了。樟芝的培養(yǎng)技術(shù)樟芝的培養(yǎng)，人工栽培技術(shù)方面，仍有待努力。所以，目前仍是以深山采集的方式來獲得。但是采集樟芝不是件容易的事，因為首先要尋找牛樟樹的產(chǎn)地。常有的困難是牛樟樹與冇樟，兩者極為相似，不易分辨。目前最直接的方法已由藤田安二提出，冇樟干油是以黃樟油(safrole)與十五燒醛為主，因而有沙土中黃樟素的味道。牛樟干油則以松油醇(d-terpinenol)為主，而有樟腦油的味道，藉此即可區(qū)別牛樟與冇樟。第二個困難是要從大片樹林中找到有中空洞的樹干才行，此相當(dāng)不易?？斩粗腥粲姓林?，則可定期采集。
由于找尋中空洞的牛樟樹干不易，不肖商人干脆將牛樟樹砍倒，以期日后能長出樟芝，進(jìn)而收集販?zhǔn)?。因此，為環(huán)保及經(jīng)濟(jì)上的考量，發(fā)展人工栽培樟芝是必要進(jìn)行的方向?？上У氖侨斯ぴ耘嗾林ゼ夹g(shù)一直無法突破。樟芝在牛樟木屑上生長極為緩慢，甚至停滯。因此，若能改以現(xiàn)代生物技術(shù)，來培養(yǎng)樟芝菌絲體，將是最經(jīng)濟(jì)、最符合環(huán)保的人工培育法。樟芝的藥效及其活性成分早期的傳說是臺灣原住民在采伐時，無意間發(fā)現(xiàn)了牛樟樹上的樟芝，原住民因生活型態(tài)之故，體能消耗量較大，肝的病變對原住民來說，是最大的威脅，民族性使然，原住民較喜歡喝酒、宿醉在所難免，因喝酒過多導(dǎo)致肝病變的比率亦是居高不下。但在喝過樟芝的烹煮液，竟可不藥而愈、強身健體、解酒效力更是一流，至此原住民便將樟芝奉為上品，成為原住民的傳統(tǒng)珍貴藥材。民間傳說對肝癌及子宮癌特別有效，也有人認(rèn)為可治急性腹痛。因此有鑒于1.樟芝唯一寄生物種一牛樟樹，屬于保育類一級木樹種，且為有空心的牛樟樹的不易取得。
2.樟芝子實體的試管內(nèi)(in vitro)及離牛樟樹心空洞外的培育的困難性；3.樟芝菌絲體亦有相似生物功能，且菌絲體的培養(yǎng)和擴大生產(chǎn)較可行；及4.有需要對此臺灣獨有的樟樹所具保肝功能予以科學(xué)性研究以確定其臨床功效；本案發(fā)明人乃經(jīng)精深研究，發(fā)現(xiàn)樟芝子實體與菌絲體，其中特別是液體培養(yǎng)所得菌絲體皆具有針對酒精誘發(fā)肝炎的保肝功能，因而據(jù)以完成本發(fā)明。圖式的簡略說明

圖1至至圖6為酒精誘發(fā)急性肝炎的活體內(nèi)(in vivo)試驗中血清生化值的結(jié)果，分別為圖1GOT；圖2GPT；圖3ALP；圖4Glu；圖5BUN和圖6CRE；其中A正常對照組；B肝損傷組；C水飛薊素(200毫克/公斤)組；D樟芝菌絲體低劑量組(0.5克/公斤)；E樟芝菌絲體高劑量組(1.0克/公斤)；F子實體低劑量組(0.5克/公斤)；G子實體高劑量組(1.0克/公斤)，H樟芝對照組(1.0克/公斤)。注H組不注射酒精。數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差；n＝6-8大鼠。
圖7至9為酒精誘發(fā)急性肝炎之活體內(nèi)(in vivo)試驗中抗氧化酶SOD、過氧化氫酶(catalase)、GSH-Px等的評估結(jié)果；分別為圖7過氧化氫酶；圖8GSH-Px；圖9抗氧化酶。其中A正常對照組；B肝損傷組；C水飛薊素(200毫克/公斤)組；D樟芝低劑量組(0.5克/公斤)；E樟芝高劑量組(1.0克/公斤)；F子實體低劑量組(0.5克/公斤)；G子實體高劑量組(1.0克/公斤)；H樟芝對照組(1.0克/公斤)。注H組不注射酒精。數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差；n＝6-8大鼠。
圖10為TBARS(MDA含量)試驗結(jié)果的圖式；其中A組正常對照組；B組肝損傷組；C組水飛薊素(200毫克/公斤)組；D組低劑量樟芝(0.5克/公斤；E組高劑量樟芝(1.0克/公斤)；F組低劑量子實體(0.5克/公斤)；G組高劑量子實體(1.0克/公斤)；H樟芝對照組(1.0克/公斤)；其中，H組不注射酒精；D、E兩組的樟芝即樟芝菌絲體；數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差；n＝5小鼠。
如上所述，本發(fā)明提出一種樟芝保肝制劑，其包括其子實體及/或菌絲體作為活性成分。
本發(fā)明所用樟芝(Antrodia Camphorata)菌絲體CCRC35398和CCRC35396的存活微生物(株)菌種已分別于2001年3月5日和2001年5月9日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(中國，北京，中關(guān)村)；菌種CCRC35398在保藏中心的登記入冊編號為CGMCC No.0543，菌種CCRC35396的登記入冊編號為CGMCC No.0575。
本發(fā)明所用樟芝菌絲體系得自寄存于中國臺灣省新竹市食品工業(yè)研究所菌種保存中心的樟芝菌絲體CCRC 35398和CCRC 36396。
樟芝菌絲體的液體培養(yǎng)，基本上系采習(xí)用技術(shù)來進(jìn)行。其中包括將菌絲體接種于平板上，于適當(dāng)溫度如15-35℃，(較佳者周溫約25℃)下培養(yǎng)約2周后，刮取菌絲接種于燒瓶內(nèi)，用實施例中所列培養(yǎng)基，在約30℃，pH2-8，較佳者pH4-7，更佳者約pH4-5，及振蕩速率50-250 rpm之下振蕩培養(yǎng)到log期初期，亦即，約5-7天；最后，將燒瓶培養(yǎng)物接種于發(fā)酵槽培養(yǎng)基(同燒瓶培養(yǎng)基)內(nèi)，在15-30℃，(較佳者周溫約25℃)，槽壓0.1-1.5公斤/平方厘米，及pH約4.5下，以0.5-1vvm通氣速率通入空氣，或空氣與氧氣，二氧化碳或氮氣的混合物，較佳者空氣，在50-300rpm攪拌速率下培養(yǎng)約8-16天。即得樟芝菌絲體液體培養(yǎng)懸浮液，包括菌絲體與澄清液。
將菌絲體與液體分開的方法可采用習(xí)知技術(shù)，例如離心，過濾，沉淀(settling)，傾析(decantation)，等。在本發(fā)明一較佳實施中，是采用離心法，使用習(xí)用的離心機，例如歐式離心脫水機，如可得自瑞典ALFALAVAL公司的Decater NX 418 S；以3200rpm(4000xg)離心即分離出菌絲體和澄清液。
本發(fā)明的保肝制劑包括樟芝子實體與菌絲體與視需要的賦形劑，稀釋劑，或載劑混合而制成各種形式的劑型，例如，干粉，氣霧劑，懸浮液，或固體填充膠囊，及錠劑。任何醫(yī)藥上可接受的賦形劑都可用來調(diào)配錠劑。錠劑典型地含有約0.1至約1克的樟芝子實體與菌絲體。因此，例如，可將樟芝子實體與菌絲體與公認(rèn)為安全的醫(yī)藥賦形劑，包括液體稀釋劑，固體稀釋劑，濕潤劑，粘合劑，崩解劑，和濕滑劑混合。參看，例如，Handbook of pharmaceuticalExcipients 2nd Edition，Amer.pharm.Assoc.(1994)。較佳的固體賦形劑包括乳糖，羥丙基纖維素，月桂基硫酸鈉，微晶纖維素，滑石，膠體二氧化硅，淀粉，硬脂酸鎂，硬脂酸，和交聯(lián)羧甲基纖維素鈉。液體賦形劑包括，例如，丙二醇，甘油，和乙醇。該醫(yī)藥組合物系用標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥制造技術(shù)制備的，如在Remington’s Pharmaceutical Sciences，18th Ed.(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，PA。這些技術(shù)包括，例如，濕式造粒接著干燥，研磨和壓制成有或無薄膜涂覆的錠劑；干式造粒接著研磨，壓制成有或無薄膜涂覆的錠劑；干摻合接著壓制成有或無薄膜涂覆的錠劑；模制錠劑；藥包；懸浮；濕式造粒，干燥和填充到明膠膠囊內(nèi)；干摻合填充到明膠膠囊內(nèi)；或?qū)腋∫禾畛涞矫髂z膠囊內(nèi)。在這些醫(yī)藥組合中，總活性成分構(gòu)成組合物重量的0.1至99.9％，特別者約1至10％。
本發(fā)明保肝制劑系經(jīng)由在大鼠體內(nèi)一次酒精誘導(dǎo)模式下經(jīng)由血清生化值GOT、GPT、ALP、Glu、BUN和CRE與抗氧化酶SOD、過氧化氫酶(catalase)、GSH-Px等評估其保肝效果。另外，以活體內(nèi)(in vivo)試驗即給小鼠喂食試驗探討本發(fā)明保肝制劑對小鼠的致死率及毒性。
此外，也檢測本發(fā)明保肝制劑的抗B型肝炎病毒活性，其中系分別使用樟芝菌絲體的氯仿，甲醇和水的萃取物利用酶連結(jié)免疫吸附分析法(Enzyme，Linked Immunosorbent Assay，ELISA)使用抗人類B型肝炎病毒表面抗原的單株抗體及抗人類B型肝炎病毒core/e抗原的多源抗體的酶免疫檢驗試劑進(jìn)行檢測。另外，使用PCR(聚合酶鏈反應(yīng))的方法；比較服用前與服服用樟芝菌絲體(每人每日約4.5克)三個月后之?dāng)?shù)值進(jìn)行活體內(nèi)(in vivo)B肝病毒之檢測以測試樟芝菌絲體是否具有抑制B肝病毒的效果本發(fā)明要以下面的實施例予以示范闡明，但本發(fā)明不受這些實施例所限制。
平板培養(yǎng)將菌絲體接種于平板上，于20℃下培養(yǎng)約2周。
燒瓶培養(yǎng)刮取平板上的菌絲接種于燒瓶內(nèi)，用下列培養(yǎng)基，在約30℃，pH4.5下，于搖動機上以振蕩速率50-250rpm振蕩培養(yǎng)到log期初期，亦即，約5-7天；培養(yǎng)基配方成分含量(重量％)谷類(如麥粉類) 1蛋白胨 0.1硫酸鎂 0.05磷酸氫二鉀 0.05硫酸鐵 0.05蔗糖2酵母抽出物、粉、膏 0.5豆類(如黃豆粉、綠事、大豆粉等) 0.2發(fā)酵槽培養(yǎng)培養(yǎng)基同上，將燒瓶培養(yǎng)物接種于發(fā)酵槽培養(yǎng)基內(nèi)，在30℃，槽壓0.5-1.0公斤/平方厘米，及pH約4.5，以150升/分通氣速率通入空氣，在200rpm攪拌速率下培養(yǎng)約10天，即得樟芝菌絲體液體培養(yǎng)懸浮液，包括菌絲體與澄清液。
結(jié)果100升發(fā)酵液發(fā)酵完畢可得2公斤菌絲體(干重)及90升的濾液。
由生化值的觀察可知，酒精的投予會造成肝損傷組(B組)GOT與GPT指數(shù)顯著地上升，表示酒精確實造成了肝損傷。同時，水飛薊素組(C組，肝治療組)與各劑量的樟芝菌絲體與子實體則發(fā)揮了治療的效果，在GOT與GPT指數(shù)上與肝損傷組有顯著性差異P＜0.05)。這些結(jié)果說明樟芝具有減少酒精誘發(fā)肝傷害的效果。
另外，在葡萄糖含量方面，肝損傷組中有顯著性上升，而樟芝菌絲體與子實體的各劑量組則能顯著抑制葡萄糖的上升。此結(jié)果證明酒精會構(gòu)成營養(yǎng)需求上的紊亂，干擾葡萄糖的利用，而樟芝菌絲體與子實體則有防止酒精所帶來的營養(yǎng)紊亂問題。至于BUN與CRE這兩項腎傷害生化指標(biāo)方面，本研究發(fā)現(xiàn)各組間皆無顯著性的差異(P＞0.05)，表示不論酒精的注射或樟芝的投予均不會造成腎的傷害。二.樟芝對肝臟中GSH含量的影響下表列出大鼠肝中GSH含量的測量結(jié)果。
GSH是重要的抗氧化物質(zhì)及許多酶的輔基，其為肝細(xì)胞中主要的非蛋白硫醇基(non-protein thiol groups)來源，約占肝中非蛋白質(zhì)硫醇基含量的95％，其含量代表細(xì)胞處于危機下的反應(yīng)，而為重要抗氧化物質(zhì)。本次實驗結(jié)果顯示在急性酒精肝損傷的狀況下，不論是在喂食水飛薊素或樟芝菌絲體或子實體9日之久，對肝中GSH含量并無顯著影響(p＞0.05)。大鼠肝中GSH
數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝6-8只老鼠三.抗氧化酶抗氧化酶方面的結(jié)果示于圖7至9之中。其結(jié)果摘要如下1.GSH＝Px于正常組、肝損傷組、水飛薊素組與樟芝(菌絲體與子實體)治療組之間并無顯著差異，此結(jié)果與Ohta et al.(1)的結(jié)果一致，推測其原因為酒精代謝時會產(chǎn)生大量的H2O2，此時則由Km值較大的過氧化氫酶來負(fù)責(zé)H2O2的清除，所以對GSH-Px影響較小，這也可解釋TSH與NPSH于各組之間并無顯著差異(p＞0.05)。
2.過氧化氫酶(catalase)的結(jié)果顯示肝損傷組的活性最高，可能是肝細(xì)胞受氧化壓力下的一種代償反應(yīng)，促使過氧化氫酶基因的表現(xiàn)。菌絲體低劑量與高劑量組；子實體低劑量與高劑量組則與正常組的差異不大(p＞0.05)，代表樟芝的菌絲體與子實體的投予與正常組一致，因此可推測樟芝的菌絲體與子實體皆具有保肝的能力。
3.SOD的結(jié)果亦顯示肝損傷組的活性最高，此結(jié)果與Baskar et al.(2.3)的結(jié)果一致，與其他組別有顯著性差異p＜0.05)，推測酒精的投予可促使SOD的基因表現(xiàn)，當(dāng)SOD活性大量表現(xiàn)下將會產(chǎn)生許多H2O2，附帶使過氧化氫酶活性大量表現(xiàn)，所以此二種抗氧化酶的活性皆上升。而菌絲體低劑量與高劑量組；子實體低劑量與高劑量組皆與正常組無顯著差異p＞0.05)，因此同上原理推測樟芝菌絲體與子實體都有有效的保肝能力。四.TBAB(Thiobarbituric acid reactive substances)(MDA含量)組別A組正常對照組；B組肝損傷組；C組水飛薊素(200毫克/公斤)組；D組低劑量樟芝(0.5克/公斤)；E組高劑量樟芝(1.0克/公斤)；F組低劑量子實體(0.5克/公斤)；G組高劑量子實體(1.0克/公斤)；H樟芝對照組(1.0克/公斤)；其中，H組不注射酒精；D、E兩組的樟芝即樟芝菌絲體TBARS值的測試主要在測定脂質(zhì)過氧化二級產(chǎn)物-MDA含量，實驗結(jié)果示于圖10中，圖中的數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝5。結(jié)果顯示管喂樟芝菌絲體與子實體的TBARS值，不論在低劑量與高劑量組、甚至僅管喂高劑量樟芝而不注射酒精的組別，都與肝損傷組(B組)呈現(xiàn)顯著性的差異(p＜0.05)，因此推斷此模式下，樟芝菌絲體與子實體具有抑制脂質(zhì)過氧化的能力，以達(dá)保肝效果。實施例3小鼠喂食量的探討劑量選定試驗試藥的處理及投予法將試藥(樟芝王粉末，樟芝菌絲體粉未)溶于生理食鹽水中，以管喂法投予。組別每組十只小白鼠(1)控制組以生理食鹽水(每100克體重1毫升)代替樟芝王(2)低劑量樟芝王組每公斤體重投予0.5克樟芝王(3)高劑量組每公斤體重投予1克樟芝王劑量范圍的選定依照“葡萄王生物中心的建議量”每人每日6顆，每顆0.42克，共2.5克。以此劑量換算成小鼠(25g)的攝取量如下人體每日建議樟芝王服用量2.5g以人體每日食物攝取量(干重)為500g所占的食物比例為2.5g/500g＝0.5％小鼠(體重25g)每日食物攝取量為5g5g×0.5％＝0.025g樟芝王以此劑量為適中量。配制及喂食法(1)將樟芝王配在理食鹽水中，(2)每100g體重以管喂投予1ml的食鹽水，(3)25g的小鼠需要喂以0.25ml食鹽水，(4)此0.25ml中應(yīng)含0.025g樟芝王，亦即0.1g/ml，此為高劑量，(5)低劑量則取中劑量之半0.5g/kg體重＝0.05g/100g體重＝0.05克/毫升。
各樣品的代號如下PT-A-1樟芝(CCRC35396)菌絲氯仿抽出物PT-A-2樟芝(CCRC35396)菌絲甲醇抽出物PT-A-3樟芝(CCRC35396)菌絲水抽出物PT-B-1樟芝(CCRC35398)菌絲氯仿抽出物PT-B-2樟芝(CCRC35398)菌絲甲醇抽出物PT-B-3樟芝(CCRC35398)菌絲水抽出物二、抗B型肝炎病毒活性的檢測(一)試管內(nèi)(in vitro)抗B型肝炎病毒活性的檢測1、細(xì)胞培養(yǎng)人類肝癌細(xì)胞株MS-G2，培養(yǎng)于含10％胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)的RPMI-1640培養(yǎng)基(Gibco Laboratories，Grand Island，NY)中，每毫升的培養(yǎng)基內(nèi)添加100I.U.青霉素(penicillin)、100微克鏈霉素(streptomycin)、2.5微克防治霉(fungizone)、2mM谷氨酸胺(L-glutamine)及100μM的非必需性氨基酸(non-essential amino acid)，包括14.7微克谷氨酸，7.5微克甘氨酸，8.9微克丙氨酸，13.3微克天冬氨酸，11.5微克脯氨，15微克天冬氨酰胺及10.5微克絲氨酸)，以上稱完全培養(yǎng)基，置于含5％二氧化碳的37℃培養(yǎng)箱中。2、抗病毒藥物的處理在24洞的細(xì)胞培養(yǎng)皿，每洞種入3.0×105MS-G2細(xì)胞，待一天后細(xì)胞充分附著于細(xì)胞培養(yǎng)皿底部，更新培養(yǎng)基，同時給予三種(200，150及100微克/毫升)不同劑量的供試藥物，每個劑量三重覆。第三天更換一次新的培養(yǎng)基并給予測試藥物。給藥處理第三及第六天，收集上層培養(yǎng)液，進(jìn)行抗病毒活性測定。供試藥物溶于三次蒸餾的無菌水者，其對照組亦加入等體積的三次蒸餾的無菌水，若供試藥物溶于二甲亞砜(DMSO)者，其對照組亦加入等體積的DMSO，DMSO的劑量最高為2.5微升/毫升。3、天冬氨酸轉(zhuǎn)胺酶(Aspartate Aminotransferase(AST))的測定給藥處理后，收集上層培養(yǎng)液，以Abbott Cision II AST assay kit測定AST值，其單位為國際單位/升(International Unit per Liter(I.U./L))，用以作為藥物是否具細(xì)胞毒性(cytotoxicity)的指標(biāo)。4、B型肝炎病毒表面抗原及e抗原的酶免疫測定利用酶連結(jié)免疫吸附分析法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)，使用抗人類B型肝炎病毒表面抗原的單株抗體及抗人類B型肝炎病毒core/e抗原的多源抗體的酶免疫檢驗試劑(普生生物科技公司，新竹，臺灣)，利用抗體—抗原—抗體酶接合體的三明治復(fù)合體，以含過氧化氫鄰苯二胺(OPD)溶液進(jìn)行顯色，再以分光比色計DYNATECHMR7000型ELISA reader在490nm測定之，所得的吸光值(O.D.value)反應(yīng)出抗原的多少。并以對照組的吸光值當(dāng)100，依以下公式計算其抑制百分比(Inhibition％) 抑制百分比在20-35為輕度抑制，抑制百分比在35-45為中度抑制，抑制百分比在45以上為強度抑制。下表為服用樟芝菌絲體對B肝病毒的抑制情形結(jié)果與討論表1.樟芝萃取物PT-A1，PT-A2，PT-A3，PT-B1，PT-B2和T-B3的抗HbsAg和HbeAg效應(yīng)
百分抑制率介於25％-35％為輕度抑制介於35％-45％為中度抑制大於45％為強度抑制結(jié)果顯示1.PT-B3及PT-A3在劑量240微克/毫升內(nèi)，對HBV的表面抗原及e抗原均無抑制作用亦無細(xì)胞毒害作用。
2.PT-Al及PT-B1在高測試劑量100，150，200和240微克/毫升，均呈現(xiàn)細(xì)胞毒害作用，但在75微克/毫升劑量則無明顯細(xì)胞毒害作用，對HBV之表面抗原及e抗原均具強度抑制作用，百分抑制率分別為59％及60.5％；69.4％及69.5％。
3.PT-A3及PT-B3在五個測試劑量75，100，150，200和240微克/毫升，皆無細(xì)胞毒害作用，對HBV之表面抗原及e抗原均不具強度抑制作用，4.PT-A2及PT-B2在五個測試劑量75，100，150，200和240微克/毫升，皆無明顯細(xì)胞毒害作用，對HBV之表面抗原及e抗原均具中度或強度抑制作用，抑制作用隨劑量增加而加大，最高抑制百分比分別為64.9％及60.9％；68.9％及61.8％。結(jié)論1.Bs抗原與HBe抗原為臨床上檢驗血中日型肝炎病毒(HBV)感染的標(biāo)識，分別表示正受到病毒感染及肝炎持續(xù)發(fā)生且病毒增殖。實驗結(jié)果可知樟芝菌絲甲醇萃取物PT-A2及PT-B2在最高測試劑量240微克/毫升仍無細(xì)胞毒害作用，對HBV之表面抗原及e抗原均具強度抑制作用，且與劑量有正相關(guān)性；且樟芝菌絲氯仿萃取物PT-A1及PT-B1在最高測試劑量75微克/毫升仍無細(xì)胞毒害作用，對HBV之表面抗原及e抗原均具強度抑制作用。
2.由本實驗結(jié)果顯示，所使用的兩株樟芝菌株(CCRC35396及CCRC35398)結(jié)果相似，推測不同菌株的樟芝菌絲中，抗HBV有效成分可能相同。(二)活體內(nèi)(in vivo)B肝病毒的檢測活體內(nèi)(in vivo)B肝病毒的檢測為使用PCR(聚合酶鏈反應(yīng))的方法；比較志愿者服用前與服用樟芝菌絲體(每人每日約4.5克)三個月后的數(shù)值，發(fā)現(xiàn)樟芝菌絲體具有抑制B肝病毒的效果，亦即具有治療B肝的功效。
*-未檢測正常標(biāo)準(zhǔn)值B肝(PCR)＜0.5毫微克/毫升(pg/ml)GOT0-40單位/升(U/L)GPT0-40單位/升總結(jié)1.綜合生化值GOT、GPT、Clu與抗氧化酶SOD、過氧化氫酶、GSH-Px等的結(jié)果，證實一次酒精誘導(dǎo)模式下，樟芝菌絲體與子實體確實具有保肝的效果。
2.樟芝菌絲甲醇萃取物PT-A2及PT-B2在最高測試劑量240微克/毫升仍無細(xì)胞毒害作用，對HBV的表面抗原及e抗原均具強度抑制作用，且與劑量有正相關(guān)性；且樟芝菌絲氯仿萃取物PT-A1及PT-B1在最高測試劑量75微克/毫升仍無細(xì)胞毒害作用，對HBV的表面抗原及e抗原均具強度抑制作用。
3.樟芝菌絲體具有抑制B肝病毒的效果，亦即具有治療B肝的功效。參考文獻(xiàn)1.Ohta Y.，Sasak E.，Nishida K.，Kobayashi T.，Nagata M.，Ishiguro I.Preventive effect of Dai-saiko-to(Da-Chai-Hu-Tang)extract on disruptedhepatic active oxygen metabolism in rats with carbon tetrachloride-inducedliver injurv.Am.J.Chin.Med.，XXIII(1)53-64，1995.
2.Baskar R.，Malini MM.，Varalakshmi P.，Balakrishna K.，Rao RB.Effect of lupeol isolated from Crataeva nurvala stem bark against free radical-induced toxicity in experimental urolithiasis.Fitotherapia，LXVII(2)121-125.1996.
3.蔡金川，中醫(yī)四方劑對實驗性肝損傷療效評估與抗氧化活性的關(guān)系探討，中國醫(yī)藥學(xué)院，臺中，1997。
權(quán)利要求
1.一種樟芝保肝制劑，其特征在于包含有樟芝子實體及/或菌絲體作為活性成分，及適合的稀釋劑，賦形劑或載體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樟芝保肝制劑，其特征在于其中該菌絲體為于2001年3月5日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，北京，中關(guān)村，的Antrodia camphorata菌絲體CCRC35398，其登記入冊編號為CGMCC No.0543。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樟芝保肝制劑，其特征在于其中該菌絲體為于2001年5月9日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，北京，中關(guān)村，的Antrodia camphorata菌絲體CCRC35396，其登記入冊編號為CGMCC No.0575。
4.根據(jù)權(quán)利要求1，2或3中任一項所述的樟芝保肝制劑，其特征在于該菌絲體是經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)生產(chǎn)而得者。
5.根據(jù)權(quán)利要求1，2或3中任一項所述的樟芝保肝制劑，其特征在于該活性成分為子實體及/或菌絲體的萃取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1，2或3中任一項所述的樟芝保肝制劑，其特征在于其對HBV的表面抗原及e抗原均具強度抑制作用，在于預(yù)防及治療B型肝炎的用途。
全文摘要
本發(fā)明是有關(guān)于僅生長于臺灣的特有物種牛樟樹(Cinnamomum kanehirae)樹心內(nèi)的菇類—樟芝(Antrodia Camphorata或Antrodia Cinnamonea)的子實體與菌絲體對酒精誘發(fā)的肝炎的保肝制劑,其包括該子實體及/或菌絲體作為活性成分。
文檔編號A61K36/07GK1386545SQ01118078
公開日2002年12月25日 申請日期2001年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月18日
發(fā)明者陳勁初, 陳清農(nóng), 許勝杰, 胡淼琳, 蔡金川, 戴宇昀, 蕭學(xué)民, 莊正宏 申請人:葡萄王企業(yè)股份有限公司