專利名稱：一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及發(fā)酵工程領(lǐng)域，尤其涉及一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
樟芝屬擔(dān)子菌綱，多孔菌目，多孔菌科，薄孔菌屬，是一種珍稀的藥用真菌，樟芝中含有多種生理活性成分，如多糖、三萜類化合物、超氧歧化酶(SOD)腺苷、蛋白質(zhì)(含免疫蛋白)、多種維生素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、膽固醇、血壓穩(wěn)定物質(zhì)等。其具備的生理活性功能具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、抗病毒、抗過敏、抗高血壓、抑制血小板凝集、降血壓、降膽固醇、抗細(xì)菌、保護(hù)肝臟等。樟芝為臺(tái)灣特有品種，原生長于臺(tái)灣特有的牛樟樹上，是牛樟樹上發(fā)現(xiàn)的唯一木腐菌。因樟芝的木腐性不強(qiáng)，只能表面腐朽，一般對牛樟樹的危害不大，因此樟芝一般生長在心材已腐朽的老樹干的中空內(nèi)壁或倒伏牛樟樹木材陰暗潮濕的表面。樟芝一般不會(huì)生長在香樟樹、白樟樹或其他類似的樹種上，對牛樟樹有明顯宿主專一性。野生樟芝生長極為緩慢，生長期僅僅為每年的6-10月，由于樟芝的寄生病原性并不強(qiáng)，形成子實(shí)體時(shí)間漫長，一年左右才能形成較薄的子實(shí)體。樟芝人工培育可以分為三種方法，I)液體發(fā)酵法，2)固體栽培法，3)椴木栽培法。鑒于樟芝生長緩慢的特性，很多椴木栽培都存在著接種后競爭力低下、存活困難、培養(yǎng)周期長(一般2年左右)、轉(zhuǎn)化率低(一般在10-20%左右)、產(chǎn)率低等問題。雖然樟芝菌是褐腐菌，但其褐腐能力不強(qiáng)，樟芝菌在牛樟樹上只腐朽表面，并不會(huì)將其腐朽致死。因?yàn)檎林マD(zhuǎn)化木材的能力很低，一般只有10% -20%,由于牛樟木的主要成分90%為木質(zhì)素、纖維素和半纖維素，而樟芝一般都是生長在被腐朽過的牛樟樹上，是因?yàn)檎林ゾ纸饽举|(zhì)素和纖維素的能力比較差，木材腐朽是因?yàn)槟静闹械闹饕煞帜举|(zhì)素，纖維素和半纖維素被分解，產(chǎn)生木糖，葡萄糖，戊糖等小分子的單糖以利于樟芝菌生長，而樟芝菌本身分解木材能力不強(qiáng)是因?yàn)檎林ゾ旧矸置诘哪举|(zhì)素分解酶，纖維素，半纖維素分解酶其活力不夠強(qiáng)大，一般白腐菌的轉(zhuǎn)化率都在95%以上，像香菇，木耳，靈芝等白腐菌都能把98%椴木分解轉(zhuǎn)化，而樟芝的椴木轉(zhuǎn)化率才10% _20%，木材的主要成分90%為木質(zhì)素，纖維素，半纖維素，而實(shí)驗(yàn)證明樟芝分解纖維素和半纖維素的能力比較強(qiáng)，分解木質(zhì)素的能力很差，由于樟芝菌無法快速分解木材中木質(zhì)素做營養(yǎng)，所以生長緩慢，因?yàn)檎林o法從他處獲得生長的必須營養(yǎng)，只能依靠牛樟樹本身少量的多糖，淀粉等營養(yǎng)物質(zhì)維持，同時(shí)還依靠本身緩慢地分解木質(zhì)素，纖維素和半纖維素等來獲得生長的必須營養(yǎng)，因而樟芝的產(chǎn)率不高，生長慢。中國專利ZL201010518942.0公開了一種微通氣椴木栽培樟芝的方法，該專利通過對樟木的處理，采用液體發(fā)酵擴(kuò)繁得到液體菌種接種于樟木的表面，采用微透氣的方式，并通過控制培養(yǎng)溫度，濕度，光照等條件進(jìn)行培養(yǎng)，采用微透氣方式，既保證透氣性又有效的防止了雜菌污染，栽培得到樟 芝子實(shí)體；但是該專利未揭示如何提高椴木利用率的方法
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)方法?！N樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)方法，包括以下步驟:人工輔助椴木腐朽；樟芝優(yōu)勢菌培植，待樟芝形成優(yōu)勢菌群后，將其接入人工輔助腐朽的椴木中培養(yǎng)
3-6個(gè)月，得到樟芝子實(shí)體。所述人工輔助椴木腐朽步驟為，向椴木中添加木質(zhì)素酶，木聚糖酶，纖維素酶和半纖維素酶，或者向椴木中添加真菌，所述真菌可產(chǎn)生分解木質(zhì)素，纖維素和半纖維素的酶。所述半纖維素酶包括β -葡聚糖酶，半乳聚糖酶和木聚糖酶。所述真菌·為可食用的白腐真菌或褐腐真菌。所述白腐真菌為香菇、木耳或靈芝。所述人工輔助椴木腐朽步驟中同時(shí)加入樟芝菌種。所述人工輔助椴木腐朽步驟中椴木首先打孔，滅菌，無菌條件下向孔中添加木質(zhì)素酶，木聚糖酶，纖維素酶，半纖維素酶，或者向孔中添加可產(chǎn)生木質(zhì)素酶或纖維素酶的可食用的白腐真菌或者褐腐真菌。所述樟芝優(yōu)勢菌培植步驟中，樟芝菌種為液體菌種或固體菌種。所述液體菌種的培養(yǎng)方法為:將已經(jīng)活化的樟芝斜面菌種切成2-10mm大小的菌絲塊接種于液體培養(yǎng)基中，于80-150r/min，15_35°C恒溫培養(yǎng)5_15天，做液體菌種備用。所述固體菌種的培養(yǎng)方法為:將已經(jīng)活化的樟芝斜面菌種切成2-10mm大小的菌絲塊接種于液體培養(yǎng)基中，于80-150r/min，15_35°C恒溫培養(yǎng)5_15天，得液體菌種備用，將10ml-20ml液體菌種接種到固體樟粉培養(yǎng)基中，上搖床培養(yǎng),待木粉成球狀并長滿粉紅色菌體和孢子后可得固體菌種。本發(fā)明所述方法先用木質(zhì)素分解酶，木聚糖酶，纖維素酶和半纖維素酶，或者接種產(chǎn)木質(zhì)素分解酶系和分解纖維素酶系的菌種，如香菇，木耳，靈芝，等可食用的菌種進(jìn)行分解腐化椴木，先將椴木的木質(zhì)素和纖維素部分水解，以提供樟芝菌的必需營養(yǎng)。本方法有效解決了樟芝對椴木的轉(zhuǎn)化率和營養(yǎng)補(bǔ)給的問題，從而有效提高了生產(chǎn)的速率和效率，培養(yǎng)出子實(shí)體，樟芝菌對木頭的轉(zhuǎn)化率從原始的10%_20%可以有效提高到50%-80%，解決了樟芝液體培養(yǎng)過程的滲透壓問題和出菇的問題，液體培養(yǎng)一般培養(yǎng)基總濃度(W/V)不超過10%，這樣就限制了樟芝的產(chǎn)量，而椴木培養(yǎng)過程中，營養(yǎng)物質(zhì)是從木質(zhì)素和纖維素水解而來，木質(zhì)素分解酶系和纖維素·分解酶系不斷水解椴木，使樟芝源源不斷獲得營養(yǎng)而不存在滲透壓的問題，所以有足夠的營養(yǎng)合成菌體而形成子實(shí)體，該工藝有效提高了樟芝栽培4-8倍的產(chǎn)率，時(shí)間有效縮短了 5-8個(gè)月，從而有效實(shí)現(xiàn)了樟芝椴木子實(shí)體工業(yè)化培養(yǎng)方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)方法本實(shí)施例采用樟芝菌種:ATCC200183。材料:牛樟樹椴木，高溫PE袋。1.樟芝液體菌種的培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基:麥芽浸膏20g，葡萄糖20g，蛋白胨lg，硫酸鎂0.5g，瓊脂粉20g，定容1L，PH5.0，然后加瓊脂制備斜面培養(yǎng)基。
液體種子培養(yǎng)基:麥芽浸膏20g，葡萄糖20g，蛋白胨lg，硫酸鎂0.5g定容1L，PH5.0。
樟芝液體菌種的培養(yǎng)，將已經(jīng)活化的樟芝斜面菌種切成5mm大小的菌絲塊接種于液體種子培養(yǎng)基中，250ml三角瓶裝IOOml培養(yǎng)液，于120r/min，25°C恒溫培養(yǎng)7天，做液體囷種備用。2.將椴木中心打拇指大的孔徑，裝高溫PE袋滅菌，冷卻后無菌條件下加入木質(zhì)素酶，木聚糖酶，纖維素酶，半纖維素酶，用復(fù)配培養(yǎng)液混合浸泡10-30天(此時(shí)也可以一起加入樟芝液體菌種)，使木頭腐化酥軟，培養(yǎng)液大部分被吸入椴木中，此時(shí)手捏木頭有腐化過的松軟的感覺，然后無菌操作接入上面培養(yǎng)好的樟芝液體種子，接種量10%，在25°C，濕度70%以上黑暗無菌條件下培養(yǎng)10-15天可看到椴木長滿橘紅色的菌絲體繼續(xù)培養(yǎng)，60天后可以看到厚度為1-2厘米的子實(shí)體或者菌塊。接種量的范圍可以是5%_10%，培養(yǎng)溫度在20_30°C。復(fù)配培養(yǎng)液:用1000ML水煮IOOg馬鈴薯過濾得出的溶液配MEA培養(yǎng)基(2%葡萄糖，2%麥芽浸膏，0.1%蛋白胨，硫酸鎂0.5g，pH5.00)，121°C，滅菌20min。本實(shí)施例還可用香樟椴木，黃樟椴木，櫟樹椴木等樟樹品系的椴木。每種椴木的效果不一致，都能生長，牛樟樹最快，其次是香樟和黃樟。本實(shí)施例還可用樟芝菌種CCRC36716，AC0623，每種菌種獨(dú)立接種，還可以任選兩種或三種同時(shí)接種。實(shí)施例2 —種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)方法1.樟芝液體菌種的培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基:麥芽浸膏20g，葡萄糖20g，蛋白胨lg，硫酸鎂0.5g，瓊脂粉20g，定容1L, PH5.0。液體種子培養(yǎng)基:麥芽浸膏20g,葡萄糖20g,蛋白胨Ig,硫酸鎂0.5g,定容1L,PH5.0。固體樟粉培養(yǎng)基:麥芽浸膏20g，葡萄糖20g，蛋白胨lg，硫酸鎂0.5g，磷酸二氫鉀Ig,定容1L，然后與樟樹的木粉混合均勻，配成含水量40%-90%含水量的固體培養(yǎng)基。樟芝菌種:CCRC36716。材料:香樟椴木,高溫PE袋。樟芝固體菌種的培養(yǎng)，將已經(jīng)活化的樟芝斜面菌種切成5mm大小的菌絲塊接種于液體種子培養(yǎng)基中，250ml三角瓶裝IOOml培養(yǎng)液，于150r/min，25°C恒溫培養(yǎng)7天，得液體菌種備用，將15ml液體菌種接種到250ml三角瓶樟粉固體培養(yǎng)基中，上搖床培養(yǎng)10天，等木粉成球狀并長滿粉紅色菌體和孢子后可得固體種子。搖床培養(yǎng)，可以增大通氣量，因?yàn)檎林バ柩趿枯^大，所以培養(yǎng)基不能壓實(shí)，固體樟粉培養(yǎng)基在上搖床后可以增大通氣量，同時(shí)也能使木粉搖成團(tuán)，上搖床在剪切力作用下打斷菌絲體，這樣可以獲得更多的生長點(diǎn)，以提高生長的速度。2.將椴木中心打拇指大的孔徑，裝高溫PE袋滅菌，冷卻后無菌條件下加入木質(zhì)素酶，木聚糖酶，纖維素酶，半纖維素酶，復(fù)配培養(yǎng)液混合浸泡10-30天(此時(shí)也可以一起加入樟芝固體菌種)，使木頭腐化酥軟，培養(yǎng)液大部分被吸入椴木中，此時(shí)手捏木頭有腐化過的感覺，然后無菌操作接入上面培養(yǎng)好的樟芝固體種子，接種量在10%-20%在20-30°C，黑暗無菌條件下培養(yǎng)10-15天可看到椴木長滿橘紅色的菌絲體，60天后可以看到厚度為1-2厘米的子實(shí)體。本實(shí)施例還可選用牛樟鍛木，黃樟鍛木，櫟樹鍛木等樟樹品系的鍛木。本實(shí)施例還可用樟芝菌種ATCC200183和AC0623，每種菌種獨(dú)立接種，還可以任選兩種同時(shí)接 種。
權(quán)利要求
1.一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)方法，包括以下步驟: 人工輔助椴木腐朽； 樟芝優(yōu)勢菌培植，待樟芝形成優(yōu)勢菌群后，將其接入人工輔助腐朽的椴木中培養(yǎng)3-6個(gè)月，得到樟芝子實(shí)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)方法，其特征在于，所述人工輔助椴木腐朽步驟為，向椴木中添加木質(zhì)素酶，木聚糖酶，纖維素酶和半纖維素酶，或者向椴木中添加可食用的真菌，所述真菌可產(chǎn)生分解木質(zhì)素，纖維素和半纖維素的酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)法，其特征在于，所述半纖維素酶包括葡聚糖酶，半乳聚糖酶和木聚糖酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)法，其特征在于，所述真菌為可食用的白腐真菌或褐腐真菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)法，其特征在于，所述白腐真菌為香菇、木耳或靈芝。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種樟芝子實(shí)體鍛木二段培養(yǎng)方法,其特征在于，所述人工輔助椴木腐朽步驟中同時(shí)加入樟芝菌種。
7.根據(jù)權(quán)利要求2、3或6中任意一項(xiàng)所述的一種樟芝子實(shí)體鍛木二段培養(yǎng)方法,其特征在于，所述人工輔助椴木腐朽步驟中椴木首先打孔，滅菌，無菌條件下向孔中添加木質(zhì)素酶，木聚糖酶，纖維素酶，半纖維素酶，或者向孔中添加可產(chǎn)生木質(zhì)素酶或纖維素酶的可食用的白腐真菌或者褐腐真菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)法，其特征在于，所述樟芝優(yōu)勢菌培植步驟中，樟芝菌種為液體菌種或固體菌種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)法，其特征在于，所述液體菌種的培養(yǎng)方法為:將已經(jīng)活化的樟芝斜面菌種切成2-10mm大小的菌絲塊接種于液體培養(yǎng)基中，于80-150r/min，15_35°C恒溫培養(yǎng)5_15天，做液體菌種備用。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)法，其特征在于，所述固體菌種的培養(yǎng)方法為:將已經(jīng)活化的樟芝斜面菌種切成2-10mm大小的菌絲塊接種于液體培養(yǎng)基中，于80-150r/min，15_35°C恒溫培養(yǎng)5_15天，得液體菌種備用，將10ml-20ml液體菌種接種到固體樟粉培養(yǎng)基中， 上搖床培養(yǎng)，待木粉成球狀并長滿粉紅色菌體和孢子后可得固體菌種。
全文摘要
本發(fā)明涉及真菌培養(yǎng)領(lǐng)域，提供了一種樟芝子實(shí)體椴木二段培養(yǎng)方法，包括以下步驟人工輔助椴木腐朽；樟芝優(yōu)勢菌培植，待樟芝形成優(yōu)勢菌群后，將其接入人工輔助腐朽的椴木中培養(yǎng)，得到樟芝子實(shí)體。本方法有效解決了樟芝對椴木的轉(zhuǎn)化率和營養(yǎng)補(bǔ)給的問題，從而有效提高了樟芝栽培4-8倍的產(chǎn)率，時(shí)間有效縮短了5-8個(gè)月，從而有效實(shí)現(xiàn)了樟芝椴木子實(shí)體工業(yè)化培養(yǎng)方式。
文檔編號(hào)A01G1/04GK103109679SQ20131006593
公開日2013年5月22日 申請日期2013年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月28日
發(fā)明者趙宗杰, 謝海濤, 楊如鋼 申請人:深圳市仁泰生物科技有限公司