專利名稱：固體制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種[3-[(2R)-[[(2R)-(3-氯苯基)2-羥乙基]氨基]丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]醋酸晶體(下文有時(shí)稱為化合物A)和含有化合物A晶體作藥物的藥劑，本發(fā)明尤其涉及一種固體制劑，其中制劑的大小(體積)、藥物的含量和均勻性、以及藥物地穩(wěn)定性是得到保證的，其次藥物從制劑的溶出是快的。
背景技術(shù)：
化合物A表現(xiàn)出有效的β-腎上腺素受體激發(fā)活性并具有優(yōu)異的腎上腺受體選擇性，它能有效預(yù)防或治療糖尿病和肥胖病(WO96/16938)。
化合物A表現(xiàn)出極有效的藥物活性，因而當(dāng)它形成藥品組合物時(shí)，這種組合物會(huì)是低含量制劑，即其中每單位劑量的活性化合物含量低。但是，伴隨著制劑中化合物A的含量降低，出現(xiàn)一種現(xiàn)象，即化合物A自身的化學(xué)穩(wěn)定性大為降低。此外，當(dāng)除化合物A外的賦形劑的量增加到該大小適宜作藥劑的程度時(shí)，每單位劑量中的化合物A的含量變得不勻，從而難于得到有均勻化合物A含量的制劑。在這種情況下，希望研制一種無上述缺點(diǎn)的化合物A的制劑，且化合物A能很快地從其中溶出。
本發(fā)明的目的在于提供一種化合物A的制劑，它能保證制劑的大小(立方容量)、化合物A的含量均勻性和化合物A的穩(wěn)定性，而且化合物A能很快地從其中溶出。發(fā)明簡(jiǎn)述
本發(fā)明包括下列的不同實(shí)施方案。(1)一種[3-[(2R)-[[(2R)-(3-氯苯基)2-羥乙基]-氨基]丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]醋酸晶體(下文有時(shí)稱為“化合物A晶體”)；(2)一種[3-[(2R)-[[(2R)-(3-氯苯基)2-羥乙基]-氨基]丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]醋酸晶體，該晶體在粉末X-射線衍射圖上于衍射角(2θ)為約5.9°、約17.9°、約20.5°和約24.0°處有特征衍射峰(下文有時(shí)亦稱為“化合物A的I型晶體”)；(3)一種化合物A的晶體，其在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)的粒度不大于100μm，在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)的粒度不大于200μm(下文有時(shí)稱為“藥物”)；(4)一種由上述(3)的晶體組成的顆粒(藥物)；(5)一種由(a)藥物、(b)填充劑，(c)分解劑，和(d)粘合劑組成的顆粒；(6)一種含上述(4)顆粒的固體制劑；(7)一種由上述(4)的顆粒壓制的片劑；(8)一種由上述(4)的顆粒和外部賦形劑壓制的片劑；(9)一種β3-腎上腺素受體興奮劑，該興奮劑含上述(3)的晶體(藥物)；(10)一種治療糖尿病的試劑，該試劑含上述(3)的晶體(藥物)；(11)一種治療肥胖病的試劑，該試劑含上述(3)的晶體(藥物)。
在整個(gè)現(xiàn)有敘述和權(quán)利要求中，“化合物A的晶體”系指[3-[(2R)-[[(2R)-(3-氯苯基)-2-羥乙基]氨基]丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]醋的純晶體，而且如下所述，基于基X-射線衍射圖的衍射峰，可將化合物A的晶體分成I型晶體(化合物A的I型晶體)和II型晶體(化合物A的II型晶體)。I型晶體、II型晶體或這些晶體的混合物可按其制備方法制取。“化合物A的晶體”包括所有這些晶體。
“藥物”系指上面所述的化合物A的晶體，其粒度在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)不大于100μm，其粒度在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于200μm。優(yōu)選粒度在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)不大于50μm，在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于150μm。更優(yōu)選粒度在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)不大于30μm，在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于100μm。本發(fā)明的“藥物”包括所有這些。
“累計(jì)重量分布值”系指按其粒度將粉末分級(jí)，將從分布端算起的各個(gè)粒度的重量加合得到的值，它用粉末總重量的百分?jǐn)?shù)表示。作為一種有顆粒大小分布的粉末(顆粒聚集體)平均粒度的方法，通常采用“累計(jì)重量分布值為50％時(shí)的粒度”。此外，在本發(fā)明的敘述和權(quán)利要求中“累計(jì)重量分布值為95％的粒度”用作調(diào)整粗顆粒含量的指數(shù)，它影響化合物從制劑中溶出的方式(參見Alfonso R.Gennard(Ed.)Particle Size Measurement and Classification(粒度測(cè)量和分級(jí))，Remington′s Pharmaceutical Sciences(Remington藥物科學(xué))，17th edition，Part 8，Chapter 89，pp 1588-1589，1985；Swithenbank，J.，Beer，J.M.Taylot，D.S.Abbot，D.and McCreath，G.C.A laser diagnostice technique for the measurement of dropletand particle size distribution(用于小滴和粒度分布測(cè)量的激光檢定技術(shù))，AIAA Paper No.76-79(1976)；and Hayashi，S.A lasersmall angle scattering instrument for the determination ofsize and concentration distribution in sprays(用于噴霧中大小和濃度分布測(cè)定的激光小角散射儀)，(Hirleman，E.D.and othersEds.)，Liquid particle Size Measurement Techniques(液體粒度測(cè)量技術(shù))2nd Volume，Philadelphia，ASTM，1990)。附圖簡(jiǎn)述


圖1是在制劑1中得到的化合物A的I型晶體的粉末X-射線衍射圖。
圖2是在制劑2中得到的化合物A的II型晶體的粉末X-射線衍射圖。實(shí)施本發(fā)明的最佳模式
本發(fā)明的化合物A的晶體可通過示于下列流程圖的方法制備。
即是說，式I化合物(其中R是酚式羥基的保護(hù)基，或-CH2COX，X是一種較低的烷氧基、芐氧基、較低的烷基、氨基、單-或雙-低烷基氨基、或環(huán)氨基)在堿的存在下與式II化合物(其中R1是氨基的保護(hù)基，Y是鹵素原子)反應(yīng)得到式III化合物(其中R和R1如上面定義)。這樣得到的式III化合物再與還原劑反應(yīng)得到式IV化合物(其中R11是氫原子或氨基保護(hù)基，R如上面定義)。然后，(i)當(dāng)式IV的R是酚式羥基的保護(hù)基(而且如果式IV的R11是氫原子，則化合物IV的氨基再次被保護(hù))時(shí)，則酚式羥基的保護(hù)基被選擇性地去掉，所得的式V的化合物(其中R1如上面定義)與結(jié)構(gòu)式VI的化合物(其中Y1是醇反應(yīng)性基，X如上面定義)反應(yīng)，然后選擇性地去掉氨基的保護(hù)基以得到化合物VII；或者(ii)當(dāng)式IV的R是-CH2COX，R11是氨基的保護(hù)基時(shí)，氨基的保護(hù)基被選擇性地去掉，得到化合物VII(其中X如上面定義)，所得化合物VII與式VIII的化合物反應(yīng)，然后所得物質(zhì)在酸性或堿性條件下經(jīng)氫解或水解，有效地得到化合物A的晶體。
用于制備本發(fā)明的化合物A的晶體的方法中的術(shù)語在下面闡明。
“低烷基”包括碳原子為1-6的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基和異丁基，優(yōu)選甲基和乙基，更優(yōu)選甲基。
“低烷氧基”包括碳原子為1-6的直鏈或支鏈烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基和異丙氧基，優(yōu)選甲氧基、乙氧基和丙氧基，更優(yōu)選甲氧基和乙氧基。
“單-或雙-低烷基氨基”包括，例如甲氨基、二甲氨基、乙氨基、甲基乙基氨基、二乙氨基、丙氨基、異丙氨基、和二丙氨基，優(yōu)選甲氨基、二甲氨基、乙氨基、二乙氨基、和二丙氨基，更優(yōu)選二甲氨基和二乙氨基。
“環(huán)氨基”包括5元-7元環(huán)氨基，例如吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、和高哌啶基，優(yōu)選吡咯烷基、嗎啉基、和哌啶基，更優(yōu)選吡咯烷基和哌啶基。
“酚式羥基的保護(hù)基和氨基的保護(hù)基”可以是通常用于有機(jī)合成領(lǐng)域的保護(hù)基(例如，T.W.Greene，D.G.M.Muts，Protective Groupsin Organic Synthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基)，John Wiley & Sons，Inc，Second Edition，1991，p 143-170 and p.309-385)，并且包括容易用還原或水解去除的取代基。酚式羥基的保護(hù)基和氨基的保護(hù)基的組合應(yīng)該這樣選擇，即它們中的一個(gè)可選擇性地去除。
“酚式羥基的保護(hù)基”包括，例如，甲基、甲氧甲基、甲氧乙氧甲基、四氫吡喃基、苯甲酰甲基、烯丙基、異丙基、叔丁基、芐基、二苯基甲基、三苯基甲基、乙酰基、三甲基乙?；?、苯甲?；?、甲氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、和芐基氧基羰基，優(yōu)選甲基、叔丁基、芐基、二苯基甲基、三苯基甲基和烯丙基，更優(yōu)選甲基、芐基、二苯基甲基和三苯基甲基。
“氨基的保護(hù)基”包括，例如甲氧羰基、乙氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、叔丁氧羰基、芐氧羰基、乙烯基氧羰基，9-芴基甲氧羰基、甲?；⒁阴；?、三氟乙酰基、苯甲酰、苯二酰亞氨基、對(duì)-甲苯磺?；?、苯磺?；⒓淄榛酋；⒑推S基，優(yōu)選叔丁氧羰基、芐氧羰基、9-芴基甲氧羰基、乙酰基，和三氟乙酰基，更優(yōu)選叔丁氧羰基、芐氧羰基、和9-芴基甲氧羰基。
“醇的活性基”包括，例如鹵原子、低級(jí)烷基磺酰氧基(例如甲烷磺酰基，乙烷磺?；?、和芳基磺酰氧基(例如苯磺酰氧基、對(duì)-甲苯磺酰氧基)。
“鹵原子”是氟原子、氯原子、溴原子、或碘原子，優(yōu)選氯原子。
下面將較詳細(xì)闡明制備化合物A的晶體的方法。工序A式III的化合物的制備
式III的化合物可通過式I的化合物在有堿存在下在一種合適的溶劑中與結(jié)構(gòu)式II的化合物反應(yīng)制備。
堿包括，例如氫化鈉、金屬醇鹽、格利雅試劑、烷基鋰、氨基鈉和二烷基氨基鋰等等。一般說來，在一種吲哚衍生物在有堿存在下與一種親核性試劑反應(yīng)的情況下，得到1-取代化合物和3-取代化合物。由于格利雅試劑廣泛用于優(yōu)選得到3-取代化合物，在本工序中亦優(yōu)選格利雅試劑。
格利雅試劑包括甲基鎂化氯、甲基鎂化溴、乙基鎂化溴、叔丁基鎂化氯、苯基鎂化氯等等，優(yōu)選甲基鎂化溴和叔丁基鎂化氯。格利雅試劑的通常使用量按1摩爾式I化合物計(jì)約為1-8摩爾，優(yōu)選2-4摩爾。
反應(yīng)通常在約-50℃-約30℃的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選-20℃-約0℃。反應(yīng)優(yōu)選在惰性氣體如氮或氬的氣氛中進(jìn)行。此外，無機(jī)試劑如氯化鋅、氯化鋁、溴化銅等可添加到反應(yīng)體系中。溶劑可以是芳族烴(例如苯、甲苯等)、醚(例如二乙醚，四氫呋喃等)、氯仿、和二氯甲烷，而且這些溶劑應(yīng)采用無水型。
式II的化合物可通過氨基保護(hù)的α氨基酸在合適的溶劑中與無機(jī)鹵化物(例如五氯化磷、三氯化磷、三溴化磷等等)或有機(jī)鹵化物(例如磷酰氯、亞硫酰氯、草酰氯、光氣等)反應(yīng)制取。所用鹵化物的量按1摩爾原料計(jì)約為1-5摩爾，優(yōu)選1-2.5摩爾?？蓪，N-二甲基甲酰胺或六甲基磷酰三胺添加到反應(yīng)體系中。反應(yīng)通常在約0℃-約200℃的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選在約25℃-約130℃的溫度下進(jìn)行。溶劑可以是芳族烴(例如苯、甲苯等)或鹵化烴(例如氯仿、二氯甲烷等)。工序B式IV的化合物的制備
式IV的化合物可通過用合適的還原劑在合適的溶劑中還原式III的化合物制備。還原劑可以是，例如氫化鋰鋁、二(乙甲氧乙氧)-氫化鋁鈉、硼氫化鈉、硼氫化鋰、硼氫化鈣、二硼烷、二異丁基氫化鋁等等，優(yōu)選硼氫化堿金屬。R為-CH2COX的化合物III的還原應(yīng)采用不還原R的羰基的還原劑。所用還原劑的量按1摩爾式III的化合物計(jì)約為2-6摩爾，優(yōu)選3-4摩爾。還原溫度可隨所采用的還原劑而變化，但通常在約-80℃-約150℃的范圍，優(yōu)選約25℃-約150℃的范圍。溶劑根據(jù)所用的還原劑類型選擇，可以是醚(例如二乙醚、四氫呋喃等)、甲苯、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、水等等。
在工序B中，如果得到其中R為酚式羥基的保護(hù)基，R11為氫原子的式IV的化合物，則該化合物在其氨基基團(tuán)經(jīng)再保護(hù)之后用于下面的工序C。
氨基的保護(hù)基的引入是按肽合成領(lǐng)域內(nèi)的常規(guī)方法進(jìn)行(例如，Nobuo IZUMIYA等，F(xiàn)undamentals and Experiments of PeptideSynthesis(肽合成的基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn))，Maruzene，1985，p.16-40)。例如其中R11為氫原子的式IV的化合物與二叔丁基酸式碳酸鹽在一種適宜的溶劑及室溫下反應(yīng)得到式IV的化合物，其中R11是叔丁氧羰基。
此外，在工序B中，如果得到其中R是-CH2COX，R11是氨基的保護(hù)基的式IV的化合物，則該化合物可直接用于工序E。
再次，在工序B中，如果得到其中R是-CH2COX，R11是氫原子的式IV的化合物，則該化合物與式VII的化合物一樣，并可直接用到工序F。工序C式V的化合物的制備
其中R11是氨基的保護(hù)基，R是酚式羥基的保護(hù)基的化合物IV的酚式羥基的保護(hù)基的去除是通過還原或水解進(jìn)行的，它應(yīng)根據(jù)要去除的保護(hù)基的類型選擇。
還原去除通過氫解或采用金屬粉末如鋅粉進(jìn)行。
氫解在有催化劑如碳上的鈀、氫氧化鈀、氧化鉑等存在下，在氫氣氛中進(jìn)行。反應(yīng)通常于約20℃-約80℃的溫度下在大氣壓下或低于大氣壓下進(jìn)行?？刹捎眉姿徜@、甲酸、環(huán)己環(huán)、肼等進(jìn)行催化氫轉(zhuǎn)移還原。溶劑可以是醇類(例如甲醇、乙醇等)、醋酸乙酯、醋酸、水等，而且這些溶劑可單獨(dú)使用或以這些溶劑中的兩種或多種混合物的形式使用。
水解是在一種合適的溶劑中在酸性條件或堿性條件下進(jìn)行。反應(yīng)溫度可按擬去除的保護(hù)基的類型變化，但它通常在約0℃-約150℃范圍內(nèi)，優(yōu)選在約20℃-約100℃范圍內(nèi)。溶劑可以是醇類(例如甲醇、乙醇等)、乙腈、水、N，N-二甲基甲酰胺等，這些溶劑可單獨(dú)使用或以這些溶劑的兩種或多種混合物的形式使用。堿可以是堿金屬氫氧化物(例如，氫氧化鈉、氫氧化鉀等)，和有機(jī)堿(例如哌啶、哌嗪等)，酸可以是氫氯酸、氫溴酸、三氟醋酸、硫酸、甲酸、醋酸、甲磺酸等。工序D和工序E式VII的化合物的制備
式VII的化合物從式V的化合物通過工序D和E制備(工序D)
式V的化合物和式VI的化合物在適宜的溶劑中進(jìn)行加成反應(yīng)。反應(yīng)溫度可根據(jù)所用起始化合物的類型變化，它通常在約50℃-約200℃的范圍內(nèi)。溶劑可以是芳族烴(例如苯、甲苯等)、酮類(例如丙酮、甲基乙基酮等)、醚類(例如四氫呋喃、二噁烷等)，醇類(例如乙醇、異丙醇等)、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、1，3-二甲基-2-咪唑啉酮等，而且這些溶劑可單獨(dú)使用或以這些溶劑的兩種或多種混合物形式使用。
反應(yīng)優(yōu)選在有堿存在下進(jìn)行，堿可以是，例如無機(jī)堿如堿金屬碳酸鹽(例如碳酸鈉、碳酸鉀等)、堿金屬碳酸氫鹽(如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀)、堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀等)，或有機(jī)堿如三乙胺、三丁胺、N-甲基嗎啉等。如果采用其中Y1是氯原子或溴原子的式VI的化合物則反應(yīng)可通過添加堿金屬碘化物(例如碘化鈉、碘化鉀等)，或鹵化的四烷基銨(例如四-正-丁基氯化銨等)而平穩(wěn)進(jìn)行。
利用本反應(yīng)，其中R是-CH2COX的化合物I可從氫氧吲哚和式VI的化合物按相似的方式制備。(工序E)
式VII的化合物可通過選擇性去除在工序D中制備的化合物的氨基的保護(hù)基制備。
氨基的保護(hù)基通過還原或水解去除，它應(yīng)根據(jù)擬去除的保護(hù)基的類型選擇。
還原去除是通過氫解或利用金屬粉末如鋅粉進(jìn)行。
氫解在有催化劑如碳上的鈀、氫氧化鈀、氧化鉑等存在下在氫氣氛中進(jìn)行。反應(yīng)溫度通常于約20℃-約80℃氣壓為大氣壓力或負(fù)壓。此外，亦可采用甲酸銨、甲酸、環(huán)己烯、肼等氫源進(jìn)行催化氫轉(zhuǎn)移還原。溶劑可以是醇類(例如甲醇、乙醇等)、醋酸乙酯、醋酸、水等，而且這些溶劑可單獨(dú)使用或以這些溶劑的兩種或多種的混合物形式使用。
水解在酸性條件或堿性條件下在合適的溶劑中進(jìn)行。反應(yīng)溫度可根據(jù)擬去除的保護(hù)基的類型變化，它通常在約0℃-約150℃，優(yōu)選約20℃-約100℃。溶劑可以是醇類(例如甲醇、乙醇等)、乙腈、水、N，N-二甲基甲酰胺等，而且這些溶劑可單獨(dú)使用或這些溶劑的兩種或多種的混合物形式使用。堿可以是堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀等)，或有機(jī)堿如哌啶、哌嗪等。酸可以是氫氯酸、氫溴酸、三氟醋酸、硫酸、甲酸、乙酸、草酸、甲烷磺酸等。工序F和工序G式IX的化合物的制備
式IX的化合物可從結(jié)構(gòu)式VII的化合物通過工序F和G制備。(工序F)
式VII的化合物和式VIII的化合物在合適的溶劑中或無溶劑中反應(yīng)。
反應(yīng)溫度可根據(jù)起始化合物的類型變化，通常在約20℃-約150℃，優(yōu)選在約25℃-約100℃，溶劑可以是芳族烴(例如苯、甲苯等)、酮類(例如丙酮、甲基乙基酮等)、醚類(例如四氫呋喃、二噁烷等)，醇類(例如乙醇、異丙醇等)、乙腈、二甲基氧化硫，N，N-二甲基甲酰胺、和1，3-二甲基-2-咪唑啉酮，而且這些溶劑可單獨(dú)使用或以這些溶劑的兩種或多種混合物的形式使用。在反應(yīng)體系中可添加三甲基甲硅烷基乙酰胺或雙三甲基甲硅烷基乙酰胺。
在本反應(yīng)中，可采用其酸加成鹽代替式VII的化合物，而且化合物VII的酸加成鹽可以是與無機(jī)酸的鹽如氫氯化物、氫溴化物等的鹽或是與有機(jī)酸的鹽如草酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽等。如果本發(fā)明采用酸加成鹽，則反應(yīng)在堿的存在下進(jìn)行。堿包括，例如無機(jī)堿如堿金屬碳酸氫鹽(例如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等)和堿金屬碳酸鹽(例如碳酸鈉、碳酸鉀等)，或有機(jī)堿如三乙胺、三丁胺、二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉等。(工序G)
式IX的化合物可通過使工序F中得到的化合物(除去X為低級(jí)烷基之外)再經(jīng)在合適溶劑中的氫解，或者在酸或堿性條件下的水解來制備。
氫解在有催化劑例如碳上的鈀、氫氧化鈀、氧化鉑等的存在下，在氫氣氛中進(jìn)行。反應(yīng)于約20℃-約80℃和在大氣壓下或負(fù)壓下進(jìn)行?？刹捎弥T如甲酸銨、甲酸、環(huán)己烯、肼等氫源實(shí)現(xiàn)催化氫轉(zhuǎn)移還原。溶劑可以是醇類(例如甲醇、乙醇等)、醋酸乙酯、醋酸、水等，而且這些溶劑可以單獨(dú)使用或以這些溶劑的兩種或多種的混合物的形式使用。
水解在酸性或堿性條件下于溶劑中進(jìn)行。反應(yīng)溫度可根據(jù)起始化合物的類型變化，它通常在約0℃-約150℃，優(yōu)選在約20℃-約80℃。溶劑可以是醇類(例如甲醇、乙醇、異丙醇等)、二噁烷、水、或這些溶劑的混合物。酸包括，例如無機(jī)酸如氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸等，和有機(jī)酸如甲酸、乙酸、三氟醋酸、對(duì)-甲苯磺酸、甲磺酸等。堿包括堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀等)和堿金屬碳酸鹽(例如碳酸鈉、碳酸鉀等)。
這樣得到的化合物A的晶體是化合物A的I型晶體，在粉末X射線衍射圖中特性衍射峰出現(xiàn)在衍射角(2θ)約為5.9°、17.9°、20.5°和約24.0°處。
化合物A的I型晶體從溶劑如甲醇中重結(jié)晶，以得到一種晶體其特征衍射峰出現(xiàn)在衍射角(2θ)約為5.9°、17.5°、20.8°和23.3°(化合物A的II型晶體)，但是化合物A的I型晶體在工業(yè)上比化合物A的II型晶體容易制備。
在本發(fā)明的制劑中，在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)粒度不超過100μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)粒度不大于200μm的化合物A晶體可用作藥物。優(yōu)選是在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)粒度不大于50μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)粒度不大于150μm的晶體，更優(yōu)選是在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)粒度不大于30μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)粒度不大于100μm的晶體。在使用滿足上述要求的藥物時(shí)，可得到藥物能從中能很快溶出的制劑。此外，由于藥物有時(shí)還能以集聚體的形式得到，則在藥物中該集聚體的含量宜小于50％，且?guī)缀鯙閱我坏牧６确植肌?br> 藥物的粒度(累計(jì)重量分布值為50％和95％時(shí))用測(cè)量藥劑粒度的常規(guī)方法測(cè)定，例如用標(biāo)準(zhǔn)篩分法、沉降法、光散射法、成象分析法等，但是測(cè)量方法應(yīng)不限于這些方法。
滿足上述要求的本藥物可通過在化合物A合成過程中選擇結(jié)晶條件和/或選擇化合物A合成之后的制粉方法得到。例如，在化合物A合成之后，可用錘式粉碎機(jī)、流體能量粉碎機(jī)、行星球粉碎機(jī)、振動(dòng)球粉碎機(jī)、錐球粉碎機(jī)、滾壓粉碎機(jī)或細(xì)桿粉碎機(jī)在根據(jù)采用的粉碎機(jī)選定的條件下將化合物A制粉以得到藥物。在化合物A的合成過程中可通過控制化合物A的粒度和集聚率得到藥物，或者通過將合成過程中的沉淀晶體溶解在合適的溶劑如水或有機(jī)溶劑等中，再將所得溶液在二氧化碳?xì)怏w的超臨界的流體中在選定的條件下噴霧干燥或干燥得到藥物。
為了用這樣得到的藥物制備預(yù)期的醫(yī)藥制劑，需制備含該藥物的顆粒。
此外，顆粒除可含(a)藥物、(b)填充劑、(c)分解劑和(d)粘合劑外，而且還可含滑動(dòng)劑或潤(rùn)滑劑等。
由于非藥物的賦形劑在顆粒中直接與藥物接觸，宜采用與藥物相容的賦形劑，并將它們以合適的比例引入藥物，通過這種方式保證藥物的穩(wěn)定性。顆粒中除藥物外的賦形劑包括，例如填充劑、分解劑和粘合劑，但是，如果需要，滑動(dòng)劑、潤(rùn)滑劑等亦可用作賦形劑。
顆粒中除藥物外的賦形劑的用量按1重量份藥物計(jì)，通常為500重量份或更低，優(yōu)選300重量份或更低，更優(yōu)選100重量份或更低。
填充劑包括例如乳糖、谷物淀粉、蔗糖、海藻糖、D-甘露醇、赤蘚醇、麥芽糖醇和乙基纖維素。分解劑包括例如低取代的羥丙基纖維素、羧甲纖維素鈣、和交聯(lián)-羧甲纖維素鈉。粘合劑包括例如羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、支鏈淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮、明膠和羧甲纖維素鈉。
滑動(dòng)劑和潤(rùn)滑劑包括例如硬脂酸鎂、氫化蓖麻油、輕體無水硅酸和滑石。如果采用硬脂酸鎂，則用量按制劑總重量計(jì)為1重量％-5重量％，優(yōu)選1重量％-4重量％，更優(yōu)選用量為1.5重量％-3重量％。
顆粒的制備宜預(yù)先制備藥物和部分或全部填充劑的預(yù)混粉末，接著篩分或粉化，然后將剩余的賦形劑加入其中，如果需要，接著制?；蛘{(diào)整混合物大小，用這種方式保證藥物的含量均勻。
混合和篩分用手采用24-60目的篩進(jìn)行，或者采用具有合適混合能力的篩分設(shè)備，例如振蕩器進(jìn)行?；旌虾头刍捎弥品蹤C(jī)，例如錘式粉碎機(jī)進(jìn)行。
制粒采用例如流化床制粒機(jī)、攪拌制粒機(jī)或高剪切制粒機(jī)進(jìn)行濕制粒。
這樣制得的顆粒的粒度通常在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)不大于350μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于1400μm。優(yōu)選顆粒的粒度在累計(jì)重量分布值為50％宜不大于300μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于1000μm。更優(yōu)選顆粒的粒度在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)更宜不大于250μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)更宜不大于800μm。采用具有優(yōu)選粒度的顆粒更加保證了藥物的含量均勻性。
藥物的粒度(在累計(jì)重量分布值為50％和95％時(shí))是用測(cè)量藥劑粒度的常規(guī)方法測(cè)定的，例如采用標(biāo)準(zhǔn)篩分法、沉降法、光散射法、成象分析法等等，但測(cè)量方法不限于這些方法。
本發(fā)明的固體制劑含有按這種方式得到的顆粒。固體制劑可以是例如片劑、膠囊、粒劑、粉末、栓劑、或外用制劑如膠帶。
固體制劑可只含顆粒，但在每劑量單位含2mg或更低藥物的低含量制劑中，宜用將外賦形劑添加到顆粒中的方式增加制劑的體積(重量)，以便保證藥物有足夠的穩(wěn)定性并保證其具有合適的大小(通常直徑為4-10mm，重25-300mg)。
除了可用在顆粒制備中用的填充劑、分解劑、粘合劑等賦形劑之外，外賦形劑可以采用結(jié)晶纖維素作填充劑。
為了保證藥物含量的均勻性，外賦形劑的含量按1重量份顆粒計(jì)為0.01-100重量份，優(yōu)選量為0.10-50重量份，更優(yōu)選0.15-10重量份。
在配制制劑中，為與含藥物的顆?；旌希赓x形劑可僅以外賦形劑的混合物使用，或者在外賦劑粒化或?qū)⑵浯笮≌{(diào)整到與顆粒相同的粒度之后使用。為了制粒或調(diào)整外賦形劑的大小可采用羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、支鏈淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮、明膠、羧甲纖維素鈉作為粘合劑。在混合顆粒和外賦形劑時(shí)，可采用滑動(dòng)劑和/或潤(rùn)滑劑。
顆粒和外賦形劑可不經(jīng)混合一道壓制，以得到干涂敷片劑或多層片劑。在這種情況下，外賦形劑可以是例如結(jié)晶纖維素和/或低取代羥丙基纖維素和硬脂酸鎂和/或氫化蓖麻油。此外，亦可采用輕體無水硅酸和/或滑石。如果需要，羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素或支鏈淀粉可用作粘合劑。
在將顆?；蝾w粒和外賦形劑的混合物制成片劑時(shí)，宜將硬脂酸鎂或氫化蓖麻油添加到顆粒或顆粒與外賦形劑的混合物中，其量為1重量％-5重量％，以防止在壓縮制片中容易出現(xiàn)的粘附，這樣制得的混合物用合適的制片機(jī)壓縮制片，以便得到預(yù)期的片劑。
此外，為了掩蓋不良的味道、增加片劑的強(qiáng)度、改進(jìn)口感和增大使用時(shí)的舒適性，按上述方式制得的片劑可涂復(fù)適當(dāng)?shù)木酆衔锍煞?；以便得到涂膜的片劑。該聚合物成分可以是例如羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、甲基羥乙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲纖維素鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯乙醇、聚乙二醇、二甲基氨基乙基甲丙烯酸酯-甲基丙烯酸酯共聚物、和乙基丙烯酸酯-甲基甲丙烯酸酯共聚物。如果需要，可向涂復(fù)劑添加聚合物成分的增塑劑，例如丙二醇、甘油、聚乙二醇、甘油三醋酸酯、三乙基檸檬酸酯、檸檬酸乙?；阴ァ⒍一狨?、二乙基癸二酸酯、乙?；瘑胃视王ァ⒈吐橛突蛞后w石蠟。其次，為了防光和改進(jìn)可鑒別性，可向涂敷劑中添加合適的著色劑。著色劑可以是例如水溶性合成色素如黃4號(hào)和黃5號(hào)、藍(lán)1號(hào)、藍(lán)2號(hào)等和它們的鋁色淀、滑石、氧化鈦、氧化鐵、硫酸鈣、碳酸鈣、或添加核黃素、洋紅、姜黃顏料。此外，為了增加可口性，還可添加甜味劑或香料。
再次，為達(dá)到上面所述的同樣目的片劑可轉(zhuǎn)化為糖衣片劑。除了主要成份蔗糖或山梨醇外糖涂復(fù)劑可由碳酸鈣、滑石或氧化鈦組成，另外還含例如明膠、金合歡、聚乙烯基醇等，或纖維素衍生物如支鏈淀粉、羥丙基甲基纖維素等作為粘合劑，如果需要，還可添加水溶性合成顏料如黃4號(hào)、黃5號(hào)、藍(lán)1號(hào)、藍(lán)2號(hào)等，以及它們的鋁色淀、滑石、氧化鈦、氧化鐵、硫酸鈣、碳酸鈣、或者核黃素、洋紅、姜黃顏料等。再次，為了改善可口性，同樣可添加甜味劑或香料。
顆?；蝾w粒和外賦形劑的混合物可直接成型為細(xì)的顆粒制劑、顆粒制劑或粉末制劑，或者將它們裝入明膠囊中成型為膠囊制劑。在這種情況下，外賦形劑可以是例如乳糖、谷物淀粉、蔗糖、海藻糖、D-甘露糖醇、赤癬醇、maltitole和/或乙基纖維素、和硬脂酸鎂和/或氫化蓖麻油。其次，同樣可采用輕體的無水硅酸和/或滑石。在顆粒制劑的情況下，在粒化之后可添加羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、支鏈淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮、明膠或羧甲纖維素鈉作顆粒制劑的填充劑。
如果還需要，使片劑成為持續(xù)釋放的片劑，則含藥物的顆粒或片劑用可控制藥物的釋放的涂劑涂敷，它由聚合成分或油脂和油組成，以得到貯器型的持續(xù)釋放片劑。涂劑可以是例如蜂蠟、巴西棕櫚蠟、鯨蠟醇、鯨蠟基硬脂酰醇、磷脂脂肪和油、樹脂(例如蟲膠)、纖維素酯(例如乙基纖維素)、和丙烯酸酯。如果需要，可在涂劑中添加丙二醇、甘油、聚乙二醇、甘油三醋酸酯、三乙基檸檬酸酯、檸檬酸乙?；阴?、二乙基酞酸酯、二乙基癸二酸酯、乙酰化單甘油酯、蓖麻油、或液體石蠟作為聚合物成分的增塑劑。再次，控制藥劑釋放的顆?？蓧褐瞥善瑒?。
這里可得到一種基體型持續(xù)釋放制劑，其方式是將控制藥劑釋放的組分，如上面所述的聚合物成分或脂肪和油與填充劑一道在生產(chǎn)顆粒和片劑的工序中混合。其次，如果需要，這種控制釋放的顆?？蓧褐瞥善瑒?br> 這樣得到的本發(fā)明的固體制劑可進(jìn)行包裝，如果需要，可裝入泡形包、熱封包、或合適材料的小瓶中，但是不應(yīng)限于這幾種包裝。再次，如果需要，本發(fā)明的固體制劑可與適宜的干燥劑，如硅膠一起封裝。藥物學(xué)試驗(yàn)
曾研究對(duì)本發(fā)明的藥物對(duì)人體β-腎上腺素受體的影響。
高度表示人體β3-和β2-腎上腺接受體的細(xì)胞系按WO 96/16938中公開的方法制備。高度表示人體β1-腎上腺素受體的細(xì)胞系按WO 00/44721公開的方法制備。試驗(yàn)人體β3-腎上腺素受體-激發(fā)活性
人體β3-腎上腺素受體-高度表示細(xì)胞系CHO/pKREX10-36用MEM-Dulbecco氏介質(zhì)并補(bǔ)加10％胎牛血清和200μg/ml的G-418培養(yǎng)2-3天。去除介質(zhì)后細(xì)胞用含0.5mM EDTA的以磷酸鹽緩沖的鹽水在37℃下培育10分鐘進(jìn)行剝離。通過離心收集CHO/pKREX10-36細(xì)胞，并在含1mM的L-抗壞血酸和1mM的3-異丁基-1-甲基-黃嘌呤的Hanks緩沖液(ICN Biomedicals)懸浮，其濃度約為5×105細(xì)胞/ml。此懸浮液(100μl)和試驗(yàn)化合物在同一緩沖液(500μl)中混合，并在37℃下培育30分鐘，然后煮沸5分鐘以終止反應(yīng)。反應(yīng)混合物離心之后，利用cAMP EIA系統(tǒng)(Amersham)測(cè)量清液中的cAMP量。
同樣，對(duì)高度表示人體β2-腎上腺素受體利用CHO/pKREX 21-8，或者對(duì)高度表示人體β1-腎上腺素受體利用CHO/pKREX 23-30，按同樣的方法測(cè)定cAMP數(shù)，而不是利用對(duì)高度表示人體β3-腎上腺素受體的CHO/pKREX 10-36。
當(dāng)反應(yīng)混合物添加10-5M的異丙基腎上腺素或完全不添加時(shí)，cAMP的數(shù)量分別用100％和0％表示，本制劑藥物(10-6-10-11M)的相對(duì)最大反應(yīng)表示為內(nèi)活性(I.A.)。EC50值為達(dá)到50％的cAMP累積所需的試驗(yàn)化合物的濃度，它用各個(gè)化合物的濃度-反應(yīng)曲線的最小二乘回歸分析法計(jì)算。
結(jié)果列于表1。
表1注*藥物；**(-)-異丙基腎上腺素。
在此試驗(yàn)中，具有低EC50值和高I.A值的化合物被認(rèn)為是具有強(qiáng)的人體β-腎上腺素受體-激發(fā)活性。因此，從表1可清楚的看出，本制劑的藥物證明具有強(qiáng)的人體β3-腎上腺素受體的激發(fā)活性，但它對(duì)人體β2-和β1-腎上腺受體的激發(fā)活性卻相當(dāng)弱。
上述結(jié)果表明，本發(fā)明的藥物可望作為人體β3-腎上腺素受體的激發(fā)劑，并具有優(yōu)異的腎上腺素受體選擇性。
本發(fā)明的藥物作為β3-腎上腺素受體-激發(fā)劑能有效用于預(yù)防或治療肥胖病、糖尿病、高脂血、急性腸綜合癥、急性或慢性痢疾、頻尿、遺尿、尿結(jié)石等。此外，本發(fā)明的藥物同樣能有效改善諸如胃痛、反胃、嘔吐、上腹部病、消化伴生潰瘍、急性或慢性胃炎、膽運(yùn)動(dòng)障礙、膽囊炎等的癥狀。
如果用本發(fā)明的藥物作為β3-腎上腺素受體的激發(fā)劑，則它可口服、腸胃外給藥、或直腸給藥，但優(yōu)選口服途徑。本發(fā)明藥物的劑量可根據(jù)服用途徑、條件、患者年齡、或目的(預(yù)防或治療)等而變化，但通常在0.0002mg/kg/天-0.02mg/kg/天，優(yōu)選在0.001mg/kg/天-0.02mg/kg/天。實(shí)施例
本發(fā)明將用下面的制劑、試驗(yàn)、和實(shí)施例加以詳細(xì)闡明，但不應(yīng)受此限制。制劑1化合物A的晶體制劑
化合物的鑒定通過元素分析、質(zhì)譜分析、紅外(IR)吸收譜、質(zhì)子核磁共振(1H-NMR)譜、和光旋測(cè)定。光學(xué)純度用高性能液體色譜確定。
下列略語可用于簡(jiǎn)化說明。
Fmoc9-芴基甲氧羰基
Ala丙氨酸基
J偶合常數(shù)
s單線
d雙線
dd雙雙線
t三線
q四線
m多線
br寬帶(1)(R)-3-(2-氨基丙基)-7-芐氧吲哚草酸酯的制備(工序1)
向Fmoc-D-Ala-OH(23.35g 75mmol)、二氯甲烷(240ml)和N，N-二甲基甲酰胺(0.39ml)的懸浮液在室溫和攪拌下逐滴添加草酰氯(7ml，80mmol)，混合物繼續(xù)攪拌一小時(shí)。反應(yīng)混合物在負(fù)壓下濃縮至干，得到含F(xiàn)moc-D-Ala-Cl的固體，它未經(jīng)進(jìn)一步純化并用于下面的反應(yīng)中。(工序2)
向在二氯甲烷(100ml)中的市售7-芐氧吲哚(11.2g，50mmol)的以冰冷卻和攪拌的溶液中在氬氣氛下添加甲基鎂化溴(50ml，150mmol)的3M的二乙醚溶液。該混合物加溫于室溫，再攪拌一小時(shí)。在冰冷卻下向反應(yīng)混合物添加工序1得到的Fmoc-D-Ala-Cl在二氯甲烷溶液(200ml)。該混合物加溫至室溫，再攪拌一小時(shí)。在冰冷卻下向混合物添加5％氫氯酸水溶液(100ml)，整體攪拌15分鐘。分離出有機(jī)層用水(100ml)洗滌，并在無水硫酸鎂上干燥。在負(fù)壓下蒸發(fā)溶劑，得到含(R)-7-芐氧-3-[[2-(9-芴基甲氧羰基)氨基]丙酰基]吲哚的油，未經(jīng)進(jìn)一步純化并用在下步工序中。(工序3)
向由工序2得到的油和乙腈(100ml)及2-丙醇(15.03ml)的混合物中在攪拌和室溫下分次添加硼氫化鈉(5.67g，150mmol)，該混合物經(jīng)回流5小時(shí)。反應(yīng)混合物冷至室溫，并向其滴加入甲醇(100ml)。反應(yīng)混合物在負(fù)壓下濃縮至干。向殘留物添加醋酸乙酯(250ml)和水(100ml)之后，攪拌混合物。分離出有機(jī)層，用水(100ml)洗滌，并在無水硫酸鎂上干燥。去除無機(jī)物質(zhì)，并在室溫和攪拌下向所得物料加入草酸(4.50g，50mmol)在醋酸乙酯(45ml)中的溶液。沉淀出來的晶體經(jīng)過濾收集，用醋酸乙酯洗滌并干燥，得到如白色晶體的標(biāo)題化合物(11.2g，61％)，熔點(diǎn)206-208℃。D25＝-46.2°(c＝1.0，N，N-二甲基甲酰胺)；
1H-NMR譜(200MHz，DMSO-d6，δppm)1.14(3H，d，J＝7Hz)，2.80(1H，dd，J＝14Hz，J＝8Hz)，3.03(1H，dd，J＝14Hz，J＝5Hz)，3.42(1H，m)，5.26(2H，s)5.94(4H，br)，6.75(1H，d，J＝8Hz)，6.92(1H，t，J＝8Hz)，7.11-7.22(2H，m)，7.32-7.48(3H，m)7.51-7.62(2H，m)，11.11(1H，s)。(2)(R)-3-(2-叔-丁氧羰基氨基丙基)-7-芐氧吲哚的制備
向碳酸鉀(28g)、水(500ml)和醋酸乙酯(250ml)的混合物中添加上面(1)得到的(R)-3-(2-氨基丙基)-7-芐氧吲哚草酸酯(50g，135mmol)，對(duì)該混合物進(jìn)行攪拌。然后，向冰冷的和攪拌的混合物中添加二-叔-丁基碳酸氫鹽(29.5g，135mmol)，混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。分離出有機(jī)層，用氯化鈉飽和水溶液(150ml)洗滌，在無水硫酸鎂上干燥。在負(fù)壓下蒸發(fā)溶劑，并向殘留物添加正-己烷(150ml)。沉淀出的晶體通過過濾收集，干燥，得到如白色晶體的標(biāo)題化合物(47.2g，92％)，熔點(diǎn)94-95℃。D25＝-21.0°(c＝1.0，甲醇)；
1H-NMR譜(300MHz，CHCl3，δppm)1.11(3H，d，J＝6.6Hz)，1.43(9H，s)，2.83(1H，dd，J＝14.5Hz，J＝6.7Hz)，2.94(1H，dd，J＝14.5Hz，J＝5.1Hz)，4.00(1H，m)，4.44(1H，m)，5.18(2H，s)，6.71(1H，d，J＝7.5Hz)，6.97(1H，d，J＝2.2Hz)，7.02(1H，t，J＝7.9Hz)，7.20(1H，s)，7.24-7.51(5H，m)，8.30(1H，s)。
光學(xué)純度98.5％ee[分析條件柱(CHIRALPAK AD(直徑4.6mm×250mm由DAICEL CHEMICAL INDUSTRIES公司制造))；移動(dòng)相(正-己烷∶異丙醇＝70∶30)；流量(0.8ml/min)溫度(25℃)；檢測(cè)波長(zhǎng)(254nm)；停留時(shí)間(8.8min)](3)N，N-二乙基-[3-[[(2R)-叔丁氧羰基氨基]-丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]乙酰胺的制備
向由上面(2)得到的(R)-7-芐氧-3-(2-叔丁氧羰基氨基丙基)吲哚(10g，26.3mmol)在甲醇(100ml)中的冰冷和攪拌的溶液中添加10％的在碳上的鈀(0.5g)，該混合物在氫的大氣壓及室溫下氫化2小時(shí)。在消耗了氫的理論量之后，去除催化劑，并在減壓少蒸發(fā)溶劑。殘留物溶解在丙酮(60ml)中，并向溶液添加碳酸鉀(4.54g)、N，N-二乙基氯乙酰胺(4.72g，31.6mmol)和碘化鉀(0.55g)，并且混合物回流4小時(shí)。在以冰冷卻后，經(jīng)過濾除去不溶物，在減壓下蒸發(fā)溶劑。向殘留物添加氯仿(100ml)和水(100ml)，對(duì)混合物進(jìn)行攪拌，分離出氯仿層并在無水硫酸鎂上干燥。在減壓下蒸發(fā)溶劑，并向殘留物添加二異丙醚(30ml)。沉淀出的晶體通過過濾收集、干燥，得到如白色晶體的標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)142℃。D25＝-26.3°(c＝1.0，甲醇)；
1H-NMR譜(300MHz，CDCl3，δppm)1.10(3H，d，J＝6.6Hz)，1.17(3H，t，J＝7.1Hz)，1.22(3H，t，J＝7.1Hz)，1.43(9H，s)，2.83(1H，dd，J＝14.1Hz，J＝7.0Hz)，2.94(1H，dd，J＝14.1Hz，J＝5.1Hz)，3.34(2H，q，J＝7.1Hz)，3.44(2H，q，J＝7.1Hz)，3.99(1H，br)，4.45(1H，br)，4.80(2H，s)，6.67(1H，d，J＝7.7Hz)，6.99(1H，t，J＝7.9Hz)，7.10(1H，s)，7.30(1H，d，J＝7.9Hz)，9.41(1H，s).
光學(xué)純度＞99％ee[分析條件柱(CHIRALPAK AD(直徑4.6mm×250mm由DAICEL CHEMICAL INDUSTRIES公司制造))；移動(dòng)相(正-己烷∶異丙醇＝50∶50)；流量(0.8ml/min)；溫度(25℃)；檢測(cè)波長(zhǎng)(254nm)；停留時(shí)間(6.6min)](4)N，N-二乙基-[3-(2R)-氨基丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]乙酰胺的制備
向從上面(3)得到的N，N-二乙基-[3-[[(2R)-叔丁氧羰基-氨基]-1H-吲哚-7-基氧基]乙酰胺(12g，29.7mmol)在乙腈(120ml)中的溶液中添加草酸(10.71g，119mmol)，該混合物回流2小時(shí)?；旌衔镉帽鋮s，沉淀出的晶體通過過濾收集，并用乙腈洗滌。向所得晶體添加10％的碳酸鉀水溶液(50ml)和氯仿(120ml)，對(duì)混合物進(jìn)行攪拌。分離出氯仿層并在無水硫酸鎂上干燥。在負(fù)壓下蒸發(fā)溶劑，并向殘留物添加二丙醚(30ml)。沉淀出來的晶體通過過濾收集，干燥，得到如白色晶體的標(biāo)題化合物(6.84g，75％)，熔點(diǎn)133℃。D25＝-46.3°(c＝1.0，甲醇)；
1H-NMR譜(300MHz，CDCl3，δppm)1.16(3H，d，J＝6.6Hz)，1.17(3H，t，J＝7.1Hz)，1.22(3H，t，J＝7.1Hz)，1.40-2.00(2H，br)，2.64(1H，dd，J＝14.1Hz，J＝8.2Hz)，2.86(1H，dd，J＝14.1Hz，J＝5.0Hz)，3.18(1H，m)，3.35(2H，q，J＝7.1Hz)，3.44(2H，q，J＝7.1Hz)，4.80(2H，s)，6.68(1H，d，J＝7.5Hz)，6.99(1H，t，J＝7.9Hz)，7.05(1H，s)，7.28(1H，d，J＝8.0Hz)，9.42(1H，s).
光學(xué)純度＞99ee[分析條件柱(CHIRALPAK AD(直徑4.6mm×250mm由DAICEL CHEMICAL INDUSTRIES公司制造))；移動(dòng)相(正-己烷∶異丙醇∶二乙胺＝85∶15∶0.8)；流量(1.0ml/min)；溫度(25℃)；檢測(cè)波長(zhǎng)(254nm)；停留時(shí)間(19.9min)]。(5)N，N-二乙基-[3-[(2R)-[[(2R)-(3-氯苯基)-2-羥乙基]氨基]丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]乙酰胺的制備
向由上面(4)得到的N，N-二乙基-[3-[(2R)-氨基丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]乙酰胺(21g，69.2mmol)在乙腈(42ml)中的溶液中添加(R)-3-氯苯乙烯氧化物(11.77g，76.1mmol)，該混合物回流5小時(shí)?；旌衔镉帽鋮s，并向它添加二異丙醚(168ml)。沉淀出的晶體通過過濾收集，干燥，得到如白色晶體的標(biāo)題化合物(16.99g，54％)。另一方面，含有未反應(yīng)的起始物質(zhì)的濾液在減壓下濃縮至干，并再向殘留中添加乙腈(21ml)和(R)-3-氯苯乙烯氧化物(1.07g，6.9mmol)，混合物回流6小時(shí)，混合物用冰冷卻，并向它添加二異丙醚(63ml)。沉淀出的晶體通過過濾收集，干燥，得到標(biāo)題化合物(2.86g，9％)，熔點(diǎn)120-121℃。D25＝-69.1°(c＝1.0，甲醇)；
1H-NMR譜(300MHz，CDCl3，δppm)1.11(3H，d，J＝6.2Hz)，1.16(3H，t，J＝7.1Hz)，1.22(3H，t，J＝7.1Hz)，2.66(1H，dd，J＝12.2Hz，J＝9.2Hz)，2.81(2H，d，J＝6.6Hz)，2.87(1H，dd，J＝12.2Hz，J＝3.7Hz)，3.00(1H，m)，3.34(2H，q，J＝7.1Hz)，3.43(2H，q，J＝7.1Hz)，4.54(1H，m)，4.78(2H，s)，6.65(1H，d，J＝7.3Hz)，6.98(1H，t，J＝7.9Hz)，6.99(1H，s)，7.12-7.30(4H，m)，7.34(1H，s)，9.60(1H，s).(6)[3-[(2R)-[[(2R)-(3-氯苯基)-2-羥乙基]-氨基]丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]醋酸(化合物A)的制備
將上面(5)得到的N，N-二乙基-[3-[(2R)-[[(2R)-(3-氯苯基)-2-羥乙基]-氨基]丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]乙酰胺(4g，8.7mmol)加入到氫氧化鉀(1.96g，34.9mmol)在50％的乙醇水溶液(32ml)中的溶液中，該混合物回流3小時(shí)，并冷卻至室溫?；旌衔锶芙庠诖姿?2.3g，38.4mmol)中，并在室溫下攪拌過夜。沉淀出的晶體通過過濾收集，干燥，得到如白色晶體的標(biāo)題化合物(3.1g，88％)，熔點(diǎn)230-231℃。D25＝-24.4°(c＝1.0，1N氫氧化鈉水溶液)；
1H-NMR譜(200MHz，DMSO-d6，δppm)0.93(3H，d，J＝7Hz)，2.61(1H，m)，2.80-3.22(4H，m)，4.54(2H，s)，4.90(1H，m)，6.48(1H，d，J＝8Hz)，6.76(1H，t，J＝8Hz)，6.89-7.02(2H，m)，7.28-7.40(3H，m)，7.46(1H，s)，11.01(1H，s).
光學(xué)純度＞99％ee[分析條件柱(CHIRAL-AGP(直徑4.0mm×100mm由SKINWA KAKO公司制造))；移動(dòng)相((20mM Na2HPO4+2mM四丁基亞硫酸氫銨)的水溶液(pH7.0)∶異丙醇＝98∶2)；流量(0.7ml/min)；溫度(30℃)；檢測(cè)波長(zhǎng)(220nm)；停留時(shí)間(27.4min)]。
以這種方式得到的化合物A的晶體用X-射線粉末衍射儀(RINT1000型，由RIGAKU CORPARATION公司制備)，管電壓為30kV，管電流為20mA，利用CuKα線按衍射角(2θ)測(cè)量X射線衍射圖，其衍射圖示于圖1?；衔顰的晶體的X-射線粉末衍射圖的衍射角約為5.9°、17.9°、18.8°、20.5°、23.3°、24.0°和24.9°，在約5.9°、17.9°、20.5°和24.0°處有特征峰。衍射角(2θ)的值具有標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確度。制劑2
化合物A的II型晶體的制備
向在制備1中得到的化合物A的I型晶體(100mg)中添加甲醇(35ml)，該混合物在加溫中溶解在100℃的水浴中。沉淀出的晶體通過過濾收集，干燥，得到化合物A的II型晶體。
以這種方式得到的化合物A的II型晶體用X-射線粉末衍射儀(RINT ULTIMA型，由RIGAKO CORPARATION公司制造)在管壓為40kV，管電流為30mA下利用CuKα線按衍射角(2θ)測(cè)定X-射線衍射圖，其衍射圖示于圖2?；衔顰的II型晶體的X-射線衍射圖的衍射角約為5.9°、17.5°、19.4°、20.8°、23.3°、24.0°和24.9°，特征峰大約在5.9°、17.5°、20.8°和23.3°處。衍射角(2θ)的值具有標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確度。制劑3藥物的制備(1)對(duì)制備1中制得的化合物A的I型晶體利用錘式粉碎機(jī)(SampleMill AP-S，由Hosokawa Micro Corparation，Japan制造)并利用孔徑0.7mm的篩進(jìn)行微粉化。(2)另外，將制劑1中制得的化合物A的I型晶體利用流體能粉碎機(jī)(Single Truck Jet Mill FS-4，由SEISHIN ENTERPRISE公司，Japan制造)，在壓縮空氣壓力為7kgf/cm2下進(jìn)行微粉化。(3)以這種方式得到的各種微粉化的顆粒在累計(jì)重量分布值為50％和95％時(shí)的粒度利用激光衍射粒度分布分析儀(HELOS & RODOS(商標(biāo))，由SYMPATEC公司Germany制造)測(cè)量，并從按照體計(jì)算的累計(jì)粒度分布用干空氣分散法進(jìn)行計(jì)算(分散空氣壓力1atm)。(1)中得到的晶體的粒度在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)不大于21μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于75μm。(2)中得到的晶體的粒度在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)不大于1.7μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于3.8μm。借助任一微粉化方法皆可得到其粒度在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)不大于100μm，和其粒度在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于200μm的化合物A的晶體。試驗(yàn)1藥物的粒度
根據(jù)表2的方案，向藥物或未微粉化的化合物A的晶體、乳糖、低取代羥丙基纖維素和羥丙基纖維素的混合粉末中在攪拌下加水，得到顆粒物(捏合制粒)，后者經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到顆粒。這樣得到的顆粒與結(jié)晶纖維素、輕體無水硅酸和硬脂酸鎂混合，經(jīng)壓制得到每片含1mg藥物或未微粉化的化合物A晶體的片劑。采用錘式粉碎機(jī)(Sample Mill AP-S，由Hosokawa Micron Corporation公司，Japan制造)和利用孔徑為0.7mm或1.0mm的篩微粉化的藥物，或者利用流體能粉碎機(jī)(Single Truck Jet Mill FS-4，由SEISHINENTERPRISE公司，Japan制造)，在壓縮空氣壓力為7kgf/cm2下得到的微粉化藥物具有不同的粒度，數(shù)據(jù)列于表3，這些藥物皆被采用。這樣制得的片劑的溶解試驗(yàn)按照日本藥學(xué)大全第十三版(槳葉攪拌，50rpm，水37℃，900ml)進(jìn)行，藥物粒度和其溶解之間的關(guān)系以15分鐘時(shí)的溶解速率的測(cè)量值進(jìn)行評(píng)定。結(jié)果示于表3。
表2
表3
采用累計(jì)重量分布值為50％時(shí)粒度不大于100μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)粒度不大于200μm的藥物制成的片劑表明，在15分鐘時(shí)溶解率為100％，它的溶解能力良好。試驗(yàn)2藥物和除藥物外的賦形劑在顆粒中的組分重量比
利用流化床制粒機(jī)和干燥機(jī)向藥物(上面的試驗(yàn)1-3所用的藥物用于試驗(yàn)2-1和對(duì)比試驗(yàn)2-1，上面試驗(yàn)1-2所用的藥物用于試驗(yàn)2-2)、乳糖、和低取代羥丙基纖維素的混合粉末噴霧羥丙基纖維素的水溶液，并制粒和干燥以得到顆粒。如表4所示，這里制備了三種顆粒，其中除藥物外的賦形劑在顆粒中的含量不同，即按1重量份藥物計(jì)為82.5重量份(試驗(yàn)2-1)，417重量份(試驗(yàn)2-2)，和834重量份(對(duì)比試驗(yàn)2-1)。向每種顆粒添加固定量的結(jié)晶纖維素、輕體無水硅酸和硬脂酸鎂，并將混合物壓制成片劑。片劑在40℃-75％RH(相對(duì)濕度)的條件下貯存4個(gè)月，測(cè)量了從藥物衍生出的所有分解產(chǎn)物的含量，并從初始量中算出其增量。結(jié)果示于表5。
表4
表5
在試驗(yàn)2-1和2-2的片劑中，所有分解產(chǎn)物的量皆比對(duì)比試驗(yàn)2-1的片劑小，對(duì)比試驗(yàn)的顆粒中所含除藥物外的賦形劑按1重量份藥物計(jì)大于500重量份，此事實(shí)證明，藥物本身的化學(xué)穩(wěn)定性在試驗(yàn)2-1和2-2的片劑中是高的。試驗(yàn)3
顆粒中藥物和除藥物外的賦形劑的重量組成比例
根據(jù)表6的方案，向乳糖和低取代羥丙基纖維素的混合粉末中添加羥丙基纖維素在純水中的溶液以得到顆粒物(捏合制粒)，顆粒物經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整，得到外賦形劑顆粒。
表6
向藥物(用于上面試驗(yàn)1-4的)、乳糖和低取代羥丙基纖維素的混合粉末中添加羥丙基纖維素在純化中的水溶液以得到顆粒物(捏合制粒)，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到顆粒。從這些顆粒中得到4種顆粒，其中除藥物外的賦形劑在顆粒中的含量是不同的，按1重量份藥物計(jì)如為416.5重量份(試驗(yàn)3-1，試驗(yàn)3-2)，1001重量份(對(duì)比試驗(yàn)3-1)1251.5重量份(對(duì)比試驗(yàn)3-2)。向4種顆粒中添加按照上表6方案得到的外賦形劑顆粒、結(jié)晶纖維素、輕體水硅酸和硬脂酸鎂，該混合物經(jīng)壓制成每片含0.1mg藥物以及按1重量份藥物計(jì)為1.87重量份外賦形劑的片劑(試驗(yàn)3-1)、含0.2mg藥物以及按1重量份藥物計(jì)為2.59重量份外賦形劑的片劑(試驗(yàn)3-2)、含0.1mg藥物以及按1重量份藥物計(jì)為0.20重量份外賦形劑的片劑(對(duì)比試驗(yàn)3-1)、和含0.2mg藥物以及按1重量份藥物計(jì)為0.2重量份外賦形劑的片劑(對(duì)比試驗(yàn)3-2)。這些片劑在40℃-75％RH(相對(duì)濕度)的條件下貯存一個(gè)月，從藥物衍生出的所有分解產(chǎn)物的含量用高性能液體色譜儀測(cè)定，并從初始量中算出其增加量。結(jié)果示于表8。
表7
表8
在試驗(yàn)3-1和3-2的片劑中，全部分解產(chǎn)物的產(chǎn)生量比對(duì)比試驗(yàn)3-1和3-2的片劑少，此事實(shí)證明，試驗(yàn)3-1和3-2片劑中藥物本身的化學(xué)穩(wěn)定性高。試驗(yàn)4顆粒制備中的預(yù)混合
根據(jù)表9的方案，曾經(jīng)得到各含0.05mg藥物(上面試驗(yàn)1-5所用的)的片劑。如果在制備顆粒時(shí)藥物預(yù)先利用混合篩(50目的不銹鋼篩＝試驗(yàn)3-1)或者利用制粒機(jī)(錘式粉碎機(jī)＝試驗(yàn)3-2)與乳糖混合和微粉化，并向其添加低取代羥丙基纖維素和羥丙基纖維素。在攪拌下將水加入混合物，得到顆粒物(捏合制粒)，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到顆粒。向這種方式得到的顆粒中添加結(jié)晶纖維素、輕體無水硅酸和硬脂酸鎂，并進(jìn)行混合，混合物壓制成片劑。這種方式得到的片劑的含量均勻性按照日本藥物大全第十三版中的含量均勻性試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)(據(jù)此低于15％的結(jié)果認(rèn)為是滿足要求的)。結(jié)果示于表10。
表9
表10
在日本藥物大全第十三版的含量均勻度試驗(yàn)中，低于15％的結(jié)果被認(rèn)為是滿足要求的。由于試驗(yàn)4-1和4-2的片劑的均勻度試驗(yàn)結(jié)果兩者皆在15％以下，所以藥物含量的均勻性被保留在片劑中。實(shí)施例1
根據(jù)表11的方案，曾得到各含1mg藥物(如上所述，在試驗(yàn)1-3中所用的)的片劑。如果在制備顆粒時(shí)，藥物預(yù)先利用錘式粉碎機(jī)與乳糖混合和篩分，并向其添加低取代羥丙基纖維素和羥丙基纖維素。將水在攪拌下加到混合物中得到顆粒(捏合制粒，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到粒度在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)不大于250μm，和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于600μm的顆粒。這樣得到的顆粒與結(jié)晶纖維素、輕體無水硅酸和硬脂酸鎂混合，混合物經(jīng)壓制成片劑。這樣得到的片劑具有適當(dāng)?shù)拇笮『秃烤鶆蚨?，而且保留了藥物的穩(wěn)定性，并且藥物從片劑中的溶解快。
表11實(shí)施例2
根據(jù)表12的方案，得到了各含0.1mg藥物(在上述試驗(yàn)1-5的)的片劑。在制備顆粒時(shí)，藥物預(yù)先用錘式粉碎機(jī)與乳糖混合和篩分，并向其添加低取代羥丙基纖維素和羥丙基纖維素。將水在攪拌下加入混合物，得到顆粒物(捏合制粒)，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到具有粒度在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)不大于250μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)不大于600μm的顆粒。這樣得到的顆粒與結(jié)晶纖維素、輕體無水硅酸和硬脂酸鎂混合，混合物經(jīng)壓制成片劑。這樣得到的片劑具有適宜的大小和含量均勻度，并保留了藥物的穩(wěn)定性，而且藥物從片劑中溶解快。
表12實(shí)施例3
根據(jù)表13的方案，得到了各含0.05mg藥物(用在上述試驗(yàn)1-5的)的片劑。在制備顆粒時(shí)，藥物預(yù)先用錘式粉碎機(jī)與乳糖混合和篩分，并向其添加低取代羥丙基纖維素和羥丙基纖維素。將水在攪拌下加入混合物，得到顆粒物(捏合制粒)，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到具有在累計(jì)重量分布值為50％時(shí)粒度不大于250μm和在累計(jì)重量分布值為95％時(shí)粒度不大于600μm的顆粒。這樣得到的顆粒與結(jié)晶纖維素、輕體無水硅酸和硬脂酸鎂混合，混合物經(jīng)壓制成片劑。這樣得到的片劑具有適宜的大小和含量均勻度，并且保留了藥物的穩(wěn)定性，并且藥物從片劑中溶解快。
表13實(shí)施例4
根據(jù)表14的方案，得到了各含0.2g藥物(用于上述試驗(yàn)1-3中的)的片劑。向藥物、低取代羥丙基纖維素和羥丙基纖維素的混合粉末在攪拌下加水，得到粒度在累計(jì)重量分布值50％時(shí)不大于350μm和在累計(jì)重量分布值95％時(shí)不大于1000μm的顆粒。這樣得到的顆粒與結(jié)晶纖維素、輕體無水硅酸和硬脂酸鎂混合，混合物經(jīng)壓制成片劑。這樣得到的片劑具有適宜的大小和含量均勻度，保留了藥物的穩(wěn)定性，并且藥物從片劑中溶解快。
表14實(shí)施例5
根據(jù)表15的方案，向藥物(用于上述試驗(yàn)1-4的)、乳糖、和低取代的羥丙基纖維素的混合粉末噴霧羥丙基纖維素在純水中的溶液，得到顆粒物(流化床制粒)，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到顆粒。這樣得到的顆粒與結(jié)晶纖維素、輕體水硅酸混合，混合物經(jīng)壓制成各含0.5mg藥物的片劑。這樣得到的片劑具有適宜的大小和含量均勻度，保留了藥物的穩(wěn)定性，并且藥物從片劑中溶解快。
表15實(shí)施例6
根據(jù)表16的方案，向藥物(在上述試驗(yàn)1-4所用的)、乳糖、低取代羥丙基纖維素的混合粉末噴霧羥丙基纖維素在純水中的溶液，得到顆粒物(流化床制粒)，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到顆粒。這樣得到的顆粒與外賦形劑顆粒、結(jié)晶纖維素和輕體水硅酸混合，混合物經(jīng)壓制成各含0.5mg藥物的片劑。這樣得到的片劑具有適宜的大小和含量均勻度，保留了藥物的穩(wěn)定性，并且藥物從片劑中溶解快。
表16實(shí)施例7
根據(jù)表7的方案，向乳糖和低取代羥丙基纖維素的混合粉末噴霧羥丙基纖維素在純水中的溶液，得到顆粒物(流化床制粒)，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整，得到外賦形劑顆粒。
表17
根據(jù)表18的方案，向藥物(在上述試驗(yàn)1-4中用的)、乳糖、和低取代羥丙基纖維素的混合粉末噴霧羥丙基纖維素在純水中的溶液，得到顆粒物(流化床制粒)，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到顆粒。這樣得到的顆粒與按照表17方案得到的外賦形劑顆粒、結(jié)晶纖維素和輕體水硅酸混合，混合物經(jīng)壓制成各含0.1mg藥物的片劑。這樣得到的片劑具有適宜的大小和含量均勻度，保留了藥物的穩(wěn)定性，并且藥物從片劑中溶解快。
表18實(shí)施例8
根據(jù)表19的方案，向藥物(在上述試驗(yàn)1-4所用的)、乳糖、和低取代羥丙基纖維素的混合粉末噴霧羥丙基纖維素在純水中的溶液，得到顆粒物(流化床制粒)，經(jīng)干燥和尺寸調(diào)整得到顆粒。這樣得到的顆粒與外賦形劑顆粒、結(jié)晶纖維素、和輕體水硅酸混合，混合物經(jīng)壓制成各含0.2mg藥物的片劑。這樣得到的片劑具有適宜的大小和含量均勻度，保留了藥物的穩(wěn)定性，并且藥物從片劑中溶解快。
表19工業(yè)實(shí)用性
具有粒度在累計(jì)重量分布50％時(shí)不大于100μm和在累計(jì)重量分布95％時(shí)不大于200μm的本發(fā)明化合物A的晶體(本發(fā)明的藥物)能用作制劑的原料。本發(fā)明的藥物表現(xiàn)出強(qiáng)的β3-腎上腺素受體-激發(fā)活性，并具有優(yōu)異的腎上腺素受體選擇性，因此，它能用于預(yù)防或治療肥胖病或糖尿病。含有本發(fā)明藥物的制劑是一種優(yōu)異的制劑，其特征在于，制劑的大小(體積)、藥物含量的均勻度、和藥物的穩(wěn)定性是得到保證的，而且藥物從制劑中的溶出快。
權(quán)利要求
1.一種[3-[(2R)-[[(2R)-(3-氯苯基)-2-羥乙基]-氨基]丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]醋酸的晶體。
2.一種[3-[(2R)-[[(2R)-(3-氯苯基)-2-羥乙基]-氨基]丙基]-1H-吲哚-7-基氧基]醋酸的晶體，該晶體在X-射線粉末衍射圖上，位于衍射角(2θ)約為5.9°、17.9°、20.5°和24.0°處有特征峰。
3.權(quán)利要求1的晶體，其中，其粒度在累計(jì)重量分布值50％時(shí)不大于100μm和在累計(jì)重量分布值95％時(shí)不大于200μm。
4.一種由權(quán)利要求3的晶體組成的顆粒。
5.權(quán)利要求4的顆粒，該顆粒由(a)權(quán)利要求3的晶體、(b)填充劑、(c)分解劑、和(d)粘合劑組成。
6.權(quán)利要求5的顆粒，其中，填充劑、分解劑和粘合劑的總重量按1重量份權(quán)利要求3的晶體計(jì)，小于500重量份。
7.一種固體制劑，該制劑含有權(quán)利要求4的顆粒。
8.權(quán)利要求7的固體制劑，該制劑包含外賦形劑。
9.權(quán)利要求7的固體制劑，其中，權(quán)利要求3的晶體含量為每劑量單位小于2mg。
10.權(quán)利要求7的固體制劑，該制劑呈片劑形狀。
11.一種片劑，該片劑是通過權(quán)利要求4的顆粒壓片制成。
12.權(quán)利要求11的片劑，其中權(quán)利要求3的晶體的含量為每劑量單位不大于2mg。
13.一種片劑，該片劑是通過向權(quán)利要求4的顆粒添加外賦形劑，然后將混合物壓片制成的。
14.權(quán)利要求13的片劑，其中權(quán)利要求3的晶體的含量為每劑量單位不大于2mg。
15.一種β3-腎上腺素受體興奮劑，該興奮劑含權(quán)利要求3的晶體。
16.一種治療糖尿病的藥劑，該藥劑含權(quán)利要求3的晶體。
17.一種治療肥胖病的藥劑，該藥劑含權(quán)利要求3的晶體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種固體制劑，該制劑含[3－[(2R)－[[(2R)－(3－氯苯基)－2－羥乙基]氨基]丙基]－1H－吲哚－7－基氧基]醋酸(化合物A)的晶體，尤其是一種化合物A的晶體，該晶體所具有的粒度在累計(jì)重量分布值50％時(shí)不大于100μm和在累計(jì)重量分布值95％時(shí)不大于200μm，優(yōu)選涉及一種具有化合物A的優(yōu)異穩(wěn)定性和含量均勻度的固體制劑，該制劑是通過制備化合物A的晶體與填充劑、分解劑和粘合劑顆粒的，然后將該顆粒與外賦形劑混合而制成的。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1433403SQ00818730
公開日2003年7月30日 申請(qǐng)日期2000年11月24日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月30日
發(fā)明者巖田基數(shù), 栗山輝明, 藤田惠美, 藤原惠一, 賀登志朗, 原田博史, 藤井昭仁, 小田井修, 川島和 申請(qǐng)人:大日本制藥株式會(huì)社