專利名稱：羰基應(yīng)激改良劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及羰基應(yīng)激改良劑。
背景技術(shù)：
由于體內(nèi)通過非酶生物化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的各種由糖或脂質(zhì)衍生的羰基化合物增加而使蛋白質(zhì)修飾處于增強(qiáng)狀態(tài)，這被稱作“羰基應(yīng)激”(Miyata等人.Kidney Int.55389-399，1999；Miyata等人.J.Am.Soc.Nephrol.，111744-1752，2000)。已有報(bào)道說(shuō)，這些羰基化合物因Maillard反應(yīng)而與成年人疾病如糖尿病和動(dòng)脈硬化以及衰老性疾病有關(guān)。所述Maillard反應(yīng)是還原糖如葡萄糖和氨基酸或蛋白質(zhì)之間的非酶促糖基化(glycation)反應(yīng)。Maillard在1912年報(bào)道了該反應(yīng)，該反應(yīng)集中在將氨基酸和還原糖組成的混合物加熱時(shí)出現(xiàn)棕色著色現(xiàn)象(Maillard，L.C.，Compt.Rend.Soc.Biol.，72599，1912)。Maillard反應(yīng)涉及棕色著色、產(chǎn)生芳族成分、味道、蛋白質(zhì)變性和在食品加熱或貯存過程中的所述這些反應(yīng)。因此，該反應(yīng)已主要在食品化學(xué)領(lǐng)域進(jìn)行研究。
然而，在1968年在體內(nèi)鑒定了糖基化血紅蛋白(HbAlc)，這是血紅蛋白的一種微量成分并且顯示在糖尿病病人中該成分增加(Rahbar.S.，Clin.Chim.Acta，22296，1968)。這些發(fā)現(xiàn)引起了人們對(duì)體內(nèi)Maillard反應(yīng)意義以及該反應(yīng)即成年人發(fā)病(如糖尿病并發(fā)癥和動(dòng)脈硬化)和衰老之間關(guān)系的關(guān)注。例如，在Amadori化合物形成反應(yīng)期之后形成的后期產(chǎn)物吡咯啉(pyrraline)和戊糖定(pentosidine)(高度糖基化的最終產(chǎn)物；下文縮寫為AGE)被認(rèn)為是衰老和糖尿病的指標(biāo)。事實(shí)上，不管存在或不存在高血糖現(xiàn)象，慢性腎衰病人的血和組織中都積聚了非常高濃度的高反應(yīng)性羰基化合物和AGE(Miyata，T.等人，Kidney Int.，511170-1181，1997；Miyata，T.等人，J.Am.Soc.Nephrol.，71198-1206，1996；Miyata，T.等人，Kidney Int.，55389-399，1999；Miyata，T.等人，J.Am.Soc.Nephrol.，92349-2356，1998)。該積聚歸因于腎衰時(shí)的羰基應(yīng)激，其中當(dāng)由糖和脂質(zhì)衍生的羰基化合物與氨基反應(yīng)時(shí)，作為Maillard反應(yīng)的結(jié)果，蛋白質(zhì)被修飾(Miyata，T.等人，Kidney Int.，55389-399，1999)。最近，已報(bào)道了在透析淀粉樣變性和動(dòng)脈硬化的發(fā)病和病情發(fā)展中涉及羰基應(yīng)激(Miyata等人，J.Clin.Invest.，921243-1252，1993；Miyata等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，932353-2358，1996；Miyata等人，F(xiàn)EBS Lett.，43724-28，1998；Miyata等人，F(xiàn)EBS Lett.，445202-206，1999)。因此確立了腎衰中羰基應(yīng)激的病理生理學(xué)重要性。
因此，通過除去體內(nèi)產(chǎn)生的羰基化合物改善羰基應(yīng)激的狀態(tài)可導(dǎo)致與腎衰有關(guān)的AGE形成的抑制作用，減少組織損傷和并發(fā)癥。
而且，在腹膜透析過程中，將廢棄物跨腹膜從血中排泄到腹膜透析液中。在腎衰病人的血中，具有高滲透壓的腹膜透析液(包含葡萄糖、icodextrin、氨基酸等的透析液)中積聚了高反應(yīng)性羰基化合物，它們通過腹膜進(jìn)入腹膜腔中的腹膜透析液中。這導(dǎo)致腹膜透析液中羰基化合物的濃度增加，由此引起羰基應(yīng)激狀態(tài)。結(jié)果，由于羰基修飾了腹膜內(nèi)的蛋白質(zhì)，腹膜的功能降低；假設(shè)該反應(yīng)接著又與除水能力削弱和腹膜硬化漸重期中有關(guān)(Miyata，T.等人，Kidney Int.，58425-435，2000；Inagi R.等人，F(xiàn)EBS Lett.，463260-264，1999；Ueda，Y.等人，Kidney Int.(in press)；Combet，S.等人，J.Am.Soc.Nephrol.，11717-728，2000)。
事實(shí)上，內(nèi)皮和間皮免疫組織化學(xué)檢查證明腹膜透析病人的腹膜內(nèi)羰基應(yīng)激狀態(tài)是由腹膜透析液中所包含的葡萄糖誘導(dǎo)的(Yamada，K.等人，Clin.Nephrol.，42356-361，1994；Nakayama，M.等人，Kidney Int.，51182-186，1997；Miyata，T.等人，Kidney Int.，58425-435，2000；Inagi R.等人，F(xiàn)EBS Lett.，463260-264，1999；Combet，S.等人，J.Am.Soc.Nephrol.，11717-728，2000)。而且已揭示，腹膜透析液中所包含的甲基乙二醛作用于內(nèi)皮和間皮細(xì)胞以促進(jìn)產(chǎn)生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)，假設(shè)該因子是一種在削弱腹膜功能中發(fā)揮核心作用的一種物質(zhì)(Combet等人，J.Am.Soc.Nephrol.，11717-728，2000；Inagi等人，F(xiàn)EBS Let，463260-264，1999)。因此，也假設(shè)羰基應(yīng)激引起伴發(fā)功能(除水能力)削弱的透析病人腹膜發(fā)生形態(tài)學(xué)改變。因此，本領(lǐng)域需要一種改善所述應(yīng)激的方法。
最近已揭示了體內(nèi)系統(tǒng)消除和代謝羰基化合物的機(jī)理。已報(bào)道在羰基化合物的消除中涉及許多酶和酶的路徑，如醛糖還原酶、醛脫氫酶和乙二醛酶。這些羰基化合物消除系統(tǒng)的活性降低直接導(dǎo)致很多類型羰基化合物的濃度升高。氧化還原輔酶如谷胱甘肽(GSH)和NAD(P)H在所述路徑中發(fā)揮重要的作用(Thomalley P.J.，Endocrinol Metab 3149-166，1996)。羰基化合物如甲基乙二醛和乙二醛與GSH的巰基進(jìn)行非酶促反應(yīng)并最后通過乙二醛酶代謝。NAD(P)H激活谷胱甘肽還原酶，增加GSH濃度。因此，由細(xì)胞內(nèi)氧化還原歷程不平衡而引起的GSH和NAD(P)H減少阻斷了羰基化合物消除系統(tǒng)并導(dǎo)致AGE積聚。事實(shí)上，有報(bào)道說(shuō)，糖尿病病人的血GSH濃度降低，而在這些病人中，羰基化合物甲基乙二醛的濃度升高。
如上所述，氧化還原輔酶如GSH和NAD(P)H的濃度降低被懷疑是AGE形成的原因，因?yàn)轸驶衔锏南郎p少。因此建議，通過升高巰基濃度來(lái)消除羰基應(yīng)激?；谠摾碚?，本發(fā)明者嘗試直接使用巰基化合物，如GSH和半胱氨酸。事實(shí)上，將正常人和糖尿病病人的血清通過加入這些巰基化合物進(jìn)行孵育，結(jié)果抑制AGE的產(chǎn)生。然而需要一個(gè)長(zhǎng)周期來(lái)獲得所述抑制作用，這使得該方法不能實(shí)行。
此外，已知AGE是通過在羰基化合物和蛋白質(zhì)之間羰基-氨基化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的。因此結(jié)論是，羰基應(yīng)激可用那些能夠通過化學(xué)方法捕獲這些產(chǎn)物的化合物來(lái)消除。所述化合物包括含肼基的氨基胍(Brownlee M.等人，Science2321629-16332，1986)和2-亞異丙基腙-4-氧-噻唑烷-5-基乙酰苯胺(NakamuraS.等人，Diabetes 46895-899，1997)。除了這些化合物外，雙胍如二甲雙胍和丁二胍也能夠捕獲羰基化合物。體外試驗(yàn)證明，所有這些化合物都能有效地捕獲羰基化合物甲基乙二醛和乙二醛(Miyata T.，J.Am.Soc.Nephrol.111719-1725，2000)。然而，盡管這些化合物能有效地抑制AGE產(chǎn)生，但這些化合物對(duì)羰基化合物的專一性低，因?yàn)樗鼈兣c所有類型的羰基化合物反應(yīng)。結(jié)果，這些化合物不僅捕獲對(duì)活細(xì)胞有害的糖或脂質(zhì)衍生的羰基化合物，而且它們也捕獲活細(xì)胞必需的羰基，如吡哆醛。
為了解決上述問題，本領(lǐng)域需要開發(fā)可迅速改善羰基應(yīng)激和對(duì)糖或脂質(zhì)衍生的有害羰基化合物有特異性的羰基應(yīng)激改良劑。
將一種有害的羰基化合物甲基乙二醛轉(zhuǎn)化為乳酸的體內(nèi)系統(tǒng)是已知的。甲基乙二醛在由GSH、乙二醛I和乙二醛II組成的乙二醛系統(tǒng)中轉(zhuǎn)化為乳酸。也已知，乙二醛酶I作用于除甲基乙二醛外的其他酮-醛化合物。然而，尚不了解該系統(tǒng)的生理作用。此外，以前尚未報(bào)道過利用該系統(tǒng)來(lái)改善活細(xì)胞中羰基應(yīng)激的狀態(tài)。
發(fā)明公開本發(fā)明的目的是提供能夠迅速消除羰基化合物的羰基應(yīng)激改良劑。
本發(fā)明者廣泛研究開發(fā)了一種有效的方法來(lái)消除和解毒溶解狀態(tài)的羰基化合物，并集中于稱作“乙二醛酶系統(tǒng)”的羰基化合物解毒系統(tǒng)。乙二醛酶系統(tǒng)是由兩種酶，乙二醛酶I(乳酰GSH裂合酶)和乙二醛酶II(羥基酰基GSH水化酶(hydrase))組成的解毒反應(yīng)系統(tǒng)。已知在GSH存在下，羰基化合物甲基乙二醛通過解毒反應(yīng)轉(zhuǎn)化為乳酸。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，通過另外將乙二醛酶I引入用谷胱甘肽捕獲甲基乙二醛反應(yīng)的反應(yīng)溶液中，可迅速消除甲基乙二醛。最后，本發(fā)明者證明，在谷胱甘肽和乙二醛酶I存在下能迅速消除輔酶透析液中的其他羰基化合物以及甲基乙二醛。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及羰基應(yīng)激改良劑和如下使用所述改良劑的腹膜透析液(1).一種羰基應(yīng)激改良劑，它包含作為活性組分的且具有乙二醛酶I活性的酶和羰基化合物還原劑；(2).(1)的羰基應(yīng)激改良劑，它還包含作為活性組分的且具有乙二醛酶II活性的酶；(3).(1)的羰基應(yīng)激改良劑，其中所述羰基化合物還原劑是還原性谷胱甘肽和/或其衍生物；(4).(3)的羰基應(yīng)激改良劑，其中介質(zhì)中用于消除羰基化合物的還原谷胱甘肽的最終濃度為0.1∶50mM；(5).(1)的羰基應(yīng)激改良劑，其中通過消除2-氧醛來(lái)改善羰基應(yīng)激反應(yīng)；(6).(5)的羰基應(yīng)激改良劑，其中2-氧醛是選自乙二醛、甲基乙二醛和3-去氧葡萄糖酮醛的化合物；(7).(1)的羰基應(yīng)激改良劑，其中將具有乙二醛酶I活性的酶固定在載體上；(8).一種消除羰基化合物的方法，它包括將(7)的載體與病人的血或腹膜透析液在羰基化合物還原劑存在下接觸的步驟；(9).一種腹膜透析液，它包含(1)的羰基應(yīng)激改良劑；和(10).一種改善腹膜透析液中羰基應(yīng)激的方法，它包括將腹膜透析液與具有乙二醛酶I活性的酶在羰基化合物還原劑存在下接觸的步驟。
此外，本發(fā)明涉及用具有乙二醛酶I活性的酶和羰基化合物還原劑來(lái)制備羰基應(yīng)激改良劑的用途。本發(fā)明也涉及用已固化了具有乙二醛酶I活性的酶的載體來(lái)制備羰基化合物吸收劑的用途。
本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑包含作為活性組分且具有乙二醛酶I活性的酶和羰基化合物還原劑。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“改善羰基應(yīng)激”是指在與活體接觸的介質(zhì)中消除羰基化合物，并因此減輕蛋白質(zhì)修飾。“消除羰基化合物”是指不可逆地消除羰基的反應(yīng)性。術(shù)語(yǔ)“與活體接觸的介質(zhì)”特指腹膜透析液(下文縮寫為“CADP溶液”)、血和其他體液。
短語(yǔ)“可用于本發(fā)明的羰基化合物還原劑”是指一種化合物，它能夠?qū)Ⅳ驶衔镞€原為用作具有乙二醛酶I活性酶底物的化合物。只要滿足上述要求，任意化合物都可用作本發(fā)明羰基化合物還原劑。例如，所述化合物包括還原谷胱甘肽(GSH)及其衍生物。這些化合物可以是其可藥用鹽。例如，還原GSH與羰基化合物甲基乙二醛結(jié)合產(chǎn)生半硫縮醛。該反應(yīng)是非酶反應(yīng)。由此產(chǎn)生的半硫縮醛用作具有乙二醛酶I活性的酶底物。此外，只要能夠產(chǎn)生用作具有乙二醛酶I活性酶底物的羰基化合物，本發(fā)明可使用任何谷胱甘肽衍生物。更優(yōu)選地，谷胱甘肽衍生物是那些具有巰基的化合物，其中所述巰基與羰基化合物反應(yīng)產(chǎn)生巰基酯化合物。具體地說(shuō)，例如，所述谷胱甘肽衍生物包括乙?；入赘孰?、aspartathion、異谷胱甘肽等。
羰基化合物還原劑應(yīng)該在能確保在反應(yīng)中消除羰基化合物的濃度下使用。具體地說(shuō)，例如當(dāng)使用GSH來(lái)消除CAPD溶液中的羰基化合物時(shí)，在消除羰基化合物的介質(zhì)(本文指CAPD溶液)中可使用最終濃度為0.1-50mM，更優(yōu)選1-10mM的GSH。當(dāng)GSH的濃度在該范圍時(shí)，可在典型的CAPD溶液中，將羰基化合物接近完全并迅速地轉(zhuǎn)化為具有乙二醛酶I活性的酶底物。然而，在透析過程中預(yù)測(cè)CAPD溶液中羰基化合物的量是困難的。因此，當(dāng)懷疑病人羰基應(yīng)激狀態(tài)增強(qiáng)時(shí)，可使用保證有較高濃度的GSH。
按照本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“具有乙二醛酶I活性的酶”是指具有相當(dāng)于乙二醛酶I催化活性功能的酶。乙二醛酶I也稱作乳酰GSH裂合酶(EC.4.4.1.5)，它利用其中羰基化合物還原劑，如還原谷胱甘肽，與酮-醛(2-氧醛)化合物的醛基連接的化合物作為酶底物。例如有代表性的乙二醛酶I的酶底物為半硫代半縮醛(半硫縮醛)，它是由與還原谷胱甘肽連接的甲基乙二醛組成的。具有乙二醛酶I活性的酶催化該反應(yīng)，其中將所述酶底物轉(zhuǎn)化為疏羥酸酯化合物。只要在羰基化合物還原劑存在下，可將酮-醛化合物的醛基轉(zhuǎn)化為疏羥酸酯，任何酶和還原劑都可以使用。酶反應(yīng)圖式如下反應(yīng)式顯示，具有乙二醛酶I活性的酶將由羰基化合物甲基乙二醛與GSH結(jié)合產(chǎn)生的半硫縮醛轉(zhuǎn)化并解毒為S-乳酰谷胱甘肽。該反應(yīng)是不可逆反應(yīng)。因此，無(wú)毒的S-乳酰谷胱甘肽是穩(wěn)定的并且基本上不進(jìn)行產(chǎn)生甲基乙二醛的可逆反應(yīng)。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，各種酶底物，包括在體內(nèi)產(chǎn)生羰基應(yīng)激狀態(tài)的甲基乙二醛酶，都可以通過聯(lián)合應(yīng)用GSH和具有乙二醛酶I活性的酶而被迅速地消除，由此來(lái)支持所述組合作為羰基應(yīng)激改良劑的可行性。
已知具有乙二醛酶I活性的酶是由如下各種途徑衍生的哺乳動(dòng)物組織(Methods Enzymol.90，536-541，1982；Methods Enzymol.90，542-546，1982)；酵母菌(FEBS Lett.85，275-276，1978；Biochem.J.183，23-30，1979)；細(xì)菌(Biochem.Biophys.Res.Commun.，141，993-999，1986)；和人(J.Biol.Chem.268，11217-11221，1993)。
在這些酶中，當(dāng)給人患者服用時(shí)，人的乙二醛酶I預(yù)期是安全的。純化乙二醛酶I的方法是本領(lǐng)域公知的。本發(fā)明所使用具有乙二醛酶I活性的酶可以是天然酶或基因重組物。例如，人的乙二醛酶I基因的結(jié)構(gòu)已被闡明(J.Biol.Chem.268，11217-11221，1993)。因此，其重組蛋白質(zhì)可以通過使用該已知的基因而很容易得到。此外，本發(fā)明具有乙二醛酶I活性的酶可以是(除了與天然酶具有相同氨基酸序列的那些酶)引入突變來(lái)改善其穩(wěn)定性、活性等的酶。在氨基酸序列中人工引入突變的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，按照位點(diǎn)特異性誘變方法(Mark，D.F.等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81，5662(1984))，利用編碼所需突變氨基酸的合成的寡聚核苷酸引物，可部分地修改核苷酸序列的密碼子。
除了使其氨基酸序列變異外，本發(fā)明具有乙二醛酶I活性的酶可進(jìn)行化學(xué)修飾。例如，已知與聚乙二醇結(jié)合在某些情況下改善酶的穩(wěn)定性。或者，將酶蛋白質(zhì)固定在固相載體上的方法也通常用于酶蛋白質(zhì)方便地回收。所述化學(xué)修飾方法可適用于本發(fā)明具有乙二醛酶I活性的酶。
以確保迅速消除羰基化合物與羰基化合物還原劑之間反應(yīng)所產(chǎn)生底物的濃度使用具有乙二醛酶I活性的酶。例如，當(dāng)從CAPD溶液中消除羰基化合物時(shí)，通過每1升CAPD溶液用10-104U乙二醛酶I，優(yōu)選10-103U乙二醛酶I可達(dá)到迅速消除羰基化合物。1U乙二醛酶I定義為在1分鐘內(nèi)從甲基乙二醛和還原谷胱甘肽中產(chǎn)生1μmol S-乳酰谷胱甘肽所需要的酶的量。
具有乙二醛酶II活性的酶也可配制成本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑。乙二醛酶II是水解酶，也叫羥基?；鵊SH水化酶(EC.3.1.2.6.)。在體內(nèi)，該酶催化產(chǎn)生乳酸的S-D-乳酰谷胱甘肽(它是由乙二醛酶I的作用產(chǎn)生的)水解和還原谷胱甘肽的再生。由乙二醛酶I、谷胱甘肽(GSH)和乙二醛酶II組成的乙二醛酶系統(tǒng)描述如下。 乙二醛酶II，包括得自人的酶(J.Biol.Chem.271，319-323，1996)也已被分離出來(lái)。本發(fā)明可使用任何已知的乙二醛酶II。像具有乙二醛酶I活性的酶一樣，本發(fā)明可使用具有乙二醛酶II活性的天然形式酶或基因重組酶。此外，本發(fā)明也可以使用在氨基酸序列中包含突變的酶。
當(dāng)具有乙二醛酶II活性的酶與本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑聯(lián)合使用時(shí)，二者可通過在使用前組合或在使用時(shí)接觸來(lái)配制。此外，當(dāng)具有乙二醛酶I活性的酶用作固定化酶時(shí)，具有乙二醛酶II活性的酶也可以以固定形式使用。可通過兩種方法完成酶的固定(1)可混合所述酶，然后固定在一起；或(2)分別固定所述酶，然后組合在一起。具有乙二醛酶II活性的酶優(yōu)選地以確保迅速消除具有乙二醛酶I活性酶反應(yīng)產(chǎn)物的濃度使用。具體地說(shuō)，當(dāng)使用1U乙二醛酶I時(shí)，具有乙二醛酶II活性的酶的量?jī)?yōu)選地為0.5-10U，更優(yōu)選1-5U。1U乙二醛酶II定義為在1分鐘內(nèi)從S-D-乳酰谷胱甘肽中產(chǎn)生1μmol乳酸所需要的酶的量。
按照本發(fā)明，包含作為活體中產(chǎn)生羰基應(yīng)激的基本結(jié)構(gòu)羰基醛(R-CO-CHO)的羰基化合物可消除。例如，所述化合物包括對(duì)氧化應(yīng)激有反應(yīng)的腎衰病人血中積聚的化合物，有如下這些·得自碳水化合物的羰基化合物·乙二醛·甲基乙二醛·3-去氧葡萄糖酮醛。
本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑可用于受羰基應(yīng)激影響的活體。具體地說(shuō)，例如，所述改良劑可通過非胃腸道給藥或用到血透析液或腹膜透析液的環(huán)路中?；蛘撸景l(fā)明羰基應(yīng)激改良劑可在CAPD溶液之前加入。在該情況下，本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑應(yīng)該以無(wú)菌方式加到加熱滅菌的CAPD溶液中?；蛘?，本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑也可以在使用時(shí)加入。
本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑可以以無(wú)菌方式加入，包括將羰基應(yīng)激改良劑以無(wú)菌方式填充到常規(guī)的多室容器中或預(yù)先填充到注射器中并在使用時(shí)混合。多室容器的實(shí)例為所述室可以是連接的分餾袋容器；包含聯(lián)通工具如雙頭針的試劑盒等等。多室容器的一個(gè)室填充腹膜透析液，而另一室填充本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑。這兩室在使用時(shí)連接。
為改善羰基應(yīng)激狀態(tài)，一種包括與CAPD溶液接觸步驟的方法也是有效的。因此，CAPD溶液包含固定化酶(具有本發(fā)明乙二醛酶I活性)和羰基化合物還原劑如還原GSH；下文除另外說(shuō)明外，術(shù)語(yǔ)“CAPD溶液”是指包含羰基化合物還原劑的溶液。例如，用于腹膜透析的CAPD溶液在貯存過程中產(chǎn)生和積聚的羰基化合物可通過將該溶液放置在內(nèi)表面固定具有乙二醛酶I活性酶的容器中或放置在包含固定在載體如珠子或纖維上的具有乙二醛酶I活性酶的容器中來(lái)加以消除。在后一情況下，可通過過濾除去腹膜透析液中不溶性載體。
消除羰基化合物的藥筒可通過將已固定具有乙二醛酶I活性酶的柱子中填充珠子形或纖維性載體來(lái)制備。CAPD溶液可在與該藥筒接觸后引入腹膜腔。消除羰基化合物所需要的羰基化合物還原劑可在引入CAPD溶液前加入。如果在引入腹膜腔時(shí)接觸了消除羰基化合物的藥筒，在透析過程中積聚的由病人產(chǎn)生羰基化合物就不能除去，但是透析液中存在的那些可除去?；蛘?，當(dāng)通過在具有循環(huán)泵的封閉回路中循環(huán)腹膜透析液進(jìn)行腹膜透析時(shí)，透析過程中腹膜腔中所積聚的羰基化合物可除去，同樣腹膜透析液中的那些羰基化合物也可通過在回路中放置上述消除羰基化合物且包含固定羰基應(yīng)力改良劑的藥筒而除去。
當(dāng)將具有乙二醛酶II活性的酶合并到本發(fā)明羰基應(yīng)力改良劑中時(shí)，它可以先與具有乙二醛酶I活性的酶一起配制?；蛘?，當(dāng)使用固定化酶作為具有乙二醛酶I活性的酶時(shí)，則具有乙二醛酶II酶活性的酶也可以固定形式使用。具體地說(shuō)，可以使用混合柱，該混合柱包含具有乙二醛酶I活性的酶和具有乙二醛酶II活性的酶，或者可將具有乙二醛酶II活性的酶順流放置到具有乙二醛酶I活性的酶中?；蛘?，可通過其中一種酶固定而另一種酶處于游離狀態(tài)的一個(gè)系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)消除羰基化合物的目的。
本發(fā)明消除羰基化合物的方法可用于改善羰基應(yīng)力的方法中，它包括將血、透析液和所述外界活體接觸。在該方法中，最好將具有乙二醛酶I活性的酶進(jìn)行固定。
按照本發(fā)明，對(duì)用于使具有乙二醛酶I活性的酶固定的載體來(lái)說(shuō)沒有特別的限制，只要該載體是對(duì)人無(wú)毒的并且是足夠安全和穩(wěn)定的以便于直接與血或透析液接觸。例如，這樣的物質(zhì)包括合成的或天然的有機(jī)大分子化合物；無(wú)機(jī)物如玻璃珠、硅膠、氧化鋁和活性炭；和用多糖、合成的聚合物等包衣的物質(zhì)，等等。
例如，包含大分子化合物的載體包括聚甲基丙烯酸甲酯聚合物、聚丙烯腈聚合物、聚砜聚合物、乙烯基聚合物、聚烯烴聚合物、氟聚合物、聚酯聚合物、聚酰胺聚合物、聚酰亞胺聚合物、聚氨酯聚合物、聚丙烯酸聚合物、聚苯乙烯聚合物、聚酮聚合物、硅聚合物、纖維素聚合物、聚氨基葡糖聚合物等。更具體地說(shuō)，載體的實(shí)例為多糖，如瓊脂糖、纖維素、殼多糖、殼聚糖、瓊脂糖凝膠、葡萄糖等及其衍生物；聚酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚砜、聚醚砜、聚丙烯、聚乙烯醇、聚烯丙基醚砜、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚碳酸酯、乙?；w維素、聚丙烯腈、聚對(duì)苯二酸乙二酯、聚酰胺、硅樹脂、氟樹脂、聚氨酯、聚醚氨酯、聚丙烯酰胺及其衍生物等。大分子物質(zhì)可單獨(dú)使用或與兩種或多種大分子聯(lián)合使用。在后一情況下，將本發(fā)明具有乙二醛酶I活性的酶固定在至少一種大分子上。也可以將具有乙二醛酶I活性的酶單獨(dú)固定在載體上，或與具有乙二醛酶II活性的酶聯(lián)合固定在載體上。
按照本發(fā)明，對(duì)載體的形狀沒有限制。例如，所述載體可以是膜狀的、纖維的、顆粒形的、中空纖維樣的、無(wú)紡布樣的、多孔的、蜂巢形的等。載體與血或腹膜透析液接觸的面積可通過改變載體的厚度、表面積、直徑、長(zhǎng)度、形狀和或大小來(lái)控制。
本發(fā)明具有乙二醛酶I活性的酶可利用已知的方法固定在上述載體上，所述方法如物理吸附、特異性生化結(jié)合反應(yīng)、離子結(jié)合、共價(jià)鍵、接枝等。根據(jù)所需要的特定用途，可在載體和具有乙二醛酶酶I活性的酶之間插入間隔物。優(yōu)選的是，將載體和具有乙二醛酶I活性的酶通過共價(jià)鍵結(jié)合使得所釋放酶的量達(dá)到最小。利用載體上的官能團(tuán)，通過共價(jià)鍵結(jié)合到具有乙二醛酶I活性的酶。例如，所述官能團(tuán)包括羥基、氨基、醛基、羧基、巰基、甲硅烷醇基、酰胺基、環(huán)氧基、琥珀酰亞胺基等。然而，本發(fā)明官能團(tuán)不限制與這些基團(tuán)。共價(jià)鍵的實(shí)例為酯鍵、醚鍵、氨基鍵、酰胺鍵、硫化物鍵、亞氨鍵、二硫化物鍵等。
固定了本發(fā)明具有乙二醛酶I活性酶的載體可通過常規(guī)滅菌方法滅菌。具體地說(shuō)，滅菌方法包括γ-射線照射、氣體滅菌等。
固定了本發(fā)明具有乙二醛酶I活性酶的載體可以通過各種方式與血接觸。其實(shí)例包括通過將所采集的病人血注入血袋中消除病人血中羰基化合物的方法，其中所述血袋中裝滿了已固定具有乙二醛酶I活性酶的載體；血液在充滿珠子或纖維等載體且固定了具有乙二醛酶I活性酶的藥筒柱中循環(huán)的方法。代替全血，血漿也可以按照該方法處理。處理過的血也可以返回病人身體內(nèi)，或者如果需要，可以貯存在血袋或類似容器中。在貯存中產(chǎn)生和/或積聚的羰基化合物也可以通過向血袋中加入固定了具有乙二醛酶I活性酶的載體來(lái)加以消除。
血、羰基化合物還原劑和固定了具有乙二醛酶I活性酶的載體之間的接觸可在血純化步驟進(jìn)行，該步驟包括血透析、血過濾、血過濾透析、血吸附和血漿分離。
例如，血透析病人的血透析和消除羰基化合物兩者可通過將固定了本發(fā)明具有乙二醛酶I活性酶的載體放在血透析回路中同時(shí)進(jìn)行，并且在羰基化合物還原劑存在下進(jìn)行。因此，將本發(fā)明具有乙二醛酶I活性的酶優(yōu)選地固定在血透析膜上。已知類型的透析膜可用作載體。其實(shí)例包括纖維素衍生物如再生的纖維素和三乙酸纖維素；聚甲基丙烯酸甲酯；聚烯烴；聚砜；聚丙烯腈(PAN)；聚酰胺；聚酰亞胺；聚醚尼龍；硅；聚酯共聚物等；然而，本發(fā)明對(duì)此沒有限制。代替使用透析膜作為載體，甚至可將充滿載體的柱子放入上述血透析回路中，其中所述載體上已固定了本發(fā)明具有乙二醛酶I活性的酶。通過在羰基化合物還原劑存在下，將病人的血與固定了具有乙二醛酶I活性酶的載體接來(lái)捕獲血液中的羰基化合物，并消除了所述化合物對(duì)活體的傷害活性，使得化合物成為無(wú)毒的?？杉尤肟鼓齽﹣?lái)預(yù)防在體外循環(huán)過程中血凝固。例如，所述抗凝劑包括肝素、低分子量肝素、Futhan(Nafamostat mesilate)等。它們也可固定在載體上。
如果用于與血或透析液接觸的本發(fā)明羰基應(yīng)力改善劑的量太少，在透析過程中可能存在一些不能完全消除病人血中羰基化合物的情況。預(yù)先測(cè)定病人血中羰基羰基化合物的量是特別困難的。因此，為了達(dá)到最好的效果，有利的是在確保病人安全的范圍內(nèi)保持盡可能多起活性作用的羰基化合物改善劑。羰基應(yīng)力改善劑的劑量可通過改變固定在載體上具有乙二醛酶I活性的酶的量或者已固定了具有乙二醛酶I活性酶的載體的量進(jìn)行調(diào)節(jié)。
本發(fā)明調(diào)節(jié)應(yīng)力改善劑可與生理上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑等一起配制成通過非胃腸道給藥的藥物組合物。非胃腸道藥物的劑型包括注射劑、滴劑等。術(shù)語(yǔ)“注射劑”包括皮下注射劑、肌內(nèi)注射劑、腹膜內(nèi)注射劑等。
注射劑可通過將作為主要組分的羰基化合物還原劑和具有乙二醛酶I活性的酶與適宜的分散劑一起溶解，將所述物質(zhì)與酶溶解或分散在分散介質(zhì)中來(lái)制備。根據(jù)所選擇的分散劑類型，所述劑型可以是水溶液或油溶液。用于制備水溶液的分散介質(zhì)包括蒸餾水、生理鹽水、林格氏溶液等。各種植物油、丙二醇等可用作制備油溶液的分散劑。另外，如果需要，也可以加入防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸酯。也可以將已知的等滲劑如氯化鈉和葡萄糖加入到注射劑中。而且，也可以將安慰劑如苯扎氯銨或鹽酸普魯卡因加到注射劑中。
本發(fā)明羰基應(yīng)力改善劑的劑量根據(jù)給藥方法的類型(劑型)和受試者的情況(體重、年齡、性別、癥狀等)選擇。通常，在口服給藥情況下，典型的給藥劑量為0.001-10mg，更優(yōu)選0.01-1mg/天/公斤體重(成人)來(lái)獲得羰基應(yīng)力的改善作用?？蛇m當(dāng)?shù)剡x擇給藥次數(shù)，例如每天1-5次。
可通過監(jiān)測(cè)血中羰基化合物或AGE的濃度來(lái)確定本發(fā)明羰基應(yīng)力改善劑的作用。體內(nèi)作用可通過比較對(duì)照組和已服用的本發(fā)明羰基應(yīng)力改善劑組之間的血AGE濃度來(lái)估價(jià)。對(duì)照組可以是未處理組或用生理鹽水或?qū)φ談?由無(wú)主要組分即羰基應(yīng)力改善劑的改善劑組成)的組。乙二醛(GO)、甲基乙二醛(MGO)、3-去氧葡糖醛酮(3DG)等也可以用作羰基化合物的指標(biāo)。這些羰基化合物的濃度可以很容易地通過實(shí)施例中所顯示的HPLC等方法測(cè)定(Ohnori S.等人，J.Chromatogra.414149-155，1987；Yamada H.，J.Biol.Chem.26920275-20280，1994)?；蛘?，羰基化合物的濃度可通過將它們與2，4-二硝基苯基肼(2，4-DNPH)在酸性條件下反應(yīng)并在360nm下測(cè)定有色反應(yīng)產(chǎn)物的光學(xué)密度來(lái)測(cè)定。此外，pendosidine等可用作AGE的指標(biāo)。用反向HPLC確定pendosidine量的方法是本領(lǐng)域早已已知的(Miyata T等人，J Am SocNephrol 71198-1206，1996)。測(cè)定血或透析液中羰基化合物和AGE的濃度來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明羰基應(yīng)力改善劑在活體外的作用。
附圖簡(jiǎn)述

圖1描述谷胱甘肽對(duì)甲基乙二醛的捕獲作用。橫坐標(biāo)表示反應(yīng)時(shí)間(hr.)；縱坐標(biāo)表示甲基乙二醛的的殘留率(％)，以反應(yīng)前(0小時(shí))的量為100％計(jì)算。
圖2描述加入乙二醛酶I對(duì)消除甲基乙二醛的作用。橫坐標(biāo)表示乙二醛酶I(單位/ml)的濃度；縱坐標(biāo)表示甲基乙二醛的的殘留率(％)，以不存在乙二醛酶時(shí)的量作為100％計(jì)算。
圖3描述加入乙二醛酶I對(duì)二羰基化合物的消除作用。
圖4描述在三種二羰基化合物的混合溶液中谷胱甘肽對(duì)二羰基化合物的捕獲作用。上端圖為乙二醛；中間圖為甲基乙二醛；下端圖為3-脫氧葡糖醛酮。
圖5描述在含有三種二羰基化合物之一的溶液中谷胱甘肽對(duì)二羰基化合物的捕獲作用。上端圖為乙二醛；中間圖為甲基乙二醛；下端圖為3-脫氧葡糖醛酮。
圖6描述在三種二羰基化合物的混合溶液中加入的乙二醛酶I對(duì)二羰基化合物的消除作用。橫坐標(biāo)表示乙二醛酶I(單位/ml)的濃度；縱坐標(biāo)表示二羰基化合物的殘留率(％)，以不存在乙二醛酶時(shí)的量作為100％計(jì)算。
本發(fā)明的最佳實(shí)施方式參照下列實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1谷胱甘肽在甲基乙二醛溶液中對(duì)甲基乙二醛的捕獲作用(1)實(shí)驗(yàn)方法將含有甲基乙二醛的PBS(-)溶液和含有谷胱甘肽的PBS(-)溶液(pH7.4)合并來(lái)制備含有400μM甲基乙二醛和0、1、2、4、或8mM谷胱甘肽的溶液。這些溶液在37℃溫度下保溫。在0、2、4、8和24小時(shí)后取樣；并且將40μl的2M高氯酸鹽、40μl的1％鄰苯二胺和100μl的200μM乙二醛加到100μl的每個(gè)取出的樣品中。攪拌混合物然后在25℃下保溫1小時(shí)。分離由甲基乙二醛和鄰苯二胺反應(yīng)產(chǎn)生的喹喔啉衍生物并按Ohmori等人的方法(Ohmori，S.等人，J.Chromatogr.414149-155，1987)使用反相柱進(jìn)行HPLC定量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果谷胱甘肽捕獲的甲基乙二醛取決于谷胱甘肽的濃度和在37℃溫度下保溫的時(shí)間(圖1)。
實(shí)施例2在谷胱甘肽和乙二醛I存在下甲基乙二醛從甲基乙二醛溶液中的消除作用(1)實(shí)驗(yàn)方法制備PBS(-)溶液，其中甲基乙二醛濃度為400μM，谷胱甘肽濃度為4mM并且具有乙二醛酶I活性的酶的濃度分別為8、16、40和80單位/ml。溶液在37℃溫度下保溫。由酵母衍生的商購(gòu)酶(Sigma)被用作乙二醛酶I。在1小時(shí)后取樣，然后采用與實(shí)施例1相同的方法定量甲基乙二醛。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果加入乙二醛酶I使大約99％的甲基乙二醛消除(圖2)。表明加入乙二醛酶I促進(jìn)甲基乙二醛的消除。
實(shí)施例3在谷胱甘肽和乙二醛酶I存在下二羰基化合物從CAPD溶液中的消除(1)實(shí)驗(yàn)方法將谷胱甘肽和乙二醛(與實(shí)施例2相同)加到CAPD溶液(Baxter Ltd.；PD-4，1.5)來(lái)制備含有0、1或4mM谷胱甘肽和0、1.3或5.2單位/ml乙二醛酶I的溶液。溶液在37℃溫度下保溫。在1小時(shí)后取樣；將40μl的2M高氯酸鹽、40μl的1％鄰苯二胺和100μl的20μM 2，3-丁二酮加到100μl的每個(gè)取出樣品的等份試樣中。攪拌混合物然后在25℃下保溫1小時(shí)。分離由鄰苯二胺和3-脫氧葡糖醛酮、乙二醛或甲基乙二醛之間反應(yīng)產(chǎn)生的喹喔啉衍生物并按Ohmori等人的方法(Ohmori，S.等人，J.Chromatogr.414149-155，1987)使用反相柱進(jìn)行HPLC定量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過加入乙二醛酶I和谷胱甘肽，可從CAPD溶液中消除二羰基化合物如3-脫氧葡糖醛酮、乙二醛和甲基乙二醛(圖3)。因此，通過加入乙二醛酶I和谷胱甘肽可有效地從CAPD溶液中消除二羰基化合物。
實(shí)施例4在含有二羰基化合物的混合溶液中谷胱甘肽對(duì)二羰基化合物的捕獲作用(1)實(shí)驗(yàn)方法制備PBS(-)溶液(pH7.4)，其中乙二醛、甲基乙二醛和3-脫氧葡糖醛酮的濃度均為200μM，谷胱甘肽的濃度是0、0.5、1或5mM，并且乙二醛酶I的濃度為0、0.05、0.1、0.5、1或2單位/ml。將這些溶液在37℃溫度下保溫1小時(shí)。將40μl的2M高氯酸鹽、40μl的1％鄰苯二胺和100μl的50μM2，3-丁二酮作為內(nèi)標(biāo)加到100μl的每個(gè)樣品的等份試樣中。攪拌混合物并在25℃下保溫1小時(shí)。分離由鄰苯二胺和乙二醛之間反應(yīng)產(chǎn)生的喹喔啉衍生物并按Ohmori等人的方法(Ohmori，S.等人，J.Chromatogr.414149-155，1987)使用反相柱進(jìn)行HPLC定量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果將乙二醛酶I加到二羰基化合物(即乙二醛、甲基乙二醛和3-脫氧葡糖醛酮)的混合溶液和含有谷胱甘肽的溶液中，觀察到二羰基化合物的濃度降低。而且，隨著谷胱甘肽和乙二醛酶I濃度的增加，二羰基化合物的消除速率增加(圖4)。在三種二羰基化合物的混合溶液中，反應(yīng)活性較低的二羰基化合物3-脫氧葡糖醛酮的消除減少。這可能由同時(shí)存在的反應(yīng)活性高的二羰基化合物甲基乙二醛所導(dǎo)致。因此，使用分別含有各個(gè)二羰基化合物的溶液進(jìn)行類似的實(shí)驗(yàn)。
實(shí)施例5在分別含有各個(gè)二羰基化合物的溶液中谷胱甘肽對(duì)二羰基化合物的捕獲作用(1)實(shí)驗(yàn)方法制備PBS(-)溶液(pH7.4)，其中乙二醛濃度為100μM，谷胱甘肽的濃度是0、0.1、1或10mM，并且乙二醛酶I的濃度為0、0.01、0.1、。1或10單位/ml。溶液在37℃溫度下保溫1小時(shí)。將40μl的2M高氯酸鹽、40μl的1％鄰苯二胺和100μl的50μM 2，3-丁二酮作為內(nèi)標(biāo)加到100μ1的每個(gè)樣品的等份試樣中；攪拌混合物并在25℃下保溫1小時(shí)。分離由鄰苯二胺和乙二醛之間反應(yīng)產(chǎn)生的喹喔啉衍生物并按Ohmori等人的方法(Ohmori，S.等人，J.Chromatogr.414149-155，1987)使用反相柱進(jìn)行HPLC定量。以相同方法用甲基乙二醛和3-脫氧葡糖醛酮代替乙二醛進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果將乙二醛酶I加到含有乙二醛、甲基乙二醛或3-脫氧葡糖醛酮的溶液中并加到含有谷胱甘肽的溶液中降低了二羰基化合物的濃度。而且，隨著谷胱甘肽和乙二醛酶濃度的增加，二羰基化合物的消除速率增加(圖5)。單獨(dú)保溫各個(gè)化合物時(shí)每個(gè)羰基化合物的消除速率比合并的反應(yīng)溶液更快。所以，假定反應(yīng)活性最高的羰基化合物(即毒性最高的)甲基乙二醛首先消除，那么三種羰基化合物中反應(yīng)活性比甲基乙二醛低的其他化合物依次從混合溶液中消除。
實(shí)施例6在CAPD液體中谷胱甘肽對(duì)二羰基化合物的捕獲作用(1)實(shí)驗(yàn)方法將谷胱甘肽和乙二醛酶I加到從選定的腹膜透析病人中收集的CAPD液體(來(lái)自Baxter Ltd.的PD-4，1.5；在腹膜腔中停留時(shí)間1小時(shí))來(lái)制備含有5mM濃度谷胱甘肽和0、5、10或20單位/ml濃度乙二醛酶I的溶液。將該溶液在37℃溫度下保溫1小時(shí)。1小時(shí)后取樣。將40μl的2M高氯酸鹽、40μl的1％鄰苯二胺和100μl的20μM 2，3-丁二酮作為內(nèi)標(biāo)加到100μl的每個(gè)樣品的等份試樣中；攪拌混合物并在25℃下保溫1小時(shí)。分離由鄰苯二胺和3-脫氧葡糖醛酮、乙二醛或甲基乙二醛之間反應(yīng)產(chǎn)生的喹喔啉衍生物并按Ohmori等人的方法(Ohmori，S.等人，J.Chromatogr.414149-155，1987)使用反相柱進(jìn)行HPLC定量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果乙二醛酶I和谷胱甘肽加到CAPD液體中之后，二羰基化合物如3-脫氧葡糖醛酮、乙二醛和甲基乙二醛的濃度降低(圖6)。所以，證實(shí)了加入乙二醛酶I和谷胱甘肽可以從CAPD病人的腹腔CAPD溶液中消除二羰基化合物。
工業(yè)實(shí)用性根據(jù)本發(fā)明，通過本發(fā)明的羰基應(yīng)力改良劑可以實(shí)現(xiàn)對(duì)羰基化合物的快速消除。所述的改良劑不僅對(duì)于甲基乙二醛的消除有效，而且對(duì)其他主要的羰基化合物包括3-脫氧葡糖醛酮和乙二醛也有效。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的意義在于證實(shí)了快速消除引起活體羰基應(yīng)力的主要羰基化合物的可能性并能夠?qū)⑵溆米黥驶鶓?yīng)力改良劑。因?yàn)楸景l(fā)明的羰基應(yīng)力改良劑使用源于體內(nèi)起作用的酶反應(yīng)，它們即使通過CAPD溶液釋放和直接進(jìn)入活體都有希望是高度安全的。
而且，由于使用酶反應(yīng)，高度特異性是本發(fā)明的另一特征。以前已知的羰基應(yīng)激改良劑是基于化合物的化學(xué)反應(yīng)。所以，其特異性是低的并且它們與所有類型的羰基化合物反應(yīng)。因此，預(yù)計(jì)這些已知的改良劑不僅捕獲對(duì)活體有害的由糖衍生的或由類脂衍生的羰基化合物，而且也捕獲活體必需的羰基如吡哆醛。本發(fā)明利用酶反應(yīng)，有望對(duì)于活體有害的羰基化合物是高度特異性的。
另外，以上實(shí)施例證實(shí)，本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑優(yōu)先消除具有較高反應(yīng)活性的羰基化合物。具體來(lái)說(shuō)，在甲基乙二醛、3-特異葡糖醛酮和乙二醛共存時(shí)，對(duì)活體影響大的甲基乙二醛首先被消除，然后其他化合物再被消除。因此，本發(fā)明羰基應(yīng)激改良劑的優(yōu)異性能不僅體現(xiàn)在羰基化合物的消除速率上，而且也體現(xiàn)在以示構(gòu)的方式進(jìn)行改良羰基應(yīng)激狀態(tài)的反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.一種羰基應(yīng)激改良劑，包含作為活性組分的具有乙二醛酶I活性的酶和羰基化合物還原劑。
2.權(quán)利要求1的羰基應(yīng)激改良劑，其中另外含有作為活性組分的具有乙二醛酶II活性的酶。
3.權(quán)利要求1的羰基應(yīng)激改良劑，其中羰基化合物還原劑是還原性的谷胱甘肽和/或其衍生物。
4.權(quán)利要求3的羰基應(yīng)激改良劑，其中介質(zhì)中用于消除羰基化合物的還原性谷胱甘肽的最終濃度為0.1-50mM。
5.權(quán)利要求1的羰基應(yīng)激改良劑，其中羰基應(yīng)激的改良是通過消除2-羰基醛來(lái)完成的。
6.權(quán)利要求5的羰基應(yīng)激改良劑，其中2-羰基醛是選自乙二醛、甲基乙二醛和3-脫氧葡糖醛酮的化合物。
7.權(quán)利要求1的羰基應(yīng)激改良劑，其中具有乙二醛酶I活性的酶被固定在載體上。
8.一種消除羰基化合物的方法，它包括在羰基化合物還原劑存在下使權(quán)利要求7的載體與病人血液或腹膜透析液接觸的步驟。
9.一種含有權(quán)利要求1的羰基應(yīng)激改良劑的腹膜透析液。
10.一種改良腹膜透析液中羰基應(yīng)激的方法，它包括在羰基化合物還原劑存在下使腹膜透析液與具有乙二醛酶I活性的酶接觸的步驟。
全文摘要
本發(fā)明提供了羰基應(yīng)激改良劑，其含有作為活性組分的具有乙二醛酶I活性的酶和羰基化合物還原劑。本發(fā)明的羰基應(yīng)激改良劑快速消除羰基化合物，并因此緩解羰基誘導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)的疾病。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1433320SQ00818720
公開日2003年7月30日 申請(qǐng)日期2000年12月15日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月20日
發(fā)明者宮田敏男 申請(qǐng)人:黑川清, 宮田敏男, 學(xué)校法人東海大學(xué)