專(zhuān)利名稱(chēng)：作為佐劑的聚氧乙烯脫水山梨醇酯和辛苯昔醇組合及其在疫苗中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型佐劑系統(tǒng)，所述佐劑系統(tǒng)包含與辛苯昔醇結(jié)合的聚氧乙烯脫水山梨醇酯表面活性劑。本發(fā)明提供所述新型佐劑、包含所述佐劑的疫苗以及其生產(chǎn)方法和將其配制到疫苗中的方法。也提供了本發(fā)明佐劑或疫苗在疾病預(yù)防或治療方面的應(yīng)用。所述佐劑尤其可用作粘膜佐劑，但也是系統(tǒng)有效的。所述佐劑尤其可用于流感疫苗。
除避開(kāi)對(duì)痛苦的注射的需要和相關(guān)的因“針頭恐懼”所致的對(duì)患者順從的不利影響外，由于已經(jīng)表明在動(dòng)物中經(jīng)粘膜給予抗原在于粘膜表面誘導(dǎo)保護(hù)性應(yīng)答方面的效率更大，而粘膜是許多病原體進(jìn)入的途徑，因此粘膜接種是吸引人的。另外，已經(jīng)提出，粘膜接種，例如鼻內(nèi)接種，可以不僅在鼻粘膜中誘導(dǎo)粘膜免疫，而且在遠(yuǎn)端粘膜部位例如生殖器粘膜中也誘導(dǎo)粘膜免疫(Mestecky，1987，Joumal of ClinicalImmunology，7，265-276；McGhee和Kiyono，Infectious Agents andDisease，1993，2，55-73)。盡管在本領(lǐng)域中有許多研究，但適用于人類(lèi)的安全而有效的佐劑仍有待鑒定。本發(fā)明提供對(duì)該問(wèn)題的一種解決方法。
某些非離子表面活性劑的醫(yī)藥應(yīng)用已有描述。例如，已經(jīng)描述了鼻內(nèi)給予聚氧乙烯脫水山梨醇酯、聚氧乙烯醚、膽汁鹽和其它滲透增強(qiáng)劑以增強(qiáng)鼻腔中胰島素的吸收(Hirai等1981，International Journal ofPharmaceutics，9，165-172；Hirai等1981，International Journal ofPharmaceutics，9，173-184)。
已經(jīng)利用了其它非離子表面活性劑制劑。例如，包含或者聚氧乙烯蓖麻油或辛酸/癸酸甘油酯與聚氧乙烯脫水山梨醇一酯和抗原的混合物的疫苗制劑，能夠在局部給予粘膜后誘導(dǎo)系統(tǒng)免疫應(yīng)答(WO94/17827)。本專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)了，非離子表面活性劑TWEEN20TM(聚氧乙烯脫水山梨醇一酯)和Imwitor742TM(辛酸/癸酸甘油酯)的組合或TWEEN20TM和聚氧乙烯蓖麻油的組合能夠在鼻內(nèi)免疫后，增強(qiáng)系統(tǒng)免疫應(yīng)答。在文獻(xiàn)中也已經(jīng)描述了這種制劑對(duì)于增強(qiáng)針對(duì)鼻內(nèi)所給予抗原的免疫應(yīng)答之影響的細(xì)節(jié)(Gizurarson等1996.Vaccine Research，5，69-75；Aggerbeck等1997，Vaccine，15，307-316；Tebbey等，ViralImmunol 1999；12(1)41-5)。在WO94/17827所示的實(shí)施例(尤其是實(shí)施例4)中，增強(qiáng)所述免疫應(yīng)答所需的TWEEN20TM濃度非常高(36％)，而甚至在有辛酸/癸酸甘油酯的情況下，在28％的濃度下也沒(méi)有發(fā)生免疫應(yīng)答的增強(qiáng)作用。
也已經(jīng)以這樣一種方式配制了非離子表面活性劑，以致形成非離子表面活性劑泡(通常稱(chēng)為NISV；US5,679,355)。這種非離子表面活性劑的制劑通常在膽固醇存在時(shí)的形成脂質(zhì)雙層囊泡，所述囊泡將抗原捕獲在內(nèi)部水相中或雙層本身中。
WO96/36352和US5,653,987描述了一種液體藥劑，所述藥劑包含至少兩種吸收增強(qiáng)劑和水，主要用于胰島素的口服傳遞，其中每種吸收增強(qiáng)劑的存在量為所述總制劑的1-10％w/w的濃度。
通常將表面活性劑用于供系統(tǒng)給藥的油乳化佐劑的配制中，起穩(wěn)定油微滴的作用。例如，聚氧乙烯脫水山梨醇酯(TWEENTM)和脫水山梨醇脂肪酸酯(SPANTM)用來(lái)穩(wěn)定水包油乳液(EP0399843，WO95/17210)。
過(guò)去，已經(jīng)利用Triton X-100或Tween和乙醚的混合物來(lái)將流感病毒斷裂，制備了流感病毒疫苗。對(duì)這兩種斷裂物(split)系統(tǒng)免疫原性的臨床比較表明它們是相當(dāng)?shù)?Gross等1981.J.Clin Microbiol 14，534-8)。也研究了其它表面活性劑對(duì)所得片段疫苗免疫原性的影響。在胃腸外給藥的比較研究中，Mukhlis等(1984 Vaccine 2，199-203)指出，全病毒比去垢劑斷裂的病毒更具免疫原性，但在不同的去垢劑Triton X-100和溴化十六烷基三甲基銨(CTAB)之間產(chǎn)生了勉強(qiáng)比去垢劑empigen強(qiáng)的免疫原性斷裂物。
本申請(qǐng)人在此介紹一個(gè)令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，即聚氧乙烯脫水山梨醇酯與辛苯昔醇聯(lián)合作為一種有效的疫苗佐劑。有利的是，這種組合物可以系統(tǒng)給予，但經(jīng)粘膜給予時(shí)足以誘導(dǎo)系統(tǒng)免疫應(yīng)答。通過(guò)粘膜給予本發(fā)明疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答可以與在系統(tǒng)注射傳統(tǒng)疫苗后觀察到的免疫應(yīng)答至少一樣強(qiáng)或至少與其相當(dāng)。
本發(fā)明提供了安全而有效的佐劑，它們易于生產(chǎn)，可以或者通過(guò)粘膜途徑或者通過(guò)系統(tǒng)途徑給予。
在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供包含聚氧乙烯脫水山梨醇酯和辛苯昔醇的佐劑。
另一方面，本發(fā)明提供包含按照本發(fā)明的佐劑與抗原的疫苗。
特別優(yōu)選包含按照本發(fā)明的佐劑與流感病毒抗原、用于給予粘膜表面、特別是給予鼻粘膜的疫苗組合物。然而，有多種可供選擇的給藥途徑和供按照本發(fā)明的疫苗用的其它可能的抗原，在下文中將描述這些抗原。
辛苯昔醇和聚氧乙烯脫水山梨醇酯在“Surfactant systems”編著Attwood和Florence(1983，Chapman and Hall)中有描述。在Merck IndexEntry 6858(第1162頁(yè)，第12版，Merck & Co.Inc.，Whitehouse Station，N.J.，USA；ISBN 0911910-12-3)中也描述了辛苯昔醇系列，包括叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(TRITON X-100TM)。在Merck Index Entry 7742(第1308頁(yè)，第12版，Merck & Co.Inc.，Whitehouse Station，N.J.，USA；ISBN0911910-12-3)中描述了聚氧乙烯脫水山梨醇酯，包括聚氧乙烯脫水山梨醇一油酸酯(TWEEN80TM)。這兩者都可以用其中描述的方法生產(chǎn)，或者從商業(yè)來(lái)源例如Sigma Inc購(gòu)買(mǎi)。
供按照本發(fā)明的佐劑用的優(yōu)選辛苯昔醇包括來(lái)自Triton系列的其它非離子表面活性劑，例如Triton X-45、、Triton X-102、Triton X-114、Triton X-165、Triton X-205、Triton X-305、Triton N-57、Triton N-101和Triton N-128，但特別優(yōu)選叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(Triton X-100)。
本發(fā)明的佐劑包含一種聚氧乙烯脫水山梨醇酯和一種辛苯昔醇。所述辛苯昔醇最好是叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(TRITON-X-100TM)。所述聚氧乙烯脫水山梨醇酯最好是聚氧乙烯脫水山梨醇一油酸酯(TWEEN80TM)。
按照本發(fā)明的佐劑還可以有利地包含一種膽汁鹽或膽酸衍生物。
因此，所述佐劑可以包含一種聚氧乙烯脫水山梨醇酯例如聚氧乙烯脫水山梨醇一油酸酯(Tween 80)、一種辛苯昔醇例如叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(Triton X-100)和一種膽汁鹽或膽酸衍生物例如脫氧膽酸鈉或?；敲撗跄懰徕c。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含聚氧乙烯脫水山梨醇一油酸酯(Tween 80)、叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(Triton X-100)和脫氧膽酸鈉的佐劑制劑。
最好是，所述佐劑制劑中存在的非離子表面活性劑總濃度低于40％，更優(yōu)選至多約20％。優(yōu)選的范圍是在約0.001-20％之間，更優(yōu)選0.01-10％，最優(yōu)選至多約2％(w/v)。
所述各種非離子表面活性劑在最終疫苗組合物中的優(yōu)選濃度如下辛基或壬基苯氧基聚乙氧基乙醇例如Triton X-100或Triton系列中的其它去垢劑0.001％-20％，優(yōu)選0.001-10％，更優(yōu)選0.001-1％，最優(yōu)選0.005-0.1％(w/v)；聚氧乙烯脫水山梨醇酯例如Tween 800.01-1％，最優(yōu)選約0.0％(w/v)。
所述非離子表面活性劑濃度的特別優(yōu)選的范圍是Tween 80TM0.01-1％，最優(yōu)選約0.1％(v/v)；Triton X-100TM0.001-0.1％，最優(yōu)選0.005-0.02％(w/v)。
本發(fā)明的一個(gè)方面是包含與辛苯昔醇結(jié)合的聚氧乙烯脫水山梨醇酯表面活性劑的疫苗制劑，其中疫苗中存在的抗原未被捕獲在非離子表面活性劑的泡中。
供按照本發(fā)明的疫苗用的流感病毒抗原可以是適合于引起免疫應(yīng)答的任何形式的流感病毒抗原，包括活的或失活的全病毒、斷裂病毒或者由全病毒制備的或通過(guò)重組方法制備的亞單位抗原。用于生產(chǎn)抗原的流感病毒可以以常規(guī)方法在含胚卵中培養(yǎng)，或所述病毒可以在組織培養(yǎng)物中培養(yǎng)。用于流感病毒組織培養(yǎng)的合適的細(xì)胞基質(zhì)包括例如犬腎細(xì)胞，例如MDCK細(xì)胞、來(lái)自MDCK一個(gè)克隆的細(xì)胞或MDCK樣細(xì)胞；猴腎細(xì)胞，例如AGMK細(xì)胞，包括Vero細(xì)胞；或適合于生產(chǎn)疫苗用流感病毒的任何其它細(xì)胞類(lèi)型。合適的細(xì)胞基質(zhì)也包括人細(xì)胞，例如MRC-5細(xì)胞。合適的細(xì)胞基質(zhì)不限于細(xì)胞系，例如也包括原代細(xì)胞，例如雞胚成纖維細(xì)胞。
優(yōu)選包含已經(jīng)歷一系列純化步驟的斷裂病毒(split virus)的流感病毒抗原制劑。因此，所述抗原制劑可以采用多種不同的商業(yè)上適用的方法生產(chǎn)，例如在DD 300 833號(hào)和DD 211 444號(hào)專(zhuān)利中描述的斷裂流感病毒法，所述專(zhuān)利通過(guò)引用結(jié)合到本文中。市售的斷裂流感疫苗包括由SmithKline Beecham出售的FluarixTM。
因此，優(yōu)選的按照本發(fā)明的疫苗制劑包含卵或組織培養(yǎng)物來(lái)源的流感抗原(優(yōu)選斷裂流感病毒抗原)與聚氧乙烯脫水山梨醇酯和辛苯昔醇，任選地還包含一種膽汁鹽或膽酸衍生物。最優(yōu)選這種制劑包含斷裂流感病毒抗原、聚氧乙烯脫水山梨醇一油酸酯(Tween 80)、叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(Triton X-100)和脫氧膽酸鈉。
按照本發(fā)明的流感疫苗最好是包含兩種或更多種流感病毒株的多價(jià)流感疫苗。最優(yōu)選的是包含三種病毒株的三價(jià)疫苗。傳統(tǒng)的流感疫苗包含三種流感病毒株-兩種A型病毒株和一種B型病毒株。然而，本發(fā)明不排除可以用于例如大流行情況下的單價(jià)疫苗。大流行流感的單價(jià)疫苗最多半含有來(lái)自單一A型病毒株的流感抗原。
本發(fā)明的疫苗制劑最好用來(lái)借助于經(jīng)粘膜途徑給予所述疫苗來(lái)保護(hù)或治療易感疾病或患病的哺乳動(dòng)物，所述粘膜途徑例如口服/口腔含化/腸/陰道/直腸或鼻途徑。這種給予可以微滴、噴霧或干粉形式給予。噴霧或氣霧型疫苗制劑也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。腸溶制劑例如用于口服的抗胃液膠囊和顆粒劑、用于直腸或陰道給藥的栓劑也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。本發(fā)明也可以用來(lái)增強(qiáng)用于皮膚(透皮傳遞或經(jīng)皮傳遞)的抗原的免疫原性。另外，本發(fā)明的佐劑可以胃腸外傳遞，例如肌內(nèi)注射或皮下注射。當(dāng)供鼻內(nèi)疫苗用時(shí)，就性質(zhì)而言，本發(fā)明的疫苗最好是溶血性的。
根據(jù)給藥途徑，可以使用各種各樣的給藥裝置。例如，對(duì)于優(yōu)選的鼻內(nèi)給藥途徑，可以使用噴霧裝置，例如市售的AccusprayTM(BectonDickinson)。
鼻內(nèi)應(yīng)用的優(yōu)選噴霧裝置是所述裝置的性能不依賴(lài)于使用者施加的壓力的裝置。這些裝置被稱(chēng)為壓力閾裝置(pressure thresholddevice)。僅在達(dá)到閾值壓力時(shí)才從噴嘴釋放出液體。這些裝置使得更易于達(dá)到微滴大小均勻的一致的噴霧。適用于本發(fā)明的壓力閾裝置是本領(lǐng)域已知的，例如描述于WO91/13281、EP311863B和EP516636B中，所述文獻(xiàn)通過(guò)引用結(jié)合到本文中。這類(lèi)裝置在商業(yè)上可得自Pfeiffer GmbH。
優(yōu)選的鼻內(nèi)裝置產(chǎn)生范圍為1-200μm、優(yōu)選10-120μm的微滴(用水作為液體測(cè)量)。低于10μm，則有吸入的危險(xiǎn)，因此，最好是低于10μm的微滴不超過(guò)約5％。大于120μm的微滴的傳播不如較小微滴，因此最好是超過(guò)120μm的微滴不超過(guò)約5％。
雙劑量傳遞是供按照本發(fā)明疫苗使用的鼻內(nèi)傳遞裝置的再一優(yōu)選特征。雙劑量裝置含有一個(gè)疫苗劑量的兩個(gè)分劑量，向每個(gè)鼻孔給予一個(gè)分劑量。一般所述兩個(gè)分劑量在一個(gè)小室內(nèi)，所述裝置的構(gòu)造允許每次有效地傳遞一個(gè)分劑量。
在再一方面，本發(fā)明提供一種試劑盒，所述試劑盒包含本文所述的一種鼻內(nèi)給藥裝置，所述裝置含有一種按照本發(fā)明的疫苗制劑。在本發(fā)明該方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述鼻內(nèi)給藥裝置裝有流感疫苗。
對(duì)于某些疫苗制劑，可以在所述制劑中包括其它疫苗組分。因此，本發(fā)明的佐劑制劑也可以包含膽汁酸或其衍生物，尤其是鹽形式。這些包括膽酸衍生物及其鹽，特別是膽酸的鈉鹽或膽酸衍生物。膽汁酸及其衍生物的實(shí)例包括膽酸、脫氧膽酸、鵝脫氧膽酸、石膽酸、熊去氧膽酸、豬脫氧膽酸和衍生物，例如上述膽汁酸的甘氨-、?；恰被?amidopropyl)-1-丙磺酸、氨基丙基-2-羥基-1-丙磺酸衍生物或N，N-雙(3D葡糖酰胺丙基)脫氧膽酰胺(deoxycholamide)。一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)例是脫氧膽酸鈉(NaDOC)，它可以存在于最終的疫苗制劑中。
最好是，當(dāng)制劑為水溶液形式或非囊泡形式的懸浮液時(shí)，本發(fā)明的佐劑制劑是有利的。這種制劑易于可重復(fù)地生產(chǎn)，也易于滅菌(通過(guò)450或220nm孔膜終末過(guò)濾)以及易于以噴霧形式給予鼻粘膜，而所述佐劑的復(fù)雜物理結(jié)構(gòu)不會(huì)被降解。
在本發(fā)明的又一方面，提供一種制備疫苗的方法，所述方法包括將按照本發(fā)明的佐劑與抗原混合。
在再一方面，提供一種誘導(dǎo)或增強(qiáng)受治療者體內(nèi)免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括將所述抗原和按照本發(fā)明的佐劑混合，并且將所述混合物給予所述受治療者。
給予所述受治療者的途徑優(yōu)選是通過(guò)粘膜表面，更優(yōu)選通過(guò)鼻粘膜。當(dāng)所述疫苗通過(guò)鼻粘膜給予時(shí)，所述疫苗最好作為噴霧劑給予。在誘導(dǎo)或增強(qiáng)免疫應(yīng)答的一個(gè)優(yōu)選方法中，通過(guò)經(jīng)鼻給予所述疫苗，誘導(dǎo)系統(tǒng)應(yīng)答。因此，按照本發(fā)明的粘膜疫苗最好是當(dāng)通過(guò)粘膜途徑給予時(shí)，能夠誘導(dǎo)系統(tǒng)免疫應(yīng)答。
本發(fā)明還提供聚氧乙烯脫水山梨醇酯和辛苯昔醇在佐劑制劑、特別是在用于患者粘膜的佐劑制劑生產(chǎn)方面的應(yīng)用。本發(fā)明也涉及聚氧乙烯脫水山梨醇酯、辛苯昔醇和抗原在疫苗制劑、尤其是用于粘膜的疫苗制劑生產(chǎn)中的應(yīng)用。所述抗原最好是流感病毒抗原。
特別優(yōu)選給予鼻粘膜的佐劑和疫苗。
最好是，按照本發(fā)明的疫苗的給予包括給予所述疫苗的一劑誘發(fā)疫苗或一劑加強(qiáng)疫苗，例如包含一種流感抗原制劑的流感疫苗的一劑誘發(fā)疫苗或一劑加強(qiáng)疫苗。
可以預(yù)見(jiàn)，本發(fā)明的組合物將可用來(lái)配制含有來(lái)源于各種各樣來(lái)源的抗原的疫苗。例如，抗原可以包括人、細(xì)菌或病毒的核酸、來(lái)源于病原體的抗原或抗原性制劑、腫瘤來(lái)源的抗原或抗原性制劑、宿主來(lái)源的抗原包括GnRH和IgE肽、重組產(chǎn)生的蛋白質(zhì)或肽以及嵌合融合蛋白。
本發(fā)明的疫苗制劑最好含有能夠引發(fā)針對(duì)人類(lèi)病原體的免疫應(yīng)答的抗原或抗原性組合物，所述抗原或抗原性組合物來(lái)源于HIV-1(例如tat、nef、gp120或gp160)；人皰疹病毒，例如gD或其衍生物、或立即早期蛋白質(zhì)例如得自HSV1或HSV2的ICP27；巨細(xì)胞病毒((尤其是人病毒)(例如gB或其衍生物)；輪狀病毒屬(Rotavirus)(包括減毒活病毒)；EB病毒(例如gp350或其衍生物)；水痘-帶狀皰疹病毒(例如gpI、II和IE63)；或肝炎病毒，例如乙型肝炎病毒(例如乙型肝炎表面抗原或其衍生物)、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和戊型肝炎病毒；或者所述抗原或抗原性組合物來(lái)源于其它病毒病原體，例如副粘病毒呼吸道合胞病毒(例如F蛋白和G蛋白或其衍生物)、副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、人乳頭瘤病毒(例如HPV6、11、16、18、...)、黃病毒(例如黃熱病毒、登革病毒、蜱傳腦膜炎病毒、日本腦膜炎病毒)或流感病毒(全活病毒或滅活病毒、斷裂流感病毒，在卵或MDCK細(xì)胞、或Vero細(xì)胞或全流感病毒體中培養(yǎng)的(如R.G1uck，Vaccine，1992，10，915-920中所述)；或其純化的蛋白質(zhì)或重組蛋白質(zhì)，例如HA、NP、NA或M蛋白、或其組合)；或者所述抗原性組合物來(lái)源于細(xì)菌病原體，例如奈瑟氏球菌(Neisseria spp.)，包括淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhea)和腦膜炎奈瑟氏球菌(N.meningitidis)(例如夾膜多糖及其綴合物、運(yùn)鐵蛋白結(jié)合蛋白、乳鐵蛋白結(jié)合蛋白、PilC、粘附素)；化膿鏈球菌(S.pyogenes)(例如M蛋白或其片段、C5A蛋白酶、脂磷壁酸質(zhì))、無(wú)乳鏈球菌(S.agalactiae)、變異鏈球菌(S.mutans)；杜氏嗜血菌(H.ducreyi)；莫拉氏菌(Moraxella spp.)，包括粘膜炎莫拉氏菌(M.cararrhalis)，也稱(chēng)為粘膜炎布蘭漢氏菌(Branhamella catarrhalis)(例如高分子量和低分子量粘附素和侵染素)；博德特氏菌(Bordetella spp.)，包括百日咳博德特氏菌(B.pertussis)(例如pertactin、百日咳毒素或其衍生物、絲狀血凝素、腺苷酸環(huán)化酶、傘毛)、副百日咳博德特氏菌(B.parapertussis)和支氣管敗血性博德特氏菌(B.bronchiseptica)；分枝桿菌(Mycobacerium spp.)，包括結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(例如ESAT6、抗原85A、85B或85C)、牛分枝桿菌(M.bovis)、麻風(fēng)分枝桿菌(M.leprae)、烏分枝桿菌(N.avium)、副結(jié)核分枝桿菌(M.paratuberculosis)、恥垢分枝桿菌(M.smegmatis)；軍團(tuán)菌(Legionellaspp.)，包括嗜肺軍團(tuán)菌(L.pneumophila)；埃希氏菌(Escherichia spp.)，包括腸毒性大腸桿菌(例如定居因子、熱不穩(wěn)定毒素或其衍生物、熱穩(wěn)定毒性或其衍生物)、腸出血性大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌(例如志賀菌毒素樣毒素或其衍生物)；弧菌(Vibrio spp.)，包括霍亂弧菌(V.cholera)(例如霍亂毒素或其衍生物)；志賀氏菌(Shigella spp.)，包括索氏志賀氏菌(S.sonnei)、痢疾志賀氏菌(S.dysenteriae)、弗氏志賀氏菌(S.flexnerii)；耶爾森氏菌(Yersinia spp.)，包括小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Y.enterocolitica)(例如Ypo蛋白)、鼠疫耶爾森氏菌(Y.pestis)、假結(jié)核耶爾森氏菌(Y.pseudotuberculosis)；彎曲桿菌(Campylobacter spp)，包括空腸彎曲桿菌(C.jejuni)(例如毒素、粘附素和侵染素)和大腸彎曲桿菌(C.coli)；沙門(mén)氏菌(Salmonella spp.)，包括傷寒沙門(mén)氏菌(S.typhi)、副傷寒沙門(mén)氏菌(S.paratyphi)、豬霍亂沙門(mén)氏菌(S.choleaesuis)、腸炎沙門(mén)氏菌(S.entertidis)；李斯特氏菌(Listeria spp.)，包括單核細(xì)胞增生李斯特氏菌(L.monocytogenes)；螺桿菌(Helicobacter spp)，包括幽門(mén)螺桿菌(H.pylori)(例如脲酶、過(guò)氧化氫酶、空泡毒素(vacuolating toxin))；假單胞菌(Pseudomonas spp.)，包括銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)；鏈球菌(Staphylococcus spp.)，金黃色鏈球菌(S.aureus)、表皮鏈球菌(S.epidermidis)；腸球菌(Enterococcus spp.)，包括糞腸球菌(E.faecalis)、屎腸球菌(E.faecium)；梭菌(Clostridium spp.)，包括破傷風(fēng)梭菌(C.tetani)(例如破傷風(fēng)毒素及其衍生物)、肉毒梭菌(C.botulinum)(例如肉毒桿菌毒素及其衍生物)、艱難梭菌(C.difficile)(例如梭菌毒素A或B及其衍生物)；芽孢桿菌(Baccillus spp.)，包括炭疽芽孢桿菌(B.anthracis)(例如肉毒桿菌毒素及其衍生物)；棒桿菌(Corynebacterium spp.)，包括白喉棒桿菌(C.diphtheriae)(例如白喉毒素及其衍生物)；疏螺旋體(Borrelia spp.)，包括布氏疏螺旋體(B.burgdorferri)(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、格氏疏螺旋體(B.garinii)(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、阿氏疏螺旋體(B.afzelii)(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、B.andersonii(例如OspA、OspC、DbpA、DbpB)、赫氏疏螺旋體(B.hermsii)；埃里希氏體(Ehrlichia spp.)，包括馬埃里希氏體(R.equi)和人粒細(xì)胞性埃利希病的病原體；立克次氏體(Rickettsia spp.)，包括立氏立克次氏體(R.rickettsii)；衣原體(Chlamydia spp.)，包括砂眼衣原體(C.trachomatis)(例如MOMP、肝素結(jié)合蛋白)、肺炎衣原體(C.pneumoniae)(例如MOMP、肝素結(jié)合蛋白)、鸚鵡熱衣原體(C.psittaci)；鉤端螺旋體(Leptospira spp.)，包括問(wèn)號(hào)鉤端螺旋體(L.interrogans)；密螺旋體(Treponema spp.)，包括蒼白密螺旋體(T.pallidum)(例如稀有外膜蛋白)、齒垢密螺旋體(T.hyodusenteriae)、豬痢疾密螺旋體(T.hyodysenteriae)；或者所述抗原或抗原性組合物來(lái)源于寄生蟲(chóng)，例如瘧原蟲(chóng)(Plasmodium spp.)，包括惡性瘧原蟲(chóng)(P.falciparum)；弓形蟲(chóng)(Toxoplasma spp.)，包括鼠弓形蟲(chóng)(T.gondii)(例如SAG2、SAG3、Tg34)；內(nèi)阿米巴(Entamoeba spp.)，包括溶組織內(nèi)阿米巴(E.histolytica)；巴貝蟲(chóng)(Babesia spp.)，包括田鼠巴貝蟲(chóng)(B.microti)；錐蟲(chóng)(Trypanosomaspp.)，包括克魯斯氏錐蟲(chóng)(T.cruzi)；賈第鞭毛蟲(chóng)(Giardia spp.)，包括蘭氏賈第鞭毛蟲(chóng)(G.lamblia)；Leshmania spp.，包括L.major；肺囊蟲(chóng)(Pneumocystis spp.)，包括卡氏肺囊蟲(chóng)(P.carinii)；毛滴蟲(chóng)(Trichomonasspp.)，包括陰道毛滴蟲(chóng)(T.vaginalis)；血吸蟲(chóng)(Schisostoma spp.)，包括曼氏血吸蟲(chóng)(S.mensoni)；或者所述抗原或抗原組合物來(lái)源于酵母，例如念珠菌(Candida spp.)，包括白色念珠菌(C.albicans)；隱球菌(Cryptococcus spp.)，包括新型隱球菌(C.neoformans)。
優(yōu)選的細(xì)菌疫苗包含來(lái)源于鏈球菌(Streptococcus spp.)包括肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)(例如夾膜多糖及其綴合物、PsaA、PspA、鏈球菌溶血素、膽堿結(jié)合蛋白)的抗原以及蛋白抗原肺炎鏈球菌溶血素(Biochem Biophys Acta，1989，67，1007；Rubins等，MicrobialPathogenesis，25，337-342)及其突變型去毒衍生物(WO90/06951；WO99/03884)。其它優(yōu)選的細(xì)菌疫苗包含來(lái)源于嗜血菌(Haemophilus spp.)包括B型流感嗜血菌(H.influenzae type B)(例如PRP及其綴合物)、不可定型的流感嗜血菌(non typeable H.influenzae)的抗原例如OMP26、高分子量粘附素、P5、P6、蛋白D和脂蛋白D以及絲束蛋白和絲束蛋白衍生肽(US5,843,464)或其多拷貝變異體(varient)或融合蛋白。其它優(yōu)選的細(xì)菌疫苗包含來(lái)源于粘膜炎莫拉氏菌的抗原(包括其外膜小泡(outmembrane vesicle)和OMP106(WO97/41731))和來(lái)源于腦膜炎奈瑟氏球菌B的抗原(包括其外膜小泡)和NspA(WO96/29412)。
乙型肝炎表面抗原的衍生物是本領(lǐng)域眾所周知的，尤其包括在歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)EP-A-414374、EP-A-0304578和EP198-474中描述闡明的那些PreS1、PreS2 S抗原。在一個(gè)優(yōu)選方面，本發(fā)明的疫苗制劑包含HIV-1抗原、gp120，尤其是當(dāng)在CHO細(xì)胞中表達(dá)時(shí)。在再一實(shí)施方案中，本發(fā)明的疫苗制劑包含以上限定的gD2t。
在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，含有要求保護(hù)的佐劑的疫苗包含來(lái)源于被認(rèn)為引起生殖器疣的人乳頭瘤病毒(HPV)的抗原(HPV6或HPV11和其它抗原)和引起宮頸癌的HPV病毒(HPV16、HPV18和其它抗原)。
特別優(yōu)選形式的生殖器疣預(yù)防性或治療性疫苗包含L1粒子或殼粒、以及包含選自HPV6和HPV11的蛋白E6、E7、L1和L2中的一種或多種抗原的融合蛋白。
最優(yōu)選形式的融合蛋白是WO96/26277中公開(kāi)的L2E7和GB9717953.5(PCT/EP98/05285)中公開(kāi)的蛋白D(1/3)-E7。
HPV宮頸感染或?qū)m頸癌的一種優(yōu)選的預(yù)防性或治療性疫苗組合物，可以包含HPV16或18的抗原。例如，L1或L2抗原單體、或作為病毒樣粒子(VLP)一起呈現(xiàn)的L1或L2抗原、或單獨(dú)在VLP或殼粒結(jié)構(gòu)中呈現(xiàn)的單獨(dú)的L1。這類(lèi)抗原、病毒樣粒子和殼粒是本來(lái)已知的。參見(jiàn)例如WO94/00152、WO94/20137、WO94/05792和WO93/02184。
另外的早期蛋白可以單獨(dú)包括或以融合蛋白來(lái)包括例如最好是E7、E2或E5；尤其優(yōu)選的實(shí)施方案包括含L1E7融合蛋白(WO96/11272)的VLP。
特別優(yōu)選的HPV16抗原包含與蛋白D載體融合形成蛋白D-E6或E7融合體的HPV16的早起蛋白E6或E7、或其組合；或者E6或E7與L2的組合(WO96/26277)。
或者，HPV16或18早期蛋白E6和E7可以存在于一個(gè)分子中，最好是蛋白D-E6/E7融合體。這種疫苗可以任選地含有來(lái)自HPV18的E6和E7中的任一種或兩種，最好是蛋白D-E6或蛋白D-E7融合蛋白或蛋白D E6/E7融合蛋白的形式。
本發(fā)明的疫苗可以另外包含來(lái)源于其它HPV毒株、優(yōu)選來(lái)自毒株HPV6、11、31、33或45的抗原。
本發(fā)明的疫苗可以包含來(lái)源于引起瘧疾的寄生蟲(chóng)的抗原。例如，來(lái)源于惡性瘧原蟲(chóng)的優(yōu)選抗原包括RTS，S和TRAP。RTS是一種雜種蛋白，包含通過(guò)乙型肝炎表面抗原preS2部分的四個(gè)氨基酸與乙型肝炎病毒的表面(S)抗原連接的惡性瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子(CS)蛋白的基本上全部的C末端部分。其完整的結(jié)構(gòu)公開(kāi)于國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)PCT/EP92/02591號(hào)中，該專(zhuān)利申請(qǐng)的公布號(hào)為WO93/10152，要求英國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)9124390.7號(hào)的優(yōu)先權(quán)。當(dāng)在酵母中表達(dá)時(shí)，RTS作為脂蛋白粒子產(chǎn)生，而當(dāng)它與HBV的S抗原共表達(dá)時(shí)，它產(chǎn)生一種稱(chēng)為RTS，S的混合粒子。TRAP抗原描述于國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)PCT/GB89/00895號(hào)中，后者的公布號(hào)為WO90/01496。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是瘧疾疫苗，其中所述抗原性制劑包含RTS，S和TRAP抗原的組合?？赡艹蔀槎嗉?jí)(multistage)瘧疾疫苗組分候選者的其它瘧原蟲(chóng)抗原是惡性瘧原蟲(chóng)的MSP1、AMA1、MSP3、EBA、GLURP、RAP1、RAP2、鉗合蛋白、PfEMP1、Pf332、LSA1、LSA3、STARP、SALSA、PfEXP1、Pfs25、Pfs28、PFS27/25、Pfs16、Pfs48/45、Pfs230和瘧原蟲(chóng)屬物種中的其類(lèi)似物。
或者，所述制劑可以含有一種抗腫瘤抗原，并且可用于癌癥的免疫治療性治療。例如，所述佐劑制劑可和腫瘤排斥抗原一起應(yīng)用，所述腫瘤排斥抗原例如前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、肺癌、胰腺癌、腎癌或黑素瘤的腫瘤排斥抗原。示范性抗原包括用于治療黑素瘤的MAGE 1和MAGE 3抗原或其它的MAGE抗原、PRAME、BAGE或GAGE(Robbins和Kawakami，1996，Current Opinions in Immunology 8，第628-636頁(yè)；Van den Eynde等，International Journal of Clinical &Laboratory Research(1997提交)；Correale等(1997)Journal of theNational Cancer Institute 89，第293頁(yè))。實(shí)際上，這些抗原在各種各樣的腫瘤類(lèi)型中表達(dá)，例如在黑素瘤、肺癌、肉瘤和膀胱癌中表達(dá)。其它腫瘤特異性抗原適于與本發(fā)明的佐劑一起使用，所述抗原包括但不限于前列腺特異性抗原(PSA)或Her-2/neu、KSA(GA733)、MUC-1和癌胚抗原(CEA)。因此，在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供一種包含按照本發(fā)明的佐劑組合物和一種腫瘤排斥抗原的疫苗。
另外，在許多癌癥的治療中或在immunocastration中，所述抗原可以是自身肽類(lèi)激素，例如一種短的10個(gè)氨基酸長(zhǎng)的肽-全長(zhǎng)促性腺素釋放激素(GnRH，WO95/20600)。
可以預(yù)見(jiàn)，本發(fā)明的組合物可用于配制含疏螺旋體來(lái)源之抗原的疫苗。例如，抗原可以包括核酸、病原體來(lái)源的抗原或抗原性制劑、重組產(chǎn)生的蛋白或肽、以及嵌合融合蛋白。特別是，所述抗原是OspA。OspA可以是借助于宿主細(xì)胞(大腸桿菌)而呈脂質(zhì)化(lipidated)狀態(tài)的稱(chēng)為(Lipo-OspA)的完整的成熟蛋白或非脂質(zhì)化衍生物。這類(lèi)非脂質(zhì)化衍生物包括非脂質(zhì)化NS1-OspA融合蛋白，它具有流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1)的N末端的前81個(gè)氨基酸和完整的OspA蛋白，而另一種-MDP-OspA是攜帶3個(gè)額外N末端氨基酸的非脂質(zhì)化形式的OspA。
本發(fā)明的疫苗可以用于預(yù)防或治療變態(tài)反應(yīng)。這類(lèi)疫苗將包含變應(yīng)原特異性抗原(例如Der p1)和變應(yīng)原非特異性抗原(例如來(lái)源于人IgE的肽，包括但不限于stanworth十肽(EP0477231B1))。
將每劑疫苗中蛋白質(zhì)的量選定為在典型疫苗中誘導(dǎo)免疫保護(hù)性應(yīng)答而無(wú)顯著不利副作用的量。根據(jù)使用哪種具體的免疫原和將其如何呈遞，則這種量將有所不同。一般而言，預(yù)期每劑將包含1-1000μg蛋白質(zhì)、優(yōu)選1-500μg、優(yōu)選1-100μg、最優(yōu)選1-50μg。通過(guò)涉及觀測(cè)受治療者體內(nèi)的適當(dāng)免疫應(yīng)答的標(biāo)準(zhǔn)研究，可以確定具體疫苗的最適量。在初次接種后，受治療者可以接受一次或數(shù)次適當(dāng)間隔的加強(qiáng)免疫。
本發(fā)明的疫苗也可以通過(guò)口服途徑給予。在這種情況下，所述藥學(xué)上可接受的賦形劑也可以包括抗酸緩沖劑或腸溶膠囊或微粒劑。本發(fā)明的疫苗也可以通過(guò)陰道途徑給予。在這種情況下，所述藥學(xué)上可接受的賦形劑也可以包括乳化劑、聚合物例如CARBOPOL以及其它已知的陰道乳膏和栓劑的穩(wěn)定劑。本發(fā)明的疫苗也可以通過(guò)直腸途徑給予。在這種情況下，所述賦形劑也可以包括蠟和本領(lǐng)域已知的用于形成直腸栓劑的聚合物。
本發(fā)明的制劑既可以用于預(yù)防目的，又可以用于治療目的。因此，本發(fā)明提供一種治療易患或患有傳染病或癌癥或變態(tài)反應(yīng)或自身免疫病的哺乳動(dòng)物的方法。在本發(fā)明的再一方面，提供本文所述的用于醫(yī)藥的一種佐劑組合和一種疫苗。New Trends and Developments inVaccines，Voller等編著，University Park Press，Baltimore，Maryland，U.S.A.1978全面地描述了疫苗制劑。
在本發(fā)明的一個(gè)替代的相關(guān)實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑還可以與其它佐劑聯(lián)合，所述其它佐劑包括霍亂毒素及其B亞基、單磷?；|(zhì)A及其無(wú)毒衍生物3-脫氧-?；瘑瘟柞；|(zhì)A(描述于英國(guó)專(zhuān)利GB2,220,211號(hào))、免疫學(xué)活性皂苷部分例如來(lái)源于南美皂樹(shù)QuillajaSaponaria Molina之樹(shù)皮的Quil A及其衍生物(例如QS21，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,057,540)和寡核苷酸佐劑系統(tǒng)CpG(描述于WO 96/02555)、尤其是5’TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT3’(SEQ ID NO.1)。
通過(guò)下面的實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不限于以下的實(shí)施例。在以下實(shí)施例中，我們使用全蛋培養(yǎng)的、用甲醛滅活的流感病毒或TWEEN-醚破碎的病毒或NaDOC破碎的蛋培養(yǎng)并補(bǔ)充以Triton X-100的病毒。Tween-80和Triton X-100的濃度示于實(shí)施例中。實(shí)施例1，用來(lái)測(cè)量血清中抗體(Ab)應(yīng)答的方法用于測(cè)量流感特異性血清Ig Ab的ELISAMaxisorp Nunc免疫平板用50μl/孔在PBS中稀釋的1μg/mlβ-丙酸內(nèi)酯(BPL)滅活的流感病毒的HA(由SSD GmBH廠商供應(yīng)，Dresden，Germany)于4℃包被過(guò)夜。所述平板上的游離位點(diǎn)用飽和緩沖液即含有1％BSA、0.1％聚氧乙烯脫水山梨醇一月桂酸酯(TWEEN 20)的PBS封閉(1小時(shí)，37℃)。然后，將按標(biāo)準(zhǔn)曲線加入的參比血清(具有以ELISA單位/ml表示的中點(diǎn)效價(jià)的血清，置于A行中)和血清樣品(始于1/100的稀釋度，置于B-H行中)的2倍連續(xù)稀釋液于37℃溫育1小時(shí)30分鐘。然后用洗滌緩沖液(PBS，0.1％聚氧乙烯脫水山梨醇一月桂酸酯(TWEEN 20))洗滌(×3)平板。然后，將用飽和緩沖液以1/3000稀釋的生物素化的山羊抗人Ig(Amersham)(50μl/孔)于37℃溫育1小時(shí)30分鐘。經(jīng)3次洗滌和隨后加入鏈霉抗生物素蛋白-辣根過(guò)氧化物酶綴合物(Amersham)后，將平板洗滌5次，并于室溫下將平板與50μl/孔的顯色緩沖液(OPDA 0.4mg/ml(Sigma)和H2O20.03％，在50mM pH 4.5的檸檬酸緩沖液中)一起保溫20分鐘。加入50μl/孔2N硫酸而終止顯色。用Biorad 3550免疫讀出儀于492nm和630nm讀出光密度。用SoftMaxPro軟件，根據(jù)4參數(shù)數(shù)學(xué)方法計(jì)算抗體的效價(jià)。小鼠中流感特異性血清Ab的血凝抑制(HAI)活性首先用100μl0.5M硼酸鹽緩沖液(pH9)和125μl Dade Behring購(gòu)買(mǎi)的高嶺土于室溫(RT)下處理血清(25μl)20分鐘。離心(30分鐘，3000RPM或860g)后，取100μl上清液(相當(dāng)于血清的1/10稀釋液)，并將其與0.5％雞紅細(xì)胞一起于4℃孵育1小時(shí)。以3200RPM(970g)離心10分鐘后，收集上清液。進(jìn)行這兩個(gè)操作以消除血清中含有的天然血凝因子。然后，在96孔Greiner板中25μl經(jīng)處理的血清用25μl PBS稀釋(2倍連續(xù)稀釋?zhuān)加?/20)。以4個(gè)血凝單位(即引發(fā)紅細(xì)胞凝集的最大稀釋度的四分之一的稀釋度)BPL滅活的全病毒(25μl/孔)，于室溫在攪拌下達(dá)30分鐘。最后將平板于4℃下保持過(guò)夜，然后進(jìn)行讀出。HAI效價(jià)相當(dāng)于抑制病毒誘導(dǎo)的血凝的最低血清稀釋度的倒數(shù)。實(shí)施例2，TWEEN80和Triton在小鼠體內(nèi)對(duì)滅活的完整流感病毒的鼻內(nèi)免疫原性的影響過(guò)去，主要在未經(jīng)攻擊的動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行其它流感疫苗(例如加入佐劑的胃腸外疫苗、基于DNA的疫苗或粘膜傳遞的疫苗)的臨床前評(píng)價(jià)。一般而言，從這些研究中獲得的有前景的結(jié)果未在人體中得到證實(shí)。這可能是由于這樣一個(gè)事實(shí)與未經(jīng)攻擊的動(dòng)物不一樣，大多數(shù)成人在接種之前已經(jīng)通過(guò)天然感染而在免疫學(xué)上“接觸過(guò)抗原”。因此，在動(dòng)物模型中評(píng)價(jià)鼻內(nèi)流感疫苗的最佳方式可能是測(cè)試其在經(jīng)鼻接觸過(guò)抗原的動(dòng)物體內(nèi)加強(qiáng)預(yù)先建立的免疫應(yīng)答的能力。我們?cè)诒緦?shí)施例中評(píng)價(jià)了TWEEN-80和Triton X-100對(duì)這樣的應(yīng)答的影響。
在第0天，通過(guò)用移液器(在麻醉下)在每個(gè)鼻孔中給予10μl PBS中含有的2.5μg BPL滅活的A/Beijing/262/95流感病毒之HA，在雌性Balb/c小鼠(8周齡)中進(jìn)行抗原接觸。28天后，用20μl溶液(每個(gè)鼻孔10μl，用移液器以小滴形式傳遞)給小鼠(6只動(dòng)物/組)進(jìn)行鼻內(nèi)加強(qiáng)(在麻醉下)，所述溶液是在或者APBS；或者BTWEEN80(0.11％)加Triton X-100(0.074％)中含有5μg BPL滅活A(yù)/Beijing/262/95流感病毒之HA的溶液；或者通過(guò)C肌內(nèi)注射1.5μg HA的流感疫苗，進(jìn)行加強(qiáng)。抗原由SSD GmBH廠商(Dresden，Germany)供應(yīng)。如實(shí)施例1中所述，測(cè)量血清中的HAI Ab應(yīng)答。如

圖1所示，當(dāng)用TWEEN80和Triton配制時(shí)，鼻內(nèi)傳遞的滅活流感病毒能夠與傳統(tǒng)胃腸外流感疫苗同樣有效地加強(qiáng)預(yù)先建立的系統(tǒng)HAI Ab應(yīng)答。然而，在缺乏TWEEN80和Triton的情況下，鼻內(nèi)給予的相同的抗原，其免疫原性顯著較低。實(shí)施例3具有TWEEN80和TRITON X-100的斷裂流感病毒鼻內(nèi)疫苗與經(jīng)批準(zhǔn)的傳統(tǒng)胃腸外疫苗(FluarixTM)在健康成年受治療者體內(nèi)的免疫原性的比較。用于該項(xiàng)研究的制劑已經(jīng)評(píng)價(jià)了蛋來(lái)源的斷裂流感抗原的兩種制劑(A、B)。A是一種鼻內(nèi)制劑，而B(niǎo)是肌內(nèi)給予的FluarixTM/α-Rix。所述制劑含有三種由WHO建議的1998/1999季節(jié)的病毒株制備的滅活斷裂病毒體抗原。
用于鼻內(nèi)傳遞的裝置是Becton Dickinson的AccusprayTM鼻內(nèi)注射器。在每個(gè)鼻孔內(nèi)噴100μl A制劑。所述制劑的組成鼻內(nèi)制劑(A)含有以下滅活斷裂病毒體1. 30μg HA A/Beijing/262/95(H1N1)2. 30μg HA A/Sydney/5/97(H3N2)3. 30μg B/Harbin/7/94的HA和磷酸緩沖鹽溶液pH 7.4±0.1、Tween 80 0.1％、Triton X-100 0.015％、脫氧膽酸鈉0.0045％和低于35μg/ml的硫柳汞。
一劑的體積是200μl(每個(gè)鼻孔100μl的分劑量)。
對(duì)比物FluarixTM/α-Rix是SmithKline Beecham Biologicals的市售的滅活三價(jià)斷裂流感疫苗。肌內(nèi)給予500μl的劑量。
該劑量含有15μg上述三種病毒株的HA、500-1000μg/ml(0.05％-0.1％)的Tween 80、50-170μg/ml(0.005％-0.017％)的Triton X-100、最高100μg/ml的脫氧膽酸鈉、100μg/ml硫柳汞和pH 6.8-7.5的磷酸緩沖鹽溶液。免疫原性研究一個(gè)開(kāi)放式、有對(duì)照和隨機(jī)的研究，評(píng)價(jià)用Tween 80和TritonX-100配制的斷裂流感鼻內(nèi)疫苗與傳統(tǒng)胃腸外疫苗(即FluarixTM)相比的免疫原性。20位健康的成年受治療者(年齡為18-40歲)接受一劑FluarixTM，10位受治療者接受一劑鼻內(nèi)流感疫苗。所述鼻內(nèi)制劑(200μl)含有以下的滅活病毒體30μg血凝素A/Beijing/262/95(H1N1)、30μg血凝素A/Sydney/5/97(H3N2)、30μg血凝素B/Harbin/7/94與磷酸緩沖鹽溶液(pH 7.4±0.1)、Tween 80(0.1％)、Triton X-100(0.015％)、脫氧膽酸鈉(0.0045％)和硫柳汞(＜35μg/ml)。
對(duì)于誘發(fā)的局部和全身性癥狀有8天的隨訪期，這兩種疫苗在安全性和反應(yīng)原性方面都能被很好地耐受。沒(méi)有報(bào)道與接種相關(guān)的嚴(yán)重不利事件。
通過(guò)評(píng)價(jià)血清血凝抑制(HI)效價(jià)以確定血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率(定義為與第0天相比，第21天時(shí)就每種疫苗株而言血清HI效價(jià)至少提高3倍的疫苗的百分比)、轉(zhuǎn)化系數(shù)定義為與第0天相比，第21天時(shí)就每種疫苗株而言血清HI幾何平均效價(jià)(GMT)的增加倍數(shù))和血清保護(hù)率(定義為接種后血清HI效價(jià)≥40(對(duì)于每種疫苗株)的疫苗的百分比，血清HI效價(jià)≥40被認(rèn)可為指示保護(hù)作用)，檢驗(yàn)所述疫苗的免疫原性。一般而言，流感疫苗對(duì)于每種病毒株而言，必須血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率大于或等于40％，血清保護(hù)率大于或等于70％，而轉(zhuǎn)化系數(shù)大于或等于2.5，以便滿(mǎn)足國(guó)際規(guī)章的要求。這適用于18-60歲的成人；老年人適用不同的標(biāo)準(zhǔn)。
另外，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)評(píng)價(jià)粘膜IgA抗體的應(yīng)答。
在表1中可以看到在給予一劑FluarixTM或所述鼻內(nèi)制劑后21天的HI血清陽(yáng)性率、血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率和血清保護(hù)率。表1在給予1劑后21天時(shí)的HI血清陽(yáng)性率、血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率和血清保護(hù)率
血清陽(yáng)性(n，％)效價(jià)≥10的受治療者的數(shù)目和百分率血清保護(hù)(n，％)效價(jià)≥40的受治療者的數(shù)目和百分率血清陽(yáng)轉(zhuǎn)(n，％)從第0天至第21天效價(jià)增加至少4倍的受治療者的數(shù)目和百分率在所有情況下，轉(zhuǎn)化系數(shù)(接種后血清HI GMT增加的倍數(shù))大于2.5，這是成功的流感疫苗所要求的水平。
在表2中可以看到在第21天和第0天之間特異性粘膜IgA抗體/總粘膜IgA抗體之比增加1倍或3倍的受治療者的百分率(一劑)。表2在第21天和第0天之間特異性IgA抗體/總IgA抗體之比增加1倍或3倍的受治療者的百分率(一劑)。
總結(jié)以上列表顯示的免疫原性結(jié)果表明，在一劑后21天時(shí)，所述鼻內(nèi)制劑導(dǎo)致的血清陽(yáng)性、血清陽(yáng)轉(zhuǎn)和血清保護(hù)的水平與由傳統(tǒng)胃腸外疫苗(FluarixTM)所導(dǎo)致的類(lèi)似。在一劑后，所述鼻內(nèi)制劑引起的粘膜IgA應(yīng)答比傳統(tǒng)胃腸外疫苗(FluarixTM)所引起的要好。
權(quán)利要求
1.一種聚氧乙烯脫水山梨醇酯與辛苯昔醇的組合的用途，用于生產(chǎn)應(yīng)用于患者粘膜表面的佐劑。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述聚氧乙烯脫水山梨醇酯是聚氧乙烯脫水山梨醇一油酸酯(TWEEN80TM)。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的用途，其中所述辛苯昔醇是叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(TRITON X-100TM)。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的用途，還包括一種膽汁鹽或膽酸衍生物。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的佐劑的用途，所述佐劑與抗原一起用于生產(chǎn)供粘膜給藥的疫苗。
6.權(quán)利要求5的用途，其中所述抗原選自人免疫缺陷病毒、水痘帶狀皰疹病毒、1型單純皰疹病毒、2型單純皰疹病毒、人巨細(xì)胞病毒、登革病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或戊型肝炎病毒、呼吸道合胞病毒、人乳頭瘤病毒、流感病毒、Hib、腦膜炎病毒、沙門(mén)氏菌屬(Salmonella)、奈瑟氏球菌屬(Neisseria)、疏螺旋體屬(Borrelia)、衣原體屬(Chlamydia)、博德特氏菌屬(Bordetella)、鏈球菌屬(Streptococcus)、支原體屬(Mycoplasma)、分枝桿菌屬(Mycobacteria)、嗜血菌屬(Haemophilus)、瘧原蟲(chóng)屬(Plasmodium)或弓形蟲(chóng)屬(Toxoplasma)、stanworth十肽；或腫瘤相關(guān)抗原(TMA)、MAGE、BAGE、GAGE、MUC-1、Her-2 neu、LnRH、CEA、PSA、KSA或PRAME。
7.權(quán)利要求6的用途，其中所述抗原是來(lái)源于流感病毒的抗原或抗原性制劑。
8.權(quán)利要求7的用途，其中所述抗原性制劑是斷裂流感病毒制劑。
9.權(quán)利要求7或權(quán)利要求8的用途，用于生產(chǎn)預(yù)防流感的疫苗。
10.權(quán)利要求5-9中任一項(xiàng)的用途，用于生產(chǎn)供醫(yī)藥用的疫苗。
11.一種生產(chǎn)疫苗的方法，所述方法包括將(a)一種聚氧乙烯脫水山梨醇酯、(b)一種辛苯昔醇和(c)一種抗原混合，并且提供供粘膜給藥的一個(gè)疫苗劑量的疫苗。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述疫苗在鼻內(nèi)氣霧劑或噴霧劑裝置中提供。
13.一種噴霧劑或氣霧劑裝置，更尤其是雙劑量裝置，所述裝置裝有包含一種聚氧乙烯脫水山梨醇酯、一種辛苯昔醇和一種抗原的疫苗。
14.權(quán)利要求13的噴霧劑或氣霧劑裝置，其中所述抗原是流感抗原或抗原性制劑。
15.權(quán)利要求14的噴霧劑或氣霧劑裝置，其中所述抗原性制劑是斷裂流感病毒制劑。
16.一種治療患有或易患病原體感染或癌癥或變態(tài)反應(yīng)的哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包括給予所述哺乳動(dòng)物的粘膜安全而有效量的疫苗組合物，所述疫苗組合物包含一種聚氧乙烯脫水山梨醇酯、一種辛苯昔醇和一種抗原。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述疫苗經(jīng)鼻內(nèi)給予。
18.權(quán)利要求16或權(quán)利要求17的方法，其中所述疫苗是流感病毒疫苗，所述流感病毒疫苗包含一種流感抗原或抗原性制劑，例如一種斷裂流感病毒制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型佐劑系統(tǒng)，所述佐劑系統(tǒng)包含與辛苯昔醇組合的聚氧乙烯脫水山梨醇酯表面活性劑，本發(fā)明也涉及包含所述佐劑系統(tǒng)連同抗原的疫苗。還提供生產(chǎn)所述佐劑和疫苗的方法以及所述佐劑和疫苗在疾病預(yù)防或治療方面的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K39/12GK1391483SQ00816014
公開(kāi)日2003年1月15日 申請(qǐng)日期2000年9月22日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月24日
發(fā)明者M·弗里德, P·赫爾曼德, V·亨德里克斯 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆生物有限公司