專利名稱：：肝病治療和預(yù)防用藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是關(guān)于肝病治療和預(yù)防用藥物組合物，特別是關(guān)于含有對(duì)于肝具有不同的作用機(jī)理的兩種藥物乳清酸肉堿和聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽，對(duì)于因各種不同原因引起的肝病都顯示出協(xié)同作用效果的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物。在現(xiàn)代社會(huì)中，人們由于精神壓力過大以及飲酒、吸煙和各種公害引起的環(huán)境污染等原因，面臨各種肝病的危險(xiǎn)。有代表性的肝病是肝硬化癥、灑精性肝硬變、脂肪肝、中毒性肝病、急慢性病毒性肝炎等。其中，B型病毒性肝炎不僅傳染性強(qiáng)，而且導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬變、肝癌等的患病率較高，近年來已發(fā)展成嚴(yán)重的社會(huì)問題。另外，這類肝炎常常引起嚴(yán)重的肝功能損傷并導(dǎo)致其它合并癥，對(duì)于集團(tuán)社會(huì)生活的現(xiàn)代人構(gòu)成很大的威脅。因此，迫切需要研制出能夠有效地治療包括這類B型肝炎在內(nèi)的各種急慢性、活動(dòng)性肝炎病，使受到損害的肝功能得到恢復(fù)，從根本上治療肝炎性疾病，使其不再?gòu)?fù)發(fā)的藥物。目前通常采用的肝病治療方法大體上分為飲食療法和藥物療法，大多數(shù)情況下這兩種方法同時(shí)并用。在肝病的藥物治療方法中，目前使用很多種藥物，但實(shí)際上具有接近于肝病病因?qū)W的根源治療概念的藥物目前還沒有。在肝病的藥物治療法中，根據(jù)肝病的發(fā)病原因和種類，使用具有多種作用基理的藥劑，例如熊去氧膽酸、水飛薊素(Silymarin)、DDB、谷胱甘肽、乳清酸肉堿、甘草甜素(Glycyrrhizin)、肝提取物、維生素合劑等肝細(xì)胞再生促進(jìn)劑和肝功能補(bǔ)助劑、阿昔洛韋(Acyclovir)等抗病毒藥、類皮質(zhì)酮(Corticosteroid)、6-巰嘌呤(6-Mercaptopurine，6-MP)、硫唑嘌呤(Azathiopurine)等免疫抑制劑、D-青霉胺(Penicillamine)等纖維化抑制劑等藥劑。但是，在大多數(shù)情況下，肝病不是僅僅由一種原因引起的，而是由各種原因的復(fù)合作用致病的，因此，在其治療過程中，僅僅使用具有某一種作用機(jī)理的藥劑不可能對(duì)所有的情況都獲得充分滿意的高的治療效果。此外，在單獨(dú)給藥時(shí)，一旦給藥中斷，可能再次反彈(例如DDB等)。因此，本發(fā)明人基于下述判斷分析和研究了各種配合物的效果，即，從上述各種藥劑中選擇具有不同治療路徑的藥物適當(dāng)配合給藥，通過多種路徑使由于肝病而受到損害的肝功能同時(shí)得到恢復(fù)，從而更加有效地治療肝病。但是，一般地說，將2種以上的藥劑混合或配合，同時(shí)給藥時(shí)，相互間有可能產(chǎn)生物理化學(xué)的變化，引起無法預(yù)料的副作用或拮抗作用，由于這種藥物相互作用在醫(yī)療時(shí)產(chǎn)生很大問題，這種事情已有很多報(bào)導(dǎo)。因此，本發(fā)明人對(duì)不產(chǎn)生這種副作用或拮抗作用，顯示出協(xié)同促進(jìn)作用的配合物進(jìn)行了集中的研究。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，將在肝細(xì)胞實(shí)質(zhì)性損傷疾病中具有肝功能改善效果并對(duì)脂肪肝和肝細(xì)胞破壞顯示治療效果的乳清酸肉堿與對(duì)于活動(dòng)性肝炎和慢性病毒性肝炎等顯示出較快的GOT、GPT數(shù)值正常化效果的聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽配合在一起，不僅對(duì)于包括肝炎在內(nèi)的各種肝病具有優(yōu)異的協(xié)同治療效果，而且還具有預(yù)防效果。即，本發(fā)明人將通過完全不同的作用機(jī)理對(duì)肝病發(fā)生作用的乳清酸肉堿和聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽配合在一起進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過這兩種藥劑的相互補(bǔ)充作用，出人意料地產(chǎn)生協(xié)同治療和預(yù)防肝病的效果，從而完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明的目的是，提供含有乳清酸肉堿和聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物。圖1是表示本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(HDS)以及乳清酸肉堿(Carnitineorotate)、聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽(DDB)對(duì)于用CCl4和乙醇誘發(fā)肝損傷的SD(Sprague-Dawley)大鼠的血清GOT值產(chǎn)生的影響的曲線圖。圖2是表示本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物以及乳清酸肉堿、聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽對(duì)于用CCl4和乙醇誘發(fā)肝損傷的SD大鼠的血清GPT值產(chǎn)生的影響的曲線圖。圖3是用CCl4和乙醇處置后，將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物經(jīng)口給藥時(shí)的大鼠肝細(xì)胞照片。圖4是用CCl4和乙醇處置后，將乳清酸肉堿經(jīng)口給藥時(shí)的大鼠肝細(xì)胞照片。圖5是用CCl4和乙醇處置后，將聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽(30mg／kg)經(jīng)口給藥時(shí)的大鼠肝細(xì)胞照片。圖6是用CCl4和乙醇處置后，只將載體(Vehicle、250mg／kg)經(jīng)口給藥時(shí)(對(duì)照組)的大鼠肝細(xì)胞照片。圖7是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的肝肉眼觀察照片。圖8是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的肝細(xì)胞照片。圖9是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的腎臟細(xì)胞照片。圖10是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的睪丸細(xì)胞照片。圖11是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的胃(Stomach)細(xì)胞照片。圖12是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠小腦細(xì)胞的照片。圖13是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的腎上腺(Adrenalgland)細(xì)胞照片。圖14是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的心臟細(xì)胞照片。圖15是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的胰臟細(xì)胞照片。圖16是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的甲狀腺細(xì)胞照片。圖17是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的胸腺(Thymus)細(xì)胞照片。圖18是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的肺細(xì)胞照片。圖19是將本發(fā)明的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物(500mg／kg)經(jīng)口給藥4周后的SD雄性大鼠的骨髓細(xì)胞照片。即，本發(fā)明是關(guān)于含有乳清酸肉堿和聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物。在本發(fā)明的組合物中，聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽與乳清酸肉堿的配比(重量比)為1∶0．01-1∶60，優(yōu)選的是1∶3-1∶30，最好是1∶6-1∶24。本發(fā)明組合物的構(gòu)成成分之一乳清酸肉堿，是化學(xué)名為D，L-三甲基-(2-羥基-6-羧基)-丙基-銨2，6-二羥基嘧啶-4-羧酸鹽(C12H9N3O7M．W．317．3)的物質(zhì)，是肉堿(Carnitine化學(xué)名3-羧基-2-羥丙基-三甲基銨氫氧化物，C7H15NO3M．W．161．2)與乳清酸(Oroticacid化學(xué)名1，2，3，6-四氫-2，6-二羥基嘧啶-4-羧酸一水合物、C5H4N2O4M．W．174．1)的有機(jī)鹽白色粉末，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下。乳清酸是生物體內(nèi)嘧啶核苷酸的中間代謝物，與DNA和RNA的生物合成有關(guān)，乳清酸的白血霉素、鎂和鉀鹽被用于治療肝病中的血尿酸過多癥(Hyperuricaemia)和血膽固醇過多癥(Hypercholesterolaemia)[G．D．Kersley，Ann．rheum．Dis．，1966，25，353；Br．med．J．，1972，2，62(tolowerbilirubinconcentrationsinprematureandfull-terminfanst)；P．J．Collipp，Curr．ther．Res．，1987，41，135(degenerativeretinaldisease)]。肉堿的另一名稱是維生素BT，作為氨基酸衍生物起到脂肪酸代謝所必需的輔酶(essentialcofactor)的作用，用于治療原發(fā)性或繼發(fā)性肉堿缺乏(deficiency)，L-和DL-異構(gòu)體一起使用，但發(fā)現(xiàn)只有L-型具有治療效果。L-肉堿經(jīng)口、注射或透析(dialysis)給藥時(shí)，提高甘油三酸酯的血脂濃度，降低總膽固醇(totalcholesterol)，具有減輕慢性間歇性血液透析的效果。還被用來預(yù)防由于高脂血癥而引起的肉堿缺乏和由蒽環(huán)類抗生素(anthracyclines)或丙戊酸鹽(valproate)等引發(fā)的毒性。另外，對(duì)于患有缺血性(ischaemic)心臟病的患者，具有對(duì)心肌功能和代謝有益的效果。對(duì)于患有心絞痛的患者，具有提高運(yùn)動(dòng)阻力的效果[K．L．GoaandR．N．Brogden．Drugs．，1987，34，1；Med．Lett．，1986，28，88(reviewofcarnitine)C．J．ReboucheandA．G．Engel，MayoClin．Proc．，1983，58，533(carnitinemetabolismanddeficiencysyndromes)Lancet，1987，2，429(roleofcarnitineinReye′ssyndrome)]。將乳清酸肉堿給藥時(shí)，乳清酸肉堿在臟器內(nèi)被吸收，然后轉(zhuǎn)移到肝組織中，被分離成肉堿和乳清酸，產(chǎn)生藥理作用。但是，乳清酸肉堿具有藥理效果緩慢的局限性。本發(fā)明組合物中的另一個(gè)成分是聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽。聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽(化學(xué)名二甲基-4’，4’-二甲氧基-5，6，5’，6’-二亞甲基二羥基聯(lián)苯基2，2’-二羧酸鹽、DDB)是與以往民間療法中使用的五味子有效成分五味子素(schizandrin)C類似的人工合成物質(zhì)，該化合物的結(jié)構(gòu)式如下。這種聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽，經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)證明對(duì)于多種慢性和病毒性肝炎具有療效，目前已經(jīng)在臨床中使用。例如，研究報(bào)告指出，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽不僅對(duì)于四氯化碳引起的肝損傷具有抑制作用[YuHuiQinDiphenyl-dimethyl-dicarboxylateintreatingandprenventinghepatitisduedrugpoisoning，ChineseMedicalJournal，100(2)122，1987]，而且可以顯著地降低慢性活動(dòng)性肝炎和活動(dòng)性肝硬變患者的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AlanineAminotransferase)[ィ-ヒョ-ンクら，“慢性活動(dòng)性肝疾患者でビフェニルジメチルジカルボン酸鹽の血清ァラニンァミノトランスフェラ-ゼ”值低下效果に關(guān)する轉(zhuǎn)向的無作為選定對(duì)照研究，韓國(guó)內(nèi)科學(xué)會(huì)雜志，第40卷第2號(hào)，1991]。另外，最近人們對(duì)聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽對(duì)于四氯化碳給藥小鼠的免疫生物學(xué)反應(yīng)的效果進(jìn)行了研究，該研究報(bào)告指出，聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽可以增強(qiáng)體液性免疫、細(xì)胞性免疫和非特異性免疫等免疫功能[ァンョンクンら、“ビフェニルジメチルジカルボン酸鹽ガ四氯化碳で投與されたマゥスの免疫生物學(xué)的反應(yīng)に及ぼす效果”，1992年度第41次韓國(guó)藥學(xué)會(huì)春季學(xué)術(shù)大會(huì)]。但是，聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽給藥中斷時(shí)，會(huì)出現(xiàn)反彈現(xiàn)象。因此，在超出上述配比范圍時(shí)，可能會(huì)產(chǎn)生與乳清酸肉堿或聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽單獨(dú)給藥時(shí)同樣的藥理效果上的問題。根據(jù)需要，本發(fā)明的組合物還可以含有治療肝病時(shí)通常使用的補(bǔ)助劑如維生素類、鹽酸肉堿、肝臟提取物(例如抗毒性肝臟提取物、Liverantitoxicfraction)和氨基酸制劑。這類成分單獨(dú)使用時(shí)，基本上沒有肝病治療效果，因此只是作為補(bǔ)助劑使用，不怎么用于肝病治療目的，但本發(fā)明的組合物中含有這些成分時(shí)，可以提高療效，還可以促進(jìn)肝病患者的肝中產(chǎn)生水溶性和脂溶性維生素、氨基酸以及補(bǔ)充由于吸收不良、貯存量低下、活化障礙等而引起的缺乏狀態(tài)，因此可以提高本發(fā)明組合物的肝病治療和肝功能改善效果。可以在本發(fā)明的組合物中使用的維生素和氨基酸制劑沒有特別的限制，優(yōu)選的是維生素B2、維生素B6、維生素B12或者它們的混合物以及鹽酸腺嘌呤、腺苷等。本發(fā)明的組合物中含有維生素時(shí)，每1份(重量)聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的維生素用量比例為0．01至3份(重量)。本發(fā)明的藥物組合物在實(shí)際使用時(shí)，最好是采用藥劑學(xué)領(lǐng)域中慣用的方法制成適合于對(duì)人體給藥的單位給藥制劑，然后給藥。適合于這一目的的劑型，對(duì)于經(jīng)口給藥制劑來說包括片劑、硬質(zhì)和軟質(zhì)膠囊劑、丸劑等固型制劑，以及內(nèi)服液劑、糖漿劑、懸浮劑等液劑，對(duì)于非經(jīng)口給藥制劑來說包括注射劑等。在這樣的制劑中，除了上述2種活性成分外，還可以含有1種或1種以上藥劑學(xué)中允許的慣用的隋性載體，例如，在固形制劑中可以含有山梨糖醇、乳糖、淀粉、羧甲基纖維素、高嶺土等賦形劑，水、明膠、酒精、葡萄糖、阿拉伯樹膠、西黃蓍膠等粘結(jié)劑，淀粉、糊精、藻酸鈉等崩解劑，膠體二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、液體石蠟等潤(rùn)滑劑。在液體制劑中可以含有山梨糖醇、白糖等甜味劑，橙油、桃香等芳香劑，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯等防腐劑，精制水等溶劑。注射用制劑例如滅菌注射用水性或油性懸浮液等也可以含有甘露醇等賦形劑，適宜的分散劑，濕潤(rùn)劑，懸浮劑，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯等防腐劑。因此，可以使用的溶劑有水、林格液和澄清性NaCl溶液，滅菌固定油也可以用來作為通常的溶劑或懸浮介質(zhì)。含有甘油一酸酯、甘油二酸酯的無刺激性固定油也可以用于這樣的目的，另外，油酸等脂肪酸也可以用于注射用制劑。本發(fā)明的組合物的每日用藥量可以根據(jù)給藥對(duì)象的肝病輕重程度、肝功能狀態(tài)、合并癥、體重、年齡、性別等各種因素而改變，一般地說，對(duì)成人(體重65kg)而言，按上述重量比配合的組合物每日1-3次經(jīng)口或注射給藥75-900mg，優(yōu)選的是175-750mg。但是，對(duì)于活動(dòng)性肝硬變等重癥患者，可以超出上述范圍將本發(fā)明的組合物大劑量給藥。特別優(yōu)選的是，將含有25-50mg聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽和150-300mg乳清酸肉堿的單位給藥體每日3次經(jīng)口給藥。本發(fā)明的藥物組合物是將具有良好肝病治療效果以及對(duì)于化學(xué)物質(zhì)引起的肝毒性誘發(fā)和肝細(xì)胞破壞具有抑制作用的乳清酸肉堿和通過與之不同的機(jī)理抑制化學(xué)物質(zhì)引起的肝毒性的聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的良好治療效果以最佳狀態(tài)均衡配合，不僅提供了意想不到的優(yōu)異的協(xié)同肝病治療和預(yù)防效果，而且基本上沒有毒性和副作用，因此不僅可以用于肝病治療目的，而且可以為了預(yù)防目的放心地長(zhǎng)期服用。下面通過組成例和實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步具體地說明本發(fā)明，但這些組成例和實(shí)驗(yàn)例僅僅是為了說明本發(fā)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍不受這些實(shí)施例的限制。實(shí)施例1(硬膠囊劑)乳清酸肉堿150mg聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽25mg抗毒性肝臟提取物12．5mg鹽酸腺嘌呤2．5mg鹽酸吡多辛25mg維生素B20．5mg維生素B120．125mgD-山梨醇165mg乳糖43mg膠體二氧化硅17mg硬脂酸鎂11．2mg總量451．825mg采用通常的膠囊劑制造方法，按指定的量將上述成分配合，然后按照每1個(gè)膠囊451．825mg的配合物將其填充到適當(dāng)大小的硬質(zhì)明膠膠囊中，制成所希望的膠囊。實(shí)施例2(片劑)乳清酸肉堿300mg聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽50mg抗毒性肝臟提取物25mg鹽酸腺嘌呤5mg鹽酸吡多辛50mg維生素B21mg維生素B120．25mg總量431．25mg按指定量將上述成分配合，然后采用通常的片劑制造方法制成片劑。實(shí)施例3(軟膠囊劑)乳清酸肉堿150mg聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽30mg抗毒性肝臟提取物12．5mg鹽酸腺嘌呤2．5mg鹽酸吡多辛25mg維生素B20．5mg維生素B120．125mgD-山梨醇165mg乳糖43mg膠體二氧化硅17mg硬脂酸鎂11．2mg總量456．825mg按指定的量將上述成分配合，然后采用通常的軟膠囊劑制造方法制成軟膠囊劑。實(shí)施例4(注射劑)乳清酸肉堿300mg聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽30mg抗毒性肝臟提取物25mg鹽酸肉堿184mg鹽酸吡多辛25mg維生素B120．125mg注射用蒸餾水適量總量5ml采用通常的注射劑制造方法將上述成分制成注射劑。實(shí)驗(yàn)例1經(jīng)口給藥的血液學(xué)檢查為了將本發(fā)明的藥物組合物對(duì)于藥物誘發(fā)的肝損傷的效果與各配合成分單獨(dú)給藥時(shí)的效果進(jìn)行比較，進(jìn)行下面所述的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用30只4-5周齡的雌眭SPFSD(Sprague-Dawley)系大鼠。在給藥之前，先稱量體重，按平均體重均勻地分成4組，每組6只，平均體重為141±2g。實(shí)驗(yàn)是在按下列條件設(shè)定的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行溫度23±2℃、相對(duì)濕度55±5％、換氣次數(shù)10-12次／小時(shí)、照明時(shí)間12小時(shí)(07:00-19:00)、照度150-300Lux。作為肝毒性物質(zhì)將四氯化碳與玉米油混合，制成50％溶液，以1ml／kg的用量給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥1次，以0．5ml／kg的慢性用量1周經(jīng)口給藥2次。避開四氯化碳給藥日將下列試驗(yàn)藥物給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥按每日1次乳清酸肉堿和聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽配合物250mg／kg(6∶1重量比)、乳清酸肉堿250mg／kg(常用量)和聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽50mg／kg(常用量)的用量分別給第1組(6只大鼠)、第2組(6只大鼠)和第3組(6只大鼠)經(jīng)口給藥。在四氯化碳給藥組中，剩余的6只不進(jìn)行治療藥物處置，用來作為第4組(對(duì)照組)。具體的給藥日如下面的表1所示。<表Ⅰ>CCl4及試驗(yàn)藥物給藥日持續(xù)進(jìn)行上述藥物給藥，然后開始實(shí)驗(yàn)，第16日采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血清，使用干式血清化學(xué)分析器(Kotachem公司制造)測(cè)定血清中的GOT、GPT濃度。結(jié)果示于下面的表2、表3和圖1、圖2中。<表2>本發(fā)明的藥物組合物對(duì)于由CCl4引起的肝損傷的治療效果(GOT)<tablesid="table1"num="002"><table>動(dòng)物組GOT動(dòng)物數(shù)相對(duì)于對(duì)照組的GOT％第1組(乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽配合)1816±1707．2644第2組(乳清酸肉堿)3177±2039．7677第3組(聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽)3708±1644．8690第4組(對(duì)照組)4141±2318．86100</table></tables><表3>本發(fā)明的藥物組合物對(duì)于由CCl4引起的肝損傷的治療效果(GPT)<tablesid="table2"num="003"><table>動(dòng)物組GPT動(dòng)物數(shù)相對(duì)于對(duì)照組的GPT％第1組(乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽配合)10896±1191．8644第2組(乳清酸肉堿)19062±2185．3677第3組(聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽)22248±1436690第4組(對(duì)照組)24846±713．46100</table></tables>注)1．上述各組測(cè)定的GOT和GPT值是平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。2．第1組四氯化碳處置后將乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的混合物(本發(fā)明組合物)給藥的組第2組四氯化碳處置后將乳清酸肉堿給藥的組第3組四氯化碳處置后將聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽給藥的組第4組只用四氯化碳處置的組由上面的表2和表3中所示的結(jié)果可以看出，在四氯化碳處理后，將乳清酸肉堿以250mg／kg／日的用量單獨(dú)給藥的組，經(jīng)過2周的處理后CCl4-誘發(fā)的血清ALT活性增加減少到77％。聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽單獨(dú)給藥的組只減少到90％。相比之下，將本發(fā)明的藥物組合物乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的6∶1(重量比)的混合物給藥的組，CCl4-誘發(fā)的血清ALT活性增加減少到44％，與各成分單獨(dú)處理的組相比較，其效能增加2倍以上。由以上結(jié)果可知，本發(fā)明的藥物組合物通過將乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽配合使用，與各成分單獨(dú)給藥的場(chǎng)合相比顯示出極其優(yōu)異的協(xié)同促進(jìn)效果。實(shí)驗(yàn)例2肝毒性血清酶的回彈(Rebounding)抑制效果比較實(shí)驗(yàn)聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽可以有效地用于肝炎治療，特別是大大降低GOT等，但給藥中斷時(shí)會(huì)出現(xiàn)回彈，為此，本發(fā)明人對(duì)于乳清酸肉堿和聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽復(fù)合劑(本發(fā)明的組合物)對(duì)由四氯化碳和乙醇誘發(fā)的大鼠急性肝病和脂肪肝是否具有回彈抑制效果進(jìn)行了研究。對(duì)實(shí)驗(yàn)例1中實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物，再次將CCl4和實(shí)驗(yàn)藥物分別給藥1日，然后中斷給藥開始實(shí)驗(yàn)，第20日宰殺動(dòng)物，采集血清，測(cè)定血清的GOT濃度，結(jié)果示于下面的表4中。<表4>本發(fā)明的藥物組合物對(duì)于由CCl4引起的肝損傷的治療效果(GOT)<tablesid="table3"num="004"><table>動(dòng)物組GOT動(dòng)物數(shù)相對(duì)于對(duì)照組的GOT％第1組(乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽配合)712±156．4653第2組(乳清酸肉堿)1636±1210．46122第3組(聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽)1084±1195．46135第4組(對(duì)照組)1336±502．56100</table></tables>注)1．上述各組測(cè)定的GOT值是平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。2．第1組四氯化碳處置后將乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的混合物(本發(fā)明組合物)給藥的組第2組四氯化碳處置后將乳清酸肉堿給藥的組第3組四氯化碳處置后將聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽給藥的組第4組只用四氯化碳處置的組將乳清酸肉堿單獨(dú)給藥時(shí)，與對(duì)照組相比顯示出22％的增加，將聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽單獨(dú)給藥時(shí)，與對(duì)照組相比顯示出35％的增加，發(fā)生了肝酶數(shù)值的回彈，沒有顯示出抑制效果，而將乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的混合物(本發(fā)明組合物)給藥的組，與對(duì)照組相比顯示出47％的減少，不僅具有確實(shí)可靠的回彈抑制效果，而且與其它組相比該效果十分顯著。這是因?yàn)?，將本發(fā)明組合物的藥物中斷給藥時(shí)，該藥物持續(xù)發(fā)揮作用的緣故。實(shí)驗(yàn)例3經(jīng)口給藥的組織病理學(xué)檢查用乙醚將實(shí)驗(yàn)例2中實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物麻醉，然后放血宰殺，用肉眼觀察肝和脾臟的病變，將異常臟器固定在10％中性緩沖福爾馬林液中，然后經(jīng)過石蠟飽媒過程，制作5μm厚的組織切片，然后進(jìn)行Masson′sTrichrome和Hematoxylin-Eosin(H＆E)染色，用光學(xué)顯微鏡觀察。病理學(xué)的印象如圖3至圖6所示。對(duì)照組的肝組織在門靜脈周圍大范圍壞死，同時(shí)壞死部分周圍胃膽管和具有透明細(xì)胞質(zhì)的腫大的肝細(xì)胞被包圍，充滿脂肪切片，如圖6所示，觀察到肝細(xì)胞中顯著的空泡形成(vacuolation)和門靜脈周圍的輕微纖維化，另外還觀察到肝細(xì)胞中的空泡形成變性(balooneddegeneration)。聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽單獨(dú)給藥組的組織和乳清酸肉堿單獨(dú)給藥組的組織，觀察到普通的空泡形成和以中心靜脈為中心的局部壞死狀及脂防切片。如圖5所示，在聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽單獨(dú)給藥組的肝細(xì)胞中，觀察到門靜脈周圍的輕微纖維化，如圖4所示，在乳清酸肉堿單獨(dú)給藥組的肝細(xì)胞中，觀察到輕微的變性(degeneration)。乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽復(fù)合劑(本發(fā)明組合物)給藥組的組織基本上是正常的組織，在肝細(xì)胞中觀察到若干空泡形成(參見圖3)。另外，在所有的組中都觀察到為了細(xì)胞再生的核分裂以及若干炎癥反應(yīng)。將上述結(jié)果與病理學(xué)印象比較，觀察乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽復(fù)合劑(本發(fā)明組合物)組的肝臟保護(hù)效果。實(shí)驗(yàn)例4對(duì)大鼠的4周經(jīng)口反復(fù)給藥毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)雌雄各10只6周齡的SD(Sprague-Dawley)大鼠，按每kg體重500mg、100mg、20mg和0mg(對(duì)照組)的用量，將實(shí)驗(yàn)物質(zhì)(本發(fā)明的組合物，乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽重量比為6∶1)每周7次給藥4周，合計(jì)經(jīng)口給藥28次，進(jìn)行臨床癥狀、體重變化、飼料攝取量、飲水量、血液學(xué)檢查、血液生化檢查、尿檢查、眼檢查、肉眼檢查和病理組織學(xué)檢查等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果概括如下，進(jìn)行Hematoxylin-Eosin染色后觀察的結(jié)果如圖8至圖19所示。(1)在雌性和雄性的所有組中，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間未觀察到由實(shí)驗(yàn)物質(zhì)引起的需要特別記錄的臨床癥狀，沒有觀察到死亡或頻臨死亡的動(dòng)物。(2)就體重增加量、飼料攝取量和飲水量等項(xiàng)目而言，與對(duì)照組相比，在各處置組中沒有發(fā)現(xiàn)由實(shí)驗(yàn)物質(zhì)給藥而引起的明顯變化。(3)眼檢查時(shí)，在雌雄所有處置組和對(duì)照組中沒有觀察到有任何異常。(4)尿檢查時(shí)，在雌雄所有處置組和對(duì)照組中沒有觀察到任何異常。(5)血液學(xué)檢查在血液學(xué)檢查中，雄性的場(chǎng)合，在高濃度組中WBC、Hgb、MCH、MCHC值與對(duì)照組相比有明顯減少(p＜0．05)，其它的值沒有觀察到明顯的變化。另外，雌性的所有處置組與對(duì)照組相比，沒有觀察到明顯變化。此外，白血球的分級(jí)系數(shù)，在所有處置組中與對(duì)照組相比未觀察到明顯變化。(6)血液生化檢查在血液生化檢查中，雄性高用量組的ALT、AST、T-蛋白質(zhì)、白蛋白、鈣、肌酸激酶(creatinekinase)、肌酸、LDH值與對(duì)照組相比觀察到明顯減少(p＜0．05或p＜0．01)、A／G比值與對(duì)照組相比明顯增加(p＜0．05)。在雄性中用量組中，與對(duì)照組相比觀察到白蛋白、鈣、肌酸激酶值明顯減少(p＜0．01)，A／G比值比對(duì)照組明顯增加(p＜0．05)。在雄性低用量組中，與對(duì)照組相比觀察到葡萄糖、T-蛋白質(zhì)、白蛋白、肌酸、LDH值明顯減少(p＜0．05或p＜0．01)，氯化物、肌酸激酶、A／G比值與對(duì)照組相比明顯增加(p＜0．05或p＜0．01)。在雌性高用量組中，與對(duì)照組相比，觀察到ALT、AST、TG、T-蛋白質(zhì)、白蛋白、GGT、磷(phosphorus)、LDH、肌酸激酶值明顯減少(p＜0．05或p＜0．01)。在雌性中用量組中，與對(duì)照組相比觀察到A／G比值明顯減少(p＜0．05或p＜0．01)，白蛋白、肌酸激酶、T-膽紅素值與對(duì)照組相比明顯增加(p＜0．01)。在雌性低用量組中，與對(duì)照組相比觀察到葡萄糖、鈣、A／G比值明顯減少(p＜0．05或p＜0．01)，ALT、AST、白蛋白、肌酸激酶、磷值與對(duì)照組相比明顯增加(p＜0．05或p＜0．01)。(7)臟器重量絕對(duì)臟器值，雄性高用量組的左、右副睪丸與對(duì)照組相比觀察到明顯減少(p＜0．01)，相對(duì)臟器重量比未發(fā)現(xiàn)明顯變化。雌性高用量組的左側(cè)卵巢與對(duì)照組相比明顯減少(p＜0．05)，右側(cè)腎臟與對(duì)照組相比明顯增加(p＜0．05)。雌性中用量組的右側(cè)卵巢與對(duì)照組相比有明顯的減少(p＜0．05)。雌性低用量組的心臟與對(duì)照組相比有明顯減少(p＜0．05)，下顎腺與對(duì)照組相比有明顯增加(p＜0．01)。但是，就相對(duì)臟器重量比而言，在各處置組的該臟器中與對(duì)照組相比未發(fā)現(xiàn)明顯變化。(8)剖檢印象將所有存活的動(dòng)物宰殺剖檢時(shí)，在雌雄所有處置組和對(duì)照組中未觀察到與實(shí)驗(yàn)物質(zhì)有關(guān)的需要特別記錄的印象。(9)病理組織學(xué)檢查腎臟的尿細(xì)管間質(zhì)中細(xì)胞浸潤(rùn)印象，在雄性中用量組中觀察到1例、對(duì)照組1例，雌性中用量組1例、低用量組2例、對(duì)照組1例，其余的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中未觀察到任何病變(參見圖9)。觀察到尿細(xì)管石灰化的，雄性中用量組中有1例、對(duì)照組2例，雌性高用量組1例、中用量組1例、低用量組2例和對(duì)照組2例。觀察到尿細(xì)管部分空泡變性的，雄性高用量組1例、低用量組1例，雌性高用量組1例、中用量組2例和對(duì)照組1例。脾臟的淋巴濾泡的增生，雄性高用量組中有2例、中用量組1例和對(duì)照組1例，雌性高用量組1例和中用量組1例。肝臟的竇狀血管(sinusoid)內(nèi)小肉芽腫形成(microgranuloma)印象為，雄性高用量組1例、中用量組2、低用量組2例和對(duì)照組1例，雌性中用量組1例、低用量組2例和對(duì)照組1例。肝細(xì)胞內(nèi)輕度空泡形成，雄性中用量組和對(duì)照組各1例，雌性中用量組1例，其余實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未觀察到任何病變(參見圖7和圖8)。Glisson′ssheath的輕度細(xì)胞浸潤(rùn)，雄性中用量組1例和對(duì)照組3例，雌性低用量組1例和對(duì)照組2例。心臟瘀血，雄性高用量組1例、低用量組1例，雌性中用量組1例，心臟間質(zhì)組織中細(xì)胞浸潤(rùn)印象，只在雄性中用量組中觀察到1例，其余實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未觀察到任何病變(參見圖14)。肺臟的肺胞壁肥厚，觀察到雄性中用量組2例、低用量組2例和對(duì)照組1例，雌性高用量組2例、中用量組3例、低用量組1例和對(duì)照組2例，其余動(dòng)物未觀察到任何病變(參見圖18)。其它臟器(例如睪丸、胃、小腦、副腎、胰臟、甲狀腺、胸腺和骨髓等)未發(fā)現(xiàn)特別需要記錄的病變(參見圖10、11、12、13、15、16、17和19)。由以上結(jié)果可以斷定，在將乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽復(fù)合劑(本發(fā)明組合物)給大鼠持續(xù)4周經(jīng)口反復(fù)給藥毒性實(shí)驗(yàn)中，在最高濃度的500mg／kg給藥組中沒有觀察到需要特別記錄的毒性變化，因此本發(fā)明的組合物是安全性很高的制劑。實(shí)驗(yàn)例5本發(fā)明組合物(HDS)對(duì)于大鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)為了測(cè)定本發(fā)明的藥物組合物的急性毒性，將本發(fā)明的組合物對(duì)6周齡SD(Sprague-Dawley)大鼠(體重-雌110-130kg，雄125-150kg)經(jīng)口給藥，確認(rèn)致死率。將本發(fā)明的藥物組合物(乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的重量比為6∶1)作為實(shí)驗(yàn)藥劑，按每kg體重500mg、100mg、20mg和0mg(對(duì)照組)的用量給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)口給藥。對(duì)于各實(shí)驗(yàn)藥劑，使用雌雄各10只，總共20只大鼠。給藥后，數(shù)出4周后死亡的動(dòng)物數(shù)，算出致死率，結(jié)果示于表5中。<表5>本發(fā)明的藥物組合物的急性毒性如上面表5所示，本發(fā)明的藥物組合物是極其安全、沒有毒性的藥劑。由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的藥物組合物通過乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的獨(dú)特配合，與單獨(dú)使用各成分的場(chǎng)合相比，不僅顯示出極其優(yōu)異的協(xié)同肝病治療效果，而且還顯示出保護(hù)肝免受藥物引起的肝損傷的預(yù)防效果，可以抑制單獨(dú)給藥時(shí)出現(xiàn)的回彈現(xiàn)象，是理想的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物。權(quán)利要求1．肝病治療和預(yù)防用藥物組合物，其特征是，以1∶0．01-1∶60和重量比含有聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽(DDB)和乳清酸肉堿(Carnitineorotate)。2．權(quán)利要求1所述的組合物，其特征是，聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽與乳清酸肉堿的重量比是1∶3-1∶30。3．權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征是，還含有維生素、氨基酸制劑、肝臟提取物或藥劑學(xué)上允許的載體。4．權(quán)利要求3所述的組合物，其特征是，相對(duì)于每1份(重量)聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽含有0．01-3份(重量)的維生素。5．權(quán)利要求3所述的組合物，其特征是，所述的維生素是B2、維生素B6、維生素B12或它們的混合物。全文摘要本發(fā)明是關(guān)于含有乳清酸肉堿(Carnitineorotate)和聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽(DDB)的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物。在本發(fā)明的組合物中,聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽與乳清酸肉堿的組成比為1∶0.01—1∶60,優(yōu)選的是1∶3—1∶30,最好是1∶6—1∶24。本發(fā)明的藥物組合物通過乳清酸肉堿與聯(lián)苯基二甲基二羧酸鹽的獨(dú)特配合,與單獨(dú)使用各成分的場(chǎng)合相比,不僅顯示出極其優(yōu)異的協(xié)同肝病治療效果,而且還顯示出保護(hù)肝免受藥物引起的肝損傷的預(yù)防效果,是理想的肝病治療和預(yù)防用藥物組合物。文檔編號(hào)A61P1/16GK1294914SQ00104199公開日2001年5月16日申請(qǐng)日期2000年1月31日優(yōu)先權(quán)日1999年11月8日發(fā)明者權(quán)哲申請(qǐng)人:韓西制藥株式會(huì)社