石斛葉抗氧化應(yīng)用
【專利摘要】一種石斛葉抗氧化應(yīng)用，通過采集石斛葉經(jīng)剪碎后加水回流提取，對提取液濃縮后離心處理并通過大孔樹脂洗脫并減壓濃縮，最后去除溶劑制成可食用添加物。本發(fā)明原料來源豐富，價(jià)格低；石斛葉經(jīng)提取純化活性部位，利于功能食品開發(fā)。
【專利說明】
石斛葉抗氧化應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及的是一種中醫(yī)藥領(lǐng)域的技術(shù)，具體是一種石斛葉抗氧化應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 自由基是高度活性氧分子來源于機(jī)體正常代謝或外源性的因素如：電離輻射、某 些藥物、酒精、吸煙等刺激產(chǎn)生，它可以攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸，在膜脂質(zhì)過氧化，降 低膜流動(dòng)性，酶和受體活性的喪失，并損壞膜蛋白導(dǎo)致細(xì)胞失活。自由基與諸多疾病相關(guān)， 如癌癥，動(dòng)脈粥樣硬化，糖尿病，神經(jīng)退行性疾病和衰老?？寡趸瘎┛梢詼p少自由基對一些 重要生物大分子，包括蛋白質(zhì)和DNA在內(nèi)的氧化損傷。近年來抗氧化劑的研究受到眾多學(xué)者 的關(guān)注，特別是天然抗氧化劑及其潛在的健康效益方面意義的研究。中藥抗氧化劑具有低 毒、高效等優(yōu)點(diǎn)，從傳統(tǒng)的中藥中篩選出中藥抗氧化劑具有重要意義。
[0003] 現(xiàn)行2010版《中國藥典》規(guī)定，石斛以莖入藥，但其葉產(chǎn)量很大不屬于藥用部位，造 成了大量資源浪費(fèi)，已有種植企業(yè)將原葉直接干燥，分裝，泡茶飲的使用方法，但功效不明 確。石斛屬國家批準(zhǔn)的藥食兩用中藥品種目錄，民間有以葉子泡茶飲的用法，但功效不明 確。
[0004] 目前國內(nèi)外學(xué)者對于石斛葉的研究較少，僅有葉多糖、葉揮發(fā)油及葉黃酮碳苷類 化學(xué)成分的研究報(bào)道，還未見石斛葉抗氧化部位及其制備方法的研究報(bào)道。因此對石斛葉 的研究具有重大意義。為了更有效、合理的利用石斛我們有必要對石斛葉進(jìn)行進(jìn)一步的活 性研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明克服現(xiàn)有石斛葉資源利用及研究的不足以及化學(xué)抗氧化劑的毒性，提出一 種石斛葉抗氧化應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 本發(fā)明通過采集石斛葉經(jīng)剪碎后加水回流提取，對提取液濃縮后離心處理并通過 大孔樹脂洗脫并減壓濃縮，最后去除溶劑制成可食用添加物。
[0008] 所述的加水回流提取是指:將干燥石斛葉剪碎后，添加其重量5~15倍的水回流提 取2~3次，每次0.5~2h，趁熱濾過，合并水溶液。
[0009 ]所述的干燥，可采用本領(lǐng)域通常的干燥方法，40 °C烘干。
[0010] 所述的濃縮是指:濃縮到濃縮液體積與干燥石斛葉的質(zhì)量比為3:1~5:1。
[0011] 所述的大孔樹脂洗脫是指：用30%~70%乙醇洗脫，將各部位減壓濃縮至干，其中 石斛葉總提物及30%~70%乙醇洗脫部位即為石斛葉抗氧化活性部位。
[0012] 將本發(fā)明成品通過Folin-Ciocalteu比色法測定總酚含量，通過三氯化鋁顯色反 應(yīng)測定總黃酮含量。
[0013] 所述的石斛葉抗氧化活性采用DPPH自由基清除活性、ABTS自由基清除活性、鐵原 子還原能力、β-胡蘿卜素漂白實(shí)驗(yàn)、超氧陰離子清除活性測定。 技術(shù)效果
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明石斛葉抗氧化活性部位與石斛莖相比，具有下述優(yōu)點(diǎn)：1. 原料來源豐富，價(jià)格低。2.石斛葉經(jīng)提取純化活性部位，利于功能食品開發(fā)。
【附圖說明】
[0015] 圖1為本發(fā)明流程圖；
[0016] 圖2為實(shí)施例中總離子流色譜圖；
[0017] 圖3為實(shí)施例中N-P-香豆酰酪胺、反式或順式阿魏酸酰對羥基苯乙胺、反式桂皮酸 酰對羥基苯乙胺的一級質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例1
[0018] 如圖1所示，本實(shí)施例包括以下步驟:將石斛葉40 °C干燥，剪碎，加藥材重量10倍水 回流提取3次，每次2h，趁熱濾過，合并水溶液，水溶液減壓濃縮至干，即為石斛葉抗氧化活 性部位。 實(shí)施例2
[0019]如圖1所示，本實(shí)施例包括以下步驟:將石斛葉40 °C干燥，剪碎，加藥材重量12倍水 回流提取3次，每次2h，趁熱濾過，合并水溶液，濃縮(濃縮至體積與藥材總量比為5:1 )，將濃 縮液離心，上樣到預(yù)處理過的非極性大孔樹脂玻璃柱中，依次用2~6BV蒸餾水（即0%乙 醇）、30 %乙醇洗脫。30 %乙醇洗脫部位減壓濃縮至干，即為石斛葉抗氧化活性部位。 實(shí)施例3
[0020] 如圖1所示，本實(shí)施例包括以下步驟:將石斛葉40 °C干燥，剪碎，加藥材重量12倍水 回流提取3次，每次2h，趁熱濾過，合并水溶液，濃縮(濃縮至體積與藥材總量比為5:1 )，將濃 縮液離心，將濃縮液上樣到預(yù)處理過的中極性大孔樹脂玻璃柱中，依次用2~6BV蒸餾水(即 0 %乙醇）、25 %~35 %乙醇、60 %乙醇洗脫。60 %乙醇洗脫部位減壓濃縮至干，即為石斛葉 抗氧化活性部位。 實(shí)施例4
[0021] 本實(shí)施例包括以下步驟:將實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3所得樣品采用DPPH自由基 清除活性、ABTS自由基清除活性、鐵原子還原能力、β-胡蘿卜素漂白實(shí)驗(yàn)、超氧陰離子清除活 性5種抗氧化模型檢測抗氧化活性。結(jié)果如表1至表5所示，可見，石斛葉30%乙醇部位及 60%乙醇部位具有較強(qiáng)抗氧化活性，且60%乙醇部位的抗氧化活性高于石斛莖水提總樣。 [0022] 表1石斛葉各化學(xué)部位DPPH法I (：50值
[0023] "」'表示樣品 IC5〇值 > 1000yg/mL
[0024] 表2石斛葉各化學(xué)部位ABTS法1(：50值
[0025] 表3石斛葉各化學(xué)部位Trolox當(dāng)量
[0026]表4石斛葉各化學(xué)部位抑制β-胡蘿卜素自氧化能力
[0027]表5石斛葉各化學(xué)部位抗超氧陰離子活力
[0028] 表示樣品濃度大于lOOOyg/mL仍無清除超氧陰離子自由基活力 實(shí)施例6
[0029] 本實(shí)施例包括以下步驟:對實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3所得的石斛葉抗氧化活性 部位進(jìn)行總酚、總黃酮含量測定，結(jié)果見表6。
[0030] 可以看出在實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3中，60%乙醇部位總酚含量最高達(dá)到 116.2Uig/mg沒食子酸當(dāng)量，其次是30%乙醇部位56.9Uig/mg沒食子酸當(dāng)量。總酚含量依次 為茶多酚>60 %乙醇部位>30 %乙醇部位〉莖水提總樣〉葉水提總樣。
[0031] 總黃酮的含量測定結(jié)果顯示，在實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3中60%乙醇部位總黃 酮含量最高?？傸S酮含量依次為60%乙醇部位>30%乙醇部位〉葉水提總樣〉茶多酚〉莖水提 總樣。
[0032] 表6石斛葉各化學(xué)部位總酚、總黃酮含量測定結(jié)果
實(shí)施例7
[0033]本實(shí)施例包括以下步驟:將實(shí)施例3制得的60 %乙醇部位進(jìn)行HPLC-MS分析，總離 子流色譜見圖2。采用MassLynx質(zhì)譜分析軟件計(jì)算可能的分子組成，并結(jié)合石斛化合物的文 獻(xiàn)報(bào)道，對色譜峰進(jìn)行比對，鑒定了其中的3個(gè)成分，見表7,分別是N-p-香豆酰酪胺、反式或 順式阿魏酸酰對羥基苯乙胺、反式桂皮酸酰對羥基苯乙胺，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式分別為：

[0037]對應(yīng)的一級質(zhì)譜圖如圖3所示。
[0038] 表7石斛葉60 %乙醇部位色譜峰鑒定結(jié)果
[0039]上述具體實(shí)施可由本領(lǐng)域技術(shù)人員在不背離本發(fā)明原理和宗旨的前提下以不同 的方式對其進(jìn)行局部調(diào)整，本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)且不由上述具體實(shí)施所 限，在其范圍內(nèi)的各個(gè)實(shí)現(xiàn)方案均受本發(fā)明之約束。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種石斛葉抗氧化應(yīng)用，其特征在于，通過采集石斛葉經(jīng)剪碎后加水回流提取，對提 取液濃縮后離心處理并通過大孔樹脂洗脫并減壓濃縮，最后去除溶劑制成可食用添加物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述的加水回流提取是指:將干燥石斛葉剪 碎后，添加其重量5~15倍的水回流提取2~3次，每次0.5~2h，趁熱濾過，合并水溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是，所述的干燥，可采用本領(lǐng)域通常的干燥方法， 40°C烘干。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述的濃縮是指:濃縮到濃縮液體積與干燥 石斛葉的質(zhì)量比為3:1~5:1。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述的大孔樹脂洗脫是指：用30%~70%乙 醇洗脫，將各部位減壓濃縮至干，其中石斛葉總提物及30%~70%乙醇洗脫部位即為石斛 葉抗氧化活性部位。
【文檔編號】A23L33/105GK105901733SQ201610266364
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月27日
【發(fā)明人】李曉波, 彭崇勝, 高蓓蓓
【申請人】上海交通大學(xué)