一種促消化葡萄復(fù)合粉及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種促消化葡萄復(fù)合粉及其制備方法，將具有天然色澤、風(fēng)味和口感的葡萄粉與植物乳桿菌粉、小麥芽粉、改性膳食纖維、酵素粉、木瓜粉等功能性產(chǎn)品科學(xué)復(fù)配，不僅有效提高了葡萄復(fù)合粉的營(yíng)養(yǎng)性、食品安全性和保健功能，而且顯著提高了葡萄復(fù)合粉的益生性和質(zhì)量穩(wěn)定性，與現(xiàn)有葡萄復(fù)合粉相比：其組分簡(jiǎn)單，色澤、風(fēng)味和口感天然，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，保健功能強(qiáng)，生物活性物質(zhì)含量高，益生菌活菌數(shù)量高、益生性強(qiáng)，益生菌功能性代謝物種類全、含量高，食品安全性高，保質(zhì)期長(zhǎng)。CGMCC NO.1176320151130
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及葡萄深加工產(chǎn)品，具體涉及一種促消化葡萄復(fù)合粉及其制備方法。 一種促消化葡萄復(fù)合粉及其制備方法
【背景技術(shù)】
[0002] 固體飲料是水分含量在5%以內(nèi)，具有一定形狀，例如顆粒狀、片狀、塊狀、粉末狀 等，需經(jīng)沖溶才可以飲用的飲料。固體飲料是由液體飲料除去水分而制成的，去除水分的目 的：一是防止飲料本身的酶或微生物引起的變質(zhì)或腐敗，以利儲(chǔ)藏;二是便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸。 與液體飲料相比，固體飲料具有如下特點(diǎn)：質(zhì)量顯著減輕，體積顯著變小，攜帶方便;風(fēng)味 好，速溶性好，應(yīng)用范圍廣，飲用方便;易于保持衛(wèi)生;包裝簡(jiǎn)易，運(yùn)輸方便。固體飲料以某種 原料為主，配以其它輔料加工而成的，按其主要原料的類別，可將固體飲料分為果香型、蛋 白型和其它型三種。它們中都要加入糖或甜味劑?，F(xiàn)有技術(shù)常以某些甜味劑代替部分或者 全部蔗糖。然而隨著營(yíng)養(yǎng)型疾病的增多，固體飲料，如：固體奶茶、咖啡伴侶、豆?jié){粉、芝麻 糊、核桃粉等中，開始需要加入低熱量的復(fù)合甜味劑以解決能量與營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩的問(wèn)題。
[0003] 白藜蘆醇是多酚類化合物，主要來(lái)源于葡萄(紅葡萄酒）、虎杖、花生、桑椹等植物。 白藜蘆醇是一種生物性很強(qiáng)的天然多酚類物質(zhì)，又稱為芪三酚，是腫瘤的化學(xué)預(yù)防劑，也是 對(duì)降低血小板聚集，預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化、心腦血管疾病的化學(xué)預(yù)防劑。美國(guó)農(nóng)業(yè)部的 研究結(jié)果表明，花生紅衣與仁中也含有相當(dāng)多的白藜蘆醇。白藜蘆醇的實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí) 具有對(duì)心血管疾病和癌癥的有益作用。白藜蘆醇對(duì)激素依賴性腫瘤有明顯的預(yù)防作用。還 可對(duì)骨質(zhì)疏松、痤瘡及老年癡呆癥有預(yù)防作用，具有抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用。對(duì)人體內(nèi)部一 種單體抗衰老酶起作用，進(jìn)而發(fā)揮預(yù)防各種年齡相關(guān)疾病、延長(zhǎng)預(yù)期壽命的潛在作用。白藜 蘆醇有著很廣泛的保健作用，例如法國(guó)人常飲高脂肪物中含有白藜蘆醇，所以法國(guó)人的冠 心病發(fā)病率低于其它西方國(guó)家，正因?yàn)榘邹继J醇因?yàn)榭梢杂行У貕褐聘咧镜姆乐巫饔茫?已有部分國(guó)家和地區(qū)把白藜蘆醇及其制品作為膳食補(bǔ)充劑開發(fā)白藜蘆醇。
[0004] 目前以葡萄為原料，制備純葡萄粉的較少：
[0005] 中國(guó)專利CN 102885265A公開了一種葡萄粉的制作方法。本發(fā)明以新鮮的葡萄為 原料，進(jìn)行篩選后，加熱進(jìn)行滅酶處理，然后在醋酸鋅溶液和抗壞血酸溶液中進(jìn)行護(hù)色，再 烘干，最后將處理后的葡萄粉碎過(guò)篩、真空包裝、滅菌，得到葡萄粉成品，該產(chǎn)品色澤鮮艷， 營(yíng)養(yǎng)豐富，保質(zhì)期長(zhǎng)。本發(fā)明具有工藝簡(jiǎn)單、操作方便、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)，適合工業(yè)化生 產(chǎn)。上述公開的專利護(hù)色工藝傳統(tǒng)，效果差，引入化學(xué)護(hù)色劑，食品安全性差，采用加熱滅酶 和烘干，生物活性物質(zhì)和熱敏性成分損失大。
[0006] 以葡萄為主要原料，制備葡萄復(fù)合粉的較多：
[0007] 中國(guó)專利CN 104172005A公開了一種益生元葡萄藍(lán)莓復(fù)合果粉及其制作方法，主 要由以下原料組成：葡萄鮮果50~80份，藍(lán)莓鮮果20~50份，低聚果糖2~5份。制作方法如 下：（1)取葡萄鮮果和藍(lán)莓鮮果洗凈；（2)破碎并在破碎過(guò)程中加入食用亞硫酸得果漿；（3) 取步驟(2)的果漿，加入果膠酶；（4)取酶解后的果漿壓榨得混合果汁；（5)添加低聚果糖； (6)將可溶性固形物含量濃縮至25%; (7)過(guò)濾；（8)冷凍干燥；（9)過(guò)篩得果粉成品。本發(fā)明 涉及的產(chǎn)品富含花青素、有機(jī)酸、維生素等成分，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，可速溶，可用于飲 料、糕點(diǎn)等食品的原料。上述公開的專利采用傳統(tǒng)的果汁制備方法營(yíng)養(yǎng)成分損失大，收得率 低，保健功效不理想。
[0008] 中國(guó)專利CN 104970419A公開了一種葡萄固體飲料，包括以下質(zhì)量百分含量的各 個(gè)組分:葡萄籽粉末20~25 %，櫻桃干粉末18~22%，藍(lán)莓干粉末15~18%，番石榴干粉末 15~17%，雙歧桿菌3~5 %，綜合植物酵素4~6 %，大豆膳食纖維粉5~10 %，維生素2~4% 和復(fù)合甜味劑2~5%。本發(fā)明所提供的葡萄固體飲料具有如下優(yōu)點(diǎn)：提升機(jī)體的新陳代謝， 強(qiáng)健體質(zhì)；清理腸道垃圾、排毒凈化;綠色天然減脂瘦身等。飲料中添加的復(fù)合甜味劑降低 了葡萄汁固體飲本身所存在的不良味道，使得固體飲料甜度柔和，不會(huì)導(dǎo)致齲齒，也不會(huì)引 起血糖膽固醇升高。上述公開的專利功能性物質(zhì)為葡萄籽，原料利用率低、成本高，食品添 加劑多，安全性低。
[0009] 以葡萄為輔料制備果蔬復(fù)合粉的也較多：
[0010] 中國(guó)專利CN 102940214B公開了一種蔬果纖維營(yíng)養(yǎng)粉產(chǎn)品，所述蔬果粉加工方法 如下：（1)前處理:取果蔬原料，清洗、去皮、打漿，獲得果蔬漿液；（2)干燥處理:取濃縮液噴 霧干燥，得到所述果蔬粉；（3)調(diào)配:按照比例添加；（4):包裝。所述果蔬粉由以下重量分?jǐn)?shù) 的原料復(fù)配制成:植物纖維:20份，植物膠質(zhì)：15份，益生因子：10份，復(fù)合氨基酸5份，核糖核 酸:0.6份，小麥芽粉:6份，酵素:3份，麥精：10份，不飽和脂肪酸：1份，瓜拉那提取物：1份，蛋 白粉:8份，調(diào)味劑:0.03份，復(fù)合維生素及礦物質(zhì)：0.6份，蔬果粉10份。本發(fā)明蔬果粉口味 好，水分含量低易于儲(chǔ)存，高營(yíng)養(yǎng)低熱量，具有很好的排毒養(yǎng)顏功效，同時(shí)具有提升睡眠質(zhì) 量，減弱焦慮情緒的作用。上述公開的專利組分復(fù)雜，原料處理工藝簡(jiǎn)單，活性物質(zhì)損失大， 保健效果仍不理想。
[0011] 中國(guó)專利CN 104286756A公開了一種減肥果蔬粉，以具有減肥作用的天然植物為 原料，采用低溫萃取和生物酶解技術(shù)，最大限度地保留了其中的有效成分，在現(xiàn)有果蔬營(yíng)養(yǎng) 粉的基礎(chǔ)上科學(xué)復(fù)配膳食纖維、植物提取物、茶葉提取物、香辛料提取物、中草藥提取物、益 生菌粉劑、益生因子和竹炭粉等減肥效果較佳的減肥因子，同時(shí)還復(fù)配了蛋白粉、麥精、小 麥芽粉等具有減肥作用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并添加了復(fù)合氨基酸、維生素及礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)素，主要 從滿足飽腹感、調(diào)節(jié)胃腸菌群、中藥養(yǎng)生、吸脂排脂等多角度出發(fā)，維持和提高了人體自我 調(diào)節(jié)消化和吸收的水平和能力，減少了人體脂肪的攝取和二次合成途徑，不會(huì)影響人體正 常的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝取和代謝水平，實(shí)現(xiàn)養(yǎng)生減肥的良性循環(huán)。上述公開的專利組分復(fù)雜，益生 菌采用傳統(tǒng)菌種，功能性保健效果仍不理想。
[0012] 綜上，以葡萄為主要原料，制備一種口感和色澤天然，營(yíng)養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)含 量高，組分簡(jiǎn)單、功能性強(qiáng)保健效果顯著的促消化葡萄復(fù)合粉仍是一種必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有葡萄復(fù)合粉及其制備的缺陷，以葡萄粉為主 要原料，添加益生性強(qiáng)大的植物乳桿菌粉、酵素粉，并科學(xué)復(fù)配小麥芽粉、改性膳食纖維等 功能性原料制備一種口感和色澤天然，營(yíng)養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)含量高，組分簡(jiǎn)單、功能性 強(qiáng)、保健效果顯著的促消化葡萄復(fù)合粉。
[0014] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0015] -種促消化葡萄復(fù)合粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0016] 葡萄粉30-50份，小麥芽粉20-30份，改性膳食纖維8-15份，木瓜粉6-12份，植物乳 桿菌粉6-12份，酵素粉11 -17份，檸檬粉2-6份；
[0017]優(yōu)選地，所述促消化葡萄復(fù)合粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0018]葡萄粉35-45份，小麥芽粉23-27份，改性膳食纖維11-13份，木瓜粉8-10份，植物乳 桿菌粉8-10份，酵素粉13_15份，梓檬粉3-5份；
[0019]更優(yōu)選地，所述促消化葡萄復(fù)合粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0020] 葡萄粉40份，小麥芽粉25份，改性膳食纖維12份，木瓜粉9份，植物乳桿菌粉9份，酵 素粉14份，檸檬粉4份；
[0021] 進(jìn)一步地，所述葡萄粉是經(jīng)微波高溫瞬時(shí)滅酶、固色和超聲波清洗、絲膠肽冷凍保 護(hù)、高壓脈沖電場(chǎng)提取、超聲波輔助微波提取、生物酶解等低溫提取技術(shù)而制得，最大限度 地保留了葡萄的天然色澤、口感及其生物活性成分；
[0022] 優(yōu)選地，所述葡萄粉的制備方法，包括以下步驟，將葡萄放入盛有0.1-0.3 %碳酸 氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中，于室溫下200-400W、35-45KHZ清洗5-10min，瀝干，每個(gè)葡萄果 任意切分成四份，單層平鋪在微波干燥機(jī)中于功率3-5kW、溫度120-130°C、干燥3-5s，然后 浸泡在質(zhì)量百分比濃度為8-12%的絲膠肽溶液中8-1〇1^11，取出，于-18--22°(：冷凍3〇-50min后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑0.3-0.5mm,接著加入粉碎物質(zhì)量1-3倍的水，用乳酸調(diào) 節(jié)pH值為3.5-5.5，于室溫下在電場(chǎng)強(qiáng)度25-35kV/cm，脈沖時(shí)間300-500ys，脈沖頻率200-300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理20-30min;然后于室溫在功率150-300W條件下進(jìn)行微 波輻照提取15_20min，同時(shí)在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加 入提取液質(zhì)量1.5-2.5 %的混合酶，于40-50 °C酶解30-50min，酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、 冷凍干燥至水分含量為5-8%即得葡萄粉；
[0023] 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-3:1-2均勻 混合。
[0024]進(jìn)一步地，所述小麥芽粉是以小麥為主要原料，依次經(jīng)超聲清洗、微波瞬時(shí)處理、 超聲輔助生物酶解浸泡、發(fā)芽、干燥、低溫粉碎等工藝而制備的；
[0025] 優(yōu)選地，所述小麥芽粉的制備方法，包括如下步驟:將小麥放在裝有0.01-0.03 % 碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于功率200-400W、頻率20-30KHZ室溫超聲清洗3-5min，取 出、瀝干，于頻率2450MHz、功率3000W、溫度38-42°C、料層厚度2-4cm微波干燥10-15s，然后 置溫度為33-36°C、pH值為6-8的浸泡液中浸泡4-6h，浸泡液含有質(zhì)量百分比濃度為0.15-0.25%的復(fù)合酶，每隔15_20min通風(fēng)一次，通風(fēng)壓力0.13-0.15MPa，同時(shí)于電場(chǎng)強(qiáng)度10-15kV/cm，脈沖時(shí)間100-300ys，脈沖頻率60-80HZ條件進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理，直至小麥水 分含量為40-45% ;浸泡后的小麥瀝干，在發(fā)芽室內(nèi)進(jìn)行暗發(fā)芽，暗發(fā)芽溫度保持20-24°C， 暗發(fā)芽時(shí)間為20_24h，經(jīng)發(fā)芽后的小麥干燥至水分含量為5-8%，低溫粉碎、過(guò)60-80目篩即 得小麥芽粉；
[0026] 所述復(fù)合酶為纖維素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按質(zhì)量比2-4:2-4:1-3均勻混合。 [0027]進(jìn)一步地，所述改性膳食纖維是將膳食纖維經(jīng)物理、化學(xué)或生物的方法處理而得 到的具有強(qiáng)持水性、膨脹性、增稠性、吸附性且網(wǎng)格結(jié)構(gòu)豐富的可溶性纖維素含量高、生物 活性強(qiáng)、對(duì)人體益生菌群有重要的、積極作用的纖維素，與普通膳食纖維相比，其生物活性 作用更強(qiáng)大，還可大大延長(zhǎng)葡萄粉的保質(zhì)期；
[0028]優(yōu)選地，所述改性纖維是由菊粉、蘋果纖維、燕麥纖維、小麥纖維中的一種或多種 經(jīng)生物酶酶解而得到的；
[0029]更優(yōu)選地，所述改性膳食纖維的制備方法，包括以下步驟:將菊粉、小麥纖維、燕麥 纖維按質(zhì)量比5-7:2-4:1-3均勻混合，加入其質(zhì)量3-7倍的水，室溫100-3001、35-401(抱條件 超聲提取l〇_15min，然后在電場(chǎng)強(qiáng)度20-40kV/cm，脈沖時(shí)間300-500ys,脈沖頻率200-400HZ 條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理10-15min;用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5-6.5，加入混合物質(zhì)量0.1-0.3 %的生物酶，于45-55 °C酶解20-48min;酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥至水分含 量為5-8 %即得改性膳食纖維；
[0030]所述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶按質(zhì)量比1-3:1-3:1-2:1-2均勻 混合。
[0031]進(jìn)一步地，所述植物乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC N0.11763為出發(fā)菌株按常規(guī) 方法制備的，其活菌含量為:7X1012-9X1012cfu/g;其中冷凍干燥工藝采用的冷凍保護(hù)劑 以含有抗凍蛋白的動(dòng)物或植物為原料，經(jīng)高壓脈沖電場(chǎng)提取、超聲波輔助微波提取和復(fù)配 酶酶解而制得的，可有效提高植物乳桿菌粉在冷凍干燥過(guò)程活菌存活率；
[0032] 優(yōu)選地，所述保護(hù)劑的制備方法，包括如下步驟:將冬黑麥、沙冬青、鯊魚皮膠原蛋 白分別清洗、瀝干，按質(zhì)量比8-10: 3-5: 2-4均勻混合，加入混合物料質(zhì)量0.1-1倍的pH值為 3.8-4.5的乳酸潤(rùn)濕3-811，于-18-22°(：冷凍1-211后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度3-5〇11，粉 碎物粒徑0.5-3mm，接著加入粉碎物質(zhì)量10-20倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5，于室溫 下在電場(chǎng)強(qiáng)度25-35kV/cm，脈沖時(shí)間300-500ys，脈沖頻率200-300HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖 電場(chǎng)處理20-30min;然后于室溫在功率150-300W條件下進(jìn)行微波輻照提取15-20min，同時(shí) 在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì)量1-2%的復(fù)配 酶，于45-55 °C酶解30-50min;酶解液過(guò)濾、濾液濃縮、低溫粉碎至粒徑為0.1-0.3mm即得保 護(hù)劑；
[0033] 所述復(fù)配酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-3: 1-2:1-2均勻混合；
[0034]更優(yōu)選地，所述微波輻照提取為間歇式提取，即微波輻照10s，間隔20s。
[0035] 進(jìn)一步地，所述酵素粉制備方法如下：采用泡菜發(fā)酵生產(chǎn)末期排放的發(fā)酵液為原 料，過(guò)濾除去發(fā)酵液中的菜葉等大粒物質(zhì)得到發(fā)酵液體，發(fā)酵液體采用冷凍干燥等干燥方 法制備獲得酵素粉。冷凍干燥的條件是:-30-40度預(yù)凍6小時(shí)；然后凍干直到含水量小于 5%。泡菜生產(chǎn)方法參照中國(guó)專利201110421967.3或201210310308.7制備。
[0036] 本發(fā)明另一目的是提供上述促消化葡萄復(fù)合粉的制備方法，包括如下步驟:按照 配方比例，稱取各原料，依次將酵素粉、植物乳桿菌粉、葡萄粉、檸檬粉、小麥芽粉、木瓜粉加 入V型混合罐均勻混合25-35min，攪拌轉(zhuǎn)速20-40r/min，然后加入改性膳食纖維均勻混12-18min，攪拌轉(zhuǎn)速40-60r/min，無(wú)菌灌裝、密封、包裝即得促消化葡萄復(fù)合粉；
[0037] 優(yōu)選地，所述無(wú)菌灌裝采用自動(dòng)粉狀灌裝機(jī)灌裝，同時(shí)采用6()C〇輻照滅菌，輻照劑 量4kGy;
[0038]優(yōu)選地，所述葡萄復(fù)合粉采用鋁塑復(fù)合袋灌裝;所述鋁塑復(fù)合袋灌裝前采用紫外 線或臭氧消毒20_40min。
[0039] 經(jīng)上述方法制備的葡萄復(fù)合粉植物乳桿菌活菌含量為6.84 X 10n-9.49 X lOUcfu/go
[0040] 本發(fā)明植物乳桿菌(1^〇1：(^&(3；[11118口1&1^&1'11111)乂11于2015年11月30日保藏于中國(guó) 微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)，保藏號(hào)為CGMCC NO. 11763,保藏 地址為：中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。 [0041 ] 植物乳桿菌益生特性如下：
[0042]本發(fā)明所提供的植物乳桿菌CGMCC N0.11763經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)能夠在pH為1.50的條件 下存活，在1%膽鹽培養(yǎng)4小時(shí)后仍處于存活狀態(tài);植物乳桿菌CGMCC N0.11763降解亞硝酸 鹽速度快，分解能力達(dá)到10.9mg/h/kg，該菌種在生產(chǎn)泡菜時(shí)，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中亞硝酸鹽濃 度在4.8mg/kg以下；CGMCC N0.11763在發(fā)酵60h小時(shí)后，對(duì)膽固醇降解率可達(dá)到64.76%。 CGMCC N0 ? 11763黏附能力測(cè)定的自凝集率為95 ? 71 %。
[0043] 植物乳桿菌CGMCC N0.11763對(duì)膽固醇降解能力研究和測(cè)定：
[0044] 取lml CGMCC N0.11763母液接種于10mL的MRS膽固醇液體培養(yǎng)基（膽固醇含量 0. 1mg/ml，pH 6.2)中，37°C的恒溫靜置分別培養(yǎng)20h、40h、60h備用，以接入lmL無(wú)菌水的MRS 膽固醇培養(yǎng)基為對(duì)照，取以上培養(yǎng)不同時(shí)間的菌液樣品及對(duì)照液各lml，9000r/min，4°C下 離心10min，得到發(fā)酵上清液，鄰苯二甲醛法測(cè)定上清液中膽固醇含量(具體為:取各上清液 0 . lml于相應(yīng)的試管中，加冰醋酸0.3ml，lmg/ml的鄰苯二甲醛0.15ml，緩緩加入濃硫酸 1. 〇ml，混合均勻。室溫靜置10min，于550nm下測(cè)吸光值）。每一處理3個(gè)重復(fù)，以同樣方法制 作膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算上清液中膽固醇含量及降解率，結(jié)果見表1?？芍珻GMCCN0.11763 對(duì)膽固醇有很好的降解作用，在發(fā)酵60h小時(shí)后，降解率可達(dá)到64.76%。
[0045]表1對(duì)膽固醇的降解情況。
[0047] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763菌株的耐膽鹽試驗(yàn)：
[0048] 取CGMCCN0.11763菌液lmL接種菌種于含有不同膽鹽（含量梯度為0.0%、0.2%、 0.4%、0.6%、0.8%、1%)的1011^]\?5液體培養(yǎng)基(？11=6.4)，置于37°(：下分別培養(yǎng)0、2、411， 每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。各取lml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋度溶液，取0.1ml稀釋 液于MRS中涂布，于37°C生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)(每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行)記錄計(jì)算平 板上的菌數(shù)個(gè)數(shù)。結(jié)果見表2?？芍摼谀扄}濃度為1 %處理4h后菌的生長(zhǎng)量依然達(dá)到 0? 59±0? 92 X 107(cfu/ml)，有很好的耐膽鹽能力。
[0049] 表2耐膽鹽能力檢測(cè)[(土s) X 107cfu/ml]
[0051]
[0052] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763菌株的耐酸試驗(yàn)
[0053] 取HLX37母液按lml接種菌種于不同pH值(pH梯度為1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0)的 lOmLMRS液體培養(yǎng)基，置于37°C下分別培養(yǎng)0、2、4h，每一處理3個(gè)重復(fù)。各取lml樣品菌液于 9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋溶液，取0 . lml稀釋液于MRS中涂布，于37 °C生化培養(yǎng)箱中倒 置培養(yǎng)48小時(shí)(每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行)記錄平板上的菌落個(gè)數(shù)。結(jié)果見表3。說(shuō)明該菌具有 很強(qiáng)的耐酸能力。
[0054] 表3耐酸能力檢測(cè)[(土s) X 107cfu/ml]
[0056] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763的黏附能力測(cè)定
[0057] 培養(yǎng)CGMCC NO. 11763(MRS液體培養(yǎng)基）、大腸桿菌DH5a(LB液體培養(yǎng)基)24h得發(fā)酵 液，分別置于3000r/min、4°C下離心10min，收集菌泥，分別用pH = 7.0的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液 (PBS)洗滌菌泥2次（即在菌落中加入PBS，震蕩混合均勻后，置于3000r/min、4°C下離心 10min，收集菌體）。自凝集率（％ :用無(wú)菌的roS將菌泥CGMCC NO. 11763制成在波長(zhǎng)600nm處 的吸光值為0.4 ±0.1 (A 0)的懸浮菌液及菌懸液，靜置24h后測(cè)定吸光值A(chǔ) 24,自凝集率 (%)公式為(A 0-A 24)/A 0。；他凝集率（％):將CGMCC如.11763和大腸桿菌0耶€[的懸菌 液調(diào)節(jié)成在波長(zhǎng)600nm處的吸光值為0.6±0.1 (A 0)的混合懸浮菌液。靜置24H后測(cè)定吸光 值A(chǔ) 24,他凝集率（％)公式為(A 0 -A 24)/A 0。測(cè)定結(jié)果見表5,可知CGMCC N0.11763的自 凝集率為95.71 %，有很強(qiáng)的黏附能力。
[0058]表4黏附能力表
[0060] 植物乳桿菌CGMCC N0.11763的菌株生理特性
[0061 ] 所述植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中國(guó)微 生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)，保藏號(hào)為CGMCC N0.11763,保藏地 址為：中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。 [0062]該菌株特點(diǎn)如下:在顯微鏡下觀察，該菌株為短桿狀，革蘭氏染色呈陽(yáng)性，無(wú)鞭毛， 不產(chǎn)芽孢;在固體培養(yǎng)基上，該菌菌落為白色，表面光滑，致密，形態(tài)為圓形，邊緣較整齊。 [0063]理化特征為:過(guò)氧化氫酶(-)，明膠液化(-)，吲哚實(shí)驗(yàn)( + )，運(yùn)動(dòng)性(-)，發(fā)酵產(chǎn)氣 (_)，亞硝酸鹽還原(_)，發(fā)酵產(chǎn)氣(_)，產(chǎn)硫化氫氣體(_)，pH4.0MRS培養(yǎng)基中生長(zhǎng)(+ )。經(jīng)過(guò) 生理生化鑒定為為植物乳桿菌（Lactobacillus plan tarum)，命名為植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)XH〇
[0064]菌株能夠在57°C下生長(zhǎng)良好，葡萄糖耐受能力為275g/L。
[0065]本發(fā)明植物乳桿菌由采集人李建樹，從新疆維吾爾族老鄉(xiāng)家中酸奶中分離得到， 采集時(shí)間2015年6月2日。
[0066]本發(fā)明植物乳桿菌CGMCC N0.11763經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)能夠在pH為1.50的條件下存活，在 1 %膽鹽培養(yǎng)4小時(shí)后仍處于存活狀態(tài);植物乳桿菌CGMCC N0.11763降解亞硝酸鹽速度快， 分解能力達(dá)到10.9mg/h/kg，該菌種在生產(chǎn)泡菜時(shí)，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中亞硝酸鹽濃度在4.8mg/ kg以下；CGMCCN0.11763在發(fā)酵60h小時(shí)后，對(duì)膽固醇降解率可達(dá)到64.76 %。CGMCC NO. 11763黏附能力測(cè)定的自凝集率為95.71 %，菌株能夠在57°C下生長(zhǎng)良好，葡萄糖耐受能 力為 275g/L。
[0067] 有益效果：
[0068]本發(fā)明促消化葡萄復(fù)合粉將具有天然色澤、風(fēng)味和口感的葡萄粉與植物乳桿菌 粉、小麥芽粉、改性膳食纖維、酵素粉、木瓜粉等功能性產(chǎn)品科學(xué)復(fù)配，不僅有效提高了葡萄 復(fù)合粉的營(yíng)養(yǎng)性、食品安全性和保健功能，而且顯著提高了葡萄復(fù)合粉的益生性和質(zhì)量穩(wěn) 定性，與現(xiàn)有葡萄復(fù)合粉相比：其組分簡(jiǎn)單，色澤、風(fēng)味和口感天然，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，保健功能 強(qiáng)，生物活性物質(zhì)含量高，益生菌活菌數(shù)量高、益生性強(qiáng)，益生菌功能性代謝物種類全、含量 高，食品安全性高，保質(zhì)期長(zhǎng)。具體試驗(yàn)效果見實(shí)施例七-十二，具體組分效果如下：
[0069] 1.本發(fā)明的植物乳桿菌CGMCC N0.11763經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)能夠在pH為1.50的條件下存 活，在1 %膽鹽培養(yǎng)4小時(shí)后仍處于存活狀態(tài);植物乳桿菌CGMCC N0.11763降解亞硝酸鹽速 度快，分解能力達(dá)到10.9mg/h/kg，該菌種在生產(chǎn)泡菜時(shí)，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中亞硝酸鹽濃度在 4.8mg/kg以下;CGMCC NO. 11763在發(fā)酵60h小時(shí)后，對(duì)膽固醇降解率可達(dá)到64.76% 〇CGMCC NO ? 11763黏附能力測(cè)定的自凝集率為95 ? 71 %。
[0070] 2.本發(fā)明在制備植物乳桿菌粉劑時(shí)采用的冷凍保護(hù)劑將含有抗凍蛋白較高的冬 黑麥、沙冬青和鯊魚皮膠原蛋白科學(xué)復(fù)配，經(jīng)高壓脈沖電場(chǎng)提取、超聲波輔助微波提取和生 物酶解而制得，全程低溫提取，抗凍蛋白提取率高，損失少，得到的保護(hù)劑抗凍多肽含量高、 種類全、功能性強(qiáng)、抗凍效果好，提高了植物乳桿菌粉劑中的活菌含量。
[0071] 3.本發(fā)明制備的葡萄粉采用超聲清洗對(duì)葡萄進(jìn)行殺蟲滅卵、殺滅微生物、去除農(nóng) 藥殘留和重金屬離子等，大大提高了葡萄粉的食品安全性;采用微波高溫瞬時(shí)干燥，在使得 葡萄切片膨化干燥的同時(shí)主要是滅酶、固色，最大限度地保留了葡萄的天然色澤，經(jīng)微波固 色后的葡萄天然色澤在后續(xù)的加工過(guò)程中非常穩(wěn)定，不會(huì)變色、褪色，色澤非常鮮艷;在含 有絲膠肽的水溶液中浸泡復(fù)水，可最大限度地減少經(jīng)冷凍而造成的葡萄活性物質(zhì)的損失， 提高了葡萄有效成分的提取率，同時(shí)也為葡萄復(fù)合粉在貯藏過(guò)程抗冷凍性奠定了基礎(chǔ);將 高壓脈沖電場(chǎng)、微波、超聲、生物酶解等低溫提取技術(shù)有機(jī)結(jié)合，可最大限度地保留葡萄的 生物活性物質(zhì)和香味成分。
[0072] 4.本發(fā)明制備的改性膳食纖維是將膳食纖維經(jīng)物理、化學(xué)或生物的方法處理而得 到的，可溶性纖維素含量高、生物活性強(qiáng)、對(duì)腸道益生菌群有重要的、積極作用的纖維素，與 普通膳食纖維相比，其生物活性作用更強(qiáng)大：1)可溶性纖維素含量高，更容易被益生菌利 用，可提高益生菌在腸道的生長(zhǎng)及繁殖能力，增加益生菌菌群的種類和數(shù)量，降低大腸pH 值，改善腸道微生態(tài)環(huán)境;2)強(qiáng)大的吸附能力，經(jīng)改性后，纖維素的比表面積增大，網(wǎng)格結(jié)構(gòu) 豐富，吸附力增強(qiáng)，螯合、吸附膽固醇和膽汁酸類的有機(jī)分子能力更強(qiáng)、抑制人體對(duì)它們的 吸收;3)離子交換能力增強(qiáng)，對(duì)金屬元素，特別是重金屬元素吸附效果更強(qiáng);4)持水性、膨脹 性、增稠性更強(qiáng)且不受酸、堿、鹽的影響，5)調(diào)節(jié)和維持腸道菌群的定植時(shí)間，增強(qiáng)腸道的消 化和吸收能力，提高人體免疫力，最終顯著提高葡萄復(fù)合粉有效成分的消化和吸收率;6)促 進(jìn)胃腸蠕動(dòng)，減緩并消除胃脹、腹脹等不良反應(yīng);7)包埋作用強(qiáng)，可有效防止外界環(huán)境(氧 氣、溫度、光照、濕度等）因素對(duì)產(chǎn)品品質(zhì)的影響，穩(wěn)定了產(chǎn)品的生物活性，延長(zhǎng)了產(chǎn)品的保 質(zhì)期。
[0073] 5.本發(fā)明小麥芽粉的制備方法對(duì)浸泡過(guò)程的小麥進(jìn)行超聲清洗、微波瞬時(shí)處理和 高壓脈沖電場(chǎng)處理有效防止了浸泡液污染雜菌，避免了產(chǎn)生臭味滲透到小麥芽粉產(chǎn)品中， 同時(shí)，可有效增強(qiáng)谷物種皮細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的相對(duì)透性、提高全谷物種子的吸水率，促進(jìn)種 子提前萌發(fā)，提高超氧陰離子自由基的產(chǎn)生速率及三磷酸腺苷(ATP)含量，促進(jìn)發(fā)芽前期小 麥種子多種生物酶的激活和釋放、胚乳溶解及功能性營(yíng)養(yǎng)成分、生物活性成分、抗氧化成分 的合成，促進(jìn)了種子的呼吸代謝作用，加快了營(yíng)養(yǎng)及功能性物質(zhì)、生物活性成分、抗氧化成 分的富集進(jìn)程，縮短了富集時(shí)間，提高了營(yíng)養(yǎng)及功能性物質(zhì)、生物活性成分、抗氧化成分的 含量，與生物酶解有機(jī)結(jié)合，可進(jìn)一步降解種皮纖維素及半纖維素結(jié)構(gòu)，增加種皮通透性， 激活各種生物活性物質(zhì)（內(nèi)源酶等)活力最強(qiáng)，富集量更大，可溶性纖維素含量隨之增大，為 葡萄復(fù)合粉中的植物乳桿菌提供了營(yíng)養(yǎng)因子，效果更佳顯著;將超聲、微波、高壓脈沖電場(chǎng) 技術(shù)和生物酶解有機(jī)結(jié)合，縮短了浸泡時(shí)間，提高了發(fā)芽率和發(fā)芽均一度;可最大限度保持 小麥芽粉熱敏性物質(zhì)含量，尤其是抗氧化物質(zhì)(谷胱甘肽、六磷酸肌醇、維生素C、多酚等）， 最大限度地保證小麥芽粉的天然色澤、口感和風(fēng)味，同時(shí)還可起到殺菌作用;特別是經(jīng)微波 瞬時(shí)適度殺胚后，在不影響小麥芽種子的生物活性的情況下，隨著水分的吸收，的小麥芽胚 被抑制但不影響各項(xiàng)酶及生物活性物質(zhì)的增長(zhǎng)和胚乳的溶解，芽生長(zhǎng)很短，呼吸作用弱，發(fā) 芽損失低，提高了小麥芽粉的產(chǎn)量和質(zhì)量，顯著提高了小麥芽粉產(chǎn)品中功能性、營(yíng)養(yǎng)性、生 物活性物質(zhì)的含量，提高了小麥芽粉的保健功能（提高人體免疫力、去除人體內(nèi)氧自由基、 降血脂、延緩衰老）、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和食品安全性。
[0074] 6.本發(fā)明制備的酵素粉不僅含有醋酸桿菌、雙歧桿菌、酵母菌和鼠李糖乳桿菌等 純種益生菌，而且含有更多、更有益的在泡菜發(fā)酵過(guò)程中參與和產(chǎn)生的多種野生微生物菌 株，其生物活性和益生性更加全面和強(qiáng)大，與本發(fā)明制備的植物乳桿菌粉科學(xué)復(fù)配，其效果 更加顯著。
[0075] 7.本發(fā)明葡萄復(fù)合粉的制備方法工藝簡(jiǎn)單，操作方便，對(duì)設(shè)備要求低，可工業(yè)化和 規(guī)模化生產(chǎn)，將改性膳食纖維最后混合，發(fā)揮了其強(qiáng)大的包埋作用，使得產(chǎn)品的性狀更穩(wěn) 定、保質(zhì)期更長(zhǎng)。
[0076]需要說(shuō)明的是本發(fā)明促消化葡萄復(fù)合粉的技術(shù)效果是各組分技術(shù)特征和方法特 征相互協(xié)同、相互作用的結(jié)果，并非簡(jiǎn)單的技術(shù)特征(組分功能）的疊加，各組分技術(shù)特征的 有機(jī)結(jié)合和協(xié)同產(chǎn)生的效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)各單一技術(shù)特征功能和效果的疊加，具有較好的先進(jìn) 性和實(shí)用性。
【具體實(shí)施方式】
[0077]下面通過(guò)具體的實(shí)施方案敘述本發(fā)明。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段 均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實(shí)施方案應(yīng)理解為說(shuō)明性的，而非限制本發(fā)明的 范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本 發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對(duì)這些實(shí)施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也 屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0078] 實(shí)施例一：
[0079] 原料制備
[0080] 1、小麥芽粉的制備
[0081] 其制備方法包括如下步驟：
[0082] 將小麥放在裝有0.02%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于功率300W、頻率25KHz 室溫超聲清洗4min，取出、瀝干，于頻率2450MHz、功率3000W、溫度40 °C、料層厚度3cm微波干 燥13s，然后置溫度為35 °C、pH值為7的浸泡液中浸泡5h，浸泡液含有質(zhì)量百分比濃度為 0.20%的復(fù)合酶，每隔18111；[11通風(fēng)一次，通風(fēng)壓力0.14MPa，同時(shí)于電場(chǎng)強(qiáng)度13kV/cm，脈沖時(shí) 間200沾，脈沖頻率70Hz條件進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理，直至小麥水分含量為43%;浸泡后的 小麥瀝干，在發(fā)芽室內(nèi)進(jìn)行暗發(fā)芽，暗發(fā)芽溫度保持22°C，暗發(fā)芽時(shí)間為22h，經(jīng)發(fā)芽后的小 麥干燥至水分含量為6.5 %，低溫粉碎、過(guò)70目篩即得小麥芽粉；
[0083]上述復(fù)合酶為纖維素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按質(zhì)量比3:3:2均勻混合。
[0084] 2、改性膳食纖維的制備
[0085]其制備方法包括以下步驟：
[0086]將菊粉、小麥纖維、燕麥纖維按質(zhì)量比6: 3: 2均勾混合，加入其質(zhì)量5倍的水，室溫 200W、38KHz條件超聲提取13min，然后在電場(chǎng)強(qiáng)度30kV/cm，脈沖時(shí)間400ys，脈沖頻率300Hz 條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理13min;用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5，加入混合物質(zhì)量0.2%的生物 酶，于50°C酶解34min;酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥至水分含量為6.5%即得改性 膳食纖維；
[0087]上述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶按質(zhì)量比2:2:1.5:1.5均勻混合。 [0088] 3、植物乳桿菌粉的制備
[0089]植物乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC N0.11763為出發(fā)菌株按常規(guī)方法制備的，其 活菌含量為:8X1012cfu/g;其中冷凍干燥工藝采用的冷凍保護(hù)劑以含有抗凍蛋白的動(dòng)物或 植物為原料，經(jīng)高壓脈沖電場(chǎng)提取、超聲波輔助微波提取和復(fù)配酶酶解而制得的，可有效提 高植物乳桿菌粉在冷凍干燥過(guò)程活菌存活率；
[0090] 上述保護(hù)劑的制備方法包括如下步驟：
[0091] 將冬黑麥、沙冬青、鯊魚皮膠原蛋白分別清洗、瀝干，按質(zhì)量比9:4:3均勻混合，加 入混合物料質(zhì)量〇. 5倍的pH值為4.1的乳酸潤(rùn)濕5h，于-20 °C冷凍1.5h后立即進(jìn)行粉碎，冷凍 料層厚度4cm，粉碎物粒徑2mm，接著加入粉碎物質(zhì)量15倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5，于室 溫下在電場(chǎng)強(qiáng)度30kV/cm，脈沖時(shí)間400iis，脈沖頻率250Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理 25min;然后于室溫在功率225W條件下進(jìn)行微波輻照提取18min，其微波輻照10s，間隔20s， 同時(shí)在功率250W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì)量1.5 %的復(fù)配酶， 于50°C酶解40min;酶解液過(guò)濾、濾液濃縮、低溫粉碎至粒徑為0.2mm即得保護(hù)劑；
[0092] 上述復(fù)配酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比3:2:2:1.5:1.5 均勻混合；
[0093] 4、酵素粉的制備
[0094]其制備方法如下：
[0095] 采用泡菜發(fā)酵生產(chǎn)末期排放的發(fā)酵液為原料，過(guò)濾除去發(fā)酵液中的菜葉等大粒物 質(zhì)得到發(fā)酵液體，發(fā)酵液體采用冷凍干燥等干燥方法制備獲得酵素粉。冷凍干燥的條件 是：-35度預(yù)凍6小時(shí)；然后凍干直到含水量為3 %。泡菜生產(chǎn)方法參照中國(guó)專利 201110421967.3 制備。
[0096] 以下實(shí)施例二至六所使用的小麥芽粉、改性膳食纖維、植物乳桿菌粉、酵素粉均由 實(shí)施例一制備。
[0097] 實(shí)施例二：
[0098] -種促消化葡萄復(fù)合粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0099] 葡萄粉40份，小麥芽粉25份，改性膳食纖維12份，木瓜粉9份，植物乳桿菌粉9份，酵 素粉14份，檸檬粉4份；
[0100] 其中葡萄粉的制備方法，包括以下步驟：
[0101]將葡萄放入盛有0.2%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中，于室溫下300W、30KHz清 洗8min，瀝干，每個(gè)葡萄果任意切分成四份，單層平鋪在微波干燥機(jī)中于功率4kW、溫度125 °C、干燥4s，然后浸泡在質(zhì)量百分比濃度為10%的絲膠肽溶液中9min，取出，于-20°C冷凍 40min后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑0.4mm,接著加入粉碎物質(zhì)量2倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值 為4.5，于室溫下在電場(chǎng)強(qiáng)度301^/〇11，脈沖時(shí)間400此，脈沖頻率250他條件下進(jìn)行高壓脈沖 電場(chǎng)處理25min;然后于室溫在功率225W條件下進(jìn)行微波輻照提取18min，同時(shí)在功率250W， 頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提??；加入提取液質(zhì)量2.0%的混合酶，于45°C酶解 40min，酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥至水分含量為6.5 %即得葡萄粉；
[0102] 上述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比3:2:2:1.5均勻混合。
[0103] 促消化葡萄復(fù)合粉的制備方法，包括如下步驟：
[0104]按照配方比例，稱取各原料，依次將酵素粉、植物乳桿菌粉、葡萄粉、檸檬粉、小麥 芽粉、木瓜粉加入V型混合罐均勻混合30min，攪拌轉(zhuǎn)速30r/min，然后加入改性膳食纖維均 勻混15min，攪拌轉(zhuǎn)速50r/min，無(wú)菌灌裝、密封、包裝即得促消化葡萄復(fù)合粉；
[0105]上述無(wú)菌灌裝采用自動(dòng)粉狀灌裝機(jī)灌裝，同時(shí)采用6()C〇輻照滅菌，輻照劑量4kGy; [0106]上述葡萄復(fù)合粉采用鋁塑復(fù)合袋灌裝；所述鋁塑復(fù)合袋灌裝前采用紫外線消毒 30min〇
[0107]經(jīng)上述方法制備的葡萄復(fù)合粉植物乳桿菌活菌含量為9.49 X 10ncfU/g。
[0108] 實(shí)施例三：
[0109] -種促消化葡萄復(fù)合粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0110] 葡萄粉35份，小麥芽粉23份，改性膳食纖維11份，木瓜粉8份，植物乳桿菌粉8份，酵 素粉13份，檸檬粉3份；
[0111] 其中葡萄粉的制備方法，包括以下步驟：
[0112] 將葡萄放入盛有0.1 %碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中，于室溫下200W、35KHz清 洗5min，瀝干，每個(gè)葡萄果任意切分成四份，單層平鋪在微波干燥機(jī)中于功率3kW、溫度120 °C、干燥3s，然后浸泡在質(zhì)量百分比濃度為8%的絲膠肽溶液中8min，取出，于-18°C冷凍 30min后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑0.3mm，接著加入粉碎物質(zhì)量1倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值 為3.5，于室溫下在電場(chǎng)強(qiáng)度25kV/cm，脈沖時(shí)間300此，脈沖頻率200Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖 電場(chǎng)處理20min;然后于室溫在功率150W條件下進(jìn)行微波輻照提取15min，同時(shí)在功率200W， 頻率30KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提??；加入提取液質(zhì)量1.5%的混合酶，于40°C酶解 30min，酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥至水分含量為5%即得葡萄粉；
[0113] 上述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比均勻混合。
[0114] 促消化葡萄復(fù)合粉的制備方法，包括如下步驟：
[0115] 按照配方比例，稱取各原料，依次將酵素粉、植物乳桿菌粉、葡萄粉、檸檬粉、小麥 芽粉、木瓜粉加入V型混合罐均勻混合25min，攪拌轉(zhuǎn)速20r/min，然后加入改性膳食纖維均 勻混12min，攪拌轉(zhuǎn)速40r/min，無(wú)菌灌裝、密封、包裝即得促消化葡萄復(fù)合粉；
[0116] 上述無(wú)菌灌裝采用自動(dòng)粉狀灌裝機(jī)灌裝，同時(shí)采用6()C〇輻照滅菌，輻照劑量4kGy;
[0117] 上述葡萄復(fù)合粉采用鋁塑復(fù)合袋灌裝；所述鋁塑復(fù)合袋灌裝前采用紫外線消毒 20min〇
[0118] 經(jīng)上述方法制備的葡萄復(fù)合粉植物乳桿菌活菌含量為8.13X 10ncfU/g。
[0119]實(shí)施例四：
[0120] -種促消化葡萄復(fù)合粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0121]葡萄粉45份，小麥芽粉27份，改性膳食纖維13份，木瓜粉10份，植物乳桿菌粉10份， 酵素粉15份，檸檬粉5份；
[0122] 其中葡萄粉的制備方法，包括以下步驟：
[0123] 將葡萄放入盛有0.3%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中，于室溫下400W、45KHz清 洗lOmin，瀝干，每個(gè)葡萄果任意切分成四份，單層平鋪在微波干燥機(jī)中于功率5kW、溫度130 °C、干燥5s，然后浸泡在質(zhì)量百分比濃度為12%的絲膠肽溶液中l(wèi)Omin，取出，于-22°C冷凍 50min后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑0.5mm,接著加入粉碎物質(zhì)量3倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值 為5.5，于室溫下在電場(chǎng)強(qiáng)度35kV/cm，脈沖時(shí)間500ys，脈沖頻率300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖 電場(chǎng)處理30min;然后于室溫在功率300W條件下進(jìn)行微波輻照提取20min，同時(shí)在功率300W， 頻率40KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提??；加入提取液質(zhì)量2.5%的混合酶，于50°C酶解 50min，酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥至水分含量為8 %即得葡萄粉；
[0124] 上述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比4:3:3:2均勻混合。
[0125] 促消化葡萄復(fù)合粉的制備方法，包括如下步驟：
[0126] 按照配方比例，稱取各原料，依次將酵素粉、植物乳桿菌粉、葡萄粉、檸檬粉、小麥 芽粉、木瓜粉加入V型混合罐均勻混合35min，攪拌轉(zhuǎn)速40r/min，然后加入改性膳食纖維均 勻混18min，攪拌轉(zhuǎn)速60r/min，無(wú)菌灌裝、密封、包裝即得促消化葡萄復(fù)合粉；
[0127] 上述無(wú)菌灌裝采用自動(dòng)粉狀灌裝機(jī)灌裝，同時(shí)采用6()C〇輻照滅菌，輻照劑量4kGy;
[0128] 上述葡萄復(fù)合粉采用鋁塑復(fù)合袋灌裝；所述鋁塑復(fù)合袋灌裝前采用紫外線消毒 40min〇
[0129] 經(jīng)上述方法制備的葡萄復(fù)合粉植物乳桿菌活菌含量為6.84 X 10ncfU/g。
[0130] 實(shí)施例五：
[0131] -種促消化葡萄復(fù)合粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0132] 葡萄粉30份，小麥芽粉20份，改性膳食纖維8份，木瓜粉6份，植物乳桿菌粉6份，酵 素粉11份，檸檬粉2份；
[0133] 其中葡萄粉的制備方法，包括以下步驟：
[0134] 將葡萄放入盛有0.1%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中，于室溫下400W、35KHz清 洗lOmin，瀝干，每個(gè)葡萄果任意切分成四份，單層平鋪在微波干燥機(jī)中于功率3kW、溫度130 °C、干燥3s，然后浸泡在質(zhì)量百分比濃度為12%的絲膠肽溶液中8min，取出，于-22°C冷凍 30min后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑0.5mm，接著加入粉碎物質(zhì)量1倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值 為5.5，于室溫下在電場(chǎng)強(qiáng)度25kV/cm，脈沖時(shí)間500ys，脈沖頻率200Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖 電場(chǎng)處理30min;然后于室溫在功率150W條件下進(jìn)行微波輻照提取20min，同時(shí)在功率200W， 頻率40KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提??；加入提取液質(zhì)量1.5%的混合酶，于50°C酶解 30min，酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥至水分含量為8 %即得葡萄粉；
[0135] 上述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比2:3:1:2均勻混合。
[0136] 促消化葡萄復(fù)合粉的制備方法，包括如下步驟：
[0137] 按照配方比例，稱取各原料，依次將酵素粉、植物乳桿菌粉、葡萄粉、檸檬粉、小麥 芽粉、木瓜粉加入V型混合罐均勻混合28min，攪拌轉(zhuǎn)速25r/min，然后加入改性膳食纖維均 勻混13min，攪拌轉(zhuǎn)速45r/min，無(wú)菌灌裝、密封、包裝即得促消化葡萄復(fù)合粉；
[0138] 上述無(wú)菌灌裝采用自動(dòng)粉狀灌裝機(jī)灌裝，同時(shí)采用6()C〇輻照滅菌，輻照劑量4kGy;
[0139] 上述葡萄復(fù)合粉采用鋁塑復(fù)合袋灌裝；所述鋁塑復(fù)合袋灌裝前采用臭氧消毒 20min〇
[0140]經(jīng)上述方法制備的葡萄復(fù)合粉植物乳桿菌活菌含量為7.26 X 10ncfU/g。
[0141] 實(shí)施例六：
[0142] -種促消化葡萄復(fù)合粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0143] 葡萄粉50份，小麥芽粉30份，改性膳食纖維15份，木瓜粉12份，植物乳桿菌粉12份， 酵素粉17份，檸檬粉6份；
[0144] 其中葡萄粉的制備方法，包括以下步驟：
[0145] 將葡萄放入盛有0.3%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中，于室溫下200W、45KHz清 洗5min，瀝干，每個(gè)葡萄果任意切分成四份，單層平鋪在微波干燥機(jī)中于功率5kW、溫度120 °C、干燥5s，然后浸泡在質(zhì)量百分比濃度為8 %的絲膠肽溶液中l(wèi)Omin，取出，于-18°C冷凍 50min后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑0.3mm,接著加入粉碎物質(zhì)量3倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值 為3.5，于室溫下在電場(chǎng)強(qiáng)度35kV/cm，脈沖時(shí)間300此，脈沖頻率300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖 電場(chǎng)處理20min;然后于室溫在功率300W條件下進(jìn)行微波輻照提取15min，同時(shí)在功率300W， 頻率30KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提?。患尤胩崛∫嘿|(zhì)量2.5%的混合酶，于40°C酶解 50min，酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥至水分含量為5%即得葡萄粉；
[0146] 上述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比4:1:3:1均勻混合。
[0147] 促消化葡萄復(fù)合粉的制備方法，包括如下步驟：
[0148] 按照配方比例，稱取各原料，依次將酵素粉、植物乳桿菌粉、葡萄粉、檸檬粉、小麥 芽粉、木瓜粉加入V型混合罐均勻混合33min，攪拌轉(zhuǎn)速35r/min，然后加入改性膳食纖維均 勻混16min，攪拌轉(zhuǎn)速55r/min，無(wú)菌灌裝、密封、包裝即得促消化葡萄復(fù)合粉；
[0149] 上述無(wú)菌灌裝采用自動(dòng)粉狀灌裝機(jī)灌裝，同時(shí)采用6()C〇輻照滅菌，輻照劑量4kGy;
[0150] 上述葡萄復(fù)合粉采用鋁塑復(fù)合袋灌裝；所述鋁塑復(fù)合袋灌裝前采用臭氧消毒 40min〇
[0151]經(jīng)上述方法制備的葡萄復(fù)合粉植物乳桿菌活菌含量為6.99 X10ncfU/g。
[0152]實(shí)驗(yàn)例七食用促消化葡萄復(fù)合粉后總膽固醇的變化
[0153] 選總膽固醇180mg/dl-250mg/dl的成年人48名，男女各半，隨機(jī)分成三組；第一組 每天晚餐飲用150毫升礦泉水;第二組每天晚餐沖飲普通市售葡萄復(fù)合粉150g，第三組每天 晚餐沖飲本發(fā)明實(shí)施例2的葡萄復(fù)合粉150g，期間每天食用同樣的食物，食物包括肉、蛋、蔬 菜和水果。分別在實(shí)驗(yàn)開始的前一天和第20、40、60天采集試驗(yàn)者的血液，測(cè)定血液中的總 膽固醇含量，結(jié)果如表1:
[0154]表1:血液中總膽固醇含量檢測(cè)結(jié)果
[0156] 由上表可知沖飲本發(fā)明實(shí)施例2的葡萄復(fù)合粉后，成年人血液中的總膽固醇的含 量發(fā)生明顯變化。與普通市售葡萄復(fù)合粉相比，本發(fā)明葡萄復(fù)合粉對(duì)成年人血液中的總膽 固醇的含量明顯的降低，而礦泉水組成年人血液中的總膽固醇的含量明顯的增加，市售葡 萄復(fù)合粉雖然有所降低，但與本發(fā)明產(chǎn)品相比，效果不顯著，由此可知，本發(fā)明采用具有降 低膽固醇特性的特定菌株制備的葡萄復(fù)合粉具有很好的降低膽固醇的保健效果。
[0157] 需要說(shuō)明的是:本發(fā)明實(shí)施例3-6所制備的促消化葡萄復(fù)合粉同樣具有上述技術(shù) 效果，各實(shí)施例之間差異性不顯著。
[0158] 實(shí)施例八本發(fā)明促消化葡萄復(fù)合粉保質(zhì)期內(nèi)植物乳桿菌活菌含量穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0159] 取本發(fā)明實(shí)施例2制備的葡萄復(fù)合粉于室溫22_25°C、通風(fēng)條件下分別儲(chǔ)藏3個(gè)月、 6個(gè)月、12個(gè)月、24個(gè)月、36個(gè)月并測(cè)定植物乳桿菌活菌含量，結(jié)果如表2:
[0160] 表2:保質(zhì)期內(nèi)植物乳桿菌活菌含量檢測(cè)結(jié)果
[0162] 以上結(jié)果表明：本發(fā)明葡萄復(fù)合粉的儲(chǔ)存穩(wěn)定性較好，抗環(huán)境(溫度、適度、氧氣、 光照、水分等)影響因素能力大，保質(zhì)期植物乳桿菌活菌含量損失率最大(36個(gè)月）為15%， 比現(xiàn)有的同類產(chǎn)品活菌含量高、損失率低、保質(zhì)期長(zhǎng)，同時(shí)反映出葡萄復(fù)合粉的其它生物活 性成分具有同樣的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。
[0163] 需要說(shuō)明的是:本發(fā)明實(shí)施例3-6制備的促消化葡萄復(fù)合粉同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效 果，各實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
[0164] 實(shí)施例九本發(fā)明促消化葡萄復(fù)合粉的感官品評(píng)試驗(yàn)
[0165] 邀請(qǐng)24名人員對(duì)本發(fā)明實(shí)施例2制備的葡萄復(fù)合粉與市售兩種同類相同生產(chǎn)日期 的葡萄復(fù)合粉進(jìn)行品評(píng)，感官打分，其中專業(yè)和非專業(yè)人員各12名，專業(yè)人員青年、中年、老 年各4名，男女各半，非專業(yè)人員少年、青年、中年、老年各3名，男女各半;打分包括外觀(20 分）、質(zhì)地(25分）、風(fēng)味(30分）、口感(25分）四個(gè)方面，打分人員獨(dú)立進(jìn)行，互不影響，以保證 品評(píng)結(jié)果準(zhǔn)確。對(duì)品評(píng)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，均分值取近似值，保留整數(shù)，具體見表3:
[0166]表3:感官品評(píng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果
[0169] 注：同一行內(nèi)標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，標(biāo)不同大寫字母表示差異 極顯著(P<〇.01)，標(biāo)有相同字母表示差異不顯著(P>〇.05)。
[0170]以上結(jié)果表明，本發(fā)明制備的葡萄復(fù)合粉從外觀、質(zhì)地、風(fēng)味和口感任何一方面都 要明顯優(yōu)于市售葡萄復(fù)合粉，特別是外觀、風(fēng)味和口感極好，同時(shí)也適合不同年齡段、不同 消費(fèi)層次的消費(fèi)者食用。
[0171] 需要說(shuō)明的是:本發(fā)明實(shí)施例3-6制備的促消化葡萄復(fù)合粉同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效 果，各實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
[0172] 實(shí)施例十本發(fā)明促消化葡萄復(fù)合粉益生性試驗(yàn)
[0173] 將本發(fā)明實(shí)施例2制備的葡萄復(fù)合粉，用無(wú)菌水制備成活菌數(shù)為2X101()CFU/mL的 植物乳桿菌溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0174] 1、取保存好的10mL植物乳桿菌溶液注入到試管1中，采用十倍逐級(jí)稀釋至1(T8,取 lmL稀釋液在平板上，將滅菌后冷卻至45°C的MRS瓊脂培養(yǎng)基傾注在平板(滅菌)上，迅速搖 勻。再將裝有10mL植物乳桿菌溶液的試管2置于80-90°C水浴鍋中加熱15-25min，取加熱后 的植物乳桿菌溶液進(jìn)行十倍逐級(jí)稀釋至1(T 8,取lmL稀釋液在平板上，將滅菌后冷卻至45°C 的MRS瓊脂培養(yǎng)基傾注在平板(滅菌）上并迅速搖勻。最后將加熱前和加熱后的平板均在35 °C條件下培養(yǎng)24h，計(jì)算加熱前后的數(shù)量。
[0175] 結(jié)果表明，活菌存活率達(dá)到了88%以上。
[0176] 2、模擬胃液及腸液的耐受試驗(yàn)：取100g/L的鹽酸16.4mL加蒸餾水稀釋，使pH值分 別為1.5、2.5和3.5，取10〇!^稀鹽酸溶液，分別加入4胃蛋白酶，使其充分溶解，得模擬胃 液，微孔濾膜除菌(0 ? 22wn)備用。取磷酸二氫鉀6 ? 8g，加水500mL使溶解，用0 ? ImoL/L氫氧化 鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8;另取胰蛋白酶10g，加水100mL使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至 1000ml，得模擬腸液，微孔濾膜除菌(0.22m)備用。取lmL保存好的植物乳桿菌溶液加入到 9mL的模擬胃液中（即十倍逐級(jí)稀釋），并迅速在振蕩器上充分混勻，然后置于30-45°C靜置 培養(yǎng)2-4h。分別在111、211、311、411的時(shí)候取出培養(yǎng)液并立即計(jì)數(shù)殘存活菌數(shù)，與原活菌數(shù)進(jìn)行 比較，結(jié)果表明，活菌存活率為98 %。然后取在人工胃液中消化不同時(shí)間的培養(yǎng)液各lmL，分 別接種于9mL pH值為6.8的人工腸液中，置于30-45°(：靜置培養(yǎng)2-411，并分別在0、3、6、2411取 樣，測(cè)定其活菌數(shù)，與原活菌數(shù)進(jìn)行比較，結(jié)果表明活菌存活率為99%。
[0177] 3、模擬膽鹽的耐受試驗(yàn):用胰液素制成lg/L的溶液，并在溶液中加入0.8%的豬膽 鹽，用10 %的NaOH調(diào)整pH為8.0，然后用0.45mi微濾膜過(guò)濾并除菌。將0.5mL保存好的植物乳 桿菌溶液接種到4.5mL模擬膽鹽中，培養(yǎng)24h后得到培養(yǎng)液，計(jì)數(shù)殘存的活菌數(shù)。將培養(yǎng)液在 滅菌生理鹽水中十倍逐級(jí)稀釋至1(T 8,并用MRS傾注，然后置于35°C靜置培養(yǎng)24h。結(jié)果表明 活菌存活率為99 %。
[0178] 以上試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明葡萄復(fù)合粉中的植物乳桿菌益生性(耐熱性、耐pH性、 耐膽鹽)較強(qiáng)，非常適合人體胃腸環(huán)境，在模擬胃腸環(huán)境中存活率大，可有效改善胃腸功能。 [0179]需要說(shuō)明的是:本發(fā)明實(shí)施例3-6制備的促消化葡萄復(fù)合粉同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效 果，各實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
[0180]實(shí)施例十一本發(fā)明促消化葡萄復(fù)合粉小鼠腸道性能試驗(yàn)
[0181] 將本發(fā)明實(shí)施例2制備的葡萄復(fù)合粉，用無(wú)菌水制備成活菌數(shù)為2X101()CFU/mL的 植物乳桿菌溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0182] 選取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18_20g，常規(guī)詞養(yǎng)。從中隨機(jī)挑選40只，每天 早晨9:00灌胃鹽酸林可霉素0.2mL(20mg)/只，其它作為對(duì)照組，每天同一時(shí)間灌胃等量滅 菌生理鹽水，連續(xù)一周，制備腸道菌群失調(diào)的小鼠模型。模型組小鼠飲食下降，未出現(xiàn)死亡 和明顯的腹瀉現(xiàn)象，排軟糞，外形正常含水分較多，墊料潮濕。將40只腸道菌群失調(diào)小鼠，隨 機(jī)分為2組，一組20只作為治療組，每天灌胃保存好的植物乳桿菌溶液0.5ml (2 X lOhcfu/ ml)/只，另20只作為自然恢復(fù)組，每天同一時(shí)間灌胃等量滅菌生理鹽水，連續(xù)兩周。整個(gè)試 驗(yàn)期21天，每天觀察小白鼠的生長(zhǎng)和排便情況，于第8、21天對(duì)葡萄復(fù)合粉治療組和自然恢 復(fù)組的小鼠進(jìn)行稱重，計(jì)算各組體重平均增長(zhǎng)率，結(jié)果如表4;每5天測(cè)各組小鼠糞便大腸桿 菌數(shù)量，計(jì)算平均數(shù)，結(jié)果如表5。取小鼠糞便約O.lg，于無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)加入3粒玻璃珠（以 〇. lg糞樣加〇. 5mL稀釋液），稀釋并接種麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，計(jì)算每克濕便中的大腸桿菌數(shù)。
[0183] 表4:小鼠增重情況
[0185]表5:小鼠糞便中大腸桿菌數(shù)的情況
[0188]葡萄復(fù)合粉治療組小鼠體重平均增長(zhǎng)率（67.96 % )顯著高于自然恢復(fù)組 (32.14%);飼喂溶液后腸道大腸桿菌數(shù)量顯著下降，降低97.07%，顯著低于自然恢復(fù)組 (24.78% )，表明本發(fā)明葡萄復(fù)合粉中的植物乳桿菌在小白鼠腸道內(nèi)迅速定植，形成優(yōu)勢(shì)菌 群，并有效抑制大腸桿菌等病原菌的生長(zhǎng)繁殖，并且定植時(shí)間長(zhǎng)，持續(xù)、有效改善了腸道性 能。
[0189] 需要說(shuō)明的是:本發(fā)明實(shí)施例3-6制備的促消化葡萄復(fù)合粉同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效 果，各實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
[0190] 實(shí)施例十二本發(fā)明促消化葡萄復(fù)合粉對(duì)機(jī)體免疫力的影響
[0191] 1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>[0192] 通過(guò)運(yùn)動(dòng)耐力測(cè)試(小鼠游泳試驗(yàn)），驗(yàn)證本發(fā)明葡萄復(fù)合粉的提高免疫力、抗疲 勞作用。
[0193] 2實(shí)驗(yàn)材料與試劑
[0194] 2.1供試藥物：
[0195] 市售葡萄復(fù)合粉(G1);市售葡萄復(fù)合粉(G2);本發(fā)明實(shí)施例2-6制備的葡萄復(fù)合粉 (G3-G7)。
[0196] 2.2 試劑：
[0197] 肝/肌糖原測(cè)試盒，購(gòu)自南京建成生物制品研究所;濃硫酸(AR)，南京化學(xué)試劑有 限公司；生理鹽水，山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司。
[0198] 3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0199] ICR小鼠，d，清潔級(jí)，體重18-22g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，實(shí)驗(yàn)期間小 鼠自由飲食。
[0200] 4 ?主要儀器
[0201 ] 錯(cuò)制游泳箱（50cmX 50cmX 40cm)，鉛絲，低溫高速離心機(jī)：5804R型，Eppendrof公 司；水浴鍋:DK-S26型，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；電子稱:BS224S型，Sartorius公司；秒 表，溫度計(jì) [0202] 5 ?實(shí)驗(yàn)分組
[0203] 5.1劑量分組及受試樣品給予時(shí)間隨機(jī)將小鼠分為8組，每組10只，第1組至第7組 分別給G1~G7的藥物，第8組為空白對(duì)照組，給予等體積的雙蒸水，每組每日均灌胃1次，灌 胃體積為0.2ml/10g，連續(xù)給予受試樣品30天。
[0204] 5.2樣品配制第1組至第7組:稱取2.25g藥物樣品，用蒸餾水配至150ml;空白對(duì)照 組:雙蒸水150ml。
[0205] 6.實(shí)驗(yàn)方法
[0206] 6.1負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水溫25 ±rc，鼠尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮，記錄小鼠游泳開始至死亡的時(shí)間，作為小鼠游泳時(shí) 間。
[0207] 6.2小鼠血清尿素測(cè)定末次給藥3〇111111后，在溫度為30°(：的水中不負(fù)重游泳9〇1]1111， 休息60min后摘眼球采血0.5mL (不加抗凝劑），置4°C冰箱3h，血凝固后2000r/min離心 15min，取血清送寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)。
[0208] 6.3肝糖原的測(cè)定末次給藥3〇1^11后，在溫度為25±1°(：的水中不負(fù)重游泳9〇111111， 頸椎脫臼處死小鼠，用生理鹽水洗凈，并用濾紙吸干水分后，準(zhǔn)確稱取肝臟l〇〇mg，肝糖原檢 測(cè)試劑盒檢測(cè)小鼠肝糖原含量。
[0209] 6.4血乳酸的測(cè)定末次給藥30min后采血，然后不負(fù)重在溫度為30 °C的水中游泳 lOmin后停止。乳酸儀測(cè)定方法:分別在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20yL加 入40此破膜液中，立即充分振蕩破碎細(xì)胞用乳酸儀測(cè)定。（血乳酸曲線下面積= 5X(游泳前 血乳酸值+3 X游泳后Omin的血乳酸值+2 X游泳后20min的血乳酸值）
[0210] 7.觀察指標(biāo)負(fù)重游泳時(shí)間，血乳酸、尿素、肝糖原值
[0211] 8.統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較 [0212] 9.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0213] 9.1本發(fā)明葡萄復(fù)合粉對(duì)小鼠體重的影響
[0214]各組小鼠在給予G1~G9藥物后，前、中，后期體重分別見下表所示，各組小鼠的初 始體重和增重體重與對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05)，表明G1~G9藥物均無(wú)明顯的 毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見表6。
[0215] 表6負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)小鼠的初始體重、中期體重和結(jié)束體重(f ± a )
[0218] 9.2本發(fā)明葡萄復(fù)合粉對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響
[0219] 經(jīng)口給予小鼠G1~G7藥物后，G1~G2藥物與空白對(duì)照組比較，可以明顯延長(zhǎng)小鼠 負(fù)重游泳時(shí)間，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明葡萄復(fù)合粉G3~G7藥物與空白對(duì)照組比 較，可以顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，具有極顯著性差異(P<〇.01)，且明顯優(yōu)于G1~G2藥 物。結(jié)果詳見表7。
[0220] 表7葡萄復(fù)合粉對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響土、；
[0222] "*"p〈0.05vs 空白對(duì)照；
[0223] "**"口〈0.01￥8空白對(duì)照；
[0224] 9.3本發(fā)明葡萄復(fù)合粉對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸的影響
[0225] 經(jīng)口給予小鼠本發(fā)明的葡萄復(fù)合粉后，本發(fā)明葡萄復(fù)合粉G3~G7藥物對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng) 后血乳酸曲線下面積與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<〇.05)，G1~G2藥物組小鼠血乳酸曲 線下面積與對(duì)照組比較雖有所降低，但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05)。結(jié)果見表8。
[0226] 表8本發(fā)明葡萄復(fù)合粉對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸水平的影響(1±入）
[0229] "*"p〈0.05vs 空白對(duì)照；
[0230] 9.4本發(fā)明葡萄復(fù)合粉對(duì)小鼠肝糖原的影響
[0231 ]經(jīng)口給予小鼠G1~G7藥物后，G1~G2藥物與空白對(duì)照組比較，小鼠肝糖原含量均 有明顯的升高，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明葡萄復(fù)合粉G3~G7藥物與與空白對(duì)照組 比較，小鼠肝糖原含量均有明顯的升高，具有極顯著性差異(P<〇.01)，且明顯優(yōu)于G1~G2 藥物。結(jié)果詳見表9。
[0232]表9本發(fā)明葡萄復(fù)合粉對(duì)小鼠肝糖原含量的影響(Lb )
[0234] "*"p〈0.05vs 空白對(duì)照；
[0235] "**"p〈0.01vs 空白對(duì)照；
[0236] 9.5本發(fā)明葡萄復(fù)合粉對(duì)小鼠血清尿素的影響
[0237] 經(jīng)口給予小鼠G1~G7藥物后，G1~G2藥物組與空白對(duì)照組比較，小鼠運(yùn)動(dòng)后血清 尿素含量均有明顯的降低，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明葡萄復(fù)合粉G3~G7藥物與與 空白對(duì)照組比較，小鼠運(yùn)動(dòng)后血清尿素含量均有明顯的降低，具有極顯著性差異（P< 0.01)，且明顯優(yōu)于G1~G2藥物。結(jié)果詳見表10。
[0238] 表10本發(fā)明葡萄復(fù)合粉對(duì)小鼠血清尿素含量的影響)
[0241] "*"p〈0.05vs 空白對(duì)照；
[0242] "**"p〈0.01vs 空白對(duì)照；
[0243] 10 ?實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0244] 本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，同時(shí)檢測(cè)小鼠肝糖原的儲(chǔ)備來(lái)觀察本發(fā)明促 消化葡萄復(fù)合粉提高免疫力、抗疲勞的效果。初步研究結(jié)果顯示如下：
[0245] 1、本發(fā)明G3~G7葡萄復(fù)合粉均能延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間（P<0.01)，且效果明顯 優(yōu)于其它G1~G2的葡萄復(fù)合粉。
[0246] 2、生化檢測(cè)方面顯示，本發(fā)明G3~G7葡萄復(fù)合粉各劑量組均能減少運(yùn)動(dòng)后小鼠血 清中葡萄糖無(wú)氧酵解所產(chǎn)生的乳酸含量，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<〇.05)，而其它G1 ~G2的葡萄復(fù)合粉雖然也能減少運(yùn)動(dòng)后小鼠血清中葡萄糖無(wú)氧酵解所產(chǎn)生的乳酸含量，但 與對(duì)照組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05);
[0247] 3、本發(fā)明G3~G7葡萄復(fù)合粉各劑量組均能顯著提高小鼠肝臟中糖原的儲(chǔ)備(P< 0.01)，且效果明顯優(yōu)于其它G1~G2的葡萄復(fù)合粉；
[0248] 4、高尿酸模型發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明G3~G7葡萄復(fù)合粉能顯著降低小鼠游泳后血清中尿素 的含量(P<〇.01)，且效果明顯優(yōu)于其它G1~G2葡萄復(fù)合粉；
[0249] 11 ?結(jié)論
[0250]上述實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明促消化葡萄復(fù)合粉能顯著提高機(jī)體免疫力，提高小鼠的體力 和耐力，降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血清中尿素及乳酸的含量，且能顯著提高小鼠肝臟中糖原的儲(chǔ)備， 有助于緩解運(yùn)動(dòng)負(fù)荷引起的疲勞;能延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳至力竭的時(shí)間。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種促消化葡萄復(fù)合粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：葡萄粉30-50份，小麥芽 粉20-30份，改性膳食纖維8-15份，木瓜粉6-12份，植物乳桿菌粉6-12份，酵素粉11-17份，檸 檬粉2_6份； 所述植物乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC NO. 11763為出發(fā)菌株按常規(guī)方法制備。2. 如權(quán)利要求1所述的促消化葡萄復(fù)合粉，其特征在于，主要由以下重量份數(shù)的原料制 備:葡萄粉35-45份，小麥芽粉23-27份，改性膳食纖維11-13份，木瓜粉8-10份，植物乳桿菌 粉8-10份，酵素粉13-15份，梓檬粉3-5份。3. 如權(quán)利要求1所述的促消化葡萄復(fù)合粉，其特征在于，主要由以下重量份數(shù)的原料制 備:葡萄粉40份，小麥芽粉25份，改性膳食纖維12份，木瓜粉9份，植物乳桿菌粉9份，酵素粉 14份，檸檬粉4份。4. 如權(quán)利要求1-3任一所述的促消化葡萄復(fù)合粉，其特征在于，所述葡萄粉的制備方 法，包括以下步驟，將葡萄放入盛有0.1-0.3%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中，于室溫下 200-400W、35-45KHZ清洗5-10min，瀝干，每個(gè)葡萄果任意切分成四份，單層平鋪在微波干燥 機(jī)中于功率3-5kW、溫度120-130 °C、干燥3-5s，然后浸泡在質(zhì)量百分比濃度為8-12%的絲膠 肽溶液中8-10min，取出，于-18-22°C冷凍30-50min后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑0.3-0.5mm，接著加入粉碎物質(zhì)量1-3倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5，于室溫下在電場(chǎng)強(qiáng)度 25-35kV/cm，脈沖時(shí)間300-500ys,脈沖頻率200-300HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理20-30min;然后于室溫在功率150-300W條件下進(jìn)行微波輻照提取15-20min，同時(shí)在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì)量1.5-2.5 %的混合酶，于 40-50 °C酶解30-50min，酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥至水分含量為5-8 %即得葡萄 粉； 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-3:1-2均勻混合。5. 如權(quán)利要求1-3任一所述的促消化葡萄復(fù)合粉，其特征在于，所述小麥芽粉的制備方 法，包括如下步驟:將小麥放在裝有0.01-0.03%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于功率 200-400W、頻率20-30KHZ室溫超聲清洗3-5min，取出、瀝干，于頻率2450MHz、功率3000W、溫 度38-42°C、料層厚度2-4cm微波干燥10-15s，然后置溫度為33-36°C、pH值為6-8的浸泡液中 浸泡4-6h，浸泡液含有質(zhì)量百分比濃度為0.15-0.25 %的復(fù)合酶，每隔15-20min通風(fēng)一次， 通風(fēng)壓力0.13-0.1510^，同時(shí)于電場(chǎng)強(qiáng)度10-151^/〇11，脈沖時(shí)間100-30(^8，脈沖頻率60-80Hz條件進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理，直至小麥水分含量為40-45 % ;浸泡后的小麥瀝干，在發(fā) 芽室內(nèi)進(jìn)行暗發(fā)芽，暗發(fā)芽溫度保持20-24°C，暗發(fā)芽時(shí)間為20-24h，經(jīng)發(fā)芽后的小麥干燥 至水分含量為5-8 %，低溫粉碎、過(guò)60-80目篩即得小麥芽粉； 所述復(fù)合酶為纖維素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按質(zhì)量比2-4:2-4:1-3均勻混合。6. 如權(quán)利要求1所述的促消化葡萄復(fù)合粉，其特征在于，植物乳桿菌粉活菌含量為:7 X 1012-9X1012cfu/g〇7. 如權(quán)利要求1所述的促消化葡萄復(fù)合粉，其特征在于，制備植物乳桿菌粉時(shí)冷凍保護(hù) 劑的制備方法，包括如下步驟:將冬黑麥、沙冬青、鯊魚皮膠原蛋白分別清洗、瀝干，按質(zhì)量 比8-10:3-5: 2-4均勻混合，加入混合物料質(zhì)量0.1-1倍的pH值為3.8-4.5的乳酸潤(rùn)濕3-8h， 于-18-22°C冷凍l_2h后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度3-5cm，粉碎物粒徑0.5-3mm，接著加 入粉碎物質(zhì)量10-20倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5，于室溫下在電場(chǎng)強(qiáng)度25-35kV/cm， 脈沖時(shí)間300-500ys，脈沖頻率200-300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理20-30min;然后于 室溫在功率150-300W條件下進(jìn)行微波輻照提取15-20min，同時(shí)在功率200-300W，頻率30-40KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提??；加入提取液質(zhì)量1-2%的復(fù)配酶，于45-55Γ酶解30-50min;酶解液過(guò)濾、濾液濃縮、低溫粉碎至粒徑為0.1-0.3_即得保護(hù)劑； 所述復(fù)配酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-3:1-2: 1-2均勻混合。8. 如權(quán)利要求1-3任一所述的促消化葡萄復(fù)合粉，其特征在于，所述酵素粉制備方法如 下:采用泡菜發(fā)酵生產(chǎn)末期排放的發(fā)酵液為原料，過(guò)濾除去發(fā)酵液中的菜葉等大粒物質(zhì)得 到發(fā)酵液體，發(fā)酵液體采用冷凍干燥獲得酵素粉;冷凍干燥的條件是：-30--40度預(yù)凍6小 時(shí);然后凍干直到含水量小于5%。9. 如權(quán)利要求1-8任一所述促消化葡萄復(fù)合粉的制備方法，其特征在于，包括如下步 驟:按照配方比例，稱取各原料，依次將酵素粉、植物乳桿菌粉、葡萄粉、檸檬粉、小麥芽粉、 木瓜粉加入V型混合罐均勻混合25-35min，攪拌轉(zhuǎn)速20-40r/min，然后加入改性膳食纖維均 勾混12-18min,攪拌轉(zhuǎn)速40-60r/min,無(wú)菌灌裝、密封、包裝即得促消化葡萄復(fù)合粉。10. 如權(quán)利要求9所述促消化葡萄復(fù)合粉的制備方法，其特征在于，所述改性膳食纖維 的制備方法，包括以下步驟:將菊粉、小麥纖維、燕麥纖維按質(zhì)量比5-7:2-4:1-3均勻混合， 加入其質(zhì)量3-7倍的水，室溫100-300W、35-40KHz條件超聲提取10-15min，然后在電場(chǎng)強(qiáng)度 20-40kV/cm，脈沖時(shí)間300-500ys,脈沖頻率200-400HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)處理10-15min;用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5-6.5，加入混合物質(zhì)量0.1-0.3%的生物酶，于45-55°C酶解 20-48min;酶解液過(guò)濾，濾液減壓濃縮、冷凍干燥至水分含量為5-8 %即得改性膳食纖維； 所述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶按質(zhì)量比1-3:1-3:1-2:1-2均勻混合。
【文檔編號(hào)】A23L19/00GK105852085SQ201610202248
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月1日
【發(fā)明人】邵素英
【申請(qǐng)人】邵素英