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一種北青龍衣的采收方法及北青龍衣的加工方法_2

文檔序號:9335107閱讀:來源:國知局
200目細粉,加水制成一定濃 度的藥物混懸液;取一定量胡桃醌、胡桃酮粉末分別置于研缽中充分研磨,再精確稱取細粉 適量,分別用含3%。吐溫的水溶液配制成一定濃度的藥液,備用。經(jīng)預試0. 26g/mL的藥物混 懸液最大可灌胃濃度。
[0048] 低溫變溫鼓風干燥法(B法)高溫恒溫鼓風干燥法(C法)毒性測定:
[0049]ICR小鼠(SPF級,體重18~22g,雌雄各半)72只,隨機分成6組,每組12只, 以最大可灌胃濃度為最高劑量,組間劑量比值為1 :〇. 8,濃度分別為0. 73g/mL、0. 58g/mL、 0. 46g/mL的B法樣品、C法樣品混懸液。小鼠禁食不禁水12h,按20mL/Kg體重灌胃給藥,給 藥后即刻及經(jīng)14天的連續(xù)觀察,個別小鼠給藥后30min內(nèi)有倦怠不動,瞇眼,活動力降低, 呼吸急促,豎毛,弓背現(xiàn)象。給藥后第2天起小鼠活動、精神狀態(tài)等逐漸恢復正常,飲食、外 觀、行為均正常,未見異常分泌物、排泄物,無小鼠死亡。各組小鼠飲食、外觀、行為均正常, 未見異常分泌物、排泄物。因此,不能找出引起動物〇%和100%死亡的劑量范圍或100%死 亡的劑量。此試驗無法測出B法樣品、C法樣品的小鼠經(jīng)口給藥的LD50。
[0050] ICR小鼠(SPF級,體重18~22g,雌雄各半)60只,隨機分成3組,分別為B法樣 品組、C法樣品組、空白對照組,每組20只,試驗前禁食12小時,不禁水,實驗室溫度22°C, 濕度40 %。各組小鼠分別灌胃最大可灌胃濃度的青龍衣鮮品、干品混懸液及蒸餾水,灌胃容 積40ml/Kg,早晚各一次,兩次間隔8h。計算可知,急性毒性試驗小鼠的最大給藥量相當于 人臨床用量的83倍,未見明顯毒副反應,說明低溫變溫鼓風干燥法(B法)、高溫恒溫鼓風干 燥法(C法)制備的樣品用藥安全。
[0051]A法樣品、胡桃醌、胡桃酮的毒性測定
[0052] 選取ICR小鼠(SPF級,體重18~22g,雌雄各半)330只,隨機分為33組,每組10 只。試驗前禁食12小時,不禁水,以預試驗中引起動物100%死亡的最低劑量為起始濃度, 各組組間比1 :〇. 85配制相應藥液。A法樣品、胡桃醌、胡桃酮各灌胃給藥組分別設10個濃 度梯度,灌胃容積20ml/Kg體重,空白對照組給予相同體積含3%。吐溫的水溶液。經(jīng)口給藥 后即刻觀察,可見各組小鼠活潑程度隨給藥劑量的增加而降低,活動時不協(xié)調(diào),蹣跚步行、 瞇眼,眼睛無神,困倦,不飲食、水。低劑量組小鼠給藥后活動力降低,有豎毛、蜷縮、弓背現(xiàn) 象,嚴重程度與給藥劑量呈正比。高劑量組小鼠倦臥于飼養(yǎng)籠底部不動,呼吸急促,快而淺。 個別小鼠給藥后20min發(fā)生抽搐、痙攣,1~2min自行緩解,倦臥不動,30min開始可見尾靜 脈瘀血,翻正反射消失,lh開始有動物死亡,死亡速度與給藥劑量呈正比。小鼠死亡均在灌 胃后24h之內(nèi),死亡后立即解剖,可見胃部和食道充盈灌胃的藥液,心、肝、脾、肺、腎、腦等 其它臟器外觀未見異常變化。經(jīng)14天的連續(xù)觀察,存活小鼠飲食、外觀、行為第二天起均恢 復正常,未見異常分泌物、排泄物,24h后未見中毒表現(xiàn)及動物死亡。各組動物死亡數(shù)量如表 4~6所示,并計算LD50。
[0053] 表4胡桃醌半數(shù)致死量
[0054]
[0056] 回歸方程y(Probit) = -3. 7889+6. 9332Log(D)
[0057]半數(shù)致死量LD50 = 18. 521mg/Kg
[0058]LD50(Feiller校正)95%的可信限=16. 323-20. 739mg/Kg
[0059] LD5 = 10. 725mg/Kg
[0060] LD95 = 31. 982mg/Kg
[0061] 表5胡桃酮半數(shù)致死量
[0062]
[0063] 回歸方程y(Probit) = -10. 235+6. 4096Log(D)
[0064]半數(shù)致死量LD50 = 238. 17mg/Kg
[0065]LD50(Feiller校正)95%的可信限=211. 72-271. 26mg/Kg
[0066] LD5 = 131. 9mg/Kg
[0067] LD95 = 430. 05mg/Kg
[0068] 表6A法干品半數(shù)致死量
[0069]
[0071] 回歸方程y(Probit) = -4. 5821+6. 0936Log(D)
[0072]半數(shù)致死量LD50 = 37. 366g/Kg
[0073] LD50(Feiller校正)95%的可信限=33. 056-42. 174g/Kg
[0074]LD5 =20. 07g/Kg
[0075] LD95 = 69. 569g/Kg
[0076] 動物實驗表明胡桃醌半數(shù)致死量LD50 = 18. 521mg/Kg,胡桃酮LD50 = 238. 17mg/ Kg,參照我國工業(yè)毒物急性毒性分級標準以及化合物經(jīng)口急性毒性分級標準,胡桃醌屬劇 毒化合物,具有強烈的神經(jīng)毒性,其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物胡桃酮毒性大大降低,屬中等毒性化合物。因 此,自然陰干法(A法)中胡桃醌含量較高,LD50 = 37. 366g/Kg,存在一定的用藥風險。低 溫變溫鼓風干燥法(B法)和高溫恒溫鼓風干燥法(C法)都具有用藥是安全性,但是高溫 恒溫鼓風干燥法(C法)中抗癌有效成分損失大、含量過低。
[0077] 抗腫瘤實驗
[0078] 取對數(shù)生長期BGC823胃癌細胞及A549肺癌細胞,調(diào)整細胞懸液密度為5X104個 /mL。按100uL/每孔接種于96孔培養(yǎng)板。貼壁后,除空白組外,每孔加入不同濃度藥物繼 續(xù)培養(yǎng)48h,每組6個復孔。孵育48h后,每孔加入20ulMTT,37°C孵育4h,棄去上清后,每 孔加150ulDMS0,在搖床上低速振蕩lOmin,酶標儀570nm波長測定吸光度(A)值,并計算 對BGC823胃癌細胞及A549肺癌細胞的增殖抑制率,并通過GraphpadPrism計算IC50值, 增殖抑制率% = 100-實驗組/對照組*100。實驗結(jié)果如表7~9所示。
[0079] 表7胡桃酮及胡桃醌抗腫瘤抑制率%及IC50值
[0080]
[0084] 表9C法樣品體外抗腫瘤活性
[0085]
[0086] 由表7~9可知不同濃度的胡桃醌及胡桃酮作用于胃癌BGC823及肺癌A549后, 細胞生長受到不同程度抑制,且抑制作用呈劑量依賴關系。胡桃酮的抑制作用略強于胡桃 醌,低溫變溫鼓風干燥法(B法)強于自然陰干法(A法)說明該轉(zhuǎn)化工藝起到了增效作用, 而高溫恒溫鼓風干燥法(C法)萘醌類成分被嚴重破壞,基本不具備抗腫瘤作用。
【主權項】
1. 一種北青龍衣的采收方法,其特征在于根據(jù)中國農(nóng)歷,在入伏后的第15~20天間對 未成熟的青胡桃皮進行采收。2. -種北青龍衣的加工方法,其特征在于北青龍衣的加工方法按以下步驟進行: 一、 入伏后的第15~20天間對未成熟的青胡桃皮進行采收; 二、 先將青胡桃皮放入25~30 °C的環(huán)境中干燥8 ± Ih,然后放入40~45 °C的環(huán)境中干 燥8± lh,再放入48~52°C的環(huán)境中干燥8± lh,完成低溫變溫干燥;即獲得加工好的北青 龍衣。3. 根據(jù)權利要求2所述的一種北青龍衣的加工方法,其特征在于步驟二先將青胡桃皮 放入28°C的環(huán)境中干燥8h,然后放入42°C的環(huán)境中干燥8h,再放入50°C的環(huán)境中干燥8h, 完成低溫變溫干燥。
【專利摘要】一種北青龍衣的采收方法及北青龍衣的加工方法,它涉及一種中藥的采收方法及該中藥的加工方法。解決目前不同批次北青龍衣質(zhì)量穩(wěn)定性差,萘醌類有效成分的含量差異性大,以及抗癌成分胡桃醌有毒性,僅能以鮮品入藥,加工過程中易被破壞,抗癌效果差的問題。采收方法:在入伏后的第15~20天間對未成熟的青胡桃皮進行采收。加工方法:一、采收;二、低溫變溫干燥。本發(fā)明的加工方法能夠促進毒性成分胡桃醌轉(zhuǎn)化成有效成分胡桃酮,從而達到增效減毒之目的。因此,利用本發(fā)明方法加工的北青龍衣制備的抗腫瘤藥物其抑制腫瘤的效果得到了大幅的提升,毒性降低,使用安全性高,保證了用藥安全。
【IPC分類】A23L3/40, A01D91/04
【公開號】CN105054223
【申請?zhí)枴緾N201510431491
【發(fā)明人】王偉明, 霍金海, 董文婷, 孫國東, 魏文峰
【申請人】黑龍江省中醫(yī)藥科學院
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年7月22日
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