枯草芽孢菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑、制備方法及其作為畜禽飼料添加劑的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生態(tài)制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種枯草芽孢菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài) 制劑、制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 枯草芽孢桿菌是芽孢桿菌屬的一種，能形成芽孢，革蘭氏陽性菌，作為一種畜禽飼 料添加劑能產(chǎn)生多種消化酶，具有提高動物消化吸收、生產(chǎn)性能和動物免疫性能的作用。目 前市場上常用的枯草芽孢桿菌微生態(tài)制劑多以普通培養(yǎng)基培養(yǎng)，以固體粉末的形式添加于 飼料或飲水中，效果不佳。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種枯草芽孢菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制 劑，發(fā)酵后該微生態(tài)制劑具有枯草芽孢桿菌和甘草的雙重功效，且其作用明顯大于二者的 復(fù)配。
[0004] 本發(fā)明還提供了上述枯草芽孢菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑的制備方法及其作為 畜禽飼料添加劑的應(yīng)用。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑，其將枯草芽孢桿菌種子液接種至甘草發(fā) 酵培養(yǎng)基中，經(jīng)振搖培養(yǎng)而得；所述甘草發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：甘草水提液〇. 5 - I. 5mg/L，LB 液體培養(yǎng)基250mg/L，pH 7. 4。
[0006] LB液體培養(yǎng)基的配方：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉10g/L，pH 7. 4。
[0007] 所述的甘草發(fā)酵培養(yǎng)基配方優(yōu)選為：甘草水提液I. 5mg/L，LB液體培養(yǎng)基250mg/ L，pH 7. 4。
[0008] 較好的，所述甘草水提液經(jīng)下述方法獲得：取甘草加水煎煮3次，第一次煎煮加 4~5重量倍的水，第二次煎煮加3~4重量倍的水，第三次煎煮加2~3重量倍的水，每次 煎煮30~60分鐘，合并三次煎煮液，過濾即得。
[0009] 上述枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑的制備方法，其包括如下步驟： 1) 將枯草芽孢桿菌菌株接種于LB液體培養(yǎng)基中，37 ± 3 °C振搖培養(yǎng)48 ± 12h，獲得枯草 芽孢桿菌種子液； 2) 將枯草芽孢桿菌種子液按5% (v/v)的接種量接種至甘草發(fā)酵培養(yǎng)基中，37±3°C振 搖培養(yǎng)24 - 72h即得。
[0010] 上述枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑作為畜禽飼料添加劑的應(yīng)用，尤其是 可以作為仔豬飼料添加劑的應(yīng)用。
[0011] 甘草是一種常用中藥，具有補脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥作 用。本發(fā)明利用枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草可以使枯草芽孢桿菌和甘草互相作用，發(fā)酵后 可提高甘草酸、甘草黃酮等甘草活性物質(zhì)含量，降低其毒副作用；同時能使枯草芽孢桿菌活 菌含量明顯增加。
[0012] 和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果： 本發(fā)明利用枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草，生產(chǎn)成本低，同時促進枯草芽孢桿菌活菌量 增加和芽孢率形成，發(fā)酵后形成一種新型的微生態(tài)制劑，添加于畜禽飲水中，可顯著提高畜 禽的消化能力、生產(chǎn)性能和免疫力。
【具體實施方式】
[0013] 以下通過實施例對本發(fā)明做進一步的說明，但本發(fā)明的保護范圍不限于此。
[0014] 下述各實施例中所用枯草芽孢桿菌菌株購自于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中 心（CICC)，編號23759。LB液體培養(yǎng)基的配方：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化鈉 10g/L，pH 7. 4。
[0015] 所述甘草水提液經(jīng)下述方法獲得：取甘草加水煎煮3次，第一次煎煮加5重量倍的 水，第二次煎煮加4重量倍的水，第三次煎煮加3重量倍的水，每次煎煮50分鐘，合并三次 煎煮液，過濾即得。
[0016] 對比例1 一種枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑，其將枯草芽孢桿菌種子液接種至甘草發(fā) 酵培養(yǎng)基中，經(jīng)振搖培養(yǎng)而得；所述甘草發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：甘草水提液〇%，LB液體培養(yǎng)基 0. 25%，余量為水，pH 7. 4。
[0017] 上述枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑的制備方法，其包括如下步驟： 1) 將枯草芽孢桿菌菌株接種于LB液體培養(yǎng)基中，37°C振搖培養(yǎng)48h，獲得種子液； 2) 將種子液按5% (v/v)的接種量接種至甘草發(fā)酵培養(yǎng)基中，37°C振搖培養(yǎng)24 - 72h 即得。
[0018] 實施例1 一種枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑，其將枯草芽孢桿菌種子液接種至甘草發(fā) 酵培養(yǎng)基中，經(jīng)振搖培養(yǎng)而得；所述甘草發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：甘草水提液〇. 5mg/L，LB液體 培養(yǎng)基 250mg/L，pH 7. 4。
[0019] 甘草水提液5%，LB液體培養(yǎng)基0? 25%，余量為水，pH 7. 4。
[0020] 上述枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑的制備方法，其包括如下步驟： 1) 將枯草芽孢桿菌菌株接種于LB液體培養(yǎng)基中，37°C振搖培養(yǎng)48h，獲得枯草芽孢桿 菌種子液； 2) 將枯草芽孢桿菌種子液按5% (v/v)的接種量接種至甘草發(fā)酵培養(yǎng)基中，37°C振搖培 養(yǎng)24 - 72h即得。
[0021] 實施例2 所述的枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑中，甘草發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：甘草水提 液1.0 mg/L，LB液體培養(yǎng)基250mg/L，pH 7. 4。其它及制備方法均同實施例1。
[0022] 實施例3 所述的枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑中，甘草發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：甘草水提 液I. 5mg/L，LB液體培養(yǎng)基250mg/L，pH 7. 4。其它及制備方法均同實施例1。
[0023] 實施例4 所述的枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑中，甘草發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：甘草水提 液2. Omg/L，LB液體培養(yǎng)基250mg/L，pH 7. 4。其它及制備方法均同實施例1。
[0024] 上述各實施例所述微生態(tài)制劑中的枯草芽孢桿菌菌體量測試 供試樣品：對比例1及實施例1 一 4所制備的微生態(tài)發(fā)酵品。
[0025] 試驗方法：分別于發(fā)酵后的第24h、48h、72h對上述實施例取樣進行枯草芽孢桿 菌、芽孢率和pH測定。枯草芽孢桿菌測定方法：吸取ImL樣品勻液注入裝有9mL生理鹽水 的無菌試管中，混勻，制成1:10的樣品勻液。按照上述操作順序，依次倍比稀釋至1〇_ 1(1。選 擇3個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度取0.1 mL樣品稀釋液，分別置于2個普通瓊脂平板 上，涂布均勻。37°C培養(yǎng)48h，對平板上的所有菌落進行計數(shù)。根據(jù)公式：每毫升樣品中菌 落數(shù)=平板上菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)/平板中菌液添加量，來計算發(fā)酵樣品中細菌總數(shù)。試驗 結(jié)果見表1。
【主權(quán)項】
1. 一種枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑，其特征在于，將枯草芽孢桿菌種子 液接種至甘草發(fā)酵培養(yǎng)基中，經(jīng)振搖培養(yǎng)而得；所述甘草發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：甘草水提液 0? 5 -I. 5mg/L，LB液體培養(yǎng)基 250mg/L，pH7. 4。
2. 如權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑，其特征在于，所述甘 草水提液經(jīng)下述方法獲得：取甘草加水煎煮3次，第一次煎煮加4~5重量倍的水，第二次 煎煮加3~4重量倍的水，第三次煎煮加2~3重量倍的水，每次煎煮30~60分鐘，合并 三次煎煮液，過濾即得。
3. 權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于， 包括如下步驟： 1)將枯草芽孢桿菌菌株接種于LB液體培養(yǎng)基中，37 ± 3 °C振搖培養(yǎng)48 ± 12h，獲得枯草 芽孢桿菌種子液； 2 )將枯草芽孢桿菌種子液按5%的接種量接種至甘草發(fā)酵培養(yǎng)基中，37 ± 3°C振搖培養(yǎng) 24 一 72h即得。
4. 權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑作為畜禽飼料添加劑的應(yīng) 用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種枯草芽孢菌液體發(fā)酵甘草微生態(tài)制劑，其將枯草芽孢桿菌種子液接種至甘草發(fā)酵培養(yǎng)基中，經(jīng)振搖培養(yǎng)而得；所述甘草發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：甘草水提液0.5－1.5mg/L，LB液體培養(yǎng)基250mg/L，pH7.4。本發(fā)明利用枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵甘草，生產(chǎn)成本低，同時促進枯草芽孢桿菌活菌量增加和芽孢率形成，發(fā)酵后成新型微生態(tài)制劑，添加于畜禽飲水中，提高畜禽消化率、生產(chǎn)性能和免疫力。
【IPC分類】C12N1-20, C12R1-125, A23K1-18, C12N1-04, A23K1-16
【公開號】CN104757275
【申請?zhí)枴緾N201510174676
【發(fā)明人】鄭立運, 方先珍, 喬宏興, 王寧, 趙志鴻, 張壯麗, 戈士文, 馬芳, 王慶端
【申請人】河南省醫(yī)藥科學(xué)研究院
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年4月14日