專利名稱：含不飽和脂肪酸油脂的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用屬于被孢霉(Mortierella)屬被孢霉(Mortierella)亞屬微生物制造含不飽和脂肪酸油脂的方法，該油脂中24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇(24,25-Methylenecholest-5-en-3β-ol)含有率少。
人們知道Mortierella屬M(fèi)ortierella亞屬微生物可以作為生產(chǎn)花生四烯酸、二高(Dihomo)-γ-亞麻酸、二十碳五烯酸等不飽和脂肪酸的微生物，利用這種微生物已經(jīng)開發(fā)出通過發(fā)酵法高效制造花生四烯酸、二高-γ-亞麻酸、二十碳五烯酸的方法〔特開昭63-44891、特開昭63-12290、特開昭63-14696、特開平5-91887、特開昭63-14697〕。利用對(duì)屬于Mortierella屬M(fèi)ortierella亞屬微生物實(shí)施變異處理獲得的Δ12不飽和活性低下或缺失的變異株制造蜜得酸(mead酸，5,8,11-二十碳三烯酸)的方法人們也已經(jīng)了解了(特開平5-91888)。
另外，二高-γ-亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、蜜得酸等不飽和脂肪酸是具有很強(qiáng)且多種生理活性的前列腺素、凝血噁烷、前列環(huán)素、白三烯等分子的前體物質(zhì)，添加了這些前體物質(zhì)的食品以及動(dòng)物飼料正受到人們的關(guān)注。
例如，花生四烯酸雖然是具有使子宮收縮或松弛作用、擴(kuò)張血管、降低血壓作用等生理活性的前列腺素、凝血噁烷、前列環(huán)素、白三烯等分子的前體物質(zhì)，但近年來，作為嬰兒發(fā)育的必需成分，花生四烯酸與二十二碳六烯酸(以下也稱之DHA)一起研究進(jìn)展很快。
據(jù)Lanting(《柳葉刀》LANCET,Vol.344.1319-1322(1994))等人報(bào)道，對(duì)出生后3周以上母乳哺育的嬰兒和用嬰兒奶粉喂養(yǎng)的嬰兒進(jìn)行跟蹤調(diào)查，直到9歲為止，從行為方面研究腦神經(jīng)的小的障礙發(fā)生率，發(fā)現(xiàn)用嬰兒奶粉喂養(yǎng)的嬰兒的腦障礙發(fā)生率是母乳哺育的嬰兒的2倍。人們推測這一驚人的結(jié)果可能是由于母乳中存在而嬰兒奶粉中幾乎不存在的DHA或花生四烯酸等高度不飽和脂肪酸與腦的發(fā)育有關(guān)系。除此之外，高度不飽和脂肪酸與新生兒的腦以及網(wǎng)膜的發(fā)育有關(guān)系的結(jié)果陸續(xù)有報(bào)道。
然而，雖說是含這些不飽和脂肪酸的油脂安全性很高，但由于有微生物產(chǎn)生的問題，所以并沒有充分滲透于社會(huì)，而且據(jù)《脂類》LIPIDS、Vol.27、No.6、481-483(1992)報(bào)道，Mortierella alpina 1S-4株中還產(chǎn)生直到現(xiàn)在還未發(fā)現(xiàn)天然存在的24,25-甲叉膽甾-5-烯-3□-醇。因此人們期待著可安全地用于食品和動(dòng)物飼料的、來自MortiereHa屬M(fèi)ortierella亞屬微生物的含不飽和脂肪酸油脂的開發(fā)。
本發(fā)明目的在于提供能夠安心用于食品或動(dòng)物飼料的，而且能夠經(jīng)濟(jì)且穩(wěn)定供給不飽和脂肪酸的微生物油。
本發(fā)明人等為了解決上述課題，探索高效制造24,25-甲叉膽甾-5-烯-3□-醇含量少，而含不飽和脂肪酸油脂的方法，詳細(xì)地研究了各種培養(yǎng)基成分與甾醇組成的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在Mortierella屬M(fèi)ortierella亞屬微生物的培養(yǎng)中，通過使用從大豆得到的氮源，可以得到24,25-甲叉膽甾-5-烯-3□-醇組成比小的油脂。由此完成了本發(fā)明。
就是說，本發(fā)明是有關(guān)含不飽和脂肪酸油脂的制造方法的發(fā)明，發(fā)明涉及在含有從大豆獲得的氮源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)Mortierella屬M(fèi)ortierella亞屬微生物，以及從該培養(yǎng)物中提取含不飽和脂肪酸油脂等過程。
本發(fā)明中所謂的不飽和脂肪酸是指碳數(shù)在16以上，且含有一個(gè)以上雙鍵的脂肪酸，而一般將碳數(shù)在18以上且含有2個(gè)以上雙鍵的脂肪酸稱之高度不飽和脂肪酸，例如γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、蜜得酸等。
本發(fā)明中所謂的Mortierella屬M(fèi)ortierella亞屬微生物是指長孢被孢霉Mortierella elongata、微小被孢霉Mortierella exigua、喜濕被孢霉Mortierella hygrophila、高山被孢霉Mortierella alpina等微生物，具體講是指長孢被孢霉Mortierella elongata IFO8570、微小被孢霉Mortierellaexigua IFO8571、喜濕被孢霉Mortierella hygrophila IFO5941、高山被孢霉Mortierella alpina IFO8568、ATCCl6266、ATCC32221、ATCC42430、CBS219.35、CBS224.37、CBS250.53、CBS343.66CBS527.72、CBS529.72、CBS608.70、CBS754.68等菌株。
這些菌株中的任一種都可以從大阪市財(cái)團(tuán)法人發(fā)酵研究所(IFO)、以及美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)和真菌菌種保藏中心[Centraalbure au voor Schimmelculturees(CBS)]無限制地得到。也可以使用本發(fā)明人從土壤中分離的菌株Mortierellaelongata SAM0219(微工研菌寄第8703號(hào))。這些屬于模式菌種的菌株或從自然界中分離的菌株可以直接使用，也可以使用與進(jìn)行過一次以上增殖和成分離后得到的原來菌株性質(zhì)不同的自然變異菌株。
本發(fā)明使用的微生物包括按照在使用同樣的培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)，與原來的野生株產(chǎn)量相比，油脂中不飽和脂肪酸含量多，或總油脂量多，或者是不飽和脂肪酸含量和總油脂量都多的意圖設(shè)計(jì)的屬于Mortierella屬M(fèi)ortierella亞屬的微生物(野生株)的變異株或重組株。
本發(fā)明使用的微生物也包括按照能有效利用費(fèi)用優(yōu)越的培養(yǎng)基，生產(chǎn)出與相應(yīng)野生株等量的不飽和脂肪酸的意圖設(shè)計(jì)的菌株。例如，作為Δ12不飽和活性缺失的變異株的Mortierella alpina SAM1861(微工研條寄第3590號(hào)、FERM BP-3590)或作為Δ5不飽和活性缺失的變異株的Mortierella alpina SAM1860(微工研條寄第3589號(hào)、FERM BP-3589)。
上述屬于Mortierella屬M(fèi)ortierella亞屬的微生物可以用它的孢子、菌絲、或預(yù)培養(yǎng)得到的前培養(yǎng)液接種于液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。作為碳源可以使用常用的葡萄糖、果糖、木糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、糖蜜、甘油、甘露糖醇、檸檬酸、玉米淀粉等中的任一種，優(yōu)選的碳源是葡萄糖、麥芽糖、果糖、玉米淀粉、甘油、檸檬酸。
而在本發(fā)明中，通過使用從大豆得到的營養(yǎng)源作為氮源，可以使油脂中的24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇組成比變小。
本發(fā)明中使用的從大豆得到的氮源中的氮含量希望占在除去水分之后重量的2％以上，優(yōu)選的是占3％以上，更優(yōu)選的是占5％以上。而作為從大豆得到的氮源可以使用脫脂大豆或是對(duì)脫脂大豆進(jìn)行熱處理、酸處理、堿處理、酶處理、以及通過包括熱處理、酸處理、堿處理、酶處理、化學(xué)修飾等化學(xué)的和/或物理的處理在內(nèi)的變性和成再生；利用水和/或有機(jī)溶劑除去一部分成分；通過過濾和/或離心分離除去一部分成分；實(shí)施冷凍；粉碎；干燥；篩分等加工的、或者是對(duì)未脫脂大豆實(shí)施同樣加工后的產(chǎn)品，可以單獨(dú)使用或組合使用上述加工的產(chǎn)品。一般常用的是大豆、脫脂大豆、豆餅、食用大豆蛋白、豆腐渣、豆乳、黃豆粉等大豆制品。特別是對(duì)脫脂大豆實(shí)施熱變性的制品，更理想的是對(duì)脫脂大豆實(shí)施熱變性后又除去乙醇可溶性成分的制品。
除此之外，根據(jù)需要，在對(duì)甾醇組成沒有很大影響的范圍內(nèi)，可以配合使用其它的氮源，例如可以使用蛋白胨、酵母提取液、麥芽提取液、肉提取液、酪蛋白氨基酸、玉米浸漬液、尿素等有機(jī)氮源，以及硝酸鈉、硝酸銨、硫酸銨等無機(jī)氮源的一種或數(shù)種。
另外，根據(jù)需要也可以使用微量的營養(yǎng)源，例如可以使用磷酸鉀、磷酸二氫鉀等磷酸鹽、硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸鐵、硫酸銅、氯化鎂、氯化鈣等無機(jī)鹽類以及維生素等。
同時(shí)在本發(fā)明中，通過在培養(yǎng)基中添加作為目的不飽和脂肪酸的基質(zhì)進(jìn)行培養(yǎng)，也可以促進(jìn)該不飽和脂肪酸的積蓄。作為不飽和脂肪酸的基質(zhì)，如十六碳烷或十八碳烷那樣的碳?xì)浠衔铮幌笥退峄騺喡樗崮菢拥闹舅峄蛩鼈兊柠}，例如它們的鈉鹽或鉀鹽，或脂肪酸酯，例如乙酯、甘油脂肪酸酯、山梨聚糖脂肪酸酯；或者是象橄欖油、大豆油、菜籽油、棉籽油或椰子油那樣的油脂類，這些物質(zhì)可以單獨(dú)或組合使用。基質(zhì)的總添加量為培養(yǎng)基重量的0.001～10％、優(yōu)選的是0.5～10％。而即使使用這些基質(zhì)作為唯一的碳源進(jìn)行培養(yǎng)也可以。
上述的碳源、氮源、無機(jī)鹽類、維生素和/或添加物可以添加到培養(yǎng)開始前的培養(yǎng)基和/或培養(yǎng)過程中的培養(yǎng)液中。這些培養(yǎng)基成分可以一次添加，或連續(xù)添加，或隨時(shí)間分幾次添加。這些培養(yǎng)基成分可以分別單獨(dú)添加，或預(yù)先混合后添加。這些培養(yǎng)基的成分只要是對(duì)菌的生長沒有妨礙，其濃度并沒有特別限制。實(shí)用中，一般希望碳源為培養(yǎng)基重量的0.1～30％、優(yōu)選1～15％，氮源為0.01～10％、優(yōu)選0.1～5％。
培養(yǎng)溫度為5～40℃、優(yōu)選20～30℃、也可以在20～30℃培養(yǎng)使菌體增殖后，再于5～20℃繼續(xù)培養(yǎng)使菌體生產(chǎn)不飽和脂肪酸。通過這樣的溫度控制可以提高生成脂肪酸中的高度不飽和脂肪酸的產(chǎn)率。將培養(yǎng)基的pH調(diào)到4～10、最好是5～8，進(jìn)行通氣攪拌培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)、或靜置培養(yǎng)。通常培養(yǎng)2～20天、理想的是培養(yǎng)5～20、最好是培養(yǎng)5～15天。
尤其是使用象通氣攪拌培養(yǎng)槽或空氣升液器培養(yǎng)槽那樣的槽，通過液體通氣培養(yǎng)，可以以可能達(dá)到商品化收率生產(chǎn)含不飽和脂肪酸的油脂。而這種情況下，從培養(yǎng)開始至少3天內(nèi)，通過一邊維持葡萄糖濃度在0.3％以上和/或葡萄糖平均濃度0.5％以上、理想的是葡萄糖濃度為0.5％以上和/或葡萄糖平均濃度為0.7％以上、最好是葡萄糖的濃度為0.5～5％和/或葡萄糖平均濃度0.7～3％，一邊進(jìn)行培養(yǎng)，可以更有效地制造含不飽和脂肪酸的油脂。例如，每1克干菌體制造的花生四烯酸在10mg以上，理想狀況可以達(dá)到120mg以上。
這樣一來，菌體內(nèi)大量積蓄著目的不飽和脂肪酸含量豐富的，而24,25-甲叉膽甾-5-烯-3□-醇含量少的油脂。
作為目的油脂可以從通過菌體培養(yǎng)制造油脂過程中的培養(yǎng)液或其滅菌的培養(yǎng)液、或是從培養(yǎng)完了時(shí)的培養(yǎng)液或其滅菌的培養(yǎng)液、或是從各個(gè)過程中收集的培養(yǎng)菌體或其干燥菌體，利用常規(guī)方法得到。
從培養(yǎng)菌體通過下面的方法可以提取目的油脂。
培養(yǎng)結(jié)束后，通過離心分離和/或過濾等常用的固液分離手段得到菌體。培養(yǎng)菌體最好是積蓄進(jìn)行、破碎、干燥。干燥可以通過冷凍干燥、風(fēng)干進(jìn)行。干燥菌體最好是在氮?dú)饬飨掠糜袡C(jī)溶劑進(jìn)行萃取。作為有機(jī)溶劑可以使用乙醚、己烷、甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷、石油醚等，而通過甲醇和石油醚交互萃取或使用氯仿-甲醇-水溶劑萃取也可以得到良好的結(jié)果。
通過在減壓下從萃取物中蒸餾掉有機(jī)溶劑，可以得到高濃度的含不飽和脂肪酸油脂。取代上述方法，使用濕菌體也可以進(jìn)行萃取。這種情況下，使用甲醇、乙醇等對(duì)水相溶性的溶劑，或使用與其它溶劑組成的對(duì)水相溶性的混合溶劑。其它的工序與上述的一樣。
上述提取過程得到的油脂中，不飽和脂肪酸是以結(jié)合為甘油三酯和磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇中的狀態(tài)存在的，幾乎是以甘油三酯形式存在的。為了從培養(yǎng)物中提取的含不飽和脂肪酸油脂中分離純化出含不飽和脂肪酸的甘油三酯，利用常規(guī)方法，經(jīng)己烷萃取后進(jìn)行脫酸、脫色、除臭、去膠處理、或冷卻分離等。
本發(fā)明所謂的24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇組成比是利用甾醇組成分析方法按照下面過程求得的。
首先說明甾醇組成分析方法。將原料油脂30～80mg稱量于帶有栓塞的試管內(nèi)，然后添加甲醇4ml和33％氫氧化鉀水溶液1ml，并加上栓塞。將該試管于80℃邊攪拌邊使其反應(yīng)一小時(shí)，然后放置冷卻，用正己烷萃取脂溶成分。對(duì)得到的正己烷萃取液進(jìn)行水洗，洗至酚酞指示劑對(duì)水相不顯色為止，通過減壓濃縮獲得分析樣品。將分析樣品溶解于少量的正己烷中，供下表記載的條件進(jìn)行氣相色譜分析用。通過與市售的24-脫氫膽固醇標(biāo)準(zhǔn)樣品比較氣相色譜，進(jìn)行24-脫氫膽固醇峰的鑒定。
在保留時(shí)間為24-脫氫膽固醇的0.8～2.0倍期間檢測的成分是甾醇成分，利用常規(guī)方法求出保留時(shí)間內(nèi)的所有甾醇成分的氣相色譜峰的面積。各個(gè)峰面積相對(duì)于該成分總面積的和的比例就作為各成分的組成比。例如24-脫氫膽固醇檢測峰的面積相對(duì)于所有甾醇面積的總和的比例就作為24-脫氫膽固醇的組成比。24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇在保留時(shí)間為24-脫氫膽固醇保留時(shí)間的1.07～1.12倍時(shí)被檢測出來。24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇檢測峰的面積相對(duì)于所有峰面積的總和的比例就作為24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇的組成比。使用的柱子ULBON HR-1(內(nèi)徑0.25mm、長25m)柱溫280℃注入口和檢測器溫度300℃載體氣體和表壓氦氣1.2kg/cm2組成氣體及流量氮?dú)?0ml/min檢測器FID分流比20本發(fā)明的含不飽和脂肪酸油脂中24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇的組成比在35％以下，比較好的在33％以下，最好的在30％以下。和/或該24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇對(duì)同樣油脂中存在的24-脫氫膽固醇之比在1.2以下，優(yōu)選在0.9％以下，更優(yōu)選在0.6％以下。所謂的24-脫氫膽固醇是與24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇一起存在于通過培養(yǎng)Mortierella屬M(fèi)ortierella亞屬的微生物得到的油脂中的成分，也存在于母乳中。
作為本發(fā)明的含不飽和脂肪酸油脂的一個(gè)例子，例如，含花生四烯酸的油脂，其中花生四烯酸占油脂中總脂肪酸重量的20～54％、優(yōu)選占30～50％，24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇的組成比在35％以下、優(yōu)選在33％以下、更優(yōu)選在30％以下，和/或該24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇對(duì)同樣油脂中存在的24-脫氫膽固醇之比在1.2以下，優(yōu)選在0.9％以下，更優(yōu)選在0.6％以下。
而該含花生四烯酸油脂具有的油脂特性是甘油三酯含量在90％以上、水分在0.1％以下、酸值在0.5以下、過氧化值在5以下、油脂顏色，于羅維邦比色法133.4mm比色杯中黃色在50以下、紅色在10以下，脂肪酸組成、花生四烯酸為20～54％、優(yōu)選占30～50％、肉豆蔻酸為0.2～0.7％、棕櫚酸為10～16％、硬脂酸為4～10％、油酸為5～15％、亞油酸為5～15％、γ-亞麻酸為1～5％、α-亞麻酸為0.1～2％、二高-γ-亞麻酸為1～6％、二十碳五烯酸為0～1％、二十四碳(烷)酸為2～7％。
該油脂富含以甘油三酯形式存在的花生四烯酸、可能不含有二十碳五烯酸、即使含有由于是極微量，用作食品、特別是用作早產(chǎn)兒用調(diào)制奶、嬰兒用調(diào)制奶、幼兒用食品、或用作孕產(chǎn)婦用食品的原料都是很理想的。而本發(fā)明的含不飽和脂肪酸油脂由于飲食經(jīng)驗(yàn)還不知道的24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇含有率少，所以可以安心地用于食品和動(dòng)物飼料。
以下，通過實(shí)施例具體說明本發(fā)明。
實(shí)施例1使用Mortierella elongata IFO8570作為花生四烯酸生產(chǎn)菌，將含有葡萄糖2％、食用大豆蛋白(商品名ェスサンミ-ト、味之素公司制造)1％、菜籽油0.1％的培養(yǎng)基1400L加入2000L通氣攪拌培養(yǎng)槽中、于溫度28℃、通氣量1.0vvm、攪拌80rpm、槽內(nèi)壓1.0kg/cm2G的條件下開始通氣攪拌培養(yǎng)。按照流加法維持葡萄糖濃度1.5％、培養(yǎng)7天后、通過過濾回收菌體、提取油脂。而作為比較例子、用1％酵母提取液代替食用大豆蛋白，進(jìn)行同樣的培養(yǎng)和油脂的提取。
按照前述的程序分析得到的油脂中的甾醇成分，在保留時(shí)間9.6分鐘附近檢測出24-脫氫膽固醇、而在保留時(shí)間7.2分鐘附近檢測出24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇。結(jié)果如表1所示。得到了24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇組成比少的含不飽和脂肪酸油脂。
表124,25-甲叉膽甾 24-脫氫膽固A/B總甾醇量*花生四烯酸-5-烯-3β-醇組 醇組成比 含量**成比(A) (B)實(shí)施例 30％65％ 0.46 1％ 8％比較例 65％27％ 2.41 1％ 9％*油脂中甾醇含量**花生四烯酸對(duì)油脂中總脂肪酸的含有率實(shí)施例2使用Mortierella alpina CBS754.68作為花生四烯酸生產(chǎn)菌，將含有葡萄糖4％、黃豆面1.3％、酵母提取液0.2％、橄欖油0.1％的培養(yǎng)基600L加入1000L通氣攪拌培養(yǎng)槽中、于溫度24℃、通氣量1.0vvm、攪拌100rpm、槽內(nèi)壓0.5kg/cm2G的條件下進(jìn)行5天的通氣攪拌培養(yǎng)。然后通過過濾、干燥回收菌體、通過己烷萃取得到油脂。而作為比較例子、使用葡萄糖4％、酵母提取液1.5％、橄欖油0.1％的培養(yǎng)基，通過同樣的培養(yǎng)得到油脂。另外，實(shí)施例、比較例在培養(yǎng)的第二天都流加1％葡萄糖。
按照前述的程序分析得到的油脂中的膽固醇成分，在保留時(shí)間10.2分鐘附近檢測出24-脫氫膽固醇、而在保留時(shí)間11.2分鐘附近檢測出24,25.甲叉膽甾-5-烯-3β-醇。結(jié)果如表1所示。得到了24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇組成比少的含不飽和脂肪酸油脂。
表224,25-甲叉膽甾 24-脫氫膽固A/B總甾醇量*花生四烯酸-5-烯-3β-醇組 醇組成比 含量**成比(A) (B)實(shí)施例25％ 53％0.47 1.2％48％比較例68％ 16％4.25 1.1％46％*油脂中甾醇含量**花生四烯酸對(duì)油脂中總脂肪酸的含有率實(shí)施例3使用Mortierella alpina ATCC32221、Morrierella alpina ATCC42430作為花生四烯酸生產(chǎn)菌，分別進(jìn)行培養(yǎng)。將含有葡萄糖4％、脫脂大豆粉1.2％、磷酸氫鉀0.2％、大豆油0.1％的培養(yǎng)基25L加入50L通氣攪拌培養(yǎng)槽中、于溫度28℃、通氣量1.0vvm、攪拌300rpm、槽內(nèi)壓1.0kg/cm2G的條件下進(jìn)行5天的通氣攪拌培養(yǎng)。然后通過過濾、干燥回收含有花生四烯酸的菌體、從回收的菌體通過己烷萃取得到油脂。
而作為比較例子、使用葡萄糖4％、啤酒酵母粉末1.2％、磷酸氫鉀0.2％、菜籽油0.1％的培養(yǎng)基，通過同樣的培養(yǎng)得到油脂。另外，實(shí)施例、比較例在培養(yǎng)的第二天都流加1％葡萄糖。按照前述的程序分析得到的油脂中的膽固醇組成。表3給出了分析的結(jié)果。得到了24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇組成比少的含不飽和脂肪酸油脂。
表324,25-甲叉膽甾- 24-脫氫膽固 A/B總膽固 花生四烯酸含量5-烯-3β-醇組成醇組成比 醇量***比少(A)(B)Mortierella 5％ 67％ 0.07 0.9％25％alpinaATCC32221比較例 37％ 28％ 1.32 0.8％20％Mortierellaalpina 5％ 35％ 0.14 0.9％18％ATCC42430比較例 40％ 25％ 1.60 1.0％18％*油脂中甾醇含量**花生四烯酸對(duì)油脂中總脂肪酸的含有率實(shí)施例4使用Mortierella alpina CBS754.68作為花生四烯酸生產(chǎn)菌，將含有葡萄糖2％、大豆蛋白1.5％、大豆油0.1％的培養(yǎng)基1400L加入2000L通氣攪拌培養(yǎng)槽中、于溫度24℃、通氣量1.0vvm、攪拌80rpm、槽內(nèi)壓200kPa的條件下開始通氣攪拌培養(yǎng)。按照流加法維持葡萄糖濃度0.5％、培養(yǎng)7天后、通過過濾回收菌體。將菌體干燥后、用己烷萃取、萃取液進(jìn)行脫色、除臭、添加0.05％的作為氧化劑的生育酚。分析得到的油脂，其組成如下。分析結(jié)果甘油三酯含量 95.6％水分0.04％酸值0.08過氧化值2.16油脂顏色(羅維邦比色法133.4mm比色杯)黃色20.1、紅色1.4脂肪酸組成花生四烯酸 44.4％十四烷酸為 0.6％軟脂酸 14.6％硬脂酸 8.8％油酸 6.3％亞油酸 10.2％γ-亞麻酸 3.2％α-亞麻酸 0.8％二高-γ-亞麻酸 5.2％二十碳五烯酸為 0.2％二十四碳(烷)酸 4.8％?？傜薮己?.0％24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇組成比24％24-脫氫膽固醇組成比67％實(shí)施例5將實(shí)施例4得到的含花生四烯酸油脂和魚油以及植物油適當(dāng)?shù)鼗旌?，得到必需脂肪酸調(diào)和油脂。除了該必需脂肪酸調(diào)和油脂外，每當(dāng)調(diào)制育兒用奶粉100kg時(shí)，準(zhǔn)備如下所示的原材料和成分。然后按照常規(guī)方法將這些原材料溶解、混合、清洗后、進(jìn)行滅菌、濃縮、調(diào)勻、噴霧干燥之后就得到育兒用調(diào)制奶粉。
原材料及成分酪蛋白5.6kgホェィ蛋白質(zhì)濃縮物24.0kg必需脂肪酸調(diào)和油脂25.0kg
(主要含有亞油酸、α-亞麻酸)作為花生四烯酸80g作為二十二碳六烯酸25g作為二十碳五烯酸 10g糖(乳糖和寡糖)43.4kg礦物質(zhì)和維生素2kg合計(jì) 100kg
權(quán)利要求
1．含不飽和脂肪酸油脂的制造方法，其特征是，在含有從大豆得到的氮源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)屬于被孢霉屬被孢霉亞屬的微生物、然后從該培養(yǎng)物中提取含不飽和脂肪酸油脂。
2．權(quán)利要求1記載的制造方法，其特征是上述從大豆得到的氮源，除去水分的成分中的氮含量的重量比在2％以上。
3．權(quán)利要求1或2記載的制造方法，其特征是上述從大豆得到的氮源至少是從脫脂大豆、未脫脂大豆、以及對(duì)這些大豆進(jìn)行過加工的產(chǎn)品中選擇出的一種至少以上的氮源。
4．權(quán)利要求3記載的制造方法，其特征是上述對(duì)脫脂或未脫脂大豆實(shí)施的加工包括通過熱處理；酸處理；堿處理；酶處理；化學(xué)修飾；或者包括上述處理的化學(xué)的和/或物理的處理在內(nèi)的變性和/或再生；利用水和/或有機(jī)溶劑除去一部分成分；通過過濾和/或離心分離除去一部分成分；冷凍；粉碎；干燥；和成篩分等工序。
5．權(quán)利要求1或2記載的制造方法，其特征是上述從大豆得到的氮源是對(duì)脫脂大豆至少實(shí)施了熱變性的氮源。
6．權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征是上述培養(yǎng)物是通過菌體培養(yǎng)制造油脂過程中的培養(yǎng)液或滅過菌的該培養(yǎng)液、培養(yǎng)結(jié)束后的培養(yǎng)液或是滅過菌的該培養(yǎng)液、或者是從培養(yǎng)過程中收集的培養(yǎng)菌體或干燥的該菌體。
7．權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征是使用槽對(duì)上述微生物進(jìn)行液體通氣培養(yǎng)。
8．權(quán)利要求7記載的制造方法，其特征是上述槽是通氣攪拌槽或空氣升液器培養(yǎng)槽。
9．權(quán)利要求7或8記載的制造方法，其特征是從培養(yǎng)開始至少3天內(nèi)，通過一邊維持葡萄糖濃度在0.3％以上和/或葡萄糖平均濃度0.5％以上一邊進(jìn)行培養(yǎng)。
10．權(quán)利要求7～9任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征是培養(yǎng)的天數(shù)為2～20大。
11．權(quán)利要求1～10任一項(xiàng)記載的制造方法，其特征是上述不飽和脂肪酸是γ-亞麻酸、二高-γ-亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、和/或蜜得酸。
12．含花生四烯酸油脂，其特征是24，25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇組成比例在35％以下，而且花生四烯酸的含量是20～54％。
13．含花生四烯酸油脂，其特征是24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇組成比例對(duì)24-脫氫膽固醇之比在1.2以下、而且花生四烯酸的含量是20～54％。
14．含花生四烯酸油脂，其特征是24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇的組成比例在35％以下，24,25-甲叉膽甾-5-烯-3β-醇組成比例對(duì)24-脫氫膽固醇之比在1.2以下、而且花生四烯酸的含量是20～54％。
15．權(quán)利要求12～14任一項(xiàng)記載的含花生四烯酸油脂，其特征是該油脂是從屬于被孢霉屬被孢霉亞屬微生物得到的微生物油。
16．配有權(quán)利要求12～15任一項(xiàng)記載的含花生四烯酸油脂的營養(yǎng)輔助食品。
17．配有權(quán)利要求12～15任一項(xiàng)記載的含花生四烯酸油脂的早產(chǎn)兒用調(diào)和奶、嬰兒用調(diào)和奶、幼兒用食品、或孕產(chǎn)婦用食品。
18．配有權(quán)利要求12～15任一項(xiàng)記載的含花生四烯酸油脂的動(dòng)物飼料。
全文摘要
含不飽和脂肪酸油脂的制造方法,其特征是,在含有從大豆中得到的氮源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)屬于被孢霉(Mortierella)屬被孢霉(Mortierella)亞屬微生物、然后從該培養(yǎng)物中提取含不飽和脂肪酸油脂。得到24,25－甲叉膽甾－5－烯－3β－醇含有率少的油脂。
文檔編號(hào)A23L1/29GK1232507SQ9719840
公開日1999年10月20日 申請日期1997年8月27日 優(yōu)先權(quán)日1996年8月30日
發(fā)明者東山堅(jiān)一, 秋元健吾, 清水昌 申請人:三得利株式會(huì)社